【課題】 本発明は、被検水棲生物の生理状態を遺伝子発現により確認し、該被検生物の生理状態が化学物質暴露により影響を受けているか否かを評価する方法を提供することを課題とする。また、様々な化学物質暴露条件下における被検水棲生物の生理状態を遺伝子発現により確認し、被検飼育条件が化学物質に汚染されておらず、化学物質暴露試験に用いられる指標生物を飼育するための条件として適しているか否かを評価する方法を提供ことも課題とする。
【解決手段】 本発明者らは、上記課題を解決するために、被検水棲生物に対して、網羅的遺伝子発現解析を行い、化学物質暴露による生理状態の変化に関与する水棲生物の遺伝子の特定を行った。その結果、化学物質暴露による生理状態の変化に関与するメダカ遺伝子群を同定し、本遺伝子群の発現確認を行うことで被検生物の生理状態を確認できることを見出した。

【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）化学物質を暴露した被検水棲生物由来の生物学的試料において、生理状態に関与する水棲生物遺伝子の発現レベルを決定する工程、
（ｂ）被検水棲生物由来の生物学的試料における該遺伝子の発現レベルと、該遺伝子の正常対照発現レベルを比較する工程、
（ｃ）（ｂ）における発現レベルの比較結果により、被検水棲生物の生理状態に対する化学物質の影響を評価する工程、
の３つの工程を含み、化学物質の暴露により正常対照発現レベルと比較して発現レベルがより大きい場合に、被検水棲生物の生理状態に対して該化学物質の影響があると評価する方法において、
該化学物質として、エタノール、メタノール、ＤＭＳＯ、ＳＤＳ、ホルムアルデヒド、ジンクピリチオン、トリブチル錫、カドミウム、ラウンドアップ、チウラム、硫酸銅を用い、その化学物質のうち６種類以上が２００％以上の発現をする水棲生物遺伝子を用いることを特徴とする化学物質の影響評価方法。
【請求項２】
該遺伝子が、本発明でいう遺伝子配列番号（１〜２４）からなる群より選択された１又は複数の遺伝子である請求項１記載の化学物質の影響評価方法。
【請求項３】
その化学物質のうち９種類以上が２００％以上の発現をする水棲生物遺伝子を用いるものである請求項１記載の化学物質の影響評価方法。
【請求項４】
該遺伝子が、本発明でいう遺伝子配列番号（１〜４）からなる群より選択された１又は複数の遺伝子である請求項３記載の化学物質の影響評価方法。
【請求項５】
（ａ）化学物質を暴露した被検水棲生物由来の生物学的試料において、生理状態に関与する水棲生物遺伝子の発現レベルを決定する工程、
（ｂ）被検水棲生物由来の生物学的試料における該遺伝子の発現レベルと、該遺伝子の正常対照発現レベルを比較する工程、
（ｃ）（ｂ）における発現レベルの比較結果により、被検水棲生物の生理状態に対する化学物質の影響を評価する工程、
の３つの工程を含み、化学物質の暴露により正常対照発現レベルと比較して発現レベルがより小さい場合に、被検水棲生物の生理状態に対して該化学物質の影響があると評価する方法において、
該化学物質として、エタノール、メタノール、ＤＭＳＯ、ＳＤＳ、ホルムアルデヒド、ジンクピリチオン、トリブチル錫、カドミウム、ラウンドアップ、チウラム、硫酸銅を用い、その化学物質のうち６種類以上が５０％以下の発現をする水棲生物遺伝子を用いることを特徴とする化学物質の影響評価方法。
【請求項６】
該遺伝子が、本発明でいう遺伝子配列番号（２５〜６９）からなる群より選択された１又は複数の遺伝子である請求項５記載の化学物質の影響評価方法。
【請求項７】
その化学物質のうち９種類以上が５０％以下の発現をする水棲生物遺伝子を用いるものである請求項５記載の化学物質の影響評価方法。
【請求項８】
該遺伝子が、本発明でいう遺伝子配列番号（２５〜３５）からなる群より選択された１又は複数の遺伝子である請求項７記載の化学物質の影響評価方法。
【請求項９】
（ａ）化学物質を暴露した被検水棲生物由来の生物学的試料において、生理状態に関与する水棲生物遺伝子の発現レベルを決定する工程、
（ｂ）被検水棲生物由来の生物学的試料における該遺伝子の発現レベルと、該遺伝子の正常対照発現レベルを比較する工程、
（ｃ）（ｂ）における発現レベルの比較結果により、被検水棲生物の生理状態に対する化学物質の影響を評価する工程、
