液浸油、液浸油の製造方法、液浸油の保存方法、及び液浸油の保存容器
【課題】蛍光観察などの微弱光観察のために、スライドガラスやカバーガラス、液浸油を含む顕微鏡の光学要素全体の自家蛍光を少なくして、自家蛍光による背景ノイズを減らすことの可能な自家蛍光の少ない液浸油、液浸油の製造方法、さらには、そのような液浸油に備わる自家蛍光の少ない性質を長期に維持することの可能な液浸油の保存方法及び液浸油の保存容器の提供。
【解決手段】液浸油は、屈折率が１．７０以上、且つ低蛍光である。好ましくは、ジヨードメタンなどのヨウ素化合物を主成分とする。好ましくは、硫黄などの高屈折率の固体を溶解又は分散させてなる。液浸油の製造方法は、精製工程を有する。精製工程では、好ましくは、吸着剤、蒸留、又は再結晶させることにより不純物を除去する。液浸油の保存方法は、吸着剤を液浸油に常時接触させる。液浸油の保存容器１は、常時液浸油４に接触する吸着剤３を内包する。
【解決手段】液浸油は、屈折率が１．７０以上、且つ低蛍光である。好ましくは、ジヨードメタンなどのヨウ素化合物を主成分とする。好ましくは、硫黄などの高屈折率の固体を溶解又は分散させてなる。液浸油の製造方法は、精製工程を有する。精製工程では、好ましくは、吸着剤、蒸留、又は再結晶させることにより不純物を除去する。液浸油の保存方法は、吸着剤を液浸油に常時接触させる。液浸油の保存容器１は、常時液浸油４に接触する吸着剤３を内包する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、従来にはない高屈折率と低蛍光特性とを併せ持った液浸油であって、例えば、顕微鏡、蛍光顕微鏡、顕微鏡等と同様の光学系を使用した各種の光学機器による観察又は計測方法に使用される液浸油、その液浸油の製造方法、その液浸油の保存方法、及びその液浸油の保存容器に関する。
【背景技術】
【０００２】
顕微鏡等の光学機器に各種の液浸油が用いられている。液浸油は、光学系において光学要素間、又は光学要素と標本との間の空気等が存在する空間に充填して光学特性を改良するために用いられている物質である。例えば、顕微鏡のようなレンズに近接する標本を観察する光学装置においては、対物レンズと標本と、対物レンズと標本との間に存在する液浸油の屈折率に影響を受ける。このため、対物レンズと標本との間に屈折率が大きな油を液浸油として使用することによって分解能を高めることが行われている。
【０００３】
液浸油を使用した場合には、液浸油を使用しない場合と比べて、実質的に光学収差を小さくするだけではなく、対物レンズの開口数を大きくして、顕微鏡の倍率を高めることができる。
【０００４】
近年、顕微鏡の分野においては、特定の波長の光で照明し、これを励起光とすることによって標本や対象物が発する蛍光を観察する蛍光観察が広く利用されている。蛍光観察によって、生体細胞、ＤＮＡ、ＲＮＡ等の生物学的材料の観察、分析、計測が行われたり、半導体製造工程中の微量な物質の検出、解析を行う分野などにおいて、各種の蛍光色素を利用して分子蛍光測定、蛍光色素の多色化による生体機能の同時解析などが行われており、微弱な蛍光を広い波長帯域で正確に観察又は計測できる技術に関する重要性が増してきている。特に、一分子蛍光観察と呼ばれる非常に微弱な蛍光の観察では、標本からの蛍光が非常に微弱であるため、ノイズ原因となる液浸油などの自家蛍光が観察画像の背景ノイズとして相対的に大きくなり、実質的に観察が不可能となるという問題がある。
【０００５】
また、従来の顕微鏡のように試料を観察、撮像する機能を備えた装置から、試料を計測し、計測結果を定量化する装置や各種の機能を付加した光学装置が開発されており、これらの光学装置では測定時のノイズの影響を受けない正確な定量方法が必要とされる。
【０００６】
また、蛍光観察又は蛍光計測では、微弱な蛍光を正確に測定できる開口数の大きく明るい光学系、例えば、ＮＡ＝１．３以上、好ましくはＮＡ＝１．６以上の開口数を持った光学系が要求されており、そのような開口数をもつ光学系としては、屈折率が１．７以上、好ましくは１．７５〜１．８程度と高い液浸油が必要となってくる。
【０００７】
これらの高屈折率且つ低蛍光の液浸油を必要とする観察法としては、例えば、特開２００５−１８９２３７号公報に記載されているようなアプリケーションで有効である。そのようなアプリケーションでは、光学系を構成するガラスと標本との間の光路にそのガラスの屈折率と同等の屈折率を有する液浸油を満たすことが必要である。
【０００８】
なお、屈折率が１．８を上回る液浸油は、砒素化合物などの毒性のある物質を添加しないと成り立たない。このため、高屈折率で、現実的に使用できる液浸油の屈折率の範囲は、１．７〜１．８程度であると考えられる。
【０００９】
従来、顕微鏡観察に用いられる液浸油としては、例えば、次の特許文献１〜３などに記載のような、液状ポリオレフィンと芳香族化合物とからなるものが知られている。
【特許文献１】特開平１１−１６０６２３号公報
【特許文献２】特開平１１−２１８６８５号公報
【特許文献３】特開平１１−２６９３１７号公報
【００１０】
また、屈折率が１．７５付近の液浸油としては、ジヨードメタンに硫黄等を含有するものが提案されて、一般的に広く用いられており、例えば、Cargille社製 Series Mなどが知られている。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
しかしながら、上記液状ポリオレフィンと芳香族化合物とからなる液浸油は、屈折率が１．５１〜１．５４と小さい値である等の欠点を有しており、液浸油としての役割を十分に果たせないという問題点があった。
また、ジヨードメタン系の液浸油は、ジヨードメタンの揮発、又はジヨードメタンの光による分解によってヨウ素を遊離し、使用する前に保存容器内で劣化し、透過率の低下や自家蛍光の上昇などが起こり、微弱蛍光試料の観察が出来なくなるという問題点を有している。
また、市販の高屈折率な液浸油は、蛍光測定を前提として製造されていないため、上記のような微弱蛍光観察を行うことが実質不可能であるという問題があった。蛍光観察の一つの主流は４８８ｎｍ励起で５３０から５８０ｎｍ付近の緑の蛍光を観察する、いわゆるＢ励起での観察である。つまり、このＢ励起での観察で低蛍光の観察を実現できれば、従来観察が不可能であった一分子蛍光などの微弱蛍光観察が可能となる。
【００１２】
本発明は、上記従来の問題点に鑑みてなされたものであり、蛍光観察を代表とする微弱な光を観察するために、スライドガラスやカバーガラス、液浸油を含む顕微鏡の光学要素全体の自家蛍光を少なくして、自家蛍光による背景ノイズを減らすことの可能な自家蛍光の少ない液浸油、液浸油の製造方法を提供することを目的としている。さらには、そのような液浸油に備わる自家蛍光の少ない性質を長期に維持することの可能な液浸油の保存方法及び液浸油の保存容器を提供することを目的としている。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
上記目的を達成するため、本発明による液浸油は、屈折率が１．７０以上で、且つ、低蛍光であることを特徴としている。
