抗酸化組成物
【課題】 活性酸素を消去させる為には、抗酸化物質を摂取すればよく、また、体内のＳＯＤが不足したらＳＯＤを補えばいいが、ＳＯＤは経口摂取しても速やかに吸収する事は困難であり、また、胃酸に分解されて活性を失う。そこでＳＯＤと同様の活性を示す抗酸化物質をとることが有効な手段となる。本発明の目的は、幅広い飲食品や医薬品に使用可能な抗酸化効果のある組成物及びそれを含有する飲食品、医薬部外品及び医薬品を提供することにある。
【解決手段】 ハイビスカス抽出物を含有することにより上記課題を解決する。
【解決手段】 ハイビスカス抽出物を含有することにより上記課題を解決する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ハイビスカス抽出物を含有する抗酸化組成物及びそれを含有する飲食品、医薬部外品及び医薬品に関する。
【背景技術】
【０００２】
ヒトは常時呼吸をし、体に酸素を取り入れている。呼吸によって摂取した酸素のうち約２％〜４％が不安定な不対電子をもつ活性酸素（分子内にひとつ以上の不対電子をもつものをフリーラジカルといい、酸素のフリーラジカルを活性酸素という）となり、これらの活性酸素は早く安定しようと、安定を求めて細胞膜を攻撃する。その後、細胞膜中の不飽和脂肪酸を酸化し、酸化された不飽和脂肪酸は脂質ペルオキシルラジカルに変化する。そして、脂質ペルオキシルラジカルは、再び不飽和脂肪酸を酸化し、酸化を繰り返しながら、過酸化脂質を生成する。活性酸素には、体内に侵入してきた細菌などから身を守る役割もあるが、問題なのは大量に活性酸素が発生した場合である。活性酸素が有害なのは、不飽和脂肪酸が体内で活性酸素によって酸化され、「過酸化脂質」になるからである。人間の身体はおよそ６０兆個の細胞から構成されていて、その細胞の一番外側にある細胞膜は「不飽和脂肪酸」でできている。その不飽和脂肪酸が酸化して、過酸化脂質となり、細胞膜がボロボロになると、さらに細胞膜内にあるタンパク質までもが巻き込まれて酸化し、もっと有害な二次酸化物ができる。これによって、老化、脳卒中、自己免疫疾患、ガン、白内障、脂肪肝、心筋梗塞、虚血性心疾患、アルツハイマー症候群、糖尿病、糖尿病性腎症、動脈硬化、アレルギー、花粉症のような様々な疾病や皮膚のしわ形成や皮膚の弾力性低下等の老化、炎症、肌の色素沈着が引き起こされている。しかし幸いな事に人体には抗酸化物質が備わっており、体内のＳＯＤ（スーパーオキシドディスムターゼ）をはじめ、カタラーゼ、グルタチオン・パーオキシターゼなどの抗酸化物質が備わっており、この活性酸素を消しさってくれる。しかしこのＳＯＤも歳を取ると共に減少する。また、最近の農薬、殺虫剤、食品添加物、窒素化合物、紫外線、放射線、ストレス、タバコなど多くの環境汚染物質によって、環境汚染は我々の体内にある貴重なＳＯＤをさらに消費しているだけでなく、活性酸素が作られる環境になっている。
【０００３】
活性酸素を消去させる為には、抗酸化物質を摂取すればよく、また、体内のＳＯＤが不足したらＳＯＤを補えばいいが、ＳＯＤは経口摂取しても速やかに吸収する事は困難であり、また、胃酸に分解されて活性を失う。そこでＳＯＤと同様の活性を示す抗酸化物質をとることが有効な手段となる。
【０００４】
抗酸化剤としては、例えばＬ−アスコルビン酸（ビタミンＣ），還元型のグルタチオン、尿酸、ポリフェノール類などの水溶性抗酸化化合物や、α−トコフェロール（ビタミンＥ）、ユビキノン（コエンザイムＱ）、カロチノイド類などの脂溶性抗酸化化合物およびＢＨＴ（ブチルヒドロキシトルエン）、ＢＨＡ（ブチルヒドロキシアニソール）などの合成化合物などが知られている。しかし、合成抗酸化剤のＢＨＴ、ＢＨＡには、発癌性の疑いが持たれている等の問題がある。日常的な抗酸化物質の摂取を考える上で、その経済性や安全性から主に抗酸化物質の製造における原料としては食品が用いられ、例えば茶葉からカテキン類や赤ワインからはプロシアニジン類等のポリフェノール類が製造されている。その他の天然成分での抗酸化剤としては、スモモ、セイヨウナツユキソウ、ベンガルカラタチ、ミラクルベリー、ヤーバサンタ、レモングラスから選ばれる抽出物（例えば、特許文献１参照。）、アガリクス、メシマコブ、及びプロポリス（例えば、特許文献２参照。）、椿花抽出物（例えば、特許文献３参照。）、サンショウ水性溶媒抽出物（例えば、特許文献４参照。）、カカオの葉、樹皮又は根抽出物（例えば、特許文献５参照。）、フスマ、胚芽又は穀粉の有機溶媒による抽出物（例えば、特許文献６参照。）、栄養的に優れているといわれる野菜類の、かぼちゃ、ホーレン草、モロヘイヤ、トマト、スイートコーン、人参、紫コーンなどの１５種類以上の天然食品素材からなるもの（例えば、特許文献７参照。）が知られている。一方で、単一な物質の大量摂取より、多種・多様な抗酸化物質を少量ずつ摂取することのほうが、種々の疾病の予防については有効であることがわかってきた。そのためには多彩な抗酸化物質を提供することが必要である。
【０００５】
【特許文献１】特開２００３−１８３１２０号公報（第１−２頁）
【特許文献２】特開２００２−２３５０８４号公報（第１−２頁）
【特許文献３】特開２００２−３７１０９２号公報（第１−２頁）
【特許文献４】特開２００２−１０４９８５号公報（第２−３頁）
【特許文献５】特開２０００−６０４８５号公報（第１−２頁）
【特許文献６】特開平１０−１４７７７９号公報（第１−２頁）
【特許文献７】特開平１０−７５７４０号公報（第２−５頁）
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明の課題は、幅広い飲食品や医薬品に使用可能な抗酸化効果のある組成物及びそれを含有する飲食品、医薬部外品及び医薬品を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは、このような状況を鑑み、従来技術の問題点を改善せんとして鋭意研究を重ねた結果、ハイビスカスに強い抗酸化作用及びＳＯＤ様活性を有することを見出し、本発明を完成させた。
【発明の効果】
【０００８】
本発明で得られたハイビスカスの果実、果汁又は葉の抽出物を含有する抗酸化組成物は、電子スピン共鳴（ＥＳＲ）装置を用いた、ＤＰＰＨ（ジフェニルピクリルヒドラジル）フリーラジカル消去能の測定結果及び同じく、適当な方法で発生させた活性酸素種をＤＭＰＯなどのスピントラップ剤で捕捉し、各活性酸素種に特異的なＥＳＲシグナルを定量する方法によるＳＯＤ様活性測定結果及びストレプトゾトシン（ＳＴＺ）を投与して誘発させた糖尿病性腎症ラットへの抗酸化組成物投与試験及び魚肉への添加試験により、酸化によって生体内で増加する過酸化脂質をチオバルビツール酸（ＴＢＡ）と反応する物質（チオバルビツール酸反応性物質；ＴＢＡＲＳ）の量で測定した結果から、抗酸化効果が高いことがわかった。
【０００９】
本発明はハイビスカスの果実、果汁又は葉の抽出物を含有する抗酸化組成物を各種飲食品及び医薬品等に利用して、老化、脳卒中、自己免疫疾患、ガン、白内障、脂肪肝、心筋梗塞、虚血性心疾患、アルツハイマー症候群、糖尿病、糖尿病性腎症、動脈硬化、アレルギー、花粉症のような様々な疾病やシミ・ソバカス等の異常な色素沈着の進行を抑制並びに食品の劣化を抑制することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１０】
本発明に用いるハイビスカスとは、アオイ科フヨウ属に属する常緑低木で、学名：ハイビスカス（Ｈｉｂｉｓｃｕｓ）といい、和名ではブッソウゲ（仏桑華）と呼ばれている。原産地は、中国南部中国南部・インド東部・南太平洋諸島・熱帯アフリカである。ハイビスカスはさわやかな酸味があり、最近では、フランス料理やイタリア料理のソースとしても使われており、ハーブとして用いられる食用ハイビスカスは、学名・ハイビスカスサブダリファ／（英）ロゼール・（米）フロリダクランベリーと呼ばれている種類で、ジャマイカ、スーダン、エジプト、タイ、中国、スリナムマレーシア等の国で裁培されている。
【００１１】
