核酸の標識および検出の方法
特定の実施形態では、レポーター分子、担体分子または固体支持体のアジド修飾核酸コンジュゲートを形成するための新しい方法が提供される。他の実施形態では、核酸をアジド基で酵素により標識するための方法が提供される。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
核酸コンジュゲートを形成する方法であって、
ａ）ＤＮＡ増幅酵素の存在下で、アジド修飾ヌクレオチドヌクレオチドを少なくとも１種の他のヌクレオチドと接触させることにより、前記アジド修飾ヌクレオチドを核酸ポリマーに組み込み、アジド修飾核酸ポリマーを形成する工程、および
ｂ）前記アジド修飾核酸ポリマーを、活性化もしくは末端アルキンまたはホスフィン部分を含む、レポーター分子、担体分子または固体支持体と接触させて、核酸ポリマー−レポーター分子、担体分子、固体支持体コンジュゲートを形成する工程
を含む、方法。
【請求項２】
核酸コンジュゲートを形成する方法であって、
ａ）ＤＮＡ増幅酵素の存在下で、末端アルキン修飾ヌクレオチドヌクレオチドを少なくとも１種の他のヌクレオチドと接触させることにより、前記末端アルキン修飾ヌクレオチドを核酸ポリマーに組み込み、末端アルキン修飾核酸ポリマーを形成する工程、および
ｂ）前記末端アルキン修飾核酸ポリマーを、アジド部分を含む、レポーター分子、担体分子または固体支持体と接触させて、核酸ポリマー−レポーター分子、担体分子、固体支持体コンジュゲートを形成する工程
を含む、方法。
【請求項３】
核酸コンジュゲートを形成する方法であって、
ａ）ＤＮＡ増幅酵素の存在下で、ホスフィン修飾ヌクレオチドヌクレオチドを少なくとも１種の他のヌクレオチドと接触させることにより、前記ホスフィン修飾ヌクレオチドを核酸ポリマーに組み込み、ホスフィン修飾核酸ポリマーを形成する工程、および
ｂ）前記ホスフィン修飾核酸ポリマーを、アジド部分を含む、レポーター分子、担体分子または固体支持体と接触させて、核酸ポリマー−レポーター分子、担体分子、固体支持体コンジュゲートを形成する工程
を含む、方法。
【請求項４】
アジド、アルキンまたはホスフィン修飾核酸ポリマーを作製する方法であって、
核酸増幅酵素の存在下で、少なくとも１種のアジド、アルキンまたはホスフィン修飾ヌクレオチドをインキュベートして、アジド、アルキンまたはホスフィン修飾核酸ポリマーを形成する工程
を含む、方法。
【請求項５】
前記核酸酵素がＤＮＡポリメラーゼである、請求項４記載の方法。
【請求項６】
前記核酸酵素がＲＮＡポリメラーゼである、請求項４記載の方法。
【請求項７】
前記アジド、アルキンまたはホスフィン修飾核酸ポリマーの融解温度が高められる、請求項４記載の方法。
【請求項８】
前記レポーター分子が、キサンテン、シアニン、クマリン、ボラポリアザインダセンまたはピレン色素である、請求項１記載の方法。
【請求項９】
前記レポーター分子が酵素基質またはハプテンである、請求項１記載の方法。
【請求項１０】
前記担体分子が、アミノ酸、ペプチド、タンパク質、多糖類、ヌクレオチド、ヌクレオシド、オリゴヌクレオチド、核酸、ハプテン、ソラレン、薬物、ホルモン、脂質、脂質集合体、合成ポリマー、ポリマー微粒子、生物細胞またはウイルスである、請求項１記載の方法。
【請求項１１】
前記担体分子が、抗体もしくはその断片、アビジンもしくはストレプトアビジン、ビオチン、血液成分タンパク質、デキストラン、酵素、酵素阻害剤、ホルモン、ＩｇＧ結合タンパク質、蛍光タンパク質、増殖因子、レクチン、リポ多糖、微生物、金属結合タンパク質、金属キレート化部分、非生物微粒子、ペプチド毒素、ホスファチジルセリン−結合タンパク質、構造タンパク質、低分子薬物、またはチラミドを含む、請求項１記載の方法。