【００１４】
または、本発明による液浸油は、屈折率が１．７８以上で、且つ、低蛍光であることを特徴としている。
【００１５】
また、本発明の液浸油においては、ヨウ素化合物を主成分とするのが好ましい。
【００１６】
また、本発明の液浸油においては、前記ヨウ素化合物がジヨードメタンであるのが好ましい。
【００１７】
また、本発明の液浸油においては、高屈折率の固体を溶解又は分散させてなるのが好ましい。
【００１８】
また、本発明の液浸油においては、前記高屈折率の固体が硫黄であるのが好ましい。
【００１９】
また、本発明による液浸油の製造方法は、上記本発明のいずれかの液浸油の製造方法において、精製工程を有することを特徴としている。
【００２０】
また、本発明の液浸油の製造方法においては、前記精製工程が、吸着剤により不純物を除去する工程であるのが好ましい。
【００２１】
また、本発明の液浸油の製造方法においては、前記精製工程が、蒸留により不純物を除去する工程であるのが好ましい。
【００２２】
また、本発明の液浸油の製造方法においては、前記精製工程が、再結晶させることにより不純物を除去する工程であるのが好ましい。
【００２３】
また、本発明による液浸油の保存方法は、上記本発明のいずれかの液浸油、又は上記本発明のいずれかの製造方法により製造された液浸油の保存方法において、吸着剤を液浸油に常時接触させることを特徴としている。
【００２４】
また、本発明による液浸油の保存方法は、上記本発明のいずれかの液浸油、又は上記本発明のいずれかの製造方法により製造された液浸油の保存方法において、液浸油を保存容器の外部に取り出す都度、吸着剤に接触させることを特徴としている。
【００２５】
また、本発明による液浸油の保存容器は、上記本発明のいずれかの液浸油、又は上記本発明のいずれかの製造方法により製造された液浸油の保存容器において、常時液浸油に接触する吸着剤を内包することを特徴としている。
【００２６】
また、本発明による液浸油の保存容器は、上記本発明のいずれかの液浸油、又は上記本発明のいずれかの製造方法により製造された液浸油の保存容器において、液浸油を取り出す都度該液浸油に接触する吸着剤を内包することを特徴としている。
【００２７】
また、本発明の液浸油の保存容器においては、液浸油を取り出す都度該液浸油に接触する吸着剤を内包する部分が、前記保存容器の本体に対して脱着可能であるのが好ましい。
【発明の効果】
【００２８】
本発明によれば、高屈折率で、低蛍光、すなわち、自家蛍光の発生光量が小さく、光学機器用液浸油に要求される他の諸性質にも適性があり、顕微鏡用液浸油など各種の光学系用の液浸油として有用な液浸油及び液浸油の製造方法が得られる。また、自家蛍光の少ない性質を維持して、自家蛍光による背景ノイズが少ない観察を長い期間に亘って行える液浸油の保存方法及び液浸油の保存容器が得られる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２９】
以下、本発明を実施の形態により詳細に説明する。
本発明の液浸油は、屈折率は１．７０以上、好ましくは１．７８以上でかつ低蛍光であることを特徴とする。より詳しくは、ヨウ素化合物を主成分とし、高屈折率の固体を溶解または分散させてなる液浸油である。ヨウ素化合物としては、例えば、ジヨードメタンであるのが好ましい。
【００３０】
ここで、本発明では、低蛍光を次のように定義する。
上述のような非常に微弱な蛍光観察装置では、シグナルが非常に微弱な為、そのシグナルは、微弱なノイズに簡単に埋もれてしまう。
蛍光光量の値としてのシグナル、又はノイズは、それぞれ時間変動している。ここで、その光量の変動値の平方根に比例して“ゆらぎ”を定義する。標本の観察・計測対象物からの蛍光光量の絶対値が大きい時には、シグナル又はノイズに対する“ゆらぎ”の割合は相対的に低い。一般に、シグナル又はノイズが非常に微弱な場合には、そのシグナルに対するノイズによる“ゆらぎ”の割合は高いものとなってくる。標本の観察・計測対象物からの蛍光光量の絶対値が小さい時には、ノイズの絶対値と“ゆらぎ”、又、シグナルの不要な絶対値と“ゆらぎ”が問題となる。
【００３１】
蛍光顕微鏡観察においてそのノイズのほとんどは、標本の観察対象以外のノイズ、対物レンズはじめ光学素子の自家蛍光のノイズ、カバーグラスの自家蛍光ノイズ、液浸油を用いる対物レンズ、所謂、オイル対物を使う場合にはその液浸油の自家蛍光のノイズの総和によって占められている。
【００３２】
本発明では、標本の観察・計測対象の蛍光以外の蛍光の光量が少ないことを低蛍光というものとする。そして、本発明では、標本の観察・計測対象の蛍光以外の蛍光のうち、液浸油の自家蛍光によるノイズを想定する。
【００３３】
ここで、被観察物のシグナルと液浸油由来のノイズを含む背景ノイズの自家蛍光ノイズの値をＳ/Ｎ比として捉え、次のように定義する。
（Ｓ−ｓ）／（Ｂ＋ｂ） …(1)
ここで、Ｓはシグナルの平均光量、Ｂは液浸油由来のノイズを含む背景ノイズの平均光量、ｓはシグナルの平均光量のゆらぎ、ｂは液浸油由来のノイズを含む背景ノイズの平均光量のゆらぎである。つまり、シグナルをＳ±ｓ、ノイズをＢ±ｂとし、シグナル値の下現値とノイズ値の上限値の比をＳ／Ｎ比として定義した。
【００３４】
検討の結果、落射蛍光による一分子観察など、極めてＳ／Ｎ比が低いアプリケーション、つまり、上記式(1)で、
（Ｓ−ｓ）／（Ｂ＋ｂ）≦２
が成立するアプリケーションに求められる低蛍光のレベルは、
Ｂ’／Ｂ≦０．３
であることを突き止めた。
ここで、Ｂ±ｂ、Ｂ'±ｂ'は、それぞれ、現在、一般的に用いられているCargille社製 Series M液浸油由来のノイズを含む背景ノイズと、本発明の液浸油由来のノイズを含む背景ノイズである。このようにノイズレベルを表現したのは、ノイズレベルの絶対値で表現すると測定器によって絶対値が変わってしまうためである。
【００３５】
また、今後トレンドとなっていく蛍光観察・計測で且つタイムラプスのような低染色濃度標本や微弱な励起光での観察・計測などのアプリケーション、つまり上記式(1)で、
（Ｓ−ｓ）／（Ｂ＋ｂ）≦３
が成立するアプリケーションに求められる低蛍光のレベルは、
Ｂ’／Ｂ≦０．５
であることを突き止めた。
【００３６】
さらに、通常の蛍光観察におけるアプリケーション、つまり、上記式(1)で、
（Ｓ−ｓ）／（Ｂ＋ｂ）≦５
が成立するアプリケーションに求められる低蛍光のレベルは、
Ｂ’／Ｂ≦０．７
であることを突き止めた。
【００３７】
すなわち、（Ｓ−ｓ）/（Ｂ＋ｂ）≦２、もしくは３、もしくは５が成立するそれぞれのアプリケーションの場合において、本願発明以前のCargille社製液浸油を使用し、標本が存在しない場合での蛍光光量の平均値をＢ、本願発明に係る液浸油を使用し、標本が存在しない場合での蛍光光量の平均値をＢ'としたときに、Ｂ’／Ｂがそれぞれ０．３、０．５、０.７以下のノイズレベルであることが必要であり、かつ、本願発明に係る液浸油によって初めてこのノイズレベルが達成できたことが確認された。
【００３８】
