メタボリック症候群改善剤
【課題】メタボリック症候群の症状を改善する作用に優れたメタボリック症候群改善剤を提供する。
【解決手段】本発明のメタボリック症候群改善剤は、冠元顆粒を有効成分として含有することを特徴とし、例えば、高血圧、高血糖、高中性脂肪血症及び低ＨＤＬコレステロール血症から選ばれる少なくとも一種の症状を改善することを特徴とする。
【解決手段】本発明のメタボリック症候群改善剤は、冠元顆粒を有効成分として含有することを特徴とし、例えば、高血圧、高血糖、高中性脂肪血症及び低ＨＤＬコレステロール血症から選ばれる少なくとも一種の症状を改善することを特徴とする。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、メタボリック症候群改善剤に係り、詳しくは冠元顆粒を有効成分として含有するメタボリック症候群改善剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
一般に、高カロリ食、飲酒・喫煙、運動不足、ストレス等の生活習慣が原因で生ずる病気として、肥満、高血圧、高血糖、高脂血症等の生活習慣病が知られている。これらの生活習慣病は、心筋梗塞、脳梗塞等の成人病の原因とされる動脈硬化症の危険因子として知られ、社会的に重大な問題となっている。一般に、動脈硬化症の危険因子である生活習慣病のうち複数種類の生活習慣病を併発している症状をメタボリック症候群という。より具体的には、内臓脂肪蓄積等の中心性肥満の症状がある他に、高血圧、高血糖、高中性脂肪血症及び低ＨＤＬコレステロール血症のうち２つ以上の症状に該当する場合をいう。これらの症状は、食生活の改善、適度な運動以外に根本的な治療法が確立されていないのが現状である。メタボリック症候群に該当する人は、健常者に比べ、心筋梗塞や脳梗塞を発症するリスクが高いため、現在、高血圧、高血糖等のメタボリック症候群該当因子の予防薬や治療薬の開発が急務となっている。
【０００３】
ところで、従来より生薬成分として「活血化お」の作用を有する紅花（コウカ）、芍薬（シャクヤク）、センキュウ及び丹参（タンジン）の４種類の薬草と、理気作用を有する香附子（コウブシ）及び木香（モッコウ）の２種類の薬草を所定の配合割合で調合した冠元顆粒が知られている。従来より、冠元顆粒は各種有効成分により中年以降又は高血圧傾向のある者の頭痛、肩こり、めまい、動悸等の症状改善に適用されている。また、特許文献１，２に記載されるような、細胞の老化を抑制する作用や糖尿病の合併症を抑制する作用も知られている。
【特許文献１】特開２００６−２８１５５号公報
【特許文献２】特開２００６−６３０７６号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
この発明は、本発明者らの鋭意研究の結果、天然薬草成分からなる冠元顆粒がメタボリック症候群の症状を改善する作用を有するという新規な薬理作用を解明したことによりなされたものである。その目的とするところは、メタボリック症候群の症状を改善する作用に優れたメタボリック症候群改善剤を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
上記目的を達成するために請求項１記載の発明のメタボリック症候群改善剤は、冠元顆粒を有効成分として含有することを特徴とする。
請求項２記載の発明は、請求項１記載のメタボリック症候群改善剤において、高血圧、高血糖、高中性脂肪血症及び低ＨＤＬコレステロール血症から選ばれる少なくとも一種の症状を改善することを特徴とする。
【０００６】
請求項３記載の発明は、請求項１又は請求項２記載のメタボリック症候群改善剤において、動脈硬化症改善剤又は動脈硬化症予防剤として適用されることを特徴とする。
【発明の効果】
【０００７】
本発明によれば、メタボリック症候群の症状を改善する作用に優れたメタボリック症候群改善剤を提供することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００８】
以下、本発明を具体化したメタボリック症候群改善剤の一実施形態を説明する。
本実施形態のメタボリック症候群改善剤は、冠元顆粒を有効成分として含有する。メタボリック症候群とは、生活習慣病のうち複数種類の生活習慣病を併発している症状のことをいう。より具体的には、メタボリック症候群とは中心性肥満の症状がある他に、高血圧、高血糖、高中性脂肪血症及び低ＨＤＬコレステロール血症のうち２つ以上の症状に該当する場合をいう。一般に、高カロリ食、飲酒・喫煙、運動不足、ストレス等の生活習慣が原因で生ずる病気として、肥満、高血圧、高血糖、高脂血症等の生活習慣病が知られている。これらの生活習慣病は、心臓病等の成人病の原因とされる動脈硬化症の危険因子として知られている。動脈硬化が進行すると例えば、心筋梗塞、狭心症、脳梗塞、腎不全、閉塞型動脈硬化症等の循環器病を発症する。したがって、メタボリック症候群に該当する患者は、健常者に比べ、動脈硬化症に伴う心筋梗塞や脳梗塞等を発症するリスクが高くなる。本実施形態のメタボリック症候群改善剤は、有効成分である冠元顆粒によりメタボリック症候群該当因子である生活習慣病の改善作用を発揮する。
【０００９】
メタボリック症候群の定義である中心性肥満とは、体の中心、すなわちお腹（内臓）に脂肪が溜まることをいい、内臓脂肪型肥満ともいう。腹部ＣＴ撮影により判別することが可能である。簡易的な判断基準としては、ウエストサイズ（おへその高さの腹囲）を用いる場合、男性で８５ｃｍ以上、女性で９０ｃｍ以上を指す。ウエスト／ヒップ比を用いる場合、男性で０．９以上、女性で０．８５以上を指す。ＢＭＩ（ボディマス指数：体重（ｋｇ）／身長（ｍ）２）を用いる場合、３０以上を示す。内臓脂肪型肥満は、皮下脂肪型肥満に比べより動脈硬化症との関連性が高いとされる。
【００１０】
メタボリック症候群における高血圧とは、具体的には、最大血圧１３０ｍｍＨｇ以上及び最小血圧８５ｍｍＨｇ以上の少なくとも一方に該当する場合をいう。高血圧症状が生ずると高い圧力によって血管内皮の損傷及び血管壁の肥厚化をもたらす。それらの症状が進行することによって動脈硬化症が起こる。動脈硬化症が悪化すると硬くなった血管がさらに高血圧を助長するという悪循環が生ずる。
【００１１】
メタボリック症候群における高血糖とは、空腹時に血糖値が１１０ｍｇ／ｄｌ以上の場合、又はグリコヘモグロビン（糖化ヘモグロビン：ＨｂＡ１ｃ）の値が５．６を超える場合を示す。グリコヘモグロビンは、ヘモグロビンがグルコースと生体内で非酵素的に共有結合した糖結合色素である。高血糖状態が長く続いた場合に赤血球中のヘモグロビンにグルコースが結合していくため、従来より糖尿病の指標の一つとしても用いられている。高血糖状態は、活性酸素及び過酸化脂質の発生を伴い血管内皮に損傷を与える。かかる血管内皮の損傷により、動脈硬化症が進行する。
【００１２】
メタボリック症候群における高中性脂肪血症とは、具体的には、血中の中性脂肪の濃度が１５０ｍｇ／ｄｌ以上の場合を示す。中性脂肪とは、グリセリンの脂肪酸エステルであり、代表的なものがトリアシルグリセロール（トリグリセリド（ＴＧ））である。血中のＴＧは、リポ蛋白のコアに組み込まれた状態で運ばれる。中性脂肪は、食事による摂取の他、肝臓中においては過剰エネルギー摂取の場合に脂肪酸と糖を原料に合成される。肝臓において過剰に合成されると脂肪が過剰に蓄積された脂肪肝となり、さらに肝臓から中性脂肪が放出されると高中性脂肪血症となる。血中の中性脂肪は、健常者の場合通常約４時間で最高値を示し、約１２時間で元に戻る。しかしながら、高中性脂肪血症の場合、食後の中性脂肪値が異常に高くなり、時間が経っても食前の数値への回復が穏やかである。高中性脂肪血症は、内臓脂肪型肥満や動脈硬化症の危険因子とされる。