【請求項１２】
前記固体支持体が、微小流体チップ、シリコンチップ、顕微鏡スライド、マイクロプレートウェル、シリカゲル、ポリマー膜、粒子、誘導体化プラスチックフィルム、ガラスビーズ、綿、プラスチックビーズ、アルミナゲル、多糖類、ポリ塩化ビニル、ポリプロピレン、ポリエチレン、ナイロン、ラテックスビーズ、電磁ビーズ、常磁性ビーズ、または超常磁性ビーズである、請求項１記載の方法。
【請求項１３】
前記固体支持体が、セファロース、ポリ（アクリレート）、ポリスチレン、ポリ（アクリルアミド）、ポリオール、アガロース、寒天、セルロース、デキストラン、デンプン、ＦＩＣＯＬＬ、ヘパリン、グリコーゲン、アミロペクチン、マンナン、イヌリン、ニトロセルロース、ジアゾセルロースまたはデンプンである、請求項１記載の方法。
【請求項１４】
アジド修飾核酸ポリマーを検出する方法であって、
ａ）末端アルキン部分を含むレポーター分子と、
アジド修飾核酸ポリマーと
を含むアジド−アルキン環化付加反応混合物を形成する工程、
ｂ）前記アジド−アルキン環化付加反応混合物を、十分な時間量の間インキュベートして、核酸ポリマー−レポーター分子コンジュゲートを形成する工程、
ｃ）前記核酸ポリマー−レポーターコンジュゲートを、核酸ポリマー−レポーター−レポーター分子コンジュゲートの大きさおよび／または重量によって分離して、分離された核酸ポリマー−レポーター−レポーター分子コンジュゲートを形成する工程、
ｄ）前記分離された核酸ポリマー−レポーター−レポーター分子コンジュゲートを、適切な波長で照射して、照射された核酸ポリマー−レポーター−レポーター分子コンジュゲートを形成する工程、
ｅ）前記照射された核酸ポリマー−レポーター−レポーター分子コンジュゲートを観察する工程であって、ここで前記核酸ポリマーが検出される工程
を含む、方法。
【請求項１６】
前記工程ａ）が、
ａ．銅イオンと、
ｂ．少なくとも１種の還元剤と、
ｃ．銅キレート剤と
をさらに含む、請求項１４記載の方法。
【請求項１６】
前記レポーター分子が、キサンテン、シアニン、クマリン、ボラポリアザインダセンまたはピレン色素である、請求項１４記載の方法。
【請求項１７】
前記レポーター分子が、酵素基質、蛍光タンパク質またはハプテンである、請求項１４記載の方法。
【請求項１８】
前記銅キレート剤が銅（Ｉ）キレート剤である、請求項１５記載の方法。
【請求項１９】
前記銅キレート剤が、Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラキス（２−ピリジルメチル）エチレンジアミン（ＴＰＥＮ）、ＥＤＴＡ、ネオクプロイン、Ｎ−（２−アセトアミド）イミノジ酢酸（ＡＤＡ）、ピリジン−２，６−ジカルボン酸（ＰＤＡ）、Ｓ−カルボキシメチル−Ｌ−システイン（ＳＣＭＣ）、１，１０フェナントロリン、もしくはその誘導体、トリエンチン、グルタチオン、ヒスタジン（ｈｉｓｔａｄｉｎｅ）、ポリヒスタジン（ｐｏｌｙｈｉｓｔａｄｉｎｅ）またはテトラエチレンポリアミン（ＴＥＰＡ）である、請求項１５記載の方法。
【請求項２０】
前記銅キレート剤が、１，１０フェナントロリン、バソフェナントロリンジスルホン酸（４，７オジフェニル（ｏｄｉｐｈｅｎｙｌ）−１，１０−フェナントロリンジスルホン酸）またはバソキュプロインジスルホン酸（２，９−ジメチル−４，７−ジフェニル−１，１０−フェナントロリンジスルホネート）である、請求項１５記載の方法。
【請求項２１】
前記還元剤が、アスコルベート、トリス（２−カルボキシエチル）ホスフィン（ＴＣＥＰ）、ＴＣＰ（２，４，６−トリクロロフェノール）、ＮＡＤＨ、ＮＡＤＰＨ、チオサルフェート、２−メルカプトエタノール、ジチオトレオトール（ｄｉｔｈｉｏｔｈｒｅｏｔｏｌ）、グルタチオン、システイン、金属銅、キノン、ヒドロキノン、ビタミンＫ１、Ｆｅ２＋、Ｃｏ２＋、または印加電位である、請求項１５記載の方法。