この液浸油は精製工程を有する製造方法で得ることができる。精製工程は、主成分および高屈折率固体に対してそれぞれ独立して実施することができ、又は、主成分に高屈折率固体を溶解または分散させた後に実施することもできる。
精製工程としては、例えば、吸着剤による不純物除去法、蒸留による不純物除去法、再結晶による不純物除去法、昇華による不純物除去法、などを用いることができ、これらの不純物除去法を２種類以上組み合わせることもできる。
【００３９】
吸着剤による不純物除去の場合、吸着剤としては、例えば、シリカゲル、活性炭、アルミナ、粘土、などを用いることができる。好ましくはシリカゲル、活性炭を用いるのがよい。
吸着剤の使用形態としては、例えば、吸着剤を筒状に備え、その内側を不純物を含んだ物質を流通させる、又は、不純物を含んだ物質に吸着剤を懸濁し、別途、ろ過手段を用いてろ過する、又は、粒子サイズの差などにより液体が自由に通り抜けかつ吸着剤が漏れ出さないように構成された容器に吸着剤を入れて不純物を含んだ物質に浸漬する、などの形態を用いることができる。
吸着剤の使用量は、不純物を含んだ物質１０ｍｌに対し、０．０１ｇ〜５ｇが好ましく、０．０５ｇ〜３ｇがより好ましい。０．０１ｇより少ないと不純物除去効果が小さく、５ｇより多いと回収率が低下する、あるいは、溶解させた物質が析出することがある。
【００４０】
蒸溜による不純物除去の場合、蒸溜は常圧でも減圧でも実施することができる。なお、蒸溜中の分解を抑えるために、窒素、アルゴンに代表される不活性ガス雰囲気で実施するのが好ましい。
【００４１】
再結晶による不純物除去の場合、不純物を含んだ物資との反応性が無ければいずれの溶媒も用いることができるが、特にトルエン酢酸エチルを用いるのが好ましい。
【００４２】
本発明の液浸油を精製する実施形態としては、吸着剤もしくは蒸溜により不純物を除去したジヨードメタンに、再結晶により不純物を除去した硫黄を溶解させる形態をとるのが好ましい。このようにすれば、屈折率の制御が容易になり、また、硫黄の析出を防ぐことができる。
【００４３】
本発明の保存方法は、上述した本発明の液浸油を保存する方法であり、吸着剤を常時液浸油に接触させることを特徴とする。また、本発明の保存容器は、上述した本発明の液浸油を保存する容器であり、常時液浸油に接触する吸着剤を内包することを特徴とする。
吸着剤としては、上述のように、シリカゲル、活性炭、アルミナ、粘土、などを用いることができる。好ましくはシリカゲル、活性炭を用いるのがよい。
吸着剤を内包する形態としては、液浸油を使用する際に吸着剤が混入しない形態であれば特に限定されないが、例えば、図１に示すように、液浸油が自由に通り抜け、かつ吸着剤３が漏れ出さないメッシュの不織物の袋の中に内包して、保存容器本体１の内部に備えた形態が好ましい。図１中、２はノズル部である。
【００４４】
また、本発明の他の保存方法は、上述した本発明の液浸油を保存する方法であり、液浸油を保存容器の外部に取り出す都度、吸着剤に接触させることを特徴とする。また、本発明の他の保存容器は、上述した本発明の液浸油を保存する容器であり、液浸油を取り出す都度接触する吸着剤を内包することを特徴とする。
吸着剤としては、上述のように、シリカゲル、活性炭、アルミナ、粘土、などを用いることができる。好ましくはシリカゲル、活性炭を用いるのがよい。
吸着剤を内包する形態としては、液浸油を使用する際に吸着剤が混入しない形態であれば特に限定されないが、例えば、図２に示すように、液浸油容器のノズル部２に吸着剤３を内包させ液浸油４を取り出す都度、液浸油４が吸着剤３と接触する形態が好ましい。より好ましくは、吸着剤３を内包したノズル部２を保存容器本体１に対して脱着式にして、このノズル部２を使用の都度取り替えることにより、液浸油４が常に新しい吸着剤３と接触する形態がよい。
【００４５】
本発明の液浸油の保存容器によれば、例えば、液浸油に含まれるジヨードメタンの揮発や光分解によってヨウ素を遊離しても、吸着剤でその遊離したヨウ素を吸着できる。このため、使用する液浸油の経時劣化を抑えることができる。
【００４６】
以下、本発明を実施例によりさらに具体的に説明する。なお、本発明は以下の実施例に限定されるものではない。
【００４７】
実施例１
実施例１の液浸油は、次の精製工程を経て製造したものである。
市販のジヨードメタン（Cargille社製 Series M 1.7800±.0005ロットナンバー 0805）を窒素雰囲気下で常圧蒸溜した（bp.180-183℃）。また、市販の硫黄１０ｇをトルエン１００ｍｌに８０℃に加熱して溶解し、室温に冷却して得られた固体を濾集して再結晶した。この再結晶した硫黄２ｇを粉砕して、上記の常圧蒸溜したジヨードメタン１０ｍｌに懸濁して室温で１７時間攪拌し、攪拌後濾過した。
【００４８】
実施例２
実施例２の液浸油は、次の精製工程を経て製造したものである。
市販のジヨードメタン２０ｍｌに市販の硫黄４ｇ粉砕したものを懸濁して室温で１７時間攪拌し、攪拌後濾過した。この濾液１０ｍｌをシリカゲル（ナカライテスク製シリカゲル60、球状、中性）２ｇ（見かけ体積４ｍｌ）を詰めたシリカゲルカラムクロマトグラフィを通し精製した。
【００４９】
実施例３
実施例３の液浸油は、次の精製工程を経て製造したものである。
市販品の屈折率が１．７８のジヨードメタンと硫黄とを主成分とする液浸油１０ｍｌを、シリカゲル（ナカライテスク製シリカゲル60、球状、中性）２ｇ（見かけ体積４ｍｌ）を詰めたシリカゲルカラムクロマトグラフィを通し精製した。
【００５０】
実施例４
実施例４の液浸油は、次の精製工程を経て製造したものである。
市販のジヨードメタン２０ｍｌに市販の硫黄４ｇ粉砕したものを懸濁して室温で１７時間攪拌し、攪拌後濾過した。この濾液１０ｍｌに活性炭（ナカライテスク製）１ｇを懸濁して室温で１７時間攪拌し、攪拌後濾過した。
【００５１】
実施例５
実施例５の液浸油は、次の精製工程を経て製造したものである。
市販品の屈折率が１．７８のジヨードメタンと硫黄とを主成分とする液浸油１０ｍｌに活性炭（ナカライテスク製）１ｇを懸濁して室温で１７時間攪拌し、攪拌後濾過した。
【００５２】
実施例６
実施例６の液浸油は、次の精製工程を経て製造したものである。
市販のジヨードメタンを窒素雰囲気下で常圧蒸溜した（bp.180-183℃）。蒸溜したジヨードメタン市販のジヨードメタン１０ｍｌに市販の硫黄２ｇ粉砕して懸濁して室温で１７時間攪拌し、攪拌後濾過した。
【００５３】
実施例７
実施例７の液浸油は、次の精製工程を経て製造したものである。
市販の硫黄１０ｇをトルエン１００ｍｌに８０℃に加熱して溶解し、室温に冷却して得られた固体を濾集して再結晶した。再結晶した硫黄２ｇを粉砕して市販のジヨードメタン１０ｍｌに懸濁して室温で１７時間攪拌し、攪拌後濾過した。
【００５４】
実施例８
実施例８の液浸油は、次の保存容器に保存しておいたものである。
実施例１の製造方法で製造した液浸油２０ｍｌを、図１に示す形態と基本構成がほぼ同様の、シリカゲル０．４ｇ（見かけ体積８ｍｌ）を内包した不織布袋が保存容器本体１に入った褐色瓶の中で室温で６ヶ月放置した。
【００５５】
実施例９
実施例９の液浸油は、次の保存容器に保存しておいたものである。
