リファキシミンの新規多形、その製造方法、及び医薬製剤中でのその使用
本発明の対象は、経口用および局所用のリファキシミンを含む医薬製剤の製造において有用であると共に、粗リファキシミンをエチルアルコールに加熱溶解すること、水を定められた温度で定められた時間加えることにより生成物の結晶化を引き起こすこと、および続いて、最終生成物中の設定含水量に至るまで制御条件下に乾燥することにより実施される結晶化プロセスにより得られる、リファキシミンδおよびリファキシミンεと呼ばれる抗生物質リファキシミン（ＩＮＮ）の結晶多形である。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（発明の背景技術）
リファキシミン（ＩＮＮ；メルクインデックス，ＸＩＩＩ版，８３０４を参照）は、リファマイシンクラスに属する抗生物質であって、まさに、これは伊国特許ＩＴ１１５４６５５号に説明され請求項に記載されているピリド−イミダゾ・リファマイシンである。一方、欧州特許ＥＰ０１６１５３４号には、リファマイシンＯ（メルクインデックス，ＸＩＩＩ版，８３０１）から出発してそれを製造するための方法が説明され請求項に記載されている。
【０００２】
これらの両特許が、一般的な方法によるリファキシミンの精製を記載しており、適当な溶媒または溶媒系中で結晶化を行うことができると言っている。一部の実施例において、反応から生じる生成物を、エチルアルコール／水の７：３混合物から結晶化することができ、大気圧および減圧下のいずれにおいても乾燥することができることを簡略化して示しているが、結晶化および乾燥の実験条件も、得られた生成物の特徴を示す結晶学的特性も全く記載されていない。
【０００３】
異なる多形の存在は全く気付かれていなかったことから、生成物そのものの結晶学的特徴は別として、化学的観点から適当な純度を有する均質生成物を得ることを目的として、両特許に記載された実験条件が検討された。
【０００４】
予想外にも、複数の多形が存在しており、その形成は、溶媒に加えて、結晶化および乾燥が行われる時間および温度の条件に依存することが今回分かった。
【０００５】
これらの規則正しい多形は、後に、本出願で報告されているそれぞれの特定のディフラクトグラムに基づき、慣習的にリファキシミンδ（図１）およびリファキシミンε（図２）と同定される。
【０００６】
リファキシミンの多形は、粉末Ｘ線回折の技術により特徴付けられる。
【０００７】
これらの多形の同定および特徴と同時に、それらを得るための実験条件の定義は、リファキシミンのようなヒトおよび獣の両方のための医薬製剤として販売されている、薬理学的活性を付与された化合物にとって非常に重要である。実際、医薬製剤中に含まれる活性成分として用いることができる化合物の多形が、薬物の薬理毒物学的特性に影響を与え得ることが知られている。経口または局所形で薬剤として投与される活性成分の異なる多形により、生物学的利用可能性、可溶性、安定性、色、圧縮性、流動性および加工性のようなその多くの特性を改良することができ、その結果、毒物学的安全性、臨床的有効性および生産効率のプロフィールが改良される。
【０００８】
前述したことは、薬剤の市場への参入に対する承認を管理する当局が、活性成分の製造法を、製造バッチの多形に関して均一かつ信頼性ある結果が提供されるように、標準化し制御することを要求するという事実により厳然と確認される（ＣＰＭＰ／ＱＷＰ／９６，２００３−新規活性物質の化学に関するガイダンスノート（Ｎｏｔｅ ｆｏｒ Ｇｕｉｄａｎｃｅ ｏｎ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｏｆ ｎｅｗ Ａｃｔｉｖｅ Ｓｕｂｓｔａｎｃｅ）；ＣＰＭＰ／ＩＣＨ／３６７／９６−ガイダンス仕様ノート：新規薬剤物質および新規薬剤製品に対する試験手順および許可基準：化学物質（ｇｕｉｄａｎｃｅ ｓｐｅｃｉｆｉｃａｔｉｏｎｓ： ｔｅｓｔ ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ ａｎｄ ａｃｃｅｐｔａｎｃｅ ｃｒｉｅｒｉａ ｆｏｒ ｎｅｗ ｄｒｕｇ ｓｕｂｓｔａｎｃｅｓ ａｎｄ ｎｅｗ ｄｒｕｇ ｐｒｏｄｕｃｔｓ： ｃｈｅｍｉｃａｌ ｓｕｂｓｔａｎｃｅｓ）；施行日：２０００年５月）。
【０００９】
Ｈｅｎｗｏｏｄ Ｓ．Ｑ．，ｄｅ Ｖｉｌｌｉｅｒｓ Ｍ．Ｍ．，Ｌｉｅｂｅｎｂｅｒｇ Ｗ． ａｎｄ Ｌｏｅｔｔｅｒ Ａ．Ｐ．，薬剤開発および工業薬学（Ｄｒｕｇ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ａｎｄ Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ Ｐｈａｒｍａｃｙ），第２６巻４号、４０３〜４０８頁（２０００年）において、異なる製造者が製造したリファンピシン（ＩＮＮ）の異なる製造バッチは、異なる多形特性を示すことから互いに異なっており、その結果、それぞれの薬理学的特性の結果的変化と共に、異なる溶解プロフィールを示すことが確認されたことにより、前述の標準化の必要性は、リファマイシン抗生物質の分野において、さらに強化された。
【００１０】
先行特許ＩＴ１１５４６５５号およびＥＰ０１６１５３４号に一般的に開示されている結晶化および乾燥工程を適用すると、ある実験条件下においてはリファキシミンの結晶形が乏しく、また他のある実験条件下においてはリファキシミンの他の結晶多形が得られることが分かった。さらに、例えば保存条件および周囲の相対湿度のような前記特許に全く開示されていない一部のパラメーターが、多形を決めるための驚くべき効果を有することが分かった。
【００１１】
結晶化、乾燥および保存のために用いられる条件にかかわらず、記載された条件の範囲内でどのような方法が選択されても、単一の均質な生成物が常に得られると考えられており、本特許出願の対象であるリファキシミンの多形は全く知られておらず、仮説として取り上げられることすらなかった。
【００１２】
今回、δおよびε形の形成は、結晶化溶媒中の水の存在、生成物が結晶化される温度、および乾燥段階の終りに生成物中に存在する水の量に依存することが発見された。
【００１３】
そして、リファキシミンのδ形およびε形が合成され、これらが本発明の対象である。
【００１４】
特に、δ形は、乾燥固体物中の残留含水量が２．５％〜６％（ｗ／ｗ）、より好ましくは３％〜４．５％であることを特徴とし、ε形は、制御された温度下でのδ形からの多形転化の結果である。
【００１５】
これらの結果は、極めて重要である。なぜなら、これらは、生成物の多形の決定に重要であると考えられていなかった幾つかの加工ステップの工業的な製造条件、例えば、結晶化生成物に対して含水量の厳格な範囲に維持すること、最終生成物の乾燥工程において、ε形を得るための乾燥を続ける前に形−すなわちδ形−を得なければならないこと、最終生成物の保存条件、または生成物を保存する容器の特徴、を決めるからである。
【００１６】
リファキシミンは、嫌気性菌株を含む感染性下痢を引き起こす局在化胃腸細菌に対して、胃腸管内で広い抗菌活性を奏する。リファキシミンは、その化学的および物理的な特徴により全身的吸収が非常に少ないことを特徴とすることが報告されている（Ｄｅｓｃｏｍｂｅ Ｊ．Ｊ． ｅｔ ａｌ．，健常ボランティアにおける経口投与後のリファキシミンの薬物動態的研究（Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃ ｓｔｕｄｙ ｏｆ ｒｉｆａｘｉｍｉｎ ａｆｔｅｒ ｏｒａｌ ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ ｉｎ ｈｅａｌｔｈｙ ｖｏｌｕｎｔｅｅｒｓ），Ｉｎｔ Ｊ Ｃｌｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｒｅｓ．，第１４巻２号，５１〜５６頁（１９９４年））。
