感染症を治療するためのアスパルチル−プロテアーゼの二環式ペプチド模倣阻害剤
本発明は、アスパルチル−プロテアーゼ活性を発現する微生物病原体と関連した感染症の治療に有用である一般式（Ｉ）の３−アザ−ビシクロ[３．２．１]オクタン誘導体、その調製、使用及び医薬組成物について言及する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、感染症、特にはアスパルチル−プロテアーゼ活性を発現する微生物病原体に起因する病態、の治療に有用な一般式（Ｉ）の３−アザ−ビシクロ[３．２．１]オクタン誘導体について言及する。
【０００２】
具体的に、本発明は、真菌感染症の治療用カンジダ・アルビカンスＳＡＰ２阻害剤として、ＨＩＶ感染症の治療用ＨＩＶプロテアーゼ阻害剤として、又はマラリア治療用プラスメプシン若しくはヒスト−アスパルチルプロテアーゼ（ＨＡＰ）阻害剤としての、一般式（Ｉ）の化合物、及びその代謝物について言及する。
【背景技術】
【０００３】
アスパルチルプロテアーゼは、異なる生理学的及び機能的特性を持つ多くの生物及び組織において広範に分布しており、活性部位に２つのアスパルチル残基を含有し、一方はプロトン化され、他方はされておらず、一般的な酸−塩基触媒として一緒に作用する。２つのアスパラギン酸塩残基の間に結合した水分子は、アミド結合加水分解用の求核試薬であると考えられており、それは、脱プロトン化した触媒のアスパラギン酸残基によって活性化される。ペプチド加水分解を触媒するため、２つのアスパラギン酸残基は、分子の三次構造において十分に接近する必要がある。アスパラギン酸プロテアーゼの大部分は、ペプシン及びキモトリプシン等の消化酵素の他、レニン及びある種の真菌プロテアーゼ（カンジダ・アルビカンスＳＡＰｓ、ペニシロペプシン等）等のリソソームカテプシンＤ及びプロセシング酵素を含めた、ペプシンファミリーに属している。アスパラギン酸プロテアーゼの第二のファミリーは、ＨＩＶ等のウイルスプロテアーゼを含み、レトロペプシンともいわれる。アスパラギン酸プロテアーゼの活性部位は、一般に、選択的不可逆的阻害剤によって化学修飾されるのに求核性が十分にある基を含有しない。このため、今までに開発されたアスパラギン酸プロテアーゼ阻害剤の大部分は、非共有結合性の相互作用を介してそれらの標的酵素に結合する。従って、それらの化合物は、可逆的阻害剤であり、酵素がその天然基質と比べて阻害剤の方に高い親和性を示す場合、結果として効果的な阻害となる（非特許文献１）。
【０００４】
酵素触媒反応の遷移状態と似ている安定な構造は、基質と比べてより強固に酵素を結合するはずであると提案された。結果として、効果的なアスパルチルプロテアーゼ阻害剤の設計に非常に成功したアプローチは、遷移状態アイソスターのペプチド模倣構造への取り込みに基づいている。
【０００５】
カンジダ・アルビカンスは、日和見性真菌病原体であり、特に免疫不全患者において重度の全身感染症を引き起こす。いくらかの抗真菌薬が利用可能であるものの、Ｃ．アルビカンスに対する新規な薬物の必要性は、カンジダに原因する粘膜及び全身感染症の広範な発生と利用可能な薬物に対する抵抗の発生の両方が原因で、激しさを増している（非特許文献２）。実際、薬物の有効性にもかかわらず、カンジダ・アルビカンスは、罹患率、入院費用及び死亡率の非常に起こりやすい原因として位置付けられている（非特許文献３）。疾患を引き起こす能力は、おそらくカンジダと宿主間の多重相互作用を伴う複雑な過程であるが、分泌性アスパルチルプロテアーゼ（ＳＡＰｓ）活性は、主要な病原性因子であるように思われるため、感染症の薬物療法に対して可能性のある標的を提供する。カンジダ株は、同一疾患の経過中に少なくとも９個の異なる遺伝子（ＳＡＰ１−９）を発現するが、感染症の異なる段階で、異なるＳＡＰｓは異なる機能を有することが示されており（非特許文献４）；特にそれらの中でも、ＳＰＡ２は、宿主での持続的コロニー形成及び侵入に関与する中で最も発現する酵素の一つである。
【０００６】
アスパルチルプロテアーゼ活性の阻害剤の必要性について、他の強力な証拠としては、以下の側面によるものが挙げられる。
・カンジダ・アルビカンスに原因する感染症の免疫不全患者は、全身カンジダ症にかかる場合や、更には一般的な治療法に対する抵抗を発生する可能性がある。
・ＨＩＶ及びＨＴＶＬウイルスは、ウイルス成熟に関し、アスパルチルプロテアーゼに依存する。
・熱帯熱マラリア原虫は、ヘモグロビンを処理するのにプラスメプシンＩ及びＩＩを使用する。
【０００７】
近年、アスパルチルプロテアーゼが重要な役割を果たす病原微生物に対するＨＩＶプロテアーゼ阻害剤（ＨＩＶ−ＰＩ）の阻害活性が実証されている（非特許文献５）。特に、ＨＩＶ−ＰＩは、カンジダ・アルビカンス（非特許文献６）とマラリアプラスメプシンＩＩ及びＩＶ（非特許文献７）の両方のアスパルチルプロテアーゼに対してマイクロモル濃度の活性を示す。かかる結果は、それら分子の柔軟性及びＨＩＶ−１のアスパルチルプロテアーゼとカンジダ・アルビカンスのＳＡＰ２の間での一部の構造類似性に従っている。
【０００８】
従って、アスパルチルプロテアーゼに対して阻害活性を有する新規化合物は、真菌感染症の治療用カンジダ・アルビカンスＳＡＰ２阻害剤として、ＨＩＶ感染症の治療用ＨＩＶプロテアーゼ阻害剤として、又はマラリア治療用プラスメプシン若しくはヒスト−アスパルチルプロテアーゼ（ＨＡＰ）阻害剤として作用することができる。
【０００９】
式（Ｉ）の化合物が知られている。
【化１】
ここで、
Ｒ１は、Ｈ、ベンジル、ｐ−メトキシベンジル及びビンズヒドリルからなる群の中で選択され、好ましくはベンジルであり；
Ｒ２は、Ｈ、アルキル、アリール及びアルキルアリールからなる群の中で選択され、好ましくはＨ、ベンジル、メチル又はイソブチルであり；
Ｒ３及びＲ４は、独立して、Ｈ、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、アリール、ヒドロキシアルキル、アルコキシアルキル、アルコキシカルボニル及び−ＣＨ(α−アミノ酸側鎖)ＣＨ２ＯＨからなる群の中で選択され、好ましくはＨ、ヒドロキシエチル、プロパルギル又は−ＣＨ(α−アミノ酸側鎖)ＣＨ２ＯＨであるか；或いは
Ｒ３及びＲ４は、それらが結合している窒素原子と一緒に、最終的に置換された環、好ましくはピペリジン、４−ヒドロキシエチル−ピペラジン、４−カルボエトキシ−ピペラジン、又はモルホリンを形成することができ；可能性のある立体異性体の組み合わせが全て含まれる。
【００１０】
それらの調製は、非特許文献８〜１４において報告されている。
【００１１】
ニューロトロフィン活性の欠損に関連した病態の治療用医薬組成物におけるそれらの使用は、ＷＯ２００４／０００３２４（特許文献１）に記載されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１２】
【特許文献１】ＷＯ２００４／０００３２４
【非特許文献】
【００１３】
【非特許文献１】Tacconelli, E. et al. Curr. Med. Chem. 2004, 4, 49
【非特許文献２】Shao, P. -L. et al. Int. J. Antimicrob. Agents 2007, 30, 487
【非特許文献３】Pfaller MA & D:J:Diekema. Epidemiology of invasive Candidiasis: a persistent public health Problem. Clin.Microbiol.Rev. 2007;20:133-163
【非特許文献４】Schaller, M. et al. J. Invest. Dermatol. 2000, 114, 712
【非特許文献５】Tacconelli et al., Curr. Med. Chem., 2004, 4, 49
【非特許文献６】Cassone et al., J. Infect. Dis., 1999, 180, 448
【非特許文献７】Andrews et al., Antimicrob. Agents Chemother. 2006, 639
【非特許文献８】J. Org. Chem. 1999, 64, 7347
【非特許文献９】J. Org. Chem. 2002, 67, 7483
【非特許文献１０】Bioorg. Med. Chem. 2001, 9, 1625
【非特許文献１１】Eur. J. Org. Chem. 2002, 873
【非特許文献１２】J. Org. Chem. 2002, 67, 7483
【非特許文献１３】C. R. Chimie 2003, 631
【非特許文献１４】J. Comb. Chem. 2007, 9, 454
【発明の概要】
【００１４】
従って、本発明の目的は、特にはＳＡＰ２の、アスパルチルプロテアーゼ活性に関連した病態の治療用、特には免疫抑制患者におけるカンジダ・アルビカンスの薬物耐性全身感染症の治療用の、薬剤を調製するための、代替化合物を提供することにある。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】投与の（１時間、２４時間、４８時間）後にＡＰＧ１２で膣内治療されたラットにおけるＣ．アルビカンスＳＡ４０の膣感染である。
【図２】投与の（１時間、２４時間、４８時間）後にＡＰＧ１２で膣内治療されたラットにおけるＣ．アルビカンスＡＩＤＳ６８の膣感染である。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
本発明は、式（Ｉ）の化合物について言及するものである。
【化２】
ここで、
Ｒ１は、−ＣＨ(Ｒ)ＣＯＲ５であり；
Ｒは、α−アミノ酸側鎖であり、好ましくは、前記α−アミノ酸がＧｌｙ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、Ａｌａ、Ｐｈｅ、Ｐｈｇ、Ｎｌｅ及びＮｖａからなる群から選択され；
Ｒ２は、Ｈ、アルキル、アリール又はアルキルアリールであり、好ましくは、Ｈ、ベンジル、メチル又はイソブチルであり；
Ｒ３及びＲ４は、独立して、Ｈ、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、アルキルアリール、アリール、ヒドロキシアルキル、アルコキシアルキル、アルコキシカルボニル及び−ＣＨ(α−アミノ酸側鎖)ＣＨ２ＯＨからなる群の中で選択され、好ましくは、Ｈ、ヒドロキシエチル、プロパルギル若しくは−ＣＨ(Ｌｅｕ側鎖)ＣＨ２ＯＨであるか；又は
Ｒ３及びＲ４は、それらが結合している窒素原子と一緒に、最終的に置換された、５〜８員環、好ましくは、ピペリジン、４−ヒドロキシエチル−ピペラジン、４−カルボエトキシ−ピペラジン、４−ベンジル−ピペラジン、４−フェネチル−ピペラジン若しくはモルホリンを形成することができ；
Ｒ５は、−Ｏアルキル、−Ｏアリール、−ＮＨアルキル、ＮＨアリール、アミノ酸及びペプチドからなる群の中で選択され、好ましくは、−ＯＣＨ３又はＮＨＣＨ２ＣＨ(ＯＨ)ＣＨ２ＣＯＮＨＢｕであり；
可能性のある立体異性体の組み合わせの全てが含まれる。
【００１７】
驚くべきことには、式（Ｉ）
【化３】
［式中：
Ｒ１は、ベンジル、フェニル及び−ＣＨ(Ｒ)ＣＯＲ５からなる群の中で選択され、好ましくは、ベンジル又は−ＣＨ(Ｒ)ＣＯＲ５であり；
Ｒは、α−アミノ酸側鎖であり、好ましくは、前記α−アミノ酸がＧｌｙ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、Ａｌａ、Ｐｈｅ、Ｐｈｇ、Ｎｌｅ及びＮｖａからなる群から選択され；
Ｒ２は、Ｈ、アルキル、アリール又はアルキルアリールであり、好ましくは、Ｈ、ベンジル、メチル又はイソブチルであり；
Ｒ３及びＲ４は、独立して、Ｈ、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、アルキルアリール、アリール、ヒドロキシアルキル、アルコキシアルキル、アルコキシカルボニル及び−ＣＨ(α−アミノ酸側鎖)ＣＨ２ＯＨからなる群の中で選択され、好ましくは、Ｈ、ヒドロキシエチル、プロパルギル若しくは−ＣＨ(Ｌｅｕ側鎖)ＣＨ２ＯＨであるか；又は
Ｒ３及びＲ４は、それらが結合している窒素原子と一緒に、最終的に置換された、５〜８員環、好ましくは、ピペリジン、４−ヒドロキシエチル−ピペラジン若しくは４−カルボエトキシ−ピペラジンを形成することができ；
Ｒ５は、−Ｏアルキル、−Ｏアリール、−ＮＨアルキル、ＮＨアリール、α−アミノ酸及びペプチドからなる群の中で選択され、好ましくは、−ＯＣＨ３又はＮＨＣＨ２ＣＨ(ＯＨ)ＣＨ２ＣＯＮＨＢｕであり；
