マーカータンパク質量調節用組成物、及びそれを含有する飲食品、飼料、医薬部外品、医薬品
【課題】加齢に伴う老化現象や疾病を防止する効果が期待できることに加え、安全性及び実用性が高いことから飲食品、飼料、医薬部外品、医薬品等に幅広く使用可能なマーカータンパク質量調節用組成物を提供すること。
【解決手段】本発明は、加齢に伴って量的に変化する細胞死マーカータンパク質についてその量的変化を小さくする方向に調節する組成物であって、アムラー抽出物を有効成分として含有するマーカータンパク質量調節用組成物である。細胞死マーカータンパク質としては、例えば細胞内にて存在し、ミトコンドリア外膜上にて機能するタンパク質のことをいう。その具体例としては、ＢａｘやＢｃｌ−２などといったタンパク質がある。
【解決手段】本発明は、加齢に伴って量的に変化する細胞死マーカータンパク質についてその量的変化を小さくする方向に調節する組成物であって、アムラー抽出物を有効成分として含有するマーカータンパク質量調節用組成物である。細胞死マーカータンパク質としては、例えば細胞内にて存在し、ミトコンドリア外膜上にて機能するタンパク質のことをいう。その具体例としては、ＢａｘやＢｃｌ−２などといったタンパク質がある。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、加齢に伴って量的に変化するマーカータンパク質の量を調節する組成物、及びそれを含有する飲食品、飼料、医薬部外品、医薬品に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
近年、我が国をはじめとする多くの先進国では老年人口が増え、今後も高齢者の数はますます増加していくものと予測される。このような状況の下、少しでも老化の進行を食い止めて、健全な生活が送れる高齢者の割合を多くすることが、現代社会全体における大きな課題とされている。
【０００３】
一般的に加齢が進むと身体の各所に老化現象が生じる。その例を挙げると、細胞数の減少からする臓器の萎縮、身長の縮小、皮膚における皺の形成や色素の沈着、毛髪の粗化や白化、歯牙の脱落などがある。このような老化現象自体は疾病というわけではないが、何らかの疾病を引き起こす原因となる老化現象もあり、その代表例としては免疫力の低下等がある。免疫とは生体防御システムの１つであるが、同システムが機能しにくくなると、腫瘍、ガン、後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）、糖尿病、心臓病、心筋梗塞、脳梗塞、脳血栓などといった、直接死につながるような重篤な疾病が引き起こされるリスクが高くなる。
【０００４】
ところで、先に列挙したような疾病においては、病変した臓器にしばしば「細胞死」を主体とした細胞障害が認められる。それゆえ近年では、老化に関して「細胞死」、とりわけ「プログラムされた細胞死（即ちアポトーシス（apoptosis））」が、関与しているのではないかと考えられている。勿論、アポトーシス自体は、多細胞生命体の恒常性を維持するための制御機能として不可欠なものであるが、何らかの理由によってこの機能が過度に発現することがあり、これが臓器に機能障害等をもたらすものと推測されている。
【０００５】
そして、このような過度の細胞死発現を防ぐための医薬品、ひいては過度の細胞死発現が関与すると考えられる老化現象や疾病を予防、治療しうる医薬品としては、従来より様々なものが提案されている（例えば、特許文献１〜４参照）。ちなみに、特許文献１には、チアゾリジンジオン化合物を含有する細胞死阻害剤が開示されている。特許文献２には、プラズマローゲンを含有する細胞死阻害剤が開示されている。特許文献３には、クロモン誘導体を含有する細胞死阻害剤が開示されている。特許文献４には、１,４−ベンゾチアゼピン誘導体を含有する細胞死阻害剤が開示されている。ただし、これら全てのものが医薬品として現在実用化されているわけではない。
【特許文献１】特開２０００−２７３０４１号公報
【特許文献２】特開２００４−０２６８０３号公報
【特許文献３】特開平１０−８７４８５号公報
【特許文献４】特開２０００−６３２８７号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
しかしながら、概して医薬品は、大量に摂取すると下痢などの副作用を引き起こすおそれがある。このため最近では、医薬品による治療よりは日常の食生活を通じて老化現象や疾病を予防することが望ましいと考えられ、このような機能を持った成分の探索が行われている。また、かかる条件を満たしうる成分は、おそらく人間が従来からの食生活において使用してきた天然物（例えば天然植物）のなかに存在するものと考えられる。
【０００７】
ただし、たとえ加齢に伴って起こる過度の細胞死発現を防ぐ効果、さらには老化現象や疾病を予防する効果が期待できる天然物を見出したとしても、風味や性状等に難点がある場合には、結局、幅広く食品等に応用できない可能性がある。従って、実用性の観点から、風味や性状等に難点が少ないものであることが望ましい。
【０００８】
本発明は上記の課題に鑑みてなされたものであり、その目的は、加齢に伴う老化現象や疾病を防止する効果が期待できることに加え、安全性及び実用性が高いことから飲食品、飼料、医薬部外品、医薬品等に幅広く使用可能なマーカータンパク質量調節用組成物を提供することにある。また、本発明の別の目的は、上記の優れたマーカータンパク質量調節用組成物を含有する飲食品、飼料、医薬部外品、医薬品を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
そこで本願発明者らは、加齢に伴って起きる過度の細胞死発現がみられる生体内では特定のタンパク質の発現量が増加または減少するという事実を、動物実験から得るとともに、これに大いに着目した。即ち、このようなタンパク質は細胞死のマーカータンパク質であると把握でき、ある意味では老化のマーカータンパク質であるとも把握できるからである。それゆえ、加齢に伴って量的に変化する細胞死マーカータンパク質についてその量的変化を小さくする方向に調節できれば、過度の細胞死発現を有効に抑制できるものと予測し、本願発明者は様々な天然物のなかから上記のタンパク質量調節作用がある成分を模索すべく、鋭意研究を行った。その結果、「アムラー」と呼ばれる植物の抽出物に上記のマーカータンパク質量調節作用があることを新規に知見した。そこで、本願発明者らはこの新規な知見をさらに発展させ、下記の発明を完成させるに到った。
【００１０】
即ち、請求項１に記載の発明は、加齢に伴って量的に変化する細胞死マーカータンパク質についてその量的変化を小さくする方向に調節する組成物であって、アムラー抽出物を有効成分として含有するマーカータンパク質量調節用組成物をその要旨とする。
【００１１】
この組成物は、加齢に伴って発現量が増加する細胞死マーカータンパク質である場合にはその発現量を低減させる方向に調節し、または、加齢に伴って発現量が減少する細胞死マーカータンパク質である場合にはその発現量を増加させる方向に調節する。つまり、この組成物の上記マーカータンパク質量調節作用が発揮されることにより、加齢に伴う過度の細胞死発現を有効に抑制でき、過度の細胞死発現が関与すると考えられる老化現象や疾病を予防することが可能となる。しかも、この組成物は、長期にわたり人間に摂取されてきた実績のある天然植物に由来するものであって、仮に大量に摂取したとしても強い副作用を誘発するおそれがなく、安全性が高い。また、アムラーは酸味を有するが、風味に関して難点が少なく、同様に性状についても難点が少ない。そのため、当該組成物は、実用性が高く、飲食品、飼料、医薬部外品、医薬品等に幅広く使用することができる。
【００１２】
請求項２に記載の発明は、請求項１において、前記細胞死マーカータンパク質が、細胞内タンパク質であることをその要旨とする。
【００１３】
請求項３に記載の発明は、請求項１または２において、前記細胞死マーカータンパク質が、ミトコンドリア外膜上にて機能するタンパク質であることをその要旨とする。
【００１４】
請求項４に記載の発明は、請求項３において、前記細胞死マーカータンパク質が、ＢａｘまたはＢｃｌ−２であることをその要旨とする。
【００１５】
請求項５に記載の発明は、請求項１乃至４のいずれか１項において、前記組成物は、さらに、加齢に伴って量的に変化する疾病マーカータンパク質についてその量的変化を小さくする方向に調節することをその要旨とする。
【００１６】
請求項６に記載の発明は、請求項５において、前記疾病マーカータンパク質が、ＨＯ−１またはＰＰＡＲαであることをその要旨とする。
【００１７】
請求項７に記載の発明は、加齢に伴って量的に変化する細胞死マーカータンパク質であるＢａｘ及びＢｃｌ−２についてその量的変化を小さくする方向に調節するとともに、加齢に伴って量的に変化する疾病マーカータンパク質であるＨＯ−１についてその量的変化を小さくする方向に調節する組成物であって、アムラー抽出物を有効成分として含有するマーカータンパク質量調節用組成物をその要旨とする。
【００１８】
請求項８に記載の発明は、加齢に伴って量的に変化する細胞死マーカータンパク質であるＢａｘ及びＢｃｌ−２についてその量的変化を小さくする方向に調節するとともに、加齢に伴って量的に変化する疾病マーカータンパク質であるＨＯ−１及びＰＰＡＲαについてその量的変化を小さくする方向に調節する組成物であって、アムラー抽出物を有効成分として含有するマーカータンパク質量調節用組成物をその要旨とする。
【００１９】
請求項９に記載の発明は、請求項１乃至８のいずれか１項に記載のマーカータンパク質量調節用組成物を含有することを特徴とする飲食品をその要旨とする。
【００２０】
請求項１０に記載の発明は、請求項１乃至８のいずれか１項に記載のマーカータンパク質量調節用組成物を含有することを特徴とする飼料をその要旨とする。
【００２１】
請求項１１に記載の発明は、請求項１乃至８のいずれか１項に記載のマーカータンパク質量調節用組成物を含有することを特徴とする医薬部外品をその要旨とする。
【００２２】
請求項１２に記載の発明は、請求項１乃至８のいずれか１項に記載のマーカータンパク質量調節用組成物を含有することを特徴とする医薬品をその要旨とする。
【発明の効果】
【００２３】
従って、請求項１乃至８に記載の発明によると、加齢に伴って起こる過度の細胞死発現を防ぐ効果、さらには加齢に伴う老化現象や疾病を予防する効果が期待できることに加え、安全性及び実用性が高いことから飲食品、飼料、医薬部外品、医薬品等に幅広く使用可能なマーカータンパク質量調節用組成物を提供することができる。また、請求項９乃至１２に記載の発明によると、上記の優れたマーカータンパク質量調節用組成物を含有する飲食品、飼料、医薬部外品、医薬品をそれぞれ提供することができる。よって、このような飲食品等を摂取することにより、加齢に伴う老化現象や疾病を予防することが可能となる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２４】
以下、本発明を具体化した一実施形態のマーカータンパク質量調節用組成物、及びそれを含有する飲食物、飼料、医薬部外品、医薬品を詳細に説明する。
【００２５】
本発明のマーカータンパク質量調節用組成物に用いる「アムラー」とは、エンビリカ・オフィシナル（Ｅｍｂｌｉｃａ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｅ）、または、フィランサス・エンブリカ（Ｐｈｙｌｌａｎｔｈｕｓ ｅｍｂｉｌｉｃａ）という学名をもつ植物である。アムラーは、トウダイグサ科コミカンソウ属に属する落葉の亜高木であり、インドからマレーシア地域及び中国南部にかけて分布しており、インドが原産地と考えられている。また、アムラーは、各地方または言語により各々固有の名称を有しており、例えば、余柑子、油甘、奄摩勒、エンブリック・ミロバラン、アーマラキー、マラッカノキ、マラッカツリー、インディアングーズベリー、アロンラ、アミラ、アミラキ、アミラキャトラ、ネリカイ、ネルリ、タシャ、カユラカ、ケムラカ、ナックホンポン等とも称されている。
【００２６】
インドの伝承医学「アユルヴェーダ」において、アムラーは、あらゆる病気の予防薬、治療薬として最もよいとされる３つの果実のうちのひとつに挙げられている。しかしながら、アムラーの抽出物が「加齢に伴って量的に変化する細胞死マーカータンパク質についてその量的変化を小さくする方向に調節する作用を有する」という事実に関する具体的な報告はこれまでになく、本願発明者が鋭意研究の末に今回新規に知見したものである。
【００２７】
マーカータンパク質量調節用組成物に使用されるアムラーの部位としては特に限定されないが、果実が好ましく用いられる。アムラー果実の形態は、特に限定するものではなく、未熟果実、完熟果実、乾燥果実等のいずれでもよい。なお、果実を絞って得られる果汁の使用も同様に好ましい。果汁の形態は、特に限定するものではなく、液状、粉末状のいずれでもよい。生果実を使用する場合には、あらかじめ種子を除去した後、必要に応じて水を添加したうえで、抽出を行う。なお、抽出効率を高めるために、ミキサー等により破砕、均質化したものを抽出原料として使用することが好ましい。乾燥果実を使用する場合についても基本的には同様のことがいえるが、抽出効率を高めるために、４０メッシュ以下の粒度になるように粉砕しておくことが好ましい。なお、果汁も抽出原料として好適に使用される。
【００２８】
抽出に使用する溶媒や温度条件等については、特に限定されるものではなく、任意に選択、設定することができる。抽出溶媒としては、水、塩基、酸等といった非有機溶媒や、親水性溶媒、アセトン等といった有機溶媒を選択することができる。親水性溶媒としては、メチルアルコール、エチルアルコール、ｎ−プロピルアルコール、イソプロピルアルコール及びブチルアルコールからなる低級アルコール群から選択される１種類以上が、操作性、抽出効率の点から好ましい。ただし、有機溶媒による抽出よりもむしろ非有機溶媒による抽出が好ましく、なかでも水、塩基及び酸のいずれかを選択することがよい。
【００２９】
酸または塩基を抽出溶媒に使用する場合、抽出物を中和させることが好ましい。中和反応によって生成された塩は、透析法やゲル濾過等、公知の方法により、取り除くことができる。ただし、水を抽出溶媒として用いた場合には、上記のような中和反応は必要なく、生成された塩を取り除く必要もない。よって、工数減及び低コスト化の観点から、水を用いることが最も好ましい。
【００３０】
