抗炎症経口投与剤
【課題】優れた抗炎症経口投与剤、並びに、炎症の予防又は改善用食品の提供。
【解決手段】水不溶性β−グルカンを有効成分として含有する、抗炎症経口投与剤。
【解決手段】水不溶性β−グルカンを有効成分として含有する、抗炎症経口投与剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、水不溶性β−グルカンを含有する抗炎症経口投与剤及び炎症の予防・改善用食品に関する。
【背景技術】
【０００２】
従来より、β−グルカンには、水可溶性のものと水不溶性のものとがあり、両者の生物活性は著しく異なるものであることが知られている。そのような異なる生物活性としては、例えば、マクロファージからの活性酸素産生活性等が挙げられ、即ち、水不溶性のβ−グルカンは、かかる活性酸素産生活性を示すものであるのに対し、水可溶性のβ−グルカンは、かかる活性酸素産生活性を示さないか、示したとしても非常に弱いものである。他にも種々の生物活性において相違が認められているが、このように水可溶性のβ−グルカンと水不溶性のβ−グルカンとの間で生物活性が異なる要因としては、水不溶性のβ−グルカンの抗原提示細胞による取り込み形態が、飲作用（ｐｉｎｏｃｙｔｏｓｉｓ）ではなく、食作用（ｐｈａｇｏｃｙｔｏｓｉｓ）であることによるものであろうとの推測がなされている（非特許文献１）。
【０００３】
一方、炎症性腸疾患の治療又は予防、改善等に、５０００〜２００００の分子量を有する植物由来のβ（１→３）グルカンが有用であることが報告されている（特許文献１）。しかし、水不溶性β−グルカンが炎症性腸疾患に有用であることは今まで知られてなく、また、特許文献１記載のβ（１→３）グルカンは水可溶性であって、抗原提示細胞による取り込み形態が飲作用（ｐｉｎｏｃｙｔｏｓｉｓ）であることから、水不溶性β−グルカンとは、生物活性が全く異なるものである。従って、水可溶性のβ（１→３）グルカンが炎症性腸疾患の治療又は予防、改善等に有用であることは、水不溶性β−グルカンが炎症性腸疾患に対する有用性について、何ら示唆するものでないばかりか、むしろ、水不溶性β−グルカンは、マクロファージからの活性酸素産生活性を示すものであることから、炎症を増悪させると考えられていた。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】国際公開第２００２／０９８４３３号
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｍｍｕｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ２（２００２）１１０９−１１２２
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明の課題は、水不溶性β−グルカンを含有する優れた抗炎症経口投与剤、並びに、炎症の予防又は改善用食品を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは、上記課題に鑑み、水不溶性β−グルカンの生理活性に注目し、鋭意研究を重ねた結果、高い活性酸素産生活性を示すことから、抗炎症効果を示すどころか、むしろ炎症を増悪させると従来考えられていた水不溶性β−グルカンが、驚くべきことに、優れた抗炎症効果を有することを見出し、本発明を完成するに至った。
即ち、本発明は下記の通りである。
【０００８】
（１）水不溶性β−グルカンを有効成分として含有する、抗炎症経口投与剤。
（２）β−グルカンが、長鎖β−１，６−結合を側鎖に有するβ−グルカンである、上記（１）に記載の剤。
（３）β−グルカンが、酸化処理したβ−グルカンである、上記（１）又は（２）に記載の剤。
（４）炎症が、腸における炎症である、上記（１）〜（３）のいずれかに記載の剤。
（５）腸が、大腸である、上記（４）に記載の剤。
（６）β−グルカンが、微生物類、海草類、原虫類からなる群より選択される一種由来のβ−グルカンである、上記（１）〜（５）のいずれかに記載の剤。
（７）微生物が、酵母菌である、上記（６）に記載の剤。
（８）酵母菌が、カンジダ（Ｃａｎｄｉｄａ）属の酵母菌である、上記（７）に記載の剤。
（９）水不溶性β−グルカンを添加してなる、食品。
（１０）β−グルカンが、長鎖β−１，６−結合を側鎖に有するβ−グルカンである、上記（９）に記載の食品。
（１１）β−グルカンが、酸化処理したβ−グルカンである、上記（９）又は（１０）に記載の食品。
（１２）炎症の予防又は改善用である、上記（９）〜（１１）のいずれかに記載の食品。
（１３）β−グルカンが、微生物類、海草類、原虫類からなる群より選択される一種由来のβ−グルカンである、上記（９）〜（１２）のいずれかに記載の食品。
（１４）微生物が、酵母菌である、上記（１３）に記載の食品。
（１５）酵母菌が、カンジダ（Ｃａｎｄｉｄａ）属の酵母菌である、上記（１４）に記載の食品。
【発明の効果】
【０００９】
本発明の水不溶性β−グルカンを含有する抗炎症経口投与剤は、優れた抗炎症効果を有する。また、経口投与が可能であるので、多くの患者に簡便に使用し得る。したがって、本発明の抗炎症経口投与剤、炎症の予防又は改善用食品は、炎症治療を向上及び改善させる上で極めて有益である。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】ＤＳＳ誘導炎症性腸疾患モデルの飼育計画を示す表。
【図２】ＤＳＳ誘導炎症性腸疾患モデルを用いた実験の結果を示す表（体重の経時的変化）。
【図３】ＤＳＳ誘導炎症性腸疾患モデルを用いた実験の結果を示す表（直腸からの出血スコア）。
【図４】ＤＳＳ誘導炎症性腸疾患モデルを用いた実験の結果を示す表（大腸の長さ）。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
以下、本発明について詳細に説明する。
【００１２】
本発明は、水不溶性β−グルカンを含有する抗炎症経口投与剤を提供する。
【００１３】
本発明のβ−グルカンは、水不溶性であることが重要である。ここで「水不溶性」とは、２５℃の水１００ｇに懸濁させたときに、その溶解度が１重量％未満であることをいい、好ましくは、全く溶解しないことをいう。このような水不溶性のβ−グルカンは、熱水にもほとんど溶解することはなく、水に添加した場合、通常は、ゲル形成せず、粒子状となる。
【００１４】
本発明のβ−グルカンは分子間相互作用によって水不溶性となっているものであって単分子ごとの分子量について特に制限を設けないが、数平均分子量が少なくとも２００００を超え、好ましくは１００，０００〜５００，０００であるものが好ましい。
【００１５】
本発明の抗炎症経口投与剤が有効成分として含有するβ−グルカンの構造は、長鎖β−１，６−結合を側鎖に有するものであることが好ましい。ここで、「長鎖β−１，６−結合を側鎖に有する」とは、主鎖（通常、β−１，３−結合のグルコース残基等）の少なくとも一箇所以上において、長鎖β−１，６−結合のグルコース残基が分岐していることをいう。また、「長鎖β−１，６−結合」とは、重合度が少なくとも２以上であるものをいい、好ましくは１０以上、より好ましくは１０〜５０であるものをいう。
【００１６】
本発明のβ−グルカンの由来は特に制限されず、例えば、微生物類、海草類、原虫類から得られるものが挙げられるが、中でも、微生物から得られるものが好ましい。
【００１７】
微生物類は、従来より食用に供せられている微生物類が安全性が高く好ましく、例えば、酵母菌、乳酸菌、納豆菌、酢酸菌、麹菌、クロレラやスピルリナなどの藻類、糸状菌、アウレオバシジウム（Ａｕｒｅｏｂａｓｉｄｉｕｍ）属に属する微生物等が挙げられるが、中でも、酵母菌が好ましい。これらは、環境中（例えば食品、土壌、室内など）より分離された当該微生物を用いることができる。また、単菌分離された保存株あるいは分離株、さらにはそれらを常法に従い変異操作を実施した変異株を用いることができる。変異操作の例としては、例えばＵＶ照射、あるいはニトロソグアニジン、エチジウムブロマイド、メタンスルホン酸エチル、亜硝酸ナトリウムなどによる化学処理などが挙げられる。
【００１８】
酵母菌としては、例えば、ビール、発泡酒、焼酎、日本酒、ワイン、ウイスキーなどのアルコール醸造や製パン工程で使用されるサッカロマイセス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）属に分類される酵母類や、圧搾パン酵母、醤油醸造で使用される酵母類、微生物蛋白質生産に使用されるカンジダ（Ｃａｎｄｉｄａ）属の酵母菌などが挙げられる。