可能性のある立体異性体の組み合わせの全てが含まれる］の化合物が、生体外及び生体内の両方におけるＳＡＰ２の強力な阻害剤であることを見出し、それ故に、それらは、好ましくはカンジダ・アルビカンス、ＨＩＶ、ＨＴＶＬ又は熱帯熱マラリア原虫に関連した、感染性疾患の治療用薬剤を調製するために使用できる。
【００１８】
本発明の一態様は、少なくとも式（Ｉ）の化合物と、少なくとも他の薬剤的に容認できる成分、賦形剤、キャリヤー又は希釈剤とを含有する医薬組成物に関するものであり、ここで、Ｒ１は、−ＣＨ(α−アミノ酸側鎖)ＣＯＲ５であり、好ましくは、かかるα−アミノ酸が、Ｇｌｙ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、Ａｌａ、Ｐｈｅ、Ｐｈｇ、Ｎｌｅ及びＮｖａからなる群の中で選択される。
【００１９】
本発明によれば：
アルキルは、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシル、ヘプチル、オクチル、エテニル、プロペニル、ブテニル、イソブテニル、アセチレニル、プロピニル、ブチニル等の線状又は枝分かれしたラジカル鎖を意味しており；
アリールは、芳香環又はＮ、Ｏ、Ｓのようなヘテロ原子を含有する芳香族複素環を意味する。
【００２０】
アミノ酸側鎖は、「アミノ酸」に結合している側鎖として種々の置換基を意味する。「アミノ酸」の語は、Ｌ又はＤシリーズのあらゆる天然α−アミノ酸を含み、「側鎖」として、グリシンでは−Ｈ、アラニンでは−ＣＨ３、バリンでは−ＣＨ(ＣＨ３)２、ロイシンでは−ＣＨ２ＣＨ(ＣＨ３)２、イソロイシンでは−ＣＨ(ＣＨ３)ＣＨ２ＣＨ３、セリンでは−ＣＨ２ＯＨ、トレオニンでは−ＣＨ(ＯＨ)ＣＨ３、システインでは−ＣＨ２ＳＨ、メチオニンでは−ＣＨ２ＣＨ２ＳＣＨ３、フェニルアラニンでは−ＣＨ２−(フェニル)、チロシンでは−ＣＨ２−(フェニル)−ＯＨ、トリプトファンでは−ＣＨ２−(インドール)、アスパラギン酸では−ＣＨ２ＣＯＯＨ、アスパラギンでは−ＣＨ２Ｃ(Ｏ)(ＮＨ２)、グルタミン酸では−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨ、グルタミンでは−ＣＨ２ＣＨ２Ｃ(Ｏ)ＮＨ２、アルギニンでは−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−Ｎ(Ｈ)Ｃ(ＮＨ２)ＮＨ、ヒスチジンでは−ＣＨ２−(イミダゾール)、リシンでは−ＣＨ２(ＣＨ２)３ＮＨ２を有しており、アミノ酸の同一の側鎖が適切な保護基を持つものを含む。更に、「アミノ酸」の語は、非天然アミノ酸を含み、オルニチン（Ｏｒｎ）、ノルロイシン（Ｎｌｅ）、ノルバリン（ＮＶａ）、β−アラニン、Ｌ又はＤのα−フェニルグリシン（Ｐｈｇ）、ジアミノプロピオン酸、ジアミノ酪酸、アミノヒドロキシ酪酸の他、ペプチドケミストリー技術において周知のもの等である。
【００２１】
スキーム１は、上述の式（Ｉ）の化合物の合成的調製を要約するものであり、ここで、Ｒ１は−ＣＨ(Ｒ)ＣＯＲ５であり、Ｒは、市販の又は容易に合成可能なα−アミノ酸誘導体（ＩＩ）からのα−アミノ酸側鎖である。
【００２２】
【化４】
【００２３】
プロトン性溶媒、好ましくはメタノール中で、還元剤、好ましくはＨ２及び触媒、好ましくはＰｄ／Ｃを用いた、市販の又は容易に合成可能なジカルボニル誘導体、例えばジメトキシ−アセトアルデヒドによるアミノ酸誘導体（ＩＩ）の還元的アルキル化は、周囲温度で、好ましくは２５℃で１６時間、攪拌した後、第２級アミン（ＩＩＩ）を提供する。或いは、極性溶媒、好ましくはＤＭＦ中、塩基、好ましくはＮＥｔ３の存在下で且つ触媒、好ましくはＫＩの存在下、化合物（ＩＩ）を、良好な脱離基（スキーム１のＸ）を含有する市販の又は容易に合成可能なアセタール誘導体、例えばブロモアセトアルデヒドジメチルアセタールと共に、好ましくは１２０℃にて、加熱する。アミン（ＩＩＩ）は、ジ−Ｏ−アセチル−酒石酸無水物とのカップリング反応を介して、首尾よくアミド（ＩＶ）に変換される。極性溶媒中の酸、好ましくはＭｅＯＨ中の塩化チオニルによるクルード（ＩＶ）の処理は、環状アセタール（Ｖ）を提供し、それは、酸触媒、好ましくはシリカゲル上のＨ２ＳＯ４の存在下、非極性溶媒中、好ましくは還流トルエン中で３０分間、更に加熱され、（ＶＩ）が得られる。
【００２４】
アミド（Ｉ）の合成は、活性化剤を使用せず、ニートのアミンの存在下、好ましくは６０℃で１８時間、メチルエステル（ＶＩ）を加熱することによって達成される。
【００２５】
本発明の非制限的な説明を行うため、以下に示す例を報告する。
【実施例】
【００２６】
実験の詳細
例１．(２Ｓ)−４−メチル−２−[(１Ｒ，５Ｓ，７Ｓ)−２−オキソ−７−(ピペリジン−１−カルボニル)−６，８−ジオキサ−３−アザ−ビシクロ[３．２．１]オクト−３−イル]−ペンタン酸メチルエステル［式（Ｉ）の化合物、ここで、Ｒ１＝−ＣＨ(Ｌｅｕ側鎖)ＣＯＯＣＨ３、Ｒ２＝Ｈ、Ｒ３及びＲ４＝−ＣＨ２(ＣＨ２)３ＣＨ２−である］
Ｌ−ロイシンメチルエステル塩酸塩（２．９ｇ，１６ｍｍｏｌ）、２−ブロモ−１，１−ジメトキシエタン（１．９ｍｌ，２．７ｇ，１６ｍｍｏｌ）、ＮＥｔ３（６．７ｍｌ，４８ｍｍｏｌ）及び触媒量のＫＩをＤＭＦ（１９０ｍｌ）中に含有する溶液を１２０℃にて３日間攪拌した。その反応溶液を減圧下で濃縮し、水で希釈し、ＤＣＭで抽出した。次いで、有機層を食塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、蒸発させた。未精製の生成物をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル，ＥｔＯＡｃ／Ｐ．Ｅ．１：１）によって精製し、式（ＩＩＩ）の化合物（ここで、Ｒ＝Ｌｅｕ側鎖）を黄色油として得た（１．２ｇ，収率３２％）。
[α]D24-3.32 (c 1.0, CHCl3); 1H-NMR (CDCl3, 200 MHz): δ 4.38 (t, J = 6 Hz, 1H), 3.65 (s, 3H), 3.30 (s, 3H), 3.29 (s, 3H), 3.24 (t, J = 6 Hz, 1H), 2.68 (dd, J1 = J2 = 6 Hz, 1H), 2.52 (dd, J1 = J2 = 6 Hz, 1H), 1.71-1.55 (m, 2H), 1.44-1.37 (m, 2H), 0.86 (d, J = 4 Hz, 3H), 0.83 (d, J = 4 Hz, 3H); 13C-NMR (CDCl3, 200 MHz): δ 175.9 (s), 103.6 (d), 59.9 (d), 54.0 (q), 53.1 (q), 51.7 (q), 49.3 (t), 42.8 (t), 25.0 (d), 22.8 (q), 22.5 (q); MS m/z 233 (0.5), 202 (7.2), 174 (33), 158 (14), 75 (100); IR (CHCl3) 2915, 1729, 1130, 1065 cm-1; C11H23NO4 (233.30)の分析 計算値: C, 56.63; H, 9.94; N, 6.00. 実測値: C, 57.49; H, 9.90; N, 6.24.
【００２７】
乾燥ＤＣＭ（４．５ｍｌ）中の(Ｓ，Ｓ)−２，３−ジ−Ｏ−アセチル−酒石酸無水物（１ｇ，４．７ｍｍｏｌ）の懸濁液に、乾燥ＤＣＭ（２．５ｍｌ）中の式（ＩＩＩ）の化合物（ここで、Ｒ＝Ｌｅｕ側鎖）（１ｇ，４．７ｍｍｏｌ）の溶液を窒素雰囲気下０℃にて加えた。反応混合物を室温にて一晩攪拌した。溶媒を蒸発させた後、式（ＩＶ）の未精製生成物（ここで、Ｒ＝Ｌｅｕ側鎖）をＭｅＯＨ（８ｍｌ）中に溶解し、塩化チオニル（２９２μｌ，４ｍｍｏｌ）を０℃にて滴下しながら加えた。次いで、その混合物を６０℃に到達させ、２時間攪拌した。溶媒を除去し、式（Ｖ）の未精製生成物（ここで、Ｒ＝Ｌｅｕ側鎖）を黄色油として単離し、更に精製を行わずに次の工程に用いた。
【００２８】
トルエン（８ｍｌ）中の（Ｖ）（ここで、Ｒ＝Ｌｅｕ側鎖）（１．６３ｇ，４．７ｍｍｏｌ）の溶液を、トルエン（１２ｍｌ）中のＳｉＯ２／Ｈ２ＳＯ４（１ｇ）の還流懸濁液に素早く加えた。その混合物を３０分間反応させ、次いで、溶媒の３分の１を留去した。熱反応混合物をＮａＨＣＯ３のパッドを通してろ過し、溶媒を蒸発させた後、フラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル，ＥｔＯＡｃ／Ｐ．Ｅ.１：２）によって未精製生成物を精製し、（ＶＩ）（ここで、Ｒ＝Ｌｅｕ側鎖）が白色固体として得られた（７３０ｍｇ，３工程を通した収率５０％）。
[α]D2422.0 (c 1.0, MeOH); 1H-NMR (CDCl3, 200 MHz): δ 5.88 (d, J = 2 Hz, 1H), 5.09 (t, J = 8 Hz, 1H), 4.87 (s, 1H), 4.59 (s, 1H), 3.72 (s, 3H), 3.64 (s, 3H), 3.50 (dd, J1 = 12 Hz, J2= 2 Hz, 1H), 3.11 (dd, J1 = 12 Hz, J2 = 2 Hz, 1H), 1.67-1.60 (m, 2H), 1.46-1.32 (m, 1H), 0.88 (s, 3H), 0.84 (s, 3H); 13C-NMR (CDCl3, 200 MHz): δ 170.8 (s), 168.7 (s), 165.6 (s), 100.0 (d), 77.8 (d), 77.3 (d), 52.8 (d), 52.4 (q), 52.3 (q), 48.1 (t), 36.6 (t), 24.7 (d), 23.3 (q), 21.3 (q); MS m/z 315 (11), 256 (100), 240 (4); C14H21NO7 (315.33)の分析 計算値: C, 53.33; H, 6.71; N, 4.44. 実測値: C, 52.99; H, 5.58; N, 4.79.
【００２９】
（ＶＩ）（ここで、Ｒ＝Ｌｅｕ側鎖）（１ｇ，３．２ｍｍｏｌ）及びピペリジン（６．３ｍｌ，６３ｍｍｏｌ）を含有する溶液を６０℃にて一晩攪拌した。次いで、その反応混合物を減圧下で濃縮し、未精製の生成物をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル，ＤＣＭ／ＭｅＯＨ ２０：１）によって精製し、式（ＶＩＩ）の化合物［ここで、Ｒ＝Ｌｅｕ側鎖、Ｒ３及びＲ４＝−ＣＨ２(ＣＨ２)３ＣＨ２−（式（Ｉ）の化合物（ここで、Ｒ１＝−ＣＨ(Ｌｅｕ側鎖)ＣＯＯＣＨ３、Ｒ２＝Ｈ、Ｒ３及びＲ４＝−ＣＨ２(ＣＨ２)３ＣＨ２−）に相当する）］を黄色油として得た（８１６ｍｇ，収率７０％）。
[α]D2233.6 (c 1.0, CHCl3); 1H-NMR (CDCl3, 200 MHz):（２つの回転異性体の混合物）δ 5.79 (d, 1H, J = 1.4 Hz), 5.06-4.94 (m, 1H), 5.02 (s, 1H), 4.82 (s, 1H, minor), 4.71 (s, 1H, major), 3.62 (s, 3H, minor), 3.61 (s, 3H, major), 3.55-3.20 (m, 5H), 3.09 (d, J = 11.8 Hz, 1H), 1.67-1.34 (m, 9H), 0.86 (d, J = 4.8 Hz, 3H), 0.84 (d, J = 5.8 Hz, 3H); 13C-NMR(CDCl3, 200 MHz)（２つの回転異性体の混合物）: δ 171.1 (s, minor), 170.8 (s, major), 167.6 (s, minor), 166.8 (s, major), 164.9 (s, minor), 164.8 (s, major), 99.6 (d, major), 99.5 (d, minor), 78.0 (d), 76.4 (d), 52.7 (q), 52.4 (d, major), 52.2 (d, minor), 48.6 (t, major), 47.7 (t, minor), 46.4 (t), 43.5 (t), 36.7 (t, major), 35.8 (t, minor), 26.4 (t), 25.5 (t), 24.7 (d), 24.5 (t), 23.2 (q), 21.5 (q); MS m/z 368 (M+), 309 (21), 312 (100); IR (CHCl3) 2935, 1739, 1666 cm-1. C18H29N3O6 (368.43) の分析 計算値: C, 58.68; H, 7.66; N, 7.60. 実測値: C, 57.06; H, 7.50; N, 8.32.
