低いコアフコシル化を有する抗体及び抗体誘導体を調製するための方法並びに組成物
本発明は、低いコアフコシル化を有する抗体及び抗体誘導体を調製するための方法並びに組成物を提供する。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
低いコアフコシル化を有する修飾抗体又は抗体誘導体を製造する方法であって、
糖鎖の還元末端のN-アセチルグルコサミンを介してFcドメインに結合した少なくとも一つの複合N-グリコシド結合糖鎖を有するFcドメインを有する抗体又は抗体誘導体を発現する宿主細胞を有効量のフコース類似体を含む培地中で適切な成長条件下で培養する段階、及び
前記抗体又は抗体誘導体を細胞から分離する段階を含み、
前記フコース類似体が以下の式(I)又は(II)の一つ
【化１】
或いはその生物学的に許容される塩又は溶媒和物からなる群から選択され、
式(I)又は(II)のそれぞれは、アルファ若しくはベータアノマー又は対応するアルドース形であってよく、
R1〜R4のそれぞれは、-OH、-OC(O)H、-OC(O)C1〜C10アルキル、-OC(O)C2〜C10アルケニル、-OC(O)C2〜C10アルキニル、-OC(O)アリール、-OC(O)複素環、-OC(O)C1〜C10アルキレン(アリール)、-OC(O)C2〜C10アルキレン(アリール)、-OC(O)C2〜C10アルキニル(アリール)、-OC(O)C1〜C10アルキレン複素環、-OC(O)C2〜C10アルケニレン(複素環)、-OC(O)C2〜C10アルキニル複素環、-OCH2OC(O)アルキル、-OCH2OC(O)Oアルキル、-OCH2OC(O)アリール、-OCH2OC(O)Oアリール、-OC(O)CH2O(CH2CH2O)nCH3、-OC(O)CH2CH2O(CH2CH2O)nCH3、-O-tri-C1〜C3アルキルシリル及び-OC1〜C10アルキルからなる群から独立に選択され、各nは、0〜5から独立に選択される整数であり、
R5は、-C≡CH、-C≡CCH3、-CH2C≡CH、-C(O)OCH3、-CH(OAc)CH3、-CN、-CH2CN、-CH2X(XはBr、Cl又はIである)及びメトキシランからなる群から選択され、
前記抗体又は抗体誘導体が前記フコース類似体の不存在下で培養した宿主細胞からの抗体又は抗体誘導体と比較して低いコアフコシル化を有する、上記方法。
【請求項２】
前記宿主細胞が組換え宿主細胞である、請求項1に記載の方法。
【請求項３】
前記宿主細胞がチャイニーズハムスター卵巣細胞である、請求項2に記載の方法。
【請求項４】
前記宿主細胞がハイブリドーマである、請求項1に記載の方法。
【請求項５】
前記宿主細胞が供給バッチ培養において成長される、請求項1に記載の方法。
【請求項６】
前記宿主細胞が連続供給培養において成長される、請求項1に記載の方法。
【請求項７】
前記培地が少なくとも100リットルの容積を有する、請求項5又は6に記載の方法。
【請求項８】
前記培地が少なくとも500リットルの容積を有する、請求項7に記載の方法。
【請求項９】
前記培地にその有効濃度を維持するようにフコース類似体を添加する、請求項1に記載の方法。
【請求項１０】
前記培地が少なくとも二つのフコース類似体を含む、請求項1に記載の方法。
【請求項１１】
前記培地が動物タンパク質不含有培地である、請求項1に記載の方法。
【請求項１２】
前記フコース類似体の20%未満が前記抗体又は抗体誘導体の複合N-グリコシド結合糖鎖に組み込まれる、請求項1に記載の方法。
【請求項１３】
前記フコース類似体の5%未満が前記抗体又は抗体誘導体の複合N-グリコシド結合糖鎖に組み込まれる、請求項1に記載の方法。
【請求項１４】
前記抗体又は抗体誘導体を培地から分離する段階をさらに含む、請求項1に記載の方法。
【請求項１５】
前記抗体又は抗体誘導体をプロテインAカラムを用いて精製する段階をさらに含む、請求項14に記載の方法。
【請求項１６】
前記抗体又は抗体誘導体を陽イオン若しくは陰イオン交換カラム又は疎水性相互作用カラム上で精製する段階を含む、請求項14に記載の方法。
【請求項１７】
前記抗体が完全な抗体である、請求項1に記載の方法。
【請求項１８】
前記抗体がIgG1である、請求項17に記載の方法。
【請求項１９】
前記抗体が単鎖抗体である、請求項1に記載の方法。
【請求項２０】
前記抗体が重鎖及び軽鎖可変領域並びにFc領域を含む、請求項1に記載の方法。
【請求項２１】
前記抗体誘導体が抗体Fc領域及び非免疫グロブリンタンパク質のリガンド結合ドメインを含む、請求項1に記載の方法。
【請求項２２】
前記フコース類似体が以下の式(I)又は(II)の一つ
【化２】
或いはその生物学的に許容される塩又は溶媒和物を有し、
式(I)又は(II)のそれぞれは、アルファ若しくはベータアノマー又は対応するアルドース形であってよく、
R1〜R4のそれぞれは、-OH、-OC(O)H、-OC(O)C1〜C10アルキル、-OC(O)C2〜C10アルケニル、-OC(O)C2〜C10アルキニル、-OC(O)アリール、-OC(O)複素環、-OC(O)C1〜C10アルキレン(アリール)、-OC(O)C2〜C10アルキレン(アリール) 、-OC(O)C2〜C10アルキニル(アリール)、-OC(O)C1〜C10アルキレン複素環、-OC(O)C2〜C10アルケニレン(複素環)、-OC(O)C2〜C10アルキニル複素環、-OCH2OC(O)アルキル、-OCH2OC(O)Oアルキル、-OCH2OC(O)アリール、-OCH2OC(O) Oアリール、-OC(O)CH2O(CH2CH2O)nCH3及び-OC(O)CH2CH2O(CH2CH2O)nCH3からなる群から独立に選択され、各nは、0〜5から独立に選択される整数であり、
R5は、-C≡CH、-C≡CCH3、-CH2C≡CH、-C(O)OCH3、-CH(OAc)CH3、-CN、-CH2CN、-CH2X(XはBr、Cl又はIである)及びメトキシランからなる群から選択される、請求項1に記載の方法。
【請求項２３】
R1〜R4のそれぞれが-OH、-OC(O)H、-OC(O)C1〜C10アルキル、-OC(O)C2〜C10アルケニル、-OC(O)C2〜C10アルキニル、-OC(O)アリール、-OC(O)複素環、-OC(O)C1〜C10アルキレン(アリール)、-OC(O)C2〜C10アルキレン(アリール) 、-OC(O)C2〜C10アルキニル(アリール)、-OC(O)C1〜C10アルキレン複素環、-OC(O)C2〜C10アルケニレン(複素環)、-OC(O)C2〜C10アルキニル複素環、-OC(O)CH2O(CH2CH2O)nCH3及び-OC(O)CH2CH2O(CH2CH2O)nCH3からなる群から独立に選択され、R5が-C≡CH、-C≡CCH3、-CH2C≡CH、-C(O)OCH3、-CH(OAc)CH3、-CN、-CH2CN、-CH2X(XはBr、Cl又はIである)及びメトキシランからなる群から選択される、請求項22に記載の方法。
【請求項２４】
R1〜R4のそれぞれが-OH及び-OC(O)C1〜C10アルキルからなる群から独立に選択される、請求項22に記載の方法。
【請求項２５】
R1〜R4のそれぞれが-OH及び-OAcからなる群から独立に選択される、請求項24に記載の方法。