【００１９】
乳酸菌としては、例えば、桿菌のラクトバシラス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）属やビフィドバクテリウム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属、球菌のロイコノストック（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ）属、ペディオコッカス（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ）属、ストレプトコッカス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）属、ラクトコッカス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ）属の乳酸菌が通常使用されるが、その他、エンテロコッカス（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ）属、バゴコッカス（Ｖａｇｏｃｏｃｃｕｓ）属、カルノバクテリウム（Ｃａｒｎｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属、アエロコッカス（Ａｅｒｏｃｏｃｃｕｓ）属、テトラゲノコッカス（Ｔｅｔｒａｇｅｎｏｃｏｃｃｕｓ）属の乳酸菌を利用することができる。具体的な乳酸菌株としては、ラクトバシルスブルガリカス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ）、ラクトバシルスヘルベティカス（Ｌ．ｈｅｌｖｅｔｉｃｕｓ）、ラクトバシルスアシドフィルス（Ｌ．ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ）、ラクトバシルスラクティス（Ｌ．ｌａｃｔｉｓ）、ラクトバシルスカゼイ（Ｌ．ｃａｓｅｉ）、ラクトバシルスブレビス（Ｌ．ｂｒｅｖｉｓ）、ラクトバシルスプランタラム（Ｌ．ｐｌａｎｔａｒｕｍ）、ラクトバシルスサケ（Ｌ．ｓａｋｅ）、ストレプトコッカスサーモフィルス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）、ストレプトコッカスラクティス（Ｓ．ｌａｃｔｉｓ）、ストレプトコッカスクレモリス（Ｓ．ｃｒｅｍｏｒｉｓ）、ビィフィドバクテリウムロンガム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｏｎｇｕｍ）、ビィフィドバクテリウムビィフィダム（Ｂ．ｂｉｆｉｄｕｍ）、ビィフィドバクテリウムブレーベ（Ｂ．ｂｒｅｖｅ）、ビィフィドバクテリウムインファンティス（Ｂ．ｉｎｆａｎｔｉｓ）、ロイコノストッククレモリス（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ ｃｒｅｍｏｒｉｓ）、ロイコノストックメセンテロイデス（Ｌｎ．ｍｅｓｅｎｔｅｒｏｉｄｅｓ）、ロイコノストックオクノス（Ｌｎ．ｏｃｎｏｓ）、ペディオコッカスアシディラクティシ（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉ）、ペディオコッカスセレビシエ（Ｐ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）、ペディオコッカスペントサセウス（Ｐ．ｐｅｎｔｏｓａｃｅｕｓ）などの従来使用されている乳酸菌の１種類または２種類以上を使用できる。これらは単品で使用してもよく、２種類以上を共生させてもよい。また、ビフィドバクテリウム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属の乳酸菌の培養とその他の乳酸菌の培養とを別々に行い、これらを混合してもよい。
【００２０】
その他、納豆菌であるバシルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属の菌株、酢酸菌であるアセトバクター（Ａｃｅｔｏｂａｃｔｏｒ）属の菌株、麹菌類であるアスペルギルス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）属やペニシリウム（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ）属の菌株、クロレラやスピルリナなどの藻類、乾燥クロレラ粉末、プルランを菌体外に分泌生産することが知られているアウレオバシジウム（Ａｕｒｅｏｂａｓｉｄｉｕｍ）属の菌株、その他食品添加物として使用される増粘多糖類を生産することが知られているキサントモナス（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ）属、アエロモナス（Ａｅｒｏｍｏｎａｓ）属、アゾトバクター（Ａｚｏｔｏｂａｃｔｏｒ）属、アルカリゲネス（Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ）属、エルウィニア（Ｅｒｗｉｎｉａ）属、エンテロバクター（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｏｒ）属、スクレロティウム（Ｓｃｌｅｒｏｔｉｕｍ）属、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）属、アグロバクテリウム（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属、マクロホモプシス（Ｍａｃｒｏｐｈｏｍｏｐｓｉｓ）属の菌株を用いることができる。
【００２１】
海草類は、特に制限されず、例えば、アオサ、アオノリ、アサクサノリ、アラメ、エゴノリ、オゴノリ、ガゴメ、カジメ、クビレズタ、クロメ、コンブ、スサビノリ、ツルアラメ、テングサ、ハバノリ、ヒジキ、ヒトエグサ、フノリ、メカブ、モズク、ワカメが挙げられる。
【００２２】
本発明のβ−グルカンの抽出、単離、精製方法としては特に制限されず、濾過、遠心分離等の自体公知の方法を制限無く用いることができるが、具体的には、例えば、酸抽出、アルカリ抽出、熱水抽出と次亜塩素酸酸化を併用すること等により、本発明の水不溶性β−グルカンを抽出、単離、精製し得る。
【００２３】
本発明のβ−グルカンは、抽出、単離、精製後に酸化処理、酵素処理、物理的処理等を施されたものであってもよい。ここで「酸化処理」は、たんぱく質、脂質、核酸等を酸化分解するものであり、例えば、特開２００３−１７６３０４号公報記載の方法に準じ、適当な酸化剤（例えば次亜塩素酸塩、過ヨウ素酸塩など）を用いて行うことができる。かかる酸化剤としては、特に次亜塩素酸塩（例えば次亜塩素酸リチウム、次亜塩素酸ナトリウム及び次亜塩素酸カリウムなど）が好ましく、次亜塩素酸ナトリウムが最も好ましい。
具体的には、例えば、酸化剤として次亜塩素酸ナトリウム溶液を用いる場合、適当量の次亜塩素酸ナトリウム溶液に植生物の脱脂乾燥物（例えば、カンジダ（Ｃａｎｄｉｄａ）属の酵母菌の脱脂乾燥菌体等）を混合した後、攪拌して反応を進めることが好ましい。その際の温度と処理時間によって酸化の程度の異なる種々の酸化物が得られるが、通常は０〜３７℃、好ましくは２〜８℃、例えば４℃の温度条件下で、１〜２４時間、好ましくは５〜１５時間程度反応させることがより好ましいが、特に限定はされない。反応時間は種々の条件の変化により変化し得る。
酸化処理したβ−グルカンは上記酸化処理溶液中で不溶性であり、酸化処理液から不溶性画分を回収することにより、夾雑物質である水溶性画分との分離がなされる。不溶性画分の回収は、通常の固液分離手段、例えば濾過、或いは遠心分離などの公知の一般的な方法によって行うことができるが、特に遠心分離処理が好ましい。
更に、反応溶液を透析などの脱塩手段による脱塩や、「不溶性画分」の水による洗浄を行い、上記固液分離手段により「不溶性画分」を回収することが好ましい。
次亜塩素酸酸化は水不溶性β−グルカン以外の成分を悉く分解することができるので、用いる原料によっては、前処理なしに、次亜塩素酸酸化を行うだけで水不溶性β−グルカンを調整することも可能である。
【００２４】
本発明における抗炎症経口投与剤の剤型は、医薬製剤一般の剤型を制限なく採用することができ、具体的には、例えば、顆粒剤、細粒剤、錠剤、散剤、カプセル剤、チュアブル剤、液剤、懸濁剤等が挙げられる。これらは、常法により製剤化することができ、製剤上の必要に応じて、例えば、賦形剤、崩壊剤、滑沢剤、結合剤、コーティング剤、着色剤、凝集防止剤、吸収促進剤、溶解補助剤、安定化剤、香料、甘味剤、保存剤、抗酸化剤などの通常の添加剤を適宜配合することができる。
