病原性細菌に引き続いて曝露される脊椎動物宿主における予防的免疫応答の産生に用いるため、細胞の微生物の免疫原性を高めるため、またはベクターとして使用し外因性抗原を発現して他の感染物質もしくは癌細胞に対する反応を誘発するための全細胞ワクチンおよび方法。本発明は、ワクチンの有効性を改善する方法で細胞内細菌により抗原提示を高めるさらなる方法に関する。細胞内微生物に感染した宿主細胞上の抗アポトーシス性効果を有する酵素を同定後、この細胞内微生物によって引き起こされた酵素の活性が酵素の変異体複製を発現することにより低下し、その結果、微生物が免疫原性を高めるようにこの微生物を修飾する。

【特許請求の範囲】
【請求項１】
細菌を遺伝学的に変えて抗アポトーシス酵素のドミナントネガティブ変異体を発現し、それによって前記細菌が対象の免疫原性を高めることを含む、前記細菌を修飾して前記細菌の免疫原性を高める方法。
【請求項２】
請求項１に記載の方法に従い作製した修飾細菌。
【請求項３】
請求項２に記載の修飾細菌を含む、免疫原組成物。
【請求項４】
細菌を遺伝学的に変えて抗アポトーシス酵素のドミナントネガティブ変異体を発現させ、それによって前記細菌が対象の免疫原性を高めることを含む、弱毒化細菌を修飾して前記弱毒化細菌の免疫原性を高める方法。
【請求項５】
前記細菌がＭ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ、Ｍ．ｂｏｖｉｓ、Ｍ．ｂｏｖｉｓ株ＢＣＧ、ＢＣＧ亜株、Ｍ．ａｖｉｕｍ、Ｍ．ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｅ、Ｍ．ａｆｒｉｃａｎｕｍ、Ｍ．ｋａｎｓａｓｉｉ、Ｍ．ｍａｒｉｎｕｍ、Ｍ．ｕｌｃｅｒａｎｓ、Ｍ．ａｖｉｕｍ亜種ｐａｒａｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ、および他のＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ種からなる群から選択される、請求項１および４に記載の方法。
【請求項６】
前記ドミナントネガティブ変異体がＳｏｄＡのドミナントネガティブ変異体であり、そこで天然核酸ヌクレオチドの欠失、挿入、および／または置換が、生物のＳＯＤ活性と干渉する分子をコードする、請求項１および４に記載の方法。
【請求項７】
前記ドミナントネガティブ変異体がグルタミンシンターゼのドミナントネガティブ変異体であり、そこで天然核酸ヌクレオチドの欠失、挿入、および／または置換が、生物のグルタミンシンターゼ活性と干渉する分子をコードする、請求項１および４に記載の方法。
【請求項８】
前記細菌がＢＣＧである、請求項６および７に記載の方法。
【請求項９】
さらなるプロアポトーシス性修飾を含む、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記さらなるプロアポトーシス性修飾がＳｉｇＨの不活性化、ｓｉｇＥの不活性化、ＳｅｃＡ２の不活性化、チオレドキシン活性の低下、チオレドキシン還元酵素活性の低下、グルタレドキシン活性の低下、チオールペルオキシダーゼ活性の低下、およびＮＡＤ（Ｐ）Ｈキノン還元酵素Ｒｖ３３０３ｃ活性の低下からなる群から選択される１つ以上の修飾を含む、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記ドミナントネガティブ変異体が２８位のヒスチジンおよび７６位のヒスチジンを欠失している変異体ＳｏｄＡである、請求項８に記載の方法。
【請求項１２】
前記ドミナントネガティブ変異体が２８位のヒスチジンまたは７６位のヒスチジンを欠失している変異体ＳｏｄＡである、請求項８に記載の方法。
【請求項１３】
前記ドミナントネガティブ変異体が５４位のグルタミン酸を欠失している変異体ＳｏｄＡである、請求項８に記載の方法。
【請求項１４】
前記ドミナントネガティブ変異体が５４位のグルタミン酸を欠失しており、２８位のヒスチジンがアルギニンと置換している変異体ＳｏｄＡである、請求項８に記載の方法。