の３つの工程を含み、化学物質の暴露により正常対照発現レベルと比較して発現レベルがより大きい場合に、被検水棲生物の生理状態に対して該化学物質の影響があると評価する方法において、
該化学物質として、エタノール、メタノール、ＤＭＳＯ、ＳＤＳ、ホルムアルデヒド、ジンクピリチオン、トリブチル錫、カドミウム、ラウンドアップ、チウラム、硫酸銅を用い、その化学物質のうち少なくとも１種類以上が４００％以上の発現をする水棲生物遺伝子を用いることを特徴とする化学物質の影響評価方法。
【請求項１０】
該遺伝子が、本発明でいう遺伝子配列番号（１〜３、５〜１８、７０〜１２５）からなる群より選択された１又は複数の遺伝子である請求項９記載の化学物質の影響評価方法。
【請求項１１】
該発現レベルが８００％（８倍）より大きいものである請求項９記載の化学物質の影響評価方法。
【請求項１２】
該遺伝子が、本発明でいう遺伝子配列番号（１〜２、５〜１０、７０〜８１）からなる群より選択された１又は複数の遺伝子である請求項１１記載の化学物質の影響評価方法。
【請求項１３】
（ａ）化学物質を暴露した被検水棲生物由来の生物学的試料において、生理状態に関与する水棲生物遺伝子の発現レベルを決定する工程、
（ｂ）被検水棲生物由来の生物学的試料における該遺伝子の発現レベルと、該遺伝子の正常対照発現レベルを比較する工程、
（ｃ）（ｂ）における発現レベルの比較結果により、被検水棲生物の生理状態に対する化学物質の影響を評価する工程、
の３つの工程を含み、化学物質の暴露により正常対照発現レベルと比較して発現レベルがより小さい場合に、被検水棲生物の生理状態に対して該化学物質の影響があると評価する方法において、
該化学物質として、エタノール、メタノール、ＤＭＳＯ、ＳＤＳ、ホルムアルデヒド、ジンクピリチオン、トリブチル錫、カドミウム、ラウンドアップ、チウラム、硫酸銅を用い、その化学物質のうち少なくとも１種類以上が２５％以下の発現をする水棲生物遺伝子を用いることを特徴とする化学物質の影響評価方法。
【請求項１４】
該遺伝子が、本発明でいう遺伝子配列番号（２５〜３３、３６〜５９、７０、１２６〜２４３）からなる群より選択された１又は複数の遺伝子である請求項１３記載の化学物質の影響評価方法。
【請求項１５】
該発現レベルが１２．５％（１／８倍）より小さいものである請求項１４記載の化学物質の影響評価方法。
【請求項１６】
該遺伝子が、本発明でいう遺伝子配列番号（３６〜３８、１２６〜１３７）からなる群より選択された１又は複数の遺伝子である請求項１５記載の化学物質の影響評価方法。
【請求項１７】
本発明でいう遺伝子配列番号（２４４〜２６７）からなる群より選択された１又は複数の遺伝子を、ネガティブコントロールとして使用するものである請求項１〜１６記載の化学物質の影響評価方法。
【請求項１８】
請求項１記載の遺伝子を有する水棲生物を、請求項１記載の化学物質の影響評価方法を実施できるよう飼育することを特徴とする水棲生物の飼育方法。
【請求項１９】
請求項５記載の遺伝子を有する水棲生物を、請求項５記載の化学物質の影響評価方法を実施できるよう飼育することを特徴とする水棲生物の飼育方法。
【請求項２０】
請求項９記載の遺伝子を有する水棲生物を、請求項９記載の化学物質の影響評価方法を実施できるよう飼育することを特徴とする水棲生物の飼育方法。
【請求項２１】
請求項１３記載の遺伝子を有する水棲生物を、請求項１３記載の化学物質の影響評価方法を実施できるよう飼育することを特徴とする水棲生物の飼育方法。

【図１】

【図２ａ】

【図２ｂ】

【公開番号】特開２００８−１６７６９９（Ｐ２００８−１６７６９９Ａ）
【公開日】平成２０年７月２４日（２００８．７．２４）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００７−４４５６（Ｐ２００７−４４５６）
【出願日】平成１９年１月１２日（２００７．１．１２）
【出願人】（５９７００１３７２）ロシュ・ダイアグノスティックス株式会社 (1)
【出願人】（３０１０２１５３３）独立行政法人産業技術総合研究所 (6,529)
【出願人】（０００１５３２８１）株式会社日本紙パルプ研究所 (7)
【上記２名の代理人】
【識別番号】１０００８０７２４
【弁理士】
【氏名又は名称】永田　久喜
【Ｆターム（参考）】