新規微生物、ホウ素除去剤及びホウ素の除去方法
【課題】ホウ素除去能を有する新たな微生物、及び該微生物を利用するホウ素の除去方法の提供。
【解決手段】ホウ素除去能を有するキャンディダ（Ｃａｎｄｉｄａ）属に属する微生物；キャンディダ（Ｃａｎｄｉｄａ）属ＪＰＣＣＹ０４０３株（ＮＩＴＥ Ｐ−８０６）；かかる微生物を有効成分として含有するホウ素除去剤；ホウ素を含む化合物の共存下で、かかる微生物を培養する工程を有するホウ素の除去方法；かかるホウ素除去剤を使用するホウ素の除去方法。
【解決手段】ホウ素除去能を有するキャンディダ（Ｃａｎｄｉｄａ）属に属する微生物；キャンディダ（Ｃａｎｄｉｄａ）属ＪＰＣＣＹ０４０３株（ＮＩＴＥ Ｐ−８０６）；かかる微生物を有効成分として含有するホウ素除去剤；ホウ素を含む化合物の共存下で、かかる微生物を培養する工程を有するホウ素の除去方法；かかるホウ素除去剤を使用するホウ素の除去方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規微生物、該微生物を含有するホウ素除去剤、及び該微生物又はホウ素除去剤を使用するホウ素の除去方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
ホウ素は、ガラスや半導体の材料に含まれていたり、防腐剤や医薬品の原料に含まれているなど、産業界において利用価値の高い元素である。また、ホウ素は、植物の必須微量元素であることが知られており、植物の成長に欠かせないことから、ホウ素が欠乏している土壌に対しては、肥料としての供給が必要となる。さらに、ホウ素は人間にとっての必須微量元素でもある。
【０００３】
一方、土壌中のホウ素量が過剰になると、植物の成長が阻害されることが知られており、人間が過剰に摂取した場合にも、健康被害が発生することが知られている。このように、ホウ素は、必要とされる量が比較的狭い範囲に限定されることが判ってきており、近年は環境中への排出に対する規制対象となっている。
【０００４】
しかし、上記のようなホウ素の利用価値の高さから、ホウ素を含む化合物は様々な分野の製造現場で使用されており、例えば、工場排水中へのホウ素の混入が懸念されている。また、元来、土壌中のホウ素濃度が高いことで、農業の発達が妨げられている地域もある。そこで、排水や自然環境からのホウ素の除去は、年々、重要な課題となってきている。
【０００５】
これに対して、これまでに金属の除去方法としては、例えば、吸着による除去技術が検討されてきている。しかし、これは重金属の除去に対しては有効であることが多いが、ホウ素の除去に対しては、除去効率が低いために不向きであると言われている。
一方、微生物を利用する金属の除去方法が、これまでに種々検討されてきている。微生物を利用する除去方法としては、除去対象である金属を含む化合物を微生物の体内に取り込ませることで対象金属を除去するバイオミネラリゼーション、微生物の細胞表面に存在する多糖類や脂質等の高分子に、除去対象である金属を含む化合物を吸着させて対象金属を除去するバイオアドソープション等が知られている。このような微生物を利用する方法は、環境負荷も少なく低コストで行うことができる優れた方法であり、今後の発展が期待されている。
このような中、微生物を利用するホウ素の除去方法としては、これまでに、微生物として微細藻類を利用する方法が開示されている（特許文献１参照）。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】微細藻類の機能を用いた排水中からの微量ホウ素除去法、財団法人電力中央研究所研究報告（Ｕ０２０６１）、０２−００８、平成１８年５月
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
しかし、前記微細藻類を利用する方法は、まだ十分な検討がなされているとは言えず、ホウ素除去能を有する微生物に関する報告もほとんど無いのが実情である。そこで、ホウ素除去能を有する新たな微生物の探索が強く望まれている。
本発明は上記事情に鑑みて為されたものであり、ホウ素除去能を有する新たな微生物、及び該微生物を利用するホウ素の除去方法を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
上記課題を解決するため、
請求項１に記載の発明は、ホウ素除去能を有するキャンディダ（Ｃａｎｄｉｄａ）属に属する微生物である。
請求項２に記載の発明は、キャンディダ（Ｃａｎｄｉｄａ）属ＪＰＣＣＹ０４０３株（ＮＩＴＥ Ｐ−８０６）である。
請求項３に記載の発明は、請求項１又は２に記載の微生物を有効成分として含有するホウ素除去剤である。
請求項４に記載の発明は、ホウ素を含む化合物の共存下で、請求項１又は２に記載の微生物を培養する工程を有するホウ素の除去方法である。
請求項５に記載の発明は、請求項３に記載のホウ素除去剤を使用するホウ素の除去方法である。
【発明の効果】
【０００９】
本発明によれば、ホウ素除去能を有する新たな微生物、及び該微生物を利用するホウ素の除去方法を提供できる。そして、環境負荷を与えることなく低コストで、排水や自然環境からホウ素を除去できる。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】ＪＰＣＣＹ０４０３の２６Ｓ ｒＤＮＡ−Ｄ１／Ｄ２塩基配列を使用して得られた分子系統樹を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
以下、本発明について詳しく説明する。
なお、以下において、「キャンディダ（Ｃａｎｄｉｄａ）属ＪＰＣＣＹ０４０３株（ＮＩＴＥ Ｐ−８０６）」のことを「ＪＰＣＣＹ０４０３」と略記することがある。
【００１２】
＜ＪＰＣＣＹ０４０３の獲得＞
ＪＰＣＣＹ０４０３は、以下の手順に従って獲得した。
