本発明は、伸張組換えポリペプチド（ＸＴＥＮ）に結合した成長ホルモンを含む組成物、その組成物をコードしている単離した核酸、それを含むベクター及び宿主細胞、並びにそのような組成物の作出方法、そして成長ホルモン関連疾患、障害及び症状の治療におけるそれら組成物の使用に関する。本開示は、成長ホルモンを投与することにより改善される、回復する、又は阻害される、任意の疾患、障害、又は状態の治療に有効である可能性のある組成物及び方法を指向する。

【特許請求の範囲】
【請求項１】
表１から選択されたアミノ酸配列と少なくとも９０％同一である成長ホルモン（ＧＨ）を含む単離した融合タンパク質であって、前記成長ホルモンは少なくとも約２００アミノ酸残基の伸張組換えポリペプチド（ＸＴＥＮ）に結合しており、そして該ＸＴＥＮが、
（ａ）該ＸＴＥＮ配列が、表３から選択された同等の長さのアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を示す、少なくとも約２００の連続したアミノ酸を含み；
（ｂ）−９又はそれを超えるスコアに基づくＴＥＰＩＴＯＰＥアルゴリズムによってＸＴＥＮ配列中にあるエピトープの予測を行った場合に、該ＸＴＥＮ配列は予測されるＴ細胞エピトープを含まず；
（ｃ）１０未満の部分列スコアを有し；及び
（ｄ）グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）、グルタミン酸（Ｅ）及びプロリン（Ｐ）残基の総和が、ＸＴＥＮの全アミノ酸残基の約９０％より多くを構成することを特徴とする、
単離した融合タンパク質。
【請求項２】
該成長ホルモンがヒト成長ホルモンである、請求項１に記載の単離した融合タンパク質。
【請求項３】
第二のＸＴＥＮ配列をさらに含む単離した融合タンパク質であって、かつ、該融合タンパク質が表５に示した多重ＸＴＥＮ配置をとる、請求項１又は２に記載の単離した融合タンパク質。
【請求項４】
該成長ホルモンペプチド及び該ＸＴＥＮがスペーサーを介して結合しており、ここで該スペーサー配列が１〜約５０までのアミノ酸残基を含み、そして該スペーサーが開裂配列を任意に含む、請求項１〜３のいずれか１項に記載の単離した融合タンパク質。
【請求項５】
該融合タンパク質が、ＸＴＥＮをもたない対応する天然の成長ホルモンと同じ標的受容体に結合し、かつ、前記融合タンパク質が、ＸＴＥＮをもたない対応する成長ホルモンの結合親和性の少なくとも約０．１％〜３０％を保持する、請求項１〜４のいずれかに記載の単離した融合タンパク質。
【請求項６】
表３５、表３６、及び表３７から選択されたアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１〜５のいずれかに記載の単離した融合タンパク質。
【請求項７】
請求項１〜６のいずれかに記載の単離した融合タンパク質及び薬学上許容可能な担体を含む医薬組成物。
【請求項８】
式Ｉに従って配置される、請求項１〜６のいずれかに記載の単離したタンパク質であって、
（ＸＴＥＮ）_ｘ−ＧＨ−（ＸＴＥＮ）_ｙ （Ｉ）
式中、各産物について独立して：
（ａ）ｘは０又は１のいずれかであり；及び
（ｂ）ｙは０又は１のいずれかであり、
ここでｘ＋ｙ≧１である、
単離したタンパク質。
【請求項９】
該ＸＴＥＮを、該成長ホルモンのＮ末端又はＣ末端を介して成長ホルモンに融合させた、請求項１〜６のいずれかに記載の単離した融合タンパク質。
【請求項１０】
ヒト成長ホルモン、並びにＡＥ９１２、ＡＭ９２３、ＡＥ１４４、及びＡＥ２８８から選択された第一の及び第二のＸＴＥＮを含む、請求項１〜６及び８〜９のいずれかに記載の単離した融合タンパク質。
【請求項１１】
請求項１〜６及び８〜１０のいずれかに記載の単離した融合タンパク質であって、
（ｉ）対象に投与した場合のＸＴＥＮをもたない対応する成長ホルモンと比較して、同等のモル用量で対象に投与した場合に、該融合タンパク質がより長い終末相半減期を有する；
