免疫抑制剤及びプロトンポンプ阻害剤が併用投与された臓器移植患者における薬物相互作用及び血中免疫抑制剤濃度変動の予測
【課題】臓器移植患者における免疫抑制剤及びプロトンポンプ阻害剤（ＰＰＩ）の薬物相互作用及び血中免疫抑制剤濃度変動の予測。
【解決手段】臓器移植患者及び臓器提供者の双方の生物学的サンプルにおけるヒトチトクロームＰ４５０ ３Ａ５及び２Ｃ１９の遺伝子多型を測定し、それによって、（１）臓器移植患者及び臓器提供者の該ヒトチトクロームＰ４５０ ３Ａ５及び２Ｃ１９の遺伝子多型がともに変異型である場合、該患者において血中免疫抑制剤濃度が最大許容レベルを超えて副作用をもたらすことを示し、かつ該副作用を抑制するか回避するような種類のＰＰＩが選択される、並びに／或いは、（２）臓器移植患者又は臓器提供者の該ヒトチトクロームＰ４５０ ３Ａ５及び２Ｃ１９の遺伝子多型の少なくとも１つが野生型である場合、該患者において血中免疫抑制剤濃度が最大許容レベル以下であって副作用をもたらさないことを示し、かつ任意の種類のＰＰＩが選択される、ことを含む方法。
【解決手段】臓器移植患者及び臓器提供者の双方の生物学的サンプルにおけるヒトチトクロームＰ４５０ ３Ａ５及び２Ｃ１９の遺伝子多型を測定し、それによって、（１）臓器移植患者及び臓器提供者の該ヒトチトクロームＰ４５０ ３Ａ５及び２Ｃ１９の遺伝子多型がともに変異型である場合、該患者において血中免疫抑制剤濃度が最大許容レベルを超えて副作用をもたらすことを示し、かつ該副作用を抑制するか回避するような種類のＰＰＩが選択される、並びに／或いは、（２）臓器移植患者又は臓器提供者の該ヒトチトクロームＰ４５０ ３Ａ５及び２Ｃ１９の遺伝子多型の少なくとも１つが野生型である場合、該患者において血中免疫抑制剤濃度が最大許容レベル以下であって副作用をもたらさないことを示し、かつ任意の種類のＰＰＩが選択される、ことを含む方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、臓器移植患者に移植後に投与される免疫抑制剤及びプロトンポンプ阻害剤（以下、「ＰＰＩ」と称する）の薬物相互作用及び血中免疫抑制剤濃度変動を予測し、かつ、効能及び副作用に関して該患者に適する種類のＰＰＩを選択するための方法に関する。より具体的には、前記予測は、ヒトチトクロームＰ４５０ ３Ａ５及び２Ｃ１９の遺伝子多型の測定に基づく。
【０００２】
本発明はまた、上記方法で遺伝子多型を測定するためのプライマーキットに関する。
【背景技術】
【０００３】
臓器移植の際、移植患者に対し、免疫抑制剤（例えばタクロリムスなど）と共に、外科的ストレスでおこる胃出血や消化器潰瘍を抑制するためのＰＰＩを同時に投与する。
【０００４】
免疫抑制剤は、血中トラフ濃度（血中濃度／投与用量）の有効治療域が狭く、個体間又は個体内変動が大きいことが知られている（非特許文献１）。この変動は、代謝酵素の遺伝子型による影響が示唆されており、例えばＣＹＰ３Ａ５＊１／＊１型（野生型）の肝臓を移植された場合、生体肝移植（ＬＤＬＴ）患者のタクロリムスの血中濃度／投与用量（Ｃ／Ｄ）比が減少すること（非特許文献２）、腸のＣＹＰ３Ａ５がタクロリムスの薬物動態に重要であること（非特許文献３）が報告されている。
【０００５】
また、ＭＤＲ１のｍＲＮＡ発現レベルがタクロリムスのＣ／Ｄと相関すること（非特許文献４）、ＣＹＰ３Ａ５変異型の心臓移植患者で、ＭＤＲ１が３種の一塩基多型（ＳＮＰ）の変異型である場合、野生型に比べてタクロリムス濃度が増加すること（非特許文献５）などが知られている。
【０００６】
さらにまた、腎移植患者において、ＣＹＰ２Ｃ１９、ＣＹＰ３Ａ５及びＭＤＲ１と関連するタクロリムスの薬物動態に対するラベプラゾール及びランソプラゾールの影響が開示され、ＣＹＰ３Ａ５＊３／＊３を有するＣＹＰ２Ｃ１９ＰＭ腎移植患者におけるタクロリムスとラベプラゾール又はランソプラゾールとの間に有意な相互作用があることを結論づけている（非特許文献６）。
【０００７】
ＰＰＩには、ＣＹＰ２Ｃ１９とＣＹＰ３Ａ４により代謝されるものがある（非特許文献７及び８））。ＣＹＰ２Ｃ１９遺伝子に変異があると、ＰＰＩは、ＣＹＰ３Ａ４のみによって代謝されるため、同じくＣＹＰ３Ａ４を代謝経路として含むタクロリムスとの間の競合が増加する。これにより、ＣＹＰ３Ａ４によるタクロリムス代謝が潜在的に抑制され、それによりタクロリムスの血中濃度が上昇することが知られている（非特許文献９〜１２）。
【０００８】
【非特許文献１】ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｊｓｓｘ．ｏｒｇ／ｊｐ／ｎｅｎｋａｉ／ｎｅｎｋａｉ２１／ｉｗａｓａｋｉ．ｐｄｆ（第２１回日本薬物動態学会年会 北川賞受賞講演、２００６年１１月３０日、東京）
【非特許文献２】Ｇｏｔｏ， Ｍ．ら， Ｐｈａｒｍａｃｏｇｅｎｅｔｉｃｓ ２００４；１４：４７１−８
【非特許文献３】Ｕｅｓｕｇｉ， Ｍ．ら， Ｐｈａｒｍａｃｏｇｅｎｅｔ Ｇｅｎｏｍｉｃｓ ２００６；１６：１１９−２７
【非特許文献４】Ｍａｓｕｄａ， Ｓ．ら， Ｃｌｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｔｈｅｒ． ２００６；７９：９０−１０２
【非特許文献５】Ｗａｎｇ， Ｊ．ら， Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ． ２００６；１５：２３５−２４０
【非特許文献６】Ｍｉｕｒａ， Ｍら， Ｂｉｏｐｈａｒｍ． Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｐｏｓ． ２００７； ２８：１６７−１７５
【非特許文献７】Ａｎｄｅｒｓｓｏｎ， Ｔ．ら， Ｂｒ Ｊ Ｃｌｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ １９９３；３６：５２１−３０
【非特許文献８】Ｐｅａｒｃｅ， ＲＥ．ら， Ｊ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｅｘｐ Ｔｈｅｒ １９９６；２７７：８０５−１６
【非特許文献９】Ｉｔａｇａｋｉ， Ｆ．ら Ｊ ｐｈａｒｍ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ ２００４；５６：１０５５−９
【非特許文献１０】Ｈｏｍｍａ， Ｍ．ら， Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ２００２；７３：３０３−４
【非特許文献１１】Ｉｔａｇａｋｉ， Ｆ．ら， Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ Ｐｒｏｃ ２００２；３４：２７７７−８
【非特許文献１２】Ｔａｋａｈａｓｈｉ， Ｋ．ら， Ａｎｎ Ｐｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒ ２００４；３８：７９１−４
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
しかし、上記の知見にも拘らず、ＣＹＰ２Ｃ１９変異型の肝臓を移植された患者において、ＰＰＩがタクロリムスなどの免疫抑制剤の薬物動態にどのような影響を及ぼすかについては知られていなかった。また、免疫抑制剤、特にタクロリムスは、血中トラフ濃度の有効治療域が狭く、個体間又は個体内変動が大きいことが知られており、従って個人に応じた適切な投与量を決定することが難しいという問題があった。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明者らは、今回、肝臓移植などの臓器移植患者の手術後の免疫抑制剤の薬物動態変動を理解するためには、臓器受容者と臓器提供者の双方のＣＹＰ３Ａ５及びＣＹＰ２Ｃ１９の遺伝子多型を知ることが重要であることを見出した。
【００１１】
すなわち、本発明は、以下の特徴を有する。
本発明は、臓器移植患者に移植後に投与される免疫抑制剤及びプロトンポンプ阻害剤（ＰＰＩ）の薬物相互作用及び血中免疫抑制剤濃度変動を予測し、かつ、効能及び副作用に関して該患者に適する種類のＰＰＩを選択するための方法であって、該方法が、臓器移植患者及び臓器提供者の双方の生物学的サンプルにおけるヒトチトクロームＰ４５０ ３Ａ５及び２Ｃ１９の遺伝子多型を測定し、それによって、
（１） 臓器移植患者及び臓器提供者の該ヒトチトクロームＰ４５０ ３Ａ５及び２Ｃ１９の遺伝子多型がともに変異型である場合、該患者において血中免疫抑制剤濃度が最大許容レベルを超えて副作用をもたらすことを示し、かつ、該副作用を抑制するか回避するような種類のＰＰＩが選択される、並びに／或いは、
（２） 臓器移植患者又は臓器提供者の該ヒトチトクロームＰ４５０ ３Ａ５及び２Ｃ１９の遺伝子多型の少なくとも１つが野生型である場合、該患者において血中免疫抑制剤濃度が最大許容レベル以下であって副作用をもたらさないことを示し、かつ、任意の種類のＰＰＩが選択される、
ことを含む、上記方法を提供する。
【００１２】
本発明の実施形態において、変異型であるヒトチトクロームＰ４５０ ３Ａ５の遺伝子多型が、ＣＹＰ３Ａ５＊３である。
【００１３】
本発明の別の実施形態において、遺伝子多型がＣＹＰ３Ａ５＊３である臓器移植患者又は臓器提供者が、ＣＹＰ３Ａ５＊３／＊３である。
【００１４】
本発明の別の実施形態において、変異型であるヒトチトクロームＰ４５０ ２Ｃ１９の遺伝子多型が、ＣＹＰ２Ｃ１９＊２又はＣＹＰ２Ｃ１９＊３である。
【００１５】
本発明の別の実施形態において、遺伝子多型がＣＹＰ２Ｃ１９＊２又はＣＹＰ２Ｃ１９＊３である臓器移植患者又は臓器提供者が、ＣＹＰ２Ｃ１９＊２／＊３又はＣＹＰ２Ｃ１９＊２／＊２又はＣＹＰ２Ｃ１９＊３／＊３である。
【００１６】
本発明の別の実施形態において、移植臓器が肝臓である。
本発明の別の実施形態において、免疫抑制剤がタクロリムスである。
本発明の別の実施形態において、ＰＰＩがランソプラゾール、ラベプラゾール又はオメプラゾール、或いはそれらの組合せである。
【００１７】
本発明の別の実施形態において、前記（１）における副作用を抑制するか回避するような種類のＰＰＩが、ラベプラゾールである。
本発明の別の実施形態において、前記（２）における任意の種類のＰＰＩが、ランソプラゾール、ラベプラゾール、オメプラゾール、及びそれらの組合せからなる群から選択される。
【００１８】
本発明の別の実施形態において、遺伝子多型の測定を制限断片長多型（ＲＦＬＰ）法で行うことを含む。
本発明の別の実施形態において、ＲＦＬＰ法が制限断片のＰＣＲ増幅をさらに含む。
【００１９】
本発明の別の実施形態において、ＰＣＲ増幅が、配列番号１、３、５、７、９及び１２のオリゴヌクレオチドからなる群から選択されるオリゴヌクレオチドと、配列番号２、４、６、８、１０、１１及び１３のオリゴヌクレオチドからなる群から選択されるオリゴヌクレオチドとの組合せからなるプライマーを用いて行われる。
【００２０】
本発明はさらに、本発明の上記の方法で使用するための、かつヒトチトクロームＰ４５０ ３Ａ５及び２Ｃ１９の遺伝子多型を測定するためのプライマーキットであって、該プライマーが、配列番号１、３、５、７、９及び１２のオリゴヌクレオチドのセットと、配列番号２、４、６、８、１０、１１及び１３のオリゴヌクレオチドのセットとを含むことを特徴とする上記キットを提供する。
【発明の効果】
【００２１】
本発明により、タクロリムスなどの免疫抑制剤の薬物動態をより精度高く予想することを可能にし、かつ、免疫抑制剤の的確な投与量を決定すること及び最大許容レベルを超える免疫抑制剤の副作用を抑制又は回避する種類のＰＰＩを選択することが可能になる。本発明の方法は、タクロリムスだけでなく、ＣＹＰ２Ｃ１９、ＣＹＰ３Ａ５及びＭＤＲ１からなる代謝酵素の何れかの基質となる任意の免疫抑制剤に適用することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２２】