このとき使用する酸としては、特に限定するものではなく、大部分の酸を使うことができる。ただし、入手のしやすさ及び操作性の観点から、塩酸または硫酸の使用、あるいは塩酸及び硫酸の併用が好ましい。また、塩基としては、特に限定するものではなく、大部分の塩基を使うことができる。ただし、入手のしやすさ及び操作性の観点から、水酸化ナトリウムまたは水酸化カリウムの使用、あるいは水酸化ナトリウム及び水酸化カリウムの併用が好ましい。
【００３１】
抽出に使用される酸または塩基の濃度は、抽出物を酵素処理する前であっても後であっても特に限定するものではない。酸または塩基の強さによって変化するが、操作性及び抽出効率の観点から、０．０１モル濃度〜０．５モル濃度の酸または塩基を使用することが好ましい。
【００３２】
上記の抽出においては酵素処理を併用してもよく、この処理によれば収率や風味を改善することができる。なお、酵素処理は抽出前に行ってもよく、抽出時に行ってもよい。酵素処理をするときのｐＨは、使用する酵素の至適ｐＨ及びｐＨ安定性を指標にして、適宜設定することができる。また、酵素処理をするときの温度に関しても、使用する酵素の至適温度及び温度安定性を指標にして、適宜設定することができる。
【００３３】
本発明の酵素処理に用いる酵素は、特に限定されるべきではないが、食品工業分野でよく用いられる加水分解酵素であることが好ましい。この種の酵素は使用実績があり、安全性等の観点からも好ましいからである。上記酵素の具体例としては、例えば、ペクチナーゼ、アミラーゼ、プロテアーゼ、リパーゼ、タンナーゼ、デキストラナーゼ、セルラーゼ、ヘミセルラーゼ、トリプシン、パパイン等の加水分解酵素が挙げられる。これらのなかでも好ましくは、ペクチナーゼ、プロテアーゼ、タンナーゼ、セルラーゼから選択される１種類を使用する、または２種類以上を組み合わせて使用することである。これによれば抽出効率をさらに向上させることが可能となる。
【００３４】
さらに、上記の抽出において、抽出残渣に対して再度抽出工程を１回またはそれ以上繰り返すことが好ましく、この方法によれば抽出効率を向上させることができる。この場合の抽出に用いる溶媒は、同じものであっても異なるものであってもよい。
【００３５】
上記の抽出物は、そのままでも使用できるが、濾過、遠心分離及び分留といった処理を行って、不溶性物質及び溶媒を取り除くことがより好ましい。このような処理を行うことで、細胞死マーカータンパク質量調節作用が高くなり、応用範囲も広くなる。
【００３６】
不溶性物質及び溶媒を取り除いた後、果汁または抽出液をそのまままたは濃縮した後に有機溶媒を用いて分配を行い、それぞれの溶媒可溶画分を得る。有機溶媒としては、例えば、メチルアルコール、エチルアルコール、ｎ−プロピルアルコール、イソプロピルアルコール、ブチルアルコール等の低級アルコール、酢酸エチル、酢酸ブチル、ジエチルエーテル、メチルエーテル、メチルイソブチルケトン、ヘキサン、アセトン、クロロホルムなどが使用できる。また、可溶画分の純度を上げるためには、他の疎水性溶媒による分配を組み合わせることもできるが、この場合にはエチルアルコールの使用が好ましい。これら溶媒の濃度としては、特に限定するものではないが、収率及び効果の観点から、終濃度として２０％〜８０％（ｖ／ｖ）が好ましく、２０％〜６０％（ｖ／ｖ）がさらに好ましい。
【００３７】
さらに純度を高めるために、例えば、フェノール系、スチレン系、アクリル酸系、エポキシアミン系、ピリジン系、メタクリル系などを母体とする疎水性樹脂を用いたクロマトグラフィーやカラムによる精製を行ってもよい。その場合、樹脂吸着後の溶離液としては、例えば、メチルアルコール、エチルアルコール、ｎ−プロピルアルコール、イソプロピルアルコール、ブチルアルコールなどの低級アルコール及びアセトンを、単独または水溶液として使用できる。
【００３８】
抽出物及び画分はそのままで使用することも可能であるが、必要に応じて噴霧乾燥や凍結乾燥等の手段により乾燥粉末化させて使用することも可能である。
【００３９】
本発明において加齢に伴う老化現象、特に細胞死によって引き起こされると考えられる老化現象としては、例えば、細胞数の減少からする臓器の萎縮、身長の縮小、皮膚における皺の形成や色素の沈着、毛髪の粗化や白化、歯牙の脱落、骨の萎縮とそれに伴う亀背等を挙げることができる。また、加齢に伴う疾病、特に細胞死に伴う免疫力の低下が引き起こす疾病としては、末期ガン、重症のアトピー性皮膚炎、慢性リンパ性白血病、腫瘍、歯茎の病気、慢性関節リューマチ、糖尿病、膠原病、クローン病、多発性硬化症、繊維性筋痛、喘息（ゼンソク）、花粉症、アレルギー症、胃潰瘍、慢性疲労症候群、口内炎、ヘルペス、後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）、インフルエンザ、気管支炎、結核症、心臓病、心筋梗塞、脳血栓、腎臓病、肝炎、アルツハイマー病、痴呆症、自閉症、中毒症（サルモネラ菌、大腸菌、クリプトス菌等）などを挙げることができる。
【００４０】
本発明における細胞死マーカータンパク質は、加齢に伴って量的に変化する性質を有しており、主として細胞内に存在している。例えば、前記細胞死マーカータンパク質は、ミトコンドリア外膜上にて機能するタンパク質であることが好ましい。即ち、ミトコンドリアは細胞死の発現に大きく関与する細胞内小器官であって、そこで機能するタンパク質の量を調整することは、過度の細胞死（アポトーシス）発現の効果的な抑制につながると考えられるからである。
【００４１】
ここで細胞死マーカータンパク質の例としては、チトクロームＣがある。チトクロームＣタンパク質は、通常ミトコンドリア内に存在するが、アポトーシスが起こる際にミトコンドリア外膜上にある「ＶＤＡＣ（Voltage-Dependent Anion Channelの略）」と呼ばれる細孔を通って外部に放出される。チトクロームＣタンパク質は、アポトーシス（詳細にはカズパーゼ−３依存性アポトーシス）を誘導するタンパク質であるため、通常は加齢に伴って発現量が増加する傾向を示す。
【００４２】
チトクロームＣ以外の細胞死マーカータンパク質の例としては、例えば、Ｂｃｌ−２タンパク質及びそれと構造が類似した十数種類のタンパク質群（いわゆるＢｃｌ−２タンパク質ファミリー）が知られている。
【００４３】
当該ファミリーの中核をなすＢｃｌ−２タンパク質は、ｂｃｌ−２遺伝子が作るタンパク質であって、加齢に伴って発現量が減少する傾向を示す。Ｂｃｌ−２タンパク質は、ミトコンドリア外膜上のＶＤＡＣに結合して孔を細くすることでチトクロームＣの放出を抑制し、これによりアポトーシスを抑制する働きがある。同様の働きを有するタンパク質としては、ｂｃｌ−ｘＬ遺伝子が作るＢｃｌ−ｘＬタンパク質や、ｂｃｌ−ｘＳ遺伝子が作るＢｃｌ−ｘＳタンパク質などがある。これらも、加齢に伴って発現量が減少する傾向を示す細胞死マーカータンパク質である。
【００４４】
当該ファミリーに属するものであって、加齢に伴って発現量が増加する傾向を示す細胞死マーカータンパク質の例としては、例えば、Ｂａｘタンパク質などがある。Ｂａｘタンパク質（Ｂｃｌ−２ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ Ｘ ｐｒｏｔｅｉｎ）は、ミトコンドリア外膜上のＶＤＡＣに結合して孔を拡げることでチトクロームＣの放出を促進し、これによりアポトーシスを促進する働きがある。同様の働きを有するタンパク質としては、そのほかにもｈｒｋ遺伝子が作るＨｒｋタンパク質、ｍｔｄ遺伝子が作るＭｔｄタンパク質、ｂａｋ遺伝子が作るＢａｋタンパク質、ｂａｄ遺伝子が作るＢａｄタンパク質などがある。
【００４５】
本発明のマーカータンパク質量調節用組成物は、さらに、加齢に伴って量的に変化する疾病マーカータンパク質についてその量的変化を小さくする方向に調節することが好ましい。即ち、このような疾病マーカータンパク質の量的変化を小さくする方向に調節すれば、当該疾病マーカータンパク質が関与している疾病（加齢に伴う疾病）の発生率を低減することが可能と考えられるからである。従って、細胞死マーカータンパク質量調節作用と疾病マーカータンパク質量調節作用との相乗効果により、加齢に伴う老化現象や疾病をより確実に予防することが可能となる。
【００４６】
前記疾病マーカータンパク質の具体例としては、例えば、ｉＮＯＳ、ＣＯＸ−２、ＰＰＡＲα、ＨＯ−１などがある。
【００４７】
ｉＮＯＳ（誘導型一酸化窒素シンターゼ）は、加齢に伴ってその発現量が増加する傾向を示すタンパク質であって、炎症マーカータンパク質としても知られている。ｉＮＯＳは、強力な活性酸素である一酸化窒素（ＮＯ）を産生する酵素であるため、これが増加すると細胞に炎症が起きて細胞障害を起こしやすくなる。よって、ｉＮＯＳの発現量を減少させる方向に調節すれば、ｉＮＯＳが関与する炎症の発生率の低減、さらには炎症が引き起こす疾病の発生率の低減が可能である。
【００４８】
ＣＯＸ−２（シクロオキシゲナーゼ−２）も、加齢に伴って発現量が増加する傾向を示すタンパク質であって、炎症マーカータンパク質としても知られている。ＣＯＸ−２は、アラキドン酸代謝経路で、膜のリン脂質からホスホリパーゼＡ２を介して遊離されたアラキドン酸を、ＰＧ−Ｇ２やＰＧ−Ｈ２を介して、トロンボキサンやＰＧ−Ｅ２をはじめとするアラキドン酸代謝物に転換するときに、一番中心的に働く酵素である。ＣＯＸ−２は、ＩＬ−１やＴＮＦ−αなどのサイトカインが存在する時に大量発現するが、加齢した細胞では炎症が起きやすいため、加齢に伴ってその発現量が増加する傾向を示す。よって、ＣＯＸ−２の発現量を減少させる方向に調節すれば、ＣＯＸ−２が関与する炎症の発生率の低減、さらには炎症が引き起こす疾病の発生率の低減が可能である。
【００４９】
ＰＰＡＲα（ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体α）は、抗炎症マーカータンパク質の一種であって、加齢に伴って発現量が減少する傾向を示す。ペルオキシソーム（ＰＰ）は、肝臓ＤＮＡ合成や肝臓細胞のアポトーシスの抑制などに影響を及ぼすことが報告されているが、ＰＰＡＲαがＰＰに結合するとＰＰを活性化し、活性化されたＰＰがレチノイドＸ受容体（ＲＸＲ）とヘテロダイマーを形成してβ酸化に関連した遺伝子の転写等を促進させると考えられている。よって、ＰＰＡＲαの発現量を増加させる方向に調節すれば、ＰＰＡＲαの抗炎症作用の強化に伴う炎症発生率の低減、さらには炎症が引き起こす疾病の発生率の低減が可能である。
【００５０】
ＨＯ−１（ヘモオキシゲナーゼ−１）は、酸化ストレスにより誘導されるタンパク質の一種であって、加齢に伴って発現量が減少する傾向を示す。ＨＯ−１は、ヘムの分解に関与しており、ＮＡＤＰＨや酸素等の存在下でヘムを一酸化炭素、鉄イオン、ビリベルディンへと分解する。ビリベルディンは強力なラジカル・スカベンジャーであり、これが抗酸化ストレス作用を奏する。よって、ＨＯ−１の発現量を増加させる方向に調節すれば、酸化ストレスが原因である疾病の発生率の低減が可能である。なお、上述した細胞死についても酸化ストレスの関与が知られており、ＨＯ−１の増加は間接的ではあるが細胞死の抑制にも寄与しうると考えられる。
【００５１】
本発明のマーカータンパク質量調節用組成物は、さらに脂質代謝改善作用を有することが好ましい。即ち、加齢に伴って脂質代謝機能も低下するため、脂質代謝を改善することで加齢に伴う疾病の発生率を低減することが可能と考えられるからである。従って、細胞死マーカータンパク質量調節作用、疾病マーカータンパク質量調節作用、及び脂質代謝改善作用の相乗効果により、加齢に伴う老化現象や疾病をより確実に予防することが可能となる。なお、前記脂質代謝改善作用とは、具体的には血清中のコレステロール値などを低減する作用や、臓器組織中のコレステロール値などを低減する作用のことをいう。ただし、ＨＤＬコレステロールのような、いわゆる善玉コレステロールの値については、低減しないことが好ましい。
【００５２】
本発明のマーカータンパク質量調節用組成物は、飲食品、飼料、医薬部外品、医薬品等に幅広く応用できるが、特に人が手軽に摂食できる飲食品に応用することが好ましい。
【００５３】
本発明における飲食品とは、溶液、懸濁物、粉末、固体成形物等、経口摂取可能な形態であればよく、特に限定するものではない。飲食物の具体例としては、例えば、即席麺、レトルト食品、缶詰、電子レンジ食品、即席スープ・みそ汁類、フリーズドライ食品等の即席食品類、清涼飲料、果汁飲料、野菜飲料、豆乳飲料、コーヒー飲料、茶飲料、粉末飲料、濃縮飲料、栄養飲料、アルコール飲料等の飲料類、パン、パスタ、麺、ケーキミックス、から揚げ粉、パン粉等の小麦粉製品、飴、キャラメル、チューイングガム、チョコレート、クッキー、ビスケット、ケーキ、パイ、スナック、クラッカー、和菓子、デザート菓子等の菓子類、ソース、トマト加工調味料、風味調味料、調理ミックス、たれ類、ドレッシング類、つゆ類、カレー・シチューの素等の調味料、加工油脂、バター、マーガリン、マヨネーズ等の油脂類、乳飲料、ヨーグルト類、乳酸菌飲料、アイスクリーム類、クリーム類等の乳製品、冷凍食品、魚肉ハム・ソーセージ、水産練り製品等の水産加工品、畜肉ハム・ソーセージ等の畜産加工品、農産缶詰、ジャム・マーマレード類、漬け物、煮豆、シリアル等の農産加工品、栄養食品、錠剤、カプセル等を挙げることができる。
【００５４】
本発明のマーカータンパク質量調節用組成物の飲食品としての摂取量は、本発明の病気の状態、病人の体重、年齢、体質、体調等によって調整されるべきであるが、一般に１日あたりマーカータンパク質量調節用組成物として０．０５ｇ〜２０ｇ、好ましくは０．１ｇ〜５ｇの範囲で適宜設定することができる。上記飲食物は、病気の状態や食品等の形態によって、１日１回ないし数回にわけて摂取することができる。
【００５５】
本発明において、マーカータンパク質量調節用組成物またはそれを含有する飲食品等に加工する際に、各種栄養成分を強化することができる。
【００５６】
強化できる栄養成分としては、ビタミンＡ、ビタミンＢ１、ビタミンＢ２、ビタミンＢ６、ビタミンＢ１２、ビタミンＣ、ビタミンＤ、ビタミンＥ、ナイアシン（ニコチン酸）、パントテン酸、葉酸等のビタミン類、リジン、スレオニン、トリプトファン等の必須アミノ酸類や、カルシウム、マグネシウム、鉄、亜鉛、銅等のミネラル類、及び、例えば、α−リノレン酸、ＥＰＡ、ＤＨＡ、月見草油、オクタコサノール、カゼインホスホペプチド（ＣＰＰ）、カゼインカルシウムペプチド（ＣＣＰ）、水溶性食物繊維、不溶性食物繊維、オリゴ糖等の人の健康に寄与する物質類、その他の食品や食品添加物として認可されている有用物質の１種または２種以上が使用できる。