【００１３】
メタボリック症候群における低ＨＤＬコレステロール血症とは、具体的には、血中のＨＤＬコレステロールの濃度が４０ｍｇ／ｄｌ未満の場合をいう。ＨＤＬコレステロールとは高比重リポ蛋白質コレステロールのことであり、俗に善玉コレステロールとも呼ばれる。ＨＤＬコレステロールは、各細胞又は血管壁の余分なコレステロールを肝臓に戻す役割を有するため抗動脈硬化作用を有する。肝臓に戻されたコレステロールは、胆汁として排出又はホルモンやＬＤＬ（低比重リポ蛋白質）として再利用される。ＨＤＬコレステロール濃度が低くなると、全身の細胞にコレステロールを運搬するＬＤＬコレステロール（低比重リポ蛋白質コレステロール）濃度とのバランスを崩し、動脈硬化症を促進する。
【００１４】
本実施形態のメタボリック症候群改善剤は、有効成分である冠元顆粒により、上記メタボリック症候群の各症状の改善作用を発揮するため、各症状の改善剤として好ましく適用される。これらメタボリック症候群の各症状のうち、有効成分である冠元顆粒は、特に高血圧、高血糖、高中性脂肪血症及び低ＨＤＬコレステロール血症の改善作用に優れる。したがって、メタボリック症候群の患者に対する高血圧改善剤、高血糖改善剤、高中性脂肪血症改善剤及び低ＨＤＬコレステロール血症改善剤として、より好ましく適用される。さらには、高血圧、高血糖、高中性脂肪血症及び低ＨＤＬコレステロール血症は、動脈硬化の危険因子とされるものであるため、動脈硬化症改善剤又は動脈硬化症予防剤として好ましく適用することができる。
【００１５】
本実施形態の有効成分である冠元顆粒は、生薬成分として「活血化お」の作用を有する紅花（コウカ）、芍薬（シャクヤク）、センキュウ及び丹参（タンジン）の４種類の薬草と、理気作用（気のめぐりを改善する）を有する香附子（コウブシ）及び木香（モッコウ）の２種類の薬草を所定の配合割合で調合した漢方薬（漢方方剤）である。
【００１６】
この冠元顆粒は、１９６０年代に中国で脳・心血管疾患に対する治療薬の研究から誕生し、１９６９年には９種類の生薬からなる冠心一号方、続いて１９７８年には５種類の生薬（丹参、芍薬、センキュウ、紅花、降香）からなる冠心二号方が誕生し、さらに降香を木香、香附子に置き換えた冠元顆粒が１９９０年に日本で医薬品として承認された。
【００１７】
冠元顆粒に含まれる各構成生薬の配合割合は、丹参２．６〜６．８重量部、香附子０．６〜１．７重量部、木香０．６〜１．７重量部、紅花１．１〜３．４重量部、芍薬１．１〜３．４重量部、センキュウ１．１〜３．４重量部が好ましく、丹参、香附子、木香、紅花、芍薬及びセンキュウが重量比で４：１：１：２：２：２であるのがより好ましい。この冠元顆粒は、従来より中年以降又は高血圧傾向のあるものの頭痛、頭重、肩こり、めまい、動悸等の諸症状を改善する効能・効果を有していることが知られている。
【００１８】
丹参はシソ科（Labiatae）の多年草タンジン（Salvia miltiorrhiza Bunge）の根である。香附子はカヤツリグサ科（Cyperaceae）の多年草ハマスゲ（Cyperus rotundus Linne）の根茎である。木香はキク科（Compositae）の多年草サウスレアラパア（Aucklandia lappa Decne (Saussurea lappa Clarke)）の根である。紅花はキク科（Compositae）の１〜２年草木ベニバナ（Carthamus tinctorius Linne）の管状花である。芍薬はボタン科（Paeoniaceae）の多年草シャクヤク（Paeonia lactiflora Pallas）の根である。センキュウはセリ科（Umbelliferae）の多年草センキュウ（Cnidium officinale Makino）の根茎である。
【００１９】
この冠元顆粒は、前記構成生薬を所定の配合割合で混合し、この混合物全重量の５〜３０倍量、好ましくは１０〜２０倍量の水にて熱水抽出した後、抽出された熱水抽出液（冠元顆粒エキス）を濃縮及び乾燥することにより製造される顆粒状品である。前記濃縮及び乾燥は常用手段、例えば減圧蒸発濃縮法、スプレードライ法、凍結乾燥法等により行われる。この冠元顆粒の製造方法によれば、例えば、丹参４．５ｇ、香附子１．１２５ｇ、木香１．１２５ｇ、紅花２．２５ｇ、芍薬２．２５ｇ及びセンキュウ２．２５ｇ（合計１３．５ｇ）から、固形分４．５ｇの冠元顆粒エキスが得られる。このように製造された冠元顆粒は、本実施形態においてメタボリック症候群改善剤として用いられる。
【００２０】
こうして得られた冠元顆粒（固形物）は、そのまま散剤や粉剤等の形態で服用してもよく、或いは適当な賦形剤、基剤、乳化剤、溶剤、安定剤等の添加剤とともに顆粒剤、錠剤、カプセル剤、丸剤、坐剤、液剤、注射剤等の形態に加工して投与してもよい。また、前記乾燥前の熱水抽出液又はその濃縮液を基に、ドリンク剤等の形態に加工して服用することも可能である。
【００２１】
メタボリック症候群改善剤は、有効成分としての冠元顆粒を成人１日当たり好ましくは１〜２０ｇ、さらに好ましくは４．５ｇ程度投与するように処方され、前記１日当たりの投与量を１日複数回（３回程度）に分けて食間又は空腹時に服用するように処方されることが特に好ましい。冠元顆粒を有効成分とするメタボリック症候群改善剤は、漢方薬等の医薬品、又は健康食品や一般食品等の食品に含有させることにより、医薬品又は食品としての用途で利用可能である。
【００２２】
本実施形態のメタボリック症候群改善剤によれば、以下のような効果を得ることができる。
（１）本実施形態のメタボリック症候群改善剤では、６種類の生薬成分が配合される冠元顆粒を有効成分として含有する。したがって、摂取によりメタボリック症候群改善作用を発揮することができる。
【００２３】
（２）本実施形態のメタボリック症候群改善剤は、有効成分である冠元顆粒により、特に、高血圧、高血糖、高中性脂肪血症及び低ＨＤＬコレステロール血症の改善作用を有効に発揮することができる。したがって、それらの疾患に罹患している人に好適に用いることができると期待される。
【００２４】
（３）また、高血圧、高血糖、高中性脂肪血症及び低ＨＤＬコレステロール血症は、動脈硬化の危険因子とされるものである。したがって、本実施形態のメタボリック症候群改善剤は、動脈硬化症改善剤又は動脈硬化症予防剤として好ましく適用することができる。
【００２５】
（４）また、動脈硬化症は、心筋梗塞、狭心症、脳梗塞、腎不全、閉塞型動脈硬化症等の循環器病の原因とされる症状であるため、本実施形態のメタボリック症候群改善剤をそれらの循環器病の改善剤又は予防剤として適用することができる。
【００２６】
（５）本実施形態のメタボリック症候群改善剤は、天然の植物を原料とするとともに既に広く使用されている漢方薬を基礎としていることから、副作用の心配がない。
（６）また、本実施形態のメタボリック症候群改善剤に有効成分として配合される冠元顆粒は、その他の薬効（頭痛、頭重、肩こり、めまい、動悸等の諸症状を改善する効能・効果、糖尿病の合併症を抑制する作用）を有しているため、摂取によりそれらの効能も期待することができる。
【００２７】
なお、本実施形態のメタボリック症候群改善剤は、次のように変更して具体化することも可能である。
・本実施形態のメタボリック症候群改善剤は、好ましくはメタボリック症候群の患者の治療に適用される。しかしながら、治療の用途のみならず、健常者がメタボリック症候群の予防のために摂取してもよい。