【００２５】
賦形剤は特に限定されず、例えば、白糖、乳糖、ブドウ糖、コーンスターチ、マンニトール、結晶セルロース、リン酸カルシウム、硫酸カルシウムなどが挙げられる。
【００２６】
崩壊剤は特に限定されず、例えば、澱粉、寒天、クエン酸カルシウム、炭酸カルシウム、炭酸水素ナトリウム、デキストリン、結晶セルロース、カルボキシメチルセルロース、トラガントなどが挙げられる。
【００２７】
滑沢剤は特に限定されず、例えば、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸ナトリウム、ステアリン酸、ステアリン酸カルシウム、オレイン酸マグネシウム、オレイン酸、オレイン酸カリウム、カプリル酸、フマル酸ステアリルナトリウム、パルミチン酸マグネシウムまたはそのような潤滑剤の配合物等が挙げられる。
【００２８】
結合剤は特に限定されず、例えば、でんぷん及びその誘導体（アルファー化デンプン、デキストリン等）、セルロース及びその誘導体（エチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ヒドロキシプロピルメチルセルロース等）、アラビアゴム、トラガント、ゼラチン、糖類（ブドウ糖、白糖等）、エタノール、ポリビニルアルコール等が挙げられる。
【００２９】
コーティング剤は特に限定されず、例えば、セルロース誘導体（ヒドロキシプロピルセルロース、酢酸フタル酸セルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート等）、セラック、ポリビニルピロリドン、ポリビニルピリジン類（ポリ−２−ビニルピリジン、ポリ−２−ビニル−５−エチルピリジン等）、ポリビニルアセチルジエチルアミノアセテート、ポリビニルアルコールフタレート、メタアクリレート・メタアクリル酸共重合体等が挙げられる。
【００３０】
着色剤は特に限定されず、医薬品あるいは食品に添加することが許可されているものなどを使用することができ、例えば、青色１号、黄色４号、緑色３号、赤色５号、レーキ色素、二酸化チタン、赤キャベツ色素、紅麹色素、ムラサキイモ色素、クチナシ色素、コチニール色素などが挙げられる。
【００３１】
凝集防止剤は特に限定されず、医薬品あるいは食品に添加することが許可されているものを使用することができ、例えば、ステアリン酸、タルク、軽質無水ケイ酸、含水二酸化ケイ酸等などが挙げられる。
【００３２】
吸収促進剤は特に限定されず、例えば、高級アルコール類、高級脂肪酸類、グリセリン脂肪酸エステルなどの界面活性剤などが挙げられる。
【００３３】
溶解補助剤は特に限定されず、例えば、アジピン酸、Ｌ−アルギニン、安息香酸ナトリウム、安息香酸ベンジル、エステル化トウモロコシ油、エタノール、塩化マグネシウム、塩酸、オリーブ油、カルメロースナトリウム、乾燥炭酸ナトリウム、希塩酸、クエン酸、クエン酸ナトリウム、グリシン、グリセリン、グリセリン脂肪酸エステル、ゲラニオール、ゴマ油、酢酸フタル酸セルロース、サリチル酸ナトリウム、酸化マグネシウム、α−シクロデキストリン、β−シクロデキストリン、γ−シクロデキストリン、ジブチルヒドロキシトルエン、酒石酸、ショ糖脂肪酸エステル、水酸化ナトリウム、セスキオレイン酸ソルビタン、ソルビタン脂肪酸エステル、Ｄ−ソルビトール、Ｄ−ソルビトール液、ダイズ油、大豆レシチン、炭酸水素ナトリウム、炭酸ナトリウム、中鎖脂肪酸トリグリセリド、トリアセチン、トリオレイン酸ソルビタン、ニコチン酸アミド、乳酸、濃グリセリン、白銅、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒマシ油、氷酢酸、ブドウ糖、プロピレングリコール、プロピレングリコール脂肪酸エステル、ポビドン、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、ポリオキシエチレン（１６０）ポリオキシプロピレン（３０）グリコール、ポリソルベート、ポリビニルアルコール、マクロゴール、Ｄ−マンニトール、ミリスチン酸イソプロピル、無水エタノール、無水クエン酸、モノオレイン酸ソルビタン、ラウリルマクロゴール、リドカイン、リン酸、リン酸水素ナトリウム、リン酸二水素カリウムなどが挙げられる。
【００３４】
安定化剤は特に限定されず、例えば、安息香酸、安息香酸ナトリウム、パラオキシ安息香酸エチルなどが挙げられる。
【００３５】
香料は特に限定されず、例えば、メントール、カルボン、アネトール、シネオール、サリチル酸メチル、シンナミックアルデヒド、オイゲノール、３，１−メントキシプロパン−１，２−ジオール、チモール、リナロール、リナリールアセテート、リモネン、メントン、メンチルアセテート、Ｎ−置換−パラメンタン−３−カルボキサミド、ピネン、オクチルアルデヒド、シトラール、プレゴン、カルビールアセテート、アニスアルデヒド、エチルアセテート、エチルブチレート、アリルシクロヘキサンプロピオネート、メチルアンスラニレート、エチルメチルエチニルグリシデート、バニリン、ウンデカラクトン、ヘキサナール、エチルアルコール、プロピルアルコール、ブタノール、イソアミルアルコール、ヘキセノール、ジメチルサルファイド、シクロテン、フルフラール、トリメチルピラゾン、エチルラクテート、エチルチオアセテートなどの単品香料、更に、ペパーミント油、スペアミント油、アニス油、ユーカリ油、ウインターグリーン油、カシア油、クローブ油、タイム油、セージ油、レモン油、オレンジ油、ハッカ油、カルダモン油、コリアンダー油、マンダリン油、ライム油、ラベンダー油、ローズマリー油、ローレル油、カモミール油、キャラウェイ油、マジョラム油、ベイ油、レモングラス油、オリガナム油、パインニードル油、ネロリ油、ローズ油、ジャスミン油、イリスコンクリート、アブソリュートペパーミント、アブソリュートローズ、オレンジフラワーなどの天然香料、ストロベリーフレーバー、アップルフレーバー、バナナフレーバー、パイナップルフレーバー、グレープフレーバー、マンゴーフレーバー、バターフレーバー、ミルクフレーバー、フルーツミックスフレーバー、トロピカルフルーツフレーバーなどの調合香料などが挙げられる。
【００３６】
甘味剤は特に限定されず、例えば、サッカリンナトリウム、アスパルテーム、ステビオサイド、ステビアエキス、パラメトキシシンナミックアルデヒド、ネオヘスペリジルジヒドロカルコン、ペリラルチンなどが挙げられる。
【００３７】
保存剤は特に限定されず、例えば、安息香酸、安息香酸ナトリウム、エタノール、エデト酸ナトリウム、乾燥亜硫酸ナトリウム、クエン酸、グリセリン、サリチル酸、サリチル酸ナトリウム、ジブチルヒドロキシトルエン、Ｄ−ソルビトール、ソルビン酸、ソルビン酸カリウム、デヒドロ酢酸ナトリウム、パラオキシ安息香酸イソブチル、パラオキシ安息香酸イソプロピル、パラオキシ安息香酸エチル、パラオキシ安息香酸ブチル、パラオキシ安息香酸プロピル、パラオキシ安息香酸メチル、プロピレングリコール、リン酸などが挙げられる。
【００３８】
抗酸化剤は特に限定されず、例えば、クエン酸、クエン酸誘導体、ビタミンＣおよびその誘導体、リコペン、ビタミンＡ、カロテノイド類、ビタミンＢおよびその誘導体、フラボノイド類、ポリフェノール類、グルタチオン、セレン、チオ硫酸ナトリウム、ビタミンＥおよびその誘導体、αリポ酸およびその誘導体、ピクノジェノール、フラバンジェノール、スーパーオキサイドディスムターゼ（ＳＯＤ）、グルタチオンペルオキシダーゼ、グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ、グルタチオン還元酵素、カタラーゼ、アスコルビン酸ペルオキシダーゼ、およびこれらの混合物などが挙げられる。
【００３９】
本発明の抗炎症経口投与剤は、腸（小腸（十二指腸、空腸、回腸を含む）又は大腸（盲腸、結腸、直腸を含む））における炎症に有効であり、特に、大腸における炎症に有効である。ここで、本発明でいう「炎症」、すなわち本発明の抗炎症経口投与剤が対象とする「炎症」とは、内的要因または細菌感染、外傷、熱・寒冷・放射線・電気等の物理的刺激あるいは化学物質等の外的要因に限定されない種々要因による生体組織の傷害あるいは機能不全において、白血球が血管内皮細胞上でのローリング、接着を経て血流中から血管外組織へと浸潤することに起因する血管及び隣接する組織の細胞学的・組織学的反応の動的な複合体からなる基本的な病理学上の局所反応を意味する。
また、本発明の抗炎症経口投与剤は、炎症性腸疾患の予防及び／又は治療に有用である。炎症性腸疾患としては、例えば、クローン病や潰瘍性・肉芽腫性・虚血性・放射性・感染性結腸炎等の大腸炎が挙げられる。
