細胞分化促進剤
【課題】 豊富な食経験があり、前駆脂肪細胞から脂肪細胞への分化誘導促進作用を有する植物由来の破砕物又は抽出物を摂取することにより、インスリン抵抗性糖尿病をはじめとする糖尿病や肥満またはメタボリックシンドロームを防止又は改善する組成物を提供する。
【解決手段】アブラナ科、好ましくはアブラナ属の植物、好ましくはブロッコリー、ケール、キャベツのスプラウト（新芽）の粉砕物又は抽出物、またはこれらの植物のスプラウトから溶媒を用いて得られる抽出物からなる前駆脂肪細胞から脂肪細胞への細胞分化促進活性を有する組成物、又はその組成物を有効成分として含む細胞分化促進剤及び細胞分化促進活性を有する飲食品。
【解決手段】アブラナ科、好ましくはアブラナ属の植物、好ましくはブロッコリー、ケール、キャベツのスプラウト（新芽）の粉砕物又は抽出物、またはこれらの植物のスプラウトから溶媒を用いて得られる抽出物からなる前駆脂肪細胞から脂肪細胞への細胞分化促進活性を有する組成物、又はその組成物を有効成分として含む細胞分化促進剤及び細胞分化促進活性を有する飲食品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、前駆脂肪細胞から脂肪細胞への細胞分化促進活性を有する組成物及びその製造方法並びに前駆脂肪細胞から脂肪細胞への細胞分化促進剤などに関するものであり、さらに詳しくは、インスリン抵抗性の改善等に有効な安全性の高い、前駆脂肪細胞から脂肪細胞への細胞分化促進活性を有する組成物に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
飽食化や食生活様式の変化（高脂肪食）、社会生活の変化に伴う肉体労働の減少、運動習慣の減少、ストレスが原因で引き起こされる過食や暴飲暴食などにより、現代人は肥満になりやすく、結果として糖尿病やさらに深刻なメタボリックシンドーム（高脂血症、高血圧、動脈硬化性疾患、高インスリン血症、高トリグリセリド血症、高LDL血症、耐糖能異常など）などを引き起こしやすくなっている。体脂肪の蓄積は脂肪細胞中への脂肪の取り込みによるものであり、この脂肪細胞数を調節することにより、脂肪の取り込みも調節することが可能である。
【０００３】
脂肪細胞には白色脂肪細胞と褐色脂肪細胞があり、両細胞は生体の特徴的な部位で発生・分化し組織を形成する。通常、脂肪細胞といえば白色脂肪細胞を指し、本発明でも白色脂肪細胞を脂肪細胞と称する。
【０００４】
脂肪細胞は全身に広く分布し、生体内において脂質代謝を中心に活発な代謝機能を有する細胞であり、この細胞は前駆脂肪細胞に対して特定の誘導因子（分化調節作用を有する物質）が働きかけることにより形成されるものである。前駆脂肪細胞は、糖や脂質を処理する能力が著しく弱いが、細胞分化を起こして脂肪細胞へ分化すると、糖や脂質を処理して中性脂肪（トリグリセリド）として細胞内に貯える能力が高くなり、しかもインスリンなどのホルモンに対する感受性も獲得する。
【０００５】
血中の糖を吸収できる脂肪細胞が、既に脂肪で飽和している場合、インスリンが分泌されているにもかかわらず、血中の糖が消費されにくくなるという現象が起きる。このため、血糖値が上昇し、糖尿病を引き起こすと考えられている。経口糖尿病治療剤であるインスリン抵抗性改善剤として知られるチアゾリジン誘導体は、前駆脂肪細胞の分化誘導を転写レベルで促進する。前駆脂肪細胞の分化を促進することにより、血中の糖を取り込むことのできる脂肪細胞を増殖させ、血糖値を低下させ糖尿病を回避できるのではないかと考えられている。
【０００６】
前駆脂肪細胞から脂肪細胞への分化誘導物質は、食用、飲用などにおける経口摂取による内服或いは、皮膚への塗布又は浴用剤等の経皮吸収による外用でのインスリン抵抗性糖尿病をはじめとする糖尿病及び肥満または肥満が原因で引き起こされるメタボリックシンドローム（高脂血症、高血圧、動脈硬化性疾患、高インスリン血症、高トリグリセリド血症、高LDL血症、耐糖能異常など）の防止及び治療効果を期待することができる。
【０００７】
脂肪細胞への細胞分化を促進させる物質としては、チアゾリン誘導体であるピオグリタゾンが報告されている（非特許文献１)。非特許文献１によると、前駆脂肪細胞から脂肪細胞へ分化を促進させると、脂肪組織などの末梢（脂肪組織）でのインスリン活性を高めることになり、それで血糖値が低下すると考えられている。また、ベンゾピランカルボン酸（特許文献１）、クロフィブラートにも同様の作用があることが解明されている（非特許文献２)。