（ｉｉ）他の点では同等な投与計画で、対象に投与されるＸＴＥＮをもたない対応する成長ホルモンよりも、少ないモル量の該融合タンパク質を投与した場合に、該融合タンパク質がＸＴＥＮをもたない対応する成長ホルモンと同等の濃度曲線下面積（ＡＵＣ）を達成する；
（ｉｉｉ）他の点では同等な投与計画で、対象に投与されるＸＴＥＮをもたない対応する成長ホルモンよりも、少ないモル量の該融合タンパク質を投与した場合に、該融合タンパク質がＸＴＥＮをもたない対応する成長ホルモンと同等の治療効果を達成する；
（ｉｖ）他の点では同等なモル量で、対象に投与されるＸＴＥＮをもたない対応する成長ホルモンよりも、該融合タンパク質を低頻度で投与した場合に、該融合タンパク質がＸＴＥＮをもたない対応する成長ホルモンと同等の濃度曲線下面積（ＡＵＣ）を達成する；
（ｖ）他の点では同等なモル量で、対象に投与されるＸＴＥＮをもたない対応する成長ホルモンよりも、該融合タンパク質を低頻度で投与した場合に、該融合タンパク質がＸＴＥＮをもたない対応する成長ホルモンと同等の治療効果を達成する；
（ｖｉ）他の点では同等な投与期間、対象に投与されるＸＴＥＮをもたない対応する成長ホルモンよりも、累積してより少ないモル量の該融合タンパク質を投与した場合に、該融合タンパク質がＸＴＥＮをもたない対応する成長ホルモンと同等の濃度曲線下面積（ＡＵＣ）を達成する；又は
（ｖｉｉ）他の点では同等な投与期間、対象に投与されるＸＴＥＮをもたない対応する成長ホルモンよりも、累積してより少ないモル量の該融合タンパク質を投与した場合に、該融合タンパク質がＸＴＥＮをもたない対応する成長ホルモンと同等の治療効果を達成する、ことを特徴とする、
単離した融合タンパク質。
【請求項１２】
１つ以上の伸張組換えポリペプチド（ＸＴＥＮ）に融合させた成長ホルモン（ＧＨ）を含む融合タンパク質の生産方法であって、
（ａ）請求項１又は６に記載の融合タンパク質をコードしている組換えポリヌクレオチド分子を含む宿主細胞を準備する工程；
（ｂ）該融合タンパク質が発現できる条件下において該宿主細胞を培養する工程；及び
（ｃ）該融合タンパク質を回収する工程を含む、生産方法。
【請求項１３】
該融合タンパク質の該成長ホルモンが、
（ａ）ヒト成長ホルモン；又は
（ｂ）表１から選択された配列
と、少なくとも９０％の配列同一性を有する、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
発現した融合タンパク質中の１つ以上のＸＴＥＮが、表３から選択された配列と少なくとも９０％の配列同一性を有する、請求項１２又は１３に記載の方法。
【請求項１５】
該融合タンパク質をコードしているポリヌクレオチド分子が、表３５、表３６、及び表３７から選択された核酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を示す核酸配列を含む、請求項１２〜１４のいずれかに記載の方法。
【請求項１６】
前記融合タンパク質の該宿主細胞中での発現を高めるために、該ポリヌクレオチドのコドンを最適化する、請求項１２〜１５のいずれかに記載の方法。
【請求項１７】
該宿主細胞が原核細胞である、請求項１２〜１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
該宿主細胞の細胞質から、該単離した融合タンパク質を実質的に可溶性の形態で回収する、請求項１２〜１７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
請求項１〜６及び８〜１１の融合タンパク質をコードしているヌクレオチド配列又はその相補鎖を含む、単離した核酸。
【請求項２０】
請求項１９に記載の核酸を含む、発現ベクター。
【請求項２１】
請求項１９に記載の核酸を含み、かつ、原核宿主細胞である、単離した宿主細胞。
【請求項２２】