【００４０】
本発明の抗炎症経口投与剤の投与対象としては炎症を有する個体（例えば、ヒトをはじめウシ、ウマ、イヌ、マウス、ラット等の哺乳動物）、炎症を有する可能性のある個体などが挙げられる。
【００４１】
本発明の抗炎症経口投与剤の有効成分である水不溶性β−グルカンの投与量は、投与する患者の性別、症状、年齢、投与方法によって異なるが、通常、成人（体重６０ｋｇ）１日あたりの投与量が全量で、５０ｍｇ〜５０ｇであり、好ましくは、成人１日あたりの投与量が全量で、５００ｍｇ〜１０ｇである。上記１日あたりの量を一度にもしくは数回に分けて投与することができ、投与時は、食前、食後、食間を問わない。また投与期間は特に限定されない。
【００４２】
本発明は、水不溶性β−グルカンを添加してなる、炎症の予防又は改善用の食品を提供する。
【００４３】
本発明の食品は、本発明の水不溶性β−グルカンを添加してなる一般的な食品形態であれば如何なるものでも良い。例えば、適当な風味を加えてドリンク剤、例えば清涼飲料、粉末飲料とすることもできる。具体的には、ジュース、牛乳、菓子、ゼリー等に混ぜて飲食することができる。また、このような食品を保健機能食品として提供することも可能であり、この保健機能食品には、炎症の予防又は改善などの本発明の用途に用いるものであるという表示を付した飲食品、特に保健機能食品、特定保健用食品、栄養機能食品なども含まれる。
【００４４】
さらに、本発明の食品を濃厚流動食や、食品補助剤として利用することも可能である。食品補助剤として使用する場合、例えば錠剤、カプセル、散剤、顆粒、懸濁剤、チュアブル剤、シロップ剤等の形態に調製することができる。本発明における食品補助剤とは、食品として摂取されるもの以外に栄養を補助する目的で摂取されるものをいい、栄養補助剤、サプリメントなどもこれに含まれる。
【００４５】
本発明の食品を摂取する場合、成人（体重６０ｋｇ）１日当たりの水不溶性β−グルカンの摂取量は、通常５０ｍｇ〜５０ｇ程度、好ましくは５００ｍｇ〜１０ｇ程度である。
【実施例】
【００４６】
以下、実施例及び比較例を挙げて本発明を更に具体的に説明するが、本発明はこれらの例によってなんら限定されるものではない。
【００４７】
（ＯＸ−ＣＡの調製）
カンジダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ：ＩＦＯ１３８５）を５ＬのＣ−制限培地（炭素源としてショ糖を含む培地）にて２７℃で４８〜７２時間液体培養し（ジャーファメンター使用；攪拌速度：４００ｒｐｍ）、アセトン処理した後、乾燥菌体（脱脂乾燥菌体）１６〜２０ｇを得た。
当該脱脂乾燥菌体２ｇに０．１ｍｏｌ／Ｌ ＮａＯＨ ２００ｍＬを加えて懸濁し、次亜塩素酸ナトリウム（アンチホルミン、和光純薬工業株式会社製）を有効塩素濃度が０．５〜１．５となるように添加して、４℃で一夜撹拌し酸化分解した。得られた酸化物を３，０００ｒｐｍ、１０分間遠心分離し沈殿物を得、β−グルカンを含まない蒸留水２００ｍＬを加え、撹拌後遠心分離（３，０００ｒｐｍ、１０分）し、その沈殿物にアセトン２００ｍＬを加え脱水沈殿物としてカンジダ属酵母菌由来酸化処理β−グルカン（ＯＸ−ＣＡ）を得た。収量は３５０ｍｇ程度であった。
ここで、上記ＯＸ−ＣＡは水不溶性であり、また、β−１，３−結合のグルコース残基の主鎖から分岐するβ−１，６−結合のグルコース残基の重合度は、２〜５０程度と広範囲に分布するが、重合度が１０〜５０程度のものが多い（Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ３１６（１９９９）１６１−１７２、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｍｍｕｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ２（２００２）１１０９−１１２２）。
【００４８】
（炎症性腸疾患モデルマウスの作製とＯＸ−ＣＡ経口投与）
炎症性腸疾患モデルマウスの飼育計画を図１に示す。具体的には、以下のとおりに飼育を行った。
ＯＸ−ＣＡ経口投与マウスは、２週に渡りβ−グルカンを含まない粉末飼料を与えたＢＡＬＢ／ｃマウス(７週齢)に、３週目から５％のＯＸ−ＣＡ粉末をβ−グルカンを含まない粉末飼料に混合し自由接種させ、かつ４週目より７日間、４％デキストラン硫酸（以下、「ＤＳＳ」と略記する場合がある）を自由飲水させた。対照として、β−グルカンを含まない粉末飼料を自由接種させ、水道水を自由飲水させたマウス（ＤＳＳ(−)群）、β−グルカンを含む粉末飼料を与えたマウスに７日間４％ＤＳＳを自由飲水させたマウス（Ｃｏｎｔｒｏｌ群）を用いた。
各群のマウスについて、以下の各項目を評価した。
【００４９】
炎症性腸疾患の程度を示す指標としてマウスの体重の経時的変化を測定し、ＤＳＳ投与開始日の体重を１００としたときの体重の割合（％）を算出した。結果を図２に示す。
【００５０】
図２に示す結果から明らかなとおり、Ｃｏｎｔｒｏｌ群ではＤＳＳ投与により大幅な体重の減少が認められたが、５重量％ＯＸ−ＣＡ投与群では、体重の顕著な減少は認められなかった。
【００５１】
炎症性腸疾患の程度を示す指標としてマウスの直腸からの出血状態を、以下に示す基準に従って各スコアに分類し、各群のマウスの平均値を求めた。結果を図３に示す。
［スコア分類基準］
スコア０：正常
スコア１：目視で便に血が混じっている
スコア２：肛門に血液が付着している
スコア３：肛門から常に出血している
【００５２】
図３に示す結果から明らかなとおり、ＤＳＳ投与により出血スコアの上昇が認められたが、５重量％ＯＸ−ＣＡ経口投与により有意に改善した。
【００５３】
炎症性腸疾患の程度を示す指標として各群のマウスの大腸の長さを測定し、平均値を算出した。結果を図４に示す。
【００５４】
図４に示す結果から明らかなとおり、ＤＳＳ投与によりマウス大腸は有意に短くなったが、５重量％ＯＸ−ＣＡ経口投与により腸管短縮の有意な改善が認められた。
【００５５】
以上の結果から明らかなように、炎症性腸疾患モデルマウスにおいて、水不溶性β−グルカンを経口投与することにより、炎症性腸疾患が有意に抑制されることが確認された。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、水不溶性β−グルカンを含有する抗炎症経口投与剤及び炎症の予防・改善用食品に関する。
【背景技術】
【０００２】
従来より、β−グルカンには、水可溶性のものと水不溶性のものとがあり、両者の生物活性は著しく異なるものであることが知られている。そのような異なる生物活性としては、例えば、マクロファージからの活性酸素産生活性等が挙げられ、即ち、水不溶性のβ−グルカンは、かかる活性酸素産生活性を示すものであるのに対し、水可溶性のβ−グルカンは、かかる活性酸素産生活性を示さないか、示したとしても非常に弱いものである。他にも種々の生物活性において相違が認められているが、このように水可溶性のβ−グルカンと水不溶性のβ−グルカンとの間で生物活性が異なる要因としては、水不溶性のβ−グルカンの抗原提示細胞による取り込み形態が、飲作用（ｐｉｎｏｃｙｔｏｓｉｓ）ではなく、食作用（ｐｈａｇｏｃｙｔｏｓｉｓ）であることによるものであろうとの推測がなされている（非特許文献１）。
【０００３】
一方、炎症性腸疾患の治療又は予防、改善等に、５０００〜２００００の分子量を有する植物由来のβ（１→３）グルカンが有用であることが報告されている（特許文献１）。しかし、水不溶性β−グルカンが炎症性腸疾患に有用であることは今まで知られてなく、また、特許文献１記載のβ（１→３）グルカンは水可溶性であって、抗原提示細胞による取り込み形態が飲作用（ｐｉｎｏｃｙｔｏｓｉｓ）であることから、水不溶性β−グルカンとは、生物活性が全く異なるものである。従って、水可溶性のβ（１→３）グルカンが炎症性腸疾患の治療又は予防、改善等に有用であることは、水不溶性β−グルカンが炎症性腸疾患に対する有用性について、何ら示唆するものでないばかりか、むしろ、水不溶性β−グルカンは、マクロファージからの活性酸素産生活性を示すものであることから、炎症を増悪させると考えられていた。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】国際公開第２００２／０９８４３３号
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｍｍｕｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ２（２００２）１１０９−１１２２