【０００８】
しかしながら、これらの合成化合物は、いずれも人体に対して有害な副作用を引き起こす可能性があり、実用化には大きな問題を抱えている。このため、人体に対して有害な副作用を生じさせることなく、優れた分化促進効果を発揮する物質の開発が待望されている。
【０００９】
経口での摂取が可能で、食経験豊かな食品由来の抽出物などにこのような脂肪細胞への分化を促進する効果が報告されている。例えば、アケビ、オランダビユ、カバ、キャラウェー、クコ、ホウノキ、ユズの抽出物（特許文献２）、リンゴ、モモ、プラム、アンズ、ブドウの抽出物（特許文献３）、柑橘類から得られるナリンゲニン、ナリンゲニン−７−グルコシド、ナリンジン、ヘスペレチンおよびヘスペリジンからなるフラバノン類（特許文献４）、豆類のダイゼニン（非特許文献３）などが知られているが、これらの脂肪細胞への分化誘導促進効果は十分に満足なものではなかった。
【非特許文献１】Sandouk, T.ら., Americanjournal of physiology, 33, C1600-C1608, 1993
【特許文献１】特表２００４−５１７９３８号公報
【非特許文献２】P. Verrandoら, Biochimica etBiophysica Acta, 663, 255-265, 1981
【特許文献２】特開２００２−１３８０４５号公報
【特許文献３】特開２０００−１８６０４３号公報
【特許文献４】特開平１１−１７１７６６号公報
【非特許文献３】日本農芸化学会誌，71，講演要旨集,1997
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
豊富な食経験があり、前駆脂肪細胞から脂肪細胞への分化誘導促進作用を有する植物由来の破砕物又は抽出物を摂取することにより、インスリン抵抗性糖尿病をはじめとする糖尿病や肥満またはメタボリックシンドロームを防止又は改善することが期待されている。
【００１１】
本発明は、上記事情に鑑みてなされたものであり、脂肪細胞への分化誘導を促進することにより前駆脂肪細胞を脂肪細胞に分化させ、血中の糖を取り込ませることが可能になることにより血糖値の上昇を抑制し、さらにインスリン抵抗性糖尿病を改善し、さらには肥満及びメタボリックシンドロームの発生を予防又は改善する効果に優れる細胞分化促進活性を有する組成物、細胞分化促進剤及び細胞分化促進活性を有する飲食品を提供することを目的としている。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本発明者らは、前駆脂肪細胞から脂肪細胞への細胞分化促進作用を有する植物由来の破砕物又は抽出物の検討を鋭意行い、アブラナ科植物のスプラウトの破砕物又は抽出物にその活性が高いことを見出し、本発明を完成するに至った。
【００１３】
すなわち本発明は、アブラナ科植物のスプラウトから得られることを特徴とする前駆脂肪細胞から脂肪細胞への細胞分化促進活性を有する組成物を要旨とするものであり、好ましくは、アブラナ科植物が、アブラナ属植物であるものである。
【００１４】
別の本発明は、アブラナ科植物のスプラウトを平均粒径１ｍｍ以下に破砕して破砕物を得ることを特徴とする前記した細胞分化促進活性を有する組成物の製造方法を要旨とするものである。
【００１５】
また、別の本発明は、アブラナ科植物のスプラウトから溶媒を用いて抽出物を得ることを特徴とする前記した細胞分化促進活性を有する組成物の製造方法を要旨とするものであり、好ましくは、溶媒が、水、メタノール、エタノール、イソプロパノール、ヘキサン、酢酸エチル、アセトン、エーテル類及び二酸化炭素からなる群から選ばれる１種の溶媒又は２種以上を混合した溶媒であるものである。
【００１６】
別の本発明は、前記した細胞分化促進活性を有する組成物を有効成分とすることを特徴とする前駆脂肪細胞から脂肪細胞への細胞分化促進剤を要旨とするものである。
【００１７】
さらに別の本発明は、前記した細胞分化促進活性を有する組成物を含有することを特徴とする前駆脂肪細胞から脂肪細胞への細胞分化促進活性を有する飲食品を要旨とするものである。
【発明の効果】
【００１８】
本発明によれば、食経験豊かなアブラナ科植物の破砕物又は抽出物を薬学的組成物や食品組成物として利用することにより、糖尿病や関連疾患の進行防止、あるいはこれら疾患の改善が期待できる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１９】