【請求項２６】
R5が-C≡CH及び-C≡CCH3からなる群から選択される、請求項22に記載の方法。
【請求項２７】
R5が-C(O)OCH3である、請求項22に記載の方法。
【請求項２８】
R5が-CN及び-CH2CNからなる群から選択される、請求項22に記載の方法。
【請求項２９】
R5が-CH2CNである、請求項22に記載の方法。
【請求項３０】
R5が-CH2Xであり、XがBr、Cl又はIである、請求項22に記載の方法。
【請求項３１】
R5が-CH2Xであり、XがBr又はIである、請求項30に記載の方法。
【請求項３２】
R5が-CH2X(XはBrである)である、請求項31に記載の方法。
【請求項３３】
R5が-メトキシランである、請求項22に記載の方法。
【請求項３４】
R5が-CH(OAc)CH3である、請求項22に記載の方法。
【請求項３５】
R5が-C≡CHであり、R1〜R4が-OAcである、請求項22に記載の方法。
【請求項３６】
有効量のフコース類似体を含む、低いコアフコシル化を有する抗体又は抗体誘導体の産生のための哺乳類細胞培地であって、
前記フコース類似体が以下の式(I)又は(II)の一つ
【化３】
或いはその生物学的に許容される塩又は溶媒和物からなる群から選択され、式(I)又は(II)のそれぞれは、アルファ若しくはベータアノマー又は対応するアルドース形であってよく、
R1〜R4のそれぞれは、-OH、-OC(O)H、-OC(O)C1〜C10アルキル、-OC(O)C2〜C10アルケニル、-OC(O)C2〜C10アルキニル、-OC(O)アリール、-OC(O)複素環、-OC(O)C1〜C10アルキレン(アリール)、-OC(O)C2〜C10アルキレン(アリール)、-OC(O)C2〜C10アルキニル(アリール)、-OC(O)C1〜C10アルキレン複素環、-OC(O)C2〜C10アルケニレン(複素環)、-OC(O)C2〜C10アルキニル複素環、-OCH2OC(O)アルキル、-OCH2OC(O)Oアルキル、-OCH2OC(O)アリール、-OCH2OC(O)Oアリール、-OC(O)CH2O(CH2CH2O)nCH3、-OC(O)CH2CH2O(CH2CH2O)nCH3、-O-tri-C1〜C3シリル及び-OC1〜C10アルキルからなる群から独立に選択され、各nは、0〜5から独立に選択される整数であり、
R5は、-C≡CH、-C≡CCH3、-CH2C≡CH、-C(O)OCH3、-CH(OAc)CH3、-CN、-CH2CN、-CH2X(XはBr、Cl又はIである)及びメトキシランからなる群から選択される、上記哺乳類細胞培地。
【請求項３７】
R5が-C≡CHであり、R1〜R4が-OAcである、請求項36に記載の培地。
【請求項３８】
添加動物タンパク質を含まない、請求項36に記載の培地。
【請求項３９】
血清を含まない、請求項36に記載の培地。
【請求項４０】
添加フコースを含まない、請求項36に記載の培地。
【請求項４１】
粉末である、請求項36に記載の培地。
【請求項４２】
液体である、請求項36に記載の培地。
【請求項４３】
R1〜R4のそれぞれが-OH及び-OC(O)C1〜C10アルキルからなる群から独立に選択される、請求項36に記載の培地。
【請求項４４】
R1〜R4のそれぞれが-OH及び-OAcからなる群から独立に選択される、請求項36に記載の培地。
【請求項４５】
R5が-C≡CH及び-C≡CCH3からなる群から選択される、請求項36に記載の培地。
【請求項４６】
R5が-C(O)OCH3である、請求項36に記載の培地。
【請求項４７】
R5が-CN及び-CH2CNからなる群から選択される、請求項36に記載の培地。
【請求項４８】
R5が-CH2CNである、請求項36に記載の培地。
【請求項４９】
R5が-CH2Xであり、XがBr、Cl又はIである、請求項36に記載の培地。
【請求項５０】
R5が-CH2Xであり、XがBr又はIである、請求項49に記載の培地。
【請求項５１】
R5が-CH2Xであり、XがBrである、請求項50に記載の培地。
【請求項５２】
R5が-メトキシランである、請求項36に記載の培地。
【請求項５３】
R5が-CH(OAc)CH3である、請求項36に記載の培地。
【請求項５４】
R5が-C≡CHであり、R1〜R4が-OAcである、請求項36に記載の培地。
【請求項５５】
以下の式(I)又は(II)の一つを有するフコース類似体
【化４】
或いはその生物学的に許容される塩又は溶媒和物[ここで、
式(I)又は(II)のそれぞれは、アルファ若しくはベータアノマー又は対応するアルドース形であってよく、
R1〜R4のそれぞれは、-OH、-OC(O)H、-OC(O)C1〜C10アルキル、-OC(O)アリール、-OC(O)複素環、-OC(O)C1〜C10アルキレンアリール、-OC(O)C1〜C10アルキレン複素環、-OCH2OC(O)アルキル、-OCH2OC(O)Oアルキル、-OCH2OC(O)アリール、-OCH2OC(O)Oアリール、-OC(O)CH2O(CH2CH2O)nCH3及び-OC(O)CH2CH2O(CH2CH2O)nCH3からなる群から独立に選択され、各nは、0〜5から独立に選択される整数であり、
R5は、-C≡CH、-C≡CCH3、-CH2C≡CH、-C(O)OCH3、-CH(OAc)CH3、-CN、-CH2CN、-CH2X(XはBr、Cl又はIである)及び-メトキシランからなる群から選択され、
ただし、R1〜R4のいずれかが-OH又は-OAcである場合、R5は-C≡CHでない]。
【請求項５６】
R1〜R4のそれぞれが-OH及び-OC(O)C1〜C10アルキルからなる群から独立に選択される、請求項55に記載のフコース類似体。
【請求項５７】
R1〜R4のそれぞれが-OH及び-OAcからなる群から独立に選択される、請求項55に記載のフコース類似体。
【請求項５８】
R5が-C≡CH及び-C≡CCH3からなる群から選択される、請求項55に記載のフコース類似体。
【請求項５９】
R5が-C(O)OCH3である、請求項55に記載のフコース類似体。
【請求項６０】
R5が-CN及び-CH2CNからなる群から選択される、請求項55に記載のフコース類似体。
【請求項６１】
R5が-CH2CNである、請求項55に記載のフコース類似体。
【請求項６２】
R5が-CH2Xであり、XがBr、Cl又はIである、請求項55に記載のフコース類似体。
【請求項６３】
R5が-CH2Xであり、XがBr又はIである、請求項55に記載のフコース類似体。
【請求項６４】
R5が-CH2Xであり、XがBrである、請求項55に記載のフコース類似体。
【請求項６５】
R5がメトキシランである、請求項55に記載のフコース類似体。
【請求項６６】
R5が-CH(OAc)CH3である、請求項55に記載のフコース類似体。
【請求項６７】
低いコアフコシル化を有する修飾抗体又は抗体誘導体を製造する方法であって、
糖鎖の還元末端のN-アセチルグルコサミンを介してFcドメインに結合した少なくとも一つの複合N-グリコシド結合糖鎖を有するFcドメインを有する抗体又は抗体誘導体を発現する宿主細胞を有効量のフコース類似体を含む培地中で適切な成長条件下で培養する段階、及び
前記抗体又は抗体誘導体を細胞から分離する段階を含み、