本発明は、臓器移植患者（以下「レシピエント」とも称する）及び臓器提供者（以下「ドナー」とも称する）の双方におけるヒトチトクロームＰ４５０ ３Ａ５＊３（以下、「ＣＹＰ３Ａ５＊３」とも称する）及び／又はヒトチトクロームＰ４５０ ２Ｃ１９＊２、２Ｃ１９＊３（以下、それぞれ「ＣＹＰ２Ｃ１９＊２」、「ＣＹＰ２Ｃ１９＊３」とも称する）遺伝子多型と、臓器移植における拒絶反応を抑制するための免疫抑制剤及びＰＰＩ投与時の患者血中免疫抑制剤濃度変動及び／又は薬物相互作用との間に相関性があるという知見に基づく。
【００２３】
より具体的には、臓器移植患者及び臓器提供者の双方の生物学的サンプルにおけるヒトチトクロームＰ４５０ ３Ａ５及び２Ｃ１９の遺伝子多型を測定することによって、
（１）臓器移植患者及び臓器提供者の該ヒトチトクロームＰ４５０ ３Ａ５及び２Ｃ１９の遺伝子多型（以下、それぞれ「ＣＹＰ３Ａ５」、「ＣＹＰ２Ｃ１９」とも称する）がともに変異型である場合、該患者において血中免疫抑制剤濃度が最大許容レベルを超えて副作用をもたらすことを示し、かつ、該副作用を抑制するか回避するような種類のＰＰＩが選択される、並びに／或いは、
（２）臓器移植患者又は臓器提供者の該ヒトチトクロームＰ４５０ ３Ａ５及び２Ｃ１９の遺伝子多型の少なくとも１つが野生型である場合、該患者において血中免疫抑制剤濃度が最大許容レベル以下であって副作用をもたらさないことを示し、かつ、任意の種類のＰＰＩが選択される。
【００２４】
ＣＹＰ３Ａ５の遺伝子型は、高活性型（＊１／＊１）、中等度活性型（＊１／＊３など）及び低活性型（＊３／＊３など）に分けられるが、このうち、本発明方法において測定対象として好ましい遺伝子型は、ＣＹＰ３Ａ５＊３であり、より好ましい遺伝子型はＣＹＰ３Ａ５＊３／＊３である。また、ＣＹＰ２Ｃ１９の遺伝子型は、高活性型（＊１／＊１）、中等度活性型（＊１／＊２、＊１／＊３など）及び低活性型（＊２／＊２、＊２／＊３、＊３／＊３など）に分けられるが、このうち、本発明方法において測定対象として好ましい遺伝子型は、ＣＹＰ２Ｃ１９＊２、ＣＹＰ２Ｃ１９＊３であり、より好ましい遺伝子型はＣＹＰ２Ｃ１９＊２／＊２、ＣＹＰ２Ｃ１９＊２／＊３及びＣＹＰ２Ｃ１９＊３／＊３である。ここで、高活性型は野生型（又は正常型）であり、一方、中等度活性型及び低活性型は、変異型であり、タンパク質の機能が低下又は欠損している。
【００２５】
上記（１）において、臓器移植患者及び臓器提供者双方のＣＹＰ３Ａ５及びＣＹＰ２Ｃ１９の遺伝子型がともに変異型、好ましくは上記各低活性型、である場合、該患者において血中免疫抑制剤濃度が最大許容レベルを超えて副作用をもたらすことを示す。
【００２６】
また、上記（２）において、臓器移植患者又は臓器提供者のＣＹＰ３Ａ５及びＣＹＰ２Ｃ１９の遺伝子型の少なくとも１つが野生型、すなわち上記各高活性型、である場合、該患者において血中免疫抑制剤濃度が最大許容レベル以下であって副作用をもたらさないことを示す。
【００２７】
本発明において、上記「副作用をもたらす」又は「副作用をもたらさない」とは、好ましくは１００％の確率で副作用をもたらす場合又は副作用をもたらさない場合を意味する。しかし、例えば患者の年齢、体質、容態などの要因のために常に上記事象の確率が１００％になるとは限らないかもしれない。このような場合を考慮して、上記事象の確率が８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上であっても本発明の範囲内に包含されるものとする。
【００２８】
本明細書中で使用する、血中免疫抑制剤濃度に関する「最大許容レベル」なる用語は、この血中レベルを超すと免疫抑制剤による副作用が生じるような許容レベルの上限値を意味する。
【００２９】
本発明の方法は、いずれの臓器移植にも適用可能であり、該臓器移植には、例えば肝臓、腎臓、心臓、肺などの臓器の移植が含まれる。特に好ましい臓器移植は、肝移植である。
【００３０】
本発明において、免疫抑制剤は、臓器移植に使用可能なものであれば特に制限はなく、例えばタクロリムス（（財）日本医薬情報センター編集・発行 ＪＡＰＩＣ 医療用医薬品集２００７ １３２２−１３２９）、シロリムス（ラパマイシンともいう）、エベロリムス（サーティカンともいう）（Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２００１，４４，２０２７−２０３４ Ｂｅｒｎｄ Ｋｕｈｎ）などが含まれる。
【００３１】
タクロリムスは、Ｔ細胞、特にヘルパーＴ細胞によるＴＮＦ−αやインターロイキン−２、−４及び−５などのサイトカイン産生や、肥満細胞によるヒスタミン遊離の直接抑制などの薬理作用が認められている。また、タクロリムスは、薬物排出トランスポーターであるＰ-糖タンパク質の基質であり、Ｐ糖タンパク質はＭＤＲ１遺伝子によってコードされており小腸及び腎臓で高発現している（Ｓａｅｋｉ， Ｔら， Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ． １９９３； ２６８：６０７７−６０８０）。
【００３２】
シロリムスは、ｍａｍｍａｌｉａｎ ｔａｒｇｅｔ ｏｆ ｒａｐａｍｙｃｉｎ（ｍＴＯＲ）の阻害を介して、抗原やサイトカインに反応して生ずるＴリンパ球の増殖・活性化を抑制する免疫抑制薬であり、海外では腎臓、肝臓、心臓などの移植後の免疫抑制療法に広く用いられている。血中濃度の上昇に伴って血球減少、高脂血症、口内炎などの副作用の発生頻度が上昇すること、体内動態の個人差が大きいことから、血中濃度モニタリングが推奨されている。また、シロリムスは、薬物代謝酵素ＣＹＰ３Ａや、薬物排出トランスポーターＰ−糖タンパク質の基質として知られている。
【００３３】
エベロリムスは、ＦＫＢＰ−１２（ＦＫ−５０６ ｂｉｎｄｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎ−１２）と複合体を形成し、細胞内情報伝達分子であるｍＴＯＲ（ｍａｍｍａｒｉａｎ ｔａｒｇｅｔ ｏｆ ｒａｐａｍｙｓｉｎ）に結合して細胞増殖シグナルを阻害することにより細胞増殖抑制作用を示すと考えられており、インターロイキン−２によるＴ細胞の増殖を抑制することで免疫抑制作用を示す。
【００３４】
これらの免疫抑制剤は、構造が類似しておりその薬物動態は似通っている。上記の免疫抑制剤は、何れもチトクロームＰ４５０ ３Ａ４及び／又はチトクロームＰ４５０ ３Ａ５によって代謝され、その後、ＭＤＲ１の基質になる。
【００３５】
ＣＹＰ３Ａ４、ＣＹＰ３Ａ５及びＭＤＲ１には遺伝子多型が存在するが、これによって酵素の活性が変化し、免疫抑制剤の動態に影響を及ぼす。従って、これらの遺伝子多型を調べることによって、免疫抑制剤の患者血中免疫抑制剤濃度変動を予測して、副作用又は薬理作用不足を防ぐために有用な情報を得ることができる。ＣＹＰ３Ａ４の遺伝子多型は、日本人での発現頻度が非常に低い（０〜５％）ことから、変異型の発現頻度が高い、ＣＹＰ３Ａ５及びＭＤＲ１の遺伝子多型が重要であることが示唆される。ＣＹＰ３Ａ５の遺伝子多型には＊１〜＊１１まで同定されているが、本発明では、特に日本人で頻度の高いＣＹＰ３Ａ５＊３という変異型を検出することが望ましい。ＣＹＰ３Ａ５＊３は、遺伝子のスプライシング異常を引き起こし、正常なＣＹＰ３Ａ５タンパク質が合成されないことにより、薬剤代謝能が失われる。
【００３６】
免疫抑制剤は、一般に他の薬物と併用されることが多いが、臓器移植の場合には、外科的ストレスでおこる胃出血や消化器潰瘍を予防するためのプロトンポンプ阻害薬（ＰＰＩ）と併用される。
【００３７】
プロトンポンプ阻害薬としては、オメプラゾール（静脈注射）（（財）日本医薬情報センター編集・発行 ＪＡＰＩＣ 医療用医薬品集２００７ ５９１−５９５）、ランソプラゾール（経口）（（財）日本医薬情報センター編集・発行 ＪＡＰＩＣ 医療用医薬品集２００７ ２５４０−２５４４）、ラベプラゾール（経口）（（財）日本医薬情報センター編集・発行 ＪＡＰＩＣ 医療用医薬品集２００７ ２５２１−２５２３）などが知られている。オメプラゾールは、主にＣＹＰ２Ｃ１９によって代謝され、ランソプラゾールは、ＣＹＰ２Ｃ１９、ＣＹＰ３Ａ４両者により代謝され、ラベプラゾールは、ＣＹＰ３Ａ４のほか非酵素的な代謝が行われる。
【００３８】
ＣＹＰ２Ｃ１９遺伝子に変異があると、ＰＰＩの代謝経路が限定されて、ＣＹＰ３Ａ（ＣＹＰ３Ａ４、ＣＹＰ３Ａ５）のみによって代謝されるようになると、同じくＣＹＰ３Ａを代謝経路として含む免疫抑制剤との間の競合が増加する。これにより、ＣＹＰ３Ａによる免疫抑制剤代謝が潜在的に抑制され、それによりタクロリムスの血中濃度が上昇すると考えられる。ＣＹＰ２Ｃ１９では、＊１〜＊２１まで報告されているが、出現頻度と影響度からエキソン５に存在する＊２変異型（Ｇ６８１Ａ）、エキソン４に存在する＊３変異型（Ｇ６３６Ａ）を検出することが望ましい。ＣＹＰ２Ｃ１９＊２及びＣＹＰ２Ｃ１９＊３はそれぞれ、スプライシング異常、ストップコドン出現により正常なＣＹＰ２Ｃ１９タンパク質が合成されないことにより薬剤代謝能が失われる。
【００３９】
ＣＹＰ２Ｃ１９遺伝子に変異があると、ＣＹＰ３Ａ４による免疫抑制剤代謝が潜在的に抑制され、それにより免疫抑制剤の血中濃度が上昇する。従って、臓器移植における免疫抑制剤及びＰＰＩ投与時の免疫抑制剤の血中濃度、及び薬物相互作用を予測するためには、ＣＹＰ３Ａ５とＣＹＰ２Ｃ１９の遺伝子多型を同時に測定することが望ましい。また、これら酵素の遺伝子多型は、臓器移植患者及び臓器提供者の双方について測定することが望ましい。このことは、特に肝臓移植の場合に重要であるが、その理由は、肝臓は薬物代謝担当臓器であるからである。腎移植又は心移植の場合には、臓器移植患者の遺伝子多型（又は一塩基多型ＳＮＰ）のみを検出することも可能であるが、しかし、臓器移植患者及び臓器提供者の双方について上記酵素の遺伝子多型を測定することがより望ましい。
【００４０】
本発明の方法において、臓器移植患者及び臓器提供者からの生物学的サンプルにおける遺伝子多型の検出は、公知のＳＮＰ検出方法のいずれも使用することができる。多型の検出は、例えば、ＲＦＬＰ（ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎ ｆｒａｇｍｅｎｔ ｌｅｎｇｔｈ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ；制限断片長多型）法、ＰＣＲ−ＳＳＣＰ（ｓｉｎｇｌｅ ｓｔｒａｎｄ ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ）法、ＡＳＯ（ａｌｌｅｌｅ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ）ハイブリダイゼーション、ダイレクトシークエンス法、ＡＲＭＳ法、変性剤濃度勾配ゲル電気泳動法、ＲＮａｓｅＡ切断法、化学切断法、ＤＯＬ法、ＴａｑＭａｎ ＰＣＲ法、インベーダー法、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ（ｍａｔｒｉｘ ａｓｓｉｓｔｅｄ ｌａｓｅｒ ｄｅｓｏｒｐｔｉｏｎ−ｔｉｍｅ ｏｆ ｆｌｉｇｈｔ）／ＭＳ法、ＴＤＩ法、モレキュラー・ビーコン法、ダイナミック・アレルスペシフィック・ハイブリダイゼーション法、パドロック・プローブ法、ＵＣＡＮ法、ＤＮＡチップ又はＤＮＡマイクロアレイを用いた核酸ハイブリダイゼーション法、ＥＣＡ法などの公知の方法により実施することができる（国際公開第ＷＯ０３／０２３０６３号；中村祐輔編、ＳＮＰ遺伝子多型の戦略、２０００年、中山書店、など）。
【００４１】
例えばＲＦＬＰ法は、遺伝子多型の存在により、制限酵素で処理して得られるＤＮＡ断片の長さに違いが生じることを利用し、一塩基多型を検出する方法である。この方法では、ＤＮＡを特定の制限酵素、たとえばＣＹＰ３Ａ５＊３の多型を検出するには制限酵素ＳｓｐＩを用いて処理し、アガロースゲルでの電気泳動パターンからその一塩基多型を解析する（Ｒｏｎ Ｈ．Ｎ．ｖａｎ ＳＣＨＡＩＫら， Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２００２；４８：１０ １６６８−１６７１）。