【００５７】
本発明における飼料とは、ヒト以外の生物に摂食させるための食べ物のことをいい、その形態については特に限定されない。飼料を適用しうる生物としては特に限定されないが、例えば、養殖動物やペット動物などが挙げられる。養殖動物としては、例えば、ウマ、ウシ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、ラクダ、ラマなどの家畜や、マウス、ラット、モルモット、ウサギなどの実験動物や、ニワトリ、アヒル、七面鳥、ダチョウなどの家禽などがある。ペット動物としては、例えば、イヌ、ネコなどがある。
【００５８】
本発明における医薬部外品及び医薬品とは、経口投与または非経口投与に適した賦形剤、その他の添加剤を用い、常法に従って経口製剤または注射剤として調製されたものをいう。好ましい医薬部外品及び医薬品の態様は経口製剤であり、最も好ましいのは経口固形製剤である。経口固形製剤は、容易に服用でき、かつ保存、持ち運びに便利だからである。
【００５９】
経口固形製剤としては、例えば、錠剤、散剤、細粒剤、顆粒剤、カプセル剤、丸剤、徐放剤等がある。本発明の経口固形製剤は、適宜の薬理学的に許容され得る坦体、賦形剤（例えばデンプン、乳糖、白糖、炭酸カルシウム、リン酸カルシウムなど）、結合剤（例えばデンプン、アラビアガム、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、結晶セルロース、アルギン酸、ゼラチン、ポリビニルピロリドンなど）、滑沢剤（例えばステアリン酸、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウムなど）、崩壊剤（例えばカルボキシメチルセルロース、タルクなど）、などをマーカータンパク質量調節用組成物と混合して固形化することにより得られる。
【００６０】
また、経口液状製剤とは、製薬学的に許容される乳濁剤、溶液剤、懸濁剤、シロップ剤、エリキシル剤等を含み、一般的に用いられる不活性な希釈剤、例えば精製水、エチルアルコールを含むものをいう。本発明の経口液状製剤は、老化予防組成物及び希釈剤のほかに、湿潤剤、懸濁剤のような補助剤、甘味剤、風味剤、芳香剤、防腐剤等をさらに含有していてもよい。
【００６１】
非経口投与に適した注射剤は、無菌の水性または非水性の溶液剤、懸濁剤、乳濁剤等を含んでいる。水性の溶液剤、懸濁剤の希釈剤としては、例えば、注射用蒸留水及び生理食塩水がある。非水溶性の溶液剤、懸濁剤の希釈剤としては、例えば、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、オリーブ油のような植物油、エチルアルコールのようなアルコール類、ポリソルベート８０等がある。この注射剤は、さらに防腐剤、湿潤剤、乳化剤、分散剤、安定化剤（例えばラクトース）、溶解補助剤（例えば、グルタミン酸、アスパラギン酸）のような補助剤を含んでもよい。これらは、例えばバクテリア保管フィルターを通す濾過、殺菌剤の配合または照射によって無菌化される。また、これらは、無菌の固体組成物を製造し、その使用前に無菌水または無菌の注射用溶媒に溶解して、使用することもできる。
【００６２】
本発明のマーカータンパク質量調節用組成物の医薬品としての投与量は、投与ルート、疾患の症状、投与対象の年齢、性別等を考慮して個々の場合に応じて適宜決定されるが、通常、成人１人当たり有効成分約４０ｍｇ／日〜３ｇ／日、好ましくは１００ｍｇ／日〜５００ｍｇ／日である。
【００６３】
以下、本発明を実施例にて詳細に説明するが、以下の実施例は本発明の範囲を限定するものではない。
[実施例１] マーカータンパク質量調節用組成物の調製１（水抽出）
【００６４】
アムラー乾燥果実を粉砕後篩別して４０メッシュ以下にし、その粉末８０ｇに、蒸留水２Ｌを加え、５５℃で３時間抽出を行った。その後、抽出液を遠心分離（３０００ｒｐｍ、１０分間）し、その上清を濾過し、抽出液と残渣とを分離した。その残渣に蒸留水２Ｌを加え、同条件でもう１回繰り返し抽出を行い、それぞれの抽出液を合わせた後、凍結乾燥し、本発明のマーカータンパク質量調節用組成物Ａ，３５．０ｇを得た。収率は４３．８％であった。
[実施例２] マーカータンパク質量調節用組成物の調製２（酢酸エチル分画）
【００６５】
アムラー乾燥果実を４０メッシュ以下に粉砕し、その粉末８０ｇに、蒸溜水２Ｌを入れ、５５℃で３時間抽出した。その後、遠心分離し、その上清を濾過し、抽出物と残渣とを分離した。その残渣に蒸留水２Ｌを加え、同条件でもう１回繰り返し抽出を行い、それぞれの抽出液を合わせた後、減圧濃縮し、２００ｍＬとした。この濃縮液に酢酸エチルを加え、５００ｍＬになるように調製（最終酢酸エチル濃度６０％）し、これをよく攪拌した後、４℃で２４時間静置した。その後、酢酸エチル層を分離して、減圧濃縮を行った後、濾液を凍結乾燥することで、本発明のマーカータンパク質量調節用組成物Ｂ，１２．５ｇを得た。
［試験例１］マーカータンパク質量調節用組成物の効果確認
【００６６】
（１）加齢ラットの飼育、採血、肝臓採取
【００６７】
日本ＳＬＣ社より購入した雄ウィスター系ラット（体重１２０ｇ〜１３０ｇ)を室温２５℃、湿度６０％のワイヤーケージ内で訓化させた。飼料としては日本ＣＬＥＡ社製のペレット飼料（蛋白質２４．０％、脂質３．５％、炭水化物６０．５％）を使用した。飼料は自由に摂餌させ、水も自由に飲ませるようにした。そして、基本的にラットを４つの群に分けた（n=10/群）。
【００６８】
アムラー無投与の若齢コントロール群である試験区１では、２ヶ月齢の若齢ラット１０匹に対し、生理食塩水を１００日間にわたり経口投与した。アムラー無投与の加齢コントロール群である試験区２では、１０ヶ月齢の加齢ラット１０匹に対し、生理食塩水を１００日間にわたり経口投与した。加齢ラットにアムラー水抽出物を投与する群である試験区３では、１０ヶ月齢の加齢ラット１０匹に対し、前記組成物Ａ（４０ｍｇ／ｋｇ体重／日）を１００日間にわたり経口投与した。加齢ラットにアムラー水抽出物の酢酸エチル分画物を投与する群である試験区４では、１０ヶ月齢の加齢ラット１０匹に対し、前記組成物Ｂ（１０ｍｇ／ｋｇ体重／日）を１００日間にわたり経口投与した。
【００６９】
その後、ラットを屠殺し、尾静脈より採血を行った。採血後、直ちに遠心分離（３６００ｒｐｍ，１０ｍｉｎ）により血清を分離し、得られた血清サンプルを分析に供するまで−８０℃にて凍結保存した。これと同時に肝臓を採取し、分析に供するまで−８０℃にて凍結保存した。
【００７０】
（２）マーカータンパク質の発現量の比較
【００７１】
ここでは、本発明の組成物Ａ，Ｂのマーカータンパク質量調節作用を確認するために、ラット肝組織における各種マーカータンパク質の発現量の変化を比較する試験を行った。
【００７２】
ａ）測定方法及び結果
【００７３】
−８０℃で保存しておいた肝臓を氷冷下でホモジナイズし、細胞質画分を抽出し、これを試料とした。この試料中の各タンパク濃度は、抗Ｂａｘ抗体、抗Ｂｃｌ−２抗体、抗ＨＯ−１抗体、抗ｉＮＯＳ抗体、抗ＣＯＸ−２抗体、抗ＰＰＡＲα抗体をそれぞれ使用して、ウエスタン・ブロッティング法により定量した。その結果を図１の表に示す。
【００７４】
ｂ）結果及び考察
【００７５】
Ｂａｘタンパク質： 若齢コントロール群（試験区１）に比較して、加齢コントロール群（試験区２）では発現量が有意に増加していた（１００％→１４６％）。しかし、このような加齢コントロール群（試験区２）を基準とした場合、試験区３，４では発現量が有意に減少しており、その減少率は試験区３で約１６％、試験区４で約１０％であった。つまり、Ｂａｘタンパク質に対する発現量調節作用が組成物Ａ，Ｂの両方で確認され、とりわけ組成物Ａのほうが勝っていた。
【００７６】
Ｂｃｌ−２タンパク質： 若齢コントロール群（試験区１）に比較して、加齢コントロール群（試験区２）では発現量が有意に減少していた（１００％→９３％）。しかし、このような加齢コントロール群（試験区２）を基準とした場合、試験区３，４では発現量が有意に増加しており、その増加率は試験区３で約５６％、試験区４で約１１％であった。つまり、Ｂｃｌ−２タンパク質に対する発現量調節作用が組成物Ａ，Ｂの両方で確認され、とりわけ組成物Ａのほうが勝っていた。
【００７７】
ＨＯ−１タンパク質： 若齢コントロール群（試験区１）と比較して、加齢コントロール群（試験区２）では発現量の有意な変化は認められず、わずかに減少する傾向が見られた（１００％→９７％）。しかし、加齢コントロール群（試験区２）を基準とした場合、試験区３，４では発現量が有意に増加しており、その増加率は試験区３で約１９％、試験区４で約６％であった。つまり、ＨＯ−１タンパク質に対する発現量調節作用が組成物Ａ，Ｂの両方で確認され、とりわけ組成物Ａのほうが勝っていた。
【００７８】
ｉＮＯＳタンパク質： 若齢コントロール群（試験区１）に比較して、加齢コントロール群（試験区２）では発現量が有意に増加していた（１００％→４８５％）。しかし、このような加齢コントロール群（試験区２）を基準とした場合、試験区３，４では発現量が有意に減少しており、その減少率は試験区３で約１５％、試験区４で約４６％であった。つまり、ｉＮＯＳタンパク質に対する発現量調節作用が組成物Ａ，Ｂの両方で確認され、とりわけ組成物Ｂのほうが勝っていた。
【００７９】
ＣＯＸ−２タンパク質： 若齢コントロール群（試験区１）に比較して、加齢コントロール群（試験区２）では発現量が有意に増加していた（１００％→１１１％）。しかし、このような加齢コントロール群（試験区２）を基準とした場合、試験区３，４では発現量が有意に減少しており、その減少率は試験区３で約１５％、試験区４で約４６％であった。つまり、ＣＯＸ−２タンパク質に対する発現量調節作用が組成物Ａ，Ｂの両方で確認された。
【００８０】
ＰＰＡＲαタンパク質： 若齢コントロール群（試験区１）に比較して、加齢コントロール群（試験区２）では発現量が有意に減少していた（１００％→６０％）。しかし、このような加齢コントロール群（試験区２）を基準とした場合、試験区３，４では発現量が有意に増加しており、その増加率は試験区３で約４８％、試験区４で約４８％であった。
【００８１】
（３）血清中におけるコレステロールの比較及び中性脂質の比較
【００８２】
ここでは、本発明の組成物Ａ，Ｂの脂質代謝改善作用を確認するために、加齢ラットに対して組成物Ａ，Ｂを与えた場合の血清中におけるコレステロールの比較試験及び中性脂質（トリグリセリド）の比較試験を行った。
【００８３】
ａ）測定方法
【００８４】
−８０℃にて凍結保存していた血清サンプルを解凍し、血清コレステロール測定用キット（和光純薬工業社製）を用いて、コレステロールオキシダーゼ法により、総コレステロール、遊離コレステロール、コレステロールエステル、ＬＤＬコレステロール、ＨＤＬコレステロールの値をそれぞれ測定した。また、血清トリグリセリド測定用キット（和光純薬工業社製）を用いて、中性脂肪の値を測定した。その結果を図２の表に示す。
【００８５】
ｂ）結果及び考察
【００８６】
若齢コントロール群（試験区１）に比較して、加齢コントロール群（試験区２）では、総コレステロール、遊離コレステロール、コレステロールエステル、ＬＤＬコレステロール、中性脂肪について増加傾向が認められた。試験区３，４でも、これらのものについて増加傾向が認められたが、その程度は試験区２よりも小さかった。つまり、組成物Ａ，Ｂに血清中コレステロール値及び中性脂肪値を下げる作用があることが確認された。
【００８７】
（４）肝組織中におけるコレステロールの比較及び中性脂質の比較
【００８８】
ここでは、本発明の組成物Ａ，Ｂの脂質代謝改善作用を確認するために、加齢ラットに対して組成物Ａ，Ｂを与えた場合の肝組織中におけるコレステロールの比較試験及び中性脂質（トリグリセリド）の比較試験を行った。
【００８９】
ａ）測定方法
【００９０】
−８０℃にて凍結保存していた肝臓組織を用い、これをクロロホルム：メタノール２：１（ｖ／ｖ）混液で磨砕・抽出後に定容とし、Ｚａｋ−Ｈｅｎｌｙ法で定量することにより、総コレステロール、遊離コレステロール、コレステロールエステルの値をそれぞれ測定した。また、上記の肝臓組織をアセチルアセトン法で定量することにより、中性脂肪の値を測定した。その結果を図３の表に示す。
【００９１】
ｂ）結果及び考察
【００９２】
若齢コントロール群（試験区１）に比較して、加齢コントロール群（試験区２）では、総コレステロール、遊離コレステロール、コレステロールエステル、中性脂肪の値がいずれも有意に増加していた。試験区３，４でも、これらのものについて増加傾向が認められたが、その程度は試験区２よりも明らかに小さかった。つまり、組成物Ａ，Ｂに肝組織中コレステロール値及び中性脂肪値を下げる作用があることが確認された。
【００９３】
（４）チオバルビツール酸反応物質（ＴＢＡＲＳ）の比較
【００９４】
ここでは、本発明の組成物Ａ，Ｂの作用を確認するために、加齢ラットに対して組成物Ａ，Ｂを与えた場合の血清中ＴＢＡＲＳ濃度の比較試験、肝組織中ＴＢＡＲＳ濃度の比較試験をそれぞれ行った。なお、ＴＢＡＲＳは酸化ストレスのマーカーであり、活性酸素などの酸化ストレスが多い場合に増加することがわかっている。
【００９５】
ａ）測定方法
【００９６】
−８０℃にて凍結保存していた血清サンプルを解凍し、これを用いてチオバルビツール酸法（ＴＢＡ法）により血清中ＴＢＡＲＳ濃度を測定した。また、−８０℃にて凍結保存していた肝臓組織を用い、これをクロロホルム：メタノール２：１（ｖ／ｖ）混液で磨砕・抽出後に定容とし、これを用いてＴＢＡ法により肝組織中ＴＢＡＲＳ濃度を測定した。上記ＴＢＡ法の具体的な手順は以下のとおりである。まず、一定量の血清に、２％ブチルヒドロキシトルエン、ＴＢＡ、トリクロロ酢酸及び塩酸の混液を加えて混和した。これを沸騰水浴中で１５分間加熱した後、水冷して遠心分離し、その上清の５３５ｎｍにおける吸光度を測定した。その結果を図４の表に示す。
【００９７】
ｂ）結果及び考察
【００９８】
若齢コントロール群（試験区１）に比較して、加齢コントロール群（試験区２）では、血清中ＴＢＡＲＳ濃度及び肝組織中ＴＢＡＲＳ濃度がいずれも有意に増加していた。しかし、加齢コントロール群（試験区２）を基準とした場合、試験区３，４では当該濃度が有意に減少していた。従って、組成物Ａ，ＢにはＴＢＡＲＳ濃度を減少させる作用、つまり抗酸化ストレス作用があることが確認された。