前記フコース類似体が以下の式(III)又は(IV)の一つ
【化５】
或いはその生物学的に許容される塩又は溶媒和物からなる群から選択され、式(III)又は(IV)のそれぞれは、アルファ若しくはベータアノマー又は対応するアルドース形であってよく、
R1〜R4のそれぞれは、フルオロ、クロロ、-OH、-OC(O)H、-OC(O)C1〜C10アルキル、-OC(O)C2〜C10アルケニル、-OC(O)C2〜C10アルキニル、-OC(O)アリール、-OC(O)複素環、-OC(O)C1〜C10アルキレン(アリール)、-OC(O)C2〜C10アルキレン(アリール)、-OC(O)C2〜C10アルキニル(アリール)、-OC(O)C1〜C10アルキレン複素環、-OC(O)C2〜C10アルケニレン(複素環)、-OC(O)C2〜C10アルキニル複素環、-OCH2OC(O)アルキル、-OCH2OC(O)Oアルキル、-OCH2OC(O)アリール、-OCH2OC(O)Oアリール、-OC(O)CH2O(CH2CH2O)nCH3、-OC(O)CH2CH2O(CH2CH2O)nCH3、-O-tri-C1〜C3アルキルシリル及び-OC1〜C10アルキルからなる群から独立に選択され、各nは、0〜5から独立に選択される整数であり、
R2a及びR3aのそれぞれは、H、F及びClからなる群から独立に選択され、
R5は、-CH3、-CHF2、-CH=C=CH2、-C≡CH、-C≡CCH3、-CH2C≡CH、-C(O)OCH3、-CH(OAc)CH3、-CN、-CH2CN、-CH2X(XはBr、Cl又はIである)及びメトキシランからなる群から選択され、
R5が-CH=C=CH2又は-CHF2以外である場合、R1、R2、R3、R2a及びR3aの少なくとも一つは、フルオロ又はクロロであり、
前記抗体又は抗体誘導体が前記フコース類似体の不存在下で培養した宿主細胞からの抗体又は抗体誘導体と比較して低いコアフコシル化を有する、上記方法。
【請求項６８】
R1がFである、請求項67に記載の方法。
【請求項６９】
R2がFである、請求項67に記載の方法。
【請求項７０】
R3がFである、請求項67に記載の方法。
【請求項７１】
R2及びR2aがそれぞれFである、請求項67に記載の方法。
【請求項７２】
R1及びR2がそれぞれFである、請求項67に記載の方法。
【請求項７３】
以下の式(III)又は(IV)からなる群から選択される式を有する化合物
【化６】
或いはその生物学的に許容される塩又は溶媒和物[ここで、
式(III)又は(IV)のそれぞれは、アルファ若しくはベータアノマー又は対応するアルドース形であってよく、
R1〜R4のそれぞれは、フルオロ、クロロ、-OH、-OC(O)H、-OC(O)C1〜C10アルキル、-OC(O)C2〜C10アルケニル、-OC(O)C2〜C10アルキニル、-OC(O)アリール、-OC(O)複素環、-OC(O)C1〜C10アルキレン(アリール)、-OC(O)C2〜C10アルキレン(アリール)、-OC(O)C2〜C10アルキニル(アリール)、-OC(O)C1〜C10アルキレン複素環、-OC(O)C2〜C10アルケニレン(複素環)、-OC(O)C2〜C10アルキニル複素環、-OCH2OC(O)アルキル、-OCH2OC(O)Oアルキル、-OCH2OC(O)アリール、-OCH2OC(O)Oアリール、-OC(O)CH2O(CH2CH2O)nCH3、-OC(O)CH2CH2O(CH2CH2O)nCH3、-O-tri-C1〜C3アルキルシリル及び-OC1〜C10アルキルからなる群から独立に選択され、各nは、0〜5から独立に選択される整数であり、
R2a及びR3aのそれぞれは、H、F及びClからなる群から独立に選択され、
R5は、-CH3、-CHF2、-CH=C=CH2、-C≡CH、-C≡CCH3、-CH2C≡CH、-C(O)OCH3、-CH(OAc)CH3、-CN、-CH2CN、-CH2X(XはBr、Cl又はIである)及びメトキシランからなる群から選択され、
R5が-CH=C=CH2又は-CHF2以外である場合、R1、R2、R3、R2a及びR3aの少なくとも一つは、フルオロ又はクロロである]。
【請求項７４】
R1がFである、請求項73に記載の化合物。
【請求項７５】
R2がFである、請求項73に記載の化合物。
【請求項７６】
R3がFである、請求項73に記載の化合物。
【請求項７７】
R1がFであり、R2がFである、請求項73に記載の化合物。
【請求項７８】
R2及びR2aがそれぞれFである、請求項73に記載の化合物。
【請求項７９】
R1、R3及びR4が-OH及び-OAcからなる群からそれぞれ独立に選択され、R2がFであり、R5が-CH3である、請求項73に記載の化合物。
【請求項８０】
R1、R3及びR4が-OH及び-OAcからなる群からそれぞれ独立に選択され、R2がFであり、R2a及びR3aがそれぞれHであり、R5が-CH3である、請求項73に記載の化合物。
【請求項８１】
有効量のフコース類似体を含む、低いコアフコシル化を有する抗体又は抗体誘導体の産生のための哺乳類細胞培地であって、
前記フコース類似体が以下の式(III)又は(IV)の一つ
【化７】
或いはその生物学的に許容される塩又は溶媒和物からなる群から選択され、式(III)又は(IV)のそれぞれは、アルファ若しくはベータアノマー又は対応するアルドース形であってよく、
R1〜R4のそれぞれは、フルオロ、クロロ、-OH、-OC(O)H、-OC(O)C1〜C10アルキル、-OC(O)C2〜C10アルケニル、-OC(O)C2〜C10アルキニル、-OC(O)アリール、-OC(O)複素環、-OC(O)C1〜C10アルキレン(アリール)、-OC(O)C2〜C10アルキレン(アリール)、-OC(O)C2〜C10アルキニル(アリール)、-OC(O)C1〜C10アルキレン複素環、-OC(O)C2〜C10アルケニレン(複素環)、-OC(O)C2〜C10アルキニル複素環、-OCH2OC(O)アルキル、-OCH2OC(O)Oアルキル、-OCH2OC(O)アリール、-OCH2OC(O)Oアリール、-OC(O)CH2O(CH2CH2O)nCH3、-OC(O)CH2CH2O(CH2CH2O)nCH3、-O-tri-C1〜C3アルキルシリル及び-OC1〜C10アルキルからなる群から独立に選択され、各nは、0〜5から独立に選択される整数であり、
R2a及びR3aのそれぞれは、H、F及びClからなる群から独立に選択され、
R5は、-CH3、-CHF2、-CH=C=CH2、-C≡CH、-C≡CCH3、-CH2C≡CH、-C(O)OCH3、-CH(OAc)CH3、-CN、-CH2CN、-CH2X(XはBr、Cl又はIである)及びメトキシランからなる群から選択され、
R5が-CH=C=CH2又は-CHF2以外である場合、R1、R2、R3、R2a及びR3aの少なくとも一つは、フルオロ又はクロロである、上記哺乳類細胞培地。
【請求項８２】
(i)添加動物タンパク質を含まず、
(ii)血清を含まず、
(iii)添加フコースを含まず、
(iv)粉末又は液体である、
請求項81に記載の培地。
【請求項８３】
R1、R2、R3、R2a及びR3aの少なくとも一つがフルオロ又はクロロである、請求項81に記載の培地。
【請求項８４】
R1、R2、R3、R2a及びR3aの二つがフルオロ又はクロロである、請求項81に記載の培地。