本発明において、ハイビスカスの部位としては、萼及び花に由来する果実弁または葉部の分が用いられるが、効果の点より、葉が好ましい。その形態は、特に限定するものではなく、生果実、乾燥果実、果実粉末、生葉、乾燥葉、乾燥葉粉末等のいずれでも良い。
【００１２】
果汁又は果汁粉末の場合は、そのままでも使用できるが、生果実、乾燥果実、生葉又は乾燥葉等、水不溶性成分を含んでいるので、抽出により、水不溶性成分が除去されていることが好ましい。
【００１３】
抽出の際、生果実、乾燥果実、生葉又は乾燥葉を使用する場合は、抽出効率を高めるためにミキサー等により破砕、均質化したものを用いることが好ましい。
【００１４】
乾燥果実又は乾燥葉を使用する場合は、抽出効率を高めるために４０メッシュ以下の粒度になるように粉砕されていることが好ましい。
【００１５】
抽出方法は、抽出溶媒、抽出温度等、特に限定されるものではなく、抽出溶媒としては、水、塩基、酸、親水性溶媒、アセトンを使うことができる。親水性溶媒はメチルアルコール、エチルアルコール、ｎ−プロピルアルコール、イソプロピルアルコール、ブチルアルコールの低級アルコール群より選ばれる１種類以上が操作性、抽出効率の点から好ましい。特に好ましくは、水、塩基、酸のいずれかである。
【００１６】
酸又は塩基を抽出溶媒に使用する場合、抽出物を中和させることが好ましい。中和反応によって生成された塩は、透析法やゲル濾過等、公知の方法により、取り除くことができる。水を抽出溶媒として用いた場合には、上記のような中和反応は必要なく、生成された塩を取り除く必要もないため、水を用いることが更に好ましい。
【００１７】
この時使用する酸としては、特に限定するものではなく、大部分の酸を使うことができるが、入手のしやすさの点及び操作性の点により塩酸、硫酸より選ばれる１種又は両者の併用が好ましい。
【００１８】
また、塩基としては、特に限定するものではなく、大部分の塩基を使うことができるが、水酸化ナトリウム、水酸化カリウムより選ばれる１種又は両者の併用が好ましい。
【００１９】
抽出に使用される酸又は塩基の濃度は、抽出物を酵素処理する前であっても後であっても特に限定するものではなく、酸又は塩基の強さによって変化するが、操作性及び抽出効率の点より、０．０１〜０．５モルの濃度を使用することが好ましい。
【００２０】
上記の抽出において、ペクチナーゼ、プロテアーゼ、タンナーゼまたは、セルラーゼ等の酵素を１種類又は２種類以上を組み合わせて併用することも可能である。
【００２１】
更に、上記の抽出において、抽出残渣に対して再度抽出工程を１回又はそれ以上繰り返すことで、抽出効率が向上し、収率が向上するので、好ましい。この場合の抽出に用いる溶媒は、同じでも良いし、別の溶媒を用いても良い。
【００２２】
上記の抽出物は、そのままでも使用できるが、濾過、遠心分離及び分留により、不溶性物質及び溶媒を取り除くことにより、抗酸化効果が高くなり、応用範囲も広がるので好ましい。
【００２３】
不溶性物質及び溶媒を取り除いた後、果汁又は抽出液をそのまま又は濃縮した後に有機溶媒を用いて分配を行い、それぞれの溶媒可溶画分を得る。これら溶媒可溶画分は、更に抗酸化効果（ＳＯＤ様活性）が高くなるので好ましい。有機溶媒としてはメチルアルコール、エチルアルコール、ｎ−プロピルアルコール、イソプロピルアルコール、ブチルアルコールなどの低級アルコールや酢酸エチル、酢酸ブチル、ジエチルエーテル、ジメチルエーテル、メチルイソブチルケトン、ヘキサン、アセトン又はクロロホルムが使用できる。このままた可溶画分の純度を上げる為には、他の疎水性溶媒による分配を組み合わせることもできるが、エチルアルコールが好ましい。これら溶媒の濃度としては、特に限定するものではないが、収率及び効果の点より、終濃度として２０〜８０％が好ましい。
【００２４】
その場合、樹脂吸着後の溶離液としては、メチルアルコール、エチルアルコール、ｎ−プロピルアルコール、イソプロピルアルコール、ブチルアルコールなどの低級アルコール及びアセトンを単独又は水溶液として使用できる。
【００２５】
抽出物及び画分はそのままでの使用も可能だが、必要であれば噴霧乾燥や凍結乾燥等の手段により乾燥粉末化させて使用することも可能である。
【００２６】
本発明において抗酸化作用効果は、フリーラジカル消去能や血液中の過酸化脂質を測定することによって確認できる。フリーラジカル消去能の測定は、ＥＳＲを用いた方法やチトクロームＣ還元法、亜硝酸法、ニトロブルーテトラゾリウム塩還元法（ＮＢＴ還元法）などの化学的方法により、ＤＰＰＨラジカル（ジフェニルピクリルヒドラジルラジカル）阻害率、スーパーオキシドラジカル消去能、ＳＯＤ様活性値、ヒドロキシラジカル値を測定によって確認することができる。
【００２７】
本願発明の抗酸化組成物は、飲食品、医薬品、飼料等に応用でき、好ましくは、人が手軽に摂食できる飲食品又は医薬品が好ましい。
【００２８】
本願発明における飲食品とは溶液、懸濁物、粉末、固体成形物等経口摂取可能な形態であれば良く特に限定するものではない。より具体的には、即席麺、レトルト食品、缶詰、電子レンジ食品、即席スープ・みそ汁類、フリーズドライ食品等の即席食品類、清涼飲料、果汁飲料、野菜飲料、豆乳飲料、コーヒー飲料、茶飲料、粉末飲料、濃縮飲料、栄養飲料、アルコール飲料等の飲料類、パン、パスタ、麺、ケーキミックス、から揚げ粉、パン粉等の小麦粉製品、飴、キャラメル、チューイングガム、チョコレート、クッキー、ビスケット、ケーキ、パイ、スナック、クラッカー、和菓子、デザート菓子等の菓子類、ソース、トマト加工調味料、風味調味料、調理ミックス、たれ類、ドレッシング類、つゆ類、カレー・シチューの素類等の調味料、加工油脂、バター、マーガリン、マヨネーズ等の油脂類、乳飲料、ヨーグルト類、乳酸菌飲料、アイスクリーム類、クリーム類等の乳製品、冷凍食品、魚肉ハム・ソーセージ、水産練り製品等の水産加工品、畜肉ハム・ソーセージ等の畜産加工品、農産缶詰、ジャム・マーマレード類、漬け物、煮豆、シリアル等の農産加工品、栄養食品、錠剤、カプセル等が例示される。
【００２９】
本願発明の抗酸化組成物の飲食品としての摂取量は、体重、年齢、体質、体調等によって調整されるべきであるが、一般に１日あたり、抗酸化組成物として０．０５ｇ〜２０ｇ、好ましくは０．１ｇ〜５ｇの範囲で適宜選択することができる。これを病気の状態や食品等の形態によって１日１ないし数回にわけて摂取することができる。
【００３０】
本願発明において、抗酸化組成物又は、それを含有する飲食品等に加工する際に、各種栄養成分を強化することができる。
【００３１】
強化できる栄養成分としては、ビタミンＡ、ビタミンＢ１、ビタミンＢ２、ビタミンＢ６、ビタミンＢ１２、ビタミンＣ、ビタミンＤ、ビタミンＥ、ナイアシン（ニコチン酸）、パントテン酸、葉酸等のビタミン類、リジン、スレオニン、トリプトファン等の必須アミノ酸類や、カルシウム、マグネシウム、鉄、亜鉛、銅等のミネラル類及び、例えば、α−リノレン酸、ＥＰＡ、ＤＨＡ、月見草油、オクタコサノール、カゼインホスホペプチド（ＣＰＰ）、カゼインカルシウムペプチド（ＣＣＰ）、水溶性食物繊維、不溶性食物繊維、オリゴ糖等の人の健康に寄与する物質類、その他の食品や食品添加物として認可されている有用物質の１種又は２種以上が使用できる。
【００３２】
本願発明における医薬部外品及び医薬品とは、経口または非経口投与に適した賦形剤、その他の添加剤を用いて、常法に従って、経口製剤または注射剤として調製することができる。好ましいのは、経口製剤であり、最も好ましいのは、容易に服用でき且つ保存、持ち運びに便利な経口固形製剤である。
【００３３】
経口固形製剤としては、錠剤、散剤、細粒剤、顆粒剤、カプセル剤、丸剤、徐放剤等が用いられる。このような固形製剤においては、適宜の薬理学的に許容され得る坦体、賦形剤（例えばデンプン、乳糖、白糖、炭酸カルシウム、リン酸カルシウムなど）、結合剤（例えばデンプン、アラビアゴム、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、結晶セルロース、アルギン酸、ゼラチン、ポリビニルピリドンなど）、滑沢剤（例えばステアリン酸、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウムなど）、崩壊剤（例えばカルボキシメチルセルロース、タルクなど）、などと混合し、常法により錠剤、散剤、細粒剤、顆粒剤、カプセル剤、丸剤、徐放剤等を調整することが出来る。経口液状製剤は、製薬学的に許容される乳濁剤、溶液剤、懸濁剤、シロップ剤、エリキシル剤等を含み、一般的に用いられる不活性な希釈剤、例えば精製水、エタノールを含む。この組成物は不活性な希釈剤以外に湿潤剤、懸濁剤のような補助剤、甘味剤、風味剤、芳香剤、防腐剤を含有していてもよい。