【００１７】
我々は、リファキシミンの２つの同定された多形に基づき、リファキシミンの異なる多形、すなわち、リファキシミンδおよびリファキシミンεを投与することにより、全身吸着の水準を調節することができることを発見し、これは本発明の一部である。血中０．００１〜０．３μｇ／ｍｌの範囲で、おおよそ１００倍の吸着の相違を有することができる。
【００１８】
生物学的利用可能性における証明された相違は、リファキシミンδおよびεの２つの多形の薬理学的および毒物学的挙動を区別することができるので、重要である。
【００１９】
実際、リファキシミンεは経口経路を通して極僅かにしか吸収されないが、リファキシミンδは穏やかな吸収を示す。
【００２０】
リファキシミンεは実用的には吸収されず、胃腸管の場合を含む局所作用によってしか作用せず、毒性が非常に低いという利点を有する。
【００２１】
他方、穏やかに吸収されるリファキシミンδは、全身の微生物に対して好適に用いることができ、それら自体を隠して局所抗生物質の作用を部分的に免れることができる。
【００２２】
特に適切なリファキシミンの治療的使用に伴ってあり得る悪影響は、生物の抗生物質に対する菌耐性を誘発することである。一般的に言えば、抗生物質を用いる治療の実施において、抵抗性菌株の選択により、同じまたは他の抗生物質に対する菌耐性を誘発することは、常に起こりえることである。
【００２３】
リファキシミンの場合、この影響は特に関係がある。なぜなら、リファキシミンはリファマイシンファミリーに属しており、その一員であるリファンピシンは結核治療において広く用いられているからである。現在行われている結核の短期治療は、リファンプシン、イソニアジド、エタンブトールおよびピラジナミドの４つの活性薬剤成分を含む組み合わせ治療であり、それらのうちリファンピシンは、極めて重要な役割を果たす。従って、リファンピシンへの抵抗を選択することにより治療の効果を台無しにする薬剤は危険である（Ｋｒｅｍｅｒ Ｌ ｅｔ ａｌ．，「結核の再発生：対策と治療（Ｒｅ−ｅｍｅｒｇｅｎｃｅ ｏｆ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ： ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ ａｎｄ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」，Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ． Ｉｎｖｅｓｔｉｇ． Ｄｒｕｇｓ，第１１巻２号，１５３〜１５７頁（２００２年））。
【００２４】
リファキシミンとリファンピシンとの構造の類似性を見ると、原理的には、リファキシミンを用いることで、Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓの抵抗性菌株を選択し、リファンピシンへの交差抵抗を誘発することは、起こりえることである。この有害事象を避けるために、全身的に吸収されたリファキシミンの量を制御することが重要である。
【００２５】
この観点で、リファキシミンのδおよびε形の全身吸収において見られる相違が重要である。なぜなら、０．１〜１μｇ／ｍｌの範囲におけるようなリファキシミンの抑制濃度以下においても、抵抗性突然変異体の選択が起こりえることが示されたからである（Ｍａｒｃｈｅｓｅ Ａ． ｅｔ ａｌ．，扱いにくいクロストリジウム属に対するリファキシミン、メトロニダゾールおよびバンコマイシンの体外活性、アンモニア生成種を含む典型的な嫌気性および好気性菌に対して自然に発生する抵抗性突然変異体の選択率（Ｉｎ ｖｉｔｒｏ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｒｉｆａｘｉｍｉｎ， ｍｅｔｒｏｎｉｄａｚｏｌｅ ａｎｄ ｖａｎｃｏｍｙｃｉｎ ａｇａｉｎｓｔ ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ ａｎｄ ｔｈｅ ｒａｔｅ ｏｆ ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓｌｙ ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ｍｕｔａｎｔｓ ａｇａｉｎｓｔ ｒｅｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｖｅ ａｎａｅｒｏｂｉｃ ａｎｄ ａｅｒｏｂｉｃ ｂａｃｔｅｒｉａ， ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ ａｍｍｏｎｉａ−ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ ｓｐｅｃｉｅｓ），Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ，第４６巻４号，２５３〜２６６頁（２０００年））。
【００２６】
前述事項によれば、前述のリファキシミン多形の存在を教示すると共に、異なる薬理学的特性を有する純粋な単一形を製造するための種々の工業的経路を生み出した本発明の重要性が明らかに増強される。
【００２７】
前述のδおよびε形を、リファキシミンを含む医薬製剤の製造において純粋かつ均質な製品として有効に用いることができる。
【００２８】
前述のように、ＥＰ０１６１５３４号において説明され請求項に記載されているリファマイシンＯからリファキシミンを製造する方法は、得られた生成物の精製および同定の観点が欠けている。すなわち、工業用途にはほとんど適していない１６〜７２時間といった非常に長い反応時間については合成観点からの制限もあることを示しており、さらに、反応混合物中に形成される場合がある酸化リファキシミンのその場還元を提供していない。
【００２９】
従って、本発明のさらなる対象は、リファキシミンのδおよびε形を工業的に製造するための改良された方法であって、ここでは、生成物として、またそのような活性成分を含む医薬製剤の製造において特定された均一な活性成分としての使用として、請求項に記載されている。
【００３０】
（発明の説明）
既述のように、本発明の対象は、リファキシミン（ＩＮＮ）として知られている抗生物質のδ形とε形、その製造方法、および経口または局所用の医薬製剤の製造におけるそれらの使用である。
【００３１】
本発明の対象となる方法は、水とエチルアルコールとの１：１〜２：１の体積比の混合溶媒中、１モル当量のリファマイシンＯを、過剰量の、好ましくは２．０〜３．５モル当量の２−アミノ−４−メチルピリジンと、４０℃〜６０℃の温度で２〜８時間反応させることを含む。
【００３２】
反応の終了時、その反応物（ｒｅａｃｔｉｏｎ ｍａｓｓ）を室温まで冷却し、強力な攪拌下に、水、エチルアルコールおよび濃塩酸の混合物中でアスコルビン酸溶液を加えて、反応中に形成される少量の酸化リファキシミンを還元し、最後に、濃塩酸をさらに加えることによりｐＨを約２．０にして、反応に用いた過剰の２−アミノ−４−メチルピリジンを効果的に除去する。懸濁液を濾過し、得られた固体を反応に用いたものと同じ水／エチルアルコール混合溶媒で洗う。そのような半終了生成物を「粗リファキシミン（ｒａｗ ｒｉｆａｘｉｍｉｎ）」と呼ぶ。
【００３３】
粗リファキシミンは、次の精製ステップに直接用いることができる。あるいは、半終了生成物を長時間保存することが予想される場合、粗リファキシミンを、減圧下に６５℃より低い温度で６〜２４時間乾燥することができ、そのような半終了生成物を「乾燥粗リファキシミン」と呼ぶ。
【００３４】
このように得られた粗リファキシミンおよび／または乾燥粗リファキシミンを、４５℃〜６５℃の温度でエチルアルコールに溶解し、水、好ましくはその溶解に用いたエチルアルコールの重量に対して１５％〜７０％の重量の水を加えることにより結晶化させ、および、得られた懸濁液を攪拌下に５０℃〜０℃の温度で４〜３６時間保持することにより精製する。