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明の課題は、水不溶性β−グルカンを含有する優れた抗炎症経口投与剤、並びに、炎症の予防又は改善用食品を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは、上記課題に鑑み、水不溶性β−グルカンの生理活性に注目し、鋭意研究を重ねた結果、高い活性酸素産生活性を示すことから、抗炎症効果を示すどころか、むしろ炎症を増悪させると従来考えられていた水不溶性β−グルカンが、驚くべきことに、優れた抗炎症効果を有することを見出し、本発明を完成するに至った。
即ち、本発明は下記の通りである。
【０００８】
（１）水不溶性β−グルカンを有効成分として含有する、抗炎症経口投与剤。
（２）β−グルカンが、長鎖β−１，６−結合を側鎖に有するβ−グルカンである、上記（１）に記載の剤。
（３）β−グルカンが、酸化処理したβ−グルカンである、上記（１）又は（２）に記載の剤。
（４）炎症が、腸における炎症である、上記（１）〜（３）のいずれかに記載の剤。
（５）腸が、大腸である、上記（４）に記載の剤。
（６）β−グルカンが、微生物類、海草類、原虫類からなる群より選択される一種由来のβ−グルカンである、上記（１）〜（５）のいずれかに記載の剤。
（７）微生物が、酵母菌である、上記（６）に記載の剤。
（８）酵母菌が、カンジダ（Ｃａｎｄｉｄａ）属の酵母菌である、上記（７）に記載の剤。
（９）水不溶性β−グルカンを添加してなる、食品。
（１０）β−グルカンが、長鎖β−１，６−結合を側鎖に有するβ−グルカンである、上記（９）に記載の食品。
（１１）β−グルカンが、酸化処理したβ−グルカンである、上記（９）又は（１０）に記載の食品。
（１２）炎症の予防又は改善用である、上記（９）〜（１１）のいずれかに記載の食品。
（１３）β−グルカンが、微生物類、海草類、原虫類からなる群より選択される一種由来のβ−グルカンである、上記（９）〜（１２）のいずれかに記載の食品。
（１４）微生物が、酵母菌である、上記（１３）に記載の食品。
（１５）酵母菌が、カンジダ（Ｃａｎｄｉｄａ）属の酵母菌である、上記（１４）に記載の食品。
【発明の効果】
【０００９】
本発明の水不溶性β−グルカンを含有する抗炎症経口投与剤は、優れた抗炎症効果を有する。また、経口投与が可能であるので、多くの患者に簡便に使用し得る。したがって、本発明の抗炎症経口投与剤、炎症の予防又は改善用食品は、炎症治療を向上及び改善させる上で極めて有益である。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】ＤＳＳ誘導炎症性腸疾患モデルの飼育計画を示す表。
【図２】ＤＳＳ誘導炎症性腸疾患モデルを用いた実験の結果を示す表（体重の経時的変化）。
【図３】ＤＳＳ誘導炎症性腸疾患モデルを用いた実験の結果を示す表（直腸からの出血スコア）。
【図４】ＤＳＳ誘導炎症性腸疾患モデルを用いた実験の結果を示す表（大腸の長さ）。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
以下、本発明について詳細に説明する。
【００１２】
本発明は、水不溶性β−グルカンを含有する抗炎症経口投与剤を提供する。
【００１３】
本発明のβ−グルカンは、水不溶性であることが重要である。ここで「水不溶性」とは、２５℃の水１００ｇに懸濁させたときに、その溶解度が１重量％未満であることをいい、好ましくは、全く溶解しないことをいう。このような水不溶性のβ−グルカンは、熱水にもほとんど溶解することはなく、水に添加した場合、通常は、ゲル形成せず、粒子状となる。
【００１４】
本発明のβ−グルカンは分子間相互作用によって水不溶性となっているものであって単分子ごとの分子量について特に制限を設けないが、数平均分子量が少なくとも２００００を超え、好ましくは１００，０００〜５００，０００であるものが好ましい。
【００１５】
本発明の抗炎症経口投与剤が有効成分として含有するβ−グルカンの構造は、長鎖β−１，６−結合を側鎖に有するものであることが好ましい。ここで、「長鎖β−１，６−結合を側鎖に有する」とは、主鎖（通常、β−１，３−結合のグルコース残基等）の少なくとも一箇所以上において、長鎖β−１，６−結合のグルコース残基が分岐していることをいう。また、「長鎖β−１，６−結合」とは、重合度が少なくとも２以上であるものをいい、好ましくは１０以上、より好ましくは１０〜５０であるものをいう。
【００１６】
本発明のβ−グルカンの由来は特に制限されず、例えば、微生物類、海草類、原虫類から得られるものが挙げられるが、中でも、微生物から得られるものが好ましい。
【００１７】
微生物類は、従来より食用に供せられている微生物類が安全性が高く好ましく、例えば、酵母菌、乳酸菌、納豆菌、酢酸菌、麹菌、クロレラやスピルリナなどの藻類、糸状菌、アウレオバシジウム（Ａｕｒｅｏｂａｓｉｄｉｕｍ）属に属する微生物等が挙げられるが、中でも、酵母菌が好ましい。これらは、環境中（例えば食品、土壌、室内など）より分離された当該微生物を用いることができる。また、単菌分離された保存株あるいは分離株、さらにはそれらを常法に従い変異操作を実施した変異株を用いることができる。変異操作の例としては、例えばＵＶ照射、あるいはニトロソグアニジン、エチジウムブロマイド、メタンスルホン酸エチル、亜硝酸ナトリウムなどによる化学処理などが挙げられる。
【００１８】
酵母菌としては、例えば、ビール、発泡酒、焼酎、日本酒、ワイン、ウイスキーなどのアルコール醸造や製パン工程で使用されるサッカロマイセス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）属に分類される酵母類や、圧搾パン酵母、醤油醸造で使用される酵母類、微生物蛋白質生産に使用されるカンジダ（Ｃａｎｄｉｄａ）属の酵母菌などが挙げられる。
【００１９】
乳酸菌としては、例えば、桿菌のラクトバシラス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）属やビフィドバクテリウム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属、球菌のロイコノストック（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ）属、ペディオコッカス（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ）属、ストレプトコッカス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）属、ラクトコッカス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ）属の乳酸菌が通常使用されるが、その他、エンテロコッカス（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ）属、バゴコッカス（Ｖａｇｏｃｏｃｃｕｓ）属、カルノバクテリウム（Ｃａｒｎｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属、アエロコッカス（Ａｅｒｏｃｏｃｃｕｓ）属、テトラゲノコッカス（Ｔｅｔｒａｇｅｎｏｃｏｃｃｕｓ）属の乳酸菌を利用することができる。具体的な乳酸菌株としては、ラクトバシルスブルガリカス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ）、ラクトバシルスヘルベティカス（Ｌ．ｈｅｌｖｅｔｉｃｕｓ）、ラクトバシルスアシドフィルス（Ｌ．ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ）、ラクトバシルスラクティス（Ｌ．ｌａｃｔｉｓ）、ラクトバシルスカゼイ（Ｌ．ｃａｓｅｉ）、ラクトバシルスブレビス（Ｌ．ｂｒｅｖｉｓ）、ラクトバシルスプランタラム（Ｌ．ｐｌａｎｔａｒｕｍ）、ラクトバシルスサケ（Ｌ．ｓａｋｅ）、ストレプトコッカスサーモフィルス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）、ストレプトコッカスラクティス（Ｓ．ｌａｃｔｉｓ）、ストレプトコッカスクレモリス（Ｓ．ｃｒｅｍｏｒｉｓ）、ビィフィドバクテリウムロンガム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｏｎｇｕｍ）、ビィフィドバクテリウムビィフィダム（Ｂ．ｂｉｆｉｄｕｍ）、ビィフィドバクテリウムブレーベ（Ｂ．ｂｒｅｖｅ）、ビィフィドバクテリウムインファンティス（Ｂ．ｉｎｆａｎｔｉｓ）、ロイコノストッククレモリス（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ ｃｒｅｍｏｒｉｓ）、ロイコノストックメセンテロイデス（Ｌｎ．ｍｅｓｅｎｔｅｒｏｉｄｅｓ）、ロイコノストックオクノス（Ｌｎ．ｏｃｎｏｓ）、ペディオコッカスアシディラクティシ（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉ）、ペディオコッカスセレビシエ（Ｐ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）、ペディオコッカスペントサセウス（Ｐ．ｐｅｎｔｏｓａｃｅｕｓ）などの従来使用されている乳酸菌の１種類または２種類以上を使用できる。これらは単品で使用してもよく、２種類以上を共生させてもよい。また、ビフィドバクテリウム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属の乳酸菌の培養とその他の乳酸菌の培養とを別々に行い、これらを混合してもよい。