【請求項２２】
前記還元剤がアスコルベートである、請求項１５記載の方法。
【請求項２３】
前記分離する工程が、クロマトグラフィまたは電気泳動を含む、請求項１４記載の方法。
【請求項２４】
前記クロマトグラフィが、ＦＰＬＣ、ＨＰＬＣ、液体クロマトグラフィ（ＬＣ）、サイズ排除クロマトグラフィ、イオン交換クロマトグラフィ、またはアフィニティークロマトグラフィのうちの１つ以上を含む、請求項２３記載の方法。
【請求項２５】
前記電気泳動が、ゲル電気泳動、一次元（１Ｄ）ゲル電気泳動、二次元（２Ｄ）ゲル電気泳動、未変性ゲル電気泳動、変性ゲル電気泳動、等電点電気泳動、またはキャピラリー電気泳動を含む、請求項２３記載の方法。
【請求項２６】
末端アルキン部分を含むレポーター分子、
アジド修飾核酸、
銅イオン、
少なくとも１種の還元剤、および
銅キレート剤
を含む、アジド−アルキン環化付加反応混合物。
【請求項２７】
固定化されたアジド修飾核酸を検出する方法であって、
ａ）前記アジド修飾核酸を、固体または半固体マトリクスに固定化して、固定化されたアジド修飾核酸を形成する工程、
ｂ）前記固定化されたアジド修飾核酸を、アジド反応性基を含有するレポーター分子と接触させて、接触されたアジド修飾核酸を形成する工程、
ｃ）前記接触されたアジド修飾核酸を、十分な量の時間インキュベートして、レポーター分子−核酸コンジュゲートを形成する工程、
ｄ）前記レポーター分子−核酸コンジュゲートを、適切な波長で照射して、照射されたレポーター分子−核酸コンジュゲートを形成する工程、
ｅ）前記照射されたレポーター分子−核酸コンジュゲートを観察する工程であって、それにより前記固定化されたアジド修飾核酸が検出される工程
を含む、方法。
【請求項２８】
固定化されたアルキン修飾核酸を検出する方法であって、
ａ）前記アルキン修飾核酸を、固体または半固体マトリクスに固定化して、固定化されたアルキン修飾核酸を形成する工程、
ｆ）前記固定化されたアルキン修飾核酸を、アジド基を含有するレポーター分子と接触させて、接触されたアルキン修飾核酸を形成する工程、
ｇ）前記接触されたアルキン修飾核酸を、十分な量の時間インキュベートして、レポーター分子−核酸コンジュゲートを形成する工程、
ｈ）前記レポーター分子−核酸コンジュゲートを、適切な波長で照射して、照射されたレポーター分子−核酸コンジュゲートを形成する工程、
ｉ）前記照射されたレポーター分子−核酸コンジュゲートを観察する工程であって、それにより前記固定化されたアルキン修飾核酸が検出される工程
を含む、方法。
【請求項２９】
前記固体または半固体支持体が、スライド、アレイ、アガロースゲル、ポリアクリルアミドゲル、ヒドロゲル、ポリマー粒子またはガラスである、請求項２８記載の方法。
【請求項３０】
アジドまたはアルキン−ｄＵＴＰと、
テロメラーゼ酵素と、
アジドもしくはアルキン反応性レポーター分子、担体分子または固体支持体と
を含む、キット。
【請求項３１】
アジド、アルキンまたはホスフィン部分を含む少なくとも１種のヌクレオチド類似体と、
アジド、アルキンもしくはホスフィン部分を含む、レポーター分子、担体分子または固体支持体と
を含む、核酸ポリマーを標識するためのキット。
【請求項３２】
核酸増幅酵素をさらに含む、請求項３１記載のキット。
【請求項３３】
テロメラーゼ酵素活性を測定する方法であって、
ａ）細胞を、有効量の、アジド基を含むｄＮＴＰヌクレオチドおよびテロメラーゼ酵素と接触させ、前記ｄＮＴＰヌクレオチドが少なくとも１種の核酸ポリマーに組み込まれるようにする工程、