まず、下記手順で分離培地を作製した。
分離培地：酵母エキス５ｇ、グルコース２０ｇ、ペプトン１０ｇ、人工海水３７ｇ、クロラムフェニコール０．３ｇ、ストレプトマイシン０．１５ｇ、アンピシリン０．１ｇ、粉末寒天１２ｇを純水１Ｌに添加し、１２１℃で１０分間滅菌処理した後、適量を滅菌済み平板に分取して、寒天平板を作製した。
次いで、長崎県五島市岐宿町河務郷字ドンドンフチから採取した土壌を、生理食塩水で１００倍（質量比）に希釈して、これを前記分離培地に塗布し、２５℃でインキュベーションした。植菌後３日目に確認できたコロニーを滅菌済み爪楊枝で釣菌し、新たな酵母培地に植菌し、生育を繰り返すことで単菌化した。
【００１３】
＜ＪＰＣＣＹ０４０３の同定＞
ＪＰＣＣＹ０４０３の同定は、株式会社テクノスルガに委託して実施した。そして取得した検体を使用して、「簡易形態観察」、「生理性状試験」、「２６Ｓ ｒＤＮＡ−Ｄ１／Ｄ２塩基配列の同定」を行った。なお、供試菌体としては、下記条件で培養した菌株を使用した。
［培養条件］
培地：Ｙｅａｓｔ ｅｘｔｒａｃｔ−ｍａｌｔ ａｇａｒ（ＹＭ ａｇａｒ）（Ｋｕｒｔｚｍａｎ ａｎｄ Ｆｅｌｌ，１９９８）
培養温度：温度耐性試験を除き２５℃
培養期間：１週間〜１ヶ月間
その他の培養条件：好気培養
【００１４】
［簡易形態観察］
以下のものを使用して行った。
顕微鏡：光学顕微鏡ＢＸ５１（オリンパス株式会社製）（微分干渉観察）
マウント液；滅菌蒸留水
【００１５】
（１）巨視的観察（コロニー観察）
ＹＭ寒天平板培地上で２５℃の温度条件下、培養４日間でコロニーは表１に示す性状を示した。
【００１６】
【表１】
【００１７】
（２）微視的観察（形態性状観察）
ＹＭ平板培地上で２５℃の温度条件下、培養開始２日目に、栄養細胞は球形から広楕円形であり、増殖は多極出芽によることが確認された。また、偽菌糸の形成が認められた。培養開始から１ヶ月経過した平板で、有性生殖器官の形成は認められなかった。
【００１８】
［生理性状試験］
試験方法は、Ｂａｒｎｅｔ ｅｔ ａｌ．（２０００）及びＫｕｒｔｚｍａｎ ａｎｄ Ｆｅｌｌ（１９９８）に準拠し、培養は温度耐性試験を除き２５℃で行った。結果を表２〜６に示す。なお、表中、「＋」は反応が陽性であることを、「−」は反応が陰性であることを、「Ｗ（ｗｅｅｋ）」は弱い陽性反応であることをそれぞれ示す。また、「Ｓ（ｓｌｏｗ）」は試験開始後に２週間から３週間以上かけて徐々に陽性反応が認められたことを、「Ｌ（ｌａｔｅｎｔ）」は試験開始２週間以降に急速に陽性反応が認められたことをそれぞれ示す。
【００１９】
【表２】
【００２０】
【表３】
【００２１】
【表４】
【００２２】
【表５】
【００２３】
【表６】
【００２４】
［２６Ｓ ｒＤＮＡ−Ｄ１／Ｄ２塩基配列の同定］
ＤＮＡ抽出からサイクルシークエンスまでの各操作は、下記の各プロトコールに基づいて行った。
ＤＮＡ抽出：物理的破壊及びＭａｒｍｕｒ（１９６１）の改変法
ＰＣＲ：ｐｕＲｅＴａｑ Ｒｅａｄｙ−Ｔｏ−Ｇｏ ＰＣＲ ｂｅａｄｓ（Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）
サイクルシークエンス：ＢｉｇＤｙｅ Ｔｅｒｍｉｎａｔｏｒ ｖ３．１ Ｋｉｔ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）
プライマー：ＮＬ１及びＮＬ４（Ｏ’Ｄｏｎｎｅｌｌ，１９９３）
シークエンス：ＡＢＩ ＰＲＩＳＭ ３１３０ｘｌ Ｇｅｎｅｔｉｃ Ａｎａｌｙｚｅｒ Ｓｙｓｔｅｍ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）
配列決定：ＣｈｒｏｍａｓＰｒｏ １．４（Ｔｅｃｈｎｅｌｙｓｉｕｍ Ｐｔｙ Ｌｔｄ．）
相同性検索及び簡易分子系統解析：アポロン２．０（ソフトウェア、テクノスルガ・ラボ）、アポロンＤＢ−ＦＵ２．０（データベース、テクノスルガ・ラボ）、国際塩基配列データベース（ＧｅｎＢａｎｋ／ＤＤＢＪ／ＥＭＢＬ）
【００２５】
ＪＰＣＣＹ０４０３の２６Ｓ ｒＤＮＡ−Ｄ１／Ｄ２の塩基配列を同定した結果、配列番号１に示す塩基配列であることが判明した。
【００２６】
アポロンＤＢ−ＦＵ２．０に対するＢＬＡＳＴ（Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．，１９９７）相同性検索の結果、ＪＰＣＣＹ０４０３の２６Ｓ ｒＤＮＡ−Ｄ１／Ｄ２塩基配列は、子嚢菌系アナモルフ（無性時代）酵母の一種であるキャンディダ ランセンシス（Ｃａｎｄｉｄａ ｒａｎｃｅｎｓｉｓ）の基準株ＣＢＳ８１７４Ｔ（アクセッション番号：ＡＪ５０８５８０）と１塩基の相違で９９．８％の最も相同率を示した。ＧｅｎＢａｎｋ／ＤＤＢＪ／ＥＭＢＬ等の国際塩基配列データベースに対する相同性検索の結果でも、ＪＰＣＣＹ０４０３の２６Ｓ ｒＤＮＡ−Ｄ１／Ｄ２塩基配列は、キャンディダ ランセンシスＣＢＳ８１７４Ｔ（アクセッション番号：ＡＪ５０８５８０）に対して、９９．８％で最もと高い相同率を示した。一般に酵母の２６Ｓ ｒＤＮＡ−Ｄ１／Ｄ２塩基配列を使用した解析では、基準株との相違塩基数が０〜３塩基であれば、同種又は姉妹種である可能性が高く、相違が１％以上である場合には、別種である可能性が高いとされている（Ｋｕｒｔｚｍａｎ ａｎｄ Ｒｏｂｎｅｔｔ，１９９８）。
【００２７】
図１は、アポロンＤＢ−ＦＵ２．０に対する相同性検索で得られた上位１５塩基配列をもとに作成した系統樹である。図１中、左下の線はスケールバーを、系統枝の分岐に位置する数字はブートストラップ値を、株名の末尾の「Ｔ」はその種の基準株（Ｔｙｐｅ ｓｔｒａｉｎ）であることを、「ＮＴ」はその種の新基準株（Ｎｅｏｔｙｐｅ ｓｔｒａｉｎ）であることを、株名中の「＿」はスペースを、それぞれ示す。