【００２０】
その他、納豆菌であるバシルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属の菌株、酢酸菌であるアセトバクター（Ａｃｅｔｏｂａｃｔｏｒ）属の菌株、麹菌類であるアスペルギルス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）属やペニシリウム（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ）属の菌株、クロレラやスピルリナなどの藻類、乾燥クロレラ粉末、プルランを菌体外に分泌生産することが知られているアウレオバシジウム（Ａｕｒｅｏｂａｓｉｄｉｕｍ）属の菌株、その他食品添加物として使用される増粘多糖類を生産することが知られているキサントモナス（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ）属、アエロモナス（Ａｅｒｏｍｏｎａｓ）属、アゾトバクター（Ａｚｏｔｏｂａｃｔｏｒ）属、アルカリゲネス（Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ）属、エルウィニア（Ｅｒｗｉｎｉａ）属、エンテロバクター（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｏｒ）属、スクレロティウム（Ｓｃｌｅｒｏｔｉｕｍ）属、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）属、アグロバクテリウム（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属、マクロホモプシス（Ｍａｃｒｏｐｈｏｍｏｐｓｉｓ）属の菌株を用いることができる。
【００２１】
海草類は、特に制限されず、例えば、アオサ、アオノリ、アサクサノリ、アラメ、エゴノリ、オゴノリ、ガゴメ、カジメ、クビレズタ、クロメ、コンブ、スサビノリ、ツルアラメ、テングサ、ハバノリ、ヒジキ、ヒトエグサ、フノリ、メカブ、モズク、ワカメが挙げられる。
【００２２】
本発明のβ−グルカンの抽出、単離、精製方法としては特に制限されず、濾過、遠心分離等の自体公知の方法を制限無く用いることができるが、具体的には、例えば、酸抽出、アルカリ抽出、熱水抽出と次亜塩素酸酸化を併用すること等により、本発明の水不溶性β−グルカンを抽出、単離、精製し得る。
【００２３】
本発明のβ−グルカンは、抽出、単離、精製後に酸化処理、酵素処理、物理的処理等を施されたものであってもよい。ここで「酸化処理」は、たんぱく質、脂質、核酸等を酸化分解するものであり、例えば、特開２００３−１７６３０４号公報記載の方法に準じ、適当な酸化剤（例えば次亜塩素酸塩、過ヨウ素酸塩など）を用いて行うことができる。かかる酸化剤としては、特に次亜塩素酸塩（例えば次亜塩素酸リチウム、次亜塩素酸ナトリウム及び次亜塩素酸カリウムなど）が好ましく、次亜塩素酸ナトリウムが最も好ましい。
具体的には、例えば、酸化剤として次亜塩素酸ナトリウム溶液を用いる場合、適当量の次亜塩素酸ナトリウム溶液に植生物の脱脂乾燥物（例えば、カンジダ（Ｃａｎｄｉｄａ）属の酵母菌の脱脂乾燥菌体等）を混合した後、攪拌して反応を進めることが好ましい。その際の温度と処理時間によって酸化の程度の異なる種々の酸化物が得られるが、通常は０〜３７℃、好ましくは２〜８℃、例えば４℃の温度条件下で、１〜２４時間、好ましくは５〜１５時間程度反応させることがより好ましいが、特に限定はされない。反応時間は種々の条件の変化により変化し得る。
酸化処理したβ−グルカンは上記酸化処理溶液中で不溶性であり、酸化処理液から不溶性画分を回収することにより、夾雑物質である水溶性画分との分離がなされる。不溶性画分の回収は、通常の固液分離手段、例えば濾過、或いは遠心分離などの公知の一般的な方法によって行うことができるが、特に遠心分離処理が好ましい。
更に、反応溶液を透析などの脱塩手段による脱塩や、「不溶性画分」の水による洗浄を行い、上記固液分離手段により「不溶性画分」を回収することが好ましい。
次亜塩素酸酸化は水不溶性β−グルカン以外の成分を悉く分解することができるので、用いる原料によっては、前処理なしに、次亜塩素酸酸化を行うだけで水不溶性β−グルカンを調整することも可能である。
【００２４】
本発明における抗炎症経口投与剤の剤型は、医薬製剤一般の剤型を制限なく採用することができ、具体的には、例えば、顆粒剤、細粒剤、錠剤、散剤、カプセル剤、チュアブル剤、液剤、懸濁剤等が挙げられる。これらは、常法により製剤化することができ、製剤上の必要に応じて、例えば、賦形剤、崩壊剤、滑沢剤、結合剤、コーティング剤、着色剤、凝集防止剤、吸収促進剤、溶解補助剤、安定化剤、香料、甘味剤、保存剤、抗酸化剤などの通常の添加剤を適宜配合することができる。
【００２５】
賦形剤は特に限定されず、例えば、白糖、乳糖、ブドウ糖、コーンスターチ、マンニトール、結晶セルロース、リン酸カルシウム、硫酸カルシウムなどが挙げられる。
【００２６】
崩壊剤は特に限定されず、例えば、澱粉、寒天、クエン酸カルシウム、炭酸カルシウム、炭酸水素ナトリウム、デキストリン、結晶セルロース、カルボキシメチルセルロース、トラガントなどが挙げられる。
【００２７】
滑沢剤は特に限定されず、例えば、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸ナトリウム、ステアリン酸、ステアリン酸カルシウム、オレイン酸マグネシウム、オレイン酸、オレイン酸カリウム、カプリル酸、フマル酸ステアリルナトリウム、パルミチン酸マグネシウムまたはそのような潤滑剤の配合物等が挙げられる。
【００２８】
結合剤は特に限定されず、例えば、でんぷん及びその誘導体（アルファー化デンプン、デキストリン等）、セルロース及びその誘導体（エチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ヒドロキシプロピルメチルセルロース等）、アラビアゴム、トラガント、ゼラチン、糖類（ブドウ糖、白糖等）、エタノール、ポリビニルアルコール等が挙げられる。
【００２９】
コーティング剤は特に限定されず、例えば、セルロース誘導体（ヒドロキシプロピルセルロース、酢酸フタル酸セルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート等）、セラック、ポリビニルピロリドン、ポリビニルピリジン類（ポリ−２−ビニルピリジン、ポリ−２−ビニル−５−エチルピリジン等）、ポリビニルアセチルジエチルアミノアセテート、ポリビニルアルコールフタレート、メタアクリレート・メタアクリル酸共重合体等が挙げられる。
【００３０】
着色剤は特に限定されず、医薬品あるいは食品に添加することが許可されているものなどを使用することができ、例えば、青色１号、黄色４号、緑色３号、赤色５号、レーキ色素、二酸化チタン、赤キャベツ色素、紅麹色素、ムラサキイモ色素、クチナシ色素、コチニール色素などが挙げられる。
【００３１】
凝集防止剤は特に限定されず、医薬品あるいは食品に添加することが許可されているものを使用することができ、例えば、ステアリン酸、タルク、軽質無水ケイ酸、含水二酸化ケイ酸等などが挙げられる。
【００３２】