【００３５】
懸濁液を濾過し、得られた固体を水で洗い、減圧または常圧下に乾燥剤を用いてまたは用いることなく室温〜１０５℃の温度で２〜７２時間乾燥させる。
【００３６】
δおよびε形の達成は、結晶化のために選択された条件に依存する。特に、結晶化が実施される混合溶媒の組成、結晶化の後に反応混合物を維持する温度、および温度を維持する時間が重要であることを見出した。
【００３７】
より正確には、温度をまず２８℃〜３２℃の値にして結晶化を開始させ、次に、懸濁液を４０℃〜５０℃の温度にしてこの温度で６〜２４時間維持し、次に、懸濁液を急速に０℃で１５分〜１時間冷却し、濾過し、固形物を水で洗い、次に乾燥すると、δおよびεリファキシミンが得られる。
【００３８】
乾燥工程は、リファキシミンの多形であるδおよびε形を得る際に重要な役割を果たし、例えばＫａｒｌ Ｆｉｓｈｅｒ法のような水投与量に適した適当な方法により、乾燥下の生成物中に存在する残留水含量を確認する必要がある。
【００３９】
乾燥中にリファキシミンδを得るためには、実際には、最終残留水含量が２．５％（ｗ／ｗ）〜６％（ｗ／ｗ）、より好ましくは３％〜４．５％であることに依存しており、この水割合の臨界的限界が達成される圧力および温度の実験的条件には依存しない。
【００４０】
吸着の乏しいε形を得るためには、δ形から出発する必要があり、また乾燥剤の存在下または不存在下に室温または高温で減圧または大気圧下に乾燥を続ける必要があり、乾燥は、ε形への転化が達成されるのに必要な時間まで延長されることが条件とされる。
【００４１】
リファキシミンのδ形とε形の両方が吸湿性であり、これらは、周囲の圧力および湿度が適当な条件である間、水を可逆的に吸収し、他の形に転化されやすい。
【００４２】
ある１つの形から他の形への転化は、本発明の範囲において非常に重要である。なぜなら、医薬製剤の製造のために望まれる形を得るための別の製造方法となり得るからである。従って、有効な工業的な方法においてリファキシミンδからリファキシミンεに転化させるための工程は、本発明の重要な一部である。
【００４３】
リファキシミンδをリファキシミンεに転化するための方法は、乾燥剤の存在下または不存在下に室温または高温で減圧または大気圧下にリファキシミンδを乾燥し、これを、転化が得られるまでの時間、通常、６〜３６時間維持することを含む。
【００４４】
前述の事項から、生成物を保存している間、湿度の制御された環境中や、外部環境との激しい水交換を起こさない密閉容器中に生成物を保存することにより、周囲の条件が生成物の含水量を変化させないように注意しなければならない。
【００４５】
リファキシミンδと呼ばれる多形は、２．５％〜６％、好ましくは３．０％〜４．５％の含水量、および、５．７°±０．２、６．７°±０．２、７．１°±０．２、８．０°±０．２、８．７°±０．２、１０．４°±０．２、１０．８°±０．２、１１．３°±０．２、１２．１°±０．２、１７．０°±０．２、１７．３°±０．２、１７．５°±０．２、１８．５°±０．２、１８．８°±０．２、１９．１°±０．２、２１．０°±０．２、２１．５°±０．２の回折角２θの値においてピークを示す粉末Ｘ線ディフラクトグラム（図１に報告されている）を特徴とする。リファキシミンεと呼ばれる多形は、７．０°±０．２、７．３°±０．２、８．２°±０．２、８．７°±０．２、１０．３°±０．２、１１．１°±０．２、１１．７°±０．２、１２．４°±０．２、１４．５°±０．２、１６．３°±０．２、１７．２°±０．２、１８．０°±０．２、１９．４°±０．２の回折角２θの値においてピークを示す粉末Ｘ線ディフラクトグラム（図２に報告されている）を特徴とする。
【００４６】
ディフラクトグラムは、Ｂｒａｇｇ−Ｂｒｅｎｔａｎｏの配置を有するＰｈｉｌｉｐｓ Ｘ’Ｐｅｒｔの装置により、以下の作業条件下に行った。
【００４７】
Ｘ線管：銅
用いた放射線：Ｋ（α１）、Ｋ（α２）
発電機の電圧および電流：ＫＶ４０，ｍＡ４０
モノクロメーター：グラファイト
ステップサイズ：０．０２
ステップ当たりの時間：１．２５秒
出発および最終角２θ値：３．０°÷３０．０°
分析サンプル中に存在する水含量の評価は、常に、Ｋａｒｌ Ｆｉｓｈｅｒ法で行った。
【００４８】
リファキシミンδおよびリファキシミンεは、生物学的利用可能性に関して著しい相違を示すので、互いに異なる。
【００４９】
２つの多形の生物学的利用可能性についての研究は、ビーグルメスイヌで行い、一方の形のカプセルを１００ｍｇ／ｋｇの投与量で経口投与し、投与前および投与から１、２、４、６、８および２４時間後に各動物の頸静脈から血液サンプルを採取し、へパリンを含む試験管にサンプルを移し、血漿を遠心分離により分離した。
【００５０】
血漿を、有効なＬＣ−ＭＳ／ＭＳ法でリファキシミンごとに検定し、観察された最大血漿濃度（Ｃｍａｘ）、Ｃｍａｘに達する時間（ｔｍａｘ）、および濃度−時間曲線（ＡＵＣ）における面積を計算した。
【００５１】
以下の表１に報告されている実験データは、明らかに、リファキシミンεがほとんど吸収されず、リファキシミンδが０．１〜１．０μｇ／ｍｌの範囲の値（Ｃｍａｘ＝０．３０８μｇ／ｍｌ）で吸収されることを示している。
【００５２】
【表１】
【００５３】
前述の実験結果は、さらに、２つのリファキシミン多形に存在する相違を指摘している。
【００５４】
δおよびε形は、経口および局所の両方のための、リファキシミンを含み抗生活性を有する医薬製剤の製造において好適に用いることができる。経口用の医薬製剤は、マンニトール、ラクトースおよびソルビトールのような希釈剤；デンプン、ゼラチン、糖、セルロース誘導体、天然ガムおよびポリビニルピロリドンのような結合剤；タルク、ステアリン酸塩、水素化植物油、ポリエチレングリコールおよびコロイド状二酸化ケイ素のような潤滑剤；デンプン、セルロース、アルギン酸塩、ガムおよび網状ポリマーのような崩壊剤；着色剤、風味剤および甘味剤のような通常の賦形剤と共に、リファキシミンδおよびεを含む。
【００５５】
経口投与される全ての固形製剤、例えば、被覆および非被覆錠剤、軟質および硬質ゼラチン製カプセル、糖衣丸剤、トローチ、オブラート、ペレット、および密封包装中の粉末を本発明で用いることができる。
【００５６】
局所用の医薬製剤は、白色ワセリン、白色ろう、ラノリンおよびそれらの誘導体、ステアリルアルコール、プロピレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウム、脂肪ポリオキシエチレンアルコールのエーテル、脂肪ポリオキシエチレン酸のエステル、ソルビタンモノステアレート、グリセリルモノステアレート、プロピレングリコールモノステアレート、ポリエチレングリコール、メチルセルロース、ヒドロキシメチルプロピルセルロース、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、コロイド状アルミニウムおよびケイ酸マグネシウム、アルギン酸ナトリウムのような通常の賦形剤と共に、リファキシミンδおよびεを含む。
【００５７】
全ての局所製剤、例えば、軟膏、ポマード、クリーム、ゲルおよびローションを本発明の範囲内で用いることができる。
【００５８】
本発明を、幾つかの実施例により以下に説明するが、発明を制限すると解すべきではない。記載された結果から、実際、前記結晶化および乾燥の条件を組み合わせることによってδおよびε形を得ることができることが明らかである。
【００５９】
＜実施例１＞
（粗リファキシミンおよび乾燥粗リファキシミンの調製）