図１に示すように、ＪＰＣＣＹ０４０３は、子嚢菌系酵母の一種であるメチニコウィア（Ｍｅｔｓｃｈｎｉｋｏｗｉａ）属の菌種と、そのアナモルフ（無性時代）酵母であるキャンディダ（Ｃａｎｄｉｄａ）属の菌種で構成されるクラスターに含まれた。さらに、ＪＰＣＣＹ０４０３は、キャンディダ ランセンシスＣＢＳ８１７４Ｔ（アクセッション番号：ＡＪ５０８５８０）と同一の分子系統学的位置を示した。
【００２８】
なお、キャンディダ ランセンシスは、古くからメチニコウィア ロイカウフィイ（Ｍｅｔｓｃｈｎｉｋｏｗｉａ ｒｅｕｋａｕｆｉｉ）のシノニム（同種異名）である可能性が言われてきたが（Ｋｕｒｔｚｍａｎ ａｎｄ Ｆｅｌｌ，１９９８）、キャンディダ ランセンシスＣＢＳ８１７４Ｔ（アクセッション番号：ＡＪ５０８５８０）及びメチニコウィア ロイカウフィイの基準株であるＮＲＲＬ Ｙ−７１１２Ｔ（アクセッション番号：Ｕ４４８２５）の相同率は、比較塩基５１３塩基中、７３塩基の相違で、８６％にとどまる。さらに、両種は、分子系統学的にも明らかに異なる位置を示すことから（Ｎａｋａｓｅ ｅｔ ａｌ．，２００９、図１参照）、シノニム（同種異名）の関係にある可能性は非常に低く、両種はそれぞれが独立した異なる種であると考えられる。
以上より、２６Ｓ ｒＤＮＡ−Ｄ１／Ｄ２の塩基配列の解析結果において、ＪＰＣＣＹ０４０３はキャンディダ ランセンシスに属する菌株であると推定された。
【００２９】
簡易形態観察の結果、ＪＰＣＣＹ０４０３の栄養細胞は、球形から広楕円形、円筒形であり、栄養増殖は多極出芽により、有性生殖器官の形成は認められず、キャンディダ属の一般的な形態学的特徴と一致した（Ｋｕｒｔｚｍａｎ ａｎｄ Ｆｅｌｌ，１９９８）。
生理性状試験の結果、ＪＰＣＣＹ０４０３は、グルコース発酵性を示し、炭素源としてイノシトール、エリスリトール、ラフィノースを資化せず、マルトース、セロビオース、メレジトースを資化し、窒素源として硝酸塩を資化しなかった。また、ＪＰＣＣＹ０４０３は、０．０１％シクロヘキシミド添加培地における生育を示さず、５０％（ｗ／ｖ）Ｄ−グルコース培地及び１０％食塩＋５％グルコース培地での生育を示す等の特徴が認められた。
【００３０】
以上より、「簡易形態観察」、「生理性状試験」及び「２６Ｓ ｒＤＮＡ−Ｄ１／Ｄ２塩基配列解析」の結果から、ＪＰＣＣＹ０４０３は、キャンディダ ランセンシスに属する新菌株であると推定された。
【００３１】
ＪＰＣＣＹ００２４は、２００９年８月２６日付けで、受託番号ＮＩＴＥ Ｐ−８０６として、独立行政法人製品評価技術基盤機構特許微生物寄託センターに受託されている。
【００３２】
＜新規微生物＞
本発明の微生物は、ホウ素除去能を有するキャンディダ（Ｃａｎｄｉｄａ）属に属する微生物である。キャンディダ属に属する微生物でホウ素除去能を有するものは、これまでに知られていない。また、本発明の微生物は酵母に分類されるが、ホウ素除去能を有する酵母もこれまでに知られていない。ＪＰＣＣＹ０４０３は、上記本発明のキャンディダ属に属する微生物に包含される。
ＪＰＣＣＹ０４０３の１８Ｓ ｒＤＮＡは、配列番号２に示す塩基配列を有する。
【００３３】
＜ホウ素除去剤＞
本発明のホウ素除去剤は、上記本発明の微生物を有効成分として含有するものである。
ホウ素除去剤としては、例えば、本発明の微生物を培養して得られた培養物をそのまま使用しても良いし、該培養物をろ過して得られたろ過物（固形分）や、遠心分離して得られた沈降物を使用しても良く、培養物から分離した微生物を使用しても良い。
【００３４】
ホウ素除去剤には、必要に応じて本発明の効果を妨げない範囲で、これまでに例示した成分以外の各種添加剤を添加しても良い。
【００３５】
ホウ素除去剤は、有効成分として複数種類の本発明の微生物を含有していても良い。この場合、これら微生物の組み合わせ及び比率は、目的に応じて任意に選択できる。
【００３６】
培養時における本発明の微生物の細胞濃度は、培養条件にもより一概には言えないが、概ねホウ素を１ｍｇ除去するために、１．０×１０１０〜１．０×１０８とすることが好ましく、１．０×１０９〜５．０×１０９とすることがより好ましい。
【００３７】
＜ホウ素の除去方法＞
本発明のホウ素の除去方法は、ホウ素を含む化合物の共存下で、上記本発明の微生物を培養する工程を有するものである。また、本発明のホウ素の除去方法は、上記本発明のホウ素除去剤を使用するものである。
本発明において、ホウ素を含む化合物とは、ホウ素原子（Ｂ）を含み、酵母が利用可能であるものであれば特に限定されず、無機化合物及び有機化合物のいずれでも良い。好ましいものとしては、ホウ酸（Ｈ３ＢＯ４）が例示できる。また、ホウ素を含む化合物はホウ酸塩等の塩類でも良く、かかる塩類としては、リチウム、ナトリウム、カリウム等のアルカリ金属の塩；マグネシウム、カルシウム等のアルカリ土類金属の塩；アンモニウム塩等が例示できる。
【００３８】
本発明の微生物を培養することで、ホウ素は微生物内に取り込まれ、蓄積されると考えられる。
【００３９】
本発明の微生物は、キャンディダ（Ｃａｎｄｉｄａ）属に属する微生物を培養する公知の方法で培養できる。
前培養時の培地は、固形培地及び液体培地のいずれでも良い。
培養時の温度は、１８〜３０℃であることが好ましく、２３〜２７℃であることがより好ましい。
培地のｐＨは６．８〜７．５であることが好ましく、７．０であることがより好ましい。
培養時間は、培養温度及びホウ素量に応じて適宜調節すれば良い。
培養方法は、静置培養、振とう培養、撹拌培養等、培地の種類に応じて適宜選択すれば良い。そして、通気培養することが好ましい。
【００４０】
ホウ素を除去する際の、本発明の微生物の培養条件は特に限定されない。例えば、先に述べた微生物獲得時の培養条件や前培養条件と同様でも良いし、これらの条件を参考に適宜調整しても良い。また、排水、土壌、汚泥、地下水、貯水池の水等の対象中に含まれるホウ素を除去する場合には、これら対象をそのまま培地とするか、又はこれら対象に本発明の微生物の生育に必要な成分を適宜添加したものを培地とし、それ以外は上記と同様の条件で培養すれば良い。