吸収促進剤は特に限定されず、例えば、高級アルコール類、高級脂肪酸類、グリセリン脂肪酸エステルなどの界面活性剤などが挙げられる。
【００３３】
溶解補助剤は特に限定されず、例えば、アジピン酸、Ｌ−アルギニン、安息香酸ナトリウム、安息香酸ベンジル、エステル化トウモロコシ油、エタノール、塩化マグネシウム、塩酸、オリーブ油、カルメロースナトリウム、乾燥炭酸ナトリウム、希塩酸、クエン酸、クエン酸ナトリウム、グリシン、グリセリン、グリセリン脂肪酸エステル、ゲラニオール、ゴマ油、酢酸フタル酸セルロース、サリチル酸ナトリウム、酸化マグネシウム、α−シクロデキストリン、β−シクロデキストリン、γ−シクロデキストリン、ジブチルヒドロキシトルエン、酒石酸、ショ糖脂肪酸エステル、水酸化ナトリウム、セスキオレイン酸ソルビタン、ソルビタン脂肪酸エステル、Ｄ−ソルビトール、Ｄ−ソルビトール液、ダイズ油、大豆レシチン、炭酸水素ナトリウム、炭酸ナトリウム、中鎖脂肪酸トリグリセリド、トリアセチン、トリオレイン酸ソルビタン、ニコチン酸アミド、乳酸、濃グリセリン、白銅、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒマシ油、氷酢酸、ブドウ糖、プロピレングリコール、プロピレングリコール脂肪酸エステル、ポビドン、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、ポリオキシエチレン（１６０）ポリオキシプロピレン（３０）グリコール、ポリソルベート、ポリビニルアルコール、マクロゴール、Ｄ−マンニトール、ミリスチン酸イソプロピル、無水エタノール、無水クエン酸、モノオレイン酸ソルビタン、ラウリルマクロゴール、リドカイン、リン酸、リン酸水素ナトリウム、リン酸二水素カリウムなどが挙げられる。
【００３４】
安定化剤は特に限定されず、例えば、安息香酸、安息香酸ナトリウム、パラオキシ安息香酸エチルなどが挙げられる。
【００３５】
香料は特に限定されず、例えば、メントール、カルボン、アネトール、シネオール、サリチル酸メチル、シンナミックアルデヒド、オイゲノール、３，１−メントキシプロパン−１，２−ジオール、チモール、リナロール、リナリールアセテート、リモネン、メントン、メンチルアセテート、Ｎ−置換−パラメンタン−３−カルボキサミド、ピネン、オクチルアルデヒド、シトラール、プレゴン、カルビールアセテート、アニスアルデヒド、エチルアセテート、エチルブチレート、アリルシクロヘキサンプロピオネート、メチルアンスラニレート、エチルメチルエチニルグリシデート、バニリン、ウンデカラクトン、ヘキサナール、エチルアルコール、プロピルアルコール、ブタノール、イソアミルアルコール、ヘキセノール、ジメチルサルファイド、シクロテン、フルフラール、トリメチルピラゾン、エチルラクテート、エチルチオアセテートなどの単品香料、更に、ペパーミント油、スペアミント油、アニス油、ユーカリ油、ウインターグリーン油、カシア油、クローブ油、タイム油、セージ油、レモン油、オレンジ油、ハッカ油、カルダモン油、コリアンダー油、マンダリン油、ライム油、ラベンダー油、ローズマリー油、ローレル油、カモミール油、キャラウェイ油、マジョラム油、ベイ油、レモングラス油、オリガナム油、パインニードル油、ネロリ油、ローズ油、ジャスミン油、イリスコンクリート、アブソリュートペパーミント、アブソリュートローズ、オレンジフラワーなどの天然香料、ストロベリーフレーバー、アップルフレーバー、バナナフレーバー、パイナップルフレーバー、グレープフレーバー、マンゴーフレーバー、バターフレーバー、ミルクフレーバー、フルーツミックスフレーバー、トロピカルフルーツフレーバーなどの調合香料などが挙げられる。
【００３６】
甘味剤は特に限定されず、例えば、サッカリンナトリウム、アスパルテーム、ステビオサイド、ステビアエキス、パラメトキシシンナミックアルデヒド、ネオヘスペリジルジヒドロカルコン、ペリラルチンなどが挙げられる。
【００３７】
保存剤は特に限定されず、例えば、安息香酸、安息香酸ナトリウム、エタノール、エデト酸ナトリウム、乾燥亜硫酸ナトリウム、クエン酸、グリセリン、サリチル酸、サリチル酸ナトリウム、ジブチルヒドロキシトルエン、Ｄ−ソルビトール、ソルビン酸、ソルビン酸カリウム、デヒドロ酢酸ナトリウム、パラオキシ安息香酸イソブチル、パラオキシ安息香酸イソプロピル、パラオキシ安息香酸エチル、パラオキシ安息香酸ブチル、パラオキシ安息香酸プロピル、パラオキシ安息香酸メチル、プロピレングリコール、リン酸などが挙げられる。
【００３８】
抗酸化剤は特に限定されず、例えば、クエン酸、クエン酸誘導体、ビタミンＣおよびその誘導体、リコペン、ビタミンＡ、カロテノイド類、ビタミンＢおよびその誘導体、フラボノイド類、ポリフェノール類、グルタチオン、セレン、チオ硫酸ナトリウム、ビタミンＥおよびその誘導体、αリポ酸およびその誘導体、ピクノジェノール、フラバンジェノール、スーパーオキサイドディスムターゼ（ＳＯＤ）、グルタチオンペルオキシダーゼ、グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ、グルタチオン還元酵素、カタラーゼ、アスコルビン酸ペルオキシダーゼ、およびこれらの混合物などが挙げられる。
【００３９】
本発明の抗炎症経口投与剤は、腸（小腸（十二指腸、空腸、回腸を含む）又は大腸（盲腸、結腸、直腸を含む））における炎症に有効であり、特に、大腸における炎症に有効である。ここで、本発明でいう「炎症」、すなわち本発明の抗炎症経口投与剤が対象とする「炎症」とは、内的要因または細菌感染、外傷、熱・寒冷・放射線・電気等の物理的刺激あるいは化学物質等の外的要因に限定されない種々要因による生体組織の傷害あるいは機能不全において、白血球が血管内皮細胞上でのローリング、接着を経て血流中から血管外組織へと浸潤することに起因する血管及び隣接する組織の細胞学的・組織学的反応の動的な複合体からなる基本的な病理学上の局所反応を意味する。
また、本発明の抗炎症経口投与剤は、炎症性腸疾患の予防及び／又は治療に有用である。炎症性腸疾患としては、例えば、クローン病や潰瘍性・肉芽腫性・虚血性・放射性・感染性結腸炎等の大腸炎が挙げられる。
【００４０】
本発明の抗炎症経口投与剤の投与対象としては炎症を有する個体（例えば、ヒトをはじめウシ、ウマ、イヌ、マウス、ラット等の哺乳動物）、炎症を有する可能性のある個体などが挙げられる。
【００４１】
本発明の抗炎症経口投与剤の有効成分である水不溶性β−グルカンの投与量は、投与する患者の性別、症状、年齢、投与方法によって異なるが、通常、成人（体重６０ｋｇ）１日あたりの投与量が全量で、５０ｍｇ〜５０ｇであり、好ましくは、成人１日あたりの投与量が全量で、５００ｍｇ〜１０ｇである。上記１日あたりの量を一度にもしくは数回に分けて投与することができ、投与時は、食前、食後、食間を問わない。また投与期間は特に限定されない。
【００４２】
本発明は、水不溶性β−グルカンを添加してなる、炎症の予防又は改善用の食品を提供する。
【００４３】
本発明の食品は、本発明の水不溶性β−グルカンを添加してなる一般的な食品形態であれば如何なるものでも良い。例えば、適当な風味を加えてドリンク剤、例えば清涼飲料、粉末飲料とすることもできる。具体的には、ジュース、牛乳、菓子、ゼリー等に混ぜて飲食することができる。また、このような食品を保健機能食品として提供することも可能であり、この保健機能食品には、炎症の予防又は改善などの本発明の用途に用いるものであるという表示を付した飲食品、特に保健機能食品、特定保健用食品、栄養機能食品なども含まれる。
【００４４】
さらに、本発明の食品を濃厚流動食や、食品補助剤として利用することも可能である。食品補助剤として使用する場合、例えば錠剤、カプセル、散剤、顆粒、懸濁剤、チュアブル剤、シロップ剤等の形態に調製することができる。本発明における食品補助剤とは、食品として摂取されるもの以外に栄養を補助する目的で摂取されるものをいい、栄養補助剤、サプリメントなどもこれに含まれる。
【００４５】
本発明の食品を摂取する場合、成人（体重６０ｋｇ）１日当たりの水不溶性β−グルカンの摂取量は、通常５０ｍｇ〜５０ｇ程度、好ましくは５００ｍｇ〜１０ｇ程度である。
【実施例】
【００４６】
以下、実施例及び比較例を挙げて本発明を更に具体的に説明するが、本発明はこれらの例によってなんら限定されるものではない。
【００４７】
（ＯＸ−ＣＡの調製）
カンジダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ：ＩＦＯ１３８５）を５ＬのＣ−制限培地（炭素源としてショ糖を含む培地）にて２７℃で４８〜７２時間液体培養し（ジャーファメンター使用；攪拌速度：４００ｒｐｍ）、アセトン処理した後、乾燥菌体（脱脂乾燥菌体）１６〜２０ｇを得た。