【００２８】
・本実施形態のメタボリック症候群改善剤は、ヒト以外にも、ウマ、ウシ、ブタのような家畜（非ヒト哺乳動物）、ニワトリ等の家禽、或いは犬、猫、ラット及びマウス等のペットに投与してもよい。
【００２９】
・前記有効成分である冠元顆粒を、パン、ケーキ、スナック菓子等の嗜好品、牛乳やヨーグルト等の乳製品、清涼飲料等の飲料品に含有させてもよい。
【実施例】
【００３０】
次に、各試験例を挙げて前記実施形態をさらに具体的に説明する。
（冠元顆粒の調製）
本試験に用いた冠元顆粒の構成生薬及びその含有量は、２．２５ｇの芍薬、２．２５ｇのセンキュウ、２．２５ｇの紅花、１．１２５ｇの香附子、１．１２５ｇの木香及び４．５ｇの丹参からなる。これらの構成生薬を調合したものに２０倍量の水を加えて１００℃で１時間熱水抽出した。次いで、ろ過後に減圧濃縮して溶媒を留去したところ、収率４４％の冠元顆粒（冠元顆粒エキス）が得られた。
【００３１】
（高フルクトース食負荷ラットの作成と評価）
メタボリック症候群の評価モデルとしては、従来より高フルクトース食負荷ラットが用いられている。フルクトース（果糖）は、通常体内においてエネルギー源として利用されている。しかしながら、高フルクトース食において過剰摂取すると余ったフルクトースは、肝臓において糖新生でブドウ糖に変換されたり、中性脂肪（トリグリセリド）に変換される。肝臓での中性脂肪（トリグリセリド）の増加は、ＶＬＤＬコレステロール（超低比重リポ蛋白質コレステロール）を増加させ、高脂血症（高中性脂肪血症）等の生活習慣病を引き起こす。
【００３２】
【表１】
８週齢のウイスター系雄性ラットを用い、高フルクトース食を与えることにより、高フルクトース食負荷ラットを作製した。まず、表１に示されるような各栄養成分を所定の配合比で混合させた高フルクトース食（フルクトース６５％）を作製した。次に、高フルクトース食をラットに一週間投与した。その後採血し、一群につき１１匹ずつ３群（コントロール群、第１群及び第２群）にグループ分けをした。なお、各群に属するラットはそれぞれ血清中トリグリセリド値及び体重が概ね揃うようにグループ分けされた。次いで、第１群及び第２群のモデルラットに対し、冠元顆粒をそれぞれ一日当たり５０ｍｇ／ｋｇ体重及び１００ｍｇ／ｋｇ体重の投与量となるように胃ゾンデで１４日間、連日経口投与した。なおこのとき、前記冠元顆粒は蒸留水に溶解した状態で経口投与された。一方、コントロール群（Control Rat）は冠元顆粒の代わりに蒸留水のみを与えた。連日経口投与終了後、血液及び肝臓を採取するとともに、下記評価項目について測定した。また、高フルクトース食の代わりに表１に示される正常食（Normal Diet）を投与したラットを正常ラット（Normal Rat）として比較のため同評価項目を測定した。
【００３３】
（ラットの形態学的測定、血圧及び脂質量の測定）
各投与群のラットの体重、肝重量、心臓の収縮期血圧及び拡張期血圧を測定した。また、各ラット群の総コレステロール濃度及びトリグリセリド濃度を公知の比色法を用いて測定した。結果を表２に示す。また、各投与群のラットの肝組織中のトリグリセリド量及び総コレステロール量も同様に測定した。結果を図１に示す。
【００３４】
【表２】
表２に示されるように、高フルクトース食によって肝重量が増加していることが確認される。また、表２及び図１に示されるように血清中の総コレステロール濃度及びトリグリセリド濃度、並びに肝組織中の総コレステロール量及びトリグリセリド量が増加していることが確認された。高フルクトース食によって、高中性脂肪血症を含む高脂血症、及び肝臓中に脂肪が蓄積する脂肪肝が発症しているものと思料される。一方、高フルクトース食に冠元顆粒を併せて投与したラット群において、これらの数値は、冠元顆粒の投与量依存的に減少していることが確認された。
【００３５】
また、表２に示されるように、高フルクトース食によって収縮期血圧値及び拡張期血圧値が上昇していることが確認される。高フルクトース食によって、高血圧症が発症しているものと思料される。一方、高フルクトース食に冠元顆粒を併せて投与したラット群において、これらの数値は、冠元顆粒の投与量依存的に低下していることが確認された。
【００３６】
（血糖値の測定）
血清中のグルコース濃度（血糖値）を公知の比色法を用いて測定した。また、血清中の糖蛋白濃度を測定した。糖蛋白濃度は、高血糖状態が長く続いた場合に血清中の蛋白質にグルコースが結合していくため、慢性的な高血糖状態を判断する一つの指標として用いられている。糖蛋白は、動脈硬化症を促進させる作用を有する。例えば、ＬＤＬコレステロールにおいて、糖化蛋白からなるＬＤＬコレステロールは血管内皮に沈着しやすくなり、ＨＤＬコレステロールにおいて、糖化蛋白からなるＨＤＬコレステロールは肝臓にコレステロールを運ぶ作用が低下する。
【００３７】
糖蛋白の測定は、まず採取した血液から血清を分離した後、該血清を蒸留水で１０倍希釈し、その１ｍＬに０．７５ｍＬのシュウ酸（oxalic acid）を加え、１００℃で２７０分間加熱後、４０％トリクロロ酢酸を加えて混和後、３，０００ｒｐｍで２０分間遠心分離した。遠心分離後の上清１ｍＬに０．２５ｍＬのチオバルビツール酸を加え、３７℃で３０分間反応後、４４３ｎｍにおける吸光度を測定し、糖化蛋白量に換算した。結果を表２に示す。
【００３８】
また、表２に示されるように、高フルクトース食によって血糖値が上昇していることが確認される。また、糖蛋白濃度も上昇していることが確認された。高フルクトース食によって、慢性的な高血糖状態である高血糖症が発症しているものと思料される。一方、高フルクトース食に冠元顆粒を併せて投与したラット群において、これらの数値は、冠元顆粒の投与量依存的に減少していることが確認された。冠元顆粒は、糖蛋白の濃度上昇を抑制するとともにＬＤＬ、ＨＤＬ等のリポ蛋白質の作用低下を抑制することにより、動脈硬化を抑制するものと期待される。
【００３９】
（過酸化脂質量の測定）
血清中、肝組織中の過酸化脂質の量を測定した。さらに肝組織においては、細胞内において活性酸素の発生が特に著しいミトコンドリア分画中の過酸化脂質の量を測定した。過酸化脂質は、動脈硬化症や脂肪肝等の肝硬変の原因とされる。つまり、血清中の過酸化脂質量の増加は、動脈硬化症の発症を増加させ、肝組織中の過酸化脂質量の増加は、脂肪肝の発症を増加させるおそれがある。また、高血圧及び高血糖患者は血中の過酸化脂質の量が上昇傾向にあることが知られている。
【００４０】
具体的測定方法は、まずサンプル溶液１５０ｍＬ、０．０５Ｎ塩酸１．５ｍＬ、０．６７％チオバルビツール酸０．５ｍＬを９５℃で３０分間反応させることにより、過酸化脂質量の指標としてのマロンジアルデヒド（ＭＤＡ）構造を有するチオバルビツール酸反応物（ＴＢＡ−ＲＳ）を生成させた。反応停止後に１５％メタノール含有ブタノールを２ｍＬ加え、３，０００ｒｐｍで１０分間遠心分離後、５３５ｎｍにおける吸光度を測定することにより定量した。結果を表３に示す。ＴＢＡ−ＲＳの量が多いほど過酸化脂質の量が多いことを示す。
【００４１】
【表３】
表３に示されるように、高フルクトース食によって血清中及び肝組織（特に肝ミトコンドリア）中の過酸化脂質の量が著しく増加していることが確認される。一方、高フルクトース食に冠元顆粒を併せて投与したラット群において、これらの数値は、冠元顆粒の投与量依存的に減少していることが確認された。
【００４２】
（核内転写因子ＳＲＥＢＰ−１のウェスタンブロッティング解析）