【００４１】
本発明の微生物の植菌は、前記ホウ素除去剤を添加するか、本発明の微生物の前培養物を添加することで行うのが好ましい。添加量は、前記ホウ素除去剤や前培養物中の本発明の微生物含有量を考慮して決定すれば良い。
【００４２】
ホウ素を除去する際の、本発明の微生物の使用量は、除去を行う環境によって種々異なるが、本発明の効果を妨げない範囲で微生物の密度を高くする方が、ホウ素の除去活性が高くなるので好ましい。
【００４３】
ＪＰＣＣＹ０４０３は、酵母の一種であり、容易に大量培養でき、しかもホウ素除去能が高い。したがって、本発明によれば、ホウ素の除去を大規模且つ低コストで行うことができる。
【実施例】
【００４４】
以下、具体的実施例により、本発明についてさらに詳しく説明する。ただし、本発明は、以下に示す実施例に何ら限定されるものではない。
【００４５】
［実施例１］
＜ＪＰＣＣＹ０４０３を使用したホウ素の除去（１）＞
（酵母の培養）
酵母エキス５ｇ、グルコース２０ｇ、ペプトン１０ｇ及び純水１Ｌを混合して得られた生育用酵母培地１０ｍＬをＬ字型試験管に分注し、ＪＰＣＣＹ０４０３を白金線で前記生育用酵母培地に植菌して、２５℃で２日間前培養した。
次いで、前記と同様の組成の生育用酵母培地２５０ｍＬを１Ｌ三角フラスコに分注し、得られた前培養液５ｍＬを添加して植菌した。そして、２５℃で２日間、１５０ｒｐｍの条件で振盪培養した後、８０００ｒｐｍ、１０分間の条件で遠心分離することにより、菌体を得た。
【００４６】
ホウ素源としてホウ酸（Ｈ３ＢＯ４）を純水に溶解させ、ホウ素（Ｂ）濃度が１００〜１２０ｐｐｍとなるように調整した水溶液を調製し、これをフィルター滅菌した。滅菌した前記水溶液１０ｍＬに、遠心分離で得た前記菌体を添加して、該菌体の濃度が２．０×１０８ｃｅｌｌｓ／ｍＬとなるように調整した後、１３０ｒｐｍで２４時間振とうしながら培養した。
次いで、８０００ｒｐｍ、１０分間の条件で遠心分離することにより、菌体全量を回収し、さらに得られた上清をフィルターでろ過した。そして、得られたろ過液中のホウ素量を、ＪＩＳ Ｋ０１０２−４７．３に則って測定し、菌体により除去されたホウ素量を算出した。その結果、ＪＰＣＣＹ０４０３は、２４時間で前記水溶液中のホウ素を２５質量％除去していた。
【００４７】
（ホウ素除去能の比較）
同様の方法により、ＪＰＣＣＹ０４０３も含めて８０６株の酵母について一株ごとにホウ素除去量を算出した結果、ＪＰＣＣＹ０４０３が、ホウ素除去能が最も高い酵母であることを見出した。
【００４８】
［実施例２］
＜ＪＰＣＣＹ０４０３を使用したホウ素の除去（２）＞
ホウ素（Ｂ）を３５０ｐｐｍ含むフィルター滅菌済みの溶液中に、細胞濃度が２．０×１０８ｃｅｌｌｓ／ｍＬとなるようにＪＰＣＣＹ０４０３を添加し、２５℃で２４時、ＪＰＣＣＹ０４０３を培養した培養液を３検体調製した（実施例２−１〜２−３）。
次いで、３検体のそれぞれについて、ＪＰＣＣＹ０４０３を除去して得られた溶液中のホウ素量を、実施例１と同様の方法で測定し、ホウ素の除去量及び除去率を求めた。結果を表７に示す。
表７から明らかなように、ＪＰＣＣＹ０４０３が安定したホウ素除去能を有することが確認できた。
【００４９】
【表７】
【００５０】
［実施例３〜７］
＜ＪＰＣＣＹ０４０３の細胞濃度を変化させた場合のホウ素の除去（１）＞
溶液中のホウ素濃度を３００ｐｐｍ、溶液中の細胞濃度をそれぞれ２．０×１０８ｃｅｌｌｓ／ｍＬ（実施例３（実施例３−１〜３−３））、４．０×１０８ｃｅｌｌｓ／ｍＬ（実施例４（実施例４−１〜４−３））、６．０×１０８ｃｅｌｌｓ／ｍＬ（実施例５（実施例５−１〜５−３））、８．０×１０８ｃｅｌｌｓ／ｍＬ（実施例６（実施例６−１〜６−３））、１．０×１０９ｃｅｌｌｓ／ｍＬ（実施例７（実施例７−１〜７−３））としたこと以外は、実施例２と同様にホウ素の除去量及び除去率を求めた。結果を表８〜１１に示す。
表８〜１１から明らかなように、細胞濃度の増加に伴い、ホウ素除去率が向上することが確認できた。
【００５１】
【表８】
【００５２】
【表９】
【００５３】
【表１０】
【００５４】
【表１１】
【００５５】
【表１２】
【００５６】
［実施例８〜１０］
＜ＪＰＣＣＹ０４０３の細胞濃度を変化させた場合のホウ素の除去（２）＞
溶液中のホウ素濃度を３１０ｐｐｍ、溶液中の細胞濃度をそれぞれ２．０×１０８ｃｅｌｌｓ／ｍＬ（実施例８（実施例８−１〜８−３））、２．０×１０９ｃｅｌｌｓ／ｍＬ（実施例９（実施例９−１〜９−３））、４．０×１０９ｃｅｌｌｓ／ｍＬ（実施例１０（実施例１０−１〜１０−３））としたこと以外は、実施例２と同様にホウ素の除去量及び除去率を求めた。結果を表１２〜１４に示す。
表１２〜１４から明らかなように、細胞濃度の増加に伴い、ホウ素除去率が向上することが確認できた。
【００５７】
【表１３】
【００５８】
【表１４】
【００５９】
【表１５】
【産業上の利用可能性】
【００６０】
本発明は、排水、土壌、汚泥、地下水、貯水池の水等に含まれるホウ素の除去に利用可能である。
【受託番号】
【００６１】
ＮＩＴＥ Ｐ−８０６
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規微生物、該微生物を含有するホウ素除去剤、及び該微生物又はホウ素除去剤を使用するホウ素の除去方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
ホウ素は、ガラスや半導体の材料に含まれていたり、防腐剤や医薬品の原料に含まれているなど、産業界において利用価値の高い元素である。また、ホウ素は、植物の必須微量元素であることが知られており、植物の成長に欠かせないことから、ホウ素が欠乏している土壌に対しては、肥料としての供給が必要となる。さらに、ホウ素は人間にとっての必須微量元素でもある。