メカニカルスターラー、温度計および還流冷却器を備える三つ口フラスコに、室温で、脱塩水１２０ｍｌ、エチルアルコール９６ｍｌ、リファマイシンＯ６３．５ｇおよび２−アミノ−４−メチルピリジン２７．２ｇを順次仕込む。仕込んだ後、その物（ｍａｓｓ）を４７±３℃で加熱し、この温度で５時間攪拌を続け、次に、２０±３℃まで冷却し、脱塩水９ｍｌ、エチルアルコール１２．６ｍｌ、アスコルビン酸１．６８ｇおよび濃塩酸９．２８ｇからなる別途調製された混合物を、３０分間で加える。添加終了時、その物を２０±３℃の内部温度で３０分間攪拌を続け、次に、同じ温度で、濃塩酸７．７２ｇをｐＨが２．０になるまで滴下する。
【００６０】
添加終了時、その物を、２０℃の内部温度で３０分間攪拌を続け、次に、沈澱を濾過し、脱塩水３２ｍｌとエチルアルコール２５ｍｌからなる混合物で洗う。このように得られた「粗リファキシミン」（８９．２ｇ）を、減圧下に室温で１２時間乾燥して、水含量が５．６％である「乾燥粗リファキシミン」を得る。生成物をさらに乾燥して、含水量が３．３％の乾燥粗リファキシミン６２．２ｇが得られる。このディフラクトグラムは、５．７°±０．２、６．７°±０．２、７．１°±０．２、８．０°±０．２、８．７°±０．２、１０．４°±０．２、１０．８°±０．２、１１．３°±０．２、１２．１°±０．２、１７．０°±０．２、１７．３°±０．２、１７．５°±０．２、１８．５°±０．２、１８．８°±０．２、１９．１°±０．２、２１．０°±０．２、２１．５°±０．２の角度２θの値においてピークを示す粉末Ｘ線ディフラクトグラムを特徴とする多形δに相当する。生成物は吸湿性である。
【００６１】
＜実施例２＞
（リファキシミンεの調製）
実施例１を繰り返してδ形を得た後、固体粉末をさらに減圧下に温度６５℃で２４時間乾燥する。得られた生成物は、７．０°±０．２、７．３°±０．２、８．２°±０．２、８．７°±０．２、１０．３°±０．２、１１．１°±０．２、１１．７°±０．２、１２．４°±０．２、１４．５°±０．２、１６．３°±０．２、１７．２°±０．２、１８．０°±０．２、１９．４°±０．２の角度２θの値においてピークを示す粉末Ｘ線ディフラクトグラムを特徴とするリファキシミンεである。
【００６２】
＜実施例３＞
（経口投与によるイヌでの生物学的利用可能性）
２０週齢で５．０〜７．５ｋｇの８匹の純血種ビーグルメスイヌを、４匹ずつの２つのグループに分けた。
【００６３】
以下の手順に従って、これらのグループのうち第１のグループをリファキシミンδで処理し、第２のグループをリファキシミンεで処理した。
【００６４】
各イヌに、ゼラチンカプセルで一方のリファキシミン多形の１００ｍｇ／ｋｇを経口投与し、分散前および投与から１、２、４、６、８および２４時間後に、各動物の頸静脈から各２ｍｌの血液サンプルを採血した。
【００６５】
各サンプルを、凝集防止剤としてのヘパリンを含む試験管に移し、遠心分離した。血漿を各５００μｌの２つの画分に分け、−２０℃で凍結した。
【００６６】
この血漿に含まれるリファキシミンを、有効なＬＣ−ＭＳ／ＭＳ法により検定し、標準的非コンパートメント解析に従って、以下のパラメーターを計算した。
【００６７】
Ｃｍａｘ＝血漿中のリファキシミンの観察された最大血漿濃度
Ｔｍａｘ＝Ｃｍａｘが達成される時間
ＡＵＣ＝線形台形公式により計算された濃度−時間曲線における面積
表１に報告された結果は、実際に吸収されないリファキシミンεに対し、いかにリファキシミンδが吸収されるか（４０倍以上）を明確に示している。
【図面の簡単な説明】
【００６８】
【図１】リファキシミンδの粉末Ｘ線ディフラクトグラム
【図２】リファキシミンεの粉末Ｘ線ディフラクトグラム
【技術分野】
【０００１】
（発明の背景技術）
リファキシミン（ＩＮＮ；メルクインデックス，ＸＩＩＩ版，８３０４を参照）は、リファマイシンクラスに属する抗生物質であって、まさに、これは伊国特許ＩＴ１１５４６５５号に説明され請求項に記載されているピリド−イミダゾ・リファマイシンである。一方、欧州特許ＥＰ０１６１５３４号には、リファマイシンＯ（メルクインデックス，ＸＩＩＩ版，８３０１）から出発してそれを製造するための方法が説明され請求項に記載されている。
【０００２】
これらの両特許が、一般的な方法によるリファキシミンの精製を記載しており、適当な溶媒または溶媒系中で結晶化を行うことができると言っている。一部の実施例において、反応から生じる生成物を、エチルアルコール／水の７：３混合物から結晶化することができ、大気圧および減圧下のいずれにおいても乾燥することができることを簡略化して示しているが、結晶化および乾燥の実験条件も、得られた生成物の特徴を示す結晶学的特性も全く記載されていない。
【０００３】
異なる多形の存在は全く気付かれていなかったことから、生成物そのものの結晶学的特徴は別として、化学的観点から適当な純度を有する均質生成物を得ることを目的として、両特許に記載された実験条件が検討された。
【０００４】
予想外にも、複数の多形が存在しており、その形成は、溶媒に加えて、結晶化および乾燥が行われる時間および温度の条件に依存することが今回分かった。
【０００５】
これらの規則正しい多形は、後に、本出願で報告されているそれぞれの特定のディフラクトグラムに基づき、慣習的にリファキシミンδ（図１）およびリファキシミンε（図２）と同定される。
【０００６】
リファキシミンの多形は、粉末Ｘ線回折の技術により特徴付けられる。
【０００７】
これらの多形の同定および特徴と同時に、それらを得るための実験条件の定義は、リファキシミンのようなヒトおよび獣の両方のための医薬製剤として販売されている、薬理学的活性を付与された化合物にとって非常に重要である。実際、医薬製剤中に含まれる活性成分として用いることができる化合物の多形が、薬物の薬理毒物学的特性に影響を与え得ることが知られている。経口または局所形で薬剤として投与される活性成分の異なる多形により、生物学的利用可能性、可溶性、安定性、色、圧縮性、流動性および加工性のようなその多くの特性を改良することができ、その結果、毒物学的安全性、臨床的有効性および生産効率のプロフィールが改良される。
【０００８】
前述したことは、薬剤の市場への参入に対する承認を管理する当局が、活性成分の製造法を、製造バッチの多形に関して均一かつ信頼性ある結果が提供されるように、標準化し制御することを要求するという事実により厳然と確認される（ＣＰＭＰ／ＱＷＰ／９６，２００３−新規活性物質の化学に関するガイダンスノート（Ｎｏｔｅ ｆｏｒ Ｇｕｉｄａｎｃｅ ｏｎ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｏｆ ｎｅｗ Ａｃｔｉｖｅ Ｓｕｂｓｔａｎｃｅ）；ＣＰＭＰ／ＩＣＨ／３６７／９６−ガイダンス仕様ノート：新規薬剤物質および新規薬剤製品に対する試験手順および許可基準：化学物質（ｇｕｉｄａｎｃｅ ｓｐｅｃｉｆｉｃａｔｉｏｎｓ： ｔｅｓｔ ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ ａｎｄ ａｃｃｅｐｔａｎｃｅ ｃｒｉｅｒｉａ ｆｏｒ ｎｅｗ ｄｒｕｇ ｓｕｂｓｔａｎｃｅｓ ａｎｄ ｎｅｗ ｄｒｕｇ ｐｒｏｄｕｃｔｓ： ｃｈｅｍｉｃａｌ ｓｕｂｓｔａｎｃｅｓ）；施行日：２０００年５月）。
【０００９】
Ｈｅｎｗｏｏｄ Ｓ．Ｑ．，ｄｅ Ｖｉｌｌｉｅｒｓ Ｍ．Ｍ．，Ｌｉｅｂｅｎｂｅｒｇ Ｗ． ａｎｄ Ｌｏｅｔｔｅｒ Ａ．Ｐ．，薬剤開発および工業薬学（Ｄｒｕｇ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ａｎｄ Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ Ｐｈａｒｍａｃｙ），第２６巻４号、４０３〜４０８頁（２０００年）において、異なる製造者が製造したリファンピシン（ＩＮＮ）の異なる製造バッチは、異なる多形特性を示すことから互いに異なっており、その結果、それぞれの薬理学的特性の結果的変化と共に、異なる溶解プロフィールを示すことが確認されたことにより、前述の標準化の必要性は、リファマイシン抗生物質の分野において、さらに強化された。