核内転写因子ＳＲＥＢＰ−１は、脂肪酸代謝関連遺伝子情報の発現調節を行うことが知られている。ＳＲＥＢＰ−１遺伝子の発現の増加は、脂肪酸の合成が活発化していることを示す。本実験では、各ラット群における肝組織における核内転写因子ＳＲＥＢＰ−１の発現をウェスタンブロッティングにより調べた。まず、肝組織より、抽出緩衝液（25ｍＭ Tris-HCl (pH 7.5), 250ｍＭ NaCl, 5ｍＭ ＥＤＴＡ, 1％ nonidet P-40, 1ｍＭ phenylmethylsulfonyl fluoride (ＰＭＳＦ), 1ｍＭ ＤＴＴ, 50μＬ プロテアーゼインヒビターカクテル）を用いて、組織内の蛋白質成分を抽出した。ウェスタンブロッティングは、３０μｇの蛋白質が含まれるように電気泳動用緩衝液に溶解させ、常法にてＳＤＳ−ＰＡＧＥを行った後、ニトロセルロース膜にトランスファーし、当該ニトロセルロース膜について免疫ブロット解析（immunoblot analysis）を行った。尚、ほとんど全ての臓器に恒常的に発現している蛋白質であるβ−アクチンが、本実験において蛋白質発現量の標準マーカーとして用いられた。
【００４３】
この免疫ブロット解析では、anti-ＳＲＥＢＰ−１モノクローナル抗体、anti-β−アクチンモノクローナル抗体、及びペルオキシダーゼ標識化２次抗体（peroxidase-labeled secondary antibody）を用いた。これらの抗体は、いずれもSanta Cruz Biotechnology Inc.から購入した。なお、前記免疫ブロット解析は、ニトロセルロース膜をＥＣＬ（enhanced chemiluminescence）法にて撮影することにより実施した。結果を図２に示す。
【００４４】
図２に示されるように、高フルクトース食によって核内転写因子ＳＲＥＢＰ−１の量が著しく増加していることが確認される。一方、高フルクトース食に冠元顆粒を併せて投与したラット群において、これらの数値は、冠元顆粒の投与量依存的に減少していることが確認された。冠元顆粒によりＳＲＥＢＰ−１の発現量が低下し、ＳＲＥＢＰ−１が関連する脂肪酸の合成が低下しているものと思料される。
【００４５】
（核内転写因子ＮＦ−κＢ及びＣＯＸ−２のウェスタンブロッティング解析）
シクロオキシゲナーゼ−２（ＣＯＸ−２）は、炎症に関わるプロスタグランジンＥ２の生成に関与しており、多くの動脈硬化関連疾患の病因となり得る蛋白質成分である。ＣＯＸ−２の遺伝子発現は転写因子のＮＦ−κＢの活性化により起こる。通常ＮＦ−κＢは細胞質内でＩ−κＢと結合して不活化状態で存在する。ＮＦ−κＢは、Ｉ−κＢから解離して活性化されると核内に移行し、ＣＯＸ−２遺伝子等の炎症関連酵素遺伝子の転写を促進させる。フリーラジカル等による酸化ストレスは、この転写因子のＮＦ−κＢを活性化させることが知られている。
【００４６】
本実験では、各ラット群における肝組織における核内転写因子ＮＦ−κＢ及びＣＯＸ−２の発現をウェスタンブロッティングにより調べた。まず、肝組織より、抽出緩衝液（25ｍＭ Tris-HCl (pH 7.5), 250ｍＭ NaCl, 5ｍＭ ＥＤＴＡ, 1％ nonidet P-40, 1ｍＭ phenylmethylsulfonyl fluoride (ＰＭＳＦ), 1ｍＭ ＤＴＴ, 50μＬ プロテアーゼインヒビターカクテル）を用いて、組織内の蛋白質成分を抽出した。ウェスタンブロッティングは、３０μｇの蛋白質が含まれるように電気泳動用緩衝液に溶解させ、常法にてＳＤＳ−ＰＡＧＥを行った後、ニトロセルロース膜にトランスファーし、当該ニトロセルロース膜について免疫ブロット解析（immunoblot analysis）を行った。尚、ほとんど全ての臓器に恒常的に発現している蛋白質であるβ−アクチンが、本実験において蛋白質発現量の標準マーカーとして用いられた。
【００４７】
この免疫ブロット解析では、anti-ＮＦ−κＢモノクローナル抗体、anti-ＣＯＸ−２モノクローナル抗体、anti-β−アクチンモノクローナル抗体、及びペルオキシダーゼ標識化２次抗体（peroxidase-labeled secondary antibody）を用いた。これらの抗体は、いずれもSanta Cruz Biotechnology Inc.から購入した。なお、前記免疫ブロット解析は、ニトロセルロース膜をＥＣＬ（enhanced chemiluminescence）法にて撮影することにより実施した。結果を図３に示す。
【００４８】
図３に示されるように、高フルクトース食によって核内転写因子ＮＦ−κＢ及びＣＯＸ−２の量が増加していることが確認される。一方、高フルクトース食に冠元顆粒を併せて投与したラット群において、これらの数値は、冠元顆粒の投与量依存的に減少していることが確認された。特に核内転写因子ＮＦ−κＢの発現量は、正常マウス比べても減少していることが確認される。
【００４９】
上述したように、高フルクトース食負荷ラットにおいて、メタボリック症候群該当因子である高血圧、高血糖、高中性脂肪血症の症状が確認された。また、動脈硬化に関連する過酸化脂質及びプロスタグランジンＥ２合成関連蛋白であるＣＯＸ−２等の酸化ストレス関連因子の増加も確認された。一方、高フルクトース食負荷ラットにおいて、冠元顆粒を併せて投与したマウスは、冠元顆粒の濃度依存的にそれらの症状が改善されることが確認された。冠元顆粒は、メタボリック症候群の各症状を改善するとともに、動脈硬化症を改善又は予防する作用を有することが確認された。
【００５０】
次に、上記実施形態及び別例から把握できる技術的思想について、それらの効果とともに以下に追記する。
（ａ）循環器病の改善剤又は予防剤として使用されることを特徴とするメタボリック症候群改善剤の投与方法。従って、この（ａ）に記載の発明によれば、動脈硬化症の改善又は予防効果により、動脈硬化症に伴う循環器障害の改善又は予防効果が期待される。
【００５１】
（ｂ）前記メタボリック症候群改善剤を有効成分として含有する医薬品又は飲食品。従って、この（ｂ）に記載の発明によれば、本メタボリック症候群改善剤を効率的に摂取することができる。
【００５２】
（ｃ）前記有効成分を５０〜１００ｍｇ／ｋｇ体重／日投与することを特徴とするメタボリック症候群改善剤の投与方法。従って、この（ａ）に記載の発明によれば、メタボリック症候群改善作用を有効に発揮させることができる。
【図面の簡単な説明】
【００５３】
【図１】肝組織中の脂質量の冠元顆粒による影響を示すグラフ。（ａ）肝組織中のトリグリセリドの量を示すグラフ。（ｂ）肝組織中の総コレステロールの量を示すグラフ。
【図２】核内転写因子ＳＲＥＢＰ−１の発現をウェスタンブロッティングにより調査した際のメンブレンの写真及び発現量を定量した結果を示すグラフ。
【図３】核内転写因子ＮＦ−κＢ及びＣＯＸ−２の発現をウェスタンブロッティングにより調査した際のメンブレンの写真及び発現量を定量した結果を示すグラフ。（ａ）核内転写因子ＮＦ−κＢの発現量を示すグラフ。（ｂ）ＣＯＸ−２の発現量を示すグラフ。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、メタボリック症候群改善剤に係り、詳しくは冠元顆粒を有効成分として含有するメタボリック症候群改善剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