実施例１の製造方法で製造した液浸油２０ｍｌを、図２に示す形態と基本構成がほぼ同様の、吸着剤３としてシリカゲル０．５ｇ（見かけ体積４ｍｌ）を内包した脱着可能なノズル部２が保存容器本体１に装着された褐色瓶の中に入れ、液浸油とシリカゲルとは非接触状態にして室温で６ヶ月放置した。その後ノズル部２を通過させて１ｍｌを取り出した。
【００５６】
実施例１０
実施例１０の液浸油は、次の保存容器に保存しておいたものである。
実施例１の製造方法で製造した液浸油２０ｍｌを、図２に示す形態と基本構成がほぼ同様の、吸着剤３としてシリカゲル０．５ｇ（見かけ体積４ｍｌ）を内包した脱着可能なノズル部２が保存容器本体１に装着された褐色瓶の中に入れた。次いで、ノズル部２を通過させて１５ｍｌを取り出し、ノズル部２を新しいシリカゲルを内包したノズル部２に取り替えた直後に、ノズル部２を通過させて１ｍｌを取り出した。
【００５７】
比較例１
比較例１の液浸油は、屈折率が１．７８のジヨードメタンと硫黄を主成分とする、市販品の液浸油である。
【００５８】
比較例２
比較例２の液浸油は、市販のジヨードメタン１０ｍｌに、市販の硫黄２ｇを粉砕したものを懸濁して、室温で１７時間攪拌し、攪拌後濾過したものである。
【００５９】
比較例３
比較例３の液浸油は、実施例１製造方法で製造した液浸油を、シリカゲル等の吸着剤が内包されていない褐色瓶の中に入れて、室温で６ヶ月放置したものである。
【００６０】
比較例４
比較例４の液浸油は、実施例１の製造方法で製造した液浸油２０ｍｌを、図２に示す形態と基本構成がほぼ同様の、シリカゲル０．５ｇ（見かけ体積４ｍｌ）を内包した脱着可能なノズル部２を装着した褐色瓶に入れて、室温で６ヶ月放置し、その後ノズル部２を通過させて１５ｍｌを取り出した後、ノズル部２を取り替えずにそのノズル部２を通過させて１ｍｌを取り出したものである。
【００６１】
実施例１〜７における製造直後の１ｍｌの液浸油、実施例８における褐色瓶から取り出した１ｍｌの液浸油、実施例９，１０において褐色瓶から取り出した１ｍｌの液浸油、比較例１，２の１ｍｌの液浸油、比較例３の褐色瓶から取り出した１ｍｌの液浸油、及び比較例４の保存容器から取り出した１ｍｌの液浸油に対し、それぞれ４８８ｎｍの励起光を照射し、そのときに発する自家蛍光を測定し、比較例１の液浸油の自家蛍光を１としたときの自家蛍光の比率を求めた。その自家蛍光の比率を次の表１に示す。
なお、分光蛍光光度計は、株式会社日立製作所（登録商標）製の分光蛍光光度計F4500を用いた。そして、上記各実施例及び各比較例のそれぞれ１ｍｌの液浸油を、測定毎に分光蛍光光度計のセルに入れて４８８ｎｍ励起で測定し、比較例１の液浸油を測定したときの自家蛍光を基準として比率を求めた。なお、液浸油の自家蛍光の測定に際し、分光蛍光光度計のセルなどには自家蛍光を含んでいるが、それらはオフセットとしてキャンセルして測定した。
表１
【００６２】
表１に示したように、上記各実施例の液浸油は、比較例の液浸油とは異なり、４８８ｎｍ励起での自家蛍光が、極めて小さい。このため、上記各実施例の液浸油によれば、従来、観察が困難又は不可能であった、例えば、一分子蛍光などの微弱蛍光観察が可能となる。
また、上記実施例８〜実施例１０の液浸油の保存容器によれば、比較例３，４の液浸油の保存容器と比べて、液浸油の経時劣化を抑えて、上記実施例１の液浸油と同様に４８８ｎｍ励起での自家蛍光を、極めて小さく抑えることができる。
【産業上の利用可能性】
【００６３】
本発明の液浸油、液浸油の製造方法、液浸油の保存方法、及び液浸油の保存容器は、例えば、一分子蛍光観察（又は計測）など微弱な蛍光観察（又は計測）をする生物学、医学の分野において有用である。
【図面の簡単な説明】
【００６４】
【図１】本発明の一実施形態にかかる液浸油の保存容器の概略構成を示す概念図である。
【図２】本発明の他の実施形態にかかる液浸油の保存容器の概略構成を示す概念図である。
【符号の説明】
【００６５】
１ 保存容器本体
２ ノズル部
３ 不純物除去物質（吸着物質）
４ 液浸油
【技術分野】
【０００１】
本発明は、従来にはない高屈折率と低蛍光特性とを併せ持った液浸油であって、例えば、顕微鏡、蛍光顕微鏡、顕微鏡等と同様の光学系を使用した各種の光学機器による観察又は計測方法に使用される液浸油、その液浸油の製造方法、その液浸油の保存方法、及びその液浸油の保存容器に関する。
【背景技術】
【０００２】
顕微鏡等の光学機器に各種の液浸油が用いられている。液浸油は、光学系において光学要素間、又は光学要素と標本との間の空気等が存在する空間に充填して光学特性を改良するために用いられている物質である。例えば、顕微鏡のようなレンズに近接する標本を観察する光学装置においては、対物レンズと標本と、対物レンズと標本との間に存在する液浸油の屈折率に影響を受ける。このため、対物レンズと標本との間に屈折率が大きな油を液浸油として使用することによって分解能を高めることが行われている。
【０００３】
液浸油を使用した場合には、液浸油を使用しない場合と比べて、実質的に光学収差を小さくするだけではなく、対物レンズの開口数を大きくして、顕微鏡の倍率を高めることができる。
【０００４】
近年、顕微鏡の分野においては、特定の波長の光で照明し、これを励起光とすることによって標本や対象物が発する蛍光を観察する蛍光観察が広く利用されている。蛍光観察によって、生体細胞、ＤＮＡ、ＲＮＡ等の生物学的材料の観察、分析、計測が行われたり、半導体製造工程中の微量な物質の検出、解析を行う分野などにおいて、各種の蛍光色素を利用して分子蛍光測定、蛍光色素の多色化による生体機能の同時解析などが行われており、微弱な蛍光を広い波長帯域で正確に観察又は計測できる技術に関する重要性が増してきている。特に、一分子蛍光観察と呼ばれる非常に微弱な蛍光の観察では、標本からの蛍光が非常に微弱であるため、ノイズ原因となる液浸油などの自家蛍光が観察画像の背景ノイズとして相対的に大きくなり、実質的に観察が不可能となるという問題がある。
【０００５】
また、従来の顕微鏡のように試料を観察、撮像する機能を備えた装置から、試料を計測し、計測結果を定量化する装置や各種の機能を付加した光学装置が開発されており、これらの光学装置では測定時のノイズの影響を受けない正確な定量方法が必要とされる。
【０００６】
また、蛍光観察又は蛍光計測では、微弱な蛍光を正確に測定できる開口数の大きく明るい光学系、例えば、ＮＡ＝１．３以上、好ましくはＮＡ＝１．６以上の開口数を持った光学系が要求されており、そのような開口数をもつ光学系としては、屈折率が１．７以上、好ましくは１．７５〜１．８程度と高い液浸油が必要となってくる。
【０００７】
これらの高屈折率且つ低蛍光の液浸油を必要とする観察法としては、例えば、特開２００５−１８９２３７号公報に記載されているようなアプリケーションで有効である。そのようなアプリケーションでは、光学系を構成するガラスと標本との間の光路にそのガラスの屈折率と同等の屈折率を有する液浸油を満たすことが必要である。
【０００８】
なお、屈折率が１．８を上回る液浸油は、砒素化合物などの毒性のある物質を添加しないと成り立たない。このため、高屈折率で、現実的に使用できる液浸油の屈折率の範囲は、１．７〜１．８程度であると考えられる。