[実施例３] マーカータンパク質量調節用組成物含有飲食品（錠菓）の調製
【００９９】
実施例１で得られた組成物Ａ，５ｇ、乳糖３０ｇ、ＤＨＡ含有粉末油脂（サンコートＤＹ−５；太陽化学株式会社製）１２ｇ、ショ糖脂肪酸エステル４ｇ、ヨーグルト香料４ｇを混合し、この混合物をロータリー式打錠機を用いて加圧成形して１錠が３００ｍｇの本発明のマーカータンパク質量調節用組成物含有飲食品（錠菓）を得た。また、これに対する比較例として、当該組成物Ａのみを含有しない反面、乳糖などの他の成分を含有する飲食品（錠菓）を、同様の方法により得た。
【０１００】
そして、これら２種の錠菓について、５名のパネラーによる官能検査を行った結果、色、匂い及び味のいずれにおいても両者に有意差が認められなかった。また、これら２種の錠菓を常温で長期間（１ヶ月間，３ヶ月間，６ヶ月間）保存したところ、両者とも色、匂い及び味について特に目立った変化は認められず、いずれも保存性に優れていた。
［実施例４］マーカータンパク質量調節用組成物含有飲食品（飲料）の調製
【０１０１】
実施例１で得られた組成物Ａ，５ｇ、１／５濃縮グレープフルーツ透明果汁２．１ｇ、エリスリトール３０ｇ、クエン酸結晶２．５ｇ、クエン酸三ナトリウム０．５ｇ、Ｌ−アスコルビン酸０．５ｇ、乳酸カルシウム１．９３ｇ、ＣＣＰ０．１５ｇ、グレープフルーツ香料１．０ｍＬを水に混合溶解し、全量を１０００ｍＬとした。それを１００ｍＬの瓶に充填し、キャップで密栓した後、９０℃、３０分間加熱殺菌をして、本発明のマーカータンパク質量調節用組成物含有飲食品（飲料）を得た。また、これに対する比較例として、当該組成物Ａのみを含有しない反面、他の成分を含有する飲食品（飲料）を、同様の方法により得た。
【０１０２】
そして、これら２種の飲料について、５名のパネラーによる官能検査を行った結果、色、匂い及び味のいずれにおいても両者に有意差が認められなかった。また、これら２種の飲料を冷蔵庫で長期間（１ヶ月間，３ヶ月間，６ヶ月間）保存したところ、両者とも色、匂い及び味について特に目立った変化は認められず、いずれも保存性に優れていた。
［実施例５］マーカータンパク質量調節用組成物含有飲食品（野菜果汁混合飲料）の調製
【０１０３】
実施例１で得られた組成物Ａ，０．２ｇ、グアーガム分解物（サンファイバーＲ；太陽化学株式会社製）３ｇを市販の野菜果汁混合飲料１００ｍＬに添加混合溶解して、本発明のマーカータンパク質量調節用組成物含有飲食品（野菜果汁混合飲料）を得た。また、これに対する比較例として、当該組成物Ａを含有せず、グアーガム分解物を含有する飲食品（野菜果汁混合飲料）を、同様の方法により得た。
【０１０４】
そして、これら２種の野菜果汁混合飲料について、５名のパネラーによる官能検査を行った結果、色、匂い及び味のいずれにおいても両者に有意差が認められなかった。また、これら２種の飲料を冷蔵庫で１ヶ月間保存したところ、両者とも色、匂い及び味について特に目立った変化は認められず、いずれも保存性に優れていた。
［実施例６］マーカータンパク質量調節用組成物含有飲食品（クッキー）の調製
【０１０５】
実施例２で得られた組成物Ｂ，４ｇ、市販のケーキミックス粉２００ｇを容器に入れた後、バター３５ｇを入れ、木杓子で混ぜ合わせた。それに溶き卵２５ｇを加えて、なめらかな生地になるまで良く練った。小麦粉を振った台の上に生地を取り出し、さらに小麦粉を振って麺棒で５ｍｍの厚さに伸ばし、丸型で抜き、それを１７０℃のオーブンで１０分間焼いて、１個約５ｇの本発明のマーカータンパク質量調節用組成物含有飲食品（クッキー）を得た。
［実施例７］マーカータンパク質量調節用組成物含有飲食品（ヨーグルト）の調製
【０１０６】
実施例１で得られた組成物Ａ，１ｇ、市販の脱脂乳（明治乳業社製、蛋白質含量３４％）９５ｇ、及び市販の無塩バター（雪印乳業社製）３５ｇを温水０．８Ｌに溶解し、均質化し、全量を１Ｌに調整した。次いで、これを９０℃で１５分間加熱殺菌した後、冷却し、市販の乳酸菌スターター（ハンゼン社製）３ｇ（ストレプトコッカス・サーモフィラス２ｇ及びラクトバシラス・ブルガリクス１ｇ）を接種した。さらに、これを均一に混合し、１００ｍＬの容器に分注・充填した後、密封して３７℃で２０時間発酵させた後、冷却することで、本発明のマーカータンパク質量調節用組成物含有飲食品（ヨーグルト）を得た。
［実施例８］マーカータンパク質量調節用組成物含有飲食品（経口流動食）の調製
【０１０７】
カゼインナトリウム（ＤＭＶ社製）５０ｇ、卵白酵素分解物（太陽化学社製）４２．５ｇ、デキストリン（松谷化学社製）１００ｇを水１Ｌに溶解させ、水相をタンク内に調製した。これとは別に、ＭＣＴ（花王社製）４５ｇ、パーム油（不二製油社製）１７．５ｇ、サフラワー油（太陽油脂社製）３５ｇ、レシチン（太陽化学社製）０．７ｇ、消泡剤（太陽化学社製）１ｇを混合溶解し、油相を調製した。タンク内の水相に油相を添加し、攪拌して混合した後、７０℃に加温し、さらに、ホモゲナイザーにより１４．７ＭＰａの圧力で均質化した。次いで、９０℃で１０分間殺菌した後、濃縮し、噴霧乾燥して、中間製品粉末約２６０ｇを調製した。この中間製品粉末２００ｇに、実施例２で得られた組成物Ｂ，４ｇ、デキストリン（松谷化学社製）１５６ｇ、グアーガム分解物（サンファイバーＲ；太陽化学株式会社製）１８ｇ、少量のビタミン・ミネラル、及び粉末香料を添加し、均一に混合して、本発明のマーカータンパク質量調節用組成物含有飲食品（経口流動食）約３８０ｇを得た。
［実施例９］マーカータンパク質量調節用組成物含有錠剤の調製
【０１０８】
実施例１で得られた組成物Ａ，１０ｇ、結晶セルロース５ｇ、トウモロコシデンプン１３．８ｇ、乳糖３２．５ｇ、ヒドロキシプロピルセルロース３．３ｇを混合し、顆粒化した。この顆粒化物にステアリン酸マグネシウム１．０ｇを加え、均一に混合し、この混合物をロータリー式打錠機で加圧成形することにより、一錠が１３０ｍｇの本発明のマーカータンパク質量調節用組成物含有錠剤を得た。
［実施例１０］マーカータンパク質量調節用組成物含有ドリンク剤の調製
【０１０９】
実施例２で得られた組成物Ｂ，５５ｇに、ブドウ糖５２８ｇ、果糖８５．４ｇ、粉末クエン酸１５．８ｇ、クエン酸ナトリウム１１．２ｇ、乳酸カルシウム１．３ｇ、塩化マグネシウム１．３ｇ、粉末天然香料１３．２ｇ、ビタミンＣを添加し、さらに水を加えて１１Ｌとした。この液体を乾熱滅菌済の１１０ｍＬ褐色瓶に充填して、アルミキャップで密封した後、１２０℃、３０分間の滅菌を行い、ドリンク剤１００本を得た。
［実施例１１］マーカータンパク質量調節用組成物含有カプセル剤の調製
【０１１０】
実施例１で得られた組成物Ａ，５０ｇに、銅クロロフィリン酸ナトリウム１ｇを加えて熱殺菌した後、それを日本薬局カプセル（＃１）に１カプセルあたり０．４ｇ充填し、カプセル剤１００個を得た。
［実施例１２］マーカータンパク質量調節用組成物含有豚繁殖用飼料の調製
【０１１１】
実施例２で得られた組成物Ｂ，１．０ｋｇに対し、とうもろこし８．０ｋｇ、マイロ５．６ｋｇ、大豆油かす２．２ｋｇ、ふすま１．２ｋｇ、魚粉１．０ｋｇ、動物性油脂０．４ｋｇ、ビタミン・ミネラル類０．６ｋｇを配合して、豚繁殖用飼料２０．０ｋｇを調製した。
【０１１２】
本発明の実施態様及び目的生成物を挙げれば以下の通りである。
【０１１３】
（１）加齢に伴って量的に変化する細胞死マーカータンパク質についてその量的変化を小さくする方向に調節する組成物であって、アムラー水抽出物を有効成分として含有するマーカータンパク質量調節用組成物。
【０１１４】
（２）加齢に伴って量的に変化する細胞死マーカータンパク質についてその量的変化を小さくする方向に調節する組成物であって、アムラー水抽出物における有機溶媒画分を有効成分として含有するマーカータンパク質量調節用組成物。
【０１１５】
（３）加齢に伴って量的に変化する細胞死マーカータンパク質についてその量的変化を小さくする方向に調節する組成物であって、アムラー水抽出物における酢酸エチル抽出画分を有効成分として含有するマーカータンパク質量調節用組成物。
【０１１６】
（４）上記（１）乃至（３）のいずれか１項において、前記細胞死マーカータンパク質がＢａｘであり、１０ヶ月齢以上の加齢ラットに対して当該組成物を与えたときのＢａｘの発現量の減少率が、前記加齢ラットに対して当該組成物を与えないときのＢａｘの発現量の５％以上（好ましくは１０％以上）であるマーカータンパク質量調節用組成物。
【０１１７】
（５）上記（１）乃至（４）のいずれか１項において、前記細胞死マーカータンパク質がＢｃｌ−２であり、１０ヶ月齢以上の加齢ラットに対して当該組成物を与えたときのＢｃｌ−２の発現量の増加率が、前記加齢ラットに対して当該組成物を与えないときのＢｃｌ−２の発現量の１０％以上（好ましくは３０％以上）であるマーカータンパク質量調節用組成物。
【０１１８】
（６）上記（１）乃至（５）のいずれか１項において、前記組成物は、さらに、加齢に伴って量的に変化する疾病マーカータンパク質についてその量的変化を小さくする方向に調節することを特徴とするマーカータンパク質量調節用組成物。
【０１１９】
（７）上記（６）において、前記疾病マーカータンパク質がＨＯ−１であり、１０ヶ月齢以上の加齢ラットに対して当該組成物を与えたときのＨＯ−１の発現量の増加率が、前記加齢ラットに対して当該組成物を与えないときのＨＯ−１の発現量の５％以上（好ましくは１０％以上）であるマーカータンパク質量調節用組成物。
【０１２０】
（８）上記（６）または（７）において、前記疾病マーカータンパク質がｉＮＯＳであり、１０ヶ月齢以上の加齢ラットに対して当該組成物を与えたときのｉＮＯＳの発現量の減少率が、前記加齢ラットに対して当該組成物を与えないときのｉＮＯＳの発現量の１０％以上（好ましくは３０％以上）であるマーカータンパク質量調節用組成物。
【０１２１】
（９）上記（６）乃至（８）のいずれか１項において、前記疾病マーカータンパク質がＣＯＸ−２であり、１０ヶ月齢以上の加齢ラットに対して当該組成物を与えたときのＣＯＸ−２の発現量の減少率が、前記加齢ラットに対して当該組成物を与えないときのＣＯＸ−２の発現量の１０％以上（好ましくは２０％以上）であるマーカータンパク質量調節用組成物。
【０１２２】
（１０）上記（１）乃至（９）のいずれか１項において、脂質代謝改善作用をさらに有することを特徴とするマーカータンパク質量調節用組成物。
【０１２３】
（１１）上記（１０）において、血清中のコレステロール値を減少させる作用をさらに有することを特徴とするマーカータンパク質量調節用組成物。
【０１２４】
（１２）上記（１０）または（１１）において、肝組織中のコレステロール値を減少させる作用をさらに有することを特徴とするマーカータンパク質量調節用組成物。
【０１２５】
（１３）上記（１）乃至（９）のいずれか１項において、チオバルビツール酸反応物質の値を減少させる作用をさらに有することを特徴とするマーカータンパク質量調節用組成物。
【０１２６】
（１４）上記（１）乃至（１３）のいずれか１項に記載のマーカータンパク質量調節用組成物を含有することを特徴とする飲食品、飼料、医薬部外品または医薬品。
【０１２７】
（１５）アムラー抽出物を有効成分として含有する細胞死マーカータンパク質量調節用組成物を用いて、過度の細胞死発現を抑制する方法。
【０１２８】
（１６）アムラー抽出物を有効成分として含有する細胞死マーカータンパク質量調節用組成物を用いて、過度の細胞死発現が関与する老化現象を予防する方法。
【０１２９】
（１７）アムラー抽出物を有効成分として含有する細胞死マーカータンパク質量調節用組成物を生物に摂取させて、過度の細胞死発現が関与する老化現象及び疾病を予防する方法。
【０１３０】
（１８）アムラー抽出物を有効成分として含有する細胞死マーカータンパク質量調節用組成物を非ヒト動物に摂取させて、過度の細胞死発現が関与する老化現象及び疾病を予防する方法。
【図面の簡単な説明】
【０１３１】
【図１】マーカータンパク質発現量比較試験の結果を示す表。
【図２】血清コレステロール値比較試験の結果を示す表。
【図３】肝組織コレステロール値比較試験の結果を示す表。
【図４】ＴＢＡＲＳ濃度比較試験の結果を示す表。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、加齢に伴って量的に変化するマーカータンパク質の量を調節する組成物、及びそれを含有する飲食品、飼料、医薬部外品、医薬品に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
近年、我が国をはじめとする多くの先進国では老年人口が増え、今後も高齢者の数はますます増加していくものと予測される。このような状況の下、少しでも老化の進行を食い止めて、健全な生活が送れる高齢者の割合を多くすることが、現代社会全体における大きな課題とされている。
【０００３】
一般的に加齢が進むと身体の各所に老化現象が生じる。その例を挙げると、細胞数の減少からする臓器の萎縮、身長の縮小、皮膚における皺の形成や色素の沈着、毛髪の粗化や白化、歯牙の脱落などがある。このような老化現象自体は疾病というわけではないが、何らかの疾病を引き起こす原因となる老化現象もあり、その代表例としては免疫力の低下等がある。免疫とは生体防御システムの１つであるが、同システムが機能しにくくなると、腫瘍、ガン、後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）、糖尿病、心臓病、心筋梗塞、脳梗塞、脳血栓などといった、直接死につながるような重篤な疾病が引き起こされるリスクが高くなる。
【０００４】
ところで、先に列挙したような疾病においては、病変した臓器にしばしば「細胞死」を主体とした細胞障害が認められる。それゆえ近年では、老化に関して「細胞死」、とりわけ「プログラムされた細胞死（即ちアポトーシス（apoptosis））」が、関与しているのではないかと考えられている。勿論、アポトーシス自体は、多細胞生命体の恒常性を維持するための制御機能として不可欠なものであるが、何らかの理由によってこの機能が過度に発現することがあり、これが臓器に機能障害等をもたらすものと推測されている。
【０００５】
そして、このような過度の細胞死発現を防ぐための医薬品、ひいては過度の細胞死発現が関与すると考えられる老化現象や疾病を予防、治療しうる医薬品としては、従来より様々なものが提案されている（例えば、特許文献１〜４参照）。ちなみに、特許文献１には、チアゾリジンジオン化合物を含有する細胞死阻害剤が開示されている。特許文献２には、プラズマローゲンを含有する細胞死阻害剤が開示されている。特許文献３には、クロモン誘導体を含有する細胞死阻害剤が開示されている。特許文献４には、１,４−ベンゾチアゼピン誘導体を含有する細胞死阻害剤が開示されている。ただし、これら全てのものが医薬品として現在実用化されているわけではない。