一般に、高カロリ食、飲酒・喫煙、運動不足、ストレス等の生活習慣が原因で生ずる病気として、肥満、高血圧、高血糖、高脂血症等の生活習慣病が知られている。これらの生活習慣病は、心筋梗塞、脳梗塞等の成人病の原因とされる動脈硬化症の危険因子として知られ、社会的に重大な問題となっている。一般に、動脈硬化症の危険因子である生活習慣病のうち複数種類の生活習慣病を併発している症状をメタボリック症候群という。より具体的には、内臓脂肪蓄積等の中心性肥満の症状がある他に、高血圧、高血糖、高中性脂肪血症及び低ＨＤＬコレステロール血症のうち２つ以上の症状に該当する場合をいう。これらの症状は、食生活の改善、適度な運動以外に根本的な治療法が確立されていないのが現状である。メタボリック症候群に該当する人は、健常者に比べ、心筋梗塞や脳梗塞を発症するリスクが高いため、現在、高血圧、高血糖等のメタボリック症候群該当因子の予防薬や治療薬の開発が急務となっている。
【０００３】
ところで、従来より生薬成分として「活血化お」の作用を有する紅花（コウカ）、芍薬（シャクヤク）、センキュウ及び丹参（タンジン）の４種類の薬草と、理気作用を有する香附子（コウブシ）及び木香（モッコウ）の２種類の薬草を所定の配合割合で調合した冠元顆粒が知られている。従来より、冠元顆粒は各種有効成分により中年以降又は高血圧傾向のある者の頭痛、肩こり、めまい、動悸等の症状改善に適用されている。また、特許文献１，２に記載されるような、細胞の老化を抑制する作用や糖尿病の合併症を抑制する作用も知られている。
【特許文献１】特開２００６−２８１５５号公報
【特許文献２】特開２００６−６３０７６号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
この発明は、本発明者らの鋭意研究の結果、天然薬草成分からなる冠元顆粒がメタボリック症候群の症状を改善する作用を有するという新規な薬理作用を解明したことによりなされたものである。その目的とするところは、メタボリック症候群の症状を改善する作用に優れたメタボリック症候群改善剤を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
上記目的を達成するために請求項１記載の発明のメタボリック症候群改善剤は、冠元顆粒を有効成分として含有することを特徴とする。
請求項２記載の発明は、請求項１記載のメタボリック症候群改善剤において、高血圧、高血糖、高中性脂肪血症及び低ＨＤＬコレステロール血症から選ばれる少なくとも一種の症状を改善することを特徴とする。
【０００６】
請求項３記載の発明は、請求項１又は請求項２記載のメタボリック症候群改善剤において、動脈硬化症改善剤又は動脈硬化症予防剤として適用されることを特徴とする。
【発明の効果】
【０００７】
本発明によれば、メタボリック症候群の症状を改善する作用に優れたメタボリック症候群改善剤を提供することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００８】
以下、本発明を具体化したメタボリック症候群改善剤の一実施形態を説明する。
本実施形態のメタボリック症候群改善剤は、冠元顆粒を有効成分として含有する。メタボリック症候群とは、生活習慣病のうち複数種類の生活習慣病を併発している症状のことをいう。より具体的には、メタボリック症候群とは中心性肥満の症状がある他に、高血圧、高血糖、高中性脂肪血症及び低ＨＤＬコレステロール血症のうち２つ以上の症状に該当する場合をいう。一般に、高カロリ食、飲酒・喫煙、運動不足、ストレス等の生活習慣が原因で生ずる病気として、肥満、高血圧、高血糖、高脂血症等の生活習慣病が知られている。これらの生活習慣病は、心臓病等の成人病の原因とされる動脈硬化症の危険因子として知られている。動脈硬化が進行すると例えば、心筋梗塞、狭心症、脳梗塞、腎不全、閉塞型動脈硬化症等の循環器病を発症する。したがって、メタボリック症候群に該当する患者は、健常者に比べ、動脈硬化症に伴う心筋梗塞や脳梗塞等を発症するリスクが高くなる。本実施形態のメタボリック症候群改善剤は、有効成分である冠元顆粒によりメタボリック症候群該当因子である生活習慣病の改善作用を発揮する。
【０００９】
メタボリック症候群の定義である中心性肥満とは、体の中心、すなわちお腹（内臓）に脂肪が溜まることをいい、内臓脂肪型肥満ともいう。腹部ＣＴ撮影により判別することが可能である。簡易的な判断基準としては、ウエストサイズ（おへその高さの腹囲）を用いる場合、男性で８５ｃｍ以上、女性で９０ｃｍ以上を指す。ウエスト／ヒップ比を用いる場合、男性で０．９以上、女性で０．８５以上を指す。ＢＭＩ（ボディマス指数：体重（ｋｇ）／身長（ｍ）２）を用いる場合、３０以上を示す。内臓脂肪型肥満は、皮下脂肪型肥満に比べより動脈硬化症との関連性が高いとされる。
【００１０】
メタボリック症候群における高血圧とは、具体的には、最大血圧１３０ｍｍＨｇ以上及び最小血圧８５ｍｍＨｇ以上の少なくとも一方に該当する場合をいう。高血圧症状が生ずると高い圧力によって血管内皮の損傷及び血管壁の肥厚化をもたらす。それらの症状が進行することによって動脈硬化症が起こる。動脈硬化症が悪化すると硬くなった血管がさらに高血圧を助長するという悪循環が生ずる。
【００１１】
メタボリック症候群における高血糖とは、空腹時に血糖値が１１０ｍｇ／ｄｌ以上の場合、又はグリコヘモグロビン（糖化ヘモグロビン：ＨｂＡ１ｃ）の値が５．６を超える場合を示す。グリコヘモグロビンは、ヘモグロビンがグルコースと生体内で非酵素的に共有結合した糖結合色素である。高血糖状態が長く続いた場合に赤血球中のヘモグロビンにグルコースが結合していくため、従来より糖尿病の指標の一つとしても用いられている。高血糖状態は、活性酸素及び過酸化脂質の発生を伴い血管内皮に損傷を与える。かかる血管内皮の損傷により、動脈硬化症が進行する。
【００１２】
メタボリック症候群における高中性脂肪血症とは、具体的には、血中の中性脂肪の濃度が１５０ｍｇ／ｄｌ以上の場合を示す。中性脂肪とは、グリセリンの脂肪酸エステルであり、代表的なものがトリアシルグリセロール（トリグリセリド（ＴＧ））である。血中のＴＧは、リポ蛋白のコアに組み込まれた状態で運ばれる。中性脂肪は、食事による摂取の他、肝臓中においては過剰エネルギー摂取の場合に脂肪酸と糖を原料に合成される。肝臓において過剰に合成されると脂肪が過剰に蓄積された脂肪肝となり、さらに肝臓から中性脂肪が放出されると高中性脂肪血症となる。血中の中性脂肪は、健常者の場合通常約４時間で最高値を示し、約１２時間で元に戻る。しかしながら、高中性脂肪血症の場合、食後の中性脂肪値が異常に高くなり、時間が経っても食前の数値への回復が穏やかである。高中性脂肪血症は、内臓脂肪型肥満や動脈硬化症の危険因子とされる。
【００１３】
メタボリック症候群における低ＨＤＬコレステロール血症とは、具体的には、血中のＨＤＬコレステロールの濃度が４０ｍｇ／ｄｌ未満の場合をいう。ＨＤＬコレステロールとは高比重リポ蛋白質コレステロールのことであり、俗に善玉コレステロールとも呼ばれる。ＨＤＬコレステロールは、各細胞又は血管壁の余分なコレステロールを肝臓に戻す役割を有するため抗動脈硬化作用を有する。肝臓に戻されたコレステロールは、胆汁として排出又はホルモンやＬＤＬ（低比重リポ蛋白質）として再利用される。ＨＤＬコレステロール濃度が低くなると、全身の細胞にコレステロールを運搬するＬＤＬコレステロール（低比重リポ蛋白質コレステロール）濃度とのバランスを崩し、動脈硬化症を促進する。
【００１４】
本実施形態のメタボリック症候群改善剤は、有効成分である冠元顆粒により、上記メタボリック症候群の各症状の改善作用を発揮するため、各症状の改善剤として好ましく適用される。これらメタボリック症候群の各症状のうち、有効成分である冠元顆粒は、特に高血圧、高血糖、高中性脂肪血症及び低ＨＤＬコレステロール血症の改善作用に優れる。したがって、メタボリック症候群の患者に対する高血圧改善剤、高血糖改善剤、高中性脂肪血症改善剤及び低ＨＤＬコレステロール血症改善剤として、より好ましく適用される。さらには、高血圧、高血糖、高中性脂肪血症及び低ＨＤＬコレステロール血症は、動脈硬化の危険因子とされるものであるため、動脈硬化症改善剤又は動脈硬化症予防剤として好ましく適用することができる。