【００４２】
本発明方法において、ＲＦＬＰ法は、制限断片のＰＣＲ増幅をさらに含むことができる。このＰＣＲ−ＲＦＬＰ法の具体的な実施手順は、後述の実施例に記載されているので、それを参照することができる。また、ＰＣＲ増幅で使用可能なＣＹＰ３Ａ５及びＣＹＰ２Ｃ１９遺伝子多型を測定するためのＰＣＲプライマーの例は、配列番号１、３、５、７、９及び１２のオリゴヌクレオチドからなる群から選択されるオリゴヌクレオチドと、配列番号２、４、６、８、１０、１１及び１３のオリゴヌクレオチドからなる群から選択されるオリゴヌクレオチドとの組合せからなるプライマーである。より具体的には、ＣＹＰ３Ａ５遺伝子多型を測定するためのＰＣＲプライマーの例は、配列番号１のオリゴヌクレオチドと、配列番号２のオリゴヌクレオチドとの組合せであり、また、ＣＹＰ２Ｃ１９遺伝子多型を測定するためのＰＣＲプライマーの例は、配列番号３，４のオリゴヌクレオチドと、配列番号５，６のオリゴヌクレオチドとの組合せである。
【００４３】
また、ＴａｑＭａｎ ＰＣＲ法は、蛍光標識したアレル特異的オリゴ（ＴａｑＭａｎプローブ）とＴａｑ ＤＮＡポリメラーゼによるＰＣＲ反応を利用した方法である。ＴａｑＭａｎプローブは、約２０塩基長であり、その５’末端がＦＡＭ、ＶＩＣなどの蛍光レポーター色素で標識され、３’末端がクエンチャーによって標識される。
【００４４】
或いは、古典的な検出方法としては、例えば、被験者の細胞等から抽出したゲノムＤＮＡを試料とし、前後の配列で示される塩基を含む約１５〜約５００塩基の違続した塩基配列を含有してなる核酸をプローブとして用い、例えばＷａｌｌａｃｅら（Ｐｒｏｃ． Ｎａｔ１． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ，８０，２７８−２８２（１９８３））の方法に従って、ストリンジェンシーを正確にコントロールしながらハイブリダイゼーションを行い、プローブと完全相補的な配列のみを検出する方法や、上記核酸と上記核酸において多型部位の塩基が他の塩基に置換された核酸のいずれか一方を標識し、他方を未標識としたミックスプローブを用い、変性温度から徐々に反応温度を低下させながらハイブリダイゼーションを行い、一方のプローブと完全相補的な配列を先にハイブリダイズさせ、ミスマッチを有するプローブとの交差反応を防ぐ方法などが挙げられる。ここで標識剤としては、例えば、放射性同位元素、酵素、蛍光物質、発光物質などが用いられる。放射性同位元素としては、例えば、１２５Ｉ、１３１Ｉ、３Ｈ、１４Ｃなどが用いられる。上記酵素としては、安定で比活性の大きなものが好ましく、例えば、β−ガラクトシダーゼ、β−グルコシダーゼ、アルカリフォスファターゼ、パーオキシダーゼ、リンゴ酸脱水素酵素などが用いられる。蛍光物質としては、例えば、フルオレスカミン、フルオレッセンイソチオシアネートなどが用いられる。発光物質としては、例えば、ルミノール、ルミノール誘導体、ルシフェリン、ルシゲニンなどが用いられる。
【００４５】
遺伝子多型を測定するための生物学的サンプルは、例えば細胞、組織、体液（例えば血液、リンパ液など）などを含み、血液が、操作上の簡便さから好ましい。これらのサンプルからゲノムＤＮＡを抽出し、上記の方法により多型を測定することができる。ゲノムＤＮＡの抽出は、溶解バッファ（ＥＤＴＡ，ＮａＣｌ，ＳＤＳ含有Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ，ｐＨ７．５）により細胞を溶解した後、例えばフェノール／クロロホルムによりＤＮＡの抽出を行うことを含む。ゲノムＤＮＡ抽出のために、種々のキットが市販されているのでそれらを使用することができる。
【００４６】
本発明によれば、臓器移植患者及び臓器提供者双方のＣＹＰ３Ａ５及びＣＹＰ２Ｃ１９の遺伝子型がともに変異型である場合、該患者において血中免疫抑制剤濃度が最大許容レベルを超えて副作用をもたらすと判定されるが、このような場合には、該副作用を抑制するか又は回避するような種類のＰＰＩを選択することによって、的確な予後の管理が可能となる。このような目的に合ったＰＰＩとしては、例えばラベプラゾールが挙げられる。一方、臓器移植患者又は臓器提供者のＣＹＰ３Ａ５及びＣＹＰ２Ｃ１９の遺伝子型の少なくとも１つが野生型である場合、該患者において血中免疫抑制剤濃度が最大許容レベル以下であって副作用をもたらさないと判定され、このような場合には、オメプラゾール、ランソプラゾール、ラベプラゾールなどの任意のＰＰＩの選択及び投与が可能になる。
【００４７】
本発明の好適実施形態によれば、本発明の方法において、移植臓器が肝臓であり、免疫抑制剤がタクロリムス（「ＦＫ５０６」ともいう）であり、ＰＰＩがオメプラゾール、ランソプラゾール又はラベプラゾール、或いはそれらの組合せである。タクロリムスの有効な免疫抑制の血中レベル範囲は５〜１５ｎｇ／ｍｌであり、また最大許容レベルは１５ｎｇ／ｍｌであり、このレベルを超えると腎機能障害、高血糖、中枢毒性、感染症などの障害が起こり易くなる。
【００４８】
また、免疫抑制剤としてシロリスム及びＰＰＩとしてランソプラゾールを肝移植患者（例えば、ＣＹＰ２Ｃ１９＊２／＊３、ＣＹＰ３Ａ５＊３／＊３）に使用したときにも、臓器提供者が例えばＣＹＰ２Ｃ１９＊２／＊２、ＣＹＰ３Ａ５＊３／＊３（いずれも変異型）である場合、シロリムスの最大許容レベルを超えることを見出している。シロリムスの最大許容レベルは、タクロリムスとほぼ同じである。
【００４９】
臓器移植患者において、免疫抑制剤の許容レベル範囲の管理は、例えば免疫抑制剤の血中トラフ濃度、すなわち血中濃度対投与用量（Ｃ／Ｄ）比、をモニターすることによって行うことができる。また、移植臓器の種類に対応した臓器の働きを調べるための生化学的臨床検査を行うことができる。例えば、移植臓器が肝臓であれば、総ビリルビン（Ｔ−Ｂｉｌ）、ＡＬＴ、ＡＳＴ、γ−ＧＴＰなどを同時に検査することによって、移植された肝臓の機能を知る手がかりになる。
【００５０】
本発明はさらに、本発明の上記方法で使用するための、かつＣＹＰ３Ａ５及びＣＹＰ２Ｃ１９の遺伝子多型を測定するためのプライマーキットであって、該プライマーが、配列番号１、３、５、７、９及び１２のオリゴヌクレオチドのセットと、配列番号２、４、６、８、１０、１１及び１３のオリゴヌクレオチドのセットとを含むことを特徴とする上記キットを提供する。
【００５１】
プライマーは、個々に別々の容器に入れてもよいし、或いは、測定すべき遺伝子多型ごとに各セットから選択された２種のプライマーを組み合わせて１つの容器にいれてもよい。
【００５２】
本発明のキットには、ＰＣＲ増幅に必要なバッファ、ｄＮＴＰミックス、耐熱性ＤＮＡポリメラーゼ酵素などの試薬を、使用説明書と一緒に包含させることができる。
【実施例】
【００５３】
本発明は、以下の実施例によってさらに具体的に説明するが、本発明の範囲は、これらの実施例に限定されないものとする。
＜実施例１＞
（１）：ゲノムＤＮＡの抽出
肝移植患者（レシピエント１；５１歳男性）と肝臓提供者（ドナー１；５５歳男性）の血液からＷｉｚａｒｄ（Ｒ） Ｇｅｎｏｍｉｃ ＤＮＡ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｋｉｔ（プロメガ株式会社）を用いて、ゲノムＤＮＡを抽出した。得られたゲノムＤＮＡは、２０ｎｇ／μｌになるように純水で希釈し、使用するまで−３０℃で凍結保存した。
【００５４】
（２）：特定すべき一塩基多型を含む領域のＰＣＲによる増幅
各遺伝子の変異の検出のために、変異部位のみ特異的に増幅し、かつ制限酵素サイトを与えるプライマーを使用した。プライマーはオリゴヌクレオチドを人工的に合成し、脱塩カラムを用いて精製した上で使用した。オリゴヌクレオチドは、ＤＮＡ自動合成装置を用いて化学的に合成することができる。この合成には一般にホスホアミダイト法が使用され、この方法によって約１００塩基までの一本鎖ＤＮＡを自動合成することができる。ＤＮＡ自動合成装置は、例えばＰｏｌｙｇｅｎ社、ＡＢＩ社、Ａｐｐｌｉｅｄ ＢｉｏＳｙｓｔｅｍｓ社などから市販されている。
【００５５】
ＰＣＲにはＴａＫａＲａ ＥｘＴａｑ（タカラバイオ株式会社）を用い、メーカー指定の条件で３５サイクルの増幅反応を実施した。もっとも、このＰＣＲは単に遺伝子の特定領域を増幅することが目的であるため、ＰＣＲの方法や酵素の種類に特段の制限はない。ここで、ＰＣＲには、常法に従い、２５μＭフォワードプライマー（配列番号１又は３又は５）０．４μｌ、２５μＭリバースプライマー（配列番号２又は４又は６）０．４μｌ、１０×ＰＣＲバッファ２μｌ、ｄＮＴＰミックス１．６μｌ、ＥｘＴａｑ ＤＮＡポリメラーゼ０．１μｌ、手順（１）で調製したゲノムＤＮＡ溶液２０ｎｇ／μｌ ２μｌを、純水で２０μｌにメスアップしたものを用いた。また、ＰＣＲは、９５℃・３分の後、９４℃・３０秒／５５℃・３０秒／７２℃・３０秒を３５サイクル、その後７２℃・５分反応し、反応後は４℃で保存した。
【００５６】
（３）：ＰＣＲ産物の制限酵素処理による多型判定（ＲＦＬＰ）
手順（２）で得られたＰＣＲ産物を下記に示す、それぞれ適切な制限酵素で処理し、断片長を確認することにより、多型を検出した。制限酵素処理は、手順（２）のＰＣＲ産物８μｌ、１０×バッファ１．５μｌ、酵素０．５μｌを用いた。それぞれＣＹＰ３Ａ５＊３はＳｓｐ１と３７℃で一晩、ＣＹＰ２Ｃ１９＊２はＳｍａＩと２５℃で一晩、２Ｃ１９＊３はＢａｍＨＩと３７℃で一晩反応させた。
【００５７】
反応産物全量を３．５％アガロースゲル電気泳動し、エチジウムブロマイドで染色して写真を撮影した。
【００５８】
電気泳動後、写真撮影して、断片長を確認した。レシピエント１、ドナー１とも同じパターンを示していた（図４）。ＣＹＰ３Ａ５は、２９３ｂｐのＰＣＲ産物（１レーン）が１７５ｂｐと１２５ｂｐに切断されている（２レーン）ことから、ＣＹＰ３Ａ５＊３／＊３変異型であることが判明した。ＣＹＰ２Ｃ１９Ｅｘｏｎ５は、１６９ｂｐのＰＣＲ産物（３レーン）が１６９ｂｐと１２０ｂｐに切断され（４レーン）、ＣＹＰ２Ｃ１９Ｅｘｏｎ４は、１３０ｂｐのＰＣＲ産物（５レーン）が１３０ｂｐと１０２ｂｐに切断されている（６レーン）ことから、ＣＹＰ２Ｃ１９は＊２と＊３変異をヘテロに持つ、ＣＹＰ２Ｃ１９＊２／＊３変異型であることが判明した。
【００５９】
（４）：レシピエントの術後タクロリムス血中濃度測定
レシピエント１にタクロリムス（商品名プログラフ、藤沢薬品工業株式会社）及びＰＰＩ（オメプラゾール（商品名オメプラール、アストラゼネカ株式会社）、ランソプラゾール（商品名タケプロン、武田薬品工業株式会社））を投与し、タクロリムスの血中濃度を全自動イムノアッセイシステムＩＭｘ（登録商標）システム（アボットジャパン株式会社）にて、モニターした。投与日、投与量及び投与薬剤は、図１（患者１変異型／オメプラゾール＋ランソプラゾール）に示す通りである。
【００６０】
図１から、タクロリムスの濃度／投与量（Ｃ／Ｄ）比が、９日目以降では２倍に増加していることがわかった。
【００６１】
＜実施例２＞
（１）：ゲノムＤＮＡの抽出
肝移植患者（レシピエント２；６０歳男性）と肝臓提供者（ドナー２；５４歳女性）の血液からＷｉｚａｒｄ（Ｒ） Ｇｅｎｏｍｉｃ ＤＮＡ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｋｉｔ（プロメガ株式会社）を用いて、ゲノムＤＮＡを抽出した。得られたゲノムＤＮＡは、２０ｎｇ／μｌになるように純水で希釈し、使用するまで−３０℃で凍結保存した。
（２）：特定すべき一塩基多型を含む領域のＰＣＲによる増幅
レシピエント２とドナー２のゲノムＤＮＡを用いたこと以外は実施例１と同様である。
（３）：ＰＣＲ産物の制限酵素処理による多型判定（ＲＦＬＰ）
実施例１と同様の操作を行った。
【００６２】