ｂ）前記核酸ポリマーを、アルキンまたはホスフィン部分を含むレポーター分子と接触させ、アジド修飾核酸ポリマーレポーター分子コンジュゲートを形成する工程、
ｃ）前記アジド修飾核酸ポリマーレポーター分子コンジュゲートを、レポーター分子を含まない核酸ポリマーから分離する工程、ならびに
ｄ）前記アジド修飾核酸ポリマーレポーター分子コンジュゲートを照射して、テロメラーゼ活性を決定する工程
を含む、方法。
【請求項３４】
テロメラーゼ酵素活性を測定する方法であって、
ａ）細胞を、有効量の、アルキンまたはホスフィン基を含むｄＮＴＰヌクレオチドおよびテロメラーゼ酵素と接触させ、前記ｄＮＴＰヌクレオチドが少なくとも１種の核酸ポリマーに組み込まれるようにする工程、
ｂ）前記核酸ポリマーを、アジド部分を含むレポーター分子と接触させ、アルキンまたはホスフィン修飾核酸ポリマーレポーター分子コンジュゲートを形成する工程、
ｃ）前記アルキンまたはホスフィン修飾核酸ポリマーレポーター分子コンジュゲートを、レポーター分子を含まない核酸ポリマーから分離する工程、ならびに
ｄ）前記アルキンまたはホスフィン修飾核酸ポリマーレポーター分子コンジュゲートを照射して、テロメラーゼ活性を決定する工程
を含む、方法。
【請求項１】
核酸コンジュゲートを形成する方法であって、
ａ）ＤＮＡ増幅酵素の存在下で、アジド修飾ヌクレオチドヌクレオチドを少なくとも１種の他のヌクレオチドと接触させることにより、前記アジド修飾ヌクレオチドを核酸ポリマーに組み込み、アジド修飾核酸ポリマーを形成する工程、および
ｂ）前記アジド修飾核酸ポリマーを、活性化もしくは末端アルキンまたはホスフィン部分を含む、レポーター分子、担体分子または固体支持体と接触させて、核酸ポリマー−レポーター分子、担体分子、固体支持体コンジュゲートを形成する工程
を含む、方法。
【請求項２】
核酸コンジュゲートを形成する方法であって、
ａ）ＤＮＡ増幅酵素の存在下で、末端アルキン修飾ヌクレオチドヌクレオチドを少なくとも１種の他のヌクレオチドと接触させることにより、前記末端アルキン修飾ヌクレオチドを核酸ポリマーに組み込み、末端アルキン修飾核酸ポリマーを形成する工程、および
ｂ）前記末端アルキン修飾核酸ポリマーを、アジド部分を含む、レポーター分子、担体分子または固体支持体と接触させて、核酸ポリマー−レポーター分子、担体分子、固体支持体コンジュゲートを形成する工程
を含む、方法。
【請求項３】
核酸コンジュゲートを形成する方法であって、
ａ）ＤＮＡ増幅酵素の存在下で、ホスフィン修飾ヌクレオチドヌクレオチドを少なくとも１種の他のヌクレオチドと接触させることにより、前記ホスフィン修飾ヌクレオチドを核酸ポリマーに組み込み、ホスフィン修飾核酸ポリマーを形成する工程、および
ｂ）前記ホスフィン修飾核酸ポリマーを、アジド部分を含む、レポーター分子、担体分子または固体支持体と接触させて、核酸ポリマー−レポーター分子、担体分子、固体支持体コンジュゲートを形成する工程
を含む、方法。
【請求項４】
アジド、アルキンまたはホスフィン修飾核酸ポリマーを作製する方法であって、
核酸増幅酵素の存在下で、少なくとも１種のアジド、アルキンまたはホスフィン修飾ヌクレオチドをインキュベートして、アジド、アルキンまたはホスフィン修飾核酸ポリマーを形成する工程
を含む、方法。
【請求項５】
前記核酸酵素がＤＮＡポリメラーゼである、請求項４記載の方法。
【請求項６】
前記核酸酵素がＲＮＡポリメラーゼである、請求項４記載の方法。
【請求項７】
前記アジド、アルキンまたはホスフィン修飾核酸ポリマーの融解温度が高められる、請求項４記載の方法。
【請求項８】
前記レポーター分子が、キサンテン、シアニン、クマリン、ボラポリアザインダセンまたはピレン色素である、請求項１記載の方法。