【請求項８５】
低いコアフコシル化を有する修飾抗体又は抗体誘導体を製造する方法であって、
糖鎖の還元末端のN-アセチルグルコサミンを介してFcドメインに結合した少なくとも一つの複合N-グリコシド結合糖鎖を有するFcドメインを有する抗体又は抗体誘導体を発現する宿主細胞を有効量のフコース類似体を含む培地中で適切な成長条件下で培養する段階、及び
前記抗体又は抗体誘導体を細胞から分離する段階を含み、
前記フコース類似体が以下の式(V)又は(VI)の一つ
【化８】
或いはその生物学的に許容される塩又は溶媒和物からなる群から選択され、式(V)又は(VI)のそれぞれは、アルファ若しくはベータアノマー又は対応するアルドース形であってよく、
R1、R2、R2a、R3、R3a及びR4のそれぞれは、-OH、-OC(O)H、-OC(O)C1〜C10アルキル、-OC(O)C2〜C10アルケニル、-OC(O)C2〜C10アルキニル、-OC(O)アリール、-OC(O)複素環、-OC(O)C1〜C10アルキレン(アリール)、-OC(O)C2〜C10アルキレン(アリール)、-OC(O)C2〜C10アルキニル(アリール)、-OC(O)C1〜C10アルキレン複素環、-OC(O)C2〜C10アルケニレン(複素環)、-OC(O)C2〜C10アルキニル複素環、-OCH2OC(O)アルキル、-OCH2OC(O)Oアルキル、-OCH2OC(O)アリール、-OCH2OC(O)Oアリール、-OC(O)CH2O(CH2CH2O)nCH3、-OC(O)CH2CH2O(CH2CH2O)nCH3、-O-tri-C1〜C3アルキルシリル、-OC1〜C10アルキル及び小電子求引基からなる群から独立に選択され、各nは、0〜5から独立に選択される整数であり、
R5は、-CH3、-CH2X、非置換又はハロゲンで置換された-CH(X')-C1〜C4アルキル、非置換又はハロゲンで置換された-CH(X')-C2〜C4アルケン、非置換又はハロゲンで置換された-CH(X')-C2〜C4アルキン、-CH=C(R10)(R11)、-C(CH3)=C(R12)(R13)、-C(R14)=C=C(R15)(R16)、非置換又はメチル若しくはハロゲンで置換された-C3炭素環、非置換又はメチル若しくはハロゲンで置換された-CH(X')-C3炭素環、非置換又はメチル若しくはハロゲンで置換されたC3複素環、非置換又はメチル若しくはハロゲンで置換された-CH(X')-C3複素環、-CH2N3、-CH2CH2N3及びベンジルオキシメチルからなる群から選択されるメンバーか、或いはR5は、小電子求引基であり、
R10は、水素或いは非置換又はハロゲンで置換されたC1〜C3アルキルであり、
R11は、非置換又はハロゲンで置換されたC1〜C3アルキルであり、
R12は、水素、ハロゲン或いは非置換又はハロゲンで置換されたC1〜C3アルキルであり、
R13は、水素或いは非置換又はハロゲンで置換されたC1〜C3アルキルであり、
R14は、水素又はメチルであり、
R15及びR16は、水素、メチル及びハロゲンから独立に選択され、
Xは、ハロゲンであり、
X'は、ハロゲン又は水素であり、
さらに、R1、R2、R2a、R3及びR3aのそれぞれが場合によって水素であり、R1、R2、R2a、R3及びR3aのうち隣接炭素原子上の二つが場合によって結合して、前記隣接炭素原子間の二重結合を形成しており、
ただし、(i)R2及びR2aが両方とも水素である、(ii)R3及びR3aが両方とも水素である、(iii)R1が水素である、(iv)二重結合が前記隣接炭素原子間に存在する、又は(v)R5がベンジルオキシメチルである場合を除き、R1、R2、R2a、R3、R3a、R4及びR5の少なくとも一つは、小電子求引基であり、或いはR5は、ハロゲン、不飽和部位、炭素環、複素環又はアジドを含み、
前記抗体又は抗体誘導体が前記フコース類似体の不存在下で培養した宿主細胞からの抗体又は抗体誘導体と比較して低いコアフコシル化を有する、上記方法。
【請求項８６】
R2及びR2aがそれぞれ水素である、請求項85に記載の方法。
【請求項８７】
R5が-CH3、-CH2CH3、-CH2C≡CH、-CH=CHCH3、-シクロプロピル、-オキシラン、メチルで置換された-オキシラン、-CH2F、-CH2Cl、-CH2Br、-CH2I、-CH=C=CH2、-CH2N3及び-CH2CH2N3からなる群から選択される、請求項85に記載の方法。
【請求項８８】
前記小電子求引基がフルオロ、クロロ、ブロモ、-CHF2、-CH=C=CH2、-C≡CH、-C≡CCH3、-CH2C≡CH、-CO2H、-C(O)OC1〜C4アルキル、-CH(OAc)CH3、-CN、-CH2CN、-CH2X(XはBr、Cl又はIである)及びメトキシランからなる群から選択される、請求項85に記載の方法。
【請求項８９】
R1、R2、R2a、R3、R3a及びR4の少なくとも二つが小電子求引基である、請求項85に記載の方法。
【請求項９０】
前記フコース類似体が表1、2及び3の化合物から選択される、請求項85に記載の方法。
【請求項９１】
有効量のフコース類似体を含み、前記フコース類似体が請求項85の次の式(V)又は(VI)の一つからなる群から選択され、前記有効量が低いコアフコシル化を有する抗体又は抗体誘導体を産生するのに十分な量である、低いコアフコシル化を有する抗体又は抗体誘導体の産生のための哺乳類細胞培地。
【請求項９２】
前記小電子求引基がフルオロ、クロロ、ブロモ、-CHF2、-CH=C=CH2、-C≡CH、-C≡CCH3、-CH2C≡CH、-CO2H、-C(O)OC1〜C4アルキル、-CH(OAc)CH3、-CN、-CH2CN、-CH2X(XはBr、Cl又はIである)、スルホン酸、スルホン酸エステル、スルホンアミド、-SO2-C1〜C4アルキル、ホスホン酸、ホスホン酸エステル、ホスフィン酸、ホスフィン酸エステル及びメトキシランからなる群から選択される、請求項91に記載の哺乳類細胞培地。
【請求項９３】
R1、R2、R2a、R3、R3a、R4及びR5の少なくとも二つが独立に選択される小電子求引基である、請求項91に記載の哺乳類細胞培地。
【請求項９４】
前記フコース類似体が表1、2及び3の化合物から選択される、請求項91に記載の哺乳類細胞培地。
【請求項９５】
化合物6、7、9、10、22、24、26、54、56〜58、61〜62、65及び66並びに2-フルオロ-2-デオキシフコース以外の、上記の請求項に記載の式I、II、III、IV、V又はVIのいずれかを有する化合物。
【請求項１】
低いコアフコシル化を有する修飾抗体又は抗体誘導体を製造する方法であって、
糖鎖の還元末端のN-アセチルグルコサミンを介してFcドメインに結合した少なくとも一つの複合N-グリコシド結合糖鎖を有するFcドメインを有する抗体又は抗体誘導体を発現する宿主細胞を有効量のフコース類似体を含む培地中で適切な成長条件下で培養する段階、及び
前記抗体又は抗体誘導体を細胞から分離する段階を含み、
前記フコース類似体が以下の式(I)又は(II)の一つ
【化１】
或いはその生物学的に許容される塩又は溶媒和物からなる群から選択され、
式(I)又は(II)のそれぞれは、アルファ若しくはベータアノマー又は対応するアルドース形であってよく、