電気泳動後、写真撮影して、断片長を確認した（図５）。レシピエント２のＣＹＰ３Ａ５は、２９３ｂｐのＰＣＲ産物（１レーン）が１７５ｂｐと１２５ｂｐにバンドがある（２レーン）ことから、ＣＹＰ３Ａ５＊３／＊３変異型であることが判明した。ドナー２のＣＹＰ３Ａ５は、２９３ｂｐのＰＣＲ産物（１レーン）が１５０ｂｐと１２５ｂｐにバンドがある（２レーン）ことから、ＣＹＰ３Ａ５＊１／＊１野生型であることが判明した。レシピエント２とドナー２のＣＹＰ２Ｃ１９Ｅｘｏｎ５は、同じパターンを示しており、１６９ｂｐのＰＣＲ産物（３レーン）が１２０ｂｐにのみバンドが検出され（４レーン）、またＣＹＰ２Ｃ１９Ｅｘｏｎ４もレシピエント２、ドナー２とも同じパターンを示し、１３０ｂｐのＰＣＲ産物（５レーン）が１０２ｂｐにのみバンドが検出された（６レーン）ことから、レシピエント２、ドナー２ともＣＹＰ２Ｃ１９は＊１／＊１野生型であることが判明した。
【００６３】
（４）：レシピエントの術後タクロリムス血中濃度測定
レシピエント２にタクロリムス及びＰＰＩ（オメプラゾール及びランソプラゾール）を投与し、タクロリムスの血中濃度を全自動イムノアッセイシステムＩＭｘ（登録商標）システム（アボットジャパン株式会社）にて、モニターした。投与日、投与量及び投与薬剤は、図２（患者２野生型／オメプラゾール＋ランソプラゾール）に示す通りである。
【００６４】
図２から、タクロリムスの濃度／投与量（Ｃ／Ｄ）比は、ランソプラゾール投与下でも変化がなかった。
【００６５】
＜実施例３＞
（１）：ゲノムＤＮＡの抽出
肝移植患者（レシピエント３；４１歳女性）と肝臓提供者（ドナー３；６３歳女性）の血液からＷｉｚａｒｄ（Ｒ） Ｇｅｎｏｍｉｃ ＤＮＡ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｋｉｔ（プロメガ株式会社）を用いて、ゲノムＤＮＡを抽出した。得られたゲノムＤＮＡは、２０ｎｇ／μｌになるように純水で希釈し、使用するまで−３０℃で凍結保存した。
（２）：特定すべき一塩基多型を含む領域のＰＣＲによる増幅
レシピエント３とドナー３のゲノムＤＮＡを用いたこと以外は実施例１と同様である。
（３）：ＰＣＲ産物の制限酵素処理による多型判定（ＲＦＬＰ）
実施例１と同様の操作を行った。
【００６６】
電気泳動後、写真撮影して、断片長を確認した（図６）。レシピエント３とドナー３のＣＹＰ３Ａ５は、同じパターンを示しており、２９３ｂｐのＰＣＲ産物（１レーン）が１７５ｂｐと１２５ｂｐにバンドがある（２レーン）ことから、両者ともＣＹＰ３Ａ５＊３／＊３変異型であることが判明した。レシピエント３のＣＹＰ２Ｃ１９Ｅｘｏｎ５は、１６９ｂｐのＰＣＲ産物（３レーン）が制限酵素処理後も１６９ｂｐにのみバンドが検出され（４レーン）、またＣＹＰ２Ｃ１９Ｅｘｏｎ４は、１３０ｂｐのＰＣＲ産物（５レーン）が制限酵素処理後には１０２ｂｐにのみバンドが検出された（６レーン）ことから、レシピエント３はＣＹＰ２Ｃ１９＊２／＊２変異型であることが判明した。
【００６７】
ドナー３のＣＹＰ２Ｃ１９Ｅｘｏｎ５は、１６９ｂｐのＰＣＲ産物（３レーン）が１６９ｂｐと１２０ｂｐに切断され（４レーン）、ＣＹＰ２Ｃ１９Ｅｘｏｎ４は、１３０ｂｐのＰＣＲ産物（５レーン）が１３０ｂｐと１０２ｂｐに切断されている（６レーン）ことから、ドナー３のＣＹＰ２Ｃ１９は＊２と＊３変異をヘテロに持つ、ＣＹＰ２Ｃ１９＊２／＊３変異型であることが判明した。
【００６８】
（４）：レシピエントの術後タクロリムス血中濃度測定
レシピエント３にタクロリムス及びＰＰＩ（オメプラゾール及びラベプラゾール）を投与し、タクロリムスの血中濃度を全自動イムノアッセイシステムＩＭｘ（登録商標）システム（アボットジャパン株式会社）にて、モニターした。投与日、投与量及び投与薬剤は、図３（患者３変異型／オメプラゾール＋ラベプラゾール）に示す通りである。
【００６９】
図３から、タクロリムスの濃度／投与量（Ｃ／Ｄ）比は、ラベプラゾール投与下でも変化がなかった。
【００７０】
＜実施例４＞
（１）：ゲノムＤＮＡの抽出
肝移植患者（レシピエント４）と肝臓提供者（ドナー４）の血液からＷｉｚａｒｄ（Ｒ） Ｇｅｎｏｍｉｃ ＤＮＡ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｋｉｔ（プロメガ株式会社）を用いて、ゲノムＤＮＡを抽出した。得られたゲノムＤＮＡは、２０ｎｇ／μｌになるように純水で希釈し、使用するまで−３０℃で凍結保存した。
（２）：特定すべき一塩基多型を含む領域のＰＣＲによる増幅
レシピエント４とドナー４のゲノムＤＮＡを用い、２５μＭフォワードプライマー（配列番号１又は３又は５又は７又は９又は１２）０．４μｌ、２５μＭリバースプライマー（配列番号２又は４又は６又は８又は１０又は１１又は１３）０．４μｌを用いたこと以外は、実施例１と同様に行った。
（３）：ＰＣＲ産物の制限酵素処理による多型判定（ＲＦＬＰ）
実施例１と同様の操作を行った。ここで、ＭＤＲ１のＥｘ１２の多型検出には、ＨａｅＩＩＩ、Ｅｘ２１の多型検出にはＢｓｒＩとＢａｎＩ、Ｅｘ２６の多型検出には、ＭｂｏＩにより処理した。
電気泳動後、写真撮影して、断片長を確認し、多型を判定する。
（４）：レシピエントの術後タクロリムス血中濃度測定
レシピエント４にタクロリムス及びＰＰＩを投与し、タクロリムスの血中濃度を全自動イムノアッセイシステムＩＭｘ（登録商標）システム（アボットジャパン株式会社）にて、モニターする。上記実施例と同様に、タクロリムスの濃度／投与量（Ｃ／Ｄ）比を測定し、ＰＰＩ投与によるタクロリムスの血中濃度変化を解析する。
【産業上の利用可能性】
【００７１】
本発明は、臓器移植後の移植患者において、拒絶反応の抑制を目的として投与される免疫抑制剤の副作用を抑制又は回避するために、かつプロトンポンプ阻害剤の的確な選択を可能にするために医療上有用である。
【図面の簡単な説明】
【００７２】
【図１】この図は、肝移植患者（レシピエント１；ＣＹＰ２Ｃ１９＊２／＊３，ＣＹＰ３Ａ５＊３／＊３）に、タクロリムス（ＰＯ（経口投与））と、オメプラゾール（ＩＶ（静脈内投与）、２０ｍｇ／日）、ランソプラゾール（ＰＯ、３０ｍｇ／日）を投与したときの、タクロリムスの用量、タクロリムスの血中濃度、タクロリムスの濃度／投与量（Ｃ／Ｄ）比、ＡＳＴ、ＡＬＴ及びＴ−Ｂｉｌ（総ビリルビン）の術後の経日変化を示すグラフである。なお、肝臓提供者はＣＹＰ２Ｃ１９＊２／＊３，ＣＹＰ３Ａ５＊３／＊３の遺伝子型をもつ。
【図２】この図は、肝移植患者（レシピエント２; ＣＹＰ２Ｃ１９＊１／＊１，ＣＹＰ３Ａ５＊３／＊３）に、タクロリムス（ＰＯ）と、オメプラゾール（ＰＯ、２０ｍｇ／日）、ランソプラゾール（ＰＯ、３０ｍｇ／日）を投与したときの、タクロリムスの用量、タクロリムスの血中濃度、タクロリムスの濃度／投与量（Ｃ／Ｄ）比、ＡＳＴ、ＡＬＴ及びＴ−Ｂｉｌの術後の経日変化を示すグラフである。なお、肝臓提供者はＣＹＰ２Ｃ１９＊１／＊１，ＣＹＰ３Ａ５＊１／＊１の遺伝子型をもつ。
【図３】この図は、肝移植患者（レシピエント３; ＣＹＰ２Ｃ１９＊２／＊２，ＣＹＰ３Ａ５＊３／＊３）に、タクロリムス（ＰＯ）と、オメプラゾール（ＰＯ、２０ｍｇ／日）、ラベプラゾール（ＰＯ、３０ｍｇ／日）を投与したときの、タクロリムスの用量、タクロリムスの血中濃度、タクロリムスの濃度／投与量（Ｃ／Ｄ）比、ＡＳＴ、ＡＬＴ及びＴ−Ｂｉｌの術後の経日変化を示すグラフである。なお、肝臓提供者はＣＹＰ２Ｃ１９＊２／＊３，ＣＹＰ３Ａ５＊３／＊３の遺伝子型をもつ。
【図４】この図は、レシピエント１及びドナー１のＣＹＰ３Ａ５及びＣＹＰ２Ｃ１９の遺伝子型を示すアガロースゲル電気泳動（エチジウムブロミド染色）図である。
【図５】この図は、レシピエント２及びドナー２のＣＹＰ３Ａ５及びＣＹＰ２Ｃ１９の遺伝子型を示すアガロースゲル電気泳動（エチジウムブロミド染色）図である。
【図６】この図は、レシピエント３及びドナー３のＣＹＰ３Ａ５及びＣＹＰ２Ｃ１９の遺伝子型を示すアガロースゲル電気泳動（エチジウムブロミド染色）図である。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、臓器移植患者に移植後に投与される免疫抑制剤及びプロトンポンプ阻害剤（以下、「ＰＰＩ」と称する）の薬物相互作用及び血中免疫抑制剤濃度変動を予測し、かつ、効能及び副作用に関して該患者に適する種類のＰＰＩを選択するための方法に関する。より具体的には、前記予測は、ヒトチトクロームＰ４５０ ３Ａ５及び２Ｃ１９の遺伝子多型の測定に基づく。
【０００２】
本発明はまた、上記方法で遺伝子多型を測定するためのプライマーキットに関する。
【背景技術】
【０００３】
臓器移植の際、移植患者に対し、免疫抑制剤（例えばタクロリムスなど）と共に、外科的ストレスでおこる胃出血や消化器潰瘍を抑制するためのＰＰＩを同時に投与する。
【０００４】
免疫抑制剤は、血中トラフ濃度（血中濃度／投与用量）の有効治療域が狭く、個体間又は個体内変動が大きいことが知られている（非特許文献１）。この変動は、代謝酵素の遺伝子型による影響が示唆されており、例えばＣＹＰ３Ａ５＊１／＊１型（野生型）の肝臓を移植された場合、生体肝移植（ＬＤＬＴ）患者のタクロリムスの血中濃度／投与用量（Ｃ／Ｄ）比が減少すること（非特許文献２）、腸のＣＹＰ３Ａ５がタクロリムスの薬物動態に重要であること（非特許文献３）が報告されている。
【０００５】
また、ＭＤＲ１のｍＲＮＡ発現レベルがタクロリムスのＣ／Ｄと相関すること（非特許文献４）、ＣＹＰ３Ａ５変異型の心臓移植患者で、ＭＤＲ１が３種の一塩基多型（ＳＮＰ）の変異型である場合、野生型に比べてタクロリムス濃度が増加すること（非特許文献５）などが知られている。
【０００６】
さらにまた、腎移植患者において、ＣＹＰ２Ｃ１９、ＣＹＰ３Ａ５及びＭＤＲ１と関連するタクロリムスの薬物動態に対するラベプラゾール及びランソプラゾールの影響が開示され、ＣＹＰ３Ａ５＊３／＊３を有するＣＹＰ２Ｃ１９ＰＭ腎移植患者におけるタクロリムスとラベプラゾール又はランソプラゾールとの間に有意な相互作用があることを結論づけている（非特許文献６）。
【０００７】
ＰＰＩには、ＣＹＰ２Ｃ１９とＣＹＰ３Ａ４により代謝されるものがある（非特許文献７及び８））。ＣＹＰ２Ｃ１９遺伝子に変異があると、ＰＰＩは、ＣＹＰ３Ａ４のみによって代謝されるため、同じくＣＹＰ３Ａ４を代謝経路として含むタクロリムスとの間の競合が増加する。これにより、ＣＹＰ３Ａ４によるタクロリムス代謝が潜在的に抑制され、それによりタクロリムスの血中濃度が上昇することが知られている（非特許文献９〜１２）。
【０００８】
【非特許文献１】ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｊｓｓｘ．ｏｒｇ／ｊｐ／ｎｅｎｋａｉ／ｎｅｎｋａｉ２１／ｉｗａｓａｋｉ．ｐｄｆ（第２１回日本薬物動態学会年会 北川賞受賞講演、２００６年１１月３０日、東京）
【非特許文献２】Ｇｏｔｏ， Ｍ．ら， Ｐｈａｒｍａｃｏｇｅｎｅｔｉｃｓ ２００４；１４：４７１−８
【非特許文献３】Ｕｅｓｕｇｉ， Ｍ．ら， Ｐｈａｒｍａｃｏｇｅｎｅｔ Ｇｅｎｏｍｉｃｓ ２００６；１６：１１９−２７
【非特許文献４】Ｍａｓｕｄａ， Ｓ．ら， Ｃｌｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｔｈｅｒ． ２００６；７９：９０−１０２
【非特許文献５】Ｗａｎｇ， Ｊ．ら， Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ． ２００６；１５：２３５−２４０
【非特許文献６】Ｍｉｕｒａ， Ｍら， Ｂｉｏｐｈａｒｍ． Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｐｏｓ． ２００７； ２８：１６７−１７５
【非特許文献７】Ａｎｄｅｒｓｓｏｎ， Ｔ．ら， Ｂｒ Ｊ Ｃｌｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ １９９３；３６：５２１−３０
【非特許文献８】Ｐｅａｒｃｅ， ＲＥ．ら， Ｊ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｅｘｐ Ｔｈｅｒ １９９６；２７７：８０５−１６
【非特許文献９】Ｉｔａｇａｋｉ， Ｆ．ら Ｊ ｐｈａｒｍ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ ２００４；５６：１０５５−９