以下、本発明を詳細に説明する。
【００２０】
本発明におけるアブラナ科植物は、世界中に３５属約３０００種が存在するといわれ、ダイコン属やワサビ属、アブラナ属、ナズナ属などが含まれる。
【００２１】
アブラナ属としては、ブロッコリー、ケール、キャベツ、メキャベツ、レッドキャベツ、カラシナ、セイヨウカラシナ、ハボタン、アブラナ、ハクサイ、コマツナ、カリフラワー、カブ、チンゲンサイ、ヤマトマナ、カイラン、ノザワナ、タカナ、スズナ、コールラビ、ワサビなどが挙げられる。
【００２２】
ダイコン属としては、ダイコン、カイワレなどが挙げられ、ワサビ属としては、ワサビなど、セイヨウワサビ属としてはホースラディッシュなどが挙げられる。
【００２３】
これらのアブラナ科植物のうち、本発明においてはアブラナ属に属する植物が好ましく、その中でもブロッコリー、ケール、キャベツが好ましい。ブロッコリーは地中海沿岸が原産の緑黄色野菜であり、ケールの改良品といわれる。またブロッコリーを改良したものがカリフラワーである。これらにはグルコシノレート類をはじめビタミンＣ、カロチン、ビタミンＢ２、カリウム、カルシウム、クロム、食物繊維などを含み、日本には明治時代の初期に渡来し、現在では食経験の豊かな植物として知られている。
【００２４】
本発明においては、上記したアブラナ科植物のスプラウトを用いることが必須となる。ここでスプラウトとは、一般には野菜の新芽を総称する用語であるが、本発明におけるスプラウトは、発芽２〜５日目の１０〜５０ｍｍに成長した全草（芽、子葉、種子、根）を含むものである。中でも芽、子葉が特に好ましい。
【００２５】
本発明の前駆脂肪細胞から脂肪細胞への細胞分化促進活性を有する組成物は、アブラナ科植物のスプラウトから得られるものであって、具体的にはアブラナ科植物のスプラウトを破砕した破砕物または乾燥破砕物や、アブラナ科植物のスプラウトから各種溶媒を用いて抽出した抽出物や該抽出物を濃縮・乾燥したものなどからなるものである。
【００２６】
アブラナ科植物のスプラウトを破砕して破砕物を得るには、予めスプラウトを乾燥することが好ましい。乾燥条件は、特に限定されるものではなく、公知の方法が利用できる。例えば常温乾燥、加熱乾燥や凍結乾燥、減圧乾燥、真空乾燥などの方法が利用でき、好ましくは経済的な３０〜１００℃での加熱乾燥であり、５０〜８０℃での加熱乾燥がさらに好ましい。乾燥機は、例えばドラムドライヤーや流動層式乾燥機、棚式乾燥機、振動乾燥機、ロータリードライヤーなどの機械装置類が挙げられるが特に限定するものではない。
【００２７】
次いで、乾燥したスプラウトを破砕するが、公知の破砕方法が採用できる。得られる破砕物の粒径が１ｍｍ以下になるように破砕することが好ましい。破砕機としては、例えば、乾式石臼式破砕機、ローラーミル、カッターミル、ボールミル、ジェットミル、ハンマーミルなどが挙げられるが特に限定するものではない。
【００２８】
以上のようにして得られたアブラナ科植物のスプラウトの破砕物は、そのままで、あるいは必要に応じて他の成分を加えることで本発明の前記脂肪細胞から脂肪細胞への細胞分化促進活性を有する組成物となる。
【００２９】
また、アブラナ科植物のスプラウトから抽出物を得る際に用いられる抽出溶媒としては、例えば水、二酸化炭素、低級１価アルコール（メチルアルコール、エチルアルコール、１−プロパノール、２−プロパノール、１−ブタノール、２−ブタノール等）、液状多価アルコール（グリセリン、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール等）、低級エステル（酢酸エチル等）、炭化水素（ベンゼン、ヘキサン、ペンタン等）、ケトン類（アセトン、メチルエチルケトン等）、エーテル類（ジエチルエーテル、テトラヒドロフラン、ジプロピルエーテル等）、アセトニトリル等が挙げられ、それらの１種の溶媒又は２種以上を混合した溶媒を用いることができる。好ましくは水、メタノール、エタノール、イソプロパノール、ヘキサン、酢酸エチル、アセトン、エーテル類、二酸化炭素である。
【００３０】
抽出を行うには、スプラウトに溶媒を添加してもよいが、できれば上記したようにスプラウトを破砕した後、破砕物に対して溶媒を添加するほうが好ましい。
【００３１】
抽出温度は、抽出溶媒が液体状態であり、抽出中にスプラウトが腐敗して変質しない条件であれば特に限定しないが、好ましくは４０℃以下であり、さらに好ましくは１０℃以下である。抽出温度は使用する溶媒の種類によって適宜選択すればよい。また抽出時間は５時間以上が好ましく、さらに好ましくは1週間以上であり、最も好ましくは２０日以上である。