【００３４】
非経口投与しての注射剤としては、無菌の水性又は非水性の溶液剤、懸濁剤、乳濁剤を包含する。水性の溶液剤、懸濁剤の希釈剤としては、例えば注射用蒸留水及び生理食塩水が含まれる。非水溶性の溶液剤、懸濁剤の希釈剤としては、例えばプロピレングリコール、ポリエチレングリコール、オリーブ油のような植物油、エタノールのようなアルコール類、ポリソルベート８０等がある。このような組成物は、さらに防腐剤、湿潤剤、乳化剤、分散剤、安定化剤（例えばラクトース）、溶解補助剤（例えば、グルタミン酸、アスパラギン酸）のような補助剤を含んでもよい。これらは例えばバクテリア保管フィルターを通す濾過、殺菌剤の配合又は照射によって無菌化される。これらはまた無菌の固体組成物を製造し、使用前に無菌水又は無菌の注射用溶媒に溶解して使用することもできる。
【００３５】
以下本発明を、実施例にて詳細に説明するが、次の実施例は、本発明の範囲を限定するものではない。
【実施例】
【００３６】
（実施例１）抗酸化組成物の調製１
【００３７】
ハイビスカスの乾燥した果実を４０メッシュ以下に粉砕し、その粉末１５０ｇに、蒸留水３Ｌを加え、１００℃で３時間抽出した。その後、遠心分離（８５００ｒｐｍ、１０分間）し、その上清を濾過し、抽出物と残渣を分離した。その濾液を減圧濃縮し、その後、凍結乾燥し、本発明の抗酸化組成物Ａ２９．８ｇ（収率１９．９％）を得た。
【００３８】
（実施例２）抗酸化組成物の調製２
ハイビスカスの乾燥した葉を２０メッシュ以下に粉砕し、その粉末１００ｇに、蒸留水２Ｌを加え、１００℃で３時間抽出した。その後、遠心分離（８５００ｒｐｍ、１０分間）し、その上清を濾過し、抽出物と残渣を分離した。その濾液を減圧濃縮し、その後、凍結乾燥し、本発明の抗酸化組成物Ｂ１３．４ｇ（収率１３．４％）を得た。
【００３９】
（抗酸化能測定法−ＤＰＰＨ測定）
フリーラジカル消去活性の測定には、比較的安定なラジカルを持つ１，１−Ｄｉｐｈｅｎｙｌ−２−ｐｉｃｒｙｌｈｙｄｒａｚｙｌ（ＤＰＰＨ）を用いた方法にて行った。本法はラジカル状態で５１７ｎｍの極大吸収を持つＤＰＰＨが抗酸化物質によって還元される事により５１７ｎｍにおける吸光度の減少から抗酸化能を評価する方法である。
【００４０】
（試験例１）ＤＰＰＨ測定
分光光度計を用いてＤＰＰＨを測定した。
実施例１、２の抗酸化組成物Ａ、Ｂをそれぞれ計量してエッペンドルフチューブに入れ、抗酸化組成物Ａの濃度が１０ｍｇ／ｍＬとなるように蒸留水を添加した。その試料溶液を段階希釈し、１５０、３００μｇ／Ｌの試料溶液を作成した。この溶液からそれぞれ５０μＬずつ別の試験管に移し、これらに５０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌを４５０μＬずつ、５０ｍＭのＤＰＰＨを１ｍＬ加えた。これらの試料溶液を分光光度計（５１７ｎｍ）にて測定し、ＤＰＰＨラジカルスカベンジャー活性を測定した。比較対照としてにがうりを実施例１と同様な方法で抽出した抽出物を用いた。
結果を表１に示す。
【００４１】
【表１】
【００４２】
以上の結果より、本願発明の抗酸化組成物Ｂの葉により強いＤＰＰＨ阻害活性が認められ、果実よりも葉により強い抗酸化作用があることが示唆された。
【００４３】
（活性酸素消去活性測定法−ＳＯＤ測定）
スーパーオキシドディスムターゼ（Ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ ｄｉｓｍｕｔａｓｅ，ＳＯＤ）はスーパーオキシドアニオン（・Ｏ２−， 活性酸素）から電子を取り除いて酸素と水素分子にする酵素で、細胞核に多く局在している。酸化ストレスを減少させる役割を持つ。
活性酸素消去活性はキサンチンオキシダーゼ／ヒポキサンチン系により発生させたスーパーオキシドに対する消去能により測定した。本測定法においては、スーパーオキシドに特異性が高い化学発光試薬で、ルシフェリン誘導体である２−メチル−ｐ−メトキシフェニルエチニルイミダゾピラジノン（ＭＰＥＣ）を用い、キサンチンオキシダーゼ／ヒポキサンチン系に添加した時の化学発光をルミノメーターで測定した。
【００４４】
（試験例２）ＳＯＤ様活性測定
実施例１、２で得られた抗酸化組成物Ａ、Ｂを各３００μｇ／ｍＬに調製し、それぞれ１０μＬに、３００μＭのＭＰＥＣ発光試薬を１０μＬ、キサンチンオキシダーゼを６０μＬ、ＫＨ２ＰＯ４／ＮａＯＨバッファーを１７０μＬおよびヒポキサンチンを５０μＬ添加した溶液を作成した。この溶液をベリタスマイクロプレートルミノメーターにて測定し、スーパーオキシドを検出した。活性は以下の式より求めた。
ＳＯＤ様活性％＝１−（反応したサンプル／コントロール）×１００
結果を表２に示す。
【００４５】
【表２】
【００４６】
以上の結果より、本願発明の抗酸化組成物Ａ、Ｂには高いＳＯＤ様活性が認められた。またその活性強度はＡの果実により強く認められた。
【００４７】
（実施例３）抗酸化組成物の調製３
ハイビスカスの乾燥した果実を４０メッシュ以下に粉砕し、その粉末１５０ｇに、蒸留水３Ｌを加え、１００℃で３時間抽出した。その後、遠心分離（８５００ｒｐｍ、１０分間）し、その上清を濾過し、抽出物と残渣を分離した。その濾液を減圧濃縮し、４００ｍＬとした。この濃縮液にエチルアルコールを加え、５００ｍＬになるように調製（最終エチルアルコール濃度２０％）した後、室温で２４時間静置して、不溶性成分を沈殿させた。遠心分離（８５００ｒｐｍ、１０分間）で沈澱物を分離し、上清を減圧濃縮後、蒸留水１Ｌを加え再溶解した。そして濾過して不溶性成分を除去し、濾液を減圧濃縮後、凍結乾燥して本発明の抗酸化組成物Ｃ１２．４ｇ（収率８．３％）を得た。また、同様にして得た濃縮液にエチルアルコールを加え、最終エチルアルコール濃度を８０％とした時の不溶性成分を沈殿させ、同様の操作をしてそれぞれ本発明の抗酸化組成物Ｄ９．８ｇ（収率６．５％）を得た。
【００４８】
（実施例４）抗酸化組成物の調製４
ハイビスカスの乾燥した葉を４０メッシュ以下に粉砕し、その粉末１５０ｇに、蒸留水３Ｌを加え、１００℃で３時間抽出した。その後、遠心分離（８５００ｒｐｍ、１０分間）し、その上清を濾過し、抽出物と残渣を分離した。その濾液を減圧濃縮し、４００ｍＬとした。この濃縮液にエチルアルコールを加え、５００ｍＬになるように調製（最終エチルアルコール濃度２０％）した後、室温で２４時間静置して、不溶性成分を沈殿させた。遠心分離（８５００ｒｐｍ、１０分間）で沈澱物を分離し、上清を減圧濃縮後、蒸留水１Ｌを加え再溶解した。そして濾過して不溶性成分を除去し、濾液を減圧濃縮後、凍結乾燥して本発明の抗酸化組成物Ｅ１２．４ｇ（収率８．３％）を得た。また、同様にして得た濃縮液にエチルアルコールを加え、最終エチルアルコール濃度を８０％とした時の不溶性成分を沈殿させ、同様の操作をしてそれぞれ本発明の抗酸化組成物Ｆ６．７ｇ（収率４．５％）を得た。
【００４９】
（試験例３）ＤＰＰＨ測定
実施例３、４の抗酸化組成物ＤおよびＦを計量してエッペンドルフチューブに入れ、抗酸化組成物Ｄ、Ｆの濃度が１０ｍｇ／ｍＬとなるように蒸留水を添加した。その試料溶液を希釈し、１０００μｇ／ｍＬの試料溶液を作成した。試験例１と同様な方法で、ＤＰＰＨラジカルスカベンジャー活性を測定した。比較対照としてにがうりを実施例３と同様な方法で抽出した抽出物を用いた。
結果を表３に示す。
【００５０】
【表３】
【００５１】
以上の結果より、本願発明の抗酸化組成物にはＤＰＰＨ阻害活性が認められ、その強度はＦの葉に強く認められることが明らかとなった。
【００５２】
（試験例４）ＳＯＤ様活性測定