【特許文献１】特開２０００−２７３０４１号公報
【特許文献２】特開２００４−０２６８０３号公報
【特許文献３】特開平１０−８７４８５号公報
【特許文献４】特開２０００−６３２８７号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
しかしながら、概して医薬品は、大量に摂取すると下痢などの副作用を引き起こすおそれがある。このため最近では、医薬品による治療よりは日常の食生活を通じて老化現象や疾病を予防することが望ましいと考えられ、このような機能を持った成分の探索が行われている。また、かかる条件を満たしうる成分は、おそらく人間が従来からの食生活において使用してきた天然物（例えば天然植物）のなかに存在するものと考えられる。
【０００７】
ただし、たとえ加齢に伴って起こる過度の細胞死発現を防ぐ効果、さらには老化現象や疾病を予防する効果が期待できる天然物を見出したとしても、風味や性状等に難点がある場合には、結局、幅広く食品等に応用できない可能性がある。従って、実用性の観点から、風味や性状等に難点が少ないものであることが望ましい。
【０００８】
本発明は上記の課題に鑑みてなされたものであり、その目的は、加齢に伴う老化現象や疾病を防止する効果が期待できることに加え、安全性及び実用性が高いことから飲食品、飼料、医薬部外品、医薬品等に幅広く使用可能なマーカータンパク質量調節用組成物を提供することにある。また、本発明の別の目的は、上記の優れたマーカータンパク質量調節用組成物を含有する飲食品、飼料、医薬部外品、医薬品を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
そこで本願発明者らは、加齢に伴って起きる過度の細胞死発現がみられる生体内では特定のタンパク質の発現量が増加または減少するという事実を、動物実験から得るとともに、これに大いに着目した。即ち、このようなタンパク質は細胞死のマーカータンパク質であると把握でき、ある意味では老化のマーカータンパク質であるとも把握できるからである。それゆえ、加齢に伴って量的に変化する細胞死マーカータンパク質についてその量的変化を小さくする方向に調節できれば、過度の細胞死発現を有効に抑制できるものと予測し、本願発明者は様々な天然物のなかから上記のタンパク質量調節作用がある成分を模索すべく、鋭意研究を行った。その結果、「アムラー」と呼ばれる植物の抽出物に上記のマーカータンパク質量調節作用があることを新規に知見した。そこで、本願発明者らはこの新規な知見をさらに発展させ、下記の発明を完成させるに到った。
【００１０】
即ち、請求項１に記載の発明は、加齢に伴って量的に変化する細胞死マーカータンパク質についてその量的変化を小さくする方向に調節する組成物であって、アムラー抽出物を有効成分として含有するマーカータンパク質量調節用組成物をその要旨とする。
【００１１】
この組成物は、加齢に伴って発現量が増加する細胞死マーカータンパク質である場合にはその発現量を低減させる方向に調節し、または、加齢に伴って発現量が減少する細胞死マーカータンパク質である場合にはその発現量を増加させる方向に調節する。つまり、この組成物の上記マーカータンパク質量調節作用が発揮されることにより、加齢に伴う過度の細胞死発現を有効に抑制でき、過度の細胞死発現が関与すると考えられる老化現象や疾病を予防することが可能となる。しかも、この組成物は、長期にわたり人間に摂取されてきた実績のある天然植物に由来するものであって、仮に大量に摂取したとしても強い副作用を誘発するおそれがなく、安全性が高い。また、アムラーは酸味を有するが、風味に関して難点が少なく、同様に性状についても難点が少ない。そのため、当該組成物は、実用性が高く、飲食品、飼料、医薬部外品、医薬品等に幅広く使用することができる。
【００１２】
請求項２に記載の発明は、請求項１において、前記細胞死マーカータンパク質が、細胞内タンパク質であることをその要旨とする。
【００１３】
請求項３に記載の発明は、請求項１または２において、前記細胞死マーカータンパク質が、ミトコンドリア外膜上にて機能するタンパク質であることをその要旨とする。
【００１４】
請求項４に記載の発明は、請求項３において、前記細胞死マーカータンパク質が、ＢａｘまたはＢｃｌ−２であることをその要旨とする。
【００１５】
請求項５に記載の発明は、請求項１乃至４のいずれか１項において、前記組成物は、さらに、加齢に伴って量的に変化する疾病マーカータンパク質についてその量的変化を小さくする方向に調節することをその要旨とする。
【００１６】
請求項６に記載の発明は、請求項５において、前記疾病マーカータンパク質が、ＨＯ−１またはＰＰＡＲαであることをその要旨とする。
【００１７】
請求項７に記載の発明は、加齢に伴って量的に変化する細胞死マーカータンパク質であるＢａｘ及びＢｃｌ−２についてその量的変化を小さくする方向に調節するとともに、加齢に伴って量的に変化する疾病マーカータンパク質であるＨＯ−１についてその量的変化を小さくする方向に調節する組成物であって、アムラー抽出物を有効成分として含有するマーカータンパク質量調節用組成物をその要旨とする。
【００１８】
請求項８に記載の発明は、加齢に伴って量的に変化する細胞死マーカータンパク質であるＢａｘ及びＢｃｌ−２についてその量的変化を小さくする方向に調節するとともに、加齢に伴って量的に変化する疾病マーカータンパク質であるＨＯ−１及びＰＰＡＲαについてその量的変化を小さくする方向に調節する組成物であって、アムラー抽出物を有効成分として含有するマーカータンパク質量調節用組成物をその要旨とする。
【００１９】
請求項９に記載の発明は、請求項１乃至８のいずれか１項に記載のマーカータンパク質量調節用組成物を含有することを特徴とする飲食品をその要旨とする。
【００２０】
請求項１０に記載の発明は、請求項１乃至８のいずれか１項に記載のマーカータンパク質量調節用組成物を含有することを特徴とする飼料をその要旨とする。
【００２１】
請求項１１に記載の発明は、請求項１乃至８のいずれか１項に記載のマーカータンパク質量調節用組成物を含有することを特徴とする医薬部外品をその要旨とする。
【００２２】
請求項１２に記載の発明は、請求項１乃至８のいずれか１項に記載のマーカータンパク質量調節用組成物を含有することを特徴とする医薬品をその要旨とする。
【発明の効果】
【００２３】
従って、請求項１乃至８に記載の発明によると、加齢に伴って起こる過度の細胞死発現を防ぐ効果、さらには加齢に伴う老化現象や疾病を予防する効果が期待できることに加え、安全性及び実用性が高いことから飲食品、飼料、医薬部外品、医薬品等に幅広く使用可能なマーカータンパク質量調節用組成物を提供することができる。また、請求項９乃至１２に記載の発明によると、上記の優れたマーカータンパク質量調節用組成物を含有する飲食品、飼料、医薬部外品、医薬品をそれぞれ提供することができる。よって、このような飲食品等を摂取することにより、加齢に伴う老化現象や疾病を予防することが可能となる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２４】
以下、本発明を具体化した一実施形態のマーカータンパク質量調節用組成物、及びそれを含有する飲食物、飼料、医薬部外品、医薬品を詳細に説明する。
【００２５】
本発明のマーカータンパク質量調節用組成物に用いる「アムラー」とは、エンビリカ・オフィシナル（Ｅｍｂｌｉｃａ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｅ）、または、フィランサス・エンブリカ（Ｐｈｙｌｌａｎｔｈｕｓ ｅｍｂｉｌｉｃａ）という学名をもつ植物である。アムラーは、トウダイグサ科コミカンソウ属に属する落葉の亜高木であり、インドからマレーシア地域及び中国南部にかけて分布しており、インドが原産地と考えられている。また、アムラーは、各地方または言語により各々固有の名称を有しており、例えば、余柑子、油甘、奄摩勒、エンブリック・ミロバラン、アーマラキー、マラッカノキ、マラッカツリー、インディアングーズベリー、アロンラ、アミラ、アミラキ、アミラキャトラ、ネリカイ、ネルリ、タシャ、カユラカ、ケムラカ、ナックホンポン等とも称されている。
【００２６】
インドの伝承医学「アユルヴェーダ」において、アムラーは、あらゆる病気の予防薬、治療薬として最もよいとされる３つの果実のうちのひとつに挙げられている。しかしながら、アムラーの抽出物が「加齢に伴って量的に変化する細胞死マーカータンパク質についてその量的変化を小さくする方向に調節する作用を有する」という事実に関する具体的な報告はこれまでになく、本願発明者が鋭意研究の末に今回新規に知見したものである。
【００２７】
マーカータンパク質量調節用組成物に使用されるアムラーの部位としては特に限定されないが、果実が好ましく用いられる。アムラー果実の形態は、特に限定するものではなく、未熟果実、完熟果実、乾燥果実等のいずれでもよい。なお、果実を絞って得られる果汁の使用も同様に好ましい。果汁の形態は、特に限定するものではなく、液状、粉末状のいずれでもよい。生果実を使用する場合には、あらかじめ種子を除去した後、必要に応じて水を添加したうえで、抽出を行う。なお、抽出効率を高めるために、ミキサー等により破砕、均質化したものを抽出原料として使用することが好ましい。乾燥果実を使用する場合についても基本的には同様のことがいえるが、抽出効率を高めるために、４０メッシュ以下の粒度になるように粉砕しておくことが好ましい。なお、果汁も抽出原料として好適に使用される。
【００２８】
抽出に使用する溶媒や温度条件等については、特に限定されるものではなく、任意に選択、設定することができる。抽出溶媒としては、水、塩基、酸等といった非有機溶媒や、親水性溶媒、アセトン等といった有機溶媒を選択することができる。親水性溶媒としては、メチルアルコール、エチルアルコール、ｎ−プロピルアルコール、イソプロピルアルコール及びブチルアルコールからなる低級アルコール群から選択される１種類以上が、操作性、抽出効率の点から好ましい。ただし、有機溶媒による抽出よりもむしろ非有機溶媒による抽出が好ましく、なかでも水、塩基及び酸のいずれかを選択することがよい。
【００２９】
酸または塩基を抽出溶媒に使用する場合、抽出物を中和させることが好ましい。中和反応によって生成された塩は、透析法やゲル濾過等、公知の方法により、取り除くことができる。ただし、水を抽出溶媒として用いた場合には、上記のような中和反応は必要なく、生成された塩を取り除く必要もない。よって、工数減及び低コスト化の観点から、水を用いることが最も好ましい。
【００３０】
このとき使用する酸としては、特に限定するものではなく、大部分の酸を使うことができる。ただし、入手のしやすさ及び操作性の観点から、塩酸または硫酸の使用、あるいは塩酸及び硫酸の併用が好ましい。また、塩基としては、特に限定するものではなく、大部分の塩基を使うことができる。ただし、入手のしやすさ及び操作性の観点から、水酸化ナトリウムまたは水酸化カリウムの使用、あるいは水酸化ナトリウム及び水酸化カリウムの併用が好ましい。
【００３１】
抽出に使用される酸または塩基の濃度は、抽出物を酵素処理する前であっても後であっても特に限定するものではない。酸または塩基の強さによって変化するが、操作性及び抽出効率の観点から、０．０１モル濃度〜０．５モル濃度の酸または塩基を使用することが好ましい。
【００３２】
上記の抽出においては酵素処理を併用してもよく、この処理によれば収率や風味を改善することができる。なお、酵素処理は抽出前に行ってもよく、抽出時に行ってもよい。酵素処理をするときのｐＨは、使用する酵素の至適ｐＨ及びｐＨ安定性を指標にして、適宜設定することができる。また、酵素処理をするときの温度に関しても、使用する酵素の至適温度及び温度安定性を指標にして、適宜設定することができる。
【００３３】
本発明の酵素処理に用いる酵素は、特に限定されるべきではないが、食品工業分野でよく用いられる加水分解酵素であることが好ましい。この種の酵素は使用実績があり、安全性等の観点からも好ましいからである。上記酵素の具体例としては、例えば、ペクチナーゼ、アミラーゼ、プロテアーゼ、リパーゼ、タンナーゼ、デキストラナーゼ、セルラーゼ、ヘミセルラーゼ、トリプシン、パパイン等の加水分解酵素が挙げられる。これらのなかでも好ましくは、ペクチナーゼ、プロテアーゼ、タンナーゼ、セルラーゼから選択される１種類を使用する、または２種類以上を組み合わせて使用することである。これによれば抽出効率をさらに向上させることが可能となる。
【００３４】
さらに、上記の抽出において、抽出残渣に対して再度抽出工程を１回またはそれ以上繰り返すことが好ましく、この方法によれば抽出効率を向上させることができる。この場合の抽出に用いる溶媒は、同じものであっても異なるものであってもよい。
【００３５】
上記の抽出物は、そのままでも使用できるが、濾過、遠心分離及び分留といった処理を行って、不溶性物質及び溶媒を取り除くことがより好ましい。このような処理を行うことで、細胞死マーカータンパク質量調節作用が高くなり、応用範囲も広くなる。
【００３６】
不溶性物質及び溶媒を取り除いた後、果汁または抽出液をそのまままたは濃縮した後に有機溶媒を用いて分配を行い、それぞれの溶媒可溶画分を得る。有機溶媒としては、例えば、メチルアルコール、エチルアルコール、ｎ−プロピルアルコール、イソプロピルアルコール、ブチルアルコール等の低級アルコール、酢酸エチル、酢酸ブチル、ジエチルエーテル、メチルエーテル、メチルイソブチルケトン、ヘキサン、アセトン、クロロホルムなどが使用できる。また、可溶画分の純度を上げるためには、他の疎水性溶媒による分配を組み合わせることもできるが、この場合にはエチルアルコールの使用が好ましい。これら溶媒の濃度としては、特に限定するものではないが、収率及び効果の観点から、終濃度として２０％〜８０％（ｖ／ｖ）が好ましく、２０％〜６０％（ｖ／ｖ）がさらに好ましい。
【００３７】
さらに純度を高めるために、例えば、フェノール系、スチレン系、アクリル酸系、エポキシアミン系、ピリジン系、メタクリル系などを母体とする疎水性樹脂を用いたクロマトグラフィーやカラムによる精製を行ってもよい。その場合、樹脂吸着後の溶離液としては、例えば、メチルアルコール、エチルアルコール、ｎ−プロピルアルコール、イソプロピルアルコール、ブチルアルコールなどの低級アルコール及びアセトンを、単独または水溶液として使用できる。