【００１５】
本実施形態の有効成分である冠元顆粒は、生薬成分として「活血化お」の作用を有する紅花（コウカ）、芍薬（シャクヤク）、センキュウ及び丹参（タンジン）の４種類の薬草と、理気作用（気のめぐりを改善する）を有する香附子（コウブシ）及び木香（モッコウ）の２種類の薬草を所定の配合割合で調合した漢方薬（漢方方剤）である。
【００１６】
この冠元顆粒は、１９６０年代に中国で脳・心血管疾患に対する治療薬の研究から誕生し、１９６９年には９種類の生薬からなる冠心一号方、続いて１９７８年には５種類の生薬（丹参、芍薬、センキュウ、紅花、降香）からなる冠心二号方が誕生し、さらに降香を木香、香附子に置き換えた冠元顆粒が１９９０年に日本で医薬品として承認された。
【００１７】
冠元顆粒に含まれる各構成生薬の配合割合は、丹参２．６〜６．８重量部、香附子０．６〜１．７重量部、木香０．６〜１．７重量部、紅花１．１〜３．４重量部、芍薬１．１〜３．４重量部、センキュウ１．１〜３．４重量部が好ましく、丹参、香附子、木香、紅花、芍薬及びセンキュウが重量比で４：１：１：２：２：２であるのがより好ましい。この冠元顆粒は、従来より中年以降又は高血圧傾向のあるものの頭痛、頭重、肩こり、めまい、動悸等の諸症状を改善する効能・効果を有していることが知られている。
【００１８】
丹参はシソ科（Labiatae）の多年草タンジン（Salvia miltiorrhiza Bunge）の根である。香附子はカヤツリグサ科（Cyperaceae）の多年草ハマスゲ（Cyperus rotundus Linne）の根茎である。木香はキク科（Compositae）の多年草サウスレアラパア（Aucklandia lappa Decne (Saussurea lappa Clarke)）の根である。紅花はキク科（Compositae）の１〜２年草木ベニバナ（Carthamus tinctorius Linne）の管状花である。芍薬はボタン科（Paeoniaceae）の多年草シャクヤク（Paeonia lactiflora Pallas）の根である。センキュウはセリ科（Umbelliferae）の多年草センキュウ（Cnidium officinale Makino）の根茎である。
【００１９】
この冠元顆粒は、前記構成生薬を所定の配合割合で混合し、この混合物全重量の５〜３０倍量、好ましくは１０〜２０倍量の水にて熱水抽出した後、抽出された熱水抽出液（冠元顆粒エキス）を濃縮及び乾燥することにより製造される顆粒状品である。前記濃縮及び乾燥は常用手段、例えば減圧蒸発濃縮法、スプレードライ法、凍結乾燥法等により行われる。この冠元顆粒の製造方法によれば、例えば、丹参４．５ｇ、香附子１．１２５ｇ、木香１．１２５ｇ、紅花２．２５ｇ、芍薬２．２５ｇ及びセンキュウ２．２５ｇ（合計１３．５ｇ）から、固形分４．５ｇの冠元顆粒エキスが得られる。このように製造された冠元顆粒は、本実施形態においてメタボリック症候群改善剤として用いられる。
【００２０】
こうして得られた冠元顆粒（固形物）は、そのまま散剤や粉剤等の形態で服用してもよく、或いは適当な賦形剤、基剤、乳化剤、溶剤、安定剤等の添加剤とともに顆粒剤、錠剤、カプセル剤、丸剤、坐剤、液剤、注射剤等の形態に加工して投与してもよい。また、前記乾燥前の熱水抽出液又はその濃縮液を基に、ドリンク剤等の形態に加工して服用することも可能である。
【００２１】
メタボリック症候群改善剤は、有効成分としての冠元顆粒を成人１日当たり好ましくは１〜２０ｇ、さらに好ましくは４．５ｇ程度投与するように処方され、前記１日当たりの投与量を１日複数回（３回程度）に分けて食間又は空腹時に服用するように処方されることが特に好ましい。冠元顆粒を有効成分とするメタボリック症候群改善剤は、漢方薬等の医薬品、又は健康食品や一般食品等の食品に含有させることにより、医薬品又は食品としての用途で利用可能である。
【００２２】
本実施形態のメタボリック症候群改善剤によれば、以下のような効果を得ることができる。
（１）本実施形態のメタボリック症候群改善剤では、６種類の生薬成分が配合される冠元顆粒を有効成分として含有する。したがって、摂取によりメタボリック症候群改善作用を発揮することができる。
【００２３】
（２）本実施形態のメタボリック症候群改善剤は、有効成分である冠元顆粒により、特に、高血圧、高血糖、高中性脂肪血症及び低ＨＤＬコレステロール血症の改善作用を有効に発揮することができる。したがって、それらの疾患に罹患している人に好適に用いることができると期待される。
【００２４】
（３）また、高血圧、高血糖、高中性脂肪血症及び低ＨＤＬコレステロール血症は、動脈硬化の危険因子とされるものである。したがって、本実施形態のメタボリック症候群改善剤は、動脈硬化症改善剤又は動脈硬化症予防剤として好ましく適用することができる。
【００２５】
（４）また、動脈硬化症は、心筋梗塞、狭心症、脳梗塞、腎不全、閉塞型動脈硬化症等の循環器病の原因とされる症状であるため、本実施形態のメタボリック症候群改善剤をそれらの循環器病の改善剤又は予防剤として適用することができる。
【００２６】
（５）本実施形態のメタボリック症候群改善剤は、天然の植物を原料とするとともに既に広く使用されている漢方薬を基礎としていることから、副作用の心配がない。
（６）また、本実施形態のメタボリック症候群改善剤に有効成分として配合される冠元顆粒は、その他の薬効（頭痛、頭重、肩こり、めまい、動悸等の諸症状を改善する効能・効果、糖尿病の合併症を抑制する作用）を有しているため、摂取によりそれらの効能も期待することができる。
【００２７】
なお、本実施形態のメタボリック症候群改善剤は、次のように変更して具体化することも可能である。
・本実施形態のメタボリック症候群改善剤は、好ましくはメタボリック症候群の患者の治療に適用される。しかしながら、治療の用途のみならず、健常者がメタボリック症候群の予防のために摂取してもよい。
【００２８】
・本実施形態のメタボリック症候群改善剤は、ヒト以外にも、ウマ、ウシ、ブタのような家畜（非ヒト哺乳動物）、ニワトリ等の家禽、或いは犬、猫、ラット及びマウス等のペットに投与してもよい。
【００２９】
・前記有効成分である冠元顆粒を、パン、ケーキ、スナック菓子等の嗜好品、牛乳やヨーグルト等の乳製品、清涼飲料等の飲料品に含有させてもよい。
【実施例】
【００３０】
次に、各試験例を挙げて前記実施形態をさらに具体的に説明する。
（冠元顆粒の調製）
本試験に用いた冠元顆粒の構成生薬及びその含有量は、２．２５ｇの芍薬、２．２５ｇのセンキュウ、２．２５ｇの紅花、１．１２５ｇの香附子、１．１２５ｇの木香及び４．５ｇの丹参からなる。これらの構成生薬を調合したものに２０倍量の水を加えて１００℃で１時間熱水抽出した。次いで、ろ過後に減圧濃縮して溶媒を留去したところ、収率４４％の冠元顆粒（冠元顆粒エキス）が得られた。
【００３１】
（高フルクトース食負荷ラットの作成と評価）
メタボリック症候群の評価モデルとしては、従来より高フルクトース食負荷ラットが用いられている。フルクトース（果糖）は、通常体内においてエネルギー源として利用されている。しかしながら、高フルクトース食において過剰摂取すると余ったフルクトースは、肝臓において糖新生でブドウ糖に変換されたり、中性脂肪（トリグリセリド）に変換される。肝臓での中性脂肪（トリグリセリド）の増加は、ＶＬＤＬコレステロール（超低比重リポ蛋白質コレステロール）を増加させ、高脂血症（高中性脂肪血症）等の生活習慣病を引き起こす。