【非特許文献１０】Ｈｏｍｍａ， Ｍ．ら， Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ２００２；７３：３０３−４
【非特許文献１１】Ｉｔａｇａｋｉ， Ｆ．ら， Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ Ｐｒｏｃ ２００２；３４：２７７７−８
【非特許文献１２】Ｔａｋａｈａｓｈｉ， Ｋ．ら， Ａｎｎ Ｐｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒ ２００４；３８：７９１−４
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
しかし、上記の知見にも拘らず、ＣＹＰ２Ｃ１９変異型の肝臓を移植された患者において、ＰＰＩがタクロリムスなどの免疫抑制剤の薬物動態にどのような影響を及ぼすかについては知られていなかった。また、免疫抑制剤、特にタクロリムスは、血中トラフ濃度の有効治療域が狭く、個体間又は個体内変動が大きいことが知られており、従って個人に応じた適切な投与量を決定することが難しいという問題があった。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明者らは、今回、肝臓移植などの臓器移植患者の手術後の免疫抑制剤の薬物動態変動を理解するためには、臓器受容者と臓器提供者の双方のＣＹＰ３Ａ５及びＣＹＰ２Ｃ１９の遺伝子多型を知ることが重要であることを見出した。
【００１１】
すなわち、本発明は、以下の特徴を有する。
本発明は、臓器移植患者に移植後に投与される免疫抑制剤及びプロトンポンプ阻害剤（ＰＰＩ）の薬物相互作用及び血中免疫抑制剤濃度変動を予測し、かつ、効能及び副作用に関して該患者に適する種類のＰＰＩを選択するための方法であって、該方法が、臓器移植患者及び臓器提供者の双方の生物学的サンプルにおけるヒトチトクロームＰ４５０ ３Ａ５及び２Ｃ１９の遺伝子多型を測定し、それによって、
（１） 臓器移植患者及び臓器提供者の該ヒトチトクロームＰ４５０ ３Ａ５及び２Ｃ１９の遺伝子多型がともに変異型である場合、該患者において血中免疫抑制剤濃度が最大許容レベルを超えて副作用をもたらすことを示し、かつ、該副作用を抑制するか回避するような種類のＰＰＩが選択される、並びに／或いは、
（２） 臓器移植患者又は臓器提供者の該ヒトチトクロームＰ４５０ ３Ａ５及び２Ｃ１９の遺伝子多型の少なくとも１つが野生型である場合、該患者において血中免疫抑制剤濃度が最大許容レベル以下であって副作用をもたらさないことを示し、かつ、任意の種類のＰＰＩが選択される、
ことを含む、上記方法を提供する。
【００１２】
本発明の実施形態において、変異型であるヒトチトクロームＰ４５０ ３Ａ５の遺伝子多型が、ＣＹＰ３Ａ５＊３である。
【００１３】
本発明の別の実施形態において、遺伝子多型がＣＹＰ３Ａ５＊３である臓器移植患者又は臓器提供者が、ＣＹＰ３Ａ５＊３／＊３である。
【００１４】
本発明の別の実施形態において、変異型であるヒトチトクロームＰ４５０ ２Ｃ１９の遺伝子多型が、ＣＹＰ２Ｃ１９＊２又はＣＹＰ２Ｃ１９＊３である。
【００１５】
本発明の別の実施形態において、遺伝子多型がＣＹＰ２Ｃ１９＊２又はＣＹＰ２Ｃ１９＊３である臓器移植患者又は臓器提供者が、ＣＹＰ２Ｃ１９＊２／＊３又はＣＹＰ２Ｃ１９＊２／＊２又はＣＹＰ２Ｃ１９＊３／＊３である。
【００１６】
本発明の別の実施形態において、移植臓器が肝臓である。
本発明の別の実施形態において、免疫抑制剤がタクロリムスである。
本発明の別の実施形態において、ＰＰＩがランソプラゾール、ラベプラゾール又はオメプラゾール、或いはそれらの組合せである。
【００１７】
本発明の別の実施形態において、前記（１）における副作用を抑制するか回避するような種類のＰＰＩが、ラベプラゾールである。
本発明の別の実施形態において、前記（２）における任意の種類のＰＰＩが、ランソプラゾール、ラベプラゾール、オメプラゾール、及びそれらの組合せからなる群から選択される。
【００１８】
本発明の別の実施形態において、遺伝子多型の測定を制限断片長多型（ＲＦＬＰ）法で行うことを含む。
本発明の別の実施形態において、ＲＦＬＰ法が制限断片のＰＣＲ増幅をさらに含む。
【００１９】
本発明の別の実施形態において、ＰＣＲ増幅が、配列番号１、３、５、７、９及び１２のオリゴヌクレオチドからなる群から選択されるオリゴヌクレオチドと、配列番号２、４、６、８、１０、１１及び１３のオリゴヌクレオチドからなる群から選択されるオリゴヌクレオチドとの組合せからなるプライマーを用いて行われる。
【００２０】
本発明はさらに、本発明の上記の方法で使用するための、かつヒトチトクロームＰ４５０ ３Ａ５及び２Ｃ１９の遺伝子多型を測定するためのプライマーキットであって、該プライマーが、配列番号１、３、５、７、９及び１２のオリゴヌクレオチドのセットと、配列番号２、４、６、８、１０、１１及び１３のオリゴヌクレオチドのセットとを含むことを特徴とする上記キットを提供する。
【発明の効果】
【００２１】
本発明により、タクロリムスなどの免疫抑制剤の薬物動態をより精度高く予想することを可能にし、かつ、免疫抑制剤の的確な投与量を決定すること及び最大許容レベルを超える免疫抑制剤の副作用を抑制又は回避する種類のＰＰＩを選択することが可能になる。本発明の方法は、タクロリムスだけでなく、ＣＹＰ２Ｃ１９、ＣＹＰ３Ａ５及びＭＤＲ１からなる代謝酵素の何れかの基質となる任意の免疫抑制剤に適用することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２２】
本発明は、臓器移植患者（以下「レシピエント」とも称する）及び臓器提供者（以下「ドナー」とも称する）の双方におけるヒトチトクロームＰ４５０ ３Ａ５＊３（以下、「ＣＹＰ３Ａ５＊３」とも称する）及び／又はヒトチトクロームＰ４５０ ２Ｃ１９＊２、２Ｃ１９＊３（以下、それぞれ「ＣＹＰ２Ｃ１９＊２」、「ＣＹＰ２Ｃ１９＊３」とも称する）遺伝子多型と、臓器移植における拒絶反応を抑制するための免疫抑制剤及びＰＰＩ投与時の患者血中免疫抑制剤濃度変動及び／又は薬物相互作用との間に相関性があるという知見に基づく。
【００２３】
より具体的には、臓器移植患者及び臓器提供者の双方の生物学的サンプルにおけるヒトチトクロームＰ４５０ ３Ａ５及び２Ｃ１９の遺伝子多型を測定することによって、
（１）臓器移植患者及び臓器提供者の該ヒトチトクロームＰ４５０ ３Ａ５及び２Ｃ１９の遺伝子多型（以下、それぞれ「ＣＹＰ３Ａ５」、「ＣＹＰ２Ｃ１９」とも称する）がともに変異型である場合、該患者において血中免疫抑制剤濃度が最大許容レベルを超えて副作用をもたらすことを示し、かつ、該副作用を抑制するか回避するような種類のＰＰＩが選択される、並びに／或いは、
（２）臓器移植患者又は臓器提供者の該ヒトチトクロームＰ４５０ ３Ａ５及び２Ｃ１９の遺伝子多型の少なくとも１つが野生型である場合、該患者において血中免疫抑制剤濃度が最大許容レベル以下であって副作用をもたらさないことを示し、かつ、任意の種類のＰＰＩが選択される。
【００２４】
ＣＹＰ３Ａ５の遺伝子型は、高活性型（＊１／＊１）、中等度活性型（＊１／＊３など）及び低活性型（＊３／＊３など）に分けられるが、このうち、本発明方法において測定対象として好ましい遺伝子型は、ＣＹＰ３Ａ５＊３であり、より好ましい遺伝子型はＣＹＰ３Ａ５＊３／＊３である。また、ＣＹＰ２Ｃ１９の遺伝子型は、高活性型（＊１／＊１）、中等度活性型（＊１／＊２、＊１／＊３など）及び低活性型（＊２／＊２、＊２／＊３、＊３／＊３など）に分けられるが、このうち、本発明方法において測定対象として好ましい遺伝子型は、ＣＹＰ２Ｃ１９＊２、ＣＹＰ２Ｃ１９＊３であり、より好ましい遺伝子型はＣＹＰ２Ｃ１９＊２／＊２、ＣＹＰ２Ｃ１９＊２／＊３及びＣＹＰ２Ｃ１９＊３／＊３である。ここで、高活性型は野生型（又は正常型）であり、一方、中等度活性型及び低活性型は、変異型であり、タンパク質の機能が低下又は欠損している。
【００２５】
上記（１）において、臓器移植患者及び臓器提供者双方のＣＹＰ３Ａ５及びＣＹＰ２Ｃ１９の遺伝子型がともに変異型、好ましくは上記各低活性型、である場合、該患者において血中免疫抑制剤濃度が最大許容レベルを超えて副作用をもたらすことを示す。
【００２６】
また、上記（２）において、臓器移植患者又は臓器提供者のＣＹＰ３Ａ５及びＣＹＰ２Ｃ１９の遺伝子型の少なくとも１つが野生型、すなわち上記各高活性型、である場合、該患者において血中免疫抑制剤濃度が最大許容レベル以下であって副作用をもたらさないことを示す。
【００２７】
本発明において、上記「副作用をもたらす」又は「副作用をもたらさない」とは、好ましくは１００％の確率で副作用をもたらす場合又は副作用をもたらさない場合を意味する。しかし、例えば患者の年齢、体質、容態などの要因のために常に上記事象の確率が１００％になるとは限らないかもしれない。このような場合を考慮して、上記事象の確率が８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上であっても本発明の範囲内に包含されるものとする。
【００２８】
本明細書中で使用する、血中免疫抑制剤濃度に関する「最大許容レベル」なる用語は、この血中レベルを超すと免疫抑制剤による副作用が生じるような許容レベルの上限値を意味する。
【００２９】
本発明の方法は、いずれの臓器移植にも適用可能であり、該臓器移植には、例えば肝臓、腎臓、心臓、肺などの臓器の移植が含まれる。特に好ましい臓器移植は、肝移植である。
【００３０】
本発明において、免疫抑制剤は、臓器移植に使用可能なものであれば特に制限はなく、例えばタクロリムス（（財）日本医薬情報センター編集・発行 ＪＡＰＩＣ 医療用医薬品集２００７ １３２２−１３２９）、シロリムス（ラパマイシンともいう）、エベロリムス（サーティカンともいう）（Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２００１，４４，２０２７−２０３４ Ｂｅｒｎｄ Ｋｕｈｎ）などが含まれる。
【００３１】
タクロリムスは、Ｔ細胞、特にヘルパーＴ細胞によるＴＮＦ−αやインターロイキン−２、−４及び−５などのサイトカイン産生や、肥満細胞によるヒスタミン遊離の直接抑制などの薬理作用が認められている。また、タクロリムスは、薬物排出トランスポーターであるＰ-糖タンパク質の基質であり、Ｐ糖タンパク質はＭＤＲ１遺伝子によってコードされており小腸及び腎臓で高発現している（Ｓａｅｋｉ， Ｔら， Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ． １９９３； ２６８：６０７７−６０８０）。
【００３２】
シロリムスは、ｍａｍｍａｌｉａｎ ｔａｒｇｅｔ ｏｆ ｒａｐａｍｙｃｉｎ（ｍＴＯＲ）の阻害を介して、抗原やサイトカインに反応して生ずるＴリンパ球の増殖・活性化を抑制する免疫抑制薬であり、海外では腎臓、肝臓、心臓などの移植後の免疫抑制療法に広く用いられている。血中濃度の上昇に伴って血球減少、高脂血症、口内炎などの副作用の発生頻度が上昇すること、体内動態の個人差が大きいことから、血中濃度モニタリングが推奨されている。また、シロリムスは、薬物代謝酵素ＣＹＰ３Ａや、薬物排出トランスポーターＰ−糖タンパク質の基質として知られている。
【００３３】
エベロリムスは、ＦＫＢＰ−１２（ＦＫ−５０６ ｂｉｎｄｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎ−１２）と複合体を形成し、細胞内情報伝達分子であるｍＴＯＲ（ｍａｍｍａｒｉａｎ ｔａｒｇｅｔ ｏｆ ｒａｐａｍｙｓｉｎ）に結合して細胞増殖シグナルを阻害することにより細胞増殖抑制作用を示すと考えられており、インターロイキン−２によるＴ細胞の増殖を抑制することで免疫抑制作用を示す。
【００３４】
これらの免疫抑制剤は、構造が類似しておりその薬物動態は似通っている。上記の免疫抑制剤は、何れもチトクロームＰ４５０ ３Ａ４及び／又はチトクロームＰ４５０ ３Ａ５によって代謝され、その後、ＭＤＲ１の基質になる。