【００３８】
抽出物及び画分はそのままで使用することも可能であるが、必要に応じて噴霧乾燥や凍結乾燥等の手段により乾燥粉末化させて使用することも可能である。
【００３９】
本発明において加齢に伴う老化現象、特に細胞死によって引き起こされると考えられる老化現象としては、例えば、細胞数の減少からする臓器の萎縮、身長の縮小、皮膚における皺の形成や色素の沈着、毛髪の粗化や白化、歯牙の脱落、骨の萎縮とそれに伴う亀背等を挙げることができる。また、加齢に伴う疾病、特に細胞死に伴う免疫力の低下が引き起こす疾病としては、末期ガン、重症のアトピー性皮膚炎、慢性リンパ性白血病、腫瘍、歯茎の病気、慢性関節リューマチ、糖尿病、膠原病、クローン病、多発性硬化症、繊維性筋痛、喘息（ゼンソク）、花粉症、アレルギー症、胃潰瘍、慢性疲労症候群、口内炎、ヘルペス、後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）、インフルエンザ、気管支炎、結核症、心臓病、心筋梗塞、脳血栓、腎臓病、肝炎、アルツハイマー病、痴呆症、自閉症、中毒症（サルモネラ菌、大腸菌、クリプトス菌等）などを挙げることができる。
【００４０】
本発明における細胞死マーカータンパク質は、加齢に伴って量的に変化する性質を有しており、主として細胞内に存在している。例えば、前記細胞死マーカータンパク質は、ミトコンドリア外膜上にて機能するタンパク質であることが好ましい。即ち、ミトコンドリアは細胞死の発現に大きく関与する細胞内小器官であって、そこで機能するタンパク質の量を調整することは、過度の細胞死（アポトーシス）発現の効果的な抑制につながると考えられるからである。
【００４１】
ここで細胞死マーカータンパク質の例としては、チトクロームＣがある。チトクロームＣタンパク質は、通常ミトコンドリア内に存在するが、アポトーシスが起こる際にミトコンドリア外膜上にある「ＶＤＡＣ（Voltage-Dependent Anion Channelの略）」と呼ばれる細孔を通って外部に放出される。チトクロームＣタンパク質は、アポトーシス（詳細にはカズパーゼ−３依存性アポトーシス）を誘導するタンパク質であるため、通常は加齢に伴って発現量が増加する傾向を示す。
【００４２】
チトクロームＣ以外の細胞死マーカータンパク質の例としては、例えば、Ｂｃｌ−２タンパク質及びそれと構造が類似した十数種類のタンパク質群（いわゆるＢｃｌ−２タンパク質ファミリー）が知られている。
【００４３】
当該ファミリーの中核をなすＢｃｌ−２タンパク質は、ｂｃｌ−２遺伝子が作るタンパク質であって、加齢に伴って発現量が減少する傾向を示す。Ｂｃｌ−２タンパク質は、ミトコンドリア外膜上のＶＤＡＣに結合して孔を細くすることでチトクロームＣの放出を抑制し、これによりアポトーシスを抑制する働きがある。同様の働きを有するタンパク質としては、ｂｃｌ−ｘＬ遺伝子が作るＢｃｌ−ｘＬタンパク質や、ｂｃｌ−ｘＳ遺伝子が作るＢｃｌ−ｘＳタンパク質などがある。これらも、加齢に伴って発現量が減少する傾向を示す細胞死マーカータンパク質である。
【００４４】
当該ファミリーに属するものであって、加齢に伴って発現量が増加する傾向を示す細胞死マーカータンパク質の例としては、例えば、Ｂａｘタンパク質などがある。Ｂａｘタンパク質（Ｂｃｌ−２ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ Ｘ ｐｒｏｔｅｉｎ）は、ミトコンドリア外膜上のＶＤＡＣに結合して孔を拡げることでチトクロームＣの放出を促進し、これによりアポトーシスを促進する働きがある。同様の働きを有するタンパク質としては、そのほかにもｈｒｋ遺伝子が作るＨｒｋタンパク質、ｍｔｄ遺伝子が作るＭｔｄタンパク質、ｂａｋ遺伝子が作るＢａｋタンパク質、ｂａｄ遺伝子が作るＢａｄタンパク質などがある。
【００４５】
本発明のマーカータンパク質量調節用組成物は、さらに、加齢に伴って量的に変化する疾病マーカータンパク質についてその量的変化を小さくする方向に調節することが好ましい。即ち、このような疾病マーカータンパク質の量的変化を小さくする方向に調節すれば、当該疾病マーカータンパク質が関与している疾病（加齢に伴う疾病）の発生率を低減することが可能と考えられるからである。従って、細胞死マーカータンパク質量調節作用と疾病マーカータンパク質量調節作用との相乗効果により、加齢に伴う老化現象や疾病をより確実に予防することが可能となる。
【００４６】
前記疾病マーカータンパク質の具体例としては、例えば、ｉＮＯＳ、ＣＯＸ−２、ＰＰＡＲα、ＨＯ−１などがある。
【００４７】
ｉＮＯＳ（誘導型一酸化窒素シンターゼ）は、加齢に伴ってその発現量が増加する傾向を示すタンパク質であって、炎症マーカータンパク質としても知られている。ｉＮＯＳは、強力な活性酸素である一酸化窒素（ＮＯ）を産生する酵素であるため、これが増加すると細胞に炎症が起きて細胞障害を起こしやすくなる。よって、ｉＮＯＳの発現量を減少させる方向に調節すれば、ｉＮＯＳが関与する炎症の発生率の低減、さらには炎症が引き起こす疾病の発生率の低減が可能である。
【００４８】
ＣＯＸ−２（シクロオキシゲナーゼ−２）も、加齢に伴って発現量が増加する傾向を示すタンパク質であって、炎症マーカータンパク質としても知られている。ＣＯＸ−２は、アラキドン酸代謝経路で、膜のリン脂質からホスホリパーゼＡ２を介して遊離されたアラキドン酸を、ＰＧ−Ｇ２やＰＧ−Ｈ２を介して、トロンボキサンやＰＧ−Ｅ２をはじめとするアラキドン酸代謝物に転換するときに、一番中心的に働く酵素である。ＣＯＸ−２は、ＩＬ−１やＴＮＦ−αなどのサイトカインが存在する時に大量発現するが、加齢した細胞では炎症が起きやすいため、加齢に伴ってその発現量が増加する傾向を示す。よって、ＣＯＸ−２の発現量を減少させる方向に調節すれば、ＣＯＸ−２が関与する炎症の発生率の低減、さらには炎症が引き起こす疾病の発生率の低減が可能である。
【００４９】
ＰＰＡＲα（ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体α）は、抗炎症マーカータンパク質の一種であって、加齢に伴って発現量が減少する傾向を示す。ペルオキシソーム（ＰＰ）は、肝臓ＤＮＡ合成や肝臓細胞のアポトーシスの抑制などに影響を及ぼすことが報告されているが、ＰＰＡＲαがＰＰに結合するとＰＰを活性化し、活性化されたＰＰがレチノイドＸ受容体（ＲＸＲ）とヘテロダイマーを形成してβ酸化に関連した遺伝子の転写等を促進させると考えられている。よって、ＰＰＡＲαの発現量を増加させる方向に調節すれば、ＰＰＡＲαの抗炎症作用の強化に伴う炎症発生率の低減、さらには炎症が引き起こす疾病の発生率の低減が可能である。
【００５０】
ＨＯ−１（ヘモオキシゲナーゼ−１）は、酸化ストレスにより誘導されるタンパク質の一種であって、加齢に伴って発現量が減少する傾向を示す。ＨＯ−１は、ヘムの分解に関与しており、ＮＡＤＰＨや酸素等の存在下でヘムを一酸化炭素、鉄イオン、ビリベルディンへと分解する。ビリベルディンは強力なラジカル・スカベンジャーであり、これが抗酸化ストレス作用を奏する。よって、ＨＯ−１の発現量を増加させる方向に調節すれば、酸化ストレスが原因である疾病の発生率の低減が可能である。なお、上述した細胞死についても酸化ストレスの関与が知られており、ＨＯ−１の増加は間接的ではあるが細胞死の抑制にも寄与しうると考えられる。
【００５１】
本発明のマーカータンパク質量調節用組成物は、さらに脂質代謝改善作用を有することが好ましい。即ち、加齢に伴って脂質代謝機能も低下するため、脂質代謝を改善することで加齢に伴う疾病の発生率を低減することが可能と考えられるからである。従って、細胞死マーカータンパク質量調節作用、疾病マーカータンパク質量調節作用、及び脂質代謝改善作用の相乗効果により、加齢に伴う老化現象や疾病をより確実に予防することが可能となる。なお、前記脂質代謝改善作用とは、具体的には血清中のコレステロール値などを低減する作用や、臓器組織中のコレステロール値などを低減する作用のことをいう。ただし、ＨＤＬコレステロールのような、いわゆる善玉コレステロールの値については、低減しないことが好ましい。
【００５２】
本発明のマーカータンパク質量調節用組成物は、飲食品、飼料、医薬部外品、医薬品等に幅広く応用できるが、特に人が手軽に摂食できる飲食品に応用することが好ましい。
【００５３】
本発明における飲食品とは、溶液、懸濁物、粉末、固体成形物等、経口摂取可能な形態であればよく、特に限定するものではない。飲食物の具体例としては、例えば、即席麺、レトルト食品、缶詰、電子レンジ食品、即席スープ・みそ汁類、フリーズドライ食品等の即席食品類、清涼飲料、果汁飲料、野菜飲料、豆乳飲料、コーヒー飲料、茶飲料、粉末飲料、濃縮飲料、栄養飲料、アルコール飲料等の飲料類、パン、パスタ、麺、ケーキミックス、から揚げ粉、パン粉等の小麦粉製品、飴、キャラメル、チューイングガム、チョコレート、クッキー、ビスケット、ケーキ、パイ、スナック、クラッカー、和菓子、デザート菓子等の菓子類、ソース、トマト加工調味料、風味調味料、調理ミックス、たれ類、ドレッシング類、つゆ類、カレー・シチューの素等の調味料、加工油脂、バター、マーガリン、マヨネーズ等の油脂類、乳飲料、ヨーグルト類、乳酸菌飲料、アイスクリーム類、クリーム類等の乳製品、冷凍食品、魚肉ハム・ソーセージ、水産練り製品等の水産加工品、畜肉ハム・ソーセージ等の畜産加工品、農産缶詰、ジャム・マーマレード類、漬け物、煮豆、シリアル等の農産加工品、栄養食品、錠剤、カプセル等を挙げることができる。
【００５４】
本発明のマーカータンパク質量調節用組成物の飲食品としての摂取量は、本発明の病気の状態、病人の体重、年齢、体質、体調等によって調整されるべきであるが、一般に１日あたりマーカータンパク質量調節用組成物として０．０５ｇ〜２０ｇ、好ましくは０．１ｇ〜５ｇの範囲で適宜設定することができる。上記飲食物は、病気の状態や食品等の形態によって、１日１回ないし数回にわけて摂取することができる。
【００５５】
本発明において、マーカータンパク質量調節用組成物またはそれを含有する飲食品等に加工する際に、各種栄養成分を強化することができる。
【００５６】
強化できる栄養成分としては、ビタミンＡ、ビタミンＢ１、ビタミンＢ２、ビタミンＢ６、ビタミンＢ１２、ビタミンＣ、ビタミンＤ、ビタミンＥ、ナイアシン（ニコチン酸）、パントテン酸、葉酸等のビタミン類、リジン、スレオニン、トリプトファン等の必須アミノ酸類や、カルシウム、マグネシウム、鉄、亜鉛、銅等のミネラル類、及び、例えば、α−リノレン酸、ＥＰＡ、ＤＨＡ、月見草油、オクタコサノール、カゼインホスホペプチド（ＣＰＰ）、カゼインカルシウムペプチド（ＣＣＰ）、水溶性食物繊維、不溶性食物繊維、オリゴ糖等の人の健康に寄与する物質類、その他の食品や食品添加物として認可されている有用物質の１種または２種以上が使用できる。
【００５７】
本発明における飼料とは、ヒト以外の生物に摂食させるための食べ物のことをいい、その形態については特に限定されない。飼料を適用しうる生物としては特に限定されないが、例えば、養殖動物やペット動物などが挙げられる。養殖動物としては、例えば、ウマ、ウシ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、ラクダ、ラマなどの家畜や、マウス、ラット、モルモット、ウサギなどの実験動物や、ニワトリ、アヒル、七面鳥、ダチョウなどの家禽などがある。ペット動物としては、例えば、イヌ、ネコなどがある。
【００５８】
本発明における医薬部外品及び医薬品とは、経口投与または非経口投与に適した賦形剤、その他の添加剤を用い、常法に従って経口製剤または注射剤として調製されたものをいう。好ましい医薬部外品及び医薬品の態様は経口製剤であり、最も好ましいのは経口固形製剤である。経口固形製剤は、容易に服用でき、かつ保存、持ち運びに便利だからである。
【００５９】
経口固形製剤としては、例えば、錠剤、散剤、細粒剤、顆粒剤、カプセル剤、丸剤、徐放剤等がある。本発明の経口固形製剤は、適宜の薬理学的に許容され得る坦体、賦形剤（例えばデンプン、乳糖、白糖、炭酸カルシウム、リン酸カルシウムなど）、結合剤（例えばデンプン、アラビアガム、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、結晶セルロース、アルギン酸、ゼラチン、ポリビニルピロリドンなど）、滑沢剤（例えばステアリン酸、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウムなど）、崩壊剤（例えばカルボキシメチルセルロース、タルクなど）、などをマーカータンパク質量調節用組成物と混合して固形化することにより得られる。
【００６０】
また、経口液状製剤とは、製薬学的に許容される乳濁剤、溶液剤、懸濁剤、シロップ剤、エリキシル剤等を含み、一般的に用いられる不活性な希釈剤、例えば精製水、エチルアルコールを含むものをいう。本発明の経口液状製剤は、老化予防組成物及び希釈剤のほかに、湿潤剤、懸濁剤のような補助剤、甘味剤、風味剤、芳香剤、防腐剤等をさらに含有していてもよい。
【００６１】
非経口投与に適した注射剤は、無菌の水性または非水性の溶液剤、懸濁剤、乳濁剤等を含んでいる。水性の溶液剤、懸濁剤の希釈剤としては、例えば、注射用蒸留水及び生理食塩水がある。非水溶性の溶液剤、懸濁剤の希釈剤としては、例えば、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、オリーブ油のような植物油、エチルアルコールのようなアルコール類、ポリソルベート８０等がある。この注射剤は、さらに防腐剤、湿潤剤、乳化剤、分散剤、安定化剤（例えばラクトース）、溶解補助剤（例えば、グルタミン酸、アスパラギン酸）のような補助剤を含んでもよい。これらは、例えばバクテリア保管フィルターを通す濾過、殺菌剤の配合または照射によって無菌化される。また、これらは、無菌の固体組成物を製造し、その使用前に無菌水または無菌の注射用溶媒に溶解して、使用することもできる。
【００６２】
本発明のマーカータンパク質量調節用組成物の医薬品としての投与量は、投与ルート、疾患の症状、投与対象の年齢、性別等を考慮して個々の場合に応じて適宜決定されるが、通常、成人１人当たり有効成分約４０ｍｇ／日〜３ｇ／日、好ましくは１００ｍｇ／日〜５００ｍｇ／日である。
【００６３】
以下、本発明を実施例にて詳細に説明するが、以下の実施例は本発明の範囲を限定するものではない。