【０００９】
従来、顕微鏡観察に用いられる液浸油としては、例えば、次の特許文献１〜３などに記載のような、液状ポリオレフィンと芳香族化合物とからなるものが知られている。
【特許文献１】特開平１１−１６０６２３号公報
【特許文献２】特開平１１−２１８６８５号公報
【特許文献３】特開平１１−２６９３１７号公報
【００１０】
また、屈折率が１．７５付近の液浸油としては、ジヨードメタンに硫黄等を含有するものが提案されて、一般的に広く用いられており、例えば、Cargille社製 Series Mなどが知られている。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
しかしながら、上記液状ポリオレフィンと芳香族化合物とからなる液浸油は、屈折率が１．５１〜１．５４と小さい値である等の欠点を有しており、液浸油としての役割を十分に果たせないという問題点があった。
また、ジヨードメタン系の液浸油は、ジヨードメタンの揮発、又はジヨードメタンの光による分解によってヨウ素を遊離し、使用する前に保存容器内で劣化し、透過率の低下や自家蛍光の上昇などが起こり、微弱蛍光試料の観察が出来なくなるという問題点を有している。
また、市販の高屈折率な液浸油は、蛍光測定を前提として製造されていないため、上記のような微弱蛍光観察を行うことが実質不可能であるという問題があった。蛍光観察の一つの主流は４８８ｎｍ励起で５３０から５８０ｎｍ付近の緑の蛍光を観察する、いわゆるＢ励起での観察である。つまり、このＢ励起での観察で低蛍光の観察を実現できれば、従来観察が不可能であった一分子蛍光などの微弱蛍光観察が可能となる。
【００１２】
本発明は、上記従来の問題点に鑑みてなされたものであり、蛍光観察を代表とする微弱な光を観察するために、スライドガラスやカバーガラス、液浸油を含む顕微鏡の光学要素全体の自家蛍光を少なくして、自家蛍光による背景ノイズを減らすことの可能な自家蛍光の少ない液浸油、液浸油の製造方法を提供することを目的としている。さらには、そのような液浸油に備わる自家蛍光の少ない性質を長期に維持することの可能な液浸油の保存方法及び液浸油の保存容器を提供することを目的としている。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
上記目的を達成するため、本発明による液浸油は、屈折率が１．７０以上で、且つ、低蛍光であることを特徴としている。
【００１４】
または、本発明による液浸油は、屈折率が１．７８以上で、且つ、低蛍光であることを特徴としている。
【００１５】
また、本発明の液浸油においては、ヨウ素化合物を主成分とするのが好ましい。
【００１６】
また、本発明の液浸油においては、前記ヨウ素化合物がジヨードメタンであるのが好ましい。
【００１７】
また、本発明の液浸油においては、高屈折率の固体を溶解又は分散させてなるのが好ましい。
【００１８】
また、本発明の液浸油においては、前記高屈折率の固体が硫黄であるのが好ましい。
【００１９】
また、本発明による液浸油の製造方法は、上記本発明のいずれかの液浸油の製造方法において、精製工程を有することを特徴としている。
【００２０】
また、本発明の液浸油の製造方法においては、前記精製工程が、吸着剤により不純物を除去する工程であるのが好ましい。
【００２１】
また、本発明の液浸油の製造方法においては、前記精製工程が、蒸留により不純物を除去する工程であるのが好ましい。
【００２２】
また、本発明の液浸油の製造方法においては、前記精製工程が、再結晶させることにより不純物を除去する工程であるのが好ましい。
【００２３】
また、本発明による液浸油の保存方法は、上記本発明のいずれかの液浸油、又は上記本発明のいずれかの製造方法により製造された液浸油の保存方法において、吸着剤を液浸油に常時接触させることを特徴としている。
【００２４】
また、本発明による液浸油の保存方法は、上記本発明のいずれかの液浸油、又は上記本発明のいずれかの製造方法により製造された液浸油の保存方法において、液浸油を保存容器の外部に取り出す都度、吸着剤に接触させることを特徴としている。
【００２５】
また、本発明による液浸油の保存容器は、上記本発明のいずれかの液浸油、又は上記本発明のいずれかの製造方法により製造された液浸油の保存容器において、常時液浸油に接触する吸着剤を内包することを特徴としている。
【００２６】
また、本発明による液浸油の保存容器は、上記本発明のいずれかの液浸油、又は上記本発明のいずれかの製造方法により製造された液浸油の保存容器において、液浸油を取り出す都度該液浸油に接触する吸着剤を内包することを特徴としている。
【００２７】
また、本発明の液浸油の保存容器においては、液浸油を取り出す都度該液浸油に接触する吸着剤を内包する部分が、前記保存容器の本体に対して脱着可能であるのが好ましい。
【発明の効果】
【００２８】
本発明によれば、高屈折率で、低蛍光、すなわち、自家蛍光の発生光量が小さく、光学機器用液浸油に要求される他の諸性質にも適性があり、顕微鏡用液浸油など各種の光学系用の液浸油として有用な液浸油及び液浸油の製造方法が得られる。また、自家蛍光の少ない性質を維持して、自家蛍光による背景ノイズが少ない観察を長い期間に亘って行える液浸油の保存方法及び液浸油の保存容器が得られる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２９】
以下、本発明を実施の形態により詳細に説明する。
本発明の液浸油は、屈折率は１．７０以上、好ましくは１．７８以上でかつ低蛍光であることを特徴とする。より詳しくは、ヨウ素化合物を主成分とし、高屈折率の固体を溶解または分散させてなる液浸油である。ヨウ素化合物としては、例えば、ジヨードメタンであるのが好ましい。
【００３０】
ここで、本発明では、低蛍光を次のように定義する。
上述のような非常に微弱な蛍光観察装置では、シグナルが非常に微弱な為、そのシグナルは、微弱なノイズに簡単に埋もれてしまう。
蛍光光量の値としてのシグナル、又はノイズは、それぞれ時間変動している。ここで、その光量の変動値の平方根に比例して“ゆらぎ”を定義する。標本の観察・計測対象物からの蛍光光量の絶対値が大きい時には、シグナル又はノイズに対する“ゆらぎ”の割合は相対的に低い。一般に、シグナル又はノイズが非常に微弱な場合には、そのシグナルに対するノイズによる“ゆらぎ”の割合は高いものとなってくる。標本の観察・計測対象物からの蛍光光量の絶対値が小さい時には、ノイズの絶対値と“ゆらぎ”、又、シグナルの不要な絶対値と“ゆらぎ”が問題となる。
【００３１】
蛍光顕微鏡観察においてそのノイズのほとんどは、標本の観察対象以外のノイズ、対物レンズはじめ光学素子の自家蛍光のノイズ、カバーグラスの自家蛍光ノイズ、液浸油を用いる対物レンズ、所謂、オイル対物を使う場合にはその液浸油の自家蛍光のノイズの総和によって占められている。
【００３２】
本発明では、標本の観察・計測対象の蛍光以外の蛍光の光量が少ないことを低蛍光というものとする。そして、本発明では、標本の観察・計測対象の蛍光以外の蛍光のうち、液浸油の自家蛍光によるノイズを想定する。