【００３２】
【表１】
８週齢のウイスター系雄性ラットを用い、高フルクトース食を与えることにより、高フルクトース食負荷ラットを作製した。まず、表１に示されるような各栄養成分を所定の配合比で混合させた高フルクトース食（フルクトース６５％）を作製した。次に、高フルクトース食をラットに一週間投与した。その後採血し、一群につき１１匹ずつ３群（コントロール群、第１群及び第２群）にグループ分けをした。なお、各群に属するラットはそれぞれ血清中トリグリセリド値及び体重が概ね揃うようにグループ分けされた。次いで、第１群及び第２群のモデルラットに対し、冠元顆粒をそれぞれ一日当たり５０ｍｇ／ｋｇ体重及び１００ｍｇ／ｋｇ体重の投与量となるように胃ゾンデで１４日間、連日経口投与した。なおこのとき、前記冠元顆粒は蒸留水に溶解した状態で経口投与された。一方、コントロール群（Control Rat）は冠元顆粒の代わりに蒸留水のみを与えた。連日経口投与終了後、血液及び肝臓を採取するとともに、下記評価項目について測定した。また、高フルクトース食の代わりに表１に示される正常食（Normal Diet）を投与したラットを正常ラット（Normal Rat）として比較のため同評価項目を測定した。
【００３３】
（ラットの形態学的測定、血圧及び脂質量の測定）
各投与群のラットの体重、肝重量、心臓の収縮期血圧及び拡張期血圧を測定した。また、各ラット群の総コレステロール濃度及びトリグリセリド濃度を公知の比色法を用いて測定した。結果を表２に示す。また、各投与群のラットの肝組織中のトリグリセリド量及び総コレステロール量も同様に測定した。結果を図１に示す。
【００３４】
【表２】
表２に示されるように、高フルクトース食によって肝重量が増加していることが確認される。また、表２及び図１に示されるように血清中の総コレステロール濃度及びトリグリセリド濃度、並びに肝組織中の総コレステロール量及びトリグリセリド量が増加していることが確認された。高フルクトース食によって、高中性脂肪血症を含む高脂血症、及び肝臓中に脂肪が蓄積する脂肪肝が発症しているものと思料される。一方、高フルクトース食に冠元顆粒を併せて投与したラット群において、これらの数値は、冠元顆粒の投与量依存的に減少していることが確認された。
【００３５】
また、表２に示されるように、高フルクトース食によって収縮期血圧値及び拡張期血圧値が上昇していることが確認される。高フルクトース食によって、高血圧症が発症しているものと思料される。一方、高フルクトース食に冠元顆粒を併せて投与したラット群において、これらの数値は、冠元顆粒の投与量依存的に低下していることが確認された。
【００３６】
（血糖値の測定）
血清中のグルコース濃度（血糖値）を公知の比色法を用いて測定した。また、血清中の糖蛋白濃度を測定した。糖蛋白濃度は、高血糖状態が長く続いた場合に血清中の蛋白質にグルコースが結合していくため、慢性的な高血糖状態を判断する一つの指標として用いられている。糖蛋白は、動脈硬化症を促進させる作用を有する。例えば、ＬＤＬコレステロールにおいて、糖化蛋白からなるＬＤＬコレステロールは血管内皮に沈着しやすくなり、ＨＤＬコレステロールにおいて、糖化蛋白からなるＨＤＬコレステロールは肝臓にコレステロールを運ぶ作用が低下する。
【００３７】
糖蛋白の測定は、まず採取した血液から血清を分離した後、該血清を蒸留水で１０倍希釈し、その１ｍＬに０．７５ｍＬのシュウ酸（oxalic acid）を加え、１００℃で２７０分間加熱後、４０％トリクロロ酢酸を加えて混和後、３，０００ｒｐｍで２０分間遠心分離した。遠心分離後の上清１ｍＬに０．２５ｍＬのチオバルビツール酸を加え、３７℃で３０分間反応後、４４３ｎｍにおける吸光度を測定し、糖化蛋白量に換算した。結果を表２に示す。
【００３８】
また、表２に示されるように、高フルクトース食によって血糖値が上昇していることが確認される。また、糖蛋白濃度も上昇していることが確認された。高フルクトース食によって、慢性的な高血糖状態である高血糖症が発症しているものと思料される。一方、高フルクトース食に冠元顆粒を併せて投与したラット群において、これらの数値は、冠元顆粒の投与量依存的に減少していることが確認された。冠元顆粒は、糖蛋白の濃度上昇を抑制するとともにＬＤＬ、ＨＤＬ等のリポ蛋白質の作用低下を抑制することにより、動脈硬化を抑制するものと期待される。
【００３９】
（過酸化脂質量の測定）
血清中、肝組織中の過酸化脂質の量を測定した。さらに肝組織においては、細胞内において活性酸素の発生が特に著しいミトコンドリア分画中の過酸化脂質の量を測定した。過酸化脂質は、動脈硬化症や脂肪肝等の肝硬変の原因とされる。つまり、血清中の過酸化脂質量の増加は、動脈硬化症の発症を増加させ、肝組織中の過酸化脂質量の増加は、脂肪肝の発症を増加させるおそれがある。また、高血圧及び高血糖患者は血中の過酸化脂質の量が上昇傾向にあることが知られている。
【００４０】
具体的測定方法は、まずサンプル溶液１５０ｍＬ、０．０５Ｎ塩酸１．５ｍＬ、０．６７％チオバルビツール酸０．５ｍＬを９５℃で３０分間反応させることにより、過酸化脂質量の指標としてのマロンジアルデヒド（ＭＤＡ）構造を有するチオバルビツール酸反応物（ＴＢＡ−ＲＳ）を生成させた。反応停止後に１５％メタノール含有ブタノールを２ｍＬ加え、３，０００ｒｐｍで１０分間遠心分離後、５３５ｎｍにおける吸光度を測定することにより定量した。結果を表３に示す。ＴＢＡ−ＲＳの量が多いほど過酸化脂質の量が多いことを示す。
【００４１】
【表３】
表３に示されるように、高フルクトース食によって血清中及び肝組織（特に肝ミトコンドリア）中の過酸化脂質の量が著しく増加していることが確認される。一方、高フルクトース食に冠元顆粒を併せて投与したラット群において、これらの数値は、冠元顆粒の投与量依存的に減少していることが確認された。
【００４２】
（核内転写因子ＳＲＥＢＰ−１のウェスタンブロッティング解析）
核内転写因子ＳＲＥＢＰ−１は、脂肪酸代謝関連遺伝子情報の発現調節を行うことが知られている。ＳＲＥＢＰ−１遺伝子の発現の増加は、脂肪酸の合成が活発化していることを示す。本実験では、各ラット群における肝組織における核内転写因子ＳＲＥＢＰ−１の発現をウェスタンブロッティングにより調べた。まず、肝組織より、抽出緩衝液（25ｍＭ Tris-HCl (pH 7.5), 250ｍＭ NaCl, 5ｍＭ ＥＤＴＡ, 1％ nonidet P-40, 1ｍＭ phenylmethylsulfonyl fluoride (ＰＭＳＦ), 1ｍＭ ＤＴＴ, 50μＬ プロテアーゼインヒビターカクテル）を用いて、組織内の蛋白質成分を抽出した。ウェスタンブロッティングは、３０μｇの蛋白質が含まれるように電気泳動用緩衝液に溶解させ、常法にてＳＤＳ−ＰＡＧＥを行った後、ニトロセルロース膜にトランスファーし、当該ニトロセルロース膜について免疫ブロット解析（immunoblot analysis）を行った。尚、ほとんど全ての臓器に恒常的に発現している蛋白質であるβ−アクチンが、本実験において蛋白質発現量の標準マーカーとして用いられた。
【００４３】