[実施例１] マーカータンパク質量調節用組成物の調製１（水抽出）
【００６４】
アムラー乾燥果実を粉砕後篩別して４０メッシュ以下にし、その粉末８０ｇに、蒸留水２Ｌを加え、５５℃で３時間抽出を行った。その後、抽出液を遠心分離（３０００ｒｐｍ、１０分間）し、その上清を濾過し、抽出液と残渣とを分離した。その残渣に蒸留水２Ｌを加え、同条件でもう１回繰り返し抽出を行い、それぞれの抽出液を合わせた後、凍結乾燥し、本発明のマーカータンパク質量調節用組成物Ａ，３５．０ｇを得た。収率は４３．８％であった。
[実施例２] マーカータンパク質量調節用組成物の調製２（酢酸エチル分画）
【００６５】
アムラー乾燥果実を４０メッシュ以下に粉砕し、その粉末８０ｇに、蒸溜水２Ｌを入れ、５５℃で３時間抽出した。その後、遠心分離し、その上清を濾過し、抽出物と残渣とを分離した。その残渣に蒸留水２Ｌを加え、同条件でもう１回繰り返し抽出を行い、それぞれの抽出液を合わせた後、減圧濃縮し、２００ｍＬとした。この濃縮液に酢酸エチルを加え、５００ｍＬになるように調製（最終酢酸エチル濃度６０％）し、これをよく攪拌した後、４℃で２４時間静置した。その後、酢酸エチル層を分離して、減圧濃縮を行った後、濾液を凍結乾燥することで、本発明のマーカータンパク質量調節用組成物Ｂ，１２．５ｇを得た。
［試験例１］マーカータンパク質量調節用組成物の効果確認
【００６６】
（１）加齢ラットの飼育、採血、肝臓採取
【００６７】
日本ＳＬＣ社より購入した雄ウィスター系ラット（体重１２０ｇ〜１３０ｇ)を室温２５℃、湿度６０％のワイヤーケージ内で訓化させた。飼料としては日本ＣＬＥＡ社製のペレット飼料（蛋白質２４．０％、脂質３．５％、炭水化物６０．５％）を使用した。飼料は自由に摂餌させ、水も自由に飲ませるようにした。そして、基本的にラットを４つの群に分けた（n=10/群）。
【００６８】
アムラー無投与の若齢コントロール群である試験区１では、２ヶ月齢の若齢ラット１０匹に対し、生理食塩水を１００日間にわたり経口投与した。アムラー無投与の加齢コントロール群である試験区２では、１０ヶ月齢の加齢ラット１０匹に対し、生理食塩水を１００日間にわたり経口投与した。加齢ラットにアムラー水抽出物を投与する群である試験区３では、１０ヶ月齢の加齢ラット１０匹に対し、前記組成物Ａ（４０ｍｇ／ｋｇ体重／日）を１００日間にわたり経口投与した。加齢ラットにアムラー水抽出物の酢酸エチル分画物を投与する群である試験区４では、１０ヶ月齢の加齢ラット１０匹に対し、前記組成物Ｂ（１０ｍｇ／ｋｇ体重／日）を１００日間にわたり経口投与した。
【００６９】
その後、ラットを屠殺し、尾静脈より採血を行った。採血後、直ちに遠心分離（３６００ｒｐｍ，１０ｍｉｎ）により血清を分離し、得られた血清サンプルを分析に供するまで−８０℃にて凍結保存した。これと同時に肝臓を採取し、分析に供するまで−８０℃にて凍結保存した。
【００７０】
（２）マーカータンパク質の発現量の比較
【００７１】
ここでは、本発明の組成物Ａ，Ｂのマーカータンパク質量調節作用を確認するために、ラット肝組織における各種マーカータンパク質の発現量の変化を比較する試験を行った。
【００７２】
ａ）測定方法及び結果
【００７３】
−８０℃で保存しておいた肝臓を氷冷下でホモジナイズし、細胞質画分を抽出し、これを試料とした。この試料中の各タンパク濃度は、抗Ｂａｘ抗体、抗Ｂｃｌ−２抗体、抗ＨＯ−１抗体、抗ｉＮＯＳ抗体、抗ＣＯＸ−２抗体、抗ＰＰＡＲα抗体をそれぞれ使用して、ウエスタン・ブロッティング法により定量した。その結果を図１の表に示す。
【００７４】
ｂ）結果及び考察
【００７５】
Ｂａｘタンパク質： 若齢コントロール群（試験区１）に比較して、加齢コントロール群（試験区２）では発現量が有意に増加していた（１００％→１４６％）。しかし、このような加齢コントロール群（試験区２）を基準とした場合、試験区３，４では発現量が有意に減少しており、その減少率は試験区３で約１６％、試験区４で約１０％であった。つまり、Ｂａｘタンパク質に対する発現量調節作用が組成物Ａ，Ｂの両方で確認され、とりわけ組成物Ａのほうが勝っていた。
【００７６】
Ｂｃｌ−２タンパク質： 若齢コントロール群（試験区１）に比較して、加齢コントロール群（試験区２）では発現量が有意に減少していた（１００％→９３％）。しかし、このような加齢コントロール群（試験区２）を基準とした場合、試験区３，４では発現量が有意に増加しており、その増加率は試験区３で約５６％、試験区４で約１１％であった。つまり、Ｂｃｌ−２タンパク質に対する発現量調節作用が組成物Ａ，Ｂの両方で確認され、とりわけ組成物Ａのほうが勝っていた。
【００７７】
ＨＯ−１タンパク質： 若齢コントロール群（試験区１）と比較して、加齢コントロール群（試験区２）では発現量の有意な変化は認められず、わずかに減少する傾向が見られた（１００％→９７％）。しかし、加齢コントロール群（試験区２）を基準とした場合、試験区３，４では発現量が有意に増加しており、その増加率は試験区３で約１９％、試験区４で約６％であった。つまり、ＨＯ−１タンパク質に対する発現量調節作用が組成物Ａ，Ｂの両方で確認され、とりわけ組成物Ａのほうが勝っていた。
【００７８】
ｉＮＯＳタンパク質： 若齢コントロール群（試験区１）に比較して、加齢コントロール群（試験区２）では発現量が有意に増加していた（１００％→４８５％）。しかし、このような加齢コントロール群（試験区２）を基準とした場合、試験区３，４では発現量が有意に減少しており、その減少率は試験区３で約１５％、試験区４で約４６％であった。つまり、ｉＮＯＳタンパク質に対する発現量調節作用が組成物Ａ，Ｂの両方で確認され、とりわけ組成物Ｂのほうが勝っていた。
【００７９】
ＣＯＸ−２タンパク質： 若齢コントロール群（試験区１）に比較して、加齢コントロール群（試験区２）では発現量が有意に増加していた（１００％→１１１％）。しかし、このような加齢コントロール群（試験区２）を基準とした場合、試験区３，４では発現量が有意に減少しており、その減少率は試験区３で約１５％、試験区４で約４６％であった。つまり、ＣＯＸ−２タンパク質に対する発現量調節作用が組成物Ａ，Ｂの両方で確認された。
【００８０】
ＰＰＡＲαタンパク質： 若齢コントロール群（試験区１）に比較して、加齢コントロール群（試験区２）では発現量が有意に減少していた（１００％→６０％）。しかし、このような加齢コントロール群（試験区２）を基準とした場合、試験区３，４では発現量が有意に増加しており、その増加率は試験区３で約４８％、試験区４で約４８％であった。
【００８１】
（３）血清中におけるコレステロールの比較及び中性脂質の比較
【００８２】
ここでは、本発明の組成物Ａ，Ｂの脂質代謝改善作用を確認するために、加齢ラットに対して組成物Ａ，Ｂを与えた場合の血清中におけるコレステロールの比較試験及び中性脂質（トリグリセリド）の比較試験を行った。
【００８３】
ａ）測定方法
【００８４】
−８０℃にて凍結保存していた血清サンプルを解凍し、血清コレステロール測定用キット（和光純薬工業社製）を用いて、コレステロールオキシダーゼ法により、総コレステロール、遊離コレステロール、コレステロールエステル、ＬＤＬコレステロール、ＨＤＬコレステロールの値をそれぞれ測定した。また、血清トリグリセリド測定用キット（和光純薬工業社製）を用いて、中性脂肪の値を測定した。その結果を図２の表に示す。
【００８５】
ｂ）結果及び考察
【００８６】
若齢コントロール群（試験区１）に比較して、加齢コントロール群（試験区２）では、総コレステロール、遊離コレステロール、コレステロールエステル、ＬＤＬコレステロール、中性脂肪について増加傾向が認められた。試験区３，４でも、これらのものについて増加傾向が認められたが、その程度は試験区２よりも小さかった。つまり、組成物Ａ，Ｂに血清中コレステロール値及び中性脂肪値を下げる作用があることが確認された。
【００８７】
（４）肝組織中におけるコレステロールの比較及び中性脂質の比較
【００８８】
ここでは、本発明の組成物Ａ，Ｂの脂質代謝改善作用を確認するために、加齢ラットに対して組成物Ａ，Ｂを与えた場合の肝組織中におけるコレステロールの比較試験及び中性脂質（トリグリセリド）の比較試験を行った。
【００８９】
ａ）測定方法
【００９０】
−８０℃にて凍結保存していた肝臓組織を用い、これをクロロホルム：メタノール２：１（ｖ／ｖ）混液で磨砕・抽出後に定容とし、Ｚａｋ−Ｈｅｎｌｙ法で定量することにより、総コレステロール、遊離コレステロール、コレステロールエステルの値をそれぞれ測定した。また、上記の肝臓組織をアセチルアセトン法で定量することにより、中性脂肪の値を測定した。その結果を図３の表に示す。
【００９１】
ｂ）結果及び考察
【００９２】
若齢コントロール群（試験区１）に比較して、加齢コントロール群（試験区２）では、総コレステロール、遊離コレステロール、コレステロールエステル、中性脂肪の値がいずれも有意に増加していた。試験区３，４でも、これらのものについて増加傾向が認められたが、その程度は試験区２よりも明らかに小さかった。つまり、組成物Ａ，Ｂに肝組織中コレステロール値及び中性脂肪値を下げる作用があることが確認された。
【００９３】
（４）チオバルビツール酸反応物質（ＴＢＡＲＳ）の比較
【００９４】
ここでは、本発明の組成物Ａ，Ｂの作用を確認するために、加齢ラットに対して組成物Ａ，Ｂを与えた場合の血清中ＴＢＡＲＳ濃度の比較試験、肝組織中ＴＢＡＲＳ濃度の比較試験をそれぞれ行った。なお、ＴＢＡＲＳは酸化ストレスのマーカーであり、活性酸素などの酸化ストレスが多い場合に増加することがわかっている。
【００９５】
ａ）測定方法
【００９６】
−８０℃にて凍結保存していた血清サンプルを解凍し、これを用いてチオバルビツール酸法（ＴＢＡ法）により血清中ＴＢＡＲＳ濃度を測定した。また、−８０℃にて凍結保存していた肝臓組織を用い、これをクロロホルム：メタノール２：１（ｖ／ｖ）混液で磨砕・抽出後に定容とし、これを用いてＴＢＡ法により肝組織中ＴＢＡＲＳ濃度を測定した。上記ＴＢＡ法の具体的な手順は以下のとおりである。まず、一定量の血清に、２％ブチルヒドロキシトルエン、ＴＢＡ、トリクロロ酢酸及び塩酸の混液を加えて混和した。これを沸騰水浴中で１５分間加熱した後、水冷して遠心分離し、その上清の５３５ｎｍにおける吸光度を測定した。その結果を図４の表に示す。
【００９７】
ｂ）結果及び考察
【００９８】
若齢コントロール群（試験区１）に比較して、加齢コントロール群（試験区２）では、血清中ＴＢＡＲＳ濃度及び肝組織中ＴＢＡＲＳ濃度がいずれも有意に増加していた。しかし、加齢コントロール群（試験区２）を基準とした場合、試験区３，４では当該濃度が有意に減少していた。従って、組成物Ａ，ＢにはＴＢＡＲＳ濃度を減少させる作用、つまり抗酸化ストレス作用があることが確認された。
[実施例３] マーカータンパク質量調節用組成物含有飲食品（錠菓）の調製
【００９９】
実施例１で得られた組成物Ａ，５ｇ、乳糖３０ｇ、ＤＨＡ含有粉末油脂（サンコートＤＹ−５；太陽化学株式会社製）１２ｇ、ショ糖脂肪酸エステル４ｇ、ヨーグルト香料４ｇを混合し、この混合物をロータリー式打錠機を用いて加圧成形して１錠が３００ｍｇの本発明のマーカータンパク質量調節用組成物含有飲食品（錠菓）を得た。また、これに対する比較例として、当該組成物Ａのみを含有しない反面、乳糖などの他の成分を含有する飲食品（錠菓）を、同様の方法により得た。
【０１００】
そして、これら２種の錠菓について、５名のパネラーによる官能検査を行った結果、色、匂い及び味のいずれにおいても両者に有意差が認められなかった。また、これら２種の錠菓を常温で長期間（１ヶ月間，３ヶ月間，６ヶ月間）保存したところ、両者とも色、匂い及び味について特に目立った変化は認められず、いずれも保存性に優れていた。
［実施例４］マーカータンパク質量調節用組成物含有飲食品（飲料）の調製
【０１０１】
実施例１で得られた組成物Ａ，５ｇ、１／５濃縮グレープフルーツ透明果汁２．１ｇ、エリスリトール３０ｇ、クエン酸結晶２．５ｇ、クエン酸三ナトリウム０．５ｇ、Ｌ−アスコルビン酸０．５ｇ、乳酸カルシウム１．９３ｇ、ＣＣＰ０．１５ｇ、グレープフルーツ香料１．０ｍＬを水に混合溶解し、全量を１０００ｍＬとした。それを１００ｍＬの瓶に充填し、キャップで密栓した後、９０℃、３０分間加熱殺菌をして、本発明のマーカータンパク質量調節用組成物含有飲食品（飲料）を得た。また、これに対する比較例として、当該組成物Ａのみを含有しない反面、他の成分を含有する飲食品（飲料）を、同様の方法により得た。
【０１０２】
そして、これら２種の飲料について、５名のパネラーによる官能検査を行った結果、色、匂い及び味のいずれにおいても両者に有意差が認められなかった。また、これら２種の飲料を冷蔵庫で長期間（１ヶ月間，３ヶ月間，６ヶ月間）保存したところ、両者とも色、匂い及び味について特に目立った変化は認められず、いずれも保存性に優れていた。
［実施例５］マーカータンパク質量調節用組成物含有飲食品（野菜果汁混合飲料）の調製
【０１０３】
実施例１で得られた組成物Ａ，０．２ｇ、グアーガム分解物（サンファイバーＲ；太陽化学株式会社製）３ｇを市販の野菜果汁混合飲料１００ｍＬに添加混合溶解して、本発明のマーカータンパク質量調節用組成物含有飲食品（野菜果汁混合飲料）を得た。また、これに対する比較例として、当該組成物Ａを含有せず、グアーガム分解物を含有する飲食品（野菜果汁混合飲料）を、同様の方法により得た。
【０１０４】
そして、これら２種の野菜果汁混合飲料について、５名のパネラーによる官能検査を行った結果、色、匂い及び味のいずれにおいても両者に有意差が認められなかった。また、これら２種の飲料を冷蔵庫で１ヶ月間保存したところ、両者とも色、匂い及び味について特に目立った変化は認められず、いずれも保存性に優れていた。
［実施例６］マーカータンパク質量調節用組成物含有飲食品（クッキー）の調製
【０１０５】
実施例２で得られた組成物Ｂ，４ｇ、市販のケーキミックス粉２００ｇを容器に入れた後、バター３５ｇを入れ、木杓子で混ぜ合わせた。それに溶き卵２５ｇを加えて、なめらかな生地になるまで良く練った。小麦粉を振った台の上に生地を取り出し、さらに小麦粉を振って麺棒で５ｍｍの厚さに伸ばし、丸型で抜き、それを１７０℃のオーブンで１０分間焼いて、１個約５ｇの本発明のマーカータンパク質量調節用組成物含有飲食品（クッキー）を得た。
［実施例７］マーカータンパク質量調節用組成物含有飲食品（ヨーグルト）の調製
【０１０６】