R1〜R4のそれぞれは、-OH、-OC(O)H、-OC(O)C1〜C10アルキル、-OC(O)C2〜C10アルケニル、-OC(O)C2〜C10アルキニル、-OC(O)アリール、-OC(O)複素環、-OC(O)C1〜C10アルキレン(アリール)、-OC(O)C2〜C10アルキレン(アリール)、-OC(O)C2〜C10アルキニル(アリール)、-OC(O)C1〜C10アルキレン複素環、-OC(O)C2〜C10アルケニレン(複素環)、-OC(O)C2〜C10アルキニル複素環、-OCH2OC(O)アルキル、-OCH2OC(O)Oアルキル、-OCH2OC(O)アリール、-OCH2OC(O)Oアリール、-OC(O)CH2O(CH2CH2O)nCH3、-OC(O)CH2CH2O(CH2CH2O)nCH3、-O-tri-C1〜C3アルキルシリル及び-OC1〜C10アルキルからなる群から独立に選択され、各nは、0〜5から独立に選択される整数であり、
R5は、-C≡CH、-C≡CCH3、-CH2C≡CH、-C(O)OCH3、-CH(OAc)CH3、-CN、-CH2CN、-CH2X(XはBr、Cl又はIである)及びメトキシランからなる群から選択され、
前記抗体又は抗体誘導体が前記フコース類似体の不存在下で培養した宿主細胞からの抗体又は抗体誘導体と比較して低いコアフコシル化を有する、上記方法。
【請求項２】
前記宿主細胞が組換え宿主細胞である、請求項1に記載の方法。
【請求項３】
前記宿主細胞がチャイニーズハムスター卵巣細胞である、請求項2に記載の方法。
【請求項４】
前記宿主細胞がハイブリドーマである、請求項1に記載の方法。
【請求項５】
前記宿主細胞が供給バッチ培養において成長される、請求項1に記載の方法。
【請求項６】
前記宿主細胞が連続供給培養において成長される、請求項1に記載の方法。
【請求項７】
前記培地が少なくとも100リットルの容積を有する、請求項5又は6に記載の方法。
【請求項８】
前記培地が少なくとも500リットルの容積を有する、請求項7に記載の方法。
【請求項９】
前記培地にその有効濃度を維持するようにフコース類似体を添加する、請求項1に記載の方法。
【請求項１０】
前記培地が少なくとも二つのフコース類似体を含む、請求項1に記載の方法。
【請求項１１】
前記培地が動物タンパク質不含有培地である、請求項1に記載の方法。
【請求項１２】
前記フコース類似体の20%未満が前記抗体又は抗体誘導体の複合N-グリコシド結合糖鎖に組み込まれる、請求項1に記載の方法。
【請求項１３】
前記フコース類似体の5%未満が前記抗体又は抗体誘導体の複合N-グリコシド結合糖鎖に組み込まれる、請求項1に記載の方法。
【請求項１４】
前記抗体又は抗体誘導体を培地から分離する段階をさらに含む、請求項1に記載の方法。
【請求項１５】
前記抗体又は抗体誘導体をプロテインAカラムを用いて精製する段階をさらに含む、請求項14に記載の方法。
【請求項１６】
前記抗体又は抗体誘導体を陽イオン若しくは陰イオン交換カラム又は疎水性相互作用カラム上で精製する段階を含む、請求項14に記載の方法。
【請求項１７】
前記抗体が完全な抗体である、請求項1に記載の方法。
【請求項１８】
前記抗体がIgG1である、請求項17に記載の方法。
【請求項１９】
前記抗体が単鎖抗体である、請求項1に記載の方法。
【請求項２０】
前記抗体が重鎖及び軽鎖可変領域並びにFc領域を含む、請求項1に記載の方法。
【請求項２１】
前記抗体誘導体が抗体Fc領域及び非免疫グロブリンタンパク質のリガンド結合ドメインを含む、請求項1に記載の方法。
【請求項２２】
前記フコース類似体が以下の式(I)又は(II)の一つ
【化２】
或いはその生物学的に許容される塩又は溶媒和物を有し、
式(I)又は(II)のそれぞれは、アルファ若しくはベータアノマー又は対応するアルドース形であってよく、
R1〜R4のそれぞれは、-OH、-OC(O)H、-OC(O)C1〜C10アルキル、-OC(O)C2〜C10アルケニル、-OC(O)C2〜C10アルキニル、-OC(O)アリール、-OC(O)複素環、-OC(O)C1〜C10アルキレン(アリール)、-OC(O)C2〜C10アルキレン(アリール) 、-OC(O)C2〜C10アルキニル(アリール)、-OC(O)C1〜C10アルキレン複素環、-OC(O)C2〜C10アルケニレン(複素環)、-OC(O)C2〜C10アルキニル複素環、-OCH2OC(O)アルキル、-OCH2OC(O)Oアルキル、-OCH2OC(O)アリール、-OCH2OC(O) Oアリール、-OC(O)CH2O(CH2CH2O)nCH3及び-OC(O)CH2CH2O(CH2CH2O)nCH3からなる群から独立に選択され、各nは、0〜5から独立に選択される整数であり、
R5は、-C≡CH、-C≡CCH3、-CH2C≡CH、-C(O)OCH3、-CH(OAc)CH3、-CN、-CH2CN、-CH2X(XはBr、Cl又はIである)及びメトキシランからなる群から選択される、請求項1に記載の方法。
【請求項２３】
R1〜R4のそれぞれが-OH、-OC(O)H、-OC(O)C1〜C10アルキル、-OC(O)C2〜C10アルケニル、-OC(O)C2〜C10アルキニル、-OC(O)アリール、-OC(O)複素環、-OC(O)C1〜C10アルキレン(アリール)、-OC(O)C2〜C10アルキレン(アリール) 、-OC(O)C2〜C10アルキニル(アリール)、-OC(O)C1〜C10アルキレン複素環、-OC(O)C2〜C10アルケニレン(複素環)、-OC(O)C2〜C10アルキニル複素環、-OC(O)CH2O(CH2CH2O)nCH3及び-OC(O)CH2CH2O(CH2CH2O)nCH3からなる群から独立に選択され、R5が-C≡CH、-C≡CCH3、-CH2C≡CH、-C(O)OCH3、-CH(OAc)CH3、-CN、-CH2CN、-CH2X(XはBr、Cl又はIである)及びメトキシランからなる群から選択される、請求項22に記載の方法。
【請求項２４】
R1〜R4のそれぞれが-OH及び-OC(O)C1〜C10アルキルからなる群から独立に選択される、請求項22に記載の方法。
【請求項２５】
R1〜R4のそれぞれが-OH及び-OAcからなる群から独立に選択される、請求項24に記載の方法。
【請求項２６】
R5が-C≡CH及び-C≡CCH3からなる群から選択される、請求項22に記載の方法。
【請求項２７】
R5が-C(O)OCH3である、請求項22に記載の方法。
【請求項２８】
R5が-CN及び-CH2CNからなる群から選択される、請求項22に記載の方法。
【請求項２９】
R5が-CH2CNである、請求項22に記載の方法。
【請求項３０】
R5が-CH2Xであり、XがBr、Cl又はIである、請求項22に記載の方法。
【請求項３１】
R5が-CH2Xであり、XがBr又はIである、請求項30に記載の方法。
【請求項３２】
R5が-CH2X(XはBrである)である、請求項31に記載の方法。
【請求項３３】
R5が-メトキシランである、請求項22に記載の方法。
【請求項３４】
R5が-CH(OAc)CH3である、請求項22に記載の方法。
【請求項３５】
R5が-C≡CHであり、R1〜R4が-OAcである、請求項22に記載の方法。
【請求項３６】
有効量のフコース類似体を含む、低いコアフコシル化を有する抗体又は抗体誘導体の産生のための哺乳類細胞培地であって、