【００３０】
例２．(２Ｓ)−２−[(１Ｒ，５Ｓ，７Ｓ)−７−(４−メチル−ピペラジン−１−カルボニル)−２−オキソ−６，８−ジオキサ−３−アザ−ビシクロ[３．２．１]オクト−３−イル]−４−メチル−ペンタン酸メチルエステル［式（Ｉ）の化合物、ここで、Ｒ１＝−ＣＨ(Ｌｅｕ側鎖)ＣＯＯＣＨ３、Ｒ２＝Ｈ、Ｒ３及びＲ４＝−ＣＨ２ＣＨ２Ｎ(ＣＨ３)ＣＨ２ＣＨ２−である］
化合物（Ｉ）（ここで、Ｒ１＝−ＣＨ(Ｌｅｕ側鎖)ＣＯＯＣＨ３、Ｒ２＝Ｈ、Ｒ３及びＲ４＝−ＣＨ２(ＣＨ２)３ＣＨ２−）について記載された手順に従い、化合物（ＶＩ）（ここで、Ｒ＝Ｌｅｕ側鎖）（１５０ｍｇ，０．４８ｍｍｏｌ）及び１−メチルピペラジン（１．０６ｍｌ，９．５ｍｍｏｌ）から出発して、化合物（Ｉ）（ここで、Ｒ１＝−ＣＨ(Ｌｅｕ側鎖)ＣＯＯＣＨ３、Ｒ２＝Ｈ、Ｒ３及びＲ４＝−ＣＨ２ＣＨ２Ｎ(ＣＨ３)ＣＨ２ＣＨ２−）を調製した。純化合物（Ｉ）（ここで、Ｒ１＝−ＣＨ(Ｌｅｕ側鎖)ＣＯＯＣＨ３、Ｒ２＝Ｈ、Ｒ３及びＲ４＝−ＣＨ２ＣＨ２Ｎ(ＣＨ３)ＣＨ２ＣＨ２−）（１２８ｍｇ，収率７２％）が黄色油として得られた。
[α]D2528.1 (c 0.9, CHCl3); 1H-NMR (CDCl3, 200 MHz): δ 5.85 (s, 1H), 5.12 (s, 1H), 5.05 (t, J = 8 Hz, 1H), 4.77 (s, 1H), 3.68 (s, 3H), 3.62-3.51 (m, 5H), 3.14 (d, J = 12 Hz, 1H), 2.42-2.33 (m, 4H), 2.72 (s, 3H), 1.73-1.65 (m, 2H), 1.49-1.42 (m, 1H), 0.92 (d, J = 6 Hz, 3H), 0.90 (d, J = 4 Hz, 3H); 13C-NMR (CDCl3, 200 MHz): δ 170.8 (s), 166.8 (s), 165.0 (s), 99.7 (d), 78.0 (d), 76.4 (d), 55.0, 54.6 (t), 52.8 (q), 52.5 (d), 48.6 (t), 46.1 (q), 45.4 (t), 42.3 (t), 36.9 (t), 24.8 (d), 23.3 (q), 21.6 (q); MS m/z 383 (23), 352 (2.4), 324 (9), 99 (55), 70 (100); IR (CHCl3) 2866, 1738, 1670 cm-1; C18H29N3O6 (383.44)の分析 計算値: C, 56.38; H, 7.62; N, 10.96. 実測値: C, 55.12; H, 6.88; N, 12.01.
【００３１】
例３．４'−メチル−(２'Ｓ)−２'−[(１Ｒ，５Ｓ，７Ｓ)−７−(モルホリン−４−カルボニル)−２−オキソ−６，８−ジオキサ−３−アザ−ビシクロ[３．２．１]オクト−３−イル]−ペンタン酸メチルエステル［式（Ｉ）の化合物、ここで、Ｒ１＝−ＣＨ(Ｌｅｕ側鎖)ＣＯＯＣＨ３、Ｒ２＝Ｈ、Ｒ３及びＲ４＝−ＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ２ＣＨ２−である］
式（Ｉ）の化合物（ここで、Ｒ１＝−ＣＨ(Ｌｅｕ側鎖)ＣＯＯＣＨ３、Ｒ２＝Ｈ、Ｒ３及びＲ４＝−ＣＨ２(ＣＨ２)３ＣＨ２−）について記載された手順に従い、化合物（ＶＩ）（ここで、Ｒ＝Ｌｅｕ側鎖）（１００ｍｇ，０．３２ｍｍｏｌ）及びモルホリン（０．５５ｍｌ，６．３ｍｍｏｌ）から出発して、式（Ｉ）の化合物（ここで、Ｒ１＝−ＣＨ(Ｌｅｕ側鎖)ＣＯＯＣＨ３、Ｒ２＝Ｈ、Ｒ３及びＲ４＝−ＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ２ＣＨ２−）を調製した。式（Ｉ）の純化合物（ここで、Ｒ１＝−ＣＨ(Ｌｅｕ側鎖)ＣＯＯＣＨ３、Ｒ２＝Ｈ、Ｒ３及びＲ４＝−ＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ２ＣＨ２−）（９５ｍｇ，収率６５％）が黄色油として得られた。
[α]D2229.0 (c 1.0, CHCl3); 1H-NMR (CDCl3, 200 MHz): δ 5.86 (d, J = 2 Hz, 1H), 5.16 (s, 1H), 5.06 (dd, J1 = J2= 8 Hz, 1H), 4.76 (s, 1H), 3.70 (s, 3H), 3.67-3.52 (m, 9H), 3.15 (d, J = 12 Hz, 1H), 1.75-1.67 (m, 2H), 1.53-1.43 (m, 1H), 0.94 (d, J = 6 Hz, 3H), 0.92 (d, J = 6 Hz, 3H); 13C-NMR (CDCl3, 200 MHz): δ 170.8 (s), 99.8 (d), 84.6 (d), 78.0 (d), 66.8 (t), 66.6 (t), 52.8 (q), 52.5 (d), 48.6 (t), 46.0 (t), 42.7 (t), 36.8 (t), 24.8 (d), 23.3 (q), 21.6 (q); MS m/z 370 (14), 311 (60), 283 (19), 168 (100); IR (CHCl3) 2932, 1735, 1668 cm-1; C17H26N2O7 (370.41)の分析 計算値: C, 55.13; H, 7.08; N, 7.56. 実測値: C, 54.27; H, 6.40; N, 7.22.
【００３２】
例４．(２Ｓ)−２−[(１Ｒ，５Ｓ，７Ｓ)−７−(４−ベンジル−ピペラジン−１−カルボニル)−２−オキソ−６，８−ジオキサ−３−アザ−ビシクロ[３．２．１]オクト−３−イル]−４−メチル−ペンタン酸メチルエステル［式（Ｉ）の化合物、ここで、Ｒ１＝−ＣＨ(Ｌｅｕ側鎖)ＣＯＯＣＨ３、Ｒ２＝Ｈ、Ｒ３及びＲ４＝−ＣＨ２ＣＨ２Ｎ(ベンジル)ＣＨ２ＣＨ２−である］
式（Ｉ）の化合物（ここで、Ｒ１＝−ＣＨ(Ｌｅｕ側鎖)ＣＯＯＣＨ３、Ｒ２＝Ｈ、Ｒ３及びＲ４＝−ＣＨ２(ＣＨ２)３ＣＨ２−）について記載された手順に従い、式（ＶＩ）の化合物（ここで、Ｒ＝Ｌｅｕ側鎖）（１００ｍｇ，０．３２ｍｍｏｌ）及び１−ベンジルピペラジン（１．１ｍｌ，６．３ｍｍｏｌ）から出発して、式（Ｉ）の化合物（ここで、Ｒ１＝−ＣＨ(Ｌｅｕ側鎖)ＣＯＯＣＨ３、Ｒ２＝Ｈ、Ｒ３及びＲ４＝−ＣＨ２ＣＨ２Ｎ(ベンジル)ＣＨ２ＣＨ２−）を調製した。式（Ｉ）の純化合物（ここで、Ｒ１＝−ＣＨ(Ｌｅｕ側鎖)ＣＯＯＣＨ３、Ｒ２＝Ｈ、Ｒ３及びＲ４＝−ＣＨ２ＣＨ２Ｎ(ベンジル)ＣＨ２ＣＨ２−）（１０６ｍｇ，収率７２％）が黄色油として得られた。
[α]D2320.1 (c 1.1, CHCl3); 1H-NMR (CDCl3, 200 MHz):δ 7.42-7.27 (m, 5H), 5.88 (s, 1H), 5.25-5.05 (m, 2H), 4.79 (s, 1H), 3.71 (s, 3H), 3.63-3.53 (m, 7H), 3.16 (d, J = 11.6 Hz, 1H), 2.51-2.45 (m, 4H), 1.76-1.68 (m, 2H), 1.55-1.25 (m, 1H), 0.96 (d, J = 5, 3H), 0.93 (d, J = 6.2 Hz, 3H); 13C-NMR (CDCl3, 200 MHz):δ 170.8 (s), 166.8 (s), 165.0 (s), 129.1 (d), 128.3 (d), 127.3 (d), 99.7 (d), 78.0 (d), 76.4 (d), 62.9 (t), 52.9 (q), 52.7, 52.7 (t), 52.5 (d), 48.5 (t), 45.5, 42.4 (t), 36.8 (t), 24.8 (d), 23.3 (q), 21.6 (q); MS m/z 459 (10), 400 (1), 330 (1), 175 (19), 91 (100); IR (CHCl3) 2940, 1740, 1672 cm-1; C24H33N3O6 (459.55)の分析 計算値: C, 62.73; H, 7.24; N, 9.14. 実測値: C, 61.34; H, 6.82; N, 8.50.
【００３３】
例５．(２Ｓ)−２−[(１Ｒ，５Ｓ，７Ｓ)−７−(４−フェニルエチル−ピペラジン−１−カルボニル)−２−オキソ−６，８−ジオキサ−３−アザ−ビシクロ[３．２．１]オクト−３−イル]−４−メチル−ペンタン酸メチルエステル［式（Ｉ）の化合物、ここで、Ｒ１＝−ＣＨ(Ｌｅｕ側鎖)ＣＯＯＣＨ３、Ｒ２＝Ｈ、Ｒ３及びＲ４＝−ＣＨ２ＣＨ２Ｎ(−ＣＨ２ＣＨ２Ｐｈ)ＣＨ２ＣＨ２−である］
式（Ｉ）の化合物（ここで、Ｒ１＝−ＣＨ(Ｌｅｕ側鎖)ＣＯＯＣＨ３、Ｒ２＝Ｈ、Ｒ３及びＲ４＝−ＣＨ２(ＣＨ２)３ＣＨ２−）について記載された手順に従い、式（ＶＩ）の化合物（ここで、Ｒ＝Ｌｅｕ側鎖）（１００ｍｇ，０．３２ｍｍｏｌ）及び１−フェニルエチルピペラジン（１．２ｍｌ，６．３ｍｍｏｌ）から出発して、式（Ｉ）の化合物（ここで、Ｒ１＝−ＣＨ(Ｌｅｕ側鎖)ＣＯＯＣＨ３、Ｒ２＝Ｈ、Ｒ３及びＲ４＝−ＣＨ２ＣＨ２Ｎ(−ＣＨ２ＣＨ２Ｐｈ)ＣＨ２ＣＨ２−）を調製した。式（Ｉ）の純化合物（ここで、Ｒ１＝−ＣＨ(Ｌｅｕ側鎖)ＣＯＯＣＨ３、Ｒ２＝Ｈ、Ｒ３及びＲ４＝−ＣＨ２ＣＨ２Ｎ(−ＣＨ２ＣＨ２Ｐｈ)ＣＨ２ＣＨ２−）（８９ｍｇ，収率５９％）が黄色油として得られた。
[α]D2521.3 (c 0.9, CHCl3); 1H-NMR (CDCl3, 200 MHz):δ 7.33-7.18 (m, 5H), 5.88 (d, J = 2 Hz, 1H), 5.17 (s, 1H), 5.09 (dd, J1 = 8 Hz, J2 = 6 Hz, 1H), 4.81 (s, 1H), 3.72 (s, 3H), 3.78-3.63 (m, 4H), 3.57 (dd, J1 = 12 Hz, J2 = 2 Hz, 1H), 3.18 (d, J = 12 Hz, 1H), 2.88-2.80 (m, 2H), 2.70-2.58 (m, 6H), 1.78-1.70 (m, 2H), 1.53-1.25 (m, 1H), 0.98 (d, J = 6 Hz, 3H), 0.94 (d, J = 6 Hz, 3H); 13C-NMR (CDCl3, 200 MHz):δ 170.6 (s), 166.5 (s), 164.8 (s), 138.5 (s), 128.4 (d), 128.3 (d), 126.1 (d), 99.5 (d), 77.7 (d), 76.9 (d), 59.5 (t), 52.6 (q), 52.4, 52.2 (t), 51.9 (d), 48.2, 44.3 (t), 41.3 (t), 36.5 (t), 32.4 (t), 24.4 (d), 22.8 (q), 21.2 (q); MS m/z 414 (1), 382 (95), 56(100); IR (CHCl3) 2923, 1740, 1672 cm-1; C25H35N3O6 (473.57)の分析 計算値: C, 63.41; H, 7.45; N, 8.87. 実測値: C, 62.28; H, 7.01; N, 8.96.