実施例１で得られた組成物Ａ，１ｇ、市販の脱脂乳（明治乳業社製、蛋白質含量３４％）９５ｇ、及び市販の無塩バター（雪印乳業社製）３５ｇを温水０．８Ｌに溶解し、均質化し、全量を１Ｌに調整した。次いで、これを９０℃で１５分間加熱殺菌した後、冷却し、市販の乳酸菌スターター（ハンゼン社製）３ｇ（ストレプトコッカス・サーモフィラス２ｇ及びラクトバシラス・ブルガリクス１ｇ）を接種した。さらに、これを均一に混合し、１００ｍＬの容器に分注・充填した後、密封して３７℃で２０時間発酵させた後、冷却することで、本発明のマーカータンパク質量調節用組成物含有飲食品（ヨーグルト）を得た。
［実施例８］マーカータンパク質量調節用組成物含有飲食品（経口流動食）の調製
【０１０７】
カゼインナトリウム（ＤＭＶ社製）５０ｇ、卵白酵素分解物（太陽化学社製）４２．５ｇ、デキストリン（松谷化学社製）１００ｇを水１Ｌに溶解させ、水相をタンク内に調製した。これとは別に、ＭＣＴ（花王社製）４５ｇ、パーム油（不二製油社製）１７．５ｇ、サフラワー油（太陽油脂社製）３５ｇ、レシチン（太陽化学社製）０．７ｇ、消泡剤（太陽化学社製）１ｇを混合溶解し、油相を調製した。タンク内の水相に油相を添加し、攪拌して混合した後、７０℃に加温し、さらに、ホモゲナイザーにより１４．７ＭＰａの圧力で均質化した。次いで、９０℃で１０分間殺菌した後、濃縮し、噴霧乾燥して、中間製品粉末約２６０ｇを調製した。この中間製品粉末２００ｇに、実施例２で得られた組成物Ｂ，４ｇ、デキストリン（松谷化学社製）１５６ｇ、グアーガム分解物（サンファイバーＲ；太陽化学株式会社製）１８ｇ、少量のビタミン・ミネラル、及び粉末香料を添加し、均一に混合して、本発明のマーカータンパク質量調節用組成物含有飲食品（経口流動食）約３８０ｇを得た。
［実施例９］マーカータンパク質量調節用組成物含有錠剤の調製
【０１０８】
実施例１で得られた組成物Ａ，１０ｇ、結晶セルロース５ｇ、トウモロコシデンプン１３．８ｇ、乳糖３２．５ｇ、ヒドロキシプロピルセルロース３．３ｇを混合し、顆粒化した。この顆粒化物にステアリン酸マグネシウム１．０ｇを加え、均一に混合し、この混合物をロータリー式打錠機で加圧成形することにより、一錠が１３０ｍｇの本発明のマーカータンパク質量調節用組成物含有錠剤を得た。
［実施例１０］マーカータンパク質量調節用組成物含有ドリンク剤の調製
【０１０９】
実施例２で得られた組成物Ｂ，５５ｇに、ブドウ糖５２８ｇ、果糖８５．４ｇ、粉末クエン酸１５．８ｇ、クエン酸ナトリウム１１．２ｇ、乳酸カルシウム１．３ｇ、塩化マグネシウム１．３ｇ、粉末天然香料１３．２ｇ、ビタミンＣを添加し、さらに水を加えて１１Ｌとした。この液体を乾熱滅菌済の１１０ｍＬ褐色瓶に充填して、アルミキャップで密封した後、１２０℃、３０分間の滅菌を行い、ドリンク剤１００本を得た。
［実施例１１］マーカータンパク質量調節用組成物含有カプセル剤の調製
【０１１０】
実施例１で得られた組成物Ａ，５０ｇに、銅クロロフィリン酸ナトリウム１ｇを加えて熱殺菌した後、それを日本薬局カプセル（＃１）に１カプセルあたり０．４ｇ充填し、カプセル剤１００個を得た。
［実施例１２］マーカータンパク質量調節用組成物含有豚繁殖用飼料の調製
【０１１１】
実施例２で得られた組成物Ｂ，１．０ｋｇに対し、とうもろこし８．０ｋｇ、マイロ５．６ｋｇ、大豆油かす２．２ｋｇ、ふすま１．２ｋｇ、魚粉１．０ｋｇ、動物性油脂０．４ｋｇ、ビタミン・ミネラル類０．６ｋｇを配合して、豚繁殖用飼料２０．０ｋｇを調製した。
【０１１２】
本発明の実施態様及び目的生成物を挙げれば以下の通りである。
【０１１３】
（１）加齢に伴って量的に変化する細胞死マーカータンパク質についてその量的変化を小さくする方向に調節する組成物であって、アムラー水抽出物を有効成分として含有するマーカータンパク質量調節用組成物。
【０１１４】
（２）加齢に伴って量的に変化する細胞死マーカータンパク質についてその量的変化を小さくする方向に調節する組成物であって、アムラー水抽出物における有機溶媒画分を有効成分として含有するマーカータンパク質量調節用組成物。
【０１１５】
（３）加齢に伴って量的に変化する細胞死マーカータンパク質についてその量的変化を小さくする方向に調節する組成物であって、アムラー水抽出物における酢酸エチル抽出画分を有効成分として含有するマーカータンパク質量調節用組成物。
【０１１６】
（４）上記（１）乃至（３）のいずれか１項において、前記細胞死マーカータンパク質がＢａｘであり、１０ヶ月齢以上の加齢ラットに対して当該組成物を与えたときのＢａｘの発現量の減少率が、前記加齢ラットに対して当該組成物を与えないときのＢａｘの発現量の５％以上（好ましくは１０％以上）であるマーカータンパク質量調節用組成物。
【０１１７】
（５）上記（１）乃至（４）のいずれか１項において、前記細胞死マーカータンパク質がＢｃｌ−２であり、１０ヶ月齢以上の加齢ラットに対して当該組成物を与えたときのＢｃｌ−２の発現量の増加率が、前記加齢ラットに対して当該組成物を与えないときのＢｃｌ−２の発現量の１０％以上（好ましくは３０％以上）であるマーカータンパク質量調節用組成物。
【０１１８】
（６）上記（１）乃至（５）のいずれか１項において、前記組成物は、さらに、加齢に伴って量的に変化する疾病マーカータンパク質についてその量的変化を小さくする方向に調節することを特徴とするマーカータンパク質量調節用組成物。
【０１１９】
（７）上記（６）において、前記疾病マーカータンパク質がＨＯ−１であり、１０ヶ月齢以上の加齢ラットに対して当該組成物を与えたときのＨＯ−１の発現量の増加率が、前記加齢ラットに対して当該組成物を与えないときのＨＯ−１の発現量の５％以上（好ましくは１０％以上）であるマーカータンパク質量調節用組成物。
【０１２０】
（８）上記（６）または（７）において、前記疾病マーカータンパク質がｉＮＯＳであり、１０ヶ月齢以上の加齢ラットに対して当該組成物を与えたときのｉＮＯＳの発現量の減少率が、前記加齢ラットに対して当該組成物を与えないときのｉＮＯＳの発現量の１０％以上（好ましくは３０％以上）であるマーカータンパク質量調節用組成物。
【０１２１】
（９）上記（６）乃至（８）のいずれか１項において、前記疾病マーカータンパク質がＣＯＸ−２であり、１０ヶ月齢以上の加齢ラットに対して当該組成物を与えたときのＣＯＸ−２の発現量の減少率が、前記加齢ラットに対して当該組成物を与えないときのＣＯＸ−２の発現量の１０％以上（好ましくは２０％以上）であるマーカータンパク質量調節用組成物。
【０１２２】
（１０）上記（１）乃至（９）のいずれか１項において、脂質代謝改善作用をさらに有することを特徴とするマーカータンパク質量調節用組成物。
【０１２３】
（１１）上記（１０）において、血清中のコレステロール値を減少させる作用をさらに有することを特徴とするマーカータンパク質量調節用組成物。
【０１２４】
（１２）上記（１０）または（１１）において、肝組織中のコレステロール値を減少させる作用をさらに有することを特徴とするマーカータンパク質量調節用組成物。
【０１２５】
（１３）上記（１）乃至（９）のいずれか１項において、チオバルビツール酸反応物質の値を減少させる作用をさらに有することを特徴とするマーカータンパク質量調節用組成物。
【０１２６】
（１４）上記（１）乃至（１３）のいずれか１項に記載のマーカータンパク質量調節用組成物を含有することを特徴とする飲食品、飼料、医薬部外品または医薬品。
【０１２７】
（１５）アムラー抽出物を有効成分として含有する細胞死マーカータンパク質量調節用組成物を用いて、過度の細胞死発現を抑制する方法。
【０１２８】
（１６）アムラー抽出物を有効成分として含有する細胞死マーカータンパク質量調節用組成物を用いて、過度の細胞死発現が関与する老化現象を予防する方法。
【０１２９】
（１７）アムラー抽出物を有効成分として含有する細胞死マーカータンパク質量調節用組成物を生物に摂取させて、過度の細胞死発現が関与する老化現象及び疾病を予防する方法。
【０１３０】
（１８）アムラー抽出物を有効成分として含有する細胞死マーカータンパク質量調節用組成物を非ヒト動物に摂取させて、過度の細胞死発現が関与する老化現象及び疾病を予防する方法。
【図面の簡単な説明】
【０１３１】
【図１】マーカータンパク質発現量比較試験の結果を示す表。
【図２】血清コレステロール値比較試験の結果を示す表。
【図３】肝組織コレステロール値比較試験の結果を示す表。
【図４】ＴＢＡＲＳ濃度比較試験の結果を示す表。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
加齢に伴って量的に変化する細胞死マーカータンパク質についてその量的変化を小さくする方向に調節する組成物であって、アムラー抽出物を有効成分として含有するマーカータンパク質量調節用組成物。
【請求項２】
前記細胞死マーカータンパク質が、細胞内タンパク質であることを特徴とする請求項１に記載のマーカータンパク質量調節用組成物。
【請求項３】
前記細胞死マーカータンパク質が、ミトコンドリア外膜上にて機能するタンパク質であることを特徴とする請求項１または２に記載のマーカータンパク質量調節用組成物。
【請求項４】
前記細胞死マーカータンパク質が、ＢａｘまたはＢｃｌ−２であることを特徴とする請求項３に記載のマーカータンパク質量調節用組成物。
【請求項５】
前記組成物は、さらに、加齢に伴って量的に変化する疾病マーカータンパク質についてその量的変化を小さくする方向に調節することを特徴とする請求項１乃至４のいずれか１項に記載のマーカータンパク質量調節用組成物。
【請求項６】
前記疾病マーカータンパク質が、ＨＯ−１またはＰＰＡＲαであることを特徴とする請求項５に記載のマーカータンパク質量調節用組成物。
【請求項７】
加齢に伴って量的に変化する細胞死マーカータンパク質であるＢａｘ及びＢｃｌ−２についてその量的変化を小さくする方向に調節するとともに、加齢に伴って量的に変化する疾病マーカータンパク質であるＨＯ−１についてその量的変化を小さくする方向に調節する組成物であって、アムラー抽出物を有効成分として含有するマーカータンパク質量調節用組成物。
【請求項８】
加齢に伴って量的に変化する細胞死マーカータンパク質であるＢａｘ及びＢｃｌ−２についてその量的変化を小さくする方向に調節するとともに、加齢に伴って量的に変化する疾病マーカータンパク質であるＨＯ−１及びＰＰＡＲαについてその量的変化を小さくする方向に調節する組成物であって、アムラー抽出物を有効成分として含有するマーカータンパク質量調節用組成物。
【請求項９】
請求項１乃至８のいずれか１項に記載のマーカータンパク質量調節用組成物を含有することを特徴とする飲食品。
【請求項１０】
請求項１乃至８のいずれか１項に記載のマーカータンパク質量調節用組成物を含有することを特徴とする飼料。
【請求項１１】
請求項１乃至８のいずれか１項に記載のマーカータンパク質量調節用組成物を含有することを特徴とする医薬部外品。
【請求項１２】
請求項１乃至８のいずれか１項に記載のマーカータンパク質量調節用組成物を含有することを特徴とする医薬品。
【請求項１】
加齢に伴って量的に変化する細胞死マーカータンパク質についてその量的変化を小さくする方向に調節する組成物であって、アムラー抽出物を有効成分として含有するマーカータンパク質量調節用組成物。
【請求項２】
前記細胞死マーカータンパク質が、細胞内タンパク質であることを特徴とする請求項１に記載のマーカータンパク質量調節用組成物。
【請求項３】
前記細胞死マーカータンパク質が、ミトコンドリア外膜上にて機能するタンパク質であることを特徴とする請求項１または２に記載のマーカータンパク質量調節用組成物。
【請求項４】
前記細胞死マーカータンパク質が、ＢａｘまたはＢｃｌ−２であることを特徴とする請求項３に記載のマーカータンパク質量調節用組成物。
【請求項５】
前記組成物は、さらに、加齢に伴って量的に変化する疾病マーカータンパク質についてその量的変化を小さくする方向に調節することを特徴とする請求項１乃至４のいずれか１項に記載のマーカータンパク質量調節用組成物。
【請求項６】
前記疾病マーカータンパク質が、ＨＯ−１またはＰＰＡＲαであることを特徴とする請求項５に記載のマーカータンパク質量調節用組成物。
【請求項７】
加齢に伴って量的に変化する細胞死マーカータンパク質であるＢａｘ及びＢｃｌ−２についてその量的変化を小さくする方向に調節するとともに、加齢に伴って量的に変化する疾病マーカータンパク質であるＨＯ−１についてその量的変化を小さくする方向に調節する組成物であって、アムラー抽出物を有効成分として含有するマーカータンパク質量調節用組成物。
【請求項８】
加齢に伴って量的に変化する細胞死マーカータンパク質であるＢａｘ及びＢｃｌ−２についてその量的変化を小さくする方向に調節するとともに、加齢に伴って量的に変化する疾病マーカータンパク質であるＨＯ−１及びＰＰＡＲαについてその量的変化を小さくする方向に調節する組成物であって、アムラー抽出物を有効成分として含有するマーカータンパク質量調節用組成物。
【請求項９】
請求項１乃至８のいずれか１項に記載のマーカータンパク質量調節用組成物を含有することを特徴とする飲食品。
【請求項１０】
請求項１乃至８のいずれか１項に記載のマーカータンパク質量調節用組成物を含有することを特徴とする飼料。
【請求項１１】
請求項１乃至８のいずれか１項に記載のマーカータンパク質量調節用組成物を含有することを特徴とする医薬部外品。
【請求項１２】
請求項１乃至８のいずれか１項に記載のマーカータンパク質量調節用組成物を含有することを特徴とする医薬品。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図２】
【図３】
【図４】
【公開番号】特開２００７−３９３８６（Ｐ２００７−３９３８６Ａ）
【公開日】平成１９年２月１５日（２００７．２．１５）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００５−２２６０３８（Ｐ２００５−２２６０３８）
【出願日】平成１７年８月３日（２００５．８．３）
【出願人】（０００２０４１８１）太陽化学株式会社 (244)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成１９年２月１５日（２００７．２．１５）
【国際特許分類】
【出願日】平成１７年８月３日（２００５．８．３）
【出願人】（０００２０４１８１）太陽化学株式会社 (244)
【Ｆターム（参考）】
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