前記フコース類似体が以下の式(I)又は(II)の一つ
【化３】
或いはその生物学的に許容される塩又は溶媒和物からなる群から選択され、式(I)又は(II)のそれぞれは、アルファ若しくはベータアノマー又は対応するアルドース形であってよく、
R1〜R4のそれぞれは、-OH、-OC(O)H、-OC(O)C1〜C10アルキル、-OC(O)C2〜C10アルケニル、-OC(O)C2〜C10アルキニル、-OC(O)アリール、-OC(O)複素環、-OC(O)C1〜C10アルキレン(アリール)、-OC(O)C2〜C10アルキレン(アリール)、-OC(O)C2〜C10アルキニル(アリール)、-OC(O)C1〜C10アルキレン複素環、-OC(O)C2〜C10アルケニレン(複素環)、-OC(O)C2〜C10アルキニル複素環、-OCH2OC(O)アルキル、-OCH2OC(O)Oアルキル、-OCH2OC(O)アリール、-OCH2OC(O)Oアリール、-OC(O)CH2O(CH2CH2O)nCH3、-OC(O)CH2CH2O(CH2CH2O)nCH3、-O-tri-C1〜C3シリル及び-OC1〜C10アルキルからなる群から独立に選択され、各nは、0〜5から独立に選択される整数であり、
R5は、-C≡CH、-C≡CCH3、-CH2C≡CH、-C(O)OCH3、-CH(OAc)CH3、-CN、-CH2CN、-CH2X(XはBr、Cl又はIである)及びメトキシランからなる群から選択される、上記哺乳類細胞培地。
【請求項３７】
R5が-C≡CHであり、R1〜R4が-OAcである、請求項36に記載の培地。
【請求項３８】
添加動物タンパク質を含まない、請求項36に記載の培地。
【請求項３９】
血清を含まない、請求項36に記載の培地。
【請求項４０】
添加フコースを含まない、請求項36に記載の培地。
【請求項４１】
粉末である、請求項36に記載の培地。
【請求項４２】
液体である、請求項36に記載の培地。
【請求項４３】
R1〜R4のそれぞれが-OH及び-OC(O)C1〜C10アルキルからなる群から独立に選択される、請求項36に記載の培地。
【請求項４４】
R1〜R4のそれぞれが-OH及び-OAcからなる群から独立に選択される、請求項36に記載の培地。
【請求項４５】
R5が-C≡CH及び-C≡CCH3からなる群から選択される、請求項36に記載の培地。
【請求項４６】
R5が-C(O)OCH3である、請求項36に記載の培地。
【請求項４７】
R5が-CN及び-CH2CNからなる群から選択される、請求項36に記載の培地。
【請求項４８】
R5が-CH2CNである、請求項36に記載の培地。
【請求項４９】
R5が-CH2Xであり、XがBr、Cl又はIである、請求項36に記載の培地。
【請求項５０】
R5が-CH2Xであり、XがBr又はIである、請求項49に記載の培地。
【請求項５１】
R5が-CH2Xであり、XがBrである、請求項50に記載の培地。
【請求項５２】
R5が-メトキシランである、請求項36に記載の培地。
【請求項５３】
R5が-CH(OAc)CH3である、請求項36に記載の培地。
【請求項５４】
R5が-C≡CHであり、R1〜R4が-OAcである、請求項36に記載の培地。
【請求項５５】
以下の式(I)又は(II)の一つを有するフコース類似体
【化４】
或いはその生物学的に許容される塩又は溶媒和物[ここで、
式(I)又は(II)のそれぞれは、アルファ若しくはベータアノマー又は対応するアルドース形であってよく、
R1〜R4のそれぞれは、-OH、-OC(O)H、-OC(O)C1〜C10アルキル、-OC(O)アリール、-OC(O)複素環、-OC(O)C1〜C10アルキレンアリール、-OC(O)C1〜C10アルキレン複素環、-OCH2OC(O)アルキル、-OCH2OC(O)Oアルキル、-OCH2OC(O)アリール、-OCH2OC(O)Oアリール、-OC(O)CH2O(CH2CH2O)nCH3及び-OC(O)CH2CH2O(CH2CH2O)nCH3からなる群から独立に選択され、各nは、0〜5から独立に選択される整数であり、
R5は、-C≡CH、-C≡CCH3、-CH2C≡CH、-C(O)OCH3、-CH(OAc)CH3、-CN、-CH2CN、-CH2X(XはBr、Cl又はIである)及び-メトキシランからなる群から選択され、
ただし、R1〜R4のいずれかが-OH又は-OAcである場合、R5は-C≡CHでない]。
【請求項５６】
R1〜R4のそれぞれが-OH及び-OC(O)C1〜C10アルキルからなる群から独立に選択される、請求項55に記載のフコース類似体。
【請求項５７】
R1〜R4のそれぞれが-OH及び-OAcからなる群から独立に選択される、請求項55に記載のフコース類似体。
【請求項５８】
R5が-C≡CH及び-C≡CCH3からなる群から選択される、請求項55に記載のフコース類似体。
【請求項５９】
R5が-C(O)OCH3である、請求項55に記載のフコース類似体。
【請求項６０】
R5が-CN及び-CH2CNからなる群から選択される、請求項55に記載のフコース類似体。
【請求項６１】
R5が-CH2CNである、請求項55に記載のフコース類似体。
【請求項６２】
R5が-CH2Xであり、XがBr、Cl又はIである、請求項55に記載のフコース類似体。
【請求項６３】
R5が-CH2Xであり、XがBr又はIである、請求項55に記載のフコース類似体。
【請求項６４】
R5が-CH2Xであり、XがBrである、請求項55に記載のフコース類似体。
【請求項６５】
R5がメトキシランである、請求項55に記載のフコース類似体。
【請求項６６】
R5が-CH(OAc)CH3である、請求項55に記載のフコース類似体。
【請求項６７】
低いコアフコシル化を有する修飾抗体又は抗体誘導体を製造する方法であって、
糖鎖の還元末端のN-アセチルグルコサミンを介してFcドメインに結合した少なくとも一つの複合N-グリコシド結合糖鎖を有するFcドメインを有する抗体又は抗体誘導体を発現する宿主細胞を有効量のフコース類似体を含む培地中で適切な成長条件下で培養する段階、及び
前記抗体又は抗体誘導体を細胞から分離する段階を含み、
前記フコース類似体が以下の式(III)又は(IV)の一つ
【化５】
或いはその生物学的に許容される塩又は溶媒和物からなる群から選択され、式(III)又は(IV)のそれぞれは、アルファ若しくはベータアノマー又は対応するアルドース形であってよく、
R1〜R4のそれぞれは、フルオロ、クロロ、-OH、-OC(O)H、-OC(O)C1〜C10アルキル、-OC(O)C2〜C10アルケニル、-OC(O)C2〜C10アルキニル、-OC(O)アリール、-OC(O)複素環、-OC(O)C1〜C10アルキレン(アリール)、-OC(O)C2〜C10アルキレン(アリール)、-OC(O)C2〜C10アルキニル(アリール)、-OC(O)C1〜C10アルキレン複素環、-OC(O)C2〜C10アルケニレン(複素環)、-OC(O)C2〜C10アルキニル複素環、-OCH2OC(O)アルキル、-OCH2OC(O)Oアルキル、-OCH2OC(O)アリール、-OCH2OC(O)Oアリール、-OC(O)CH2O(CH2CH2O)nCH3、-OC(O)CH2CH2O(CH2CH2O)nCH3、-O-tri-C1〜C3アルキルシリル及び-OC1〜C10アルキルからなる群から独立に選択され、各nは、0〜5から独立に選択される整数であり、