【０００３】
一方、土壌中のホウ素量が過剰になると、植物の成長が阻害されることが知られており、人間が過剰に摂取した場合にも、健康被害が発生することが知られている。このように、ホウ素は、必要とされる量が比較的狭い範囲に限定されることが判ってきており、近年は環境中への排出に対する規制対象となっている。
【０００４】
しかし、上記のようなホウ素の利用価値の高さから、ホウ素を含む化合物は様々な分野の製造現場で使用されており、例えば、工場排水中へのホウ素の混入が懸念されている。また、元来、土壌中のホウ素濃度が高いことで、農業の発達が妨げられている地域もある。そこで、排水や自然環境からのホウ素の除去は、年々、重要な課題となってきている。
【０００５】
これに対して、これまでに金属の除去方法としては、例えば、吸着による除去技術が検討されてきている。しかし、これは重金属の除去に対しては有効であることが多いが、ホウ素の除去に対しては、除去効率が低いために不向きであると言われている。
一方、微生物を利用する金属の除去方法が、これまでに種々検討されてきている。微生物を利用する除去方法としては、除去対象である金属を含む化合物を微生物の体内に取り込ませることで対象金属を除去するバイオミネラリゼーション、微生物の細胞表面に存在する多糖類や脂質等の高分子に、除去対象である金属を含む化合物を吸着させて対象金属を除去するバイオアドソープション等が知られている。このような微生物を利用する方法は、環境負荷も少なく低コストで行うことができる優れた方法であり、今後の発展が期待されている。
このような中、微生物を利用するホウ素の除去方法としては、これまでに、微生物として微細藻類を利用する方法が開示されている（特許文献１参照）。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】微細藻類の機能を用いた排水中からの微量ホウ素除去法、財団法人電力中央研究所研究報告（Ｕ０２０６１）、０２−００８、平成１８年５月
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
しかし、前記微細藻類を利用する方法は、まだ十分な検討がなされているとは言えず、ホウ素除去能を有する微生物に関する報告もほとんど無いのが実情である。そこで、ホウ素除去能を有する新たな微生物の探索が強く望まれている。
本発明は上記事情に鑑みて為されたものであり、ホウ素除去能を有する新たな微生物、及び該微生物を利用するホウ素の除去方法を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
上記課題を解決するため、
請求項１に記載の発明は、ホウ素除去能を有するキャンディダ（Ｃａｎｄｉｄａ）属に属する微生物である。
請求項２に記載の発明は、キャンディダ（Ｃａｎｄｉｄａ）属ＪＰＣＣＹ０４０３株（ＮＩＴＥ Ｐ−８０６）である。
請求項３に記載の発明は、請求項１又は２に記載の微生物を有効成分として含有するホウ素除去剤である。
請求項４に記載の発明は、ホウ素を含む化合物の共存下で、請求項１又は２に記載の微生物を培養する工程を有するホウ素の除去方法である。
請求項５に記載の発明は、請求項３に記載のホウ素除去剤を使用するホウ素の除去方法である。
【発明の効果】
【０００９】
本発明によれば、ホウ素除去能を有する新たな微生物、及び該微生物を利用するホウ素の除去方法を提供できる。そして、環境負荷を与えることなく低コストで、排水や自然環境からホウ素を除去できる。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】ＪＰＣＣＹ０４０３の２６Ｓ ｒＤＮＡ−Ｄ１／Ｄ２塩基配列を使用して得られた分子系統樹を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
以下、本発明について詳しく説明する。
なお、以下において、「キャンディダ（Ｃａｎｄｉｄａ）属ＪＰＣＣＹ０４０３株（ＮＩＴＥ Ｐ−８０６）」のことを「ＪＰＣＣＹ０４０３」と略記することがある。
【００１２】
＜ＪＰＣＣＹ０４０３の獲得＞
ＪＰＣＣＹ０４０３は、以下の手順に従って獲得した。
まず、下記手順で分離培地を作製した。
分離培地：酵母エキス５ｇ、グルコース２０ｇ、ペプトン１０ｇ、人工海水３７ｇ、クロラムフェニコール０．３ｇ、ストレプトマイシン０．１５ｇ、アンピシリン０．１ｇ、粉末寒天１２ｇを純水１Ｌに添加し、１２１℃で１０分間滅菌処理した後、適量を滅菌済み平板に分取して、寒天平板を作製した。
次いで、長崎県五島市岐宿町河務郷字ドンドンフチから採取した土壌を、生理食塩水で１００倍（質量比）に希釈して、これを前記分離培地に塗布し、２５℃でインキュベーションした。植菌後３日目に確認できたコロニーを滅菌済み爪楊枝で釣菌し、新たな酵母培地に植菌し、生育を繰り返すことで単菌化した。
【００１３】
＜ＪＰＣＣＹ０４０３の同定＞
ＪＰＣＣＹ０４０３の同定は、株式会社テクノスルガに委託して実施した。そして取得した検体を使用して、「簡易形態観察」、「生理性状試験」、「２６Ｓ ｒＤＮＡ−Ｄ１／Ｄ２塩基配列の同定」を行った。なお、供試菌体としては、下記条件で培養した菌株を使用した。
［培養条件］
培地：Ｙｅａｓｔ ｅｘｔｒａｃｔ−ｍａｌｔ ａｇａｒ（ＹＭ ａｇａｒ）（Ｋｕｒｔｚｍａｎ ａｎｄ Ｆｅｌｌ，１９９８）
培養温度：温度耐性試験を除き２５℃
培養期間：１週間〜１ヶ月間
その他の培養条件：好気培養
【００１４】
［簡易形態観察］
以下のものを使用して行った。
顕微鏡：光学顕微鏡ＢＸ５１（オリンパス株式会社製）（微分干渉観察）
マウント液；滅菌蒸留水
【００１５】