【請求項１５】
前記細菌が、ＳｏｄＡのドミナントネガティブ変異体およびｓｉｇＨの不活性化を含む、請求項１０、１１、１２、１３または１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記細菌が、ＳｏｄＡのドミナントネガティブ変異体およびｓｅｃＡ２の不活性化を含む、請求項１０、１１、１２、１３または１４に記載の方法。
【請求項１７】
前記細菌が、ＳｏｄＡのドミナントネガティブ変異体、ｓｉｇＨの不活性化およびｓｅｃＡ２の不活性化を含む、請求項１０、１１、１２、１３または１４に記載の方法。
【請求項１８】
前記細菌が、ＳｏｄＡのドミナントネガティブ変異体、ｇｌｎＡ１のドミナントネガティブ変異体、ｓｉｇＨの不活性化およびｓｅｃＡ２の不活性化を含む、請求項１０、１１、１２、１３または１４に記載の方法。
【請求項１９】
前記細菌が、ｇｌｎＡ１のドミナントネガティブ変異体を含む、請求項８に記載の方法。
【請求項２０】
前記グルタミンシンターゼのドミナントネガティブ変異体が、アミノ酸５４位のアスパラギン酸およびアミノ酸３３５位のグルタミン酸の欠失を含む、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記グルタミンシンターゼのドミナントネガティブ変異体が、アミノ酸５４位のアスパラギン酸またはアミノ酸３３５位のグルタミン酸の欠失を含む、請求項１９に記載の方法。
【請求項２２】
前記細菌がｓｅｃＡ２の不活性化をさらに含む、請求項２０に記載の方法。
【請求項２３】
前記細菌がＳｏｄＡの不活性化をさらに含む、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記ＳｏｄＡのドミナントネガティブ変異体が２８位のヒスチジンおよび７６位のヒスチジンを欠失している変異体ＳｏｄＡである、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
前記細菌がｓｉｇＨの活性低下変異およびｓｅｃＡ２の不活性化をさらに含む、請求項２０に記載の方法。
【請求項２６】
前記細菌がＳｏｄＡのドミナントネガティブ変異体およびｓｉｇＨの不活性化をさらに含む、請求項２０に記載の方法。
【請求項２７】
前記ドミナントネガティブ変異体が５４位のグルタミン酸を欠失している変異体ＳｏｄＡである、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
前記ドミナントネガティブ変異体が２８位のヒスチジンおよび７６位のヒスチジンを欠失している変異体ＳｏｄＡである、請求項２６に記載の方法。
【請求項２９】
前記細菌がＳｏｄＡのドミナントネガティブ変異体およびｓｅｃＡ２の不活性化をさらに含む、請求項２０に記載の方法。
【請求項３０】
前記ドミナントネガティブ変異体が５４位のグルタミン酸を欠失している変異体ＳｏｄＡである、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
前記ドミナントネガティブ変異体が２８位のヒスチジンおよび７６位のヒスチジンを欠失している変異体ＳｏｄＡである、請求項２９に記載の方法。
【請求項３２】
前記細菌がｓｉｇＨの不活性化を含む、請求項４に記載の方法。
【請求項３３】
前記細菌がｓｉｇＨの不活性化およびｓｅｃＡ２の不活性化を含む、請求項４に記載の方法。
【請求項３４】
前記細菌が弱毒化している、請求項２に記載の修飾細菌。
【請求項３５】
前記細菌がＭ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ、Ｍ．ｂｏｖｉｓ、Ｍ．ｂｏｖｉｓ株ＢＣＧ、ＢＣＧ亜株、Ｍ．ａｖｉｕｍ、Ｍ．ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｅ、Ｍ．ａｆｒｉｃａｎｕｍ、Ｍ．ｋａｎｓａｓｉｉ、Ｍ．ｍａｒｉｎｕｍ、Ｍ．ｕｌｃｅｒａｎｓ、Ｍ．ａｖｉｕｍ亜種ｐａｒａｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ、および他のＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ種からなる群から選択される、請求項２に記載の修飾細菌。