【００１０】
先行特許ＩＴ１１５４６５５号およびＥＰ０１６１５３４号に一般的に開示されている結晶化および乾燥工程を適用すると、ある実験条件下においてはリファキシミンの結晶形が乏しく、また他のある実験条件下においてはリファキシミンの他の結晶多形が得られることが分かった。さらに、例えば保存条件および周囲の相対湿度のような前記特許に全く開示されていない一部のパラメーターが、多形を決めるための驚くべき効果を有することが分かった。
【００１１】
結晶化、乾燥および保存のために用いられる条件にかかわらず、記載された条件の範囲内でどのような方法が選択されても、単一の均質な生成物が常に得られると考えられており、本特許出願の対象であるリファキシミンの多形は全く知られておらず、仮説として取り上げられることすらなかった。
【００１２】
今回、δおよびε形の形成は、結晶化溶媒中の水の存在、生成物が結晶化される温度、および乾燥段階の終りに生成物中に存在する水の量に依存することが発見された。
【００１３】
そして、リファキシミンのδ形およびε形が合成され、これらが本発明の対象である。
【００１４】
特に、δ形は、乾燥固体物中の残留含水量が２．５％〜６％（ｗ／ｗ）、より好ましくは３％〜４．５％であることを特徴とし、ε形は、制御された温度下でのδ形からの多形転化の結果である。
【００１５】
これらの結果は、極めて重要である。なぜなら、これらは、生成物の多形の決定に重要であると考えられていなかった幾つかの加工ステップの工業的な製造条件、例えば、結晶化生成物に対して含水量の厳格な範囲に維持すること、最終生成物の乾燥工程において、ε形を得るための乾燥を続ける前に形−すなわちδ形−を得なければならないこと、最終生成物の保存条件、または生成物を保存する容器の特徴、を決めるからである。
【００１６】
リファキシミンは、嫌気性菌株を含む感染性下痢を引き起こす局在化胃腸細菌に対して、胃腸管内で広い抗菌活性を奏する。リファキシミンは、その化学的および物理的な特徴により全身的吸収が非常に少ないことを特徴とすることが報告されている（Ｄｅｓｃｏｍｂｅ Ｊ．Ｊ． ｅｔ ａｌ．，健常ボランティアにおける経口投与後のリファキシミンの薬物動態的研究（Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃ ｓｔｕｄｙ ｏｆ ｒｉｆａｘｉｍｉｎ ａｆｔｅｒ ｏｒａｌ ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ ｉｎ ｈｅａｌｔｈｙ ｖｏｌｕｎｔｅｅｒｓ），Ｉｎｔ Ｊ Ｃｌｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｒｅｓ．，第１４巻２号，５１〜５６頁（１９９４年））。
【００１７】
我々は、リファキシミンの２つの同定された多形に基づき、リファキシミンの異なる多形、すなわち、リファキシミンδおよびリファキシミンεを投与することにより、全身吸着の水準を調節することができることを発見し、これは本発明の一部である。血中０．００１〜０．３μｇ／ｍｌの範囲で、おおよそ１００倍の吸着の相違を有することができる。
【００１８】
生物学的利用可能性における証明された相違は、リファキシミンδおよびεの２つの多形の薬理学的および毒物学的挙動を区別することができるので、重要である。
【００１９】
実際、リファキシミンεは経口経路を通して極僅かにしか吸収されないが、リファキシミンδは穏やかな吸収を示す。
【００２０】
リファキシミンεは実用的には吸収されず、胃腸管の場合を含む局所作用によってしか作用せず、毒性が非常に低いという利点を有する。
【００２１】
他方、穏やかに吸収されるリファキシミンδは、全身の微生物に対して好適に用いることができ、それら自体を隠して局所抗生物質の作用を部分的に免れることができる。
【００２２】
特に適切なリファキシミンの治療的使用に伴ってあり得る悪影響は、生物の抗生物質に対する菌耐性を誘発することである。一般的に言えば、抗生物質を用いる治療の実施において、抵抗性菌株の選択により、同じまたは他の抗生物質に対する菌耐性を誘発することは、常に起こりえることである。
【００２３】
リファキシミンの場合、この影響は特に関係がある。なぜなら、リファキシミンはリファマイシンファミリーに属しており、その一員であるリファンピシンは結核治療において広く用いられているからである。現在行われている結核の短期治療は、リファンプシン、イソニアジド、エタンブトールおよびピラジナミドの４つの活性薬剤成分を含む組み合わせ治療であり、それらのうちリファンピシンは、極めて重要な役割を果たす。従って、リファンピシンへの抵抗を選択することにより治療の効果を台無しにする薬剤は危険である（Ｋｒｅｍｅｒ Ｌ ｅｔ ａｌ．，「結核の再発生：対策と治療（Ｒｅ−ｅｍｅｒｇｅｎｃｅ ｏｆ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ： ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ ａｎｄ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」，Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ． Ｉｎｖｅｓｔｉｇ． Ｄｒｕｇｓ，第１１巻２号，１５３〜１５７頁（２００２年））。
【００２４】
リファキシミンとリファンピシンとの構造の類似性を見ると、原理的には、リファキシミンを用いることで、Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓの抵抗性菌株を選択し、リファンピシンへの交差抵抗を誘発することは、起こりえることである。この有害事象を避けるために、全身的に吸収されたリファキシミンの量を制御することが重要である。
【００２５】
この観点で、リファキシミンのδおよびε形の全身吸収において見られる相違が重要である。なぜなら、０．１〜１μｇ／ｍｌの範囲におけるようなリファキシミンの抑制濃度以下においても、抵抗性突然変異体の選択が起こりえることが示されたからである（Ｍａｒｃｈｅｓｅ Ａ． ｅｔ ａｌ．，扱いにくいクロストリジウム属に対するリファキシミン、メトロニダゾールおよびバンコマイシンの体外活性、アンモニア生成種を含む典型的な嫌気性および好気性菌に対して自然に発生する抵抗性突然変異体の選択率（Ｉｎ ｖｉｔｒｏ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｒｉｆａｘｉｍｉｎ， ｍｅｔｒｏｎｉｄａｚｏｌｅ ａｎｄ ｖａｎｃｏｍｙｃｉｎ ａｇａｉｎｓｔ ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ ａｎｄ ｔｈｅ ｒａｔｅ ｏｆ ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓｌｙ ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ｍｕｔａｎｔｓ ａｇａｉｎｓｔ ｒｅｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｖｅ ａｎａｅｒｏｂｉｃ ａｎｄ ａｅｒｏｂｉｃ ｂａｃｔｅｒｉａ， ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ ａｍｍｏｎｉａ−ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ ｓｐｅｃｉｅｓ），Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ，第４６巻４号，２５３〜２６６頁（２０００年））。
【００２６】