R2a及びR3aのそれぞれは、H、F及びClからなる群から独立に選択され、
R5は、-CH3、-CHF2、-CH=C=CH2、-C≡CH、-C≡CCH3、-CH2C≡CH、-C(O)OCH3、-CH(OAc)CH3、-CN、-CH2CN、-CH2X(XはBr、Cl又はIである)及びメトキシランからなる群から選択され、
R5が-CH=C=CH2又は-CHF2以外である場合、R1、R2、R3、R2a及びR3aの少なくとも一つは、フルオロ又はクロロであり、
前記抗体又は抗体誘導体が前記フコース類似体の不存在下で培養した宿主細胞からの抗体又は抗体誘導体と比較して低いコアフコシル化を有する、上記方法。
【請求項６８】
R1がFである、請求項67に記載の方法。
【請求項６９】
R2がFである、請求項67に記載の方法。
【請求項７０】
R3がFである、請求項67に記載の方法。
【請求項７１】
R2及びR2aがそれぞれFである、請求項67に記載の方法。
【請求項７２】
R1及びR2がそれぞれFである、請求項67に記載の方法。
【請求項７３】
以下の式(III)又は(IV)からなる群から選択される式を有する化合物
【化６】
或いはその生物学的に許容される塩又は溶媒和物[ここで、
式(III)又は(IV)のそれぞれは、アルファ若しくはベータアノマー又は対応するアルドース形であってよく、
R1〜R4のそれぞれは、フルオロ、クロロ、-OH、-OC(O)H、-OC(O)C1〜C10アルキル、-OC(O)C2〜C10アルケニル、-OC(O)C2〜C10アルキニル、-OC(O)アリール、-OC(O)複素環、-OC(O)C1〜C10アルキレン(アリール)、-OC(O)C2〜C10アルキレン(アリール)、-OC(O)C2〜C10アルキニル(アリール)、-OC(O)C1〜C10アルキレン複素環、-OC(O)C2〜C10アルケニレン(複素環)、-OC(O)C2〜C10アルキニル複素環、-OCH2OC(O)アルキル、-OCH2OC(O)Oアルキル、-OCH2OC(O)アリール、-OCH2OC(O)Oアリール、-OC(O)CH2O(CH2CH2O)nCH3、-OC(O)CH2CH2O(CH2CH2O)nCH3、-O-tri-C1〜C3アルキルシリル及び-OC1〜C10アルキルからなる群から独立に選択され、各nは、0〜5から独立に選択される整数であり、
R2a及びR3aのそれぞれは、H、F及びClからなる群から独立に選択され、
R5は、-CH3、-CHF2、-CH=C=CH2、-C≡CH、-C≡CCH3、-CH2C≡CH、-C(O)OCH3、-CH(OAc)CH3、-CN、-CH2CN、-CH2X(XはBr、Cl又はIである)及びメトキシランからなる群から選択され、
R5が-CH=C=CH2又は-CHF2以外である場合、R1、R2、R3、R2a及びR3aの少なくとも一つは、フルオロ又はクロロである]。
【請求項７４】
R1がFである、請求項73に記載の化合物。
【請求項７５】
R2がFである、請求項73に記載の化合物。
【請求項７６】
R3がFである、請求項73に記載の化合物。
【請求項７７】
R1がFであり、R2がFである、請求項73に記載の化合物。
【請求項７８】
R2及びR2aがそれぞれFである、請求項73に記載の化合物。
【請求項７９】
R1、R3及びR4が-OH及び-OAcからなる群からそれぞれ独立に選択され、R2がFであり、R5が-CH3である、請求項73に記載の化合物。
【請求項８０】
R1、R3及びR4が-OH及び-OAcからなる群からそれぞれ独立に選択され、R2がFであり、R2a及びR3aがそれぞれHであり、R5が-CH3である、請求項73に記載の化合物。
【請求項８１】
有効量のフコース類似体を含む、低いコアフコシル化を有する抗体又は抗体誘導体の産生のための哺乳類細胞培地であって、
前記フコース類似体が以下の式(III)又は(IV)の一つ
【化７】
或いはその生物学的に許容される塩又は溶媒和物からなる群から選択され、式(III)又は(IV)のそれぞれは、アルファ若しくはベータアノマー又は対応するアルドース形であってよく、
R1〜R4のそれぞれは、フルオロ、クロロ、-OH、-OC(O)H、-OC(O)C1〜C10アルキル、-OC(O)C2〜C10アルケニル、-OC(O)C2〜C10アルキニル、-OC(O)アリール、-OC(O)複素環、-OC(O)C1〜C10アルキレン(アリール)、-OC(O)C2〜C10アルキレン(アリール)、-OC(O)C2〜C10アルキニル(アリール)、-OC(O)C1〜C10アルキレン複素環、-OC(O)C2〜C10アルケニレン(複素環)、-OC(O)C2〜C10アルキニル複素環、-OCH2OC(O)アルキル、-OCH2OC(O)Oアルキル、-OCH2OC(O)アリール、-OCH2OC(O)Oアリール、-OC(O)CH2O(CH2CH2O)nCH3、-OC(O)CH2CH2O(CH2CH2O)nCH3、-O-tri-C1〜C3アルキルシリル及び-OC1〜C10アルキルからなる群から独立に選択され、各nは、0〜5から独立に選択される整数であり、
R2a及びR3aのそれぞれは、H、F及びClからなる群から独立に選択され、
R5は、-CH3、-CHF2、-CH=C=CH2、-C≡CH、-C≡CCH3、-CH2C≡CH、-C(O)OCH3、-CH(OAc)CH3、-CN、-CH2CN、-CH2X(XはBr、Cl又はIである)及びメトキシランからなる群から選択され、
R5が-CH=C=CH2又は-CHF2以外である場合、R1、R2、R3、R2a及びR3aの少なくとも一つは、フルオロ又はクロロである、上記哺乳類細胞培地。
【請求項８２】
(i)添加動物タンパク質を含まず、
(ii)血清を含まず、
(iii)添加フコースを含まず、
(iv)粉末又は液体である、
請求項81に記載の培地。
【請求項８３】
R1、R2、R3、R2a及びR3aの少なくとも一つがフルオロ又はクロロである、請求項81に記載の培地。
【請求項８４】
R1、R2、R3、R2a及びR3aの二つがフルオロ又はクロロである、請求項81に記載の培地。
【請求項８５】
低いコアフコシル化を有する修飾抗体又は抗体誘導体を製造する方法であって、
糖鎖の還元末端のN-アセチルグルコサミンを介してFcドメインに結合した少なくとも一つの複合N-グリコシド結合糖鎖を有するFcドメインを有する抗体又は抗体誘導体を発現する宿主細胞を有効量のフコース類似体を含む培地中で適切な成長条件下で培養する段階、及び
前記抗体又は抗体誘導体を細胞から分離する段階を含み、
前記フコース類似体が以下の式(V)又は(VI)の一つ
【化８】
或いはその生物学的に許容される塩又は溶媒和物からなる群から選択され、式(V)又は(VI)のそれぞれは、アルファ若しくはベータアノマー又は対応するアルドース形であってよく、