実施例３、４で得られた抗酸化組成物ＤおよびＦを３１、６２．５、１２５、２５０、５００、１０００μｇ／ｍＬに調製し、試験例２と同様な方法でＳＯＤ様活性を求めた。
結果を表４に示す。
【００５３】
【表４】
以上の結果より、抗酸化組成物Ｄ及びＦには、エタノール未処理（抗酸化組成物Ａ、Ｂ）高いＳＯＤ様活性が認められた。またその活性強度はＦの葉により強く認められた。
【００５４】
（実施例５）抗酸化組成物含有食品（錠菓）の調製
実施例１で得られた抗酸化組成物Ａ５ｇ、乳糖３０ｇ、ＤＨＡ含有粉末油脂（サンコートＤＹ−５；太陽化学社製）１２ｇ、ショ糖脂肪酸エステル４ｇ、ヨーグルト香料４ｇを混合し、この混合物をロータリー式打錠機を用いて加圧成形して１錠が３００ｍｇの本発明の抗酸化組成物含有飲食品（錠菓）を得た。
【００５５】
（実施例６）抗酸化組成物含有飲料の調製
実施例２で得られた抗酸化組成物Ｂ５ｇ及び、１／５濃縮グレープフルーツ透明果汁２．１ｇ、エリスリトール３０ｇ、クエン酸結晶２．５ｇ、クエン酸三ナトリウム０．５ｇ、Ｌ−アスコルビン酸０．５ｇ、乳酸カルシウム１．９３ｇ、ＣＣＰ０．１５ｇ、グレープフルーツ香料１．０を水に混合溶解して、全量を１０００ｍＬとし、それを１００ｍＬの瓶に充填し、キャップで密栓した後、９０℃、３０分間加熱殺菌をして、本発明の抗酸化組成物含有飲食品を得た。
【００５６】
（実施例７）抗酸化組成物含有飲料（野菜果汁混合飲料）の調製
実施例２で得られた抗酸化組成物Ａ０．２ｇ及び、グアーガム分解物（サンファイバーＲ；太陽化学社製）３ｇを市販の野菜果汁混合飲料１００ｍＬに添加混合溶解して、本発明の抗酸化組成物含有飲食品（野菜果汁混合飲料）を得た。
【００５７】
（実施例８）抗酸化組成物含有クッキーの調製
実施例２で得られた抗酸化組成物Ｂ４ｇ及び、市販のケーキミックス粉２００ｇを容器に入れた後、バター３５ｇを入れ、木杓子で混ぜ合わせた。それに溶き卵２５ｇを加えて、なめらかな生地になるまで良く練った。小麦粉を振った台の上に生地を取り出し、さらに小麦粉を振って麺棒で５ｍｍの厚さに伸ばし、丸型で抜き、それを１７０℃のオーブンで１０分間焼いて、１個約５ｇの本発明の抗酸化組成物含有クッキーを得た。
【００５８】
（実施例９）抗酸化組成物含有ヨーグルトの調製
実施例１で得られた抗酸化組成物Ａ１ｇ、市販の脱脂乳（明治乳業社製。蛋白質含量３４％）９５ｇ、及び市販の無塩バター（雪印乳業社製）３５ｇを温水０．８Ｌに溶解し、均質化し、全量を１Ｌに調整した。次いで、９０℃で１５分間加熱殺菌し、冷却し、市販の乳酸菌スターター（ハンゼン社製）３ｇ（ストレプトコッカス・サーモフィラス２ｇ及びラクトバシラス・ブルガリクス１ｇ）を接種し、均一に混合し、１００ｍＬの容器に分注，充填し、密封し、３７℃で２０時間発酵させた後、冷却し、本発明の抗酸化組成物含有ヨーグルトを得た。
【００５９】
（実施例１０）抗酸化組成物含有経口流動食の調製
カゼインナトリウム（ＤＭＶ社製）５０ｇ、卵白酵素分解物（太陽化学社製）４２．５ｇ、デキストリン（松谷化学社製）１００ｇ水１Ｌに溶解し、水相をタンク内に調製した。これとは別に、ＭＣＴ（花王社製）４５ｇ、パーム油（不二製油社製）１７．５ｇ、サフラワー油（太陽油脂社製）３５ｇ、レシチン（太陽化学社製）０．７ｇ、消泡剤（太陽化学社製）１ｇを混合溶解し、油相を調製した。タンク内の水相に油相を添加し、攪拌して混合した後、７０℃に加温し、更に、ホモゲナイザーにより１４．７ＭＰａの圧力で均質化した。次いで、９０℃で１０分間殺菌した後、濃縮し、噴霧乾燥して、中間製品粉末約２６０ｇを調製した。この中間製品粉末２００ｇに実施例１で得られた抗酸化組成物Ａ４ｇ、デキストリン（松谷化学社製）１５６ｇ、グアーガム分解物（サンファイバーＲ；太陽化学株式会社製）１８ｇ、少量のビタミンとミネラルおよび粉末香料を添加し、均一に混合して、抗酸化組成物を含有する経口流動食約３８０ｇを得た。
【００６０】
（実施例１１）抗酸化組成物含有錠剤の調製
実施例１で得られた抗酸化組成物Ａ１０ｇ、結晶セルロース５ｇ、トウモロコシデンプン１３．８ｇ、乳糖３２．５ｇ、ヒドロキシプロピルセルロース３．３ｇを混合し、顆粒化した。この顆粒化物にステアリン酸マグネシウム１．０ｇを加え、均一に混合し、この混合物をロータリー式打錠機を用いて加圧成形して一錠が１３０ｍｇの本発明の抗酸化組成物含有錠剤を得た。
【００６１】
本発明の実施態様ならびに目的生成物を挙げれば以下の通りである。
（１） ハイビスカスの果実、果汁又は葉の抽出物を含有することを特徴とする抗酸化組成物。
（２） ハイビスカスの葉の抽出物を含有することを特徴とする抗酸化組成物。
（３） ハイビスカスの抽出物が、対象部位から水、塩基、酸、親水性溶媒により抽出されていることを特徴とする前記（１）又は（２）いずれか記載の抗酸化組成物。
（４） ハイビスカスの抽出物が、対象部位水により抽出されていることを特徴とする前記（１）又は（２）いずれか記載の抗酸化組成物。
（５） 親水性溶媒がメチルアルコール、エチルアルコール、ｎ−プロピルアルコール、イソプロピルアルコール、ブチルアルコールの群より選ばれる少なくとも１種類以上の低級アルコールであることを特徴とする前記（３）記載の抗酸化組成物。
（６） 前記（１）〜（５）いずれか記載のハイビスカス抽出物から有機溶媒のいずれか１種類又は２種類以上により分画されていることを特徴とする抗酸化組成物。
（７） 有機溶媒がエチルアルコールであることを特徴とする前記（６）記載の抗酸化組成物。
（８） エチルアルコールで分画する際の可溶画分であることを特徴とする前記（７）記載の抗酸化組成物。
（９） エチルアルコールで分画する際のエチルアルコール濃度が、２０〜８０％であり、そのエチルアルコール可溶画分であることを特徴とする前記（７）記載の抗酸化組成物。
（１０） ハイビスカスの果実、果汁又は葉の抽出物が、疎水性樹脂を用いたクロマトグラフィーやカラムにより効果を高めてあることを特徴とする前記（１）〜（９）いずれか記載の抗酸化組成物。
（１１） 疎水性樹脂が、フェノール系、スチレン系、アクリル酸系、エポキシアミン系、ピリジン系、メタクリル系など母体とする特徴とする前記（１０）記載の抗酸化組成物。
（１２） 前記（１）〜（１１）いずれか記載の抗酸化組成物を含有することを特徴とする飲食品。
（１３） 前記（１）〜（１１）いずれか記載の抗酸化組成物を含有することを特徴とする医薬品。
（１４） 前記（１）〜（１１）いずれか記載の抗酸化組成物を含有することを特徴とする医薬部外品。
（１５） 前記（１）〜（１１）いずれか記載の抗酸化組成物を含有することを特徴とする飼料。
【産業上の利用可能性】
【００６２】
本発明で得られたハイビスカス抽出物を含有する抗酸化組成物は、ＤＰＰＨフリーラジカル消去能およびＳＯＤ様活性値が高いことから、抗酸化効果があることが確認でき、各種飲食品、医薬部外品及び医薬品等に利用して、老化、脳卒中、自己免疫疾患、ガン、白内障、脂肪肝、心筋梗塞、虚血性心疾患、アルツハイマー症候群、糖尿病、糖尿病性腎症、動脈硬化、アレルギー、花粉症のような様々な疾病やシミ・ソバカス等の異常な色素沈着の進行を抑制並びに食品の劣化を抑制することができる。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ハイビスカス抽出物を含有する抗酸化組成物及びそれを含有する飲食品、医薬部外品及び医薬品に関する。
【背景技術】
【０００２】