前述事項によれば、前述のリファキシミン多形の存在を教示すると共に、異なる薬理学的特性を有する純粋な単一形を製造するための種々の工業的経路を生み出した本発明の重要性が明らかに増強される。
【００２７】
前述のδおよびε形を、リファキシミンを含む医薬製剤の製造において純粋かつ均質な製品として有効に用いることができる。
【００２８】
前述のように、ＥＰ０１６１５３４号において説明され請求項に記載されているリファマイシンＯからリファキシミンを製造する方法は、得られた生成物の精製および同定の観点が欠けている。すなわち、工業用途にはほとんど適していない１６〜７２時間といった非常に長い反応時間については合成観点からの制限もあることを示しており、さらに、反応混合物中に形成される場合がある酸化リファキシミンのその場還元を提供していない。
【００２９】
従って、本発明のさらなる対象は、リファキシミンのδおよびε形を工業的に製造するための改良された方法であって、ここでは、生成物として、またそのような活性成分を含む医薬製剤の製造において特定された均一な活性成分としての使用として、請求項に記載されている。
【００３０】
（発明の説明）
既述のように、本発明の対象は、リファキシミン（ＩＮＮ）として知られている抗生物質のδ形とε形、その製造方法、および経口または局所用の医薬製剤の製造におけるそれらの使用である。
【００３１】
本発明の対象となる方法は、水とエチルアルコールとの１：１〜２：１の体積比の混合溶媒中、１モル当量のリファマイシンＯを、過剰量の、好ましくは２．０〜３．５モル当量の２−アミノ−４−メチルピリジンと、４０℃〜６０℃の温度で２〜８時間反応させることを含む。
【００３２】
反応の終了時、その反応物（ｒｅａｃｔｉｏｎ ｍａｓｓ）を室温まで冷却し、強力な攪拌下に、水、エチルアルコールおよび濃塩酸の混合物中でアスコルビン酸溶液を加えて、反応中に形成される少量の酸化リファキシミンを還元し、最後に、濃塩酸をさらに加えることによりｐＨを約２．０にして、反応に用いた過剰の２−アミノ−４−メチルピリジンを効果的に除去する。懸濁液を濾過し、得られた固体を反応に用いたものと同じ水／エチルアルコール混合溶媒で洗う。そのような半終了生成物を「粗リファキシミン（ｒａｗ ｒｉｆａｘｉｍｉｎ）」と呼ぶ。
【００３３】
粗リファキシミンは、次の精製ステップに直接用いることができる。あるいは、半終了生成物を長時間保存することが予想される場合、粗リファキシミンを、減圧下に６５℃より低い温度で６〜２４時間乾燥することができ、そのような半終了生成物を「乾燥粗リファキシミン」と呼ぶ。
【００３４】
このように得られた粗リファキシミンおよび／または乾燥粗リファキシミンを、４５℃〜６５℃の温度でエチルアルコールに溶解し、水、好ましくはその溶解に用いたエチルアルコールの重量に対して１５％〜７０％の重量の水を加えることにより結晶化させ、および、得られた懸濁液を攪拌下に５０℃〜０℃の温度で４〜３６時間保持することにより精製する。
【００３５】
懸濁液を濾過し、得られた固体を水で洗い、減圧または常圧下に乾燥剤を用いてまたは用いることなく室温〜１０５℃の温度で２〜７２時間乾燥させる。
【００３６】
δおよびε形の達成は、結晶化のために選択された条件に依存する。特に、結晶化が実施される混合溶媒の組成、結晶化の後に反応混合物を維持する温度、および温度を維持する時間が重要であることを見出した。
【００３７】
より正確には、温度をまず２８℃〜３２℃の値にして結晶化を開始させ、次に、懸濁液を４０℃〜５０℃の温度にしてこの温度で６〜２４時間維持し、次に、懸濁液を急速に０℃で１５分〜１時間冷却し、濾過し、固形物を水で洗い、次に乾燥すると、δおよびεリファキシミンが得られる。
【００３８】
乾燥工程は、リファキシミンの多形であるδおよびε形を得る際に重要な役割を果たし、例えばＫａｒｌ Ｆｉｓｈｅｒ法のような水投与量に適した適当な方法により、乾燥下の生成物中に存在する残留水含量を確認する必要がある。
【００３９】
乾燥中にリファキシミンδを得るためには、実際には、最終残留水含量が２．５％（ｗ／ｗ）〜６％（ｗ／ｗ）、より好ましくは３％〜４．５％であることに依存しており、この水割合の臨界的限界が達成される圧力および温度の実験的条件には依存しない。
【００４０】
吸着の乏しいε形を得るためには、δ形から出発する必要があり、また乾燥剤の存在下または不存在下に室温または高温で減圧または大気圧下に乾燥を続ける必要があり、乾燥は、ε形への転化が達成されるのに必要な時間まで延長されることが条件とされる。
【００４１】
リファキシミンのδ形とε形の両方が吸湿性であり、これらは、周囲の圧力および湿度が適当な条件である間、水を可逆的に吸収し、他の形に転化されやすい。
【００４２】
ある１つの形から他の形への転化は、本発明の範囲において非常に重要である。なぜなら、医薬製剤の製造のために望まれる形を得るための別の製造方法となり得るからである。従って、有効な工業的な方法においてリファキシミンδからリファキシミンεに転化させるための工程は、本発明の重要な一部である。
【００４３】
リファキシミンδをリファキシミンεに転化するための方法は、乾燥剤の存在下または不存在下に室温または高温で減圧または大気圧下にリファキシミンδを乾燥し、これを、転化が得られるまでの時間、通常、６〜３６時間維持することを含む。
【００４４】
前述の事項から、生成物を保存している間、湿度の制御された環境中や、外部環境との激しい水交換を起こさない密閉容器中に生成物を保存することにより、周囲の条件が生成物の含水量を変化させないように注意しなければならない。
【００４５】
リファキシミンδと呼ばれる多形は、２．５％〜６％、好ましくは３．０％〜４．５％の含水量、および、５．７°±０．２、６．７°±０．２、７．１°±０．２、８．０°±０．２、８．７°±０．２、１０．４°±０．２、１０．８°±０．２、１１．３°±０．２、１２．１°±０．２、１７．０°±０．２、１７．３°±０．２、１７．５°±０．２、１８．５°±０．２、１８．８°±０．２、１９．１°±０．２、２１．０°±０．２、２１．５°±０．２の回折角２θの値においてピークを示す粉末Ｘ線ディフラクトグラム（図１に報告されている）を特徴とする。リファキシミンεと呼ばれる多形は、７．０°±０．２、７．３°±０．２、８．２°±０．２、８．７°±０．２、１０．３°±０．２、１１．１°±０．２、１１．７°±０．２、１２．４°±０．２、１４．５°±０．２、１６．３°±０．２、１７．２°±０．２、１８．０°±０．２、１９．４°±０．２の回折角２θの値においてピークを示す粉末Ｘ線ディフラクトグラム（図２に報告されている）を特徴とする。
【００４６】
ディフラクトグラムは、Ｂｒａｇｇ−Ｂｒｅｎｔａｎｏの配置を有するＰｈｉｌｉｐｓ Ｘ’Ｐｅｒｔの装置により、以下の作業条件下に行った。
【００４７】
Ｘ線管：銅
用いた放射線：Ｋ（α１）、Ｋ（α２）
発電機の電圧および電流：ＫＶ４０，ｍＡ４０
モノクロメーター：グラファイト
ステップサイズ：０．０２
ステップ当たりの時間：１．２５秒
出発および最終角２θ値：３．０°÷３０．０°
分析サンプル中に存在する水含量の評価は、常に、Ｋａｒｌ Ｆｉｓｈｅｒ法で行った。
【００４８】
リファキシミンδおよびリファキシミンεは、生物学的利用可能性に関して著しい相違を示すので、互いに異なる。
【００４９】
２つの多形の生物学的利用可能性についての研究は、ビーグルメスイヌで行い、一方の形のカプセルを１００ｍｇ／ｋｇの投与量で経口投与し、投与前および投与から１、２、４、６、８および２４時間後に各動物の頸静脈から血液サンプルを採取し、へパリンを含む試験管にサンプルを移し、血漿を遠心分離により分離した。
【００５０】
血漿を、有効なＬＣ−ＭＳ／ＭＳ法でリファキシミンごとに検定し、観察された最大血漿濃度（Ｃｍａｘ）、Ｃｍａｘに達する時間（ｔｍａｘ）、および濃度−時間曲線（ＡＵＣ）における面積を計算した。