【００３５】
ＣＹＰ３Ａ４、ＣＹＰ３Ａ５及びＭＤＲ１には遺伝子多型が存在するが、これによって酵素の活性が変化し、免疫抑制剤の動態に影響を及ぼす。従って、これらの遺伝子多型を調べることによって、免疫抑制剤の患者血中免疫抑制剤濃度変動を予測して、副作用又は薬理作用不足を防ぐために有用な情報を得ることができる。ＣＹＰ３Ａ４の遺伝子多型は、日本人での発現頻度が非常に低い（０〜５％）ことから、変異型の発現頻度が高い、ＣＹＰ３Ａ５及びＭＤＲ１の遺伝子多型が重要であることが示唆される。ＣＹＰ３Ａ５の遺伝子多型には＊１〜＊１１まで同定されているが、本発明では、特に日本人で頻度の高いＣＹＰ３Ａ５＊３という変異型を検出することが望ましい。ＣＹＰ３Ａ５＊３は、遺伝子のスプライシング異常を引き起こし、正常なＣＹＰ３Ａ５タンパク質が合成されないことにより、薬剤代謝能が失われる。
【００３６】
免疫抑制剤は、一般に他の薬物と併用されることが多いが、臓器移植の場合には、外科的ストレスでおこる胃出血や消化器潰瘍を予防するためのプロトンポンプ阻害薬（ＰＰＩ）と併用される。
【００３７】
プロトンポンプ阻害薬としては、オメプラゾール（静脈注射）（（財）日本医薬情報センター編集・発行 ＪＡＰＩＣ 医療用医薬品集２００７ ５９１−５９５）、ランソプラゾール（経口）（（財）日本医薬情報センター編集・発行 ＪＡＰＩＣ 医療用医薬品集２００７ ２５４０−２５４４）、ラベプラゾール（経口）（（財）日本医薬情報センター編集・発行 ＪＡＰＩＣ 医療用医薬品集２００７ ２５２１−２５２３）などが知られている。オメプラゾールは、主にＣＹＰ２Ｃ１９によって代謝され、ランソプラゾールは、ＣＹＰ２Ｃ１９、ＣＹＰ３Ａ４両者により代謝され、ラベプラゾールは、ＣＹＰ３Ａ４のほか非酵素的な代謝が行われる。
【００３８】
ＣＹＰ２Ｃ１９遺伝子に変異があると、ＰＰＩの代謝経路が限定されて、ＣＹＰ３Ａ（ＣＹＰ３Ａ４、ＣＹＰ３Ａ５）のみによって代謝されるようになると、同じくＣＹＰ３Ａを代謝経路として含む免疫抑制剤との間の競合が増加する。これにより、ＣＹＰ３Ａによる免疫抑制剤代謝が潜在的に抑制され、それによりタクロリムスの血中濃度が上昇すると考えられる。ＣＹＰ２Ｃ１９では、＊１〜＊２１まで報告されているが、出現頻度と影響度からエキソン５に存在する＊２変異型（Ｇ６８１Ａ）、エキソン４に存在する＊３変異型（Ｇ６３６Ａ）を検出することが望ましい。ＣＹＰ２Ｃ１９＊２及びＣＹＰ２Ｃ１９＊３はそれぞれ、スプライシング異常、ストップコドン出現により正常なＣＹＰ２Ｃ１９タンパク質が合成されないことにより薬剤代謝能が失われる。
【００３９】
ＣＹＰ２Ｃ１９遺伝子に変異があると、ＣＹＰ３Ａ４による免疫抑制剤代謝が潜在的に抑制され、それにより免疫抑制剤の血中濃度が上昇する。従って、臓器移植における免疫抑制剤及びＰＰＩ投与時の免疫抑制剤の血中濃度、及び薬物相互作用を予測するためには、ＣＹＰ３Ａ５とＣＹＰ２Ｃ１９の遺伝子多型を同時に測定することが望ましい。また、これら酵素の遺伝子多型は、臓器移植患者及び臓器提供者の双方について測定することが望ましい。このことは、特に肝臓移植の場合に重要であるが、その理由は、肝臓は薬物代謝担当臓器であるからである。腎移植又は心移植の場合には、臓器移植患者の遺伝子多型（又は一塩基多型ＳＮＰ）のみを検出することも可能であるが、しかし、臓器移植患者及び臓器提供者の双方について上記酵素の遺伝子多型を測定することがより望ましい。
【００４０】
本発明の方法において、臓器移植患者及び臓器提供者からの生物学的サンプルにおける遺伝子多型の検出は、公知のＳＮＰ検出方法のいずれも使用することができる。多型の検出は、例えば、ＲＦＬＰ（ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎ ｆｒａｇｍｅｎｔ ｌｅｎｇｔｈ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ；制限断片長多型）法、ＰＣＲ−ＳＳＣＰ（ｓｉｎｇｌｅ ｓｔｒａｎｄ ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ）法、ＡＳＯ（ａｌｌｅｌｅ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ）ハイブリダイゼーション、ダイレクトシークエンス法、ＡＲＭＳ法、変性剤濃度勾配ゲル電気泳動法、ＲＮａｓｅＡ切断法、化学切断法、ＤＯＬ法、ＴａｑＭａｎ ＰＣＲ法、インベーダー法、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ（ｍａｔｒｉｘ ａｓｓｉｓｔｅｄ ｌａｓｅｒ ｄｅｓｏｒｐｔｉｏｎ−ｔｉｍｅ ｏｆ ｆｌｉｇｈｔ）／ＭＳ法、ＴＤＩ法、モレキュラー・ビーコン法、ダイナミック・アレルスペシフィック・ハイブリダイゼーション法、パドロック・プローブ法、ＵＣＡＮ法、ＤＮＡチップ又はＤＮＡマイクロアレイを用いた核酸ハイブリダイゼーション法、ＥＣＡ法などの公知の方法により実施することができる（国際公開第ＷＯ０３／０２３０６３号；中村祐輔編、ＳＮＰ遺伝子多型の戦略、２０００年、中山書店、など）。
【００４１】
例えばＲＦＬＰ法は、遺伝子多型の存在により、制限酵素で処理して得られるＤＮＡ断片の長さに違いが生じることを利用し、一塩基多型を検出する方法である。この方法では、ＤＮＡを特定の制限酵素、たとえばＣＹＰ３Ａ５＊３の多型を検出するには制限酵素ＳｓｐＩを用いて処理し、アガロースゲルでの電気泳動パターンからその一塩基多型を解析する（Ｒｏｎ Ｈ．Ｎ．ｖａｎ ＳＣＨＡＩＫら， Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２００２；４８：１０ １６６８−１６７１）。
【００４２】
本発明方法において、ＲＦＬＰ法は、制限断片のＰＣＲ増幅をさらに含むことができる。このＰＣＲ−ＲＦＬＰ法の具体的な実施手順は、後述の実施例に記載されているので、それを参照することができる。また、ＰＣＲ増幅で使用可能なＣＹＰ３Ａ５及びＣＹＰ２Ｃ１９遺伝子多型を測定するためのＰＣＲプライマーの例は、配列番号１、３、５、７、９及び１２のオリゴヌクレオチドからなる群から選択されるオリゴヌクレオチドと、配列番号２、４、６、８、１０、１１及び１３のオリゴヌクレオチドからなる群から選択されるオリゴヌクレオチドとの組合せからなるプライマーである。より具体的には、ＣＹＰ３Ａ５遺伝子多型を測定するためのＰＣＲプライマーの例は、配列番号１のオリゴヌクレオチドと、配列番号２のオリゴヌクレオチドとの組合せであり、また、ＣＹＰ２Ｃ１９遺伝子多型を測定するためのＰＣＲプライマーの例は、配列番号３，４のオリゴヌクレオチドと、配列番号５，６のオリゴヌクレオチドとの組合せである。
【００４３】
また、ＴａｑＭａｎ ＰＣＲ法は、蛍光標識したアレル特異的オリゴ（ＴａｑＭａｎプローブ）とＴａｑ ＤＮＡポリメラーゼによるＰＣＲ反応を利用した方法である。ＴａｑＭａｎプローブは、約２０塩基長であり、その５’末端がＦＡＭ、ＶＩＣなどの蛍光レポーター色素で標識され、３’末端がクエンチャーによって標識される。
【００４４】
或いは、古典的な検出方法としては、例えば、被験者の細胞等から抽出したゲノムＤＮＡを試料とし、前後の配列で示される塩基を含む約１５〜約５００塩基の違続した塩基配列を含有してなる核酸をプローブとして用い、例えばＷａｌｌａｃｅら（Ｐｒｏｃ． Ｎａｔ１． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ，８０，２７８−２８２（１９８３））の方法に従って、ストリンジェンシーを正確にコントロールしながらハイブリダイゼーションを行い、プローブと完全相補的な配列のみを検出する方法や、上記核酸と上記核酸において多型部位の塩基が他の塩基に置換された核酸のいずれか一方を標識し、他方を未標識としたミックスプローブを用い、変性温度から徐々に反応温度を低下させながらハイブリダイゼーションを行い、一方のプローブと完全相補的な配列を先にハイブリダイズさせ、ミスマッチを有するプローブとの交差反応を防ぐ方法などが挙げられる。ここで標識剤としては、例えば、放射性同位元素、酵素、蛍光物質、発光物質などが用いられる。放射性同位元素としては、例えば、１２５Ｉ、１３１Ｉ、３Ｈ、１４Ｃなどが用いられる。上記酵素としては、安定で比活性の大きなものが好ましく、例えば、β−ガラクトシダーゼ、β−グルコシダーゼ、アルカリフォスファターゼ、パーオキシダーゼ、リンゴ酸脱水素酵素などが用いられる。蛍光物質としては、例えば、フルオレスカミン、フルオレッセンイソチオシアネートなどが用いられる。発光物質としては、例えば、ルミノール、ルミノール誘導体、ルシフェリン、ルシゲニンなどが用いられる。
【００４５】
遺伝子多型を測定するための生物学的サンプルは、例えば細胞、組織、体液（例えば血液、リンパ液など）などを含み、血液が、操作上の簡便さから好ましい。これらのサンプルからゲノムＤＮＡを抽出し、上記の方法により多型を測定することができる。ゲノムＤＮＡの抽出は、溶解バッファ（ＥＤＴＡ，ＮａＣｌ，ＳＤＳ含有Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ，ｐＨ７．５）により細胞を溶解した後、例えばフェノール／クロロホルムによりＤＮＡの抽出を行うことを含む。ゲノムＤＮＡ抽出のために、種々のキットが市販されているのでそれらを使用することができる。
【００４６】
本発明によれば、臓器移植患者及び臓器提供者双方のＣＹＰ３Ａ５及びＣＹＰ２Ｃ１９の遺伝子型がともに変異型である場合、該患者において血中免疫抑制剤濃度が最大許容レベルを超えて副作用をもたらすと判定されるが、このような場合には、該副作用を抑制するか又は回避するような種類のＰＰＩを選択することによって、的確な予後の管理が可能となる。このような目的に合ったＰＰＩとしては、例えばラベプラゾールが挙げられる。一方、臓器移植患者又は臓器提供者のＣＹＰ３Ａ５及びＣＹＰ２Ｃ１９の遺伝子型の少なくとも１つが野生型である場合、該患者において血中免疫抑制剤濃度が最大許容レベル以下であって副作用をもたらさないと判定され、このような場合には、オメプラゾール、ランソプラゾール、ラベプラゾールなどの任意のＰＰＩの選択及び投与が可能になる。
【００４７】
本発明の好適実施形態によれば、本発明の方法において、移植臓器が肝臓であり、免疫抑制剤がタクロリムス（「ＦＫ５０６」ともいう）であり、ＰＰＩがオメプラゾール、ランソプラゾール又はラベプラゾール、或いはそれらの組合せである。タクロリムスの有効な免疫抑制の血中レベル範囲は５〜１５ｎｇ／ｍｌであり、また最大許容レベルは１５ｎｇ／ｍｌであり、このレベルを超えると腎機能障害、高血糖、中枢毒性、感染症などの障害が起こり易くなる。
【００４８】
また、免疫抑制剤としてシロリスム及びＰＰＩとしてランソプラゾールを肝移植患者（例えば、ＣＹＰ２Ｃ１９＊２／＊３、ＣＹＰ３Ａ５＊３／＊３）に使用したときにも、臓器提供者が例えばＣＹＰ２Ｃ１９＊２／＊２、ＣＹＰ３Ａ５＊３／＊３（いずれも変異型）である場合、シロリムスの最大許容レベルを超えることを見出している。シロリムスの最大許容レベルは、タクロリムスとほぼ同じである。
【００４９】
臓器移植患者において、免疫抑制剤の許容レベル範囲の管理は、例えば免疫抑制剤の血中トラフ濃度、すなわち血中濃度対投与用量（Ｃ／Ｄ）比、をモニターすることによって行うことができる。また、移植臓器の種類に対応した臓器の働きを調べるための生化学的臨床検査を行うことができる。例えば、移植臓器が肝臓であれば、総ビリルビン（Ｔ−Ｂｉｌ）、ＡＬＴ、ＡＳＴ、γ−ＧＴＰなどを同時に検査することによって、移植された肝臓の機能を知る手がかりになる。
【００５０】
本発明はさらに、本発明の上記方法で使用するための、かつＣＹＰ３Ａ５及びＣＹＰ２Ｃ１９の遺伝子多型を測定するためのプライマーキットであって、該プライマーが、配列番号１、３、５、７、９及び１２のオリゴヌクレオチドのセットと、配列番号２、４、６、８、１０、１１及び１３のオリゴヌクレオチドのセットとを含むことを特徴とする上記キットを提供する。