【請求項３６】
前記ドミナントネガティブ変異体が、
ａ）天然核酸ヌクレオチドの欠失、挿入、および／または置換が、生物のＳＯＤ活性を低下させる分子をコードするＳｏｄＡ；ならびに
ｂ）天然核酸ヌクレオチドの欠失、挿入、および／または置換が、生物のグルタミンシンターゼ活性を低下させる分子をコードするグルタミンシンターゼ
からなる群から選択されるドミナントネガティブ変異体である、請求項２に記載の修飾細菌。
【請求項３７】
前記細菌がＢＣＧである、請求項３６に記載の修飾細菌。
【請求項３８】
さらなるプロアポトーシス性修飾を含む、請求項３７に記載の修飾細菌。
【請求項３９】
前記さらなるプロアポトーシス性修飾が、ＳｉｇＨの不活性化、ｓｉｇＥの不活性化、ＳｅｃＡ２の不活性化、チオレドキシン活性の低下、チオレドキシン還元酵素活性の低下、グルタレドキシン活性の低下、チオールペルオキシダーゼ活性の低下、およびＮＡＤ（Ｐ）Ｈキノン還元酵素Ｒｖ３３０３ｃ活性の低下からなる群から選択される１つ以上の修飾を含む、請求項３８に記載の修飾細菌。
【請求項４０】
前記ドミナントネガティブ変異体が２８位のヒスチジンおよび７６位のヒスチジンを欠失している変異体ＳｏｄＡである、請求項３７に記載の修飾細菌。
【請求項４１】
前記ドミナントネガティブ変異体が２８位のヒスチジンまたは７６位のヒスチジンを欠失している変異体ＳｏｄＡである、請求項３７に記載の修飾細菌。
【請求項４２】
前記ドミナントネガティブ変異体が５４位のグルタミン酸を欠失している変異体ＳｏｄＡである、請求項３７に記載の修飾細菌。
【請求項４３】
前記ドミナントネガティブ変異体が５４位のグルタミン酸を欠失しており、かつ、２８位のヒスチジンがアルギニンと置換している変異体ＳｏｄＡである、請求項３７に記載の修飾細菌。
【請求項４４】
前記細菌が、ＳｏｄＡのドミナントネガティブ変異体およびｓｉｇＨの不活性化を含む、請求項３９に記載の修飾細菌。
【請求項４５】
前記細菌が、ＳｏｄＡのドミナントネガティブ変異体およびｓｅｃＡ２の不活性化を含む、請求項３９に記載の修飾細菌。
【請求項４６】
前記細菌がＳｏｄＡのドミナントネガティブ変異体、ｓｉｇＨの不活性化およびｓｅｃＡ２の不活性化を含む、請求項３９に記載の修飾細菌。
【請求項４７】
前記細菌がＳｏｄＡのドミナントネガティブ変異体、ｇｌｎＡ１のドミナントネガティブ変異体、ｓｉｇＨの不活性化およびｓｅｃＡ２の不活性化を含む、請求項３９に記載の修飾細菌。
【請求項４８】
前記細菌がｇｌｎＡ１のドミナントネガティブ変異体を含む、請求項３９に記載の修飾細菌。
【請求項４９】
前記グルタミンシンターゼのドミナントネガティブ変異体が、アミノ酸５４位のアスパラギン酸およびアミノ酸３３５位のグルタミン酸の欠失を含む、請求項４８に記載の修飾細菌。
【請求項５０】
前記グルタミンシンターゼのドミナントネガティブ変異体が、アミノ酸５４位のアスパラギン酸またはアミノ酸３３５位のグルタミン酸の欠失を含む、請求項４８に記載の修飾細菌。
【請求項５１】
前記細菌がｓｅｃＡ２の不活性化をさらに含む、請求項４９に記載の修飾細菌。
【請求項５２】
前記細菌がＳｏｄＡのドミナントネガティブ変異体をさらに含む、請求項５１に記載の修飾細菌。
【請求項５３】
前記ＳｏｄＡのドミナントネガティブ変異体が２８位のヒスチジンおよび７６位のヒスチジンを欠失している変異体ＳｏｄＡである、請求項５２に記載の修飾細菌。
【請求項５４】
前記細菌がｓｉｇＨの不活性化およびｓｅｃＡ２の不活性化をさらに含む、請求項４９に記載の修飾細菌。
【請求項５５】
前記細菌がＳｏｄＡのドミナントネガティブ変異体およびｓｉｇＨの不活性化をさらに含む、請求項４９に記載の修飾細菌。
【請求項５６】
前記ドミナントネガティブ変異体が５４位のグルタミン酸を欠失している変異体ＳｏｄＡである、請求項５５に記載の修飾細菌。