【００３２】
抽出後、破砕物と溶媒との混合物は公知の方法によって固液分離し、抽出液のみを回収すればよい。固液分離する方法としては遠心分離、フィルタープレス、吸引ろ過などが挙げられるが特に限定しない。さらに、必要に応じて抽出液を濃縮・乾燥することもできる。
【００３３】
以上のようにして得られたアブラナ科植物のスプラウトの抽出物は、そのままで、あるいは必要に応じて他の成分を加えることで本発明の前駆脂肪細胞から脂肪細胞への細胞分化促進活性を有する組成物となる。
【００３４】
本発明の細胞分化促進活性を有する組成物に含まれ得る他の成分としては、本発明における細胞分化促進活性を低下させないものであれば混合することが可能であり、例えば従来から用いられている薬学的に許容された界面活性剤、溶媒、増粘剤、安定剤、保存料、酸化防止剤、香味料等のような添加剤と混合されることが出来る。
【００３５】
組成物の形態としては、錠剤、液体、カプセル、軟カプセル、ペースト若しくはトローチ、ガム、又は飲用可能な溶液若しくは乳濁液、ドライ経口サプリメント、ウェット経口サプリメントなどが挙げられるがこれらに限定されるものではない。また、これらの形態は従来から知られている方法によって作製することができる。
【００３６】
次に、本発明の前駆脂肪細胞から脂肪細胞への細胞分化促進剤は、上記した本発明の細胞分化促進活性を有する組成物を有効成分として含むものである。該組成物の含有量としては、摂取する対象者の年齢、体重などによって変わり得るが、成人１日あたり0.01〜100mg/kg服用できるように含有するのが好ましく、さらに0.1〜10mg/kgが好ましく、0.5〜5mg/kgが最も好ましい。
【００３７】
本発明の前駆脂肪細胞から脂肪細胞への細胞分化促進剤に含まれる各種添加剤としては、界面活性剤、賦形剤、着色料、保存料、コーティング助剤ならびにこれらの組合せが挙げられる。これら添加剤は、通常の医薬品製造における添加剤であれば特に限定されず、より具体的な例としては、ラクトース、デキストリン、スクロース、マンニトール、コーンスターチ、ソルビトール、結晶性セルロース、ポリビニルピロリドン、デキストリン、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース塩、ステアリン酸及びその塩、タルクなどの添加剤であり、これらの組合せが挙げられる。さらに、香辛料、甘味料などを添加してもよい。またさらに、必要に応じて他の薬剤や食品粉砕物、食品抽出物を添加してもよい。
【００３８】
本発明の細胞分化促進剤の投与剤形も特に限定されず、日本薬局方に従って適切な剤形に製造される。具体的には、カプセル剤、錠剤、粉剤、除放剤などの剤形に製造される。
【００３９】
本発明の前駆脂肪細胞から脂肪細胞への細胞分化促進活性を有する飲食品は、上記した本発明の細胞分化促進活性を有する組成物を含有するものである。該組成物の含有量は１日あたりの摂取量が0.01〜100mg/kgになるようそれぞれの飲食品の形態に合わせて設定すればよく、さらには0.1〜10mg/kgが好ましく、0.5〜5mg/kgが最も好ましい。
【００４０】
本発明の細胞分化促進活性を有する飲食品に混合され得る他の材料としては、一般に食品用材料として使用され得るものが挙げられる。例としては、米、小麦、トウモロコシ、ジャガイモ、昆布などから得られる多糖類、大豆や乳製品、動物原料などから得られるタンパク質、グルコース、ラクトース、フルクトース、スクロース、マンニトール、キシリトールや各種オリゴ糖などの糖類、ならびにこれらの組合せが挙げられる。さらに、香辛料、着色料、甘味料、酸味料、食用油、ビタミンや他の食品破砕物、食品抽出物などを添加してもよい。これら適切な材料および添加剤は単独または組合せて使用される。またさらに、必要に応じて水を添加して所望の形状に加工してもよい。
【００４１】
本発明の飲食品の具体例としては、菓子類（ガム、キャンディー、キャラメル、チョコレート、クッキー、スナック菓子、ゼリー、グミ、錠菓等）、麺類（そば、うどん、ラーメン等）、乳製品（ミルク、アイスクリーム、ヨーグルト等）、調味料（味噌、醤油等）、スープ類、飲料（ジュース、コーヒー、紅茶、茶、炭酸飲料、スポーツ飲料等）をはじめとする一般食品や健康食品（錠剤、カプセル等）、栄養補助食品（栄養ドリンク等）などが挙げられるがこれらに限定されるものではない。また、インスタント食品に本発明の抽出物を添加しても良い。例えば、抽出物を粉末セルロースとともにスプレードライまたは凍結乾燥したものを、粉末、顆粒、打錠または溶液にすることで容易に飲食品に含有させることができる。