【００３４】
例６．(２Ｓ)−４−メチル−２−[(１Ｒ，５Ｓ，７Ｓ)−２−オキソ−７−(ピペリジン−１−カルボニル)−６，８−ジオキサ−３−アザ−ビシクロ[３．２．１]オクト−３−イル]−ペンタン酸(３−ブチルカルバモイル−２−ヒドロキシ−プロピル)−アミド［式（Ｉ）の化合物、ここで、Ｒ１＝−ＣＨ(Ｌｅｕ側鎖)ＣＯＲ５、Ｒ２＝Ｈ、Ｒ３及びＲ４＝−ＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ２ＣＨ２−、Ｒ５＝−ＮＨＣＨ２ＣＨ(ＯＨ)ＣＨ２ＣＯＮＨＢｕである］
ＤＣＭ（４ｍｌ）中の４−アミノ−３−ヒドロキシ−酪酸メチルエステル塩酸塩（３７ｍｇ，０．２２ｍｍｏｌ）の溶液に、窒素雰囲気下、０℃にて、ＰｙＢｒＯＰ（１０２ｍｇ，０．２２ｍｍｏｌ）と、式（Ｉ）の化合物（ここで、Ｒ１＝−ＣＨ(Ｌｅｕ側鎖)ＣＯＯＣＨ３、Ｒ２＝Ｈ、Ｒ３及びＲ４＝−ＣＨ２(ＣＨ２)３ＣＨ２−）のＬｉＯＨによる塩基性エステル加水分解によって予め得られた、(２Ｓ)−４−メチル−２−[(１Ｒ，５Ｓ，７Ｓ)−２−オキソ−７−(ピペリジン−１−カルボニル)−６，８−ジオキサ−３−アザ−ビシクロ[３．２．１]オクト−３−イル]−ペンタン酸（８０ｍｇ，０．２２ｍｍｏｌ）と、ＤＩＰＥＡ（８５μｌ，０．５ｍｍｏｌ）とを加えた。得られた溶液を室温に到達させて、一晩攪拌させた。次いで、反応混合物をＮａＨＣＯ３の飽和溶液、水性５％ＫＨＳＯ４及び食塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させた。溶媒を蒸発させた後、未精製生成物をＥｔＯＡｃ中で希釈させ、ＰｙＢｒＯＰを沈殿させるために４℃にて３時間放置した。フラッシュクロマトグラフィーによる精製の後、得られた化合物（４０ｍｇ，０．０８ｍｍｏｌ）を、ＴＨＦ（２００μｌ）及び２滴のＨ２Ｏの混合物中で、ｎ−ブチルアミン（１６８μｌ，１．７ｍｍｏｌ）により、５０℃にて３日間処理した。Ａｍｂｅｒｌｙｓｔ１５上での反応混合物のろ過、更にはカラムクロマトグラフィー（シリカゲル，ＤＣＭ／ＭｅＯＨ ２０：１）による精製によって、式（Ｉ）の化合物（ここで、Ｒ１＝−ＣＨ(Ｌｅｕ側鎖)ＣＯＲ５、Ｒ２＝Ｈ、Ｒ３及びＲ４＝−ＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ２ＣＨ２−、Ｒ５＝−ＮＨＣＨ２ＣＨ(ＯＨ)ＣＨ２ＣＯＮＨＢｕ）が無色油として得られた。
1H-NMR (CDCl3, 200 MHz):δ 6.81-6.68 (m, 1H), 6.41-6.22 (m, 1H), 5.90, 5.86 (s, 1H, ２つのジアステレオ異性体の混合物), 5.14-4.81 (m, 3H), 4.13-3.92 (m, 1H), 3.66-3.35 (m, 6H), 3.36-3.02 (m, 4H), 2.28 (d, J = 5.2 Hz, 2H), 1.88-1.20 (m, 13H), 0.97-0.87 (m, 9H); 13C-NMR (CDCl3, 200 MHz):δ 171.5 (s), 170.2 (s), 168.0 (s), 164.8 (s), 99.6 (d), 77.9 (d), 67.9 (d), 54.1, 53.9 (d), 47.6 (t), 46.6 (t), 44.5 (t), 43.6 (t), 39.4 (t), 36.4 (t), 34.9 (t), 31.6 (t), 26.4 (t), 25.6 (t), 24.9 (d), 24.6 (t), 23.1 (q), 22.0 (q), 20.3 (t), 13.9 (q); MS m/z 510 (3), 309 (34), 112 (69), 84 (100).
【００３５】
選択された本発明の化合物の生体外及び生体内活性について、非制限的な説明を与えるため、以下に示す例を報告する。
【００３６】
プロテアーゼ酵素アッセイ
分光光度法：
式（Ｉ）の各種化合物のプロテアーゼ活性は、同一濃度でのペプスタチン活性に対する分光光度アッセイによって測定された：各アッセイは、ｐＨ３．２の５０ｍＭクエン酸ナトリウム中１％（ｗ／ｖ）ＢＳＡ０．４ｍｌ及びプロテアーゼ溶液（１μｇ／ｍｌ）５０μｌにおいてサンプル５０μｌを含んだ。３７℃にて３０分後、１０％（ｗ／ｖ）トリクロロ酢酸１ｍｌを加えた。チューブを氷中にて３０分間保存し、次いで、１０分間遠心分離にかけた（３０００ｇ）。上澄みの吸光度を２８０ｎｍで読んだ。対照：クエン酸塩緩衝液中１％ＢＳＡ。酵素の一のユニットは、１ｍｉｎ−１のΔＡ２８０を触媒した。純プロテアーゼの場合、アッセイは、ΔＡ２８００．１−０．４の範囲に亘って酵素濃度に比例した。検出下限は１μｇであった（De Bernardis F., Sullivan P.A., Cassone A. Medical Mycology 2001, 39, 303）。
【００３７】
表１．本発明の代表的な化合物のＳＡＰ２に対する生体外活性。Ｉ％は、同一濃度１０μＭでのペプスタチンに対する阻害率である。
【化５】
【００３８】
【表１】
【００３９】
生体内アッセイ
実験的膣感染：
実験的膣感染については、前述のラット膣モデルを採用した（De Bernardis, F.; Boccanera, M.; Adriani, D.; Spreghini, E.; Santoni, G.; Cassone, A. Infect. Immun., 1997, 65, 3399）。
【００４０】
簡単に説明すると、卵巣を摘出された雌のウィスターラット（８０−１００ｇ；Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｃａｌｃｏ，イタリア）は、安息香酸エストラジオール０．５ｍｇ（Ｅｓｔｒａｄｉｏｌｏ，Ａｍｓａ Ｆａｒｍａｃｅｕｔｉｃｉ ｓｒｌ，ローマ，イタリア）を皮下に注射された。１回目のエストラジオールの６日後に、その動物は、試験されるＣ．アルビカンス株それぞれの食塩溶液０．１ｍｌ中の１０７酵母細胞を膣内接種された。接種材料は、多目的目盛り付きチップ（Ｃｏｍｂｉｔｉｐ；ＰＢＩ，ミラノ，イタリア）を備えたシリンジを介して膣腔中に投薬された。酵母細胞は、あらかじめ、旋回シェーカー（２００ｒｐｍ）上、２８℃のＹＰＤブロス（酵母エキス１％；ペプトン２％；デキストロース２％）中で成長し、遠心分離（１５００ｇ）によって収集され、洗浄され、血球計数器でカウントされ、所要の数だけ食塩溶液中において懸濁させた。膣液中の細胞数は、前述のクロラムフェニコール（５０μｇ／ｍｌ）を含有するサブロー培地上で、（目盛り付きプラスチック製ループ（Ｄｉｓｐｏｎｏｉｃ，ＰＢＩ，ミラノ，イタリア）を用いて）各動物から取った、サンプル１００μｌを培養することによってカウントされた。少なくとも１ＣＦＵが膣洗浄に見られた場合、即ち、数値が＞１０３ＣＦＵ／ｍｌの場合に、ラットが感染したと見なした。
【００４１】
生体内研究用の代表的な例として、上記した式（１）の化合物の一つであり、以下ＡＰＧ１２と名付けた、表１の化合物６に対応するものを、２つの異なる株、即ちＳＡ４０及び薬物耐性ＡＩＤＳ６８の膣内カンジダ・アルビカンス投与の１時間、２４時間、４８時間後に、１０μＭの濃度で膣内に投与した。ポジティブ（ペプスタチン１０μｇ；フルコナゾール１０μｇ）及びネガティブ（無菌食塩溶液）を同様に投与した。
【００４２】
ＡＰＧ１２で膣内処置されたラットにおけるカンジダ・アルビカンスクリアランスのプロファイルは、天然ＳＡＰ２阻害剤ペプスタチンで処置したラットと、フルコナゾールで処置したラットにおいて観測された促進に似ている（表２及び図１）。更に重要なことには、薬物耐性ＡＩＤＳ６８株におけるカンジダ・アルビカンスクリアランスの促進は、天然ＳＡＰ２阻害剤ペプスタチンとＡＰＧ１２の両方の有効性を示すが、未処理対照に似たクリアランスプロファイルが示すように、フルコナゾールは無効である（表３及び図２）。
【００４３】
表２．投与の（１時間、２４時間、４８時間）後にＡＰＧ１２で膣内治療されたラットにおけるカンジダＳＡ４０クリアランスの促進
【００４４】
【表２】
【００４５】
全値×１０００；ＳＡ４０：未処理対照；開始１日目で、ＡＰＧ１２処理と未処理対照間の違いはすべて統計的に有意である；（Ｐ＜０．０１，マンホイットニーＵ検定）
【００４６】
表３．投与の（１時間、２４時間、４８時間）後にＡＰＧ１２で膣内治療されたラットにおけるカンジダＡＩＤＳ６８クリアランスの促進
【００４７】
【表３】
【００４８】
全値×１０００；ＡＩＤＳ６８：未処理対照；開始１日目で、ＡＰＧ１２処理と未処理対照間の違いはすべて統計的に有意である；（Ｐ＜０．０１，マンホイットニーＵ検定）
【技術分野】
【０００１】
本発明は、感染症、特にはアスパルチル−プロテアーゼ活性を発現する微生物病原体に起因する病態、の治療に有用な一般式（Ｉ）の３−アザ−ビシクロ[３．２．１]オクタン誘導体について言及する。
【０００２】
具体的に、本発明は、真菌感染症の治療用カンジダ・アルビカンスＳＡＰ２阻害剤として、ＨＩＶ感染症の治療用ＨＩＶプロテアーゼ阻害剤として、又はマラリア治療用プラスメプシン若しくはヒスト−アスパルチルプロテアーゼ（ＨＡＰ）阻害剤としての、一般式（Ｉ）の化合物、及びその代謝物について言及する。
【背景技術】
【０００３】
アスパルチルプロテアーゼは、異なる生理学的及び機能的特性を持つ多くの生物及び組織において広範に分布しており、活性部位に２つのアスパルチル残基を含有し、一方はプロトン化され、他方はされておらず、一般的な酸−塩基触媒として一緒に作用する。２つのアスパラギン酸塩残基の間に結合した水分子は、アミド結合加水分解用の求核試薬であると考えられており、それは、脱プロトン化した触媒のアスパラギン酸残基によって活性化される。ペプチド加水分解を触媒するため、２つのアスパラギン酸残基は、分子の三次構造において十分に接近する必要がある。アスパラギン酸プロテアーゼの大部分は、ペプシン及びキモトリプシン等の消化酵素の他、レニン及びある種の真菌プロテアーゼ（カンジダ・アルビカンスＳＡＰｓ、ペニシロペプシン等）等のリソソームカテプシンＤ及びプロセシング酵素を含めた、ペプシンファミリーに属している。アスパラギン酸プロテアーゼの第二のファミリーは、ＨＩＶ等のウイルスプロテアーゼを含み、レトロペプシンともいわれる。アスパラギン酸プロテアーゼの活性部位は、一般に、選択的不可逆的阻害剤によって化学修飾されるのに求核性が十分にある基を含有しない。このため、今までに開発されたアスパラギン酸プロテアーゼ阻害剤の大部分は、非共有結合性の相互作用を介してそれらの標的酵素に結合する。従って、それらの化合物は、可逆的阻害剤であり、酵素がその天然基質と比べて阻害剤の方に高い親和性を示す場合、結果として効果的な阻害となる（非特許文献１）。
【０００４】
酵素触媒反応の遷移状態と似ている安定な構造は、基質と比べてより強固に酵素を結合するはずであると提案された。結果として、効果的なアスパルチルプロテアーゼ阻害剤の設計に非常に成功したアプローチは、遷移状態アイソスターのペプチド模倣構造への取り込みに基づいている。
【０００５】
カンジダ・アルビカンスは、日和見性真菌病原体であり、特に免疫不全患者において重度の全身感染症を引き起こす。いくらかの抗真菌薬が利用可能であるものの、Ｃ．アルビカンスに対する新規な薬物の必要性は、カンジダに原因する粘膜及び全身感染症の広範な発生と利用可能な薬物に対する抵抗の発生の両方が原因で、激しさを増している（非特許文献２）。実際、薬物の有効性にもかかわらず、カンジダ・アルビカンスは、罹患率、入院費用及び死亡率の非常に起こりやすい原因として位置付けられている（非特許文献３）。疾患を引き起こす能力は、おそらくカンジダと宿主間の多重相互作用を伴う複雑な過程であるが、分泌性アスパルチルプロテアーゼ（ＳＡＰｓ）活性は、主要な病原性因子であるように思われるため、感染症の薬物療法に対して可能性のある標的を提供する。カンジダ株は、同一疾患の経過中に少なくとも９個の異なる遺伝子（ＳＡＰ１−９）を発現するが、感染症の異なる段階で、異なるＳＡＰｓは異なる機能を有することが示されており（非特許文献４）；特にそれらの中でも、ＳＰＡ２は、宿主での持続的コロニー形成及び侵入に関与する中で最も発現する酵素の一つである。
【０００６】
アスパルチルプロテアーゼ活性の阻害剤の必要性について、他の強力な証拠としては、以下の側面によるものが挙げられる。
・カンジダ・アルビカンスに原因する感染症の免疫不全患者は、全身カンジダ症にかかる場合や、更には一般的な治療法に対する抵抗を発生する可能性がある。
・ＨＩＶ及びＨＴＶＬウイルスは、ウイルス成熟に関し、アスパルチルプロテアーゼに依存する。
・熱帯熱マラリア原虫は、ヘモグロビンを処理するのにプラスメプシンＩ及びＩＩを使用する。
【０００７】
近年、アスパルチルプロテアーゼが重要な役割を果たす病原微生物に対するＨＩＶプロテアーゼ阻害剤（ＨＩＶ−ＰＩ）の阻害活性が実証されている（非特許文献５）。特に、ＨＩＶ−ＰＩは、カンジダ・アルビカンス（非特許文献６）とマラリアプラスメプシンＩＩ及びＩＶ（非特許文献７）の両方のアスパルチルプロテアーゼに対してマイクロモル濃度の活性を示す。かかる結果は、それら分子の柔軟性及びＨＩＶ−１のアスパルチルプロテアーゼとカンジダ・アルビカンスのＳＡＰ２の間での一部の構造類似性に従っている。
【０００８】
従って、アスパルチルプロテアーゼに対して阻害活性を有する新規化合物は、真菌感染症の治療用カンジダ・アルビカンスＳＡＰ２阻害剤として、ＨＩＶ感染症の治療用ＨＩＶプロテアーゼ阻害剤として、又はマラリア治療用プラスメプシン若しくはヒスト−アスパルチルプロテアーゼ（ＨＡＰ）阻害剤として作用することができる。
【０００９】
式（Ｉ）の化合物が知られている。
【化１】
ここで、
Ｒ１は、Ｈ、ベンジル、ｐ−メトキシベンジル及びビンズヒドリルからなる群の中で選択され、好ましくはベンジルであり；
Ｒ２は、Ｈ、アルキル、アリール及びアルキルアリールからなる群の中で選択され、好ましくはＨ、ベンジル、メチル又はイソブチルであり；