ヒトは常時呼吸をし、体に酸素を取り入れている。呼吸によって摂取した酸素のうち約２％〜４％が不安定な不対電子をもつ活性酸素（分子内にひとつ以上の不対電子をもつものをフリーラジカルといい、酸素のフリーラジカルを活性酸素という）となり、これらの活性酸素は早く安定しようと、安定を求めて細胞膜を攻撃する。その後、細胞膜中の不飽和脂肪酸を酸化し、酸化された不飽和脂肪酸は脂質ペルオキシルラジカルに変化する。そして、脂質ペルオキシルラジカルは、再び不飽和脂肪酸を酸化し、酸化を繰り返しながら、過酸化脂質を生成する。活性酸素には、体内に侵入してきた細菌などから身を守る役割もあるが、問題なのは大量に活性酸素が発生した場合である。活性酸素が有害なのは、不飽和脂肪酸が体内で活性酸素によって酸化され、「過酸化脂質」になるからである。人間の身体はおよそ６０兆個の細胞から構成されていて、その細胞の一番外側にある細胞膜は「不飽和脂肪酸」でできている。その不飽和脂肪酸が酸化して、過酸化脂質となり、細胞膜がボロボロになると、さらに細胞膜内にあるタンパク質までもが巻き込まれて酸化し、もっと有害な二次酸化物ができる。これによって、老化、脳卒中、自己免疫疾患、ガン、白内障、脂肪肝、心筋梗塞、虚血性心疾患、アルツハイマー症候群、糖尿病、糖尿病性腎症、動脈硬化、アレルギー、花粉症のような様々な疾病や皮膚のしわ形成や皮膚の弾力性低下等の老化、炎症、肌の色素沈着が引き起こされている。しかし幸いな事に人体には抗酸化物質が備わっており、体内のＳＯＤ（スーパーオキシドディスムターゼ）をはじめ、カタラーゼ、グルタチオン・パーオキシターゼなどの抗酸化物質が備わっており、この活性酸素を消しさってくれる。しかしこのＳＯＤも歳を取ると共に減少する。また、最近の農薬、殺虫剤、食品添加物、窒素化合物、紫外線、放射線、ストレス、タバコなど多くの環境汚染物質によって、環境汚染は我々の体内にある貴重なＳＯＤをさらに消費しているだけでなく、活性酸素が作られる環境になっている。
【０００３】
活性酸素を消去させる為には、抗酸化物質を摂取すればよく、また、体内のＳＯＤが不足したらＳＯＤを補えばいいが、ＳＯＤは経口摂取しても速やかに吸収する事は困難であり、また、胃酸に分解されて活性を失う。そこでＳＯＤと同様の活性を示す抗酸化物質をとることが有効な手段となる。
【０００４】
抗酸化剤としては、例えばＬ−アスコルビン酸（ビタミンＣ），還元型のグルタチオン、尿酸、ポリフェノール類などの水溶性抗酸化化合物や、α−トコフェロール（ビタミンＥ）、ユビキノン（コエンザイムＱ）、カロチノイド類などの脂溶性抗酸化化合物およびＢＨＴ（ブチルヒドロキシトルエン）、ＢＨＡ（ブチルヒドロキシアニソール）などの合成化合物などが知られている。しかし、合成抗酸化剤のＢＨＴ、ＢＨＡには、発癌性の疑いが持たれている等の問題がある。日常的な抗酸化物質の摂取を考える上で、その経済性や安全性から主に抗酸化物質の製造における原料としては食品が用いられ、例えば茶葉からカテキン類や赤ワインからはプロシアニジン類等のポリフェノール類が製造されている。その他の天然成分での抗酸化剤としては、スモモ、セイヨウナツユキソウ、ベンガルカラタチ、ミラクルベリー、ヤーバサンタ、レモングラスから選ばれる抽出物（例えば、特許文献１参照。）、アガリクス、メシマコブ、及びプロポリス（例えば、特許文献２参照。）、椿花抽出物（例えば、特許文献３参照。）、サンショウ水性溶媒抽出物（例えば、特許文献４参照。）、カカオの葉、樹皮又は根抽出物（例えば、特許文献５参照。）、フスマ、胚芽又は穀粉の有機溶媒による抽出物（例えば、特許文献６参照。）、栄養的に優れているといわれる野菜類の、かぼちゃ、ホーレン草、モロヘイヤ、トマト、スイートコーン、人参、紫コーンなどの１５種類以上の天然食品素材からなるもの（例えば、特許文献７参照。）が知られている。一方で、単一な物質の大量摂取より、多種・多様な抗酸化物質を少量ずつ摂取することのほうが、種々の疾病の予防については有効であることがわかってきた。そのためには多彩な抗酸化物質を提供することが必要である。
【０００５】
【特許文献１】特開２００３−１８３１２０号公報（第１−２頁）
【特許文献２】特開２００２−２３５０８４号公報（第１−２頁）
【特許文献３】特開２００２−３７１０９２号公報（第１−２頁）
【特許文献４】特開２００２−１０４９８５号公報（第２−３頁）
【特許文献５】特開２０００−６０４８５号公報（第１−２頁）
【特許文献６】特開平１０−１４７７７９号公報（第１−２頁）
【特許文献７】特開平１０−７５７４０号公報（第２−５頁）
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明の課題は、幅広い飲食品や医薬品に使用可能な抗酸化効果のある組成物及びそれを含有する飲食品、医薬部外品及び医薬品を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは、このような状況を鑑み、従来技術の問題点を改善せんとして鋭意研究を重ねた結果、ハイビスカスに強い抗酸化作用及びＳＯＤ様活性を有することを見出し、本発明を完成させた。
【発明の効果】
【０００８】
本発明で得られたハイビスカスの果実、果汁又は葉の抽出物を含有する抗酸化組成物は、電子スピン共鳴（ＥＳＲ）装置を用いた、ＤＰＰＨ（ジフェニルピクリルヒドラジル）フリーラジカル消去能の測定結果及び同じく、適当な方法で発生させた活性酸素種をＤＭＰＯなどのスピントラップ剤で捕捉し、各活性酸素種に特異的なＥＳＲシグナルを定量する方法によるＳＯＤ様活性測定結果及びストレプトゾトシン（ＳＴＺ）を投与して誘発させた糖尿病性腎症ラットへの抗酸化組成物投与試験及び魚肉への添加試験により、酸化によって生体内で増加する過酸化脂質をチオバルビツール酸（ＴＢＡ）と反応する物質（チオバルビツール酸反応性物質；ＴＢＡＲＳ）の量で測定した結果から、抗酸化効果が高いことがわかった。
【０００９】
本発明はハイビスカスの果実、果汁又は葉の抽出物を含有する抗酸化組成物を各種飲食品及び医薬品等に利用して、老化、脳卒中、自己免疫疾患、ガン、白内障、脂肪肝、心筋梗塞、虚血性心疾患、アルツハイマー症候群、糖尿病、糖尿病性腎症、動脈硬化、アレルギー、花粉症のような様々な疾病やシミ・ソバカス等の異常な色素沈着の進行を抑制並びに食品の劣化を抑制することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１０】
本発明に用いるハイビスカスとは、アオイ科フヨウ属に属する常緑低木で、学名：ハイビスカス（Ｈｉｂｉｓｃｕｓ）といい、和名ではブッソウゲ（仏桑華）と呼ばれている。原産地は、中国南部中国南部・インド東部・南太平洋諸島・熱帯アフリカである。ハイビスカスはさわやかな酸味があり、最近では、フランス料理やイタリア料理のソースとしても使われており、ハーブとして用いられる食用ハイビスカスは、学名・ハイビスカスサブダリファ／（英）ロゼール・（米）フロリダクランベリーと呼ばれている種類で、ジャマイカ、スーダン、エジプト、タイ、中国、スリナムマレーシア等の国で裁培されている。
【００１１】
本発明において、ハイビスカスの部位としては、萼及び花に由来する果実弁または葉部の分が用いられるが、効果の点より、葉が好ましい。その形態は、特に限定するものではなく、生果実、乾燥果実、果実粉末、生葉、乾燥葉、乾燥葉粉末等のいずれでも良い。
【００１２】
果汁又は果汁粉末の場合は、そのままでも使用できるが、生果実、乾燥果実、生葉又は乾燥葉等、水不溶性成分を含んでいるので、抽出により、水不溶性成分が除去されていることが好ましい。
【００１３】
抽出の際、生果実、乾燥果実、生葉又は乾燥葉を使用する場合は、抽出効率を高めるためにミキサー等により破砕、均質化したものを用いることが好ましい。
【００１４】
乾燥果実又は乾燥葉を使用する場合は、抽出効率を高めるために４０メッシュ以下の粒度になるように粉砕されていることが好ましい。
【００１５】
抽出方法は、抽出溶媒、抽出温度等、特に限定されるものではなく、抽出溶媒としては、水、塩基、酸、親水性溶媒、アセトンを使うことができる。親水性溶媒はメチルアルコール、エチルアルコール、ｎ−プロピルアルコール、イソプロピルアルコール、ブチルアルコールの低級アルコール群より選ばれる１種類以上が操作性、抽出効率の点から好ましい。特に好ましくは、水、塩基、酸のいずれかである。
【００１６】
酸又は塩基を抽出溶媒に使用する場合、抽出物を中和させることが好ましい。中和反応によって生成された塩は、透析法やゲル濾過等、公知の方法により、取り除くことができる。水を抽出溶媒として用いた場合には、上記のような中和反応は必要なく、生成された塩を取り除く必要もないため、水を用いることが更に好ましい。
【００１７】
この時使用する酸としては、特に限定するものではなく、大部分の酸を使うことができるが、入手のしやすさの点及び操作性の点により塩酸、硫酸より選ばれる１種又は両者の併用が好ましい。