【００５１】
プライマーは、個々に別々の容器に入れてもよいし、或いは、測定すべき遺伝子多型ごとに各セットから選択された２種のプライマーを組み合わせて１つの容器にいれてもよい。
【００５２】
本発明のキットには、ＰＣＲ増幅に必要なバッファ、ｄＮＴＰミックス、耐熱性ＤＮＡポリメラーゼ酵素などの試薬を、使用説明書と一緒に包含させることができる。
【実施例】
【００５３】
本発明は、以下の実施例によってさらに具体的に説明するが、本発明の範囲は、これらの実施例に限定されないものとする。
＜実施例１＞
（１）：ゲノムＤＮＡの抽出
肝移植患者（レシピエント１；５１歳男性）と肝臓提供者（ドナー１；５５歳男性）の血液からＷｉｚａｒｄ（Ｒ） Ｇｅｎｏｍｉｃ ＤＮＡ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｋｉｔ（プロメガ株式会社）を用いて、ゲノムＤＮＡを抽出した。得られたゲノムＤＮＡは、２０ｎｇ／μｌになるように純水で希釈し、使用するまで−３０℃で凍結保存した。
【００５４】
（２）：特定すべき一塩基多型を含む領域のＰＣＲによる増幅
各遺伝子の変異の検出のために、変異部位のみ特異的に増幅し、かつ制限酵素サイトを与えるプライマーを使用した。プライマーはオリゴヌクレオチドを人工的に合成し、脱塩カラムを用いて精製した上で使用した。オリゴヌクレオチドは、ＤＮＡ自動合成装置を用いて化学的に合成することができる。この合成には一般にホスホアミダイト法が使用され、この方法によって約１００塩基までの一本鎖ＤＮＡを自動合成することができる。ＤＮＡ自動合成装置は、例えばＰｏｌｙｇｅｎ社、ＡＢＩ社、Ａｐｐｌｉｅｄ ＢｉｏＳｙｓｔｅｍｓ社などから市販されている。
【００５５】
ＰＣＲにはＴａＫａＲａ ＥｘＴａｑ（タカラバイオ株式会社）を用い、メーカー指定の条件で３５サイクルの増幅反応を実施した。もっとも、このＰＣＲは単に遺伝子の特定領域を増幅することが目的であるため、ＰＣＲの方法や酵素の種類に特段の制限はない。ここで、ＰＣＲには、常法に従い、２５μＭフォワードプライマー（配列番号１又は３又は５）０．４μｌ、２５μＭリバースプライマー（配列番号２又は４又は６）０．４μｌ、１０×ＰＣＲバッファ２μｌ、ｄＮＴＰミックス１．６μｌ、ＥｘＴａｑ ＤＮＡポリメラーゼ０．１μｌ、手順（１）で調製したゲノムＤＮＡ溶液２０ｎｇ／μｌ ２μｌを、純水で２０μｌにメスアップしたものを用いた。また、ＰＣＲは、９５℃・３分の後、９４℃・３０秒／５５℃・３０秒／７２℃・３０秒を３５サイクル、その後７２℃・５分反応し、反応後は４℃で保存した。
【００５６】
（３）：ＰＣＲ産物の制限酵素処理による多型判定（ＲＦＬＰ）
手順（２）で得られたＰＣＲ産物を下記に示す、それぞれ適切な制限酵素で処理し、断片長を確認することにより、多型を検出した。制限酵素処理は、手順（２）のＰＣＲ産物８μｌ、１０×バッファ１．５μｌ、酵素０．５μｌを用いた。それぞれＣＹＰ３Ａ５＊３はＳｓｐ１と３７℃で一晩、ＣＹＰ２Ｃ１９＊２はＳｍａＩと２５℃で一晩、２Ｃ１９＊３はＢａｍＨＩと３７℃で一晩反応させた。
【００５７】
反応産物全量を３．５％アガロースゲル電気泳動し、エチジウムブロマイドで染色して写真を撮影した。
【００５８】
電気泳動後、写真撮影して、断片長を確認した。レシピエント１、ドナー１とも同じパターンを示していた（図４）。ＣＹＰ３Ａ５は、２９３ｂｐのＰＣＲ産物（１レーン）が１７５ｂｐと１２５ｂｐに切断されている（２レーン）ことから、ＣＹＰ３Ａ５＊３／＊３変異型であることが判明した。ＣＹＰ２Ｃ１９Ｅｘｏｎ５は、１６９ｂｐのＰＣＲ産物（３レーン）が１６９ｂｐと１２０ｂｐに切断され（４レーン）、ＣＹＰ２Ｃ１９Ｅｘｏｎ４は、１３０ｂｐのＰＣＲ産物（５レーン）が１３０ｂｐと１０２ｂｐに切断されている（６レーン）ことから、ＣＹＰ２Ｃ１９は＊２と＊３変異をヘテロに持つ、ＣＹＰ２Ｃ１９＊２／＊３変異型であることが判明した。
【００５９】
（４）：レシピエントの術後タクロリムス血中濃度測定
レシピエント１にタクロリムス（商品名プログラフ、藤沢薬品工業株式会社）及びＰＰＩ（オメプラゾール（商品名オメプラール、アストラゼネカ株式会社）、ランソプラゾール（商品名タケプロン、武田薬品工業株式会社））を投与し、タクロリムスの血中濃度を全自動イムノアッセイシステムＩＭｘ（登録商標）システム（アボットジャパン株式会社）にて、モニターした。投与日、投与量及び投与薬剤は、図１（患者１変異型／オメプラゾール＋ランソプラゾール）に示す通りである。
【００６０】
図１から、タクロリムスの濃度／投与量（Ｃ／Ｄ）比が、９日目以降では２倍に増加していることがわかった。
【００６１】
＜実施例２＞
（１）：ゲノムＤＮＡの抽出
肝移植患者（レシピエント２；６０歳男性）と肝臓提供者（ドナー２；５４歳女性）の血液からＷｉｚａｒｄ（Ｒ） Ｇｅｎｏｍｉｃ ＤＮＡ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｋｉｔ（プロメガ株式会社）を用いて、ゲノムＤＮＡを抽出した。得られたゲノムＤＮＡは、２０ｎｇ／μｌになるように純水で希釈し、使用するまで−３０℃で凍結保存した。
（２）：特定すべき一塩基多型を含む領域のＰＣＲによる増幅
レシピエント２とドナー２のゲノムＤＮＡを用いたこと以外は実施例１と同様である。
（３）：ＰＣＲ産物の制限酵素処理による多型判定（ＲＦＬＰ）
実施例１と同様の操作を行った。
【００６２】
電気泳動後、写真撮影して、断片長を確認した（図５）。レシピエント２のＣＹＰ３Ａ５は、２９３ｂｐのＰＣＲ産物（１レーン）が１７５ｂｐと１２５ｂｐにバンドがある（２レーン）ことから、ＣＹＰ３Ａ５＊３／＊３変異型であることが判明した。ドナー２のＣＹＰ３Ａ５は、２９３ｂｐのＰＣＲ産物（１レーン）が１５０ｂｐと１２５ｂｐにバンドがある（２レーン）ことから、ＣＹＰ３Ａ５＊１／＊１野生型であることが判明した。レシピエント２とドナー２のＣＹＰ２Ｃ１９Ｅｘｏｎ５は、同じパターンを示しており、１６９ｂｐのＰＣＲ産物（３レーン）が１２０ｂｐにのみバンドが検出され（４レーン）、またＣＹＰ２Ｃ１９Ｅｘｏｎ４もレシピエント２、ドナー２とも同じパターンを示し、１３０ｂｐのＰＣＲ産物（５レーン）が１０２ｂｐにのみバンドが検出された（６レーン）ことから、レシピエント２、ドナー２ともＣＹＰ２Ｃ１９は＊１／＊１野生型であることが判明した。
【００６３】
（４）：レシピエントの術後タクロリムス血中濃度測定
レシピエント２にタクロリムス及びＰＰＩ（オメプラゾール及びランソプラゾール）を投与し、タクロリムスの血中濃度を全自動イムノアッセイシステムＩＭｘ（登録商標）システム（アボットジャパン株式会社）にて、モニターした。投与日、投与量及び投与薬剤は、図２（患者２野生型／オメプラゾール＋ランソプラゾール）に示す通りである。
【００６４】
図２から、タクロリムスの濃度／投与量（Ｃ／Ｄ）比は、ランソプラゾール投与下でも変化がなかった。
【００６５】
＜実施例３＞
（１）：ゲノムＤＮＡの抽出
肝移植患者（レシピエント３；４１歳女性）と肝臓提供者（ドナー３；６３歳女性）の血液からＷｉｚａｒｄ（Ｒ） Ｇｅｎｏｍｉｃ ＤＮＡ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｋｉｔ（プロメガ株式会社）を用いて、ゲノムＤＮＡを抽出した。得られたゲノムＤＮＡは、２０ｎｇ／μｌになるように純水で希釈し、使用するまで−３０℃で凍結保存した。
（２）：特定すべき一塩基多型を含む領域のＰＣＲによる増幅
レシピエント３とドナー３のゲノムＤＮＡを用いたこと以外は実施例１と同様である。
（３）：ＰＣＲ産物の制限酵素処理による多型判定（ＲＦＬＰ）
実施例１と同様の操作を行った。
【００６６】
電気泳動後、写真撮影して、断片長を確認した（図６）。レシピエント３とドナー３のＣＹＰ３Ａ５は、同じパターンを示しており、２９３ｂｐのＰＣＲ産物（１レーン）が１７５ｂｐと１２５ｂｐにバンドがある（２レーン）ことから、両者ともＣＹＰ３Ａ５＊３／＊３変異型であることが判明した。レシピエント３のＣＹＰ２Ｃ１９Ｅｘｏｎ５は、１６９ｂｐのＰＣＲ産物（３レーン）が制限酵素処理後も１６９ｂｐにのみバンドが検出され（４レーン）、またＣＹＰ２Ｃ１９Ｅｘｏｎ４は、１３０ｂｐのＰＣＲ産物（５レーン）が制限酵素処理後には１０２ｂｐにのみバンドが検出された（６レーン）ことから、レシピエント３はＣＹＰ２Ｃ１９＊２／＊２変異型であることが判明した。
【００６７】
ドナー３のＣＹＰ２Ｃ１９Ｅｘｏｎ５は、１６９ｂｐのＰＣＲ産物（３レーン）が１６９ｂｐと１２０ｂｐに切断され（４レーン）、ＣＹＰ２Ｃ１９Ｅｘｏｎ４は、１３０ｂｐのＰＣＲ産物（５レーン）が１３０ｂｐと１０２ｂｐに切断されている（６レーン）ことから、ドナー３のＣＹＰ２Ｃ１９は＊２と＊３変異をヘテロに持つ、ＣＹＰ２Ｃ１９＊２／＊３変異型であることが判明した。
【００６８】
（４）：レシピエントの術後タクロリムス血中濃度測定
レシピエント３にタクロリムス及びＰＰＩ（オメプラゾール及びラベプラゾール）を投与し、タクロリムスの血中濃度を全自動イムノアッセイシステムＩＭｘ（登録商標）システム（アボットジャパン株式会社）にて、モニターした。投与日、投与量及び投与薬剤は、図３（患者３変異型／オメプラゾール＋ラベプラゾール）に示す通りである。
【００６９】
図３から、タクロリムスの濃度／投与量（Ｃ／Ｄ）比は、ラベプラゾール投与下でも変化がなかった。
【００７０】
＜実施例４＞
（１）：ゲノムＤＮＡの抽出
肝移植患者（レシピエント４）と肝臓提供者（ドナー４）の血液からＷｉｚａｒｄ（Ｒ） Ｇｅｎｏｍｉｃ ＤＮＡ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｋｉｔ（プロメガ株式会社）を用いて、ゲノムＤＮＡを抽出した。得られたゲノムＤＮＡは、２０ｎｇ／μｌになるように純水で希釈し、使用するまで−３０℃で凍結保存した。
（２）：特定すべき一塩基多型を含む領域のＰＣＲによる増幅
レシピエント４とドナー４のゲノムＤＮＡを用い、２５μＭフォワードプライマー（配列番号１又は３又は５又は７又は９又は１２）０．４μｌ、２５μＭリバースプライマー（配列番号２又は４又は６又は８又は１０又は１１又は１３）０．４μｌを用いたこと以外は、実施例１と同様に行った。
（３）：ＰＣＲ産物の制限酵素処理による多型判定（ＲＦＬＰ）
実施例１と同様の操作を行った。ここで、ＭＤＲ１のＥｘ１２の多型検出には、ＨａｅＩＩＩ、Ｅｘ２１の多型検出にはＢｓｒＩとＢａｎＩ、Ｅｘ２６の多型検出には、ＭｂｏＩにより処理した。
電気泳動後、写真撮影して、断片長を確認し、多型を判定する。
（４）：レシピエントの術後タクロリムス血中濃度測定
レシピエント４にタクロリムス及びＰＰＩを投与し、タクロリムスの血中濃度を全自動イムノアッセイシステムＩＭｘ（登録商標）システム（アボットジャパン株式会社）にて、モニターする。上記実施例と同様に、タクロリムスの濃度／投与量（Ｃ／Ｄ）比を測定し、ＰＰＩ投与によるタクロリムスの血中濃度変化を解析する。
【産業上の利用可能性】
【００７１】
本発明は、臓器移植後の移植患者において、拒絶反応の抑制を目的として投与される免疫抑制剤の副作用を抑制又は回避するために、かつプロトンポンプ阻害剤の的確な選択を可能にするために医療上有用である。
【図面の簡単な説明】
【００７２】
【図１】この図は、肝移植患者（レシピエント１；ＣＹＰ２Ｃ１９＊２／＊３，ＣＹＰ３Ａ５＊３／＊３）に、タクロリムス（ＰＯ（経口投与））と、オメプラゾール（ＩＶ（静脈内投与）、２０ｍｇ／日）、ランソプラゾール（ＰＯ、３０ｍｇ／日）を投与したときの、タクロリムスの用量、タクロリムスの血中濃度、タクロリムスの濃度／投与量（Ｃ／Ｄ）比、ＡＳＴ、ＡＬＴ及びＴ−Ｂｉｌ（総ビリルビン）の術後の経日変化を示すグラフである。なお、肝臓提供者はＣＹＰ２Ｃ１９＊２／＊３，ＣＹＰ３Ａ５＊３／＊３の遺伝子型をもつ。