Ｒ３及びＲ４は、独立して、Ｈ、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、アリール、ヒドロキシアルキル、アルコキシアルキル、アルコキシカルボニル及び−ＣＨ(α−アミノ酸側鎖)ＣＨ２ＯＨからなる群の中で選択され、好ましくはＨ、ヒドロキシエチル、プロパルギル又は−ＣＨ(α−アミノ酸側鎖)ＣＨ２ＯＨであるか；或いは
Ｒ３及びＲ４は、それらが結合している窒素原子と一緒に、最終的に置換された環、好ましくはピペリジン、４−ヒドロキシエチル−ピペラジン、４−カルボエトキシ−ピペラジン、又はモルホリンを形成することができ；可能性のある立体異性体の組み合わせが全て含まれる。
【００１０】
それらの調製は、非特許文献８〜１４において報告されている。
【００１１】
ニューロトロフィン活性の欠損に関連した病態の治療用医薬組成物におけるそれらの使用は、ＷＯ２００４／０００３２４（特許文献１）に記載されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１２】
【特許文献１】ＷＯ２００４／０００３２４
【非特許文献】
【００１３】
【非特許文献１】Tacconelli, E. et al. Curr. Med. Chem. 2004, 4, 49
【非特許文献２】Shao, P. -L. et al. Int. J. Antimicrob. Agents 2007, 30, 487
【非特許文献３】Pfaller MA & D:J:Diekema. Epidemiology of invasive Candidiasis: a persistent public health Problem. Clin.Microbiol.Rev. 2007;20:133-163
【非特許文献４】Schaller, M. et al. J. Invest. Dermatol. 2000, 114, 712
【非特許文献５】Tacconelli et al., Curr. Med. Chem., 2004, 4, 49
【非特許文献６】Cassone et al., J. Infect. Dis., 1999, 180, 448
【非特許文献７】Andrews et al., Antimicrob. Agents Chemother. 2006, 639
【非特許文献８】J. Org. Chem. 1999, 64, 7347
【非特許文献９】J. Org. Chem. 2002, 67, 7483
【非特許文献１０】Bioorg. Med. Chem. 2001, 9, 1625
【非特許文献１１】Eur. J. Org. Chem. 2002, 873
【非特許文献１２】J. Org. Chem. 2002, 67, 7483
【非特許文献１３】C. R. Chimie 2003, 631
【非特許文献１４】J. Comb. Chem. 2007, 9, 454
【発明の概要】
【００１４】
従って、本発明の目的は、特にはＳＡＰ２の、アスパルチルプロテアーゼ活性に関連した病態の治療用、特には免疫抑制患者におけるカンジダ・アルビカンスの薬物耐性全身感染症の治療用の、薬剤を調製するための、代替化合物を提供することにある。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】投与の（１時間、２４時間、４８時間）後にＡＰＧ１２で膣内治療されたラットにおけるＣ．アルビカンスＳＡ４０の膣感染である。
【図２】投与の（１時間、２４時間、４８時間）後にＡＰＧ１２で膣内治療されたラットにおけるＣ．アルビカンスＡＩＤＳ６８の膣感染である。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
本発明は、式（Ｉ）の化合物について言及するものである。
【化２】
ここで、
Ｒ１は、−ＣＨ(Ｒ)ＣＯＲ５であり；
Ｒは、α−アミノ酸側鎖であり、好ましくは、前記α−アミノ酸がＧｌｙ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、Ａｌａ、Ｐｈｅ、Ｐｈｇ、Ｎｌｅ及びＮｖａからなる群から選択され；
Ｒ２は、Ｈ、アルキル、アリール又はアルキルアリールであり、好ましくは、Ｈ、ベンジル、メチル又はイソブチルであり；
Ｒ３及びＲ４は、独立して、Ｈ、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、アルキルアリール、アリール、ヒドロキシアルキル、アルコキシアルキル、アルコキシカルボニル及び−ＣＨ(α−アミノ酸側鎖)ＣＨ２ＯＨからなる群の中で選択され、好ましくは、Ｈ、ヒドロキシエチル、プロパルギル若しくは−ＣＨ(Ｌｅｕ側鎖)ＣＨ２ＯＨであるか；又は
Ｒ３及びＲ４は、それらが結合している窒素原子と一緒に、最終的に置換された、５〜８員環、好ましくは、ピペリジン、４−ヒドロキシエチル−ピペラジン、４−カルボエトキシ−ピペラジン、４−ベンジル−ピペラジン、４−フェネチル−ピペラジン若しくはモルホリンを形成することができ；
Ｒ５は、−Ｏアルキル、−Ｏアリール、−ＮＨアルキル、ＮＨアリール、アミノ酸及びペプチドからなる群の中で選択され、好ましくは、−ＯＣＨ３又はＮＨＣＨ２ＣＨ(ＯＨ)ＣＨ２ＣＯＮＨＢｕであり；
可能性のある立体異性体の組み合わせの全てが含まれる。
【００１７】
驚くべきことには、式（Ｉ）
【化３】
［式中：
Ｒ１は、ベンジル、フェニル及び−ＣＨ(Ｒ)ＣＯＲ５からなる群の中で選択され、好ましくは、ベンジル又は−ＣＨ(Ｒ)ＣＯＲ５であり；
Ｒは、α−アミノ酸側鎖であり、好ましくは、前記α−アミノ酸がＧｌｙ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、Ａｌａ、Ｐｈｅ、Ｐｈｇ、Ｎｌｅ及びＮｖａからなる群から選択され；
Ｒ２は、Ｈ、アルキル、アリール又はアルキルアリールであり、好ましくは、Ｈ、ベンジル、メチル又はイソブチルであり；
Ｒ３及びＲ４は、独立して、Ｈ、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、アルキルアリール、アリール、ヒドロキシアルキル、アルコキシアルキル、アルコキシカルボニル及び−ＣＨ(α−アミノ酸側鎖)ＣＨ２ＯＨからなる群の中で選択され、好ましくは、Ｈ、ヒドロキシエチル、プロパルギル若しくは−ＣＨ(Ｌｅｕ側鎖)ＣＨ２ＯＨであるか；又は
Ｒ３及びＲ４は、それらが結合している窒素原子と一緒に、最終的に置換された、５〜８員環、好ましくは、ピペリジン、４−ヒドロキシエチル−ピペラジン若しくは４−カルボエトキシ−ピペラジンを形成することができ；
Ｒ５は、−Ｏアルキル、−Ｏアリール、−ＮＨアルキル、ＮＨアリール、α−アミノ酸及びペプチドからなる群の中で選択され、好ましくは、−ＯＣＨ３又はＮＨＣＨ２ＣＨ(ＯＨ)ＣＨ２ＣＯＮＨＢｕであり；
可能性のある立体異性体の組み合わせの全てが含まれる］の化合物が、生体外及び生体内の両方におけるＳＡＰ２の強力な阻害剤であることを見出し、それ故に、それらは、好ましくはカンジダ・アルビカンス、ＨＩＶ、ＨＴＶＬ又は熱帯熱マラリア原虫に関連した、感染性疾患の治療用薬剤を調製するために使用できる。
【００１８】
本発明の一態様は、少なくとも式（Ｉ）の化合物と、少なくとも他の薬剤的に容認できる成分、賦形剤、キャリヤー又は希釈剤とを含有する医薬組成物に関するものであり、ここで、Ｒ１は、−ＣＨ(α−アミノ酸側鎖)ＣＯＲ５であり、好ましくは、かかるα−アミノ酸が、Ｇｌｙ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、Ａｌａ、Ｐｈｅ、Ｐｈｇ、Ｎｌｅ及びＮｖａからなる群の中で選択される。
【００１９】
本発明によれば：
アルキルは、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシル、ヘプチル、オクチル、エテニル、プロペニル、ブテニル、イソブテニル、アセチレニル、プロピニル、ブチニル等の線状又は枝分かれしたラジカル鎖を意味しており；
アリールは、芳香環又はＮ、Ｏ、Ｓのようなヘテロ原子を含有する芳香族複素環を意味する。
【００２０】
アミノ酸側鎖は、「アミノ酸」に結合している側鎖として種々の置換基を意味する。「アミノ酸」の語は、Ｌ又はＤシリーズのあらゆる天然α−アミノ酸を含み、「側鎖」として、グリシンでは−Ｈ、アラニンでは−ＣＨ３、バリンでは−ＣＨ(ＣＨ３)２、ロイシンでは−ＣＨ２ＣＨ(ＣＨ３)２、イソロイシンでは−ＣＨ(ＣＨ３)ＣＨ２ＣＨ３、セリンでは−ＣＨ２ＯＨ、トレオニンでは−ＣＨ(ＯＨ)ＣＨ３、システインでは−ＣＨ２ＳＨ、メチオニンでは−ＣＨ２ＣＨ２ＳＣＨ３、フェニルアラニンでは−ＣＨ２−(フェニル)、チロシンでは−ＣＨ２−(フェニル)−ＯＨ、トリプトファンでは−ＣＨ２−(インドール)、アスパラギン酸では−ＣＨ２ＣＯＯＨ、アスパラギンでは−ＣＨ２Ｃ(Ｏ)(ＮＨ２)、グルタミン酸では−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨ、グルタミンでは−ＣＨ２ＣＨ２Ｃ(Ｏ)ＮＨ２、アルギニンでは−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−Ｎ(Ｈ)Ｃ(ＮＨ２)ＮＨ、ヒスチジンでは−ＣＨ２−(イミダゾール)、リシンでは−ＣＨ２(ＣＨ２)３ＮＨ２を有しており、アミノ酸の同一の側鎖が適切な保護基を持つものを含む。更に、「アミノ酸」の語は、非天然アミノ酸を含み、オルニチン（Ｏｒｎ）、ノルロイシン（Ｎｌｅ）、ノルバリン（ＮＶａ）、β−アラニン、Ｌ又はＤのα−フェニルグリシン（Ｐｈｇ）、ジアミノプロピオン酸、ジアミノ酪酸、アミノヒドロキシ酪酸の他、ペプチドケミストリー技術において周知のもの等である。
【００２１】
スキーム１は、上述の式（Ｉ）の化合物の合成的調製を要約するものであり、ここで、Ｒ１は−ＣＨ(Ｒ)ＣＯＲ５であり、Ｒは、市販の又は容易に合成可能なα−アミノ酸誘導体（ＩＩ）からのα−アミノ酸側鎖である。
【００２２】
【化４】
【００２３】
プロトン性溶媒、好ましくはメタノール中で、還元剤、好ましくはＨ２及び触媒、好ましくはＰｄ／Ｃを用いた、市販の又は容易に合成可能なジカルボニル誘導体、例えばジメトキシ−アセトアルデヒドによるアミノ酸誘導体（ＩＩ）の還元的アルキル化は、周囲温度で、好ましくは２５℃で１６時間、攪拌した後、第２級アミン（ＩＩＩ）を提供する。或いは、極性溶媒、好ましくはＤＭＦ中、塩基、好ましくはＮＥｔ３の存在下で且つ触媒、好ましくはＫＩの存在下、化合物（ＩＩ）を、良好な脱離基（スキーム１のＸ）を含有する市販の又は容易に合成可能なアセタール誘導体、例えばブロモアセトアルデヒドジメチルアセタールと共に、好ましくは１２０℃にて、加熱する。アミン（ＩＩＩ）は、ジ−Ｏ−アセチル−酒石酸無水物とのカップリング反応を介して、首尾よくアミド（ＩＶ）に変換される。極性溶媒中の酸、好ましくはＭｅＯＨ中の塩化チオニルによるクルード（ＩＶ）の処理は、環状アセタール（Ｖ）を提供し、それは、酸触媒、好ましくはシリカゲル上のＨ２ＳＯ４の存在下、非極性溶媒中、好ましくは還流トルエン中で３０分間、更に加熱され、（ＶＩ）が得られる。
【００２４】
アミド（Ｉ）の合成は、活性化剤を使用せず、ニートのアミンの存在下、好ましくは６０℃で１８時間、メチルエステル（ＶＩ）を加熱することによって達成される。
【００２５】
本発明の非制限的な説明を行うため、以下に示す例を報告する。
【実施例】
【００２６】
実験の詳細
例１．(２Ｓ)−４−メチル−２−[(１Ｒ，５Ｓ，７Ｓ)−２−オキソ−７−(ピペリジン−１−カルボニル)−６，８−ジオキサ−３−アザ−ビシクロ[３．２．１]オクト−３−イル]−ペンタン酸メチルエステル［式（Ｉ）の化合物、ここで、Ｒ１＝−ＣＨ(Ｌｅｕ側鎖)ＣＯＯＣＨ３、Ｒ２＝Ｈ、Ｒ３及びＲ４＝−ＣＨ２(ＣＨ２)３ＣＨ２−である］
Ｌ−ロイシンメチルエステル塩酸塩（２．９ｇ，１６ｍｍｏｌ）、２−ブロモ−１，１−ジメトキシエタン（１．９ｍｌ，２．７ｇ，１６ｍｍｏｌ）、ＮＥｔ３（６．７ｍｌ，４８ｍｍｏｌ）及び触媒量のＫＩをＤＭＦ（１９０ｍｌ）中に含有する溶液を１２０℃にて３日間攪拌した。その反応溶液を減圧下で濃縮し、水で希釈し、ＤＣＭで抽出した。次いで、有機層を食塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、蒸発させた。未精製の生成物をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル，ＥｔＯＡｃ／Ｐ．Ｅ．１：１）によって精製し、式（ＩＩＩ）の化合物（ここで、Ｒ＝Ｌｅｕ側鎖）を黄色油として得た（１．２ｇ，収率３２％）。
[α]D24-3.32 (c 1.0, CHCl3); 1H-NMR (CDCl3, 200 MHz): δ 4.38 (t, J = 6 Hz, 1H), 3.65 (s, 3H), 3.30 (s, 3H), 3.29 (s, 3H), 3.24 (t, J = 6 Hz, 1H), 2.68 (dd, J1 = J2 = 6 Hz, 1H), 2.52 (dd, J1 = J2 = 6 Hz, 1H), 1.71-1.55 (m, 2H), 1.44-1.37 (m, 2H), 0.86 (d, J = 4 Hz, 3H), 0.83 (d, J = 4 Hz, 3H); 13C-NMR (CDCl3, 200 MHz): δ 175.9 (s), 103.6 (d), 59.9 (d), 54.0 (q), 53.1 (q), 51.7 (q), 49.3 (t), 42.8 (t), 25.0 (d), 22.8 (q), 22.5 (q); MS m/z 233 (0.5), 202 (7.2), 174 (33), 158 (14), 75 (100); IR (CHCl3) 2915, 1729, 1130, 1065 cm-1; C11H23NO4 (233.30)の分析 計算値: C, 56.63; H, 9.94; N, 6.00. 実測値: C, 57.49; H, 9.90; N, 6.24.