【実施例】
【００４２】
以下、本発明を実施例によりさらに詳細に説明する。
【００４３】
なお、前駆脂肪細胞から脂肪細胞への細胞分化促進活性の測定は以下のようにして行った。すなわち、24ウェルのタイタープレートの各ウェルに１０％FBS入りDMEM培地（GIBCO社製、グルコース4.5mg/mL含有）0.5mLと前駆脂肪細胞株3T3-L1細胞（ヒューマンサイエンス振興財団）を2.5×104個加え、コンフルエントになるまで培養する。底部に細胞が付着した各ウェルに１０％FBS入りDMEM培地（グルコース 4.5mg/mL含有）と検体（7.5μl）を添加して6日間培養した。陽性対照としてはインシュリン溶液(終濃度10μg/mL)、デキサメタゾン溶液（終濃度1μM）及びイソブチルメチルキサンチン溶液（終濃度0.5mM）を用いた。陰性対照としては検体の各溶媒を用いた。
【００４４】
約１週間培養を行い、各ウェルの上清を除去して細胞表面をPBS溶液で洗浄した。このウェルに2%トリトン-X100を120μl添加して30分間放置し、プレートに蓋をして15分間超音波処理を行った。細胞破砕液を回収し、細胞内に蓄積されたトリグリセリド含量を測定した。トリグリセリドはLタイプワコーTG/H（和光純薬製）測定キットを使用し、600-700nmの吸光度変化からトリグリセリド量を算出した。
【００４５】
実施例１〔スプラウト抽出物の調製〕
ブロッコリー、ケール、キャベツ、カイワレ、ソバ、緑豆の種子を１５℃〜２５℃の水に浸漬させ、２〜５日間、間接日光照射にて発芽させた後、芽を１０〜３０ｍｍに成長させた全草（芽、種子、根）を80℃で熱風乾燥し、回転刃付ブレンダーで破砕処理を行い、1mm以下の破砕物を得た。この破砕物１ｇに対してエタノール１０ｍｌを添加し、４℃にて室温で5時間攪拌して抽出処理を行った。また、ブロッコリーについてはエタノールに代えて水、メタノール、イソプロパノール、ヘキサン、酢酸エチル、アセトン、ジエチルエーテルそれぞれ単独の溶媒を用いて同様の抽出処理を行った。これらの各抽出物を遠心分離（3000rpm、10分間）して上清を回収し、上清を減圧下で乾燥させ、本発明の細胞分化促進活性を有する組成物を得た。固形分含量を測定した後、この乾燥物を再度、各抽出溶媒１０ｍｌに溶解し、細胞分化促進活性を測定した。
【００４６】
結果を表１に示した。表１の結果から、アブラナ科植物のスプラウトの水、アルコール類及びアセトン抽出物には強い細胞分化促進活性があり、中でもブロッコリーが最も効果が高かった。
【００４７】
【表１】
【００４８】
実施例２
上記実施例１で得たブロッコリースプラウトのエタノール抽出物を終固形分濃度が２５、５０、２００μg/mlとなるように加える以外は同様にして、3T3-L1細胞を用いてトリグリセリドを細胞内に蓄積させ、トリグリセリド量を測定した。結果を表２に示した。表２の結果から、ブロッコリースプラウトのエタノール抽出画分は濃度依存的に細胞分化促進活性が高くなることが明らかとなった。また破砕前の細胞を顕微鏡下で観察すると、細胞内に油滴を蓄積している状況が確認され、分化誘導されていることが確認された。
【００４９】
【表２】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、前駆脂肪細胞から脂肪細胞への細胞分化促進活性を有する組成物及びその製造方法並びに前駆脂肪細胞から脂肪細胞への細胞分化促進剤などに関するものであり、さらに詳しくは、インスリン抵抗性の改善等に有効な安全性の高い、前駆脂肪細胞から脂肪細胞への細胞分化促進活性を有する組成物に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
飽食化や食生活様式の変化（高脂肪食）、社会生活の変化に伴う肉体労働の減少、運動習慣の減少、ストレスが原因で引き起こされる過食や暴飲暴食などにより、現代人は肥満になりやすく、結果として糖尿病やさらに深刻なメタボリックシンドーム（高脂血症、高血圧、動脈硬化性疾患、高インスリン血症、高トリグリセリド血症、高LDL血症、耐糖能異常など）などを引き起こしやすくなっている。体脂肪の蓄積は脂肪細胞中への脂肪の取り込みによるものであり、この脂肪細胞数を調節することにより、脂肪の取り込みも調節することが可能である。