【図２】この図は、肝移植患者（レシピエント２; ＣＹＰ２Ｃ１９＊１／＊１，ＣＹＰ３Ａ５＊３／＊３）に、タクロリムス（ＰＯ）と、オメプラゾール（ＰＯ、２０ｍｇ／日）、ランソプラゾール（ＰＯ、３０ｍｇ／日）を投与したときの、タクロリムスの用量、タクロリムスの血中濃度、タクロリムスの濃度／投与量（Ｃ／Ｄ）比、ＡＳＴ、ＡＬＴ及びＴ−Ｂｉｌの術後の経日変化を示すグラフである。なお、肝臓提供者はＣＹＰ２Ｃ１９＊１／＊１，ＣＹＰ３Ａ５＊１／＊１の遺伝子型をもつ。
【図３】この図は、肝移植患者（レシピエント３; ＣＹＰ２Ｃ１９＊２／＊２，ＣＹＰ３Ａ５＊３／＊３）に、タクロリムス（ＰＯ）と、オメプラゾール（ＰＯ、２０ｍｇ／日）、ラベプラゾール（ＰＯ、３０ｍｇ／日）を投与したときの、タクロリムスの用量、タクロリムスの血中濃度、タクロリムスの濃度／投与量（Ｃ／Ｄ）比、ＡＳＴ、ＡＬＴ及びＴ−Ｂｉｌの術後の経日変化を示すグラフである。なお、肝臓提供者はＣＹＰ２Ｃ１９＊２／＊３，ＣＹＰ３Ａ５＊３／＊３の遺伝子型をもつ。
【図４】この図は、レシピエント１及びドナー１のＣＹＰ３Ａ５及びＣＹＰ２Ｃ１９の遺伝子型を示すアガロースゲル電気泳動（エチジウムブロミド染色）図である。
【図５】この図は、レシピエント２及びドナー２のＣＹＰ３Ａ５及びＣＹＰ２Ｃ１９の遺伝子型を示すアガロースゲル電気泳動（エチジウムブロミド染色）図である。
【図６】この図は、レシピエント３及びドナー３のＣＹＰ３Ａ５及びＣＹＰ２Ｃ１９の遺伝子型を示すアガロースゲル電気泳動（エチジウムブロミド染色）図である。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
臓器移植患者に移植後に投与される免疫抑制剤及びプロトンポンプ阻害剤（ＰＰＩ）の薬物相互作用及び血中免疫抑制剤濃度変動を予測し、かつ、効能及び副作用に関して該患者に適する種類のＰＰＩを選択するための方法であって、該方法が、臓器移植患者及び臓器提供者の双方の生物学的サンプルにおけるヒトチトクロームＰ４５０ ３Ａ５及び２Ｃ１９の遺伝子多型を測定し、それによって、
（１） 臓器移植患者及び臓器提供者の該ヒトチトクロームＰ４５０ ３Ａ５及び２Ｃ１９の遺伝子多型がともに変異型である場合、該患者において血中免疫抑制剤濃度が最大許容レベルを超えて副作用をもたらすことを示し、かつ、該副作用を抑制するか回避するような種類のＰＰＩが選択される、並びに／或いは、
（２） 臓器移植患者又は臓器提供者の該ヒトチトクロームＰ４５０ ３Ａ５及び２Ｃ１９の遺伝子多型の少なくとも１つが野生型である場合、該患者において血中免疫抑制剤濃度が最大許容レベル以下であって副作用をもたらさないことを示し、かつ、任意の種類のＰＰＩが選択される、
ことを含む、上記方法。
【請求項２】
変異型であるヒトチトクロームＰ４５０ ３Ａ５の遺伝子多型が、ＣＹＰ３Ａ５＊３である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
遺伝子多型がＣＹＰ３Ａ５＊３である臓器移植患者又は臓器提供者が、ＣＹＰ３Ａ５＊３／＊３である、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
変異型であるヒトチトクロームＰ４５０ ２Ｃ１９の遺伝子多型が、ＣＹＰ２Ｃ１９＊２又はＣＹＰ２Ｃ１９＊３である、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
遺伝子多型がＣＹＰ２Ｃ１９＊２又はＣＹＰ２Ｃ１９＊３である臓器移植患者又は臓器提供者が、ＣＹＰ２Ｃ１９＊２／＊２又はＣＹＰ２Ｃ１９＊２／＊３又はＣＹＰ２Ｃ１９＊３／＊３である、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
移植臓器が肝臓である、請求項１〜５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
免疫抑制剤がタクロリムスである、請求項１〜６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
ＰＰＩがランソプラゾール、ラベプラゾール又はオメプラゾール、或いはそれらの組合せである、請求項１〜７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９】
前記（１）における副作用を抑制するか回避するような種類のＰＰＩが、ラベプラゾールである、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
前記（２）における任意の種類のＰＰＩが、ランソプラゾール、ラベプラゾール、オメプラゾール、及びそれらの組合わせからなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
遺伝子多型の測定を制限断片長多型（ＲＦＬＰ）法で行うことを含む、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２】
ＲＦＬＰ法が制限断片のＰＣＲ増幅をさらに含む、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
ＰＣＲ増幅が、配列番号１、３、５、７、９及び１２のオリゴヌクレオチドからなる群から選択されるオリゴヌクレオチドと、配列番号２、４、６、８、１０、１１及び１３のオリゴヌクレオチドからなる群から選択されるオリゴヌクレオチドとの組合せからなるプライマーを用いて行われる、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
請求項１〜１３のいずれか１項に記載の方法で使用するための、かつヒトチトクロームＰ４５０ ３Ａ５及び２Ｃ１９の遺伝子多型を測定するためのプライマーキットであって、該プライマーが、配列番号１、３、５、７、９及び１２のオリゴヌクレオチドのセットと、配列番号２、４、６、８、１０、１１及び１３のオリゴヌクレオチドのセットとを含むことを特徴とする、上記キット。
【請求項１】
臓器移植患者に移植後に投与される免疫抑制剤及びプロトンポンプ阻害剤（ＰＰＩ）の薬物相互作用及び血中免疫抑制剤濃度変動を予測し、かつ、効能及び副作用に関して該患者に適する種類のＰＰＩを選択するための方法であって、該方法が、臓器移植患者及び臓器提供者の双方の生物学的サンプルにおけるヒトチトクロームＰ４５０ ３Ａ５及び２Ｃ１９の遺伝子多型を測定し、それによって、
（１） 臓器移植患者及び臓器提供者の該ヒトチトクロームＰ４５０ ３Ａ５及び２Ｃ１９の遺伝子多型がともに変異型である場合、該患者において血中免疫抑制剤濃度が最大許容レベルを超えて副作用をもたらすことを示し、かつ、該副作用を抑制するか回避するような種類のＰＰＩが選択される、並びに／或いは、
（２） 臓器移植患者又は臓器提供者の該ヒトチトクロームＰ４５０ ３Ａ５及び２Ｃ１９の遺伝子多型の少なくとも１つが野生型である場合、該患者において血中免疫抑制剤濃度が最大許容レベル以下であって副作用をもたらさないことを示し、かつ、任意の種類のＰＰＩが選択される、
ことを含む、上記方法。
【請求項２】
変異型であるヒトチトクロームＰ４５０ ３Ａ５の遺伝子多型が、ＣＹＰ３Ａ５＊３である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
遺伝子多型がＣＹＰ３Ａ５＊３である臓器移植患者又は臓器提供者が、ＣＹＰ３Ａ５＊３／＊３である、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
変異型であるヒトチトクロームＰ４５０ ２Ｃ１９の遺伝子多型が、ＣＹＰ２Ｃ１９＊２又はＣＹＰ２Ｃ１９＊３である、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
遺伝子多型がＣＹＰ２Ｃ１９＊２又はＣＹＰ２Ｃ１９＊３である臓器移植患者又は臓器提供者が、ＣＹＰ２Ｃ１９＊２／＊２又はＣＹＰ２Ｃ１９＊２／＊３又はＣＹＰ２Ｃ１９＊３／＊３である、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
移植臓器が肝臓である、請求項１〜５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
免疫抑制剤がタクロリムスである、請求項１〜６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
ＰＰＩがランソプラゾール、ラベプラゾール又はオメプラゾール、或いはそれらの組合せである、請求項１〜７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９】
前記（１）における副作用を抑制するか回避するような種類のＰＰＩが、ラベプラゾールである、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
前記（２）における任意の種類のＰＰＩが、ランソプラゾール、ラベプラゾール、オメプラゾール、及びそれらの組合わせからなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
遺伝子多型の測定を制限断片長多型（ＲＦＬＰ）法で行うことを含む、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２】
ＲＦＬＰ法が制限断片のＰＣＲ増幅をさらに含む、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
ＰＣＲ増幅が、配列番号１、３、５、７、９及び１２のオリゴヌクレオチドからなる群から選択されるオリゴヌクレオチドと、配列番号２、４、６、８、１０、１１及び１３のオリゴヌクレオチドからなる群から選択されるオリゴヌクレオチドとの組合せからなるプライマーを用いて行われる、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
請求項１〜１３のいずれか１項に記載の方法で使用するための、かつヒトチトクロームＰ４５０ ３Ａ５及び２Ｃ１９の遺伝子多型を測定するためのプライマーキットであって、該プライマーが、配列番号１、３、５、７、９及び１２のオリゴヌクレオチドのセットと、配列番号２、４、６、８、１０、１１及び１３のオリゴヌクレオチドのセットとを含むことを特徴とする、上記キット。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【公開番号】特開２００９−２７９８２（Ｐ２００９−２７９８２Ａ）
【公開日】平成２１年２月１２日（２００９．２．１２）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００７−１９５８１０（Ｐ２００７−１９５８１０）
【出願日】平成１９年７月２７日（２００７．７．２７）
【新規性喪失の例外の表示】特許法第３０条第１項適用申請有り 電気通信回線でのプログラム集・要旨集発表 学会名：日本薬学会第１２７年会（富山） 講演番号：２８０−ｐｍ１１ 電子通信回線掲載日：２００７年２月１日 掲載アドレス：ｈｔｔｐ：／／ｎｅｎｋａｉ．ｐｈａｒｍ．ｏｒ．ｊｐ／１２７／ｗｅｂ／
【出願人】（０００００３１５９）東レ株式会社 (7,677)
【出願人】（５０４１３２２７２）国立大学法人京都大学 (1,269)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２１年２月１２日（２００９．２．１２）
【国際特許分類】
【出願日】平成１９年７月２７日（２００７．７．２７）
【新規性喪失の例外の表示】特許法第３０条第１項適用申請有り 電気通信回線でのプログラム集・要旨集発表 学会名：日本薬学会第１２７年会（富山） 講演番号：２８０−ｐｍ１１ 電子通信回線掲載日：２００７年２月１日 掲載アドレス：ｈｔｔｐ：／／ｎｅｎｋａｉ．ｐｈａｒｍ．ｏｒ．ｊｐ／１２７／ｗｅｂ／
【出願人】（０００００３１５９）東レ株式会社 (7,677)
【出願人】（５０４１３２２７２）国立大学法人京都大学 (1,269)
【Ｆターム（参考）】
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