（１）巨視的観察（コロニー観察）
ＹＭ寒天平板培地上で２５℃の温度条件下、培養４日間でコロニーは表１に示す性状を示した。
【００１６】
【表１】
【００１７】
（２）微視的観察（形態性状観察）
ＹＭ平板培地上で２５℃の温度条件下、培養開始２日目に、栄養細胞は球形から広楕円形であり、増殖は多極出芽によることが確認された。また、偽菌糸の形成が認められた。培養開始から１ヶ月経過した平板で、有性生殖器官の形成は認められなかった。
【００１８】
［生理性状試験］
試験方法は、Ｂａｒｎｅｔ ｅｔ ａｌ．（２０００）及びＫｕｒｔｚｍａｎ ａｎｄ Ｆｅｌｌ（１９９８）に準拠し、培養は温度耐性試験を除き２５℃で行った。結果を表２〜６に示す。なお、表中、「＋」は反応が陽性であることを、「−」は反応が陰性であることを、「Ｗ（ｗｅｅｋ）」は弱い陽性反応であることをそれぞれ示す。また、「Ｓ（ｓｌｏｗ）」は試験開始後に２週間から３週間以上かけて徐々に陽性反応が認められたことを、「Ｌ（ｌａｔｅｎｔ）」は試験開始２週間以降に急速に陽性反応が認められたことをそれぞれ示す。
【００１９】
【表２】
【００２０】
【表３】
【００２１】
【表４】
【００２２】
【表５】
【００２３】
【表６】
【００２４】
［２６Ｓ ｒＤＮＡ−Ｄ１／Ｄ２塩基配列の同定］
ＤＮＡ抽出からサイクルシークエンスまでの各操作は、下記の各プロトコールに基づいて行った。
ＤＮＡ抽出：物理的破壊及びＭａｒｍｕｒ（１９６１）の改変法
ＰＣＲ：ｐｕＲｅＴａｑ Ｒｅａｄｙ−Ｔｏ−Ｇｏ ＰＣＲ ｂｅａｄｓ（Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）
サイクルシークエンス：ＢｉｇＤｙｅ Ｔｅｒｍｉｎａｔｏｒ ｖ３．１ Ｋｉｔ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）
プライマー：ＮＬ１及びＮＬ４（Ｏ’Ｄｏｎｎｅｌｌ，１９９３）
シークエンス：ＡＢＩ ＰＲＩＳＭ ３１３０ｘｌ Ｇｅｎｅｔｉｃ Ａｎａｌｙｚｅｒ Ｓｙｓｔｅｍ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）
配列決定：ＣｈｒｏｍａｓＰｒｏ １．４（Ｔｅｃｈｎｅｌｙｓｉｕｍ Ｐｔｙ Ｌｔｄ．）
相同性検索及び簡易分子系統解析：アポロン２．０（ソフトウェア、テクノスルガ・ラボ）、アポロンＤＢ−ＦＵ２．０（データベース、テクノスルガ・ラボ）、国際塩基配列データベース（ＧｅｎＢａｎｋ／ＤＤＢＪ／ＥＭＢＬ）
【００２５】
ＪＰＣＣＹ０４０３の２６Ｓ ｒＤＮＡ−Ｄ１／Ｄ２の塩基配列を同定した結果、配列番号１に示す塩基配列であることが判明した。
【００２６】
アポロンＤＢ−ＦＵ２．０に対するＢＬＡＳＴ（Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．，１９９７）相同性検索の結果、ＪＰＣＣＹ０４０３の２６Ｓ ｒＤＮＡ−Ｄ１／Ｄ２塩基配列は、子嚢菌系アナモルフ（無性時代）酵母の一種であるキャンディダ ランセンシス（Ｃａｎｄｉｄａ ｒａｎｃｅｎｓｉｓ）の基準株ＣＢＳ８１７４Ｔ（アクセッション番号：ＡＪ５０８５８０）と１塩基の相違で９９．８％の最も相同率を示した。ＧｅｎＢａｎｋ／ＤＤＢＪ／ＥＭＢＬ等の国際塩基配列データベースに対する相同性検索の結果でも、ＪＰＣＣＹ０４０３の２６Ｓ ｒＤＮＡ−Ｄ１／Ｄ２塩基配列は、キャンディダ ランセンシスＣＢＳ８１７４Ｔ（アクセッション番号：ＡＪ５０８５８０）に対して、９９．８％で最もと高い相同率を示した。一般に酵母の２６Ｓ ｒＤＮＡ−Ｄ１／Ｄ２塩基配列を使用した解析では、基準株との相違塩基数が０〜３塩基であれば、同種又は姉妹種である可能性が高く、相違が１％以上である場合には、別種である可能性が高いとされている（Ｋｕｒｔｚｍａｎ ａｎｄ Ｒｏｂｎｅｔｔ，１９９８）。
【００２７】
図１は、アポロンＤＢ−ＦＵ２．０に対する相同性検索で得られた上位１５塩基配列をもとに作成した系統樹である。図１中、左下の線はスケールバーを、系統枝の分岐に位置する数字はブートストラップ値を、株名の末尾の「Ｔ」はその種の基準株（Ｔｙｐｅ ｓｔｒａｉｎ）であることを、「ＮＴ」はその種の新基準株（Ｎｅｏｔｙｐｅ ｓｔｒａｉｎ）であることを、株名中の「＿」はスペースを、それぞれ示す。
図１に示すように、ＪＰＣＣＹ０４０３は、子嚢菌系酵母の一種であるメチニコウィア（Ｍｅｔｓｃｈｎｉｋｏｗｉａ）属の菌種と、そのアナモルフ（無性時代）酵母であるキャンディダ（Ｃａｎｄｉｄａ）属の菌種で構成されるクラスターに含まれた。さらに、ＪＰＣＣＹ０４０３は、キャンディダ ランセンシスＣＢＳ８１７４Ｔ（アクセッション番号：ＡＪ５０８５８０）と同一の分子系統学的位置を示した。
【００２８】
なお、キャンディダ ランセンシスは、古くからメチニコウィア ロイカウフィイ（Ｍｅｔｓｃｈｎｉｋｏｗｉａ ｒｅｕｋａｕｆｉｉ）のシノニム（同種異名）である可能性が言われてきたが（Ｋｕｒｔｚｍａｎ ａｎｄ Ｆｅｌｌ，１９９８）、キャンディダ ランセンシスＣＢＳ８１７４Ｔ（アクセッション番号：ＡＪ５０８５８０）及びメチニコウィア ロイカウフィイの基準株であるＮＲＲＬ Ｙ−７１１２Ｔ（アクセッション番号：Ｕ４４８２５）の相同率は、比較塩基５１３塩基中、７３塩基の相違で、８６％にとどまる。さらに、両種は、分子系統学的にも明らかに異なる位置を示すことから（Ｎａｋａｓｅ ｅｔ ａｌ．，２００９、図１参照）、シノニム（同種異名）の関係にある可能性は非常に低く、両種はそれぞれが独立した異なる種であると考えられる。
以上より、２６Ｓ ｒＤＮＡ−Ｄ１／Ｄ２の塩基配列の解析結果において、ＪＰＣＣＹ０４０３はキャンディダ ランセンシスに属する菌株であると推定された。
【００２９】