【００３３】
ここで、被観察物のシグナルと液浸油由来のノイズを含む背景ノイズの自家蛍光ノイズの値をＳ/Ｎ比として捉え、次のように定義する。
（Ｓ−ｓ）／（Ｂ＋ｂ） …(1)
ここで、Ｓはシグナルの平均光量、Ｂは液浸油由来のノイズを含む背景ノイズの平均光量、ｓはシグナルの平均光量のゆらぎ、ｂは液浸油由来のノイズを含む背景ノイズの平均光量のゆらぎである。つまり、シグナルをＳ±ｓ、ノイズをＢ±ｂとし、シグナル値の下現値とノイズ値の上限値の比をＳ／Ｎ比として定義した。
【００３４】
検討の結果、落射蛍光による一分子観察など、極めてＳ／Ｎ比が低いアプリケーション、つまり、上記式(1)で、
（Ｓ−ｓ）／（Ｂ＋ｂ）≦２
が成立するアプリケーションに求められる低蛍光のレベルは、
Ｂ’／Ｂ≦０．３
であることを突き止めた。
ここで、Ｂ±ｂ、Ｂ'±ｂ'は、それぞれ、現在、一般的に用いられているCargille社製 Series M液浸油由来のノイズを含む背景ノイズと、本発明の液浸油由来のノイズを含む背景ノイズである。このようにノイズレベルを表現したのは、ノイズレベルの絶対値で表現すると測定器によって絶対値が変わってしまうためである。
【００３５】
また、今後トレンドとなっていく蛍光観察・計測で且つタイムラプスのような低染色濃度標本や微弱な励起光での観察・計測などのアプリケーション、つまり上記式(1)で、
（Ｓ−ｓ）／（Ｂ＋ｂ）≦３
が成立するアプリケーションに求められる低蛍光のレベルは、
Ｂ’／Ｂ≦０．５
であることを突き止めた。
【００３６】
さらに、通常の蛍光観察におけるアプリケーション、つまり、上記式(1)で、
（Ｓ−ｓ）／（Ｂ＋ｂ）≦５
が成立するアプリケーションに求められる低蛍光のレベルは、
Ｂ’／Ｂ≦０．７
であることを突き止めた。
【００３７】
すなわち、（Ｓ−ｓ）/（Ｂ＋ｂ）≦２、もしくは３、もしくは５が成立するそれぞれのアプリケーションの場合において、本願発明以前のCargille社製液浸油を使用し、標本が存在しない場合での蛍光光量の平均値をＢ、本願発明に係る液浸油を使用し、標本が存在しない場合での蛍光光量の平均値をＢ'としたときに、Ｂ’／Ｂがそれぞれ０．３、０．５、０.７以下のノイズレベルであることが必要であり、かつ、本願発明に係る液浸油によって初めてこのノイズレベルが達成できたことが確認された。
【００３８】
この液浸油は精製工程を有する製造方法で得ることができる。精製工程は、主成分および高屈折率固体に対してそれぞれ独立して実施することができ、又は、主成分に高屈折率固体を溶解または分散させた後に実施することもできる。
精製工程としては、例えば、吸着剤による不純物除去法、蒸留による不純物除去法、再結晶による不純物除去法、昇華による不純物除去法、などを用いることができ、これらの不純物除去法を２種類以上組み合わせることもできる。
【００３９】
吸着剤による不純物除去の場合、吸着剤としては、例えば、シリカゲル、活性炭、アルミナ、粘土、などを用いることができる。好ましくはシリカゲル、活性炭を用いるのがよい。
吸着剤の使用形態としては、例えば、吸着剤を筒状に備え、その内側を不純物を含んだ物質を流通させる、又は、不純物を含んだ物質に吸着剤を懸濁し、別途、ろ過手段を用いてろ過する、又は、粒子サイズの差などにより液体が自由に通り抜けかつ吸着剤が漏れ出さないように構成された容器に吸着剤を入れて不純物を含んだ物質に浸漬する、などの形態を用いることができる。
吸着剤の使用量は、不純物を含んだ物質１０ｍｌに対し、０．０１ｇ〜５ｇが好ましく、０．０５ｇ〜３ｇがより好ましい。０．０１ｇより少ないと不純物除去効果が小さく、５ｇより多いと回収率が低下する、あるいは、溶解させた物質が析出することがある。
【００４０】
蒸溜による不純物除去の場合、蒸溜は常圧でも減圧でも実施することができる。なお、蒸溜中の分解を抑えるために、窒素、アルゴンに代表される不活性ガス雰囲気で実施するのが好ましい。
【００４１】
再結晶による不純物除去の場合、不純物を含んだ物資との反応性が無ければいずれの溶媒も用いることができるが、特にトルエン酢酸エチルを用いるのが好ましい。
【００４２】
本発明の液浸油を精製する実施形態としては、吸着剤もしくは蒸溜により不純物を除去したジヨードメタンに、再結晶により不純物を除去した硫黄を溶解させる形態をとるのが好ましい。このようにすれば、屈折率の制御が容易になり、また、硫黄の析出を防ぐことができる。
【００４３】
本発明の保存方法は、上述した本発明の液浸油を保存する方法であり、吸着剤を常時液浸油に接触させることを特徴とする。また、本発明の保存容器は、上述した本発明の液浸油を保存する容器であり、常時液浸油に接触する吸着剤を内包することを特徴とする。
吸着剤としては、上述のように、シリカゲル、活性炭、アルミナ、粘土、などを用いることができる。好ましくはシリカゲル、活性炭を用いるのがよい。
吸着剤を内包する形態としては、液浸油を使用する際に吸着剤が混入しない形態であれば特に限定されないが、例えば、図１に示すように、液浸油が自由に通り抜け、かつ吸着剤３が漏れ出さないメッシュの不織物の袋の中に内包して、保存容器本体１の内部に備えた形態が好ましい。図１中、２はノズル部である。
【００４４】
また、本発明の他の保存方法は、上述した本発明の液浸油を保存する方法であり、液浸油を保存容器の外部に取り出す都度、吸着剤に接触させることを特徴とする。また、本発明の他の保存容器は、上述した本発明の液浸油を保存する容器であり、液浸油を取り出す都度接触する吸着剤を内包することを特徴とする。
吸着剤としては、上述のように、シリカゲル、活性炭、アルミナ、粘土、などを用いることができる。好ましくはシリカゲル、活性炭を用いるのがよい。
吸着剤を内包する形態としては、液浸油を使用する際に吸着剤が混入しない形態であれば特に限定されないが、例えば、図２に示すように、液浸油容器のノズル部２に吸着剤３を内包させ液浸油４を取り出す都度、液浸油４が吸着剤３と接触する形態が好ましい。より好ましくは、吸着剤３を内包したノズル部２を保存容器本体１に対して脱着式にして、このノズル部２を使用の都度取り替えることにより、液浸油４が常に新しい吸着剤３と接触する形態がよい。
【００４５】
本発明の液浸油の保存容器によれば、例えば、液浸油に含まれるジヨードメタンの揮発や光分解によってヨウ素を遊離しても、吸着剤でその遊離したヨウ素を吸着できる。このため、使用する液浸油の経時劣化を抑えることができる。
【００４６】
以下、本発明を実施例によりさらに具体的に説明する。なお、本発明は以下の実施例に限定されるものではない。
【００４７】
実施例１
実施例１の液浸油は、次の精製工程を経て製造したものである。
市販のジヨードメタン（Cargille社製 Series M 1.7800±.0005ロットナンバー 0805）を窒素雰囲気下で常圧蒸溜した（bp.180-183℃）。また、市販の硫黄１０ｇをトルエン１００ｍｌに８０℃に加熱して溶解し、室温に冷却して得られた固体を濾集して再結晶した。この再結晶した硫黄２ｇを粉砕して、上記の常圧蒸溜したジヨードメタン１０ｍｌに懸濁して室温で１７時間攪拌し、攪拌後濾過した。