【請求項９】
前記レポーター分子が酵素基質またはハプテンである、請求項１記載の方法。
【請求項１０】
前記担体分子が、アミノ酸、ペプチド、タンパク質、多糖類、ヌクレオチド、ヌクレオシド、オリゴヌクレオチド、核酸、ハプテン、ソラレン、薬物、ホルモン、脂質、脂質集合体、合成ポリマー、ポリマー微粒子、生物細胞またはウイルスである、請求項１記載の方法。
【請求項１１】
前記担体分子が、抗体もしくはその断片、アビジンもしくはストレプトアビジン、ビオチン、血液成分タンパク質、デキストラン、酵素、酵素阻害剤、ホルモン、ＩｇＧ結合タンパク質、蛍光タンパク質、増殖因子、レクチン、リポ多糖、微生物、金属結合タンパク質、金属キレート化部分、非生物微粒子、ペプチド毒素、ホスファチジルセリン−結合タンパク質、構造タンパク質、低分子薬物、またはチラミドを含む、請求項１記載の方法。
【請求項１２】
前記固体支持体が、微小流体チップ、シリコンチップ、顕微鏡スライド、マイクロプレートウェル、シリカゲル、ポリマー膜、粒子、誘導体化プラスチックフィルム、ガラスビーズ、綿、プラスチックビーズ、アルミナゲル、多糖類、ポリ塩化ビニル、ポリプロピレン、ポリエチレン、ナイロン、ラテックスビーズ、電磁ビーズ、常磁性ビーズ、または超常磁性ビーズである、請求項１記載の方法。
【請求項１３】
前記固体支持体が、セファロース、ポリ（アクリレート）、ポリスチレン、ポリ（アクリルアミド）、ポリオール、アガロース、寒天、セルロース、デキストラン、デンプン、ＦＩＣＯＬＬ、ヘパリン、グリコーゲン、アミロペクチン、マンナン、イヌリン、ニトロセルロース、ジアゾセルロースまたはデンプンである、請求項１記載の方法。
【請求項１４】
アジド修飾核酸ポリマーを検出する方法であって、
ａ）末端アルキン部分を含むレポーター分子と、
アジド修飾核酸ポリマーと
を含むアジド−アルキン環化付加反応混合物を形成する工程、
ｂ）前記アジド−アルキン環化付加反応混合物を、十分な時間量の間インキュベートして、核酸ポリマー−レポーター分子コンジュゲートを形成する工程、
ｃ）前記核酸ポリマー−レポーターコンジュゲートを、核酸ポリマー−レポーター−レポーター分子コンジュゲートの大きさおよび／または重量によって分離して、分離された核酸ポリマー−レポーター−レポーター分子コンジュゲートを形成する工程、
ｄ）前記分離された核酸ポリマー−レポーター−レポーター分子コンジュゲートを、適切な波長で照射して、照射された核酸ポリマー−レポーター−レポーター分子コンジュゲートを形成する工程、
ｅ）前記照射された核酸ポリマー−レポーター−レポーター分子コンジュゲートを観察する工程であって、ここで前記核酸ポリマーが検出される工程
を含む、方法。
【請求項１６】
前記工程ａ）が、
ａ．銅イオンと、
ｂ．少なくとも１種の還元剤と、
ｃ．銅キレート剤と
をさらに含む、請求項１４記載の方法。
【請求項１６】
前記レポーター分子が、キサンテン、シアニン、クマリン、ボラポリアザインダセンまたはピレン色素である、請求項１４記載の方法。
【請求項１７】
前記レポーター分子が、酵素基質、蛍光タンパク質またはハプテンである、請求項１４記載の方法。
【請求項１８】
前記銅キレート剤が銅（Ｉ）キレート剤である、請求項１５記載の方法。
【請求項１９】
前記銅キレート剤が、Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラキス（２−ピリジルメチル）エチレンジアミン（ＴＰＥＮ）、ＥＤＴＡ、ネオクプロイン、Ｎ−（２−アセトアミド）イミノジ酢酸（ＡＤＡ）、ピリジン−２，６−ジカルボン酸（ＰＤＡ）、Ｓ−カルボキシメチル−Ｌ−システイン（ＳＣＭＣ）、１，１０フェナントロリン、もしくはその誘導体、トリエンチン、グルタチオン、ヒスタジン（ｈｉｓｔａｄｉｎｅ）、ポリヒスタジン（ｐｏｌｙｈｉｓｔａｄｉｎｅ）またはテトラエチレンポリアミン（ＴＥＰＡ）である、請求項１５記載の方法。