簡易形態観察の結果、ＪＰＣＣＹ０４０３の栄養細胞は、球形から広楕円形、円筒形であり、栄養増殖は多極出芽により、有性生殖器官の形成は認められず、キャンディダ属の一般的な形態学的特徴と一致した（Ｋｕｒｔｚｍａｎ ａｎｄ Ｆｅｌｌ，１９９８）。
生理性状試験の結果、ＪＰＣＣＹ０４０３は、グルコース発酵性を示し、炭素源としてイノシトール、エリスリトール、ラフィノースを資化せず、マルトース、セロビオース、メレジトースを資化し、窒素源として硝酸塩を資化しなかった。また、ＪＰＣＣＹ０４０３は、０．０１％シクロヘキシミド添加培地における生育を示さず、５０％（ｗ／ｖ）Ｄ−グルコース培地及び１０％食塩＋５％グルコース培地での生育を示す等の特徴が認められた。
【００３０】
以上より、「簡易形態観察」、「生理性状試験」及び「２６Ｓ ｒＤＮＡ−Ｄ１／Ｄ２塩基配列解析」の結果から、ＪＰＣＣＹ０４０３は、キャンディダ ランセンシスに属する新菌株であると推定された。
【００３１】
ＪＰＣＣＹ００２４は、２００９年８月２６日付けで、受託番号ＮＩＴＥ Ｐ−８０６として、独立行政法人製品評価技術基盤機構特許微生物寄託センターに受託されている。
【００３２】
＜新規微生物＞
本発明の微生物は、ホウ素除去能を有するキャンディダ（Ｃａｎｄｉｄａ）属に属する微生物である。キャンディダ属に属する微生物でホウ素除去能を有するものは、これまでに知られていない。また、本発明の微生物は酵母に分類されるが、ホウ素除去能を有する酵母もこれまでに知られていない。ＪＰＣＣＹ０４０３は、上記本発明のキャンディダ属に属する微生物に包含される。
ＪＰＣＣＹ０４０３の１８Ｓ ｒＤＮＡは、配列番号２に示す塩基配列を有する。
【００３３】
＜ホウ素除去剤＞
本発明のホウ素除去剤は、上記本発明の微生物を有効成分として含有するものである。
ホウ素除去剤としては、例えば、本発明の微生物を培養して得られた培養物をそのまま使用しても良いし、該培養物をろ過して得られたろ過物（固形分）や、遠心分離して得られた沈降物を使用しても良く、培養物から分離した微生物を使用しても良い。
【００３４】
ホウ素除去剤には、必要に応じて本発明の効果を妨げない範囲で、これまでに例示した成分以外の各種添加剤を添加しても良い。
【００３５】
ホウ素除去剤は、有効成分として複数種類の本発明の微生物を含有していても良い。この場合、これら微生物の組み合わせ及び比率は、目的に応じて任意に選択できる。
【００３６】
培養時における本発明の微生物の細胞濃度は、培養条件にもより一概には言えないが、概ねホウ素を１ｍｇ除去するために、１．０×１０１０〜１．０×１０８とすることが好ましく、１．０×１０９〜５．０×１０９とすることがより好ましい。
【００３７】
＜ホウ素の除去方法＞
本発明のホウ素の除去方法は、ホウ素を含む化合物の共存下で、上記本発明の微生物を培養する工程を有するものである。また、本発明のホウ素の除去方法は、上記本発明のホウ素除去剤を使用するものである。
本発明において、ホウ素を含む化合物とは、ホウ素原子（Ｂ）を含み、酵母が利用可能であるものであれば特に限定されず、無機化合物及び有機化合物のいずれでも良い。好ましいものとしては、ホウ酸（Ｈ３ＢＯ４）が例示できる。また、ホウ素を含む化合物はホウ酸塩等の塩類でも良く、かかる塩類としては、リチウム、ナトリウム、カリウム等のアルカリ金属の塩；マグネシウム、カルシウム等のアルカリ土類金属の塩；アンモニウム塩等が例示できる。
【００３８】
本発明の微生物を培養することで、ホウ素は微生物内に取り込まれ、蓄積されると考えられる。
【００３９】
本発明の微生物は、キャンディダ（Ｃａｎｄｉｄａ）属に属する微生物を培養する公知の方法で培養できる。
前培養時の培地は、固形培地及び液体培地のいずれでも良い。
培養時の温度は、１８〜３０℃であることが好ましく、２３〜２７℃であることがより好ましい。
培地のｐＨは６．８〜７．５であることが好ましく、７．０であることがより好ましい。
培養時間は、培養温度及びホウ素量に応じて適宜調節すれば良い。
培養方法は、静置培養、振とう培養、撹拌培養等、培地の種類に応じて適宜選択すれば良い。そして、通気培養することが好ましい。
【００４０】
ホウ素を除去する際の、本発明の微生物の培養条件は特に限定されない。例えば、先に述べた微生物獲得時の培養条件や前培養条件と同様でも良いし、これらの条件を参考に適宜調整しても良い。また、排水、土壌、汚泥、地下水、貯水池の水等の対象中に含まれるホウ素を除去する場合には、これら対象をそのまま培地とするか、又はこれら対象に本発明の微生物の生育に必要な成分を適宜添加したものを培地とし、それ以外は上記と同様の条件で培養すれば良い。
【００４１】
本発明の微生物の植菌は、前記ホウ素除去剤を添加するか、本発明の微生物の前培養物を添加することで行うのが好ましい。添加量は、前記ホウ素除去剤や前培養物中の本発明の微生物含有量を考慮して決定すれば良い。
【００４２】
ホウ素を除去する際の、本発明の微生物の使用量は、除去を行う環境によって種々異なるが、本発明の効果を妨げない範囲で微生物の密度を高くする方が、ホウ素の除去活性が高くなるので好ましい。
【００４３】
ＪＰＣＣＹ０４０３は、酵母の一種であり、容易に大量培養でき、しかもホウ素除去能が高い。したがって、本発明によれば、ホウ素の除去を大規模且つ低コストで行うことができる。
【実施例】
【００４４】
以下、具体的実施例により、本発明についてさらに詳しく説明する。ただし、本発明は、以下に示す実施例に何ら限定されるものではない。
【００４５】
［実施例１］
＜ＪＰＣＣＹ０４０３を使用したホウ素の除去（１）＞
（酵母の培養）
酵母エキス５ｇ、グルコース２０ｇ、ペプトン１０ｇ及び純水１Ｌを混合して得られた生育用酵母培地１０ｍＬをＬ字型試験管に分注し、ＪＰＣＣＹ０４０３を白金線で前記生育用酵母培地に植菌して、２５℃で２日間前培養した。