【００５１】
以下の表１に報告されている実験データは、明らかに、リファキシミンεがほとんど吸収されず、リファキシミンδが０．１〜１．０μｇ／ｍｌの範囲の値（Ｃｍａｘ＝０．３０８μｇ／ｍｌ）で吸収されることを示している。
【００５２】
【表１】
【００５３】
前述の実験結果は、さらに、２つのリファキシミン多形に存在する相違を指摘している。
【００５４】
δおよびε形は、経口および局所の両方のための、リファキシミンを含み抗生活性を有する医薬製剤の製造において好適に用いることができる。経口用の医薬製剤は、マンニトール、ラクトースおよびソルビトールのような希釈剤；デンプン、ゼラチン、糖、セルロース誘導体、天然ガムおよびポリビニルピロリドンのような結合剤；タルク、ステアリン酸塩、水素化植物油、ポリエチレングリコールおよびコロイド状二酸化ケイ素のような潤滑剤；デンプン、セルロース、アルギン酸塩、ガムおよび網状ポリマーのような崩壊剤；着色剤、風味剤および甘味剤のような通常の賦形剤と共に、リファキシミンδおよびεを含む。
【００５５】
経口投与される全ての固形製剤、例えば、被覆および非被覆錠剤、軟質および硬質ゼラチン製カプセル、糖衣丸剤、トローチ、オブラート、ペレット、および密封包装中の粉末を本発明で用いることができる。
【００５６】
局所用の医薬製剤は、白色ワセリン、白色ろう、ラノリンおよびそれらの誘導体、ステアリルアルコール、プロピレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウム、脂肪ポリオキシエチレンアルコールのエーテル、脂肪ポリオキシエチレン酸のエステル、ソルビタンモノステアレート、グリセリルモノステアレート、プロピレングリコールモノステアレート、ポリエチレングリコール、メチルセルロース、ヒドロキシメチルプロピルセルロース、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、コロイド状アルミニウムおよびケイ酸マグネシウム、アルギン酸ナトリウムのような通常の賦形剤と共に、リファキシミンδおよびεを含む。
【００５７】
全ての局所製剤、例えば、軟膏、ポマード、クリーム、ゲルおよびローションを本発明の範囲内で用いることができる。
【００５８】
本発明を、幾つかの実施例により以下に説明するが、発明を制限すると解すべきではない。記載された結果から、実際、前記結晶化および乾燥の条件を組み合わせることによってδおよびε形を得ることができることが明らかである。
【００５９】
＜実施例１＞
（粗リファキシミンおよび乾燥粗リファキシミンの調製）
メカニカルスターラー、温度計および還流冷却器を備える三つ口フラスコに、室温で、脱塩水１２０ｍｌ、エチルアルコール９６ｍｌ、リファマイシンＯ６３．５ｇおよび２−アミノ−４−メチルピリジン２７．２ｇを順次仕込む。仕込んだ後、その物（ｍａｓｓ）を４７±３℃で加熱し、この温度で５時間攪拌を続け、次に、２０±３℃まで冷却し、脱塩水９ｍｌ、エチルアルコール１２．６ｍｌ、アスコルビン酸１．６８ｇおよび濃塩酸９．２８ｇからなる別途調製された混合物を、３０分間で加える。添加終了時、その物を２０±３℃の内部温度で３０分間攪拌を続け、次に、同じ温度で、濃塩酸７．７２ｇをｐＨが２．０になるまで滴下する。
【００６０】
添加終了時、その物を、２０℃の内部温度で３０分間攪拌を続け、次に、沈澱を濾過し、脱塩水３２ｍｌとエチルアルコール２５ｍｌからなる混合物で洗う。このように得られた「粗リファキシミン」（８９．２ｇ）を、減圧下に室温で１２時間乾燥して、水含量が５．６％である「乾燥粗リファキシミン」を得る。生成物をさらに乾燥して、含水量が３．３％の乾燥粗リファキシミン６２．２ｇが得られる。このディフラクトグラムは、５．７°±０．２、６．７°±０．２、７．１°±０．２、８．０°±０．２、８．７°±０．２、１０．４°±０．２、１０．８°±０．２、１１．３°±０．２、１２．１°±０．２、１７．０°±０．２、１７．３°±０．２、１７．５°±０．２、１８．５°±０．２、１８．８°±０．２、１９．１°±０．２、２１．０°±０．２、２１．５°±０．２の角度２θの値においてピークを示す粉末Ｘ線ディフラクトグラムを特徴とする多形δに相当する。生成物は吸湿性である。
【００６１】
＜実施例２＞
（リファキシミンεの調製）
実施例１を繰り返してδ形を得た後、固体粉末をさらに減圧下に温度６５℃で２４時間乾燥する。得られた生成物は、７．０°±０．２、７．３°±０．２、８．２°±０．２、８．７°±０．２、１０．３°±０．２、１１．１°±０．２、１１．７°±０．２、１２．４°±０．２、１４．５°±０．２、１６．３°±０．２、１７．２°±０．２、１８．０°±０．２、１９．４°±０．２の角度２θの値においてピークを示す粉末Ｘ線ディフラクトグラムを特徴とするリファキシミンεである。
【００６２】
＜実施例３＞
（経口投与によるイヌでの生物学的利用可能性）
２０週齢で５．０〜７．５ｋｇの８匹の純血種ビーグルメスイヌを、４匹ずつの２つのグループに分けた。
【００６３】
以下の手順に従って、これらのグループのうち第１のグループをリファキシミンδで処理し、第２のグループをリファキシミンεで処理した。
【００６４】
各イヌに、ゼラチンカプセルで一方のリファキシミン多形の１００ｍｇ／ｋｇを経口投与し、分散前および投与から１、２、４、６、８および２４時間後に、各動物の頸静脈から各２ｍｌの血液サンプルを採血した。
【００６５】
各サンプルを、凝集防止剤としてのヘパリンを含む試験管に移し、遠心分離した。血漿を各５００μｌの２つの画分に分け、−２０℃で凍結した。
【００６６】
この血漿に含まれるリファキシミンを、有効なＬＣ−ＭＳ／ＭＳ法により検定し、標準的非コンパートメント解析に従って、以下のパラメーターを計算した。
【００６７】
Ｃｍａｘ＝血漿中のリファキシミンの観察された最大血漿濃度
Ｔｍａｘ＝Ｃｍａｘが達成される時間
ＡＵＣ＝線形台形公式により計算された濃度−時間曲線における面積
表１に報告された結果は、実際に吸収されないリファキシミンεに対し、いかにリファキシミンδが吸収されるか（４０倍以上）を明確に示している。
【図面の簡単な説明】
【００６８】
【図１】リファキシミンδの粉末Ｘ線ディフラクトグラム
【図２】リファキシミンεの粉末Ｘ線ディフラクトグラム
【特許請求の範囲】
【請求項１】
２．５％（ｗ／ｗ）〜６％（ｗ／ｗ）、好ましくは３．０％〜４．５％の含水量、および、５．７°±０．２、６．７°±０．２、７．１°±０．２、８．０°±０．２、８．７°±０．２、１０．４°±０．２、１０．８°±０．２、１１．３°±０．２、１２．１°±０．２、１７．０°±０．２、１７．３°±０．２、１７．５°±０．２、１８．５°±０．２、１８．８°±０．２、１９．１°±０．２、２１．０°±０．２、２１．５°±０．２の回折角２θの値においてピークを示す粉末Ｘ線ディフラクトグラムを特徴とする、リファキシミンδと呼ばれる抗生物質リファキシミンの多形。
【請求項２】
７．０°±０．２、７．３°±０．２、８．２°±０．２、８．７°±０．２、１０．３°±０．２、１１．１°±０．２、１１．７°±０．２、１２．４°±０．２、１４．５°±０．２、１６．３°±０．２、１７．２°±０．２、１８．０°±０．２、１９．４°±０．２の回折角２θの値においてピークを示す粉末Ｘ線ディフラクトグラムを特徴とする、リファキシミンεと呼ばれる抗生物質リファキシミンの多形。
【請求項３】