【請求項２０】
前記銅キレート剤が、１，１０フェナントロリン、バソフェナントロリンジスルホン酸（４，７オジフェニル（ｏｄｉｐｈｅｎｙｌ）−１，１０−フェナントロリンジスルホン酸）またはバソキュプロインジスルホン酸（２，９−ジメチル−４，７−ジフェニル−１，１０−フェナントロリンジスルホネート）である、請求項１５記載の方法。
【請求項２１】
前記還元剤が、アスコルベート、トリス（２−カルボキシエチル）ホスフィン（ＴＣＥＰ）、ＴＣＰ（２，４，６−トリクロロフェノール）、ＮＡＤＨ、ＮＡＤＰＨ、チオサルフェート、２−メルカプトエタノール、ジチオトレオトール（ｄｉｔｈｉｏｔｈｒｅｏｔｏｌ）、グルタチオン、システイン、金属銅、キノン、ヒドロキノン、ビタミンＫ１、Ｆｅ２＋、Ｃｏ２＋、または印加電位である、請求項１５記載の方法。
【請求項２２】
前記還元剤がアスコルベートである、請求項１５記載の方法。
【請求項２３】
前記分離する工程が、クロマトグラフィまたは電気泳動を含む、請求項１４記載の方法。
【請求項２４】
前記クロマトグラフィが、ＦＰＬＣ、ＨＰＬＣ、液体クロマトグラフィ（ＬＣ）、サイズ排除クロマトグラフィ、イオン交換クロマトグラフィ、またはアフィニティークロマトグラフィのうちの１つ以上を含む、請求項２３記載の方法。
【請求項２５】
前記電気泳動が、ゲル電気泳動、一次元（１Ｄ）ゲル電気泳動、二次元（２Ｄ）ゲル電気泳動、未変性ゲル電気泳動、変性ゲル電気泳動、等電点電気泳動、またはキャピラリー電気泳動を含む、請求項２３記載の方法。
【請求項２６】
末端アルキン部分を含むレポーター分子、
アジド修飾核酸、
銅イオン、
少なくとも１種の還元剤、および
銅キレート剤
を含む、アジド−アルキン環化付加反応混合物。
【請求項２７】
固定化されたアジド修飾核酸を検出する方法であって、
ａ）前記アジド修飾核酸を、固体または半固体マトリクスに固定化して、固定化されたアジド修飾核酸を形成する工程、
ｂ）前記固定化されたアジド修飾核酸を、アジド反応性基を含有するレポーター分子と接触させて、接触されたアジド修飾核酸を形成する工程、
ｃ）前記接触されたアジド修飾核酸を、十分な量の時間インキュベートして、レポーター分子−核酸コンジュゲートを形成する工程、
ｄ）前記レポーター分子−核酸コンジュゲートを、適切な波長で照射して、照射されたレポーター分子−核酸コンジュゲートを形成する工程、
ｅ）前記照射されたレポーター分子−核酸コンジュゲートを観察する工程であって、それにより前記固定化されたアジド修飾核酸が検出される工程
を含む、方法。
【請求項２８】
固定化されたアルキン修飾核酸を検出する方法であって、
ａ）前記アルキン修飾核酸を、固体または半固体マトリクスに固定化して、固定化されたアルキン修飾核酸を形成する工程、
ｆ）前記固定化されたアルキン修飾核酸を、アジド基を含有するレポーター分子と接触させて、接触されたアルキン修飾核酸を形成する工程、
ｇ）前記接触されたアルキン修飾核酸を、十分な量の時間インキュベートして、レポーター分子−核酸コンジュゲートを形成する工程、
ｈ）前記レポーター分子−核酸コンジュゲートを、適切な波長で照射して、照射されたレポーター分子−核酸コンジュゲートを形成する工程、
ｉ）前記照射されたレポーター分子−核酸コンジュゲートを観察する工程であって、それにより前記固定化されたアルキン修飾核酸が検出される工程
を含む、方法。
【請求項２９】
前記固体または半固体支持体が、スライド、アレイ、アガロースゲル、ポリアクリルアミドゲル、ヒドロゲル、ポリマー粒子またはガラスである、請求項２８記載の方法。