次いで、前記と同様の組成の生育用酵母培地２５０ｍＬを１Ｌ三角フラスコに分注し、得られた前培養液５ｍＬを添加して植菌した。そして、２５℃で２日間、１５０ｒｐｍの条件で振盪培養した後、８０００ｒｐｍ、１０分間の条件で遠心分離することにより、菌体を得た。
【００４６】
ホウ素源としてホウ酸（Ｈ３ＢＯ４）を純水に溶解させ、ホウ素（Ｂ）濃度が１００〜１２０ｐｐｍとなるように調整した水溶液を調製し、これをフィルター滅菌した。滅菌した前記水溶液１０ｍＬに、遠心分離で得た前記菌体を添加して、該菌体の濃度が２．０×１０８ｃｅｌｌｓ／ｍＬとなるように調整した後、１３０ｒｐｍで２４時間振とうしながら培養した。
次いで、８０００ｒｐｍ、１０分間の条件で遠心分離することにより、菌体全量を回収し、さらに得られた上清をフィルターでろ過した。そして、得られたろ過液中のホウ素量を、ＪＩＳ Ｋ０１０２−４７．３に則って測定し、菌体により除去されたホウ素量を算出した。その結果、ＪＰＣＣＹ０４０３は、２４時間で前記水溶液中のホウ素を２５質量％除去していた。
【００４７】
（ホウ素除去能の比較）
同様の方法により、ＪＰＣＣＹ０４０３も含めて８０６株の酵母について一株ごとにホウ素除去量を算出した結果、ＪＰＣＣＹ０４０３が、ホウ素除去能が最も高い酵母であることを見出した。
【００４８】
［実施例２］
＜ＪＰＣＣＹ０４０３を使用したホウ素の除去（２）＞
ホウ素（Ｂ）を３５０ｐｐｍ含むフィルター滅菌済みの溶液中に、細胞濃度が２．０×１０８ｃｅｌｌｓ／ｍＬとなるようにＪＰＣＣＹ０４０３を添加し、２５℃で２４時、ＪＰＣＣＹ０４０３を培養した培養液を３検体調製した（実施例２−１〜２−３）。
次いで、３検体のそれぞれについて、ＪＰＣＣＹ０４０３を除去して得られた溶液中のホウ素量を、実施例１と同様の方法で測定し、ホウ素の除去量及び除去率を求めた。結果を表７に示す。
表７から明らかなように、ＪＰＣＣＹ０４０３が安定したホウ素除去能を有することが確認できた。
【００４９】
【表７】
【００５０】
［実施例３〜７］
＜ＪＰＣＣＹ０４０３の細胞濃度を変化させた場合のホウ素の除去（１）＞
溶液中のホウ素濃度を３００ｐｐｍ、溶液中の細胞濃度をそれぞれ２．０×１０８ｃｅｌｌｓ／ｍＬ（実施例３（実施例３−１〜３−３））、４．０×１０８ｃｅｌｌｓ／ｍＬ（実施例４（実施例４−１〜４−３））、６．０×１０８ｃｅｌｌｓ／ｍＬ（実施例５（実施例５−１〜５−３））、８．０×１０８ｃｅｌｌｓ／ｍＬ（実施例６（実施例６−１〜６−３））、１．０×１０９ｃｅｌｌｓ／ｍＬ（実施例７（実施例７−１〜７−３））としたこと以外は、実施例２と同様にホウ素の除去量及び除去率を求めた。結果を表８〜１１に示す。
表８〜１１から明らかなように、細胞濃度の増加に伴い、ホウ素除去率が向上することが確認できた。
【００５１】
【表８】
【００５２】
【表９】
【００５３】
【表１０】
【００５４】
【表１１】
【００５５】
【表１２】
【００５６】
［実施例８〜１０］
＜ＪＰＣＣＹ０４０３の細胞濃度を変化させた場合のホウ素の除去（２）＞
溶液中のホウ素濃度を３１０ｐｐｍ、溶液中の細胞濃度をそれぞれ２．０×１０８ｃｅｌｌｓ／ｍＬ（実施例８（実施例８−１〜８−３））、２．０×１０９ｃｅｌｌｓ／ｍＬ（実施例９（実施例９−１〜９−３））、４．０×１０９ｃｅｌｌｓ／ｍＬ（実施例１０（実施例１０−１〜１０−３））としたこと以外は、実施例２と同様にホウ素の除去量及び除去率を求めた。結果を表１２〜１４に示す。
表１２〜１４から明らかなように、細胞濃度の増加に伴い、ホウ素除去率が向上することが確認できた。
【００５７】
【表１３】
【００５８】
【表１４】
【００５９】
【表１５】
【産業上の利用可能性】
【００６０】
本発明は、排水、土壌、汚泥、地下水、貯水池の水等に含まれるホウ素の除去に利用可能である。
【受託番号】
【００６１】
ＮＩＴＥ Ｐ−８０６
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ホウ素除去能を有するキャンディダ（Ｃａｎｄｉｄａ）属に属する微生物。
【請求項２】
キャンディダ（Ｃａｎｄｉｄａ）属ＪＰＣＣＹ０４０３株（ＮＩＴＥ Ｐ−８０６）。
【請求項３】
請求項１又は２に記載の微生物を有効成分として含有するホウ素除去剤。
【請求項４】
ホウ素を含む化合物の共存下で、請求項１又は２に記載の微生物を培養する工程を有するホウ素の除去方法。
【請求項５】
請求項３に記載のホウ素除去剤を使用するホウ素の除去方法。
【請求項１】
ホウ素除去能を有するキャンディダ（Ｃａｎｄｉｄａ）属に属する微生物。
【請求項２】
キャンディダ（Ｃａｎｄｉｄａ）属ＪＰＣＣＹ０４０３株（ＮＩＴＥ Ｐ−８０６）。
【請求項３】
請求項１又は２に記載の微生物を有効成分として含有するホウ素除去剤。
【請求項４】
ホウ素を含む化合物の共存下で、請求項１又は２に記載の微生物を培養する工程を有するホウ素の除去方法。
【請求項５】
請求項３に記載のホウ素除去剤を使用するホウ素の除去方法。
【図１】
【公開番号】特開２０１１−６２１３９（Ｐ２０１１−６２１３９Ａ）
【公開日】平成２３年３月３１日（２０１１．３．３１）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００９−２１５８３５（Ｐ２００９−２１５８３５）
【出願日】平成２１年９月１７日（２００９．９．１７）
【出願人】（０００２１７６８６）電源開発株式会社 (207)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２３年３月３１日（２０１１．３．３１）
【国際特許分類】
【出願日】平成２１年９月１７日（２００９．９．１７）
【出願人】（０００２１７６８６）電源開発株式会社 (207)
【Ｆターム（参考）】
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