水とエチルアルコールとの１：１〜２：１の体積比の混合溶媒中、１モル当量のリファマイシンＯを、過剰量の、好ましくは２．０〜３．５モル当量の２−アミノ−４−メチルピリジンと、４０℃〜６０℃の温度で２〜８時間反応させること、その反応物を、室温で、水、エチルアルコールおよび濃塩酸の混合物中でアスコルビン酸溶液で処理すること、その反応物を濃塩酸によりｐＨを２．０にすること、懸濁液を濾過すること、得られた固体を前記反応で用いたものと同じ水／エチルアルコール混合溶媒で洗うこと、および、このように得られた粗リファキシミンを、４５℃〜６５℃の温度でエチルアルコールに溶解し、水、好ましくはその溶解に用いたエチルアルコールの重量に対して１５％〜７０％の重量の水を加えることにより沈澱を引き起こし、懸濁液の温度を攪拌下に５０℃〜０℃の間の値に４〜３６時間低下させ、最後に、懸濁液を濾過し、得られた固体を水で洗い、減圧下または常圧条件下に乾燥剤を用いてまたは用いることなく室温〜１０５℃の温度で２〜７２時間乾燥させることにより精製することを特徴とする、リファキシミンδおよびεの製造方法。
【請求項４】
粗リファキシミンのエタノール溶液に水を加えた後、温度を２８℃〜３２℃の間の値まで下げて結晶化を開始させ、そのように得られた懸濁液を攪拌下に４０℃〜５０℃に６〜２４時間保ち、次に、０℃に１５分〜１時間冷却してから濾過し、得られた固体を含水量が２．５％（ｗ／ｗ）〜６％（ｗ／ｗ）、好ましくは３．０％〜４．５％になるまで乾燥する、リファキシミンδの製造のための請求項３に記載の方法。
【請求項５】
減圧下または大気圧で室温または高温で乾燥剤の存在下または不存在下にリファキシミンδを乾燥するが、乾燥は、ε形への転化が達成されるのに必要な時間まで延長される、リファキシミンεの製造のための請求項３に記載の方法。
【請求項６】
希釈剤、結合剤、潤滑剤、崩壊剤、着色剤、風味剤および甘味剤のような通常の賦形剤と一緒の、抗生活性を有する経口用の医薬製剤の調製における、リファキシミンδの使用。
【請求項７】
希釈剤、結合剤、潤滑剤、崩壊剤、着色剤、風味剤および甘味剤のような通常の賦形剤と一緒の、抗生活性を有する経口用の医薬製剤の調製における、リファキシミンεの使用。
【請求項８】
経口用の製剤が、被覆および非被覆錠剤、硬質および軟質ゼラチンカプセル、糖衣丸剤、トローチ、オブラート、ペレット、および密封包装中の粉末から選択される、請求項６または７に記載の使用。
【請求項９】
局所用の抗生活性を有する医薬製剤の調製におけるリファキシミンδの使用。
【請求項１０】
局所用の抗生活性を有する医薬製剤の調製におけるリファキシミンεの使用。
【請求項１１】
局所用の製剤が、軟膏、ポマード、クリーム、ゲルおよびローションから選択される請求項９または１０に記載の使用。
【請求項１】
２．５％（ｗ／ｗ）〜６％（ｗ／ｗ）、好ましくは３．０％〜４．５％の含水量、および、５．７°±０．２、６．７°±０．２、７．１°±０．２、８．０°±０．２、８．７°±０．２、１０．４°±０．２、１０．８°±０．２、１１．３°±０．２、１２．１°±０．２、１７．０°±０．２、１７．３°±０．２、１７．５°±０．２、１８．５°±０．２、１８．８°±０．２、１９．１°±０．２、２１．０°±０．２、２１．５°±０．２の回折角２θの値においてピークを示す粉末Ｘ線ディフラクトグラムを特徴とする、リファキシミンδと呼ばれる抗生物質リファキシミンの多形。
【請求項２】
７．０°±０．２、７．３°±０．２、８．２°±０．２、８．７°±０．２、１０．３°±０．２、１１．１°±０．２、１１．７°±０．２、１２．４°±０．２、１４．５°±０．２、１６．３°±０．２、１７．２°±０．２、１８．０°±０．２、１９．４°±０．２の回折角２θの値においてピークを示す粉末Ｘ線ディフラクトグラムを特徴とする、リファキシミンεと呼ばれる抗生物質リファキシミンの多形。
【請求項３】
水とエチルアルコールとの１：１〜２：１の体積比の混合溶媒中、１モル当量のリファマイシンＯを、過剰量の、好ましくは２．０〜３．５モル当量の２−アミノ−４−メチルピリジンと、４０℃〜６０℃の温度で２〜８時間反応させること、その反応物を、室温で、水、エチルアルコールおよび濃塩酸の混合物中でアスコルビン酸溶液で処理すること、その反応物を濃塩酸によりｐＨを２．０にすること、懸濁液を濾過すること、得られた固体を前記反応で用いたものと同じ水／エチルアルコール混合溶媒で洗うこと、および、このように得られた粗リファキシミンを、４５℃〜６５℃の温度でエチルアルコールに溶解し、水、好ましくはその溶解に用いたエチルアルコールの重量に対して１５％〜７０％の重量の水を加えることにより沈澱を引き起こし、懸濁液の温度を攪拌下に５０℃〜０℃の間の値に４〜３６時間低下させ、最後に、懸濁液を濾過し、得られた固体を水で洗い、減圧下または常圧条件下に乾燥剤を用いてまたは用いることなく室温〜１０５℃の温度で２〜７２時間乾燥させることにより精製することを特徴とする、リファキシミンδおよびεの製造方法。
【請求項４】
粗リファキシミンのエタノール溶液に水を加えた後、温度を２８℃〜３２℃の間の値まで下げて結晶化を開始させ、そのように得られた懸濁液を攪拌下に４０℃〜５０℃に６〜２４時間保ち、次に、０℃に１５分〜１時間冷却してから濾過し、得られた固体を含水量が２．５％（ｗ／ｗ）〜６％（ｗ／ｗ）、好ましくは３．０％〜４．５％になるまで乾燥する、リファキシミンδの製造のための請求項３に記載の方法。
【請求項５】
減圧下または大気圧で室温または高温で乾燥剤の存在下または不存在下にリファキシミンδを乾燥するが、乾燥は、ε形への転化が達成されるのに必要な時間まで延長される、リファキシミンεの製造のための請求項３に記載の方法。
【請求項６】
希釈剤、結合剤、潤滑剤、崩壊剤、着色剤、風味剤および甘味剤のような通常の賦形剤と一緒の、抗生活性を有する経口用の医薬製剤の調製における、リファキシミンδの使用。
【請求項７】
希釈剤、結合剤、潤滑剤、崩壊剤、着色剤、風味剤および甘味剤のような通常の賦形剤と一緒の、抗生活性を有する経口用の医薬製剤の調製における、リファキシミンεの使用。
【請求項８】
経口用の製剤が、被覆および非被覆錠剤、硬質および軟質ゼラチンカプセル、糖衣丸剤、トローチ、オブラート、ペレット、および密封包装中の粉末から選択される、請求項６または７に記載の使用。
【請求項９】
局所用の抗生活性を有する医薬製剤の調製におけるリファキシミンδの使用。
【請求項１０】
局所用の抗生活性を有する医薬製剤の調製におけるリファキシミンεの使用。
【請求項１１】
局所用の製剤が、軟膏、ポマード、クリーム、ゲルおよびローションから選択される請求項９または１０に記載の使用。
【図１】
【図２】
【図２】
【公表番号】特表２００８−５３１６２３（Ｐ２００８−５３１６２３Ａ）
【公表日】平成２０年８月１４日（２００８．８．１４）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００７−５５７３９８（Ｐ２００７−５５７３９８）
【出願日】平成１８年２月２７日（２００６．２．２７）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２００６／００１７５５
【国際公開番号】ＷＯ２００６／０９４６６２
【国際公開日】平成１８年９月１４日（２００６．９．１４）
【出願人】（３０４０４４７９３）アルファ ワッセルマン ソシエタ ペル アチオニ (8)
【氏名又は名称原語表記】ＡＬＦＡ ＷＡＳＳＥＲＭＡＮＮ Ｓ．Ｐ．Ａ．
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２０年８月１４日（２００８．８．１４）
【国際特許分類】
【出願日】平成１８年２月２７日（２００６．２．２７）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２００６／００１７５５
【国際公開番号】ＷＯ２００６／０９４６６２
【国際公開日】平成１８年９月１４日（２００６．９．１４）
【出願人】（３０４０４４７９３）アルファ ワッセルマン ソシエタ ペル アチオニ (8)
【氏名又は名称原語表記】ＡＬＦＡ ＷＡＳＳＥＲＭＡＮＮ Ｓ．Ｐ．Ａ．
【Ｆターム（参考）】
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