【００２７】
乾燥ＤＣＭ（４．５ｍｌ）中の(Ｓ，Ｓ)−２，３−ジ−Ｏ−アセチル−酒石酸無水物（１ｇ，４．７ｍｍｏｌ）の懸濁液に、乾燥ＤＣＭ（２．５ｍｌ）中の式（ＩＩＩ）の化合物（ここで、Ｒ＝Ｌｅｕ側鎖）（１ｇ，４．７ｍｍｏｌ）の溶液を窒素雰囲気下０℃にて加えた。反応混合物を室温にて一晩攪拌した。溶媒を蒸発させた後、式（ＩＶ）の未精製生成物（ここで、Ｒ＝Ｌｅｕ側鎖）をＭｅＯＨ（８ｍｌ）中に溶解し、塩化チオニル（２９２μｌ，４ｍｍｏｌ）を０℃にて滴下しながら加えた。次いで、その混合物を６０℃に到達させ、２時間攪拌した。溶媒を除去し、式（Ｖ）の未精製生成物（ここで、Ｒ＝Ｌｅｕ側鎖）を黄色油として単離し、更に精製を行わずに次の工程に用いた。
【００２８】
トルエン（８ｍｌ）中の（Ｖ）（ここで、Ｒ＝Ｌｅｕ側鎖）（１．６３ｇ，４．７ｍｍｏｌ）の溶液を、トルエン（１２ｍｌ）中のＳｉＯ２／Ｈ２ＳＯ４（１ｇ）の還流懸濁液に素早く加えた。その混合物を３０分間反応させ、次いで、溶媒の３分の１を留去した。熱反応混合物をＮａＨＣＯ３のパッドを通してろ過し、溶媒を蒸発させた後、フラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル，ＥｔＯＡｃ／Ｐ．Ｅ.１：２）によって未精製生成物を精製し、（ＶＩ）（ここで、Ｒ＝Ｌｅｕ側鎖）が白色固体として得られた（７３０ｍｇ，３工程を通した収率５０％）。
[α]D2422.0 (c 1.0, MeOH); 1H-NMR (CDCl3, 200 MHz): δ 5.88 (d, J = 2 Hz, 1H), 5.09 (t, J = 8 Hz, 1H), 4.87 (s, 1H), 4.59 (s, 1H), 3.72 (s, 3H), 3.64 (s, 3H), 3.50 (dd, J1 = 12 Hz, J2= 2 Hz, 1H), 3.11 (dd, J1 = 12 Hz, J2 = 2 Hz, 1H), 1.67-1.60 (m, 2H), 1.46-1.32 (m, 1H), 0.88 (s, 3H), 0.84 (s, 3H); 13C-NMR (CDCl3, 200 MHz): δ 170.8 (s), 168.7 (s), 165.6 (s), 100.0 (d), 77.8 (d), 77.3 (d), 52.8 (d), 52.4 (q), 52.3 (q), 48.1 (t), 36.6 (t), 24.7 (d), 23.3 (q), 21.3 (q); MS m/z 315 (11), 256 (100), 240 (4); C14H21NO7 (315.33)の分析 計算値: C, 53.33; H, 6.71; N, 4.44. 実測値: C, 52.99; H, 5.58; N, 4.79.
【００２９】
（ＶＩ）（ここで、Ｒ＝Ｌｅｕ側鎖）（１ｇ，３．２ｍｍｏｌ）及びピペリジン（６．３ｍｌ，６３ｍｍｏｌ）を含有する溶液を６０℃にて一晩攪拌した。次いで、その反応混合物を減圧下で濃縮し、未精製の生成物をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル，ＤＣＭ／ＭｅＯＨ ２０：１）によって精製し、式（ＶＩＩ）の化合物［ここで、Ｒ＝Ｌｅｕ側鎖、Ｒ３及びＲ４＝−ＣＨ２(ＣＨ２)３ＣＨ２−（式（Ｉ）の化合物（ここで、Ｒ１＝−ＣＨ(Ｌｅｕ側鎖)ＣＯＯＣＨ３、Ｒ２＝Ｈ、Ｒ３及びＲ４＝−ＣＨ２(ＣＨ２)３ＣＨ２−）に相当する）］を黄色油として得た（８１６ｍｇ，収率７０％）。
[α]D2233.6 (c 1.0, CHCl3); 1H-NMR (CDCl3, 200 MHz):（２つの回転異性体の混合物）δ 5.79 (d, 1H, J = 1.4 Hz), 5.06-4.94 (m, 1H), 5.02 (s, 1H), 4.82 (s, 1H, minor), 4.71 (s, 1H, major), 3.62 (s, 3H, minor), 3.61 (s, 3H, major), 3.55-3.20 (m, 5H), 3.09 (d, J = 11.8 Hz, 1H), 1.67-1.34 (m, 9H), 0.86 (d, J = 4.8 Hz, 3H), 0.84 (d, J = 5.8 Hz, 3H); 13C-NMR(CDCl3, 200 MHz)（２つの回転異性体の混合物）: δ 171.1 (s, minor), 170.8 (s, major), 167.6 (s, minor), 166.8 (s, major), 164.9 (s, minor), 164.8 (s, major), 99.6 (d, major), 99.5 (d, minor), 78.0 (d), 76.4 (d), 52.7 (q), 52.4 (d, major), 52.2 (d, minor), 48.6 (t, major), 47.7 (t, minor), 46.4 (t), 43.5 (t), 36.7 (t, major), 35.8 (t, minor), 26.4 (t), 25.5 (t), 24.7 (d), 24.5 (t), 23.2 (q), 21.5 (q); MS m/z 368 (M+), 309 (21), 312 (100); IR (CHCl3) 2935, 1739, 1666 cm-1. C18H29N3O6 (368.43) の分析 計算値: C, 58.68; H, 7.66; N, 7.60. 実測値: C, 57.06; H, 7.50; N, 8.32.
【００３０】
例２．(２Ｓ)−２−[(１Ｒ，５Ｓ，７Ｓ)−７−(４−メチル−ピペラジン−１−カルボニル)−２−オキソ−６，８−ジオキサ−３−アザ−ビシクロ[３．２．１]オクト−３−イル]−４−メチル−ペンタン酸メチルエステル［式（Ｉ）の化合物、ここで、Ｒ１＝−ＣＨ(Ｌｅｕ側鎖)ＣＯＯＣＨ３、Ｒ２＝Ｈ、Ｒ３及びＲ４＝−ＣＨ２ＣＨ２Ｎ(ＣＨ３)ＣＨ２ＣＨ２−である］
化合物（Ｉ）（ここで、Ｒ１＝−ＣＨ(Ｌｅｕ側鎖)ＣＯＯＣＨ３、Ｒ２＝Ｈ、Ｒ３及びＲ４＝−ＣＨ２(ＣＨ２)３ＣＨ２−）について記載された手順に従い、化合物（ＶＩ）（ここで、Ｒ＝Ｌｅｕ側鎖）（１５０ｍｇ，０．４８ｍｍｏｌ）及び１−メチルピペラジン（１．０６ｍｌ，９．５ｍｍｏｌ）から出発して、化合物（Ｉ）（ここで、Ｒ１＝−ＣＨ(Ｌｅｕ側鎖)ＣＯＯＣＨ３、Ｒ２＝Ｈ、Ｒ３及びＲ４＝−ＣＨ２ＣＨ２Ｎ(ＣＨ３)ＣＨ２ＣＨ２−）を調製した。純化合物（Ｉ）（ここで、Ｒ１＝−ＣＨ(Ｌｅｕ側鎖)ＣＯＯＣＨ３、Ｒ２＝Ｈ、Ｒ３及びＲ４＝−ＣＨ２ＣＨ２Ｎ(ＣＨ３)ＣＨ２ＣＨ２−）（１２８ｍｇ，収率７２％）が黄色油として得られた。
[α]D2528.1 (c 0.9, CHCl3); 1H-NMR (CDCl3, 200 MHz): δ 5.85 (s, 1H), 5.12 (s, 1H), 5.05 (t, J = 8 Hz, 1H), 4.77 (s, 1H), 3.68 (s, 3H), 3.62-3.51 (m, 5H), 3.14 (d, J = 12 Hz, 1H), 2.42-2.33 (m, 4H), 2.72 (s, 3H), 1.73-1.65 (m, 2H), 1.49-1.42 (m, 1H), 0.92 (d, J = 6 Hz, 3H), 0.90 (d, J = 4 Hz, 3H); 13C-NMR (CDCl3, 200 MHz): δ 170.8 (s), 166.8 (s), 165.0 (s), 99.7 (d), 78.0 (d), 76.4 (d), 55.0, 54.6 (t), 52.8 (q), 52.5 (d), 48.6 (t), 46.1 (q), 45.4 (t), 42.3 (t), 36.9 (t), 24.8 (d), 23.3 (q), 21.6 (q); MS m/z 383 (23), 352 (2.4), 324 (9), 99 (55), 70 (100); IR (CHCl3) 2866, 1738, 1670 cm-1; C18H29N3O6 (383.44)の分析 計算値: C, 56.38; H, 7.62; N, 10.96. 実測値: C, 55.12; H, 6.88; N, 12.01.
【００３１】
例３．４'−メチル−(２'Ｓ)−２'−[(１Ｒ，５Ｓ，７Ｓ)−７−(モルホリン−４−カルボニル)−２−オキソ−６，８−ジオキサ−３−アザ−ビシクロ[３．２．１]オクト−３−イル]−ペンタン酸メチルエステル［式（Ｉ）の化合物、ここで、Ｒ１＝−ＣＨ(Ｌｅｕ側鎖)ＣＯＯＣＨ３、Ｒ２＝Ｈ、Ｒ３及びＲ４＝−ＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ２ＣＨ２−である］
式（Ｉ）の化合物（ここで、Ｒ１＝−ＣＨ(Ｌｅｕ側鎖)ＣＯＯＣＨ３、Ｒ２＝Ｈ、Ｒ３及びＲ４＝−ＣＨ２(ＣＨ２)３ＣＨ２−）について記載された手順に従い、化合物（ＶＩ）（ここで、Ｒ＝Ｌｅｕ側鎖）（１００ｍｇ，０．３２ｍｍｏｌ）及びモルホリン（０．５５ｍｌ，６．３ｍｍｏｌ）から出発して、式（Ｉ）の化合物（ここで、Ｒ１＝−ＣＨ(Ｌｅｕ側鎖)ＣＯＯＣＨ３、Ｒ２＝Ｈ、Ｒ３及びＲ４＝−ＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ２ＣＨ２−）を調製した。式（Ｉ）の純化合物（ここで、Ｒ１＝−ＣＨ(Ｌｅｕ側鎖)ＣＯＯＣＨ３、Ｒ２＝Ｈ、Ｒ３及びＲ４＝−ＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ２ＣＨ２−）（９５ｍｇ，収率６５％）が黄色油として得られた。
[α]D2229.0 (c 1.0, CHCl3); 1H-NMR (CDCl3, 200 MHz): δ 5.86 (d, J = 2 Hz, 1H), 5.16 (s, 1H), 5.06 (dd, J1 = J2= 8 Hz, 1H), 4.76 (s, 1H), 3.70 (s, 3H), 3.67-3.52 (m, 9H), 3.15 (d, J = 12 Hz, 1H), 1.75-1.67 (m, 2H), 1.53-1.43 (m, 1H), 0.94 (d, J = 6 Hz, 3H), 0.92 (d, J = 6 Hz, 3H); 13C-NMR (CDCl3, 200 MHz): δ 170.8 (s), 99.8 (d), 84.6 (d), 78.0 (d), 66.8 (t), 66.6 (t), 52.8 (q), 52.5 (d), 48.6 (t), 46.0 (t), 42.7 (t), 36.8 (t), 24.8 (d), 23.3 (q), 21.6 (q); MS m/z 370 (14), 311 (60), 283 (19), 168 (100); IR (CHCl3) 2932, 1735, 1668 cm-1; C17H26N2O7 (370.41)の分析 計算値: C, 55.13; H, 7.08; N, 7.56. 実測値: C, 54.27; H, 6.40; N, 7.22.