この免疫ブロット解析では、anti-ＳＲＥＢＰ−１モノクローナル抗体、anti-β−アクチンモノクローナル抗体、及びペルオキシダーゼ標識化２次抗体（peroxidase-labeled secondary antibody）を用いた。これらの抗体は、いずれもSanta Cruz Biotechnology Inc.から購入した。なお、前記免疫ブロット解析は、ニトロセルロース膜をＥＣＬ（enhanced chemiluminescence）法にて撮影することにより実施した。結果を図２に示す。
【００４４】
図２に示されるように、高フルクトース食によって核内転写因子ＳＲＥＢＰ−１の量が著しく増加していることが確認される。一方、高フルクトース食に冠元顆粒を併せて投与したラット群において、これらの数値は、冠元顆粒の投与量依存的に減少していることが確認された。冠元顆粒によりＳＲＥＢＰ−１の発現量が低下し、ＳＲＥＢＰ−１が関連する脂肪酸の合成が低下しているものと思料される。
【００４５】
（核内転写因子ＮＦ−κＢ及びＣＯＸ−２のウェスタンブロッティング解析）
シクロオキシゲナーゼ−２（ＣＯＸ−２）は、炎症に関わるプロスタグランジンＥ２の生成に関与しており、多くの動脈硬化関連疾患の病因となり得る蛋白質成分である。ＣＯＸ−２の遺伝子発現は転写因子のＮＦ−κＢの活性化により起こる。通常ＮＦ−κＢは細胞質内でＩ−κＢと結合して不活化状態で存在する。ＮＦ−κＢは、Ｉ−κＢから解離して活性化されると核内に移行し、ＣＯＸ−２遺伝子等の炎症関連酵素遺伝子の転写を促進させる。フリーラジカル等による酸化ストレスは、この転写因子のＮＦ−κＢを活性化させることが知られている。
【００４６】
本実験では、各ラット群における肝組織における核内転写因子ＮＦ−κＢ及びＣＯＸ−２の発現をウェスタンブロッティングにより調べた。まず、肝組織より、抽出緩衝液（25ｍＭ Tris-HCl (pH 7.5), 250ｍＭ NaCl, 5ｍＭ ＥＤＴＡ, 1％ nonidet P-40, 1ｍＭ phenylmethylsulfonyl fluoride (ＰＭＳＦ), 1ｍＭ ＤＴＴ, 50μＬ プロテアーゼインヒビターカクテル）を用いて、組織内の蛋白質成分を抽出した。ウェスタンブロッティングは、３０μｇの蛋白質が含まれるように電気泳動用緩衝液に溶解させ、常法にてＳＤＳ−ＰＡＧＥを行った後、ニトロセルロース膜にトランスファーし、当該ニトロセルロース膜について免疫ブロット解析（immunoblot analysis）を行った。尚、ほとんど全ての臓器に恒常的に発現している蛋白質であるβ−アクチンが、本実験において蛋白質発現量の標準マーカーとして用いられた。
【００４７】
この免疫ブロット解析では、anti-ＮＦ−κＢモノクローナル抗体、anti-ＣＯＸ−２モノクローナル抗体、anti-β−アクチンモノクローナル抗体、及びペルオキシダーゼ標識化２次抗体（peroxidase-labeled secondary antibody）を用いた。これらの抗体は、いずれもSanta Cruz Biotechnology Inc.から購入した。なお、前記免疫ブロット解析は、ニトロセルロース膜をＥＣＬ（enhanced chemiluminescence）法にて撮影することにより実施した。結果を図３に示す。
【００４８】
図３に示されるように、高フルクトース食によって核内転写因子ＮＦ−κＢ及びＣＯＸ−２の量が増加していることが確認される。一方、高フルクトース食に冠元顆粒を併せて投与したラット群において、これらの数値は、冠元顆粒の投与量依存的に減少していることが確認された。特に核内転写因子ＮＦ−κＢの発現量は、正常マウス比べても減少していることが確認される。
【００４９】
上述したように、高フルクトース食負荷ラットにおいて、メタボリック症候群該当因子である高血圧、高血糖、高中性脂肪血症の症状が確認された。また、動脈硬化に関連する過酸化脂質及びプロスタグランジンＥ２合成関連蛋白であるＣＯＸ−２等の酸化ストレス関連因子の増加も確認された。一方、高フルクトース食負荷ラットにおいて、冠元顆粒を併せて投与したマウスは、冠元顆粒の濃度依存的にそれらの症状が改善されることが確認された。冠元顆粒は、メタボリック症候群の各症状を改善するとともに、動脈硬化症を改善又は予防する作用を有することが確認された。
【００５０】
次に、上記実施形態及び別例から把握できる技術的思想について、それらの効果とともに以下に追記する。
（ａ）循環器病の改善剤又は予防剤として使用されることを特徴とするメタボリック症候群改善剤の投与方法。従って、この（ａ）に記載の発明によれば、動脈硬化症の改善又は予防効果により、動脈硬化症に伴う循環器障害の改善又は予防効果が期待される。
【００５１】
（ｂ）前記メタボリック症候群改善剤を有効成分として含有する医薬品又は飲食品。従って、この（ｂ）に記載の発明によれば、本メタボリック症候群改善剤を効率的に摂取することができる。
【００５２】
（ｃ）前記有効成分を５０〜１００ｍｇ／ｋｇ体重／日投与することを特徴とするメタボリック症候群改善剤の投与方法。従って、この（ａ）に記載の発明によれば、メタボリック症候群改善作用を有効に発揮させることができる。
【図面の簡単な説明】
【００５３】
【図１】肝組織中の脂質量の冠元顆粒による影響を示すグラフ。（ａ）肝組織中のトリグリセリドの量を示すグラフ。（ｂ）肝組織中の総コレステロールの量を示すグラフ。
【図２】核内転写因子ＳＲＥＢＰ−１の発現をウェスタンブロッティングにより調査した際のメンブレンの写真及び発現量を定量した結果を示すグラフ。
【図３】核内転写因子ＮＦ−κＢ及びＣＯＸ−２の発現をウェスタンブロッティングにより調査した際のメンブレンの写真及び発現量を定量した結果を示すグラフ。（ａ）核内転写因子ＮＦ−κＢの発現量を示すグラフ。（ｂ）ＣＯＸ−２の発現量を示すグラフ。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
冠元顆粒を有効成分として含有することを特徴とするメタボリック症候群改善剤。
【請求項２】
高血圧、高血糖、高中性脂肪血症及び低ＨＤＬコレステロール血症から選ばれる少なくとも一種の症状を改善することを特徴とする請求項１記載のメタボリック症候群改善剤。
【請求項３】
動脈硬化症改善剤又は動脈硬化症予防剤として適用されることを特徴とする請求項１又は請求項２記載のメタボリック症候群改善剤。
【請求項１】
冠元顆粒を有効成分として含有することを特徴とするメタボリック症候群改善剤。
【請求項２】
高血圧、高血糖、高中性脂肪血症及び低ＨＤＬコレステロール血症から選ばれる少なくとも一種の症状を改善することを特徴とする請求項１記載のメタボリック症候群改善剤。
【請求項３】
動脈硬化症改善剤又は動脈硬化症予防剤として適用されることを特徴とする請求項１又は請求項２記載のメタボリック症候群改善剤。
【図１】
【図２】
【図３】
【図２】
【図３】
【公開番号】特開２００８−１８４４４９（Ｐ２００８−１８４４４９Ａ）
【公開日】平成２０年８月１４日（２００８．８．１４）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００７−２０５０２（Ｐ２００７−２０５０２）
【出願日】平成１９年１月３１日（２００７．１．３１）
【出願人】（５９１０８２６５０）イスクラ産業株式会社 (12)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２０年８月１４日（２００８．８．１４）
【国際特許分類】
【出願日】平成１９年１月３１日（２００７．１．３１）
【出願人】（５９１０８２６５０）イスクラ産業株式会社 (12)
【Ｆターム（参考）】
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