【００１８】
また、塩基としては、特に限定するものではなく、大部分の塩基を使うことができるが、水酸化ナトリウム、水酸化カリウムより選ばれる１種又は両者の併用が好ましい。
【００１９】
抽出に使用される酸又は塩基の濃度は、抽出物を酵素処理する前であっても後であっても特に限定するものではなく、酸又は塩基の強さによって変化するが、操作性及び抽出効率の点より、０．０１〜０．５モルの濃度を使用することが好ましい。
【００２０】
上記の抽出において、ペクチナーゼ、プロテアーゼ、タンナーゼまたは、セルラーゼ等の酵素を１種類又は２種類以上を組み合わせて併用することも可能である。
【００２１】
更に、上記の抽出において、抽出残渣に対して再度抽出工程を１回又はそれ以上繰り返すことで、抽出効率が向上し、収率が向上するので、好ましい。この場合の抽出に用いる溶媒は、同じでも良いし、別の溶媒を用いても良い。
【００２２】
上記の抽出物は、そのままでも使用できるが、濾過、遠心分離及び分留により、不溶性物質及び溶媒を取り除くことにより、抗酸化効果が高くなり、応用範囲も広がるので好ましい。
【００２３】
不溶性物質及び溶媒を取り除いた後、果汁又は抽出液をそのまま又は濃縮した後に有機溶媒を用いて分配を行い、それぞれの溶媒可溶画分を得る。これら溶媒可溶画分は、更に抗酸化効果（ＳＯＤ様活性）が高くなるので好ましい。有機溶媒としてはメチルアルコール、エチルアルコール、ｎ−プロピルアルコール、イソプロピルアルコール、ブチルアルコールなどの低級アルコールや酢酸エチル、酢酸ブチル、ジエチルエーテル、ジメチルエーテル、メチルイソブチルケトン、ヘキサン、アセトン又はクロロホルムが使用できる。このままた可溶画分の純度を上げる為には、他の疎水性溶媒による分配を組み合わせることもできるが、エチルアルコールが好ましい。これら溶媒の濃度としては、特に限定するものではないが、収率及び効果の点より、終濃度として２０〜８０％が好ましい。
【００２４】
その場合、樹脂吸着後の溶離液としては、メチルアルコール、エチルアルコール、ｎ−プロピルアルコール、イソプロピルアルコール、ブチルアルコールなどの低級アルコール及びアセトンを単独又は水溶液として使用できる。
【００２５】
抽出物及び画分はそのままでの使用も可能だが、必要であれば噴霧乾燥や凍結乾燥等の手段により乾燥粉末化させて使用することも可能である。
【００２６】
本発明において抗酸化作用効果は、フリーラジカル消去能や血液中の過酸化脂質を測定することによって確認できる。フリーラジカル消去能の測定は、ＥＳＲを用いた方法やチトクロームＣ還元法、亜硝酸法、ニトロブルーテトラゾリウム塩還元法（ＮＢＴ還元法）などの化学的方法により、ＤＰＰＨラジカル（ジフェニルピクリルヒドラジルラジカル）阻害率、スーパーオキシドラジカル消去能、ＳＯＤ様活性値、ヒドロキシラジカル値を測定によって確認することができる。
【００２７】
本願発明の抗酸化組成物は、飲食品、医薬品、飼料等に応用でき、好ましくは、人が手軽に摂食できる飲食品又は医薬品が好ましい。
【００２８】
本願発明における飲食品とは溶液、懸濁物、粉末、固体成形物等経口摂取可能な形態であれば良く特に限定するものではない。より具体的には、即席麺、レトルト食品、缶詰、電子レンジ食品、即席スープ・みそ汁類、フリーズドライ食品等の即席食品類、清涼飲料、果汁飲料、野菜飲料、豆乳飲料、コーヒー飲料、茶飲料、粉末飲料、濃縮飲料、栄養飲料、アルコール飲料等の飲料類、パン、パスタ、麺、ケーキミックス、から揚げ粉、パン粉等の小麦粉製品、飴、キャラメル、チューイングガム、チョコレート、クッキー、ビスケット、ケーキ、パイ、スナック、クラッカー、和菓子、デザート菓子等の菓子類、ソース、トマト加工調味料、風味調味料、調理ミックス、たれ類、ドレッシング類、つゆ類、カレー・シチューの素類等の調味料、加工油脂、バター、マーガリン、マヨネーズ等の油脂類、乳飲料、ヨーグルト類、乳酸菌飲料、アイスクリーム類、クリーム類等の乳製品、冷凍食品、魚肉ハム・ソーセージ、水産練り製品等の水産加工品、畜肉ハム・ソーセージ等の畜産加工品、農産缶詰、ジャム・マーマレード類、漬け物、煮豆、シリアル等の農産加工品、栄養食品、錠剤、カプセル等が例示される。
【００２９】
本願発明の抗酸化組成物の飲食品としての摂取量は、体重、年齢、体質、体調等によって調整されるべきであるが、一般に１日あたり、抗酸化組成物として０．０５ｇ〜２０ｇ、好ましくは０．１ｇ〜５ｇの範囲で適宜選択することができる。これを病気の状態や食品等の形態によって１日１ないし数回にわけて摂取することができる。
【００３０】
本願発明において、抗酸化組成物又は、それを含有する飲食品等に加工する際に、各種栄養成分を強化することができる。
【００３１】
強化できる栄養成分としては、ビタミンＡ、ビタミンＢ１、ビタミンＢ２、ビタミンＢ６、ビタミンＢ１２、ビタミンＣ、ビタミンＤ、ビタミンＥ、ナイアシン（ニコチン酸）、パントテン酸、葉酸等のビタミン類、リジン、スレオニン、トリプトファン等の必須アミノ酸類や、カルシウム、マグネシウム、鉄、亜鉛、銅等のミネラル類及び、例えば、α−リノレン酸、ＥＰＡ、ＤＨＡ、月見草油、オクタコサノール、カゼインホスホペプチド（ＣＰＰ）、カゼインカルシウムペプチド（ＣＣＰ）、水溶性食物繊維、不溶性食物繊維、オリゴ糖等の人の健康に寄与する物質類、その他の食品や食品添加物として認可されている有用物質の１種又は２種以上が使用できる。
【００３２】
本願発明における医薬部外品及び医薬品とは、経口または非経口投与に適した賦形剤、その他の添加剤を用いて、常法に従って、経口製剤または注射剤として調製することができる。好ましいのは、経口製剤であり、最も好ましいのは、容易に服用でき且つ保存、持ち運びに便利な経口固形製剤である。
【００３３】
経口固形製剤としては、錠剤、散剤、細粒剤、顆粒剤、カプセル剤、丸剤、徐放剤等が用いられる。このような固形製剤においては、適宜の薬理学的に許容され得る坦体、賦形剤（例えばデンプン、乳糖、白糖、炭酸カルシウム、リン酸カルシウムなど）、結合剤（例えばデンプン、アラビアゴム、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、結晶セルロース、アルギン酸、ゼラチン、ポリビニルピリドンなど）、滑沢剤（例えばステアリン酸、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウムなど）、崩壊剤（例えばカルボキシメチルセルロース、タルクなど）、などと混合し、常法により錠剤、散剤、細粒剤、顆粒剤、カプセル剤、丸剤、徐放剤等を調整することが出来る。経口液状製剤は、製薬学的に許容される乳濁剤、溶液剤、懸濁剤、シロップ剤、エリキシル剤等を含み、一般的に用いられる不活性な希釈剤、例えば精製水、エタノールを含む。この組成物は不活性な希釈剤以外に湿潤剤、懸濁剤のような補助剤、甘味剤、風味剤、芳香剤、防腐剤を含有していてもよい。
【００３４】
非経口投与しての注射剤としては、無菌の水性又は非水性の溶液剤、懸濁剤、乳濁剤を包含する。水性の溶液剤、懸濁剤の希釈剤としては、例えば注射用蒸留水及び生理食塩水が含まれる。非水溶性の溶液剤、懸濁剤の希釈剤としては、例えばプロピレングリコール、ポリエチレングリコール、オリーブ油のような植物油、エタノールのようなアルコール類、ポリソルベート８０等がある。このような組成物は、さらに防腐剤、湿潤剤、乳化剤、分散剤、安定化剤（例えばラクトース）、溶解補助剤（例えば、グルタミン酸、アスパラギン酸）のような補助剤を含んでもよい。これらは例えばバクテリア保管フィルターを通す濾過、殺菌剤の配合又は照射によって無菌化される。これらはまた無菌の固体組成物を製造し、使用前に無菌水又は無菌の注射用溶媒に溶解して使用することもできる。
【００３５】
以下本発明を、実施例にて詳細に説明するが、次の実施例は、本発明の範囲を限定するものではない。
【実施例】
【００３６】
（実施例１）抗酸化組成物の調製１
【００３７】