【０００３】
脂肪細胞には白色脂肪細胞と褐色脂肪細胞があり、両細胞は生体の特徴的な部位で発生・分化し組織を形成する。通常、脂肪細胞といえば白色脂肪細胞を指し、本発明でも白色脂肪細胞を脂肪細胞と称する。
【０００４】
脂肪細胞は全身に広く分布し、生体内において脂質代謝を中心に活発な代謝機能を有する細胞であり、この細胞は前駆脂肪細胞に対して特定の誘導因子（分化調節作用を有する物質）が働きかけることにより形成されるものである。前駆脂肪細胞は、糖や脂質を処理する能力が著しく弱いが、細胞分化を起こして脂肪細胞へ分化すると、糖や脂質を処理して中性脂肪（トリグリセリド）として細胞内に貯える能力が高くなり、しかもインスリンなどのホルモンに対する感受性も獲得する。
【０００５】
血中の糖を吸収できる脂肪細胞が、既に脂肪で飽和している場合、インスリンが分泌されているにもかかわらず、血中の糖が消費されにくくなるという現象が起きる。このため、血糖値が上昇し、糖尿病を引き起こすと考えられている。経口糖尿病治療剤であるインスリン抵抗性改善剤として知られるチアゾリジン誘導体は、前駆脂肪細胞の分化誘導を転写レベルで促進する。前駆脂肪細胞の分化を促進することにより、血中の糖を取り込むことのできる脂肪細胞を増殖させ、血糖値を低下させ糖尿病を回避できるのではないかと考えられている。
【０００６】
前駆脂肪細胞から脂肪細胞への分化誘導物質は、食用、飲用などにおける経口摂取による内服或いは、皮膚への塗布又は浴用剤等の経皮吸収による外用でのインスリン抵抗性糖尿病をはじめとする糖尿病及び肥満または肥満が原因で引き起こされるメタボリックシンドローム（高脂血症、高血圧、動脈硬化性疾患、高インスリン血症、高トリグリセリド血症、高LDL血症、耐糖能異常など）の防止及び治療効果を期待することができる。
【０００７】
脂肪細胞への細胞分化を促進させる物質としては、チアゾリン誘導体であるピオグリタゾンが報告されている（非特許文献１)。非特許文献１によると、前駆脂肪細胞から脂肪細胞へ分化を促進させると、脂肪組織などの末梢（脂肪組織）でのインスリン活性を高めることになり、それで血糖値が低下すると考えられている。また、ベンゾピランカルボン酸（特許文献１）、クロフィブラートにも同様の作用があることが解明されている（非特許文献２)。
【０００８】
しかしながら、これらの合成化合物は、いずれも人体に対して有害な副作用を引き起こす可能性があり、実用化には大きな問題を抱えている。このため、人体に対して有害な副作用を生じさせることなく、優れた分化促進効果を発揮する物質の開発が待望されている。
【０００９】
経口での摂取が可能で、食経験豊かな食品由来の抽出物などにこのような脂肪細胞への分化を促進する効果が報告されている。例えば、アケビ、オランダビユ、カバ、キャラウェー、クコ、ホウノキ、ユズの抽出物（特許文献２）、リンゴ、モモ、プラム、アンズ、ブドウの抽出物（特許文献３）、柑橘類から得られるナリンゲニン、ナリンゲニン−７−グルコシド、ナリンジン、ヘスペレチンおよびヘスペリジンからなるフラバノン類（特許文献４）、豆類のダイゼニン（非特許文献３）などが知られているが、これらの脂肪細胞への分化誘導促進効果は十分に満足なものではなかった。
【非特許文献１】Sandouk, T.ら., Americanjournal of physiology, 33, C1600-C1608, 1993
【特許文献１】特表２００４−５１７９３８号公報
【非特許文献２】P. Verrandoら, Biochimica etBiophysica Acta, 663, 255-265, 1981
【特許文献２】特開２００２−１３８０４５号公報
【特許文献３】特開２０００−１８６０４３号公報
【特許文献４】特開平１１−１７１７６６号公報
【非特許文献３】日本農芸化学会誌，71，講演要旨集,1997
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
豊富な食経験があり、前駆脂肪細胞から脂肪細胞への分化誘導促進作用を有する植物由来の破砕物又は抽出物を摂取することにより、インスリン抵抗性糖尿病をはじめとする糖尿病や肥満またはメタボリックシンドロームを防止又は改善することが期待されている。
【００１１】