治療上有効量の、請求項１〜６及び８〜１１のいずれかに記載の融合タンパク質を対象に投与する工程を含む、対象における成長ホルモンに関連した状態の治療方法。
【請求項２３】
該成長ホルモンに関連した状態が、成長ホルモンの欠如、ターナー症候群、プラダー・ウィリー症候群、特発性低身長、ＡＩＤＳ消耗症候群、多発性硬化症、クローン病、潰瘍性大腸炎、及び筋ジストロフィーから選択される、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
該治療上有効量が、該融合タンパク質の治療ウインドウ中での該融合タンパク質の血中濃度を、同等の量で対象に投与されるＸＴＥＮをもたない対応する天然の成長ホルモンと比較して、少なくとも３倍長く維持する、請求項２２又は２３に記載の方法。
【請求項２５】
治療上効果的な用量計画に則って該融合タンパク質を対象に１回以上連続して投与すると、該融合タンパク質の血中レベルの連続したＣ_ｍａｘのピーク及び／又はＣ_ｍｉｎの谷の間の時間が、ＧＨの確立された治療上の投与計画に則って投与される該融合タンパク質に結合していない対応する成長ホルモンと比較して長くなる、請求項２２〜２４のいずれかに記載の方法。
【請求項２６】
請求項２２〜２５のいずれかに記載の方法であって、
（ｉ）他の点では同等の投与計画で、対象に投与されるＸＴＥＮをもたない対応する成長ホルモンよりも少ないモル量の該融合タンパク質を対象に投与すると、該融合タンパク質がＸＴＥＮをもたない対応する成長ホルモンと同等な治療効果を達成する；
（ｉｉ）他の点では同等のモル量で、対象に投与されるＸＴＥＮをもたない対応する成長ホルモンよりも該融合タンパク質を低頻度で投与すると、該融合タンパク質がＸＴＥＮをもたない対応する成長ホルモンと同等な治療効果を達成する；又は
（ｉｉｉ）他の点では同等の投与期間、対象に投与されるＸＴＥＮをもたない対応する成長ホルモンと比較して、累積してより少ないモル量の該融合タンパク質を投与すると、該融合タンパク質がＸＴＥＮをもたない対応する成長ホルモンと同等な治療効果を達成する、方法。
【請求項２７】
該治療効果が、ＩＧＦ−１濃度、ＩＧＦＢＰ３濃度、身長発育速度、除脂肪体重、総体脂肪、体幹脂質、インスリン耐性試験への反応、軟骨細胞の分裂速度、軟骨細胞数、骨密度、骨成長、及び骨端板幅の増加、から選択される測定指標である、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
請求項７に記載の医薬組成物、該医薬組成物を識別するラベル、並びに、保管、再構成及び／又は該医薬組成物の対象への投与についての取扱説明書を含むキット。

【図８】

【図１６】

【図１７Ａ】

【図１７Ｂ】

【図２６Ａ】

【図２６Ｂ】

【図２６Ｃ】

【図４】

【図５】

【図６】

【図７】

【図９】

【図１０】

【図１１】

【図１２】

【図１３】

【図１４】

【図１５】

【図１８】

【図１９】

【図２０】

【図２１】

【図２２】

【図２３】

【図２４】

【図２５】

【図２７】

【図２８】

【図２９】

【図３０】

【図３１】

【図３２】

【図３３】

【図３４】

【図３５】

【図３６】

【図３７】

【公表番号】特表２０１２−５２９２９６（Ｐ２０１２−５２９２９６Ａ）
【公表日】平成２４年１１月２２日（２０１２．１１．２２）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１２−５１５０８０（Ｐ２０１２−５１５０８０）
【出願日】平成２２年６月８日（２０１０．６．８）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２０１０／０３７８４９
【国際公開番号】ＷＯ２０１０／１４４５０２
【国際公開日】平成２２年１２月１６日（２０１０．１２．１６）
【出願人】（５１１１８８８１９）アムニクス　オペレーティング　インコーポレイテッド (6)
【Ｆターム（参考）】