ハイビスカスの乾燥した果実を４０メッシュ以下に粉砕し、その粉末１５０ｇに、蒸留水３Ｌを加え、１００℃で３時間抽出した。その後、遠心分離（８５００ｒｐｍ、１０分間）し、その上清を濾過し、抽出物と残渣を分離した。その濾液を減圧濃縮し、その後、凍結乾燥し、本発明の抗酸化組成物Ａ２９．８ｇ（収率１９．９％）を得た。
【００３８】
（実施例２）抗酸化組成物の調製２
ハイビスカスの乾燥した葉を２０メッシュ以下に粉砕し、その粉末１００ｇに、蒸留水２Ｌを加え、１００℃で３時間抽出した。その後、遠心分離（８５００ｒｐｍ、１０分間）し、その上清を濾過し、抽出物と残渣を分離した。その濾液を減圧濃縮し、その後、凍結乾燥し、本発明の抗酸化組成物Ｂ１３．４ｇ（収率１３．４％）を得た。
【００３９】
（抗酸化能測定法−ＤＰＰＨ測定）
フリーラジカル消去活性の測定には、比較的安定なラジカルを持つ１，１−Ｄｉｐｈｅｎｙｌ−２−ｐｉｃｒｙｌｈｙｄｒａｚｙｌ（ＤＰＰＨ）を用いた方法にて行った。本法はラジカル状態で５１７ｎｍの極大吸収を持つＤＰＰＨが抗酸化物質によって還元される事により５１７ｎｍにおける吸光度の減少から抗酸化能を評価する方法である。
【００４０】
（試験例１）ＤＰＰＨ測定
分光光度計を用いてＤＰＰＨを測定した。
実施例１、２の抗酸化組成物Ａ、Ｂをそれぞれ計量してエッペンドルフチューブに入れ、抗酸化組成物Ａの濃度が１０ｍｇ／ｍＬとなるように蒸留水を添加した。その試料溶液を段階希釈し、１５０、３００μｇ／Ｌの試料溶液を作成した。この溶液からそれぞれ５０μＬずつ別の試験管に移し、これらに５０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌを４５０μＬずつ、５０ｍＭのＤＰＰＨを１ｍＬ加えた。これらの試料溶液を分光光度計（５１７ｎｍ）にて測定し、ＤＰＰＨラジカルスカベンジャー活性を測定した。比較対照としてにがうりを実施例１と同様な方法で抽出した抽出物を用いた。
結果を表１に示す。
【００４１】
【表１】
【００４２】
以上の結果より、本願発明の抗酸化組成物Ｂの葉により強いＤＰＰＨ阻害活性が認められ、果実よりも葉により強い抗酸化作用があることが示唆された。
【００４３】
（活性酸素消去活性測定法−ＳＯＤ測定）
スーパーオキシドディスムターゼ（Ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ ｄｉｓｍｕｔａｓｅ，ＳＯＤ）はスーパーオキシドアニオン（・Ｏ２−， 活性酸素）から電子を取り除いて酸素と水素分子にする酵素で、細胞核に多く局在している。酸化ストレスを減少させる役割を持つ。
活性酸素消去活性はキサンチンオキシダーゼ／ヒポキサンチン系により発生させたスーパーオキシドに対する消去能により測定した。本測定法においては、スーパーオキシドに特異性が高い化学発光試薬で、ルシフェリン誘導体である２−メチル−ｐ−メトキシフェニルエチニルイミダゾピラジノン（ＭＰＥＣ）を用い、キサンチンオキシダーゼ／ヒポキサンチン系に添加した時の化学発光をルミノメーターで測定した。
【００４４】
（試験例２）ＳＯＤ様活性測定
実施例１、２で得られた抗酸化組成物Ａ、Ｂを各３００μｇ／ｍＬに調製し、それぞれ１０μＬに、３００μＭのＭＰＥＣ発光試薬を１０μＬ、キサンチンオキシダーゼを６０μＬ、ＫＨ２ＰＯ４／ＮａＯＨバッファーを１７０μＬおよびヒポキサンチンを５０μＬ添加した溶液を作成した。この溶液をベリタスマイクロプレートルミノメーターにて測定し、スーパーオキシドを検出した。活性は以下の式より求めた。
ＳＯＤ様活性％＝１−（反応したサンプル／コントロール）×１００
結果を表２に示す。
【００４５】
【表２】
【００４６】
以上の結果より、本願発明の抗酸化組成物Ａ、Ｂには高いＳＯＤ様活性が認められた。またその活性強度はＡの果実により強く認められた。
【００４７】
（実施例３）抗酸化組成物の調製３
ハイビスカスの乾燥した果実を４０メッシュ以下に粉砕し、その粉末１５０ｇに、蒸留水３Ｌを加え、１００℃で３時間抽出した。その後、遠心分離（８５００ｒｐｍ、１０分間）し、その上清を濾過し、抽出物と残渣を分離した。その濾液を減圧濃縮し、４００ｍＬとした。この濃縮液にエチルアルコールを加え、５００ｍＬになるように調製（最終エチルアルコール濃度２０％）した後、室温で２４時間静置して、不溶性成分を沈殿させた。遠心分離（８５００ｒｐｍ、１０分間）で沈澱物を分離し、上清を減圧濃縮後、蒸留水１Ｌを加え再溶解した。そして濾過して不溶性成分を除去し、濾液を減圧濃縮後、凍結乾燥して本発明の抗酸化組成物Ｃ１２．４ｇ（収率８．３％）を得た。また、同様にして得た濃縮液にエチルアルコールを加え、最終エチルアルコール濃度を８０％とした時の不溶性成分を沈殿させ、同様の操作をしてそれぞれ本発明の抗酸化組成物Ｄ９．８ｇ（収率６．５％）を得た。
【００４８】
（実施例４）抗酸化組成物の調製４
ハイビスカスの乾燥した葉を４０メッシュ以下に粉砕し、その粉末１５０ｇに、蒸留水３Ｌを加え、１００℃で３時間抽出した。その後、遠心分離（８５００ｒｐｍ、１０分間）し、その上清を濾過し、抽出物と残渣を分離した。その濾液を減圧濃縮し、４００ｍＬとした。この濃縮液にエチルアルコールを加え、５００ｍＬになるように調製（最終エチルアルコール濃度２０％）した後、室温で２４時間静置して、不溶性成分を沈殿させた。遠心分離（８５００ｒｐｍ、１０分間）で沈澱物を分離し、上清を減圧濃縮後、蒸留水１Ｌを加え再溶解した。そして濾過して不溶性成分を除去し、濾液を減圧濃縮後、凍結乾燥して本発明の抗酸化組成物Ｅ１２．４ｇ（収率８．３％）を得た。また、同様にして得た濃縮液にエチルアルコールを加え、最終エチルアルコール濃度を８０％とした時の不溶性成分を沈殿させ、同様の操作をしてそれぞれ本発明の抗酸化組成物Ｆ６．７ｇ（収率４．５％）を得た。
【００４９】
（試験例３）ＤＰＰＨ測定
実施例３、４の抗酸化組成物ＤおよびＦを計量してエッペンドルフチューブに入れ、抗酸化組成物Ｄ、Ｆの濃度が１０ｍｇ／ｍＬとなるように蒸留水を添加した。その試料溶液を希釈し、１０００μｇ／ｍＬの試料溶液を作成した。試験例１と同様な方法で、ＤＰＰＨラジカルスカベンジャー活性を測定した。比較対照としてにがうりを実施例３と同様な方法で抽出した抽出物を用いた。
結果を表３に示す。
【００５０】
【表３】
【００５１】
以上の結果より、本願発明の抗酸化組成物にはＤＰＰＨ阻害活性が認められ、その強度はＦの葉に強く認められることが明らかとなった。
【００５２】
（試験例４）ＳＯＤ様活性測定
実施例３、４で得られた抗酸化組成物ＤおよびＦを３１、６２．５、１２５、２５０、５００、１０００μｇ／ｍＬに調製し、試験例２と同様な方法でＳＯＤ様活性を求めた。
結果を表４に示す。
【００５３】
【表４】
以上の結果より、抗酸化組成物Ｄ及びＦには、エタノール未処理（抗酸化組成物Ａ、Ｂ）高いＳＯＤ様活性が認められた。またその活性強度はＦの葉により強く認められた。
【００５４】
（実施例５）抗酸化組成物含有食品（錠菓）の調製
実施例１で得られた抗酸化組成物Ａ５ｇ、乳糖３０ｇ、ＤＨＡ含有粉末油脂（サンコートＤＹ−５；太陽化学社製）１２ｇ、ショ糖脂肪酸エステル４ｇ、ヨーグルト香料４ｇを混合し、この混合物をロータリー式打錠機を用いて加圧成形して１錠が３００ｍｇの本発明の抗酸化組成物含有飲食品（錠菓）を得た。
【００５５】
（実施例６）抗酸化組成物含有飲料の調製
実施例２で得られた抗酸化組成物Ｂ５ｇ及び、１／５濃縮グレープフルーツ透明果汁２．１ｇ、エリスリトール３０ｇ、クエン酸結晶２．５ｇ、クエン酸三ナトリウム０．５ｇ、Ｌ−アスコルビン酸０．５ｇ、乳酸カルシウム１．９３ｇ、ＣＣＰ０．１５ｇ、グレープフルーツ香料１．０を水に混合溶解して、全量を１０００ｍＬとし、それを１００ｍＬの瓶に充填し、キャップで密栓した後、９０℃、３０分間加熱殺菌をして、本発明の抗酸化組成物含有飲食品を得た。
【００５６】
（実施例７）抗酸化組成物含有飲料（野菜果汁混合飲料）の調製
実施例２で得られた抗酸化組成物Ａ０．２ｇ及び、グアーガム分解物（サンファイバーＲ；太陽化学社製）３ｇを市販の野菜果汁混合飲料１００ｍＬに添加混合溶解して、本発明の抗酸化組成物含有飲食品（野菜果汁混合飲料）を得た。
【００５７】
（実施例８）抗酸化組成物含有クッキーの調製