本発明は、上記事情に鑑みてなされたものであり、脂肪細胞への分化誘導を促進することにより前駆脂肪細胞を脂肪細胞に分化させ、血中の糖を取り込ませることが可能になることにより血糖値の上昇を抑制し、さらにインスリン抵抗性糖尿病を改善し、さらには肥満及びメタボリックシンドロームの発生を予防又は改善する効果に優れる細胞分化促進活性を有する組成物、細胞分化促進剤及び細胞分化促進活性を有する飲食品を提供することを目的としている。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本発明者らは、前駆脂肪細胞から脂肪細胞への細胞分化促進作用を有する植物由来の破砕物又は抽出物の検討を鋭意行い、アブラナ科植物のスプラウトの破砕物又は抽出物にその活性が高いことを見出し、本発明を完成するに至った。
【００１３】
すなわち本発明は、アブラナ科植物のスプラウトから得られることを特徴とする前駆脂肪細胞から脂肪細胞への細胞分化促進活性を有する組成物を要旨とするものであり、好ましくは、アブラナ科植物が、アブラナ属植物であるものである。
【００１４】
別の本発明は、アブラナ科植物のスプラウトを平均粒径１ｍｍ以下に破砕して破砕物を得ることを特徴とする前記した細胞分化促進活性を有する組成物の製造方法を要旨とするものである。
【００１５】
また、別の本発明は、アブラナ科植物のスプラウトから溶媒を用いて抽出物を得ることを特徴とする前記した細胞分化促進活性を有する組成物の製造方法を要旨とするものであり、好ましくは、溶媒が、水、メタノール、エタノール、イソプロパノール、ヘキサン、酢酸エチル、アセトン、エーテル類及び二酸化炭素からなる群から選ばれる１種の溶媒又は２種以上を混合した溶媒であるものである。
【００１６】
別の本発明は、前記した細胞分化促進活性を有する組成物を有効成分とすることを特徴とする前駆脂肪細胞から脂肪細胞への細胞分化促進剤を要旨とするものである。
【００１７】
さらに別の本発明は、前記した細胞分化促進活性を有する組成物を含有することを特徴とする前駆脂肪細胞から脂肪細胞への細胞分化促進活性を有する飲食品を要旨とするものである。
【発明の効果】
【００１８】
本発明によれば、食経験豊かなアブラナ科植物の破砕物又は抽出物を薬学的組成物や食品組成物として利用することにより、糖尿病や関連疾患の進行防止、あるいはこれら疾患の改善が期待できる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１９】
以下、本発明を詳細に説明する。
【００２０】
本発明におけるアブラナ科植物は、世界中に３５属約３０００種が存在するといわれ、ダイコン属やワサビ属、アブラナ属、ナズナ属などが含まれる。
【００２１】
アブラナ属としては、ブロッコリー、ケール、キャベツ、メキャベツ、レッドキャベツ、カラシナ、セイヨウカラシナ、ハボタン、アブラナ、ハクサイ、コマツナ、カリフラワー、カブ、チンゲンサイ、ヤマトマナ、カイラン、ノザワナ、タカナ、スズナ、コールラビ、ワサビなどが挙げられる。
【００２２】
ダイコン属としては、ダイコン、カイワレなどが挙げられ、ワサビ属としては、ワサビなど、セイヨウワサビ属としてはホースラディッシュなどが挙げられる。
【００２３】
これらのアブラナ科植物のうち、本発明においてはアブラナ属に属する植物が好ましく、その中でもブロッコリー、ケール、キャベツが好ましい。ブロッコリーは地中海沿岸が原産の緑黄色野菜であり、ケールの改良品といわれる。またブロッコリーを改良したものがカリフラワーである。これらにはグルコシノレート類をはじめビタミンＣ、カロチン、ビタミンＢ２、カリウム、カルシウム、クロム、食物繊維などを含み、日本には明治時代の初期に渡来し、現在では食経験の豊かな植物として知られている。
【００２４】
本発明においては、上記したアブラナ科植物のスプラウトを用いることが必須となる。ここでスプラウトとは、一般には野菜の新芽を総称する用語であるが、本発明におけるスプラウトは、発芽２〜５日目の１０〜５０ｍｍに成長した全草（芽、子葉、種子、根）を含むものである。中でも芽、子葉が特に好ましい。
【００２５】
本発明の前駆脂肪細胞から脂肪細胞への細胞分化促進活性を有する組成物は、アブラナ科植物のスプラウトから得られるものであって、具体的にはアブラナ科植物のスプラウトを破砕した破砕物または乾燥破砕物や、アブラナ科植物のスプラウトから各種溶媒を用いて抽出した抽出物や該抽出物を濃縮・乾燥したものなどからなるものである。
【００２６】