【００３２】
例４．(２Ｓ)−２−[(１Ｒ，５Ｓ，７Ｓ)−７−(４−ベンジル−ピペラジン−１−カルボニル)−２−オキソ−６，８−ジオキサ−３−アザ−ビシクロ[３．２．１]オクト−３−イル]−４−メチル−ペンタン酸メチルエステル［式（Ｉ）の化合物、ここで、Ｒ１＝−ＣＨ(Ｌｅｕ側鎖)ＣＯＯＣＨ３、Ｒ２＝Ｈ、Ｒ３及びＲ４＝−ＣＨ２ＣＨ２Ｎ(ベンジル)ＣＨ２ＣＨ２−である］
式（Ｉ）の化合物（ここで、Ｒ１＝−ＣＨ(Ｌｅｕ側鎖)ＣＯＯＣＨ３、Ｒ２＝Ｈ、Ｒ３及びＲ４＝−ＣＨ２(ＣＨ２)３ＣＨ２−）について記載された手順に従い、式（ＶＩ）の化合物（ここで、Ｒ＝Ｌｅｕ側鎖）（１００ｍｇ，０．３２ｍｍｏｌ）及び１−ベンジルピペラジン（１．１ｍｌ，６．３ｍｍｏｌ）から出発して、式（Ｉ）の化合物（ここで、Ｒ１＝−ＣＨ(Ｌｅｕ側鎖)ＣＯＯＣＨ３、Ｒ２＝Ｈ、Ｒ３及びＲ４＝−ＣＨ２ＣＨ２Ｎ(ベンジル)ＣＨ２ＣＨ２−）を調製した。式（Ｉ）の純化合物（ここで、Ｒ１＝−ＣＨ(Ｌｅｕ側鎖)ＣＯＯＣＨ３、Ｒ２＝Ｈ、Ｒ３及びＲ４＝−ＣＨ２ＣＨ２Ｎ(ベンジル)ＣＨ２ＣＨ２−）（１０６ｍｇ，収率７２％）が黄色油として得られた。
[α]D2320.1 (c 1.1, CHCl3); 1H-NMR (CDCl3, 200 MHz):δ 7.42-7.27 (m, 5H), 5.88 (s, 1H), 5.25-5.05 (m, 2H), 4.79 (s, 1H), 3.71 (s, 3H), 3.63-3.53 (m, 7H), 3.16 (d, J = 11.6 Hz, 1H), 2.51-2.45 (m, 4H), 1.76-1.68 (m, 2H), 1.55-1.25 (m, 1H), 0.96 (d, J = 5, 3H), 0.93 (d, J = 6.2 Hz, 3H); 13C-NMR (CDCl3, 200 MHz):δ 170.8 (s), 166.8 (s), 165.0 (s), 129.1 (d), 128.3 (d), 127.3 (d), 99.7 (d), 78.0 (d), 76.4 (d), 62.9 (t), 52.9 (q), 52.7, 52.7 (t), 52.5 (d), 48.5 (t), 45.5, 42.4 (t), 36.8 (t), 24.8 (d), 23.3 (q), 21.6 (q); MS m/z 459 (10), 400 (1), 330 (1), 175 (19), 91 (100); IR (CHCl3) 2940, 1740, 1672 cm-1; C24H33N3O6 (459.55)の分析 計算値: C, 62.73; H, 7.24; N, 9.14. 実測値: C, 61.34; H, 6.82; N, 8.50.
【００３３】
例５．(２Ｓ)−２−[(１Ｒ，５Ｓ，７Ｓ)−７−(４−フェニルエチル−ピペラジン−１−カルボニル)−２−オキソ−６，８−ジオキサ−３−アザ−ビシクロ[３．２．１]オクト−３−イル]−４−メチル−ペンタン酸メチルエステル［式（Ｉ）の化合物、ここで、Ｒ１＝−ＣＨ(Ｌｅｕ側鎖)ＣＯＯＣＨ３、Ｒ２＝Ｈ、Ｒ３及びＲ４＝−ＣＨ２ＣＨ２Ｎ(−ＣＨ２ＣＨ２Ｐｈ)ＣＨ２ＣＨ２−である］
式（Ｉ）の化合物（ここで、Ｒ１＝−ＣＨ(Ｌｅｕ側鎖)ＣＯＯＣＨ３、Ｒ２＝Ｈ、Ｒ３及びＲ４＝−ＣＨ２(ＣＨ２)３ＣＨ２−）について記載された手順に従い、式（ＶＩ）の化合物（ここで、Ｒ＝Ｌｅｕ側鎖）（１００ｍｇ，０．３２ｍｍｏｌ）及び１−フェニルエチルピペラジン（１．２ｍｌ，６．３ｍｍｏｌ）から出発して、式（Ｉ）の化合物（ここで、Ｒ１＝−ＣＨ(Ｌｅｕ側鎖)ＣＯＯＣＨ３、Ｒ２＝Ｈ、Ｒ３及びＲ４＝−ＣＨ２ＣＨ２Ｎ(−ＣＨ２ＣＨ２Ｐｈ)ＣＨ２ＣＨ２−）を調製した。式（Ｉ）の純化合物（ここで、Ｒ１＝−ＣＨ(Ｌｅｕ側鎖)ＣＯＯＣＨ３、Ｒ２＝Ｈ、Ｒ３及びＲ４＝−ＣＨ２ＣＨ２Ｎ(−ＣＨ２ＣＨ２Ｐｈ)ＣＨ２ＣＨ２−）（８９ｍｇ，収率５９％）が黄色油として得られた。
[α]D2521.3 (c 0.9, CHCl3); 1H-NMR (CDCl3, 200 MHz):δ 7.33-7.18 (m, 5H), 5.88 (d, J = 2 Hz, 1H), 5.17 (s, 1H), 5.09 (dd, J1 = 8 Hz, J2 = 6 Hz, 1H), 4.81 (s, 1H), 3.72 (s, 3H), 3.78-3.63 (m, 4H), 3.57 (dd, J1 = 12 Hz, J2 = 2 Hz, 1H), 3.18 (d, J = 12 Hz, 1H), 2.88-2.80 (m, 2H), 2.70-2.58 (m, 6H), 1.78-1.70 (m, 2H), 1.53-1.25 (m, 1H), 0.98 (d, J = 6 Hz, 3H), 0.94 (d, J = 6 Hz, 3H); 13C-NMR (CDCl3, 200 MHz):δ 170.6 (s), 166.5 (s), 164.8 (s), 138.5 (s), 128.4 (d), 128.3 (d), 126.1 (d), 99.5 (d), 77.7 (d), 76.9 (d), 59.5 (t), 52.6 (q), 52.4, 52.2 (t), 51.9 (d), 48.2, 44.3 (t), 41.3 (t), 36.5 (t), 32.4 (t), 24.4 (d), 22.8 (q), 21.2 (q); MS m/z 414 (1), 382 (95), 56(100); IR (CHCl3) 2923, 1740, 1672 cm-1; C25H35N3O6 (473.57)の分析 計算値: C, 63.41; H, 7.45; N, 8.87. 実測値: C, 62.28; H, 7.01; N, 8.96.
【００３４】
例６．(２Ｓ)−４−メチル−２−[(１Ｒ，５Ｓ，７Ｓ)−２−オキソ−７−(ピペリジン−１−カルボニル)−６，８−ジオキサ−３−アザ−ビシクロ[３．２．１]オクト−３−イル]−ペンタン酸(３−ブチルカルバモイル−２−ヒドロキシ−プロピル)−アミド［式（Ｉ）の化合物、ここで、Ｒ１＝−ＣＨ(Ｌｅｕ側鎖)ＣＯＲ５、Ｒ２＝Ｈ、Ｒ３及びＲ４＝−ＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ２ＣＨ２−、Ｒ５＝−ＮＨＣＨ２ＣＨ(ＯＨ)ＣＨ２ＣＯＮＨＢｕである］
ＤＣＭ（４ｍｌ）中の４−アミノ−３−ヒドロキシ−酪酸メチルエステル塩酸塩（３７ｍｇ，０．２２ｍｍｏｌ）の溶液に、窒素雰囲気下、０℃にて、ＰｙＢｒＯＰ（１０２ｍｇ，０．２２ｍｍｏｌ）と、式（Ｉ）の化合物（ここで、Ｒ１＝−ＣＨ(Ｌｅｕ側鎖)ＣＯＯＣＨ３、Ｒ２＝Ｈ、Ｒ３及びＲ４＝−ＣＨ２(ＣＨ２)３ＣＨ２−）のＬｉＯＨによる塩基性エステル加水分解によって予め得られた、(２Ｓ)−４−メチル−２−[(１Ｒ，５Ｓ，７Ｓ)−２−オキソ−７−(ピペリジン−１−カルボニル)−６，８−ジオキサ−３−アザ−ビシクロ[３．２．１]オクト−３−イル]−ペンタン酸（８０ｍｇ，０．２２ｍｍｏｌ）と、ＤＩＰＥＡ（８５μｌ，０．５ｍｍｏｌ）とを加えた。得られた溶液を室温に到達させて、一晩攪拌させた。次いで、反応混合物をＮａＨＣＯ３の飽和溶液、水性５％ＫＨＳＯ４及び食塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させた。溶媒を蒸発させた後、未精製生成物をＥｔＯＡｃ中で希釈させ、ＰｙＢｒＯＰを沈殿させるために４℃にて３時間放置した。フラッシュクロマトグラフィーによる精製の後、得られた化合物（４０ｍｇ，０．０８ｍｍｏｌ）を、ＴＨＦ（２００μｌ）及び２滴のＨ２Ｏの混合物中で、ｎ−ブチルアミン（１６８μｌ，１．７ｍｍｏｌ）により、５０℃にて３日間処理した。Ａｍｂｅｒｌｙｓｔ１５上での反応混合物のろ過、更にはカラムクロマトグラフィー（シリカゲル，ＤＣＭ／ＭｅＯＨ ２０：１）による精製によって、式（Ｉ）の化合物（ここで、Ｒ１＝−ＣＨ(Ｌｅｕ側鎖)ＣＯＲ５、Ｒ２＝Ｈ、Ｒ３及びＲ４＝−ＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ２ＣＨ２−、Ｒ５＝−ＮＨＣＨ２ＣＨ(ＯＨ)ＣＨ２ＣＯＮＨＢｕ）が無色油として得られた。
1H-NMR (CDCl3, 200 MHz):δ 6.81-6.68 (m, 1H), 6.41-6.22 (m, 1H), 5.90, 5.86 (s, 1H, ２つのジアステレオ異性体の混合物), 5.14-4.81 (m, 3H), 4.13-3.92 (m, 1H), 3.66-3.35 (m, 6H), 3.36-3.02 (m, 4H), 2.28 (d, J = 5.2 Hz, 2H), 1.88-1.20 (m, 13H), 0.97-0.87 (m, 9H); 13C-NMR (CDCl3, 200 MHz):δ 171.5 (s), 170.2 (s), 168.0 (s), 164.8 (s), 99.6 (d), 77.9 (d), 67.9 (d), 54.1, 53.9 (d), 47.6 (t), 46.6 (t), 44.5 (t), 43.6 (t), 39.4 (t), 36.4 (t), 34.9 (t), 31.6 (t), 26.4 (t), 25.6 (t), 24.9 (d), 24.6 (t), 23.1 (q), 22.0 (q), 20.3 (t), 13.9 (q); MS m/z 510 (3), 309 (34), 112 (69), 84 (100).