当該脱脂乾燥菌体２ｇに０．１ｍｏｌ／Ｌ ＮａＯＨ ２００ｍＬを加えて懸濁し、次亜塩素酸ナトリウム（アンチホルミン、和光純薬工業株式会社製）を有効塩素濃度が０．５〜１．５となるように添加して、４℃で一夜撹拌し酸化分解した。得られた酸化物を３，０００ｒｐｍ、１０分間遠心分離し沈殿物を得、β−グルカンを含まない蒸留水２００ｍＬを加え、撹拌後遠心分離（３，０００ｒｐｍ、１０分）し、その沈殿物にアセトン２００ｍＬを加え脱水沈殿物としてカンジダ属酵母菌由来酸化処理β−グルカン（ＯＸ−ＣＡ）を得た。収量は３５０ｍｇ程度であった。
ここで、上記ＯＸ−ＣＡは水不溶性であり、また、β−１，３−結合のグルコース残基の主鎖から分岐するβ−１，６−結合のグルコース残基の重合度は、２〜５０程度と広範囲に分布するが、重合度が１０〜５０程度のものが多い（Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ３１６（１９９９）１６１−１７２、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｍｍｕｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ２（２００２）１１０９−１１２２）。
【００４８】
（炎症性腸疾患モデルマウスの作製とＯＸ−ＣＡ経口投与）
炎症性腸疾患モデルマウスの飼育計画を図１に示す。具体的には、以下のとおりに飼育を行った。
ＯＸ−ＣＡ経口投与マウスは、２週に渡りβ−グルカンを含まない粉末飼料を与えたＢＡＬＢ／ｃマウス(７週齢)に、３週目から５％のＯＸ−ＣＡ粉末をβ−グルカンを含まない粉末飼料に混合し自由接種させ、かつ４週目より７日間、４％デキストラン硫酸（以下、「ＤＳＳ」と略記する場合がある）を自由飲水させた。対照として、β−グルカンを含まない粉末飼料を自由接種させ、水道水を自由飲水させたマウス（ＤＳＳ(−)群）、β−グルカンを含む粉末飼料を与えたマウスに７日間４％ＤＳＳを自由飲水させたマウス（Ｃｏｎｔｒｏｌ群）を用いた。
各群のマウスについて、以下の各項目を評価した。
【００４９】
炎症性腸疾患の程度を示す指標としてマウスの体重の経時的変化を測定し、ＤＳＳ投与開始日の体重を１００としたときの体重の割合（％）を算出した。結果を図２に示す。
【００５０】
図２に示す結果から明らかなとおり、Ｃｏｎｔｒｏｌ群ではＤＳＳ投与により大幅な体重の減少が認められたが、５重量％ＯＸ−ＣＡ投与群では、体重の顕著な減少は認められなかった。
【００５１】
炎症性腸疾患の程度を示す指標としてマウスの直腸からの出血状態を、以下に示す基準に従って各スコアに分類し、各群のマウスの平均値を求めた。結果を図３に示す。
［スコア分類基準］
スコア０：正常
スコア１：目視で便に血が混じっている
スコア２：肛門に血液が付着している
スコア３：肛門から常に出血している
【００５２】
図３に示す結果から明らかなとおり、ＤＳＳ投与により出血スコアの上昇が認められたが、５重量％ＯＸ−ＣＡ経口投与により有意に改善した。
【００５３】
炎症性腸疾患の程度を示す指標として各群のマウスの大腸の長さを測定し、平均値を算出した。結果を図４に示す。
【００５４】
図４に示す結果から明らかなとおり、ＤＳＳ投与によりマウス大腸は有意に短くなったが、５重量％ＯＸ−ＣＡ経口投与により腸管短縮の有意な改善が認められた。
【００５５】
以上の結果から明らかなように、炎症性腸疾患モデルマウスにおいて、水不溶性β−グルカンを経口投与することにより、炎症性腸疾患が有意に抑制されることが確認された。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
水不溶性β−グルカンを有効成分として含有する、抗炎症経口投与剤。
【請求項２】
β−グルカンが、長鎖β−１，６−結合を側鎖に有するβ−グルカンである、請求項１に記載の剤。
【請求項３】
β−グルカンが、酸化処理したβ−グルカンである、請求項１又は２に記載の剤。
【請求項４】
炎症が、腸における炎症である、請求項１〜３のいずれか１項に記載の剤。
【請求項５】
腸が、大腸である、請求項４に記載の剤。
【請求項６】
β−グルカンが、微生物類、海草類、原虫類からなる群より選択される一種由来のβ−グルカンである、請求項１〜５のいずれか１項に記載の剤。
【請求項７】
微生物が、酵母菌である、請求項６に記載の剤。
【請求項８】
酵母菌が、カンジダ（Ｃａｎｄｉｄａ）属の酵母菌である、請求項７に記載の剤。
【請求項９】
水不溶性β−グルカンを添加してなる、食品。
【請求項１０】
β−グルカンが、長鎖β−１，６−結合を側鎖に有するβ−グルカンである、請求項９に記載の食品。
【請求項１１】
β−グルカンが、酸化処理したβ−グルカンである、請求項９又は１０に記載の食品。
【請求項１２】
炎症の予防又は改善用である、請求項９〜１１のいずれか１項に記載の食品。
【請求項１３】
β−グルカンが、微生物類、海草類、原虫類からなる群より選択される一種由来のβ−グルカンである、請求項９〜１２のいずれか１項に記載の食品。
【請求項１４】
微生物が、酵母菌である、請求項１３に記載の食品。
【請求項１５】
酵母菌が、カンジダ（Ｃａｎｄｉｄａ）属の酵母菌である、請求項１４に記載の食品。
【請求項１】
水不溶性β−グルカンを有効成分として含有する、抗炎症経口投与剤。
【請求項２】
β−グルカンが、長鎖β−１，６−結合を側鎖に有するβ−グルカンである、請求項１に記載の剤。
【請求項３】
β−グルカンが、酸化処理したβ−グルカンである、請求項１又は２に記載の剤。
【請求項４】
炎症が、腸における炎症である、請求項１〜３のいずれか１項に記載の剤。
【請求項５】
腸が、大腸である、請求項４に記載の剤。
【請求項６】
β−グルカンが、微生物類、海草類、原虫類からなる群より選択される一種由来のβ−グルカンである、請求項１〜５のいずれか１項に記載の剤。
【請求項７】
微生物が、酵母菌である、請求項６に記載の剤。
【請求項８】
酵母菌が、カンジダ（Ｃａｎｄｉｄａ）属の酵母菌である、請求項７に記載の剤。
【請求項９】
水不溶性β−グルカンを添加してなる、食品。
【請求項１０】
β−グルカンが、長鎖β−１，６−結合を側鎖に有するβ−グルカンである、請求項９に記載の食品。
【請求項１１】
β−グルカンが、酸化処理したβ−グルカンである、請求項９又は１０に記載の食品。
【請求項１２】
炎症の予防又は改善用である、請求項９〜１１のいずれか１項に記載の食品。
【請求項１３】
β−グルカンが、微生物類、海草類、原虫類からなる群より選択される一種由来のβ−グルカンである、請求項９〜１２のいずれか１項に記載の食品。
【請求項１４】
微生物が、酵母菌である、請求項１３に記載の食品。
【請求項１５】
酵母菌が、カンジダ（Ｃａｎｄｉｄａ）属の酵母菌である、請求項１４に記載の食品。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図２】
【図３】
【図４】
【公開番号】特開２０１２−４１３１２（Ｐ２０１２−４１３１２Ａ）
【公開日】平成２４年３月１日（２０１２．３．１）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１０−１８５４３９（Ｐ２０１０−１８５４３９）
【出願日】平成２２年８月２０日（２０１０．８．２０）
【国等の委託研究の成果に係る記載事項】（出願人による申告）平成２２年度、独立行政法人農業・食品産業技術総合研究機構生物系特定産業技術研究支援センター「消化管免疫細胞の活性化と機能成熟機構の解明」委託研究、産業技術力強化法第１９条の適用を受ける特許出願
【出願人】（３０１０２１５３３）独立行政法人産業技術総合研究所 (6,529)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２４年３月１日（２０１２．３．１）
【国際特許分類】
【出願日】平成２２年８月２０日（２０１０．８．２０）
【国等の委託研究の成果に係る記載事項】（出願人による申告）平成２２年度、独立行政法人農業・食品産業技術総合研究機構生物系特定産業技術研究支援センター「消化管免疫細胞の活性化と機能成熟機構の解明」委託研究、産業技術力強化法第１９条の適用を受ける特許出願
【出願人】（３０１０２１５３３）独立行政法人産業技術総合研究所 (6,529)
【Ｆターム（参考）】
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