【請求項３０】
アジドまたはアルキン−ｄＵＴＰと、
テロメラーゼ酵素と、
アジドもしくはアルキン反応性レポーター分子、担体分子または固体支持体と
を含む、キット。
【請求項３１】
アジド、アルキンまたはホスフィン部分を含む少なくとも１種のヌクレオチド類似体と、
アジド、アルキンもしくはホスフィン部分を含む、レポーター分子、担体分子または固体支持体と
を含む、核酸ポリマーを標識するためのキット。
【請求項３２】
核酸増幅酵素をさらに含む、請求項３１記載のキット。
【請求項３３】
テロメラーゼ酵素活性を測定する方法であって、
ａ）細胞を、有効量の、アジド基を含むｄＮＴＰヌクレオチドおよびテロメラーゼ酵素と接触させ、前記ｄＮＴＰヌクレオチドが少なくとも１種の核酸ポリマーに組み込まれるようにする工程、
ｂ）前記核酸ポリマーを、アルキンまたはホスフィン部分を含むレポーター分子と接触させ、アジド修飾核酸ポリマーレポーター分子コンジュゲートを形成する工程、
ｃ）前記アジド修飾核酸ポリマーレポーター分子コンジュゲートを、レポーター分子を含まない核酸ポリマーから分離する工程、ならびに
ｄ）前記アジド修飾核酸ポリマーレポーター分子コンジュゲートを照射して、テロメラーゼ活性を決定する工程
を含む、方法。
【請求項３４】
テロメラーゼ酵素活性を測定する方法であって、
ａ）細胞を、有効量の、アルキンまたはホスフィン基を含むｄＮＴＰヌクレオチドおよびテロメラーゼ酵素と接触させ、前記ｄＮＴＰヌクレオチドが少なくとも１種の核酸ポリマーに組み込まれるようにする工程、
ｂ）前記核酸ポリマーを、アジド部分を含むレポーター分子と接触させ、アルキンまたはホスフィン修飾核酸ポリマーレポーター分子コンジュゲートを形成する工程、
ｃ）前記アルキンまたはホスフィン修飾核酸ポリマーレポーター分子コンジュゲートを、レポーター分子を含まない核酸ポリマーから分離する工程、ならびに
ｄ）前記アルキンまたはホスフィン修飾核酸ポリマーレポーター分子コンジュゲートを照射して、テロメラーゼ活性を決定する工程
を含む、方法。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【公表番号】特表２０１０−５１７５９４（Ｐ２０１０−５１７５９４Ａ）
【公表日】平成２２年５月２７日（２０１０．５．２７）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００９−５５０１０７（Ｐ２００９−５５０１０７）
【出願日】平成２０年２月１３日（２００８．２．１３）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００８／０５３８７０
【国際公開番号】ＷＯ２００８／１０１０２４
【国際公開日】平成２０年８月２１日（２００８．８．２１）
【出願人】（５０２２２１２８２）ライフ テクノロジーズ コーポレーション (113)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２２年５月２７日（２０１０．５．２７）
【国際特許分類】
【出願日】平成２０年２月１３日（２００８．２．１３）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００８／０５３８７０
【国際公開番号】ＷＯ２００８／１０１０２４
【国際公開日】平成２０年８月２１日（２００８．８．２１）
【出願人】（５０２２２１２８２）ライフ テクノロジーズ コーポレーション (113)
【Ｆターム（参考）】
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