【００４８】
実施例２
実施例２の液浸油は、次の精製工程を経て製造したものである。
市販のジヨードメタン２０ｍｌに市販の硫黄４ｇ粉砕したものを懸濁して室温で１７時間攪拌し、攪拌後濾過した。この濾液１０ｍｌをシリカゲル（ナカライテスク製シリカゲル60、球状、中性）２ｇ（見かけ体積４ｍｌ）を詰めたシリカゲルカラムクロマトグラフィを通し精製した。
【００４９】
実施例３
実施例３の液浸油は、次の精製工程を経て製造したものである。
市販品の屈折率が１．７８のジヨードメタンと硫黄とを主成分とする液浸油１０ｍｌを、シリカゲル（ナカライテスク製シリカゲル60、球状、中性）２ｇ（見かけ体積４ｍｌ）を詰めたシリカゲルカラムクロマトグラフィを通し精製した。
【００５０】
実施例４
実施例４の液浸油は、次の精製工程を経て製造したものである。
市販のジヨードメタン２０ｍｌに市販の硫黄４ｇ粉砕したものを懸濁して室温で１７時間攪拌し、攪拌後濾過した。この濾液１０ｍｌに活性炭（ナカライテスク製）１ｇを懸濁して室温で１７時間攪拌し、攪拌後濾過した。
【００５１】
実施例５
実施例５の液浸油は、次の精製工程を経て製造したものである。
市販品の屈折率が１．７８のジヨードメタンと硫黄とを主成分とする液浸油１０ｍｌに活性炭（ナカライテスク製）１ｇを懸濁して室温で１７時間攪拌し、攪拌後濾過した。
【００５２】
実施例６
実施例６の液浸油は、次の精製工程を経て製造したものである。
市販のジヨードメタンを窒素雰囲気下で常圧蒸溜した（bp.180-183℃）。蒸溜したジヨードメタン市販のジヨードメタン１０ｍｌに市販の硫黄２ｇ粉砕して懸濁して室温で１７時間攪拌し、攪拌後濾過した。
【００５３】
実施例７
実施例７の液浸油は、次の精製工程を経て製造したものである。
市販の硫黄１０ｇをトルエン１００ｍｌに８０℃に加熱して溶解し、室温に冷却して得られた固体を濾集して再結晶した。再結晶した硫黄２ｇを粉砕して市販のジヨードメタン１０ｍｌに懸濁して室温で１７時間攪拌し、攪拌後濾過した。
【００５４】
実施例８
実施例８の液浸油は、次の保存容器に保存しておいたものである。
実施例１の製造方法で製造した液浸油２０ｍｌを、図１に示す形態と基本構成がほぼ同様の、シリカゲル０．４ｇ（見かけ体積８ｍｌ）を内包した不織布袋が保存容器本体１に入った褐色瓶の中で室温で６ヶ月放置した。
【００５５】
実施例９
実施例９の液浸油は、次の保存容器に保存しておいたものである。
実施例１の製造方法で製造した液浸油２０ｍｌを、図２に示す形態と基本構成がほぼ同様の、吸着剤３としてシリカゲル０．５ｇ（見かけ体積４ｍｌ）を内包した脱着可能なノズル部２が保存容器本体１に装着された褐色瓶の中に入れ、液浸油とシリカゲルとは非接触状態にして室温で６ヶ月放置した。その後ノズル部２を通過させて１ｍｌを取り出した。
【００５６】
実施例１０
実施例１０の液浸油は、次の保存容器に保存しておいたものである。
実施例１の製造方法で製造した液浸油２０ｍｌを、図２に示す形態と基本構成がほぼ同様の、吸着剤３としてシリカゲル０．５ｇ（見かけ体積４ｍｌ）を内包した脱着可能なノズル部２が保存容器本体１に装着された褐色瓶の中に入れた。次いで、ノズル部２を通過させて１５ｍｌを取り出し、ノズル部２を新しいシリカゲルを内包したノズル部２に取り替えた直後に、ノズル部２を通過させて１ｍｌを取り出した。
【００５７】
比較例１
比較例１の液浸油は、屈折率が１．７８のジヨードメタンと硫黄を主成分とする、市販品の液浸油である。
【００５８】
比較例２
比較例２の液浸油は、市販のジヨードメタン１０ｍｌに、市販の硫黄２ｇを粉砕したものを懸濁して、室温で１７時間攪拌し、攪拌後濾過したものである。
【００５９】
比較例３
比較例３の液浸油は、実施例１製造方法で製造した液浸油を、シリカゲル等の吸着剤が内包されていない褐色瓶の中に入れて、室温で６ヶ月放置したものである。
【００６０】
比較例４
比較例４の液浸油は、実施例１の製造方法で製造した液浸油２０ｍｌを、図２に示す形態と基本構成がほぼ同様の、シリカゲル０．５ｇ（見かけ体積４ｍｌ）を内包した脱着可能なノズル部２を装着した褐色瓶に入れて、室温で６ヶ月放置し、その後ノズル部２を通過させて１５ｍｌを取り出した後、ノズル部２を取り替えずにそのノズル部２を通過させて１ｍｌを取り出したものである。
【００６１】
実施例１〜７における製造直後の１ｍｌの液浸油、実施例８における褐色瓶から取り出した１ｍｌの液浸油、実施例９，１０において褐色瓶から取り出した１ｍｌの液浸油、比較例１，２の１ｍｌの液浸油、比較例３の褐色瓶から取り出した１ｍｌの液浸油、及び比較例４の保存容器から取り出した１ｍｌの液浸油に対し、それぞれ４８８ｎｍの励起光を照射し、そのときに発する自家蛍光を測定し、比較例１の液浸油の自家蛍光を１としたときの自家蛍光の比率を求めた。その自家蛍光の比率を次の表１に示す。
なお、分光蛍光光度計は、株式会社日立製作所（登録商標）製の分光蛍光光度計F4500を用いた。そして、上記各実施例及び各比較例のそれぞれ１ｍｌの液浸油を、測定毎に分光蛍光光度計のセルに入れて４８８ｎｍ励起で測定し、比較例１の液浸油を測定したときの自家蛍光を基準として比率を求めた。なお、液浸油の自家蛍光の測定に際し、分光蛍光光度計のセルなどには自家蛍光を含んでいるが、それらはオフセットとしてキャンセルして測定した。
表１
【００６２】
表１に示したように、上記各実施例の液浸油は、比較例の液浸油とは異なり、４８８ｎｍ励起での自家蛍光が、極めて小さい。このため、上記各実施例の液浸油によれば、従来、観察が困難又は不可能であった、例えば、一分子蛍光などの微弱蛍光観察が可能となる。
また、上記実施例８〜実施例１０の液浸油の保存容器によれば、比較例３，４の液浸油の保存容器と比べて、液浸油の経時劣化を抑えて、上記実施例１の液浸油と同様に４８８ｎｍ励起での自家蛍光を、極めて小さく抑えることができる。
【産業上の利用可能性】
【００６３】
本発明の液浸油、液浸油の製造方法、液浸油の保存方法、及び液浸油の保存容器は、例えば、一分子蛍光観察（又は計測）など微弱な蛍光観察（又は計測）をする生物学、医学の分野において有用である。
【図面の簡単な説明】
【００６４】
【図１】本発明の一実施形態にかかる液浸油の保存容器の概略構成を示す概念図である。
【図２】本発明の他の実施形態にかかる液浸油の保存容器の概略構成を示す概念図である。
【符号の説明】
【００６５】
１ 保存容器本体
２ ノズル部
３ 不純物除去物質（吸着物質）
４ 液浸油
【特許請求の範囲】
【請求項１】
屈折率が１．７０以上で、且つ、低蛍光であることを特徴とする液浸油。
【請求項２】
ヨウ素化合物を主成分とすることを特徴とする請求項１に記載の液浸油。
【請求項３】
前記ヨウ素化合物がジヨードメタンであることを特徴とする請求項２に記載の液浸油。
【請求項４】
高屈折率の固体を溶解又は分散させてなることを特徴とする請求項３に記載の液浸油。
【請求項５】
前記高屈折率の固体が硫黄であることを特徴とする請求項４に記載の液浸油。
【請求項６】
屈折率が１．７８以上で、且つ、低蛍光であることを特徴とする液浸油。
【請求項７】