R1、R2、R2a、R3、R3a及びR4のそれぞれは、-OH、-OC(O)H、-OC(O)C1〜C10アルキル、-OC(O)C2〜C10アルケニル、-OC(O)C2〜C10アルキニル、-OC(O)アリール、-OC(O)複素環、-OC(O)C1〜C10アルキレン(アリール)、-OC(O)C2〜C10アルキレン(アリール)、-OC(O)C2〜C10アルキニル(アリール)、-OC(O)C1〜C10アルキレン複素環、-OC(O)C2〜C10アルケニレン(複素環)、-OC(O)C2〜C10アルキニル複素環、-OCH2OC(O)アルキル、-OCH2OC(O)Oアルキル、-OCH2OC(O)アリール、-OCH2OC(O)Oアリール、-OC(O)CH2O(CH2CH2O)nCH3、-OC(O)CH2CH2O(CH2CH2O)nCH3、-O-tri-C1〜C3アルキルシリル、-OC1〜C10アルキル及び小電子求引基からなる群から独立に選択され、各nは、0〜5から独立に選択される整数であり、
R5は、-CH3、-CH2X、非置換又はハロゲンで置換された-CH(X')-C1〜C4アルキル、非置換又はハロゲンで置換された-CH(X')-C2〜C4アルケン、非置換又はハロゲンで置換された-CH(X')-C2〜C4アルキン、-CH=C(R10)(R11)、-C(CH3)=C(R12)(R13)、-C(R14)=C=C(R15)(R16)、非置換又はメチル若しくはハロゲンで置換された-C3炭素環、非置換又はメチル若しくはハロゲンで置換された-CH(X')-C3炭素環、非置換又はメチル若しくはハロゲンで置換されたC3複素環、非置換又はメチル若しくはハロゲンで置換された-CH(X')-C3複素環、-CH2N3、-CH2CH2N3及びベンジルオキシメチルからなる群から選択されるメンバーか、或いはR5は、小電子求引基であり、
R10は、水素或いは非置換又はハロゲンで置換されたC1〜C3アルキルであり、
R11は、非置換又はハロゲンで置換されたC1〜C3アルキルであり、
R12は、水素、ハロゲン或いは非置換又はハロゲンで置換されたC1〜C3アルキルであり、
R13は、水素或いは非置換又はハロゲンで置換されたC1〜C3アルキルであり、
R14は、水素又はメチルであり、
R15及びR16は、水素、メチル及びハロゲンから独立に選択され、
Xは、ハロゲンであり、
X'は、ハロゲン又は水素であり、
さらに、R1、R2、R2a、R3及びR3aのそれぞれが場合によって水素であり、R1、R2、R2a、R3及びR3aのうち隣接炭素原子上の二つが場合によって結合して、前記隣接炭素原子間の二重結合を形成しており、
ただし、(i)R2及びR2aが両方とも水素である、(ii)R3及びR3aが両方とも水素である、(iii)R1が水素である、(iv)二重結合が前記隣接炭素原子間に存在する、又は(v)R5がベンジルオキシメチルである場合を除き、R1、R2、R2a、R3、R3a、R4及びR5の少なくとも一つは、小電子求引基であり、或いはR5は、ハロゲン、不飽和部位、炭素環、複素環又はアジドを含み、
前記抗体又は抗体誘導体が前記フコース類似体の不存在下で培養した宿主細胞からの抗体又は抗体誘導体と比較して低いコアフコシル化を有する、上記方法。
【請求項８６】
R2及びR2aがそれぞれ水素である、請求項85に記載の方法。
【請求項８７】
R5が-CH3、-CH2CH3、-CH2C≡CH、-CH=CHCH3、-シクロプロピル、-オキシラン、メチルで置換された-オキシラン、-CH2F、-CH2Cl、-CH2Br、-CH2I、-CH=C=CH2、-CH2N3及び-CH2CH2N3からなる群から選択される、請求項85に記載の方法。
【請求項８８】
前記小電子求引基がフルオロ、クロロ、ブロモ、-CHF2、-CH=C=CH2、-C≡CH、-C≡CCH3、-CH2C≡CH、-CO2H、-C(O)OC1〜C4アルキル、-CH(OAc)CH3、-CN、-CH2CN、-CH2X(XはBr、Cl又はIである)及びメトキシランからなる群から選択される、請求項85に記載の方法。
【請求項８９】
R1、R2、R2a、R3、R3a及びR4の少なくとも二つが小電子求引基である、請求項85に記載の方法。
【請求項９０】
前記フコース類似体が表1、2及び3の化合物から選択される、請求項85に記載の方法。
【請求項９１】
有効量のフコース類似体を含み、前記フコース類似体が請求項85の次の式(V)又は(VI)の一つからなる群から選択され、前記有効量が低いコアフコシル化を有する抗体又は抗体誘導体を産生するのに十分な量である、低いコアフコシル化を有する抗体又は抗体誘導体の産生のための哺乳類細胞培地。
【請求項９２】
前記小電子求引基がフルオロ、クロロ、ブロモ、-CHF2、-CH=C=CH2、-C≡CH、-C≡CCH3、-CH2C≡CH、-CO2H、-C(O)OC1〜C4アルキル、-CH(OAc)CH3、-CN、-CH2CN、-CH2X(XはBr、Cl又はIである)、スルホン酸、スルホン酸エステル、スルホンアミド、-SO2-C1〜C4アルキル、ホスホン酸、ホスホン酸エステル、ホスフィン酸、ホスフィン酸エステル及びメトキシランからなる群から選択される、請求項91に記載の哺乳類細胞培地。
【請求項９３】
R1、R2、R2a、R3、R3a、R4及びR5の少なくとも二つが独立に選択される小電子求引基である、請求項91に記載の哺乳類細胞培地。
【請求項９４】
前記フコース類似体が表1、2及び3の化合物から選択される、請求項91に記載の哺乳類細胞培地。
【請求項９５】
化合物6、7、9、10、22、24、26、54、56〜58、61〜62、65及び66並びに2-フルオロ-2-デオキシフコース以外の、上記の請求項に記載の式I、II、III、IV、V又はVIのいずれかを有する化合物。
【図１Ａ】
【図１Ｂ】
【図１Ｃ】
【図２】
【図３Ａ】
【図３Ｂ】
【図４Ａ】
【図４Ｂ】
【図４Ｃ】
【図４Ｄ】
【図５Ａ】
【図５Ｂ】
【図６】
【図１Ｂ】
【図１Ｃ】
【図２】
【図３Ａ】
【図３Ｂ】
【図４Ａ】
【図４Ｂ】
【図４Ｃ】
【図４Ｄ】
【図５Ａ】
【図５Ｂ】
【図６】
【公表番号】特表２０１１−５１９５６７（Ｐ２０１１−５１９５６７Ａ）
【公表日】平成２３年７月１４日（２０１１．７．１４）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１１−５０７６９８（Ｐ２０１１−５０７６９８）
【出願日】平成２１年５月１日（２００９．５．１）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００９／０４２６１０
【国際公開番号】ＷＯ２００９／１３５１８１
【国際公開日】平成２１年１１月５日（２００９．１１．５）
【出願人】（５０３１８８７５９）シアトル ジェネティクス，インコーポレーテッド (11)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２３年７月１４日（２０１１．７．１４）
【国際特許分類】
【出願日】平成２１年５月１日（２００９．５．１）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００９／０４２６１０
【国際公開番号】ＷＯ２００９／１３５１８１
【国際公開日】平成２１年１１月５日（２００９．１１．５）
【出願人】（５０３１８８７５９）シアトル ジェネティクス，インコーポレーテッド (11)
【Ｆターム（参考）】
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