アブラナ科植物のスプラウトを破砕して破砕物を得るには、予めスプラウトを乾燥することが好ましい。乾燥条件は、特に限定されるものではなく、公知の方法が利用できる。例えば常温乾燥、加熱乾燥や凍結乾燥、減圧乾燥、真空乾燥などの方法が利用でき、好ましくは経済的な３０〜１００℃での加熱乾燥であり、５０〜８０℃での加熱乾燥がさらに好ましい。乾燥機は、例えばドラムドライヤーや流動層式乾燥機、棚式乾燥機、振動乾燥機、ロータリードライヤーなどの機械装置類が挙げられるが特に限定するものではない。
【００２７】
次いで、乾燥したスプラウトを破砕するが、公知の破砕方法が採用できる。得られる破砕物の粒径が１ｍｍ以下になるように破砕することが好ましい。破砕機としては、例えば、乾式石臼式破砕機、ローラーミル、カッターミル、ボールミル、ジェットミル、ハンマーミルなどが挙げられるが特に限定するものではない。
【００２８】
以上のようにして得られたアブラナ科植物のスプラウトの破砕物は、そのままで、あるいは必要に応じて他の成分を加えることで本発明の前記脂肪細胞から脂肪細胞への細胞分化促進活性を有する組成物となる。
【００２９】
また、アブラナ科植物のスプラウトから抽出物を得る際に用いられる抽出溶媒としては、例えば水、二酸化炭素、低級１価アルコール（メチルアルコール、エチルアルコール、１−プロパノール、２−プロパノール、１−ブタノール、２−ブタノール等）、液状多価アルコール（グリセリン、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール等）、低級エステル（酢酸エチル等）、炭化水素（ベンゼン、ヘキサン、ペンタン等）、ケトン類（アセトン、メチルエチルケトン等）、エーテル類（ジエチルエーテル、テトラヒドロフラン、ジプロピルエーテル等）、アセトニトリル等が挙げられ、それらの１種の溶媒又は２種以上を混合した溶媒を用いることができる。好ましくは水、メタノール、エタノール、イソプロパノール、ヘキサン、酢酸エチル、アセトン、エーテル類、二酸化炭素である。
【００３０】
抽出を行うには、スプラウトに溶媒を添加してもよいが、できれば上記したようにスプラウトを破砕した後、破砕物に対して溶媒を添加するほうが好ましい。
【００３１】
抽出温度は、抽出溶媒が液体状態であり、抽出中にスプラウトが腐敗して変質しない条件であれば特に限定しないが、好ましくは４０℃以下であり、さらに好ましくは１０℃以下である。抽出温度は使用する溶媒の種類によって適宜選択すればよい。また抽出時間は５時間以上が好ましく、さらに好ましくは1週間以上であり、最も好ましくは２０日以上である。
【００３２】
抽出後、破砕物と溶媒との混合物は公知の方法によって固液分離し、抽出液のみを回収すればよい。固液分離する方法としては遠心分離、フィルタープレス、吸引ろ過などが挙げられるが特に限定しない。さらに、必要に応じて抽出液を濃縮・乾燥することもできる。
【００３３】
以上のようにして得られたアブラナ科植物のスプラウトの抽出物は、そのままで、あるいは必要に応じて他の成分を加えることで本発明の前駆脂肪細胞から脂肪細胞への細胞分化促進活性を有する組成物となる。
【００３４】
本発明の細胞分化促進活性を有する組成物に含まれ得る他の成分としては、本発明における細胞分化促進活性を低下させないものであれば混合することが可能であり、例えば従来から用いられている薬学的に許容された界面活性剤、溶媒、増粘剤、安定剤、保存料、酸化防止剤、香味料等のような添加剤と混合されることが出来る。
【００３５】
組成物の形態としては、錠剤、液体、カプセル、軟カプセル、ペースト若しくはトローチ、ガム、又は飲用可能な溶液若しくは乳濁液、ドライ経口サプリメント、ウェット経口サプリメントなどが挙げられるがこれらに限定されるものではない。また、これらの形態は従来から知られている方法によって作製することができる。
【００３６】
次に、本発明の前駆脂肪細胞から脂肪細胞への細胞分化促進剤は、上記した本発明の細胞分化促進活性を有する組成物を有効成分として含むものである。該組成物の含有量としては、摂取する対象者の年齢、体重などによって変わり得るが、成人１日あたり0.01〜100mg/kg服用できるように含有するのが好ましく、さらに0.1〜10mg/kgが好ましく、0.5〜5mg/kgが最も好ましい。
【００３７】
本発明の前駆脂肪細胞から脂肪細胞への細胞分化促進剤に含まれる各種添加剤としては、界面活性剤、賦形剤、着色料、保存料、コーティング助剤ならびにこれらの組合せが挙げられる。これら添加剤は、通常の医薬品製造における添加剤であれば特に限定されず、より具体的な