【請求項５７】
前記ドミナントネガティブ変異体が２８位のヒスチジンおよび７６位のヒスチジンを欠失している変異体ＳｏｄＡである、請求項５５に記載の修飾細菌。
【請求項５８】
前記細菌がＳｏｄＡのドミナントネガティブ変異体およびｓｅｃＡ２の不活性化をさらに含む、請求項４９に記載の修飾細菌。
【請求項５９】
前記ドミナントネガティブ変異体が５４位のグルタミン酸を欠失している変異体ＳｏｄＡである、請求項５８に記載の修飾細菌。
【請求項６０】
前記ドミナントネガティブ変異体が２８位のヒスチジンおよび７６位のヒスチジンを欠失している変異体ＳｏｄＡである、請求項５８に記載の修飾細菌。
【請求項６１】
前記細菌がｓｉｇＨの不活性化を含む、請求項２に記載の修飾細菌。
【請求項６２】
前記細菌がｓｉｇＨの不活性化およびｓｅｃＡ２の不活性化を含む、請求項２に記載の修飾細菌。
【請求項６３】
プロアポトーシスＢＣＧ（ｐａＢＣＧ）を、膀胱癌を呈する対象へ投与することを含む、膀胱癌を治療する方法。
【請求項６４】
前記投与が膀胱内への点滴である、請求項６３に記載の方法。
【請求項６５】
ｐａＢＣＧを、前記固形腫瘍を呈する対象へ投与することを含む、固形腫瘍を治療する方法。
【請求項６６】
前記投与が前記固形腫瘍内への病巣内注射である、請求項６５に記載の方法。
【請求項６７】
前記投与が腫瘍に供給する動脈内への動脈内注入である、請求項６５に記載の方法。
【請求項６８】
前記固形腫瘍が皮膚癌、脳癌、咽頭癌、乳癌、肺癌、食道癌、胃癌、肝臓癌、結腸癌、胆管癌、膵臓癌、肛門癌、腎臓癌、前立腺癌、および肉腫からなる群から選択される、請求項６５に記載の方法。
【請求項６９】
ａ）前記皮膚癌が黒色腫もしくは扁平上皮細胞癌であり；
ｂ）前記脳癌が神経膠芽腫、アストロチトームもしくは乏突起膠腫であり；
ｃ）前記肺癌が原発腫瘍もしくは他の腫瘍の肺転移であり；または
ｄ）前記肝臓癌が原発腫瘍（ヘパトーマ）もしくは他の腫瘍の肝転移である
請求項６８に記載の方法。
【請求項７０】
前記固形腫瘍が黒色腫であり、かつ、前記投与が前記黒色腫内への病巣内注射である、請求項６５に記載の方法。
【請求項７１】
癌を呈する対象に抗癌ワクチンおよびｐａＢＣＧを投与することを含む、癌を治療する方法。
【請求項７２】
前記抗癌ワクチンとｐａＢＣＧとが別々に投与される、請求項７１に記載の方法。
【請求項７３】
前記抗癌ワクチンとｐａＢＣＧとが別々におよび実質的に同時に投与される、請求項７１に記載の方法。
【請求項７４】
前記抗癌ワクチンとｐａＢＣＧとが混合される、請求項７１に記載の方法。
【請求項７５】
抗癌ワクチンとｐａＢＣＧとを含む組成物。
【請求項７６】
前記抗癌ワクチンが癌抗原を含む、請求項７５に記載の組成物。
【請求項７７】
前記抗癌ワクチンが自己由来癌細胞を含む、請求項７５に記載の組成物。
【請求項７８】
ドミナントネガティブ変異体ＳｏｄＡ、変異体ＳｏｄＡ、またはＳｏｄＡペプチドを発現するｐａＢＣＧ、および医薬上許容可能な担体を含む組成物。
【請求項７９】
ドミナントネガティブ変異体ＳｏｄＡ、変異体ＳｏｄＡ、またはＳｏｄＡペプチドを発現するｐａＢＣＧを含む組成物で対象を免疫化することを含む、活動性肺結核の発生を予防する方法。
【請求項８０】
ドミナントネガティブ変異体ＳｏｄＡ、変異体ＳｏｄＡ、またはＳｏｄＡペプチドを発現するｐａＢＣＧを含む組成物で対象を免疫化することを含む、活動性肺結核者の肺損傷を減少させる方法。
【請求項８１】
ドミナントネガティブ変異体ＳｏｄＡ、変異体ＳｏｄＡ、またはＳｏｄＡペプチドを発現するｐａＢＣＧを含む組成物で対象を免疫化することを含む、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ種感染者における肺線維症を減少させる方法。
【請求項８２】
対象にｐａＢＣＧを投与することを含む、癌を呈する対象を延命する方法。
【請求項８３】
対象にｐａＢＣＧを投与することを含む、対象が癌を発症する可能性を減少させる方法。