【００３５】
選択された本発明の化合物の生体外及び生体内活性について、非制限的な説明を与えるため、以下に示す例を報告する。
【００３６】
プロテアーゼ酵素アッセイ
分光光度法：
式（Ｉ）の各種化合物のプロテアーゼ活性は、同一濃度でのペプスタチン活性に対する分光光度アッセイによって測定された：各アッセイは、ｐＨ３．２の５０ｍＭクエン酸ナトリウム中１％（ｗ／ｖ）ＢＳＡ０．４ｍｌ及びプロテアーゼ溶液（１μｇ／ｍｌ）５０μｌにおいてサンプル５０μｌを含んだ。３７℃にて３０分後、１０％（ｗ／ｖ）トリクロロ酢酸１ｍｌを加えた。チューブを氷中にて３０分間保存し、次いで、１０分間遠心分離にかけた（３０００ｇ）。上澄みの吸光度を２８０ｎｍで読んだ。対照：クエン酸塩緩衝液中１％ＢＳＡ。酵素の一のユニットは、１ｍｉｎ−１のΔＡ２８０を触媒した。純プロテアーゼの場合、アッセイは、ΔＡ２８００．１−０．４の範囲に亘って酵素濃度に比例した。検出下限は１μｇであった（De Bernardis F., Sullivan P.A., Cassone A. Medical Mycology 2001, 39, 303）。
【００３７】
表１．本発明の代表的な化合物のＳＡＰ２に対する生体外活性。Ｉ％は、同一濃度１０μＭでのペプスタチンに対する阻害率である。
【化５】
【００３８】
【表１】
【００３９】
生体内アッセイ
実験的膣感染：
実験的膣感染については、前述のラット膣モデルを採用した（De Bernardis, F.; Boccanera, M.; Adriani, D.; Spreghini, E.; Santoni, G.; Cassone, A. Infect. Immun., 1997, 65, 3399）。
【００４０】
簡単に説明すると、卵巣を摘出された雌のウィスターラット（８０−１００ｇ；Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｃａｌｃｏ，イタリア）は、安息香酸エストラジオール０．５ｍｇ（Ｅｓｔｒａｄｉｏｌｏ，Ａｍｓａ Ｆａｒｍａｃｅｕｔｉｃｉ ｓｒｌ，ローマ，イタリア）を皮下に注射された。１回目のエストラジオールの６日後に、その動物は、試験されるＣ．アルビカンス株それぞれの食塩溶液０．１ｍｌ中の１０７酵母細胞を膣内接種された。接種材料は、多目的目盛り付きチップ（Ｃｏｍｂｉｔｉｐ；ＰＢＩ，ミラノ，イタリア）を備えたシリンジを介して膣腔中に投薬された。酵母細胞は、あらかじめ、旋回シェーカー（２００ｒｐｍ）上、２８℃のＹＰＤブロス（酵母エキス１％；ペプトン２％；デキストロース２％）中で成長し、遠心分離（１５００ｇ）によって収集され、洗浄され、血球計数器でカウントされ、所要の数だけ食塩溶液中において懸濁させた。膣液中の細胞数は、前述のクロラムフェニコール（５０μｇ／ｍｌ）を含有するサブロー培地上で、（目盛り付きプラスチック製ループ（Ｄｉｓｐｏｎｏｉｃ，ＰＢＩ，ミラノ，イタリア）を用いて）各動物から取った、サンプル１００μｌを培養することによってカウントされた。少なくとも１ＣＦＵが膣洗浄に見られた場合、即ち、数値が＞１０３ＣＦＵ／ｍｌの場合に、ラットが感染したと見なした。
【００４１】
生体内研究用の代表的な例として、上記した式（１）の化合物の一つであり、以下ＡＰＧ１２と名付けた、表１の化合物６に対応するものを、２つの異なる株、即ちＳＡ４０及び薬物耐性ＡＩＤＳ６８の膣内カンジダ・アルビカンス投与の１時間、２４時間、４８時間後に、１０μＭの濃度で膣内に投与した。ポジティブ（ペプスタチン１０μｇ；フルコナゾール１０μｇ）及びネガティブ（無菌食塩溶液）を同様に投与した。
【００４２】
ＡＰＧ１２で膣内処置されたラットにおけるカンジダ・アルビカンスクリアランスのプロファイルは、天然ＳＡＰ２阻害剤ペプスタチンで処置したラットと、フルコナゾールで処置したラットにおいて観測された促進に似ている（表２及び図１）。更に重要なことには、薬物耐性ＡＩＤＳ６８株におけるカンジダ・アルビカンスクリアランスの促進は、天然ＳＡＰ２阻害剤ペプスタチンとＡＰＧ１２の両方の有効性を示すが、未処理対照に似たクリアランスプロファイルが示すように、フルコナゾールは無効である（表３及び図２）。
【００４３】
表２．投与の（１時間、２４時間、４８時間）後にＡＰＧ１２で膣内治療されたラットにおけるカンジダＳＡ４０クリアランスの促進
【００４４】
【表２】
【００４５】
全値×１０００；ＳＡ４０：未処理対照；開始１日目で、ＡＰＧ１２処理と未処理対照間の違いはすべて統計的に有意である；（Ｐ＜０．０１，マンホイットニーＵ検定）
【００４６】
表３．投与の（１時間、２４時間、４８時間）後にＡＰＧ１２で膣内治療されたラットにおけるカンジダＡＩＤＳ６８クリアランスの促進
【００４７】
【表３】
【００４８】
全値×１０００；ＡＩＤＳ６８：未処理対照；開始１日目で、ＡＰＧ１２処理と未処理対照間の違いはすべて統計的に有意である；（Ｐ＜０．０１，マンホイットニーＵ検定）
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）
【化１】
［式中：
Ｒ１は、−ＣＨ(Ｒ)ＣＯＲ５であり；
Ｒは、α−アミノ酸側鎖であり；
Ｒ２は、Ｈ、アルキル、アリール、又はアルキルアリールであり；
Ｒ３及びＲ４は、独立して、Ｈ、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、アルキルアリール、アリール、ヒドロキシアルキル、アルコキシアルキル、アルコキシカルボニル、及び−ＣＨ(α−アミノ酸側鎖)ＣＨ２ＯＨからなる群から選択されるか；又は
Ｒ３及びＲ４は、それらが結合している窒素原子と一緒に、任意に置換された５〜８員環を形成することができ；
Ｒ５は、−Ｏアルキル、−Ｏアリール、−ＮＨアルキル、ＮＨアリール、アミノ酸、及びペプチドからなる群から選択され；
可能性のある立体異性体の組み合わせの全てが含まれる］の化合物。
【請求項２】
Ｒ２が、Ｈ、ベンジル、メチル又はイソブチルであることを特徴とする請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項３】
Ｒが、Ｇｌｙ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、Ａｌａ、Ｐｈｅ、Ｐｈｇ、Ｎｌｅ、及びＮｖａのものからなる群から選択されることを特徴とする請求項２に記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項４】
Ｒ３及びＲ４が、独立して、Ｈ、ヒドロキシエチル、プロパルギル、及び−ＣＨ(Ｌｅｕ側鎖)ＣＨ２ＯＨからなる群から選択されるか；又は
Ｒ３及びＲ４が、それらが結合している窒素原子と一緒に、ピペリジン、４−ヒドロキシエチル−ピペラジン、４−メチル−ピペラジン、４−カルボエトキシ−ピペラジン、４−フェニルエチル−ピペラジン、４−ベンジル−ピペラジン、及びモルホリンからなる群から選択される環を形成できることを特徴とする請求項３に記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項５】
Ｒ３がＨで、且つ、Ｒ４が、Ｈ、ヒドロキシエチル、プロパルギル、及び−ＣＨ(Ｌｅｕ側鎖)ＣＨ２ＯＨからなる群から選択されるか；又は
Ｒ３及びＲ４が、それらが結合している窒素原子と一緒に、ピペリジン、４−ヒドロキシエチル−ピペラジン、及び４−カルボエトキシ−ピペラジンからなる群から選択される環を形成できることを特徴とする請求項４に記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項６】
Ｒが、Ｌｅｕ側鎖であることを特徴とする請求項５に記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項７】
薬剤として使用するための請求項１〜６のいずれかに記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項８】
感染症の治療用薬剤を調製するための、式（Ｉ）
【化２】
［式中：
Ｒ１は、ベンジル、フェニル、及び−ＣＨ(Ｒ)ＣＯＲ５からなる群から選択され；
Ｒは、α−アミノ酸側鎖であり；
Ｒ２は、Ｈ、アルキル、アリール、又はアルキルアリールであり；
Ｒ３及びＲ４は、独立して、Ｈ、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、アルキルアリール、アリール、ヒドロキシアルキル、アルコキシアルキル、アルコキシカルボニル、及び−ＣＨ(α−アミノ酸側鎖)ＣＨ２ＯＨからなる群から選択されるか；又は
Ｒ３及びＲ４は、それらが結合している窒素原子と一緒に、任意に置換された５〜８員環を形成することができ；
Ｒ５は、−Ｏアルキル、−Ｏアリール、−ＮＨアルキル、ＮＨアリール、アミノ酸、及びペプチドからなる群から選択され；
可能性のある立体異性体の組み合わせの全てが含まれる］の化合物の使用。
【請求項９】
式（Ｉ）の化合物の請求項８に記載の使用であって、
Ｒ１が、ベンジル、及び−ＣＨ(Ｒ)ＣＯＲ５からなる群から選択され；
Ｒが、α−アミノ酸側鎖であって、Ｇｌｙ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、Ａｌａ、Ｐｈｅ、Ｐｈｇ、Ｎｌｅ、及びＮｖａのものからなる群から選択され；
Ｒ２が、Ｈ，ベンジル、メチル、及びイソブチルの群から選択され；
Ｒ３及びＲ４が、独立して、Ｈ、ヒドロキシエチル、プロパルギル、及び−ＣＨ(Ｌｅｕ側鎖)ＣＨ２ＯＨからなる群から選択されるか；又は
Ｒ３及びＲ４が、それらが結合している窒素原子と一緒に、ピペリジン、４−ヒドロキシ−ピペラジン、及び４−カルボエトキシ−ピペラジンからなる群から選択される環を形成できることを特徴とする使用。
【請求項１０】
アスパルチル−プロテアーゼ活性を発現する微生物病原体と関連した感染症の治療用薬剤を調製するための、請求項８又は９に記載の化合物の使用。
【請求項１１】
カンジダ・アルビカンス、ＨＩＶ、ＨＴＶＬ、及び熱帯熱マラリア原虫からなる群から選択される病原体と関連した感染症の治療用薬剤を調製するための、請求項１０に記載の化合物の使用。
【請求項１２】
カンジダ・アルビカンスと関連した薬物耐性感染症の治療用薬剤を調製するための、請求項１１に記載の化合物の使用。
【請求項１３】
請求項１〜６のいずれかに記載の式（Ｉ）の化合物を少なくとも１種と、少なくとも他の薬剤的に容認できる成分、キャリヤー又は希釈剤とを含有する医薬組成物。
【請求項１】
式（Ｉ）
【化１】
［式中：
Ｒ１は、−ＣＨ(Ｒ)ＣＯＲ５であり；
Ｒは、α−アミノ酸側鎖であり；
Ｒ２は、Ｈ、アルキル、アリール、又はアルキルアリールであり；
Ｒ３及びＲ４は、独立して、Ｈ、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、アルキルアリール、アリール、ヒドロキシアルキル、アルコキシアルキル、アルコキシカルボニル、及び−ＣＨ(α−アミノ酸側鎖)ＣＨ２ＯＨからなる群から選択されるか；又は
Ｒ３及びＲ４は、それらが結合している窒素原子と一緒に、任意に置換された５〜８員環を形成することができ；
Ｒ５は、−Ｏアルキル、−Ｏアリール、−ＮＨアルキル、ＮＨアリール、アミノ酸、及びペプチドからなる群から選択され；
可能性のある立体異性体の組み合わせの全てが含まれる］の化合物。
【請求項２】
Ｒ２が、Ｈ、ベンジル、メチル又はイソブチルであることを特徴とする請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項３】
Ｒが、Ｇｌｙ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、Ａｌａ、Ｐｈｅ、Ｐｈｇ、Ｎｌｅ、及びＮｖａのものからなる群から選択されることを特徴とする請求項２に記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項４】
Ｒ３及びＲ４が、独立して、Ｈ、ヒドロキシエチル、プロパルギル、及び−ＣＨ(Ｌｅｕ側鎖)ＣＨ２ＯＨからなる群から選択されるか；又は
Ｒ３及びＲ４が、それらが結合している窒素原子と一緒に、ピペリジン、４−ヒドロキシエチル−ピペラジン、４−メチル−ピペラジン、４−カルボエトキシ−ピペラジン、４−フェニルエチル−ピペラジン、４−ベンジル−ピペラジン、及びモルホリンからなる群から選択される環を形成できることを特徴とする請求項３に記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項５】
Ｒ３がＨで、且つ、Ｒ４が、Ｈ、ヒドロキシエチル、プロパルギル、及び−ＣＨ(Ｌｅｕ側鎖)ＣＨ２ＯＨからなる群から選択されるか；又は
Ｒ３及びＲ４が、それらが結合している窒素原子と一緒に、ピペリジン、４−ヒドロキシエチル−ピペラジン、及び４−カルボエトキシ−ピペラジンからなる群から選択される環を形成できることを特徴とする請求項４に記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項６】
Ｒが、Ｌｅｕ側鎖であることを特徴とする請求項５に記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項７】
薬剤として使用するための請求項１〜６のいずれかに記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項８】
感染症の治療用薬剤を調製するための、式（Ｉ）
【化２】
［式中：
Ｒ１は、ベンジル、フェニル、及び−ＣＨ(Ｒ)ＣＯＲ５からなる群から選択され；
Ｒは、α−アミノ酸側鎖であり；
Ｒ２は、Ｈ、アルキル、アリール、又はアルキルアリールであり；
Ｒ３及びＲ４は、独立して、Ｈ、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、アルキルアリール、アリール、ヒドロキシアルキル、アルコキシアルキル、アルコキシカルボニル、及び−ＣＨ(α−アミノ酸側鎖)ＣＨ２ＯＨからなる群から選択されるか；又は
Ｒ３及びＲ４は、それらが結合している窒素原子と一緒に、任意に置換された５〜８員環を形成することができ；
Ｒ５は、−Ｏアルキル、−Ｏアリール、−ＮＨアルキル、ＮＨアリール、アミノ酸、及びペプチドからなる群から選択され；
可能性のある立体異性体の組み合わせの全てが含まれる］の化合物の使用。
【請求項９】
式（Ｉ）の化合物の請求項８に記載の使用であって、
Ｒ１が、ベンジル、及び−ＣＨ(Ｒ)ＣＯＲ５からなる群から選択され；
Ｒが、α−アミノ酸側鎖であって、Ｇｌｙ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、Ａｌａ、Ｐｈｅ、Ｐｈｇ、Ｎｌｅ、及びＮｖａのものからなる群から選択され；
Ｒ２が、Ｈ，ベンジル、メチル、及びイソブチルの群から選択され；
Ｒ３及びＲ４が、独立して、Ｈ、ヒドロキシエチル、プロパルギル、及び−ＣＨ(Ｌｅｕ側鎖)ＣＨ２ＯＨからなる群から選択されるか；又は
Ｒ３及びＲ４が、それらが結合している窒素原子と一緒に、ピペリジン、４−ヒドロキシ−ピペラジン、及び４−カルボエトキシ−ピペラジンからなる群から選択される環を形成できることを特徴とする使用。
【請求項１０】
アスパルチル−プロテアーゼ活性を発現する微生物病原体と関連した感染症の治療用薬剤を調製するための、請求項８又は９に記載の化合物の使用。
【請求項１１】
カンジダ・アルビカンス、ＨＩＶ、ＨＴＶＬ、及び熱帯熱マラリア原虫からなる群から選択される病原体と関連した感染症の治療用薬剤を調製するための、請求項１０に記載の化合物の使用。
【請求項１２】
カンジダ・アルビカンスと関連した薬物耐性感染症の治療用薬剤を調製するための、請求項１１に記載の化合物の使用。
【請求項１３】
請求項１〜６のいずれかに記載の式（Ｉ）の化合物を少なくとも１種と、少なくとも他の薬剤的に容認できる成分、キャリヤー又は希釈剤とを含有する医薬組成物。
【図１】
【図２】
【図２】
【公表番号】特表２０１２−５０９８６３（Ｐ２０１２−５０９８６３Ａ）
【公表日】平成２４年４月２６日（２０１２．４．２６）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１１−５３６８９８（Ｐ２０１１−５３６８９８）
【出願日】平成２１年１１月２４日（２００９．１１．２４）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２００９／０６５７２８
【国際公開番号】ＷＯ２０１０／０６０９０４
【国際公開日】平成２２年６月３日（２０１０．６．３）
【出願人】（５０５３０３９３４）ユニヴァーシタ’デグリ ステュディ ディ フィレンツェ (3)
【出願人】（５００２５４９９６）
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２４年４月２６日（２０１２．４．２６）
【国際特許分類】
【出願日】平成２１年１１月２４日（２００９．１１．２４）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２００９／０６５７２８
【国際公開番号】ＷＯ２０１０／０６０９０４
【国際公開日】平成２２年６月３日（２０１０．６．３）
【出願人】（５０５３０３９３４）ユニヴァーシタ’デグリ ステュディ ディ フィレンツェ (3)
【出願人】（５００２５４９９６）
【Ｆターム（参考）】
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