実施例２で得られた抗酸化組成物Ｂ４ｇ及び、市販のケーキミックス粉２００ｇを容器に入れた後、バター３５ｇを入れ、木杓子で混ぜ合わせた。それに溶き卵２５ｇを加えて、なめらかな生地になるまで良く練った。小麦粉を振った台の上に生地を取り出し、さらに小麦粉を振って麺棒で５ｍｍの厚さに伸ばし、丸型で抜き、それを１７０℃のオーブンで１０分間焼いて、１個約５ｇの本発明の抗酸化組成物含有クッキーを得た。
【００５８】
（実施例９）抗酸化組成物含有ヨーグルトの調製
実施例１で得られた抗酸化組成物Ａ１ｇ、市販の脱脂乳（明治乳業社製。蛋白質含量３４％）９５ｇ、及び市販の無塩バター（雪印乳業社製）３５ｇを温水０．８Ｌに溶解し、均質化し、全量を１Ｌに調整した。次いで、９０℃で１５分間加熱殺菌し、冷却し、市販の乳酸菌スターター（ハンゼン社製）３ｇ（ストレプトコッカス・サーモフィラス２ｇ及びラクトバシラス・ブルガリクス１ｇ）を接種し、均一に混合し、１００ｍＬの容器に分注，充填し、密封し、３７℃で２０時間発酵させた後、冷却し、本発明の抗酸化組成物含有ヨーグルトを得た。
【００５９】
（実施例１０）抗酸化組成物含有経口流動食の調製
カゼインナトリウム（ＤＭＶ社製）５０ｇ、卵白酵素分解物（太陽化学社製）４２．５ｇ、デキストリン（松谷化学社製）１００ｇ水１Ｌに溶解し、水相をタンク内に調製した。これとは別に、ＭＣＴ（花王社製）４５ｇ、パーム油（不二製油社製）１７．５ｇ、サフラワー油（太陽油脂社製）３５ｇ、レシチン（太陽化学社製）０．７ｇ、消泡剤（太陽化学社製）１ｇを混合溶解し、油相を調製した。タンク内の水相に油相を添加し、攪拌して混合した後、７０℃に加温し、更に、ホモゲナイザーにより１４．７ＭＰａの圧力で均質化した。次いで、９０℃で１０分間殺菌した後、濃縮し、噴霧乾燥して、中間製品粉末約２６０ｇを調製した。この中間製品粉末２００ｇに実施例１で得られた抗酸化組成物Ａ４ｇ、デキストリン（松谷化学社製）１５６ｇ、グアーガム分解物（サンファイバーＲ；太陽化学株式会社製）１８ｇ、少量のビタミンとミネラルおよび粉末香料を添加し、均一に混合して、抗酸化組成物を含有する経口流動食約３８０ｇを得た。
【００６０】
（実施例１１）抗酸化組成物含有錠剤の調製
実施例１で得られた抗酸化組成物Ａ１０ｇ、結晶セルロース５ｇ、トウモロコシデンプン１３．８ｇ、乳糖３２．５ｇ、ヒドロキシプロピルセルロース３．３ｇを混合し、顆粒化した。この顆粒化物にステアリン酸マグネシウム１．０ｇを加え、均一に混合し、この混合物をロータリー式打錠機を用いて加圧成形して一錠が１３０ｍｇの本発明の抗酸化組成物含有錠剤を得た。
【００６１】
本発明の実施態様ならびに目的生成物を挙げれば以下の通りである。
（１） ハイビスカスの果実、果汁又は葉の抽出物を含有することを特徴とする抗酸化組成物。
（２） ハイビスカスの葉の抽出物を含有することを特徴とする抗酸化組成物。
（３） ハイビスカスの抽出物が、対象部位から水、塩基、酸、親水性溶媒により抽出されていることを特徴とする前記（１）又は（２）いずれか記載の抗酸化組成物。
（４） ハイビスカスの抽出物が、対象部位水により抽出されていることを特徴とする前記（１）又は（２）いずれか記載の抗酸化組成物。
（５） 親水性溶媒がメチルアルコール、エチルアルコール、ｎ−プロピルアルコール、イソプロピルアルコール、ブチルアルコールの群より選ばれる少なくとも１種類以上の低級アルコールであることを特徴とする前記（３）記載の抗酸化組成物。
（６） 前記（１）〜（５）いずれか記載のハイビスカス抽出物から有機溶媒のいずれか１種類又は２種類以上により分画されていることを特徴とする抗酸化組成物。
（７） 有機溶媒がエチルアルコールであることを特徴とする前記（６）記載の抗酸化組成物。
（８） エチルアルコールで分画する際の可溶画分であることを特徴とする前記（７）記載の抗酸化組成物。
（９） エチルアルコールで分画する際のエチルアルコール濃度が、２０〜８０％であり、そのエチルアルコール可溶画分であることを特徴とする前記（７）記載の抗酸化組成物。
（１０） ハイビスカスの果実、果汁又は葉の抽出物が、疎水性樹脂を用いたクロマトグラフィーやカラムにより効果を高めてあることを特徴とする前記（１）〜（９）いずれか記載の抗酸化組成物。
（１１） 疎水性樹脂が、フェノール系、スチレン系、アクリル酸系、エポキシアミン系、ピリジン系、メタクリル系など母体とする特徴とする前記（１０）記載の抗酸化組成物。
（１２） 前記（１）〜（１１）いずれか記載の抗酸化組成物を含有することを特徴とする飲食品。
（１３） 前記（１）〜（１１）いずれか記載の抗酸化組成物を含有することを特徴とする医薬品。
（１４） 前記（１）〜（１１）いずれか記載の抗酸化組成物を含有することを特徴とする医薬部外品。
（１５） 前記（１）〜（１１）いずれか記載の抗酸化組成物を含有することを特徴とする飼料。
【産業上の利用可能性】
【００６２】
本発明で得られたハイビスカス抽出物を含有する抗酸化組成物は、ＤＰＰＨフリーラジカル消去能およびＳＯＤ様活性値が高いことから、抗酸化効果があることが確認でき、各種飲食品、医薬部外品及び医薬品等に利用して、老化、脳卒中、自己免疫疾患、ガン、白内障、脂肪肝、心筋梗塞、虚血性心疾患、アルツハイマー症候群、糖尿病、糖尿病性腎症、動脈硬化、アレルギー、花粉症のような様々な疾病やシミ・ソバカス等の異常な色素沈着の進行を抑制並びに食品の劣化を抑制することができる。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ハイビスカス抽出物を含有することを特徴とする抗酸化組成物。
【請求項２】
ハイビスカス抽出物が、ハイビスカスの果実、果汁又は葉から水、塩基、酸、親水性溶媒、アセトンからなる群より選ばれる少なくとも１種により抽出されていることを特徴とする請求項１記載の抗酸化組成物。
【請求項３】
請求項１又は２記載のハイビスカス抽出物の有機溶媒による分画物を含有することを特徴とする抗酸化組成物。
【請求項４】
有機溶媒がエチルアルコールであることを特徴とする請求項３記載の抗酸化組成物。
【請求項５】
請求項１〜４いずれか記載の抗酸化組成物を含有することを特徴とする飲食品。
【請求項６】
請求項１〜４いずれか記載の抗酸化組成物を含有することを特徴とする医薬部外品。
【請求項７】
請求項１〜４いずれか記載の抗酸化組成物を含有することを特徴とする医薬品。
【請求項１】
ハイビスカス抽出物を含有することを特徴とする抗酸化組成物。
【請求項２】
ハイビスカス抽出物が、ハイビスカスの果実、果汁又は葉から水、塩基、酸、親水性溶媒、アセトンからなる群より選ばれる少なくとも１種により抽出されていることを特徴とする請求項１記載の抗酸化組成物。
【請求項３】
請求項１又は２記載のハイビスカス抽出物の有機溶媒による分画物を含有することを特徴とする抗酸化組成物。
【請求項４】
有機溶媒がエチルアルコールであることを特徴とする請求項３記載の抗酸化組成物。
【請求項５】
請求項１〜４いずれか記載の抗酸化組成物を含有することを特徴とする飲食品。
【請求項６】
請求項１〜４いずれか記載の抗酸化組成物を含有することを特徴とする医薬部外品。
【請求項７】
請求項１〜４いずれか記載の抗酸化組成物を含有することを特徴とする医薬品。
【公開番号】特開２００７−９９６７１（Ｐ２００７−９９６７１Ａ）
【公開日】平成１９年４月１９日（２００７．４．１９）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００５−２９１１２８（Ｐ２００５−２９１１２８）
【出願日】平成１７年１０月４日（２００５．１０．４）
【出願人】（０００２０４１８１）太陽化学株式会社 (244)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成１９年４月１９日（２００７．４．１９）
【国際特許分類】
【出願日】平成１７年１０月４日（２００５．１０．４）
【出願人】（０００２０４１８１）太陽化学株式会社 (244)
【Ｆターム（参考）】
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