【図１Ａ】

【図１Ｂ】

【図２Ａ】

【図２Ｂ】

【図２Ｃ】

【図２Ｄ】

【図３】

【図４】

【図５Ａ】

【図５Ｂ】

【図５Ｃ】

【図５Ｄ】

【図６】

【図８Ａ】

【図８Ｂ】

【図９】

【図１２】

【図１３】

【図１４Ａ】

【図１４Ｂ】

【図１４Ｃ】

【図１５】

【図１６Ａ】

【図１６Ｂ】

【図１６Ｃ】

【図１６Ｄ】

【図１８】

【図１９Ａ】

【図１９Ｂ】

【図２０Ａ】

【図２０Ｂ】

【図２０Ｃ】

【図２０Ｄ】

【図２２Ａ】

【図２２Ｂ】

【図２３Ａ】

【図２３Ｂ】

【図２４Ａ】

【図２４Ｂ】

【図２５Ａ】

【図２５Ｂ】

【図２５Ｃ】

【図２６Ａ】

【図２６Ｂ】

【図２７】

【図２７−１】

【図２８】

【図２８−１】

【図２９】

【図３０】

【図３１Ｂ】

【図３２】

【図７】

【図１０】

【図１１】

【図１７】

【図２１】

【図３１Ａ】

【公表番号】特表２０１２−５０１１８９（Ｐ２０１２−５０１１８９Ａ）
【公表日】平成２４年１月１９日（２０１２．１．１９）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１１−５２５２７６（Ｐ２０１１−５２５２７６）
【出願日】平成２１年８月３１日（２００９．８．３１）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００９／０５５５５０
【国際公開番号】ＷＯ２０１０／０２５４６２
【国際公開日】平成２２年３月４日（２０１０．３．４）
【出願人】（５００１６７８８１）バンダービルト　ユニバーシティ (11)
【Ｆターム（参考）】