ヨウ素化合物を主成分とすることを特徴とする請求項６に記載の液浸油。
【請求項８】
前記ヨウ素化合物がジヨードメタンであることを特徴とする請求項７に記載の液浸油。
【請求項９】
高屈折率の固体を溶解又は分散させてなることを特徴とする請求項８に記載の液浸油。
【請求項１０】
前記高屈折率の固体が硫黄であることを特徴とする請求項９に記載の液浸油。
【請求項１１】
請求項１〜５のいずれかに記載の液浸油の製造方法において、
精製工程を有することを特徴とする液浸油の製造方法。
【請求項１２】
前記精製工程が、吸着剤により不純物を除去する工程であることを特徴とする請求項１１に記載の液浸油の製造方法。
【請求項１３】
前記精製工程が、蒸留により不純物を除去する工程であることを特徴とする請求項１１に記載の液浸油の製造方法。
【請求項１４】
前記精製工程が、再結晶させることにより不純物を除去する工程であることを特徴とする請求項１１に記載の液浸油の製造方法。
【請求項１５】
請求項６〜１０のいずれかに記載の液浸油の製造方法において、
精製工程を有することを特徴とする液浸油の製造方法。
【請求項１６】
前記精製工程が、吸着剤により不純物を除去する工程であることを特徴とする請求項１５に記載の液浸油の製造方法。
【請求項１７】
前記精製工程が、蒸留により不純物を除去する工程であることを特徴とする請求項１５に記載の液浸油の製造方法。
【請求項１８】
前記精製工程が、再結晶させることにより不純物を除去する工程であることを特徴とする請求項１５に記載の液浸油の製造方法。
【請求項１９】
請求項１〜１０のいずれかに記載の液浸油、又は請求項１１〜１８のいずれかに記載の製造方法により製造された液浸油の保存方法において、
吸着剤を液浸油に常時接触させることを特徴とする液浸油の保存方法。
【請求項２０】
請求項１〜１０のいずれかに記載の液浸油、又は請求項１１〜１８のいずれかに記載の製造方法により製造された液浸油の保存方法において、
液浸油を保存容器の外部に取り出す都度、吸着剤に接触させることを特徴とする液浸油の保存方法。
【請求項２１】
請求項１〜１０のいずれかに記載の液浸油、又は請求項１１〜１８のいずれかに記載の製造方法により製造された液浸油の保存容器において、
常時液浸油に接触する吸着剤を内包することを特徴とする液浸油の保存容器。
【請求項２２】
請求項１〜１０のいずれかに記載の液浸油、又は請求項１１〜１８のいずれかに記載の製造方法により製造された液浸油の保存容器において、
液浸油を取り出す都度該液浸油に接触する吸着剤を内包することを特徴とする液浸油の保存容器。
【請求項２３】
液浸油を取り出す都度該液浸油に接触する吸着剤を内包する部分が、前記保存容器の本体に対して脱着可能であることを特徴とする請求項２２に記載の液浸油の保存容器。
【請求項１】
屈折率が１．７０以上で、且つ、低蛍光であることを特徴とする液浸油。
【請求項２】
ヨウ素化合物を主成分とすることを特徴とする請求項１に記載の液浸油。
【請求項３】
前記ヨウ素化合物がジヨードメタンであることを特徴とする請求項２に記載の液浸油。
【請求項４】
高屈折率の固体を溶解又は分散させてなることを特徴とする請求項３に記載の液浸油。
【請求項５】
前記高屈折率の固体が硫黄であることを特徴とする請求項４に記載の液浸油。
【請求項６】
屈折率が１．７８以上で、且つ、低蛍光であることを特徴とする液浸油。
【請求項７】
ヨウ素化合物を主成分とすることを特徴とする請求項６に記載の液浸油。
【請求項８】
前記ヨウ素化合物がジヨードメタンであることを特徴とする請求項７に記載の液浸油。
【請求項９】
高屈折率の固体を溶解又は分散させてなることを特徴とする請求項８に記載の液浸油。
【請求項１０】
前記高屈折率の固体が硫黄であることを特徴とする請求項９に記載の液浸油。
【請求項１１】
請求項１〜５のいずれかに記載の液浸油の製造方法において、
精製工程を有することを特徴とする液浸油の製造方法。
【請求項１２】
前記精製工程が、吸着剤により不純物を除去する工程であることを特徴とする請求項１１に記載の液浸油の製造方法。
【請求項１３】
前記精製工程が、蒸留により不純物を除去する工程であることを特徴とする請求項１１に記載の液浸油の製造方法。
【請求項１４】
前記精製工程が、再結晶させることにより不純物を除去する工程であることを特徴とする請求項１１に記載の液浸油の製造方法。
【請求項１５】
請求項６〜１０のいずれかに記載の液浸油の製造方法において、
精製工程を有することを特徴とする液浸油の製造方法。
【請求項１６】
前記精製工程が、吸着剤により不純物を除去する工程であることを特徴とする請求項１５に記載の液浸油の製造方法。
【請求項１７】
前記精製工程が、蒸留により不純物を除去する工程であることを特徴とする請求項１５に記載の液浸油の製造方法。
【請求項１８】
前記精製工程が、再結晶させることにより不純物を除去する工程であることを特徴とする請求項１５に記載の液浸油の製造方法。
【請求項１９】
請求項１〜１０のいずれかに記載の液浸油、又は請求項１１〜１８のいずれかに記載の製造方法により製造された液浸油の保存方法において、
吸着剤を液浸油に常時接触させることを特徴とする液浸油の保存方法。
【請求項２０】
請求項１〜１０のいずれかに記載の液浸油、又は請求項１１〜１８のいずれかに記載の製造方法により製造された液浸油の保存方法において、
液浸油を保存容器の外部に取り出す都度、吸着剤に接触させることを特徴とする液浸油の保存方法。
【請求項２１】
請求項１〜１０のいずれかに記載の液浸油、又は請求項１１〜１８のいずれかに記載の製造方法により製造された液浸油の保存容器において、
常時液浸油に接触する吸着剤を内包することを特徴とする液浸油の保存容器。
【請求項２２】
請求項１〜１０のいずれかに記載の液浸油、又は請求項１１〜１８のいずれかに記載の製造方法により製造された液浸油の保存容器において、
液浸油を取り出す都度該液浸油に接触する吸着剤を内包することを特徴とする液浸油の保存容器。
【請求項２３】
液浸油を取り出す都度該液浸油に接触する吸着剤を内包する部分が、前記保存容器の本体に対して脱着可能であることを特徴とする請求項２２に記載の液浸油の保存容器。
【図１】
【図２】
【図２】
【公開番号】特開２００８−１３４５１７（Ｐ２００８−１３４５１７Ａ）
【公開日】平成２０年６月１２日（２００８．６．１２）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００６−３２１４７３（Ｐ２００６−３２１４７３）
【出願日】平成１８年１１月２９日（２００６．１１．２９）
【出願人】（００００００３７６）オリンパス株式会社 (11,466)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２０年６月１２日（２００８．６．１２）
【国際特許分類】
【出願日】平成１８年１１月２９日（２００６．１１．２９）
【出願人】（００００００３７６）オリンパス株式会社 (11,466)
【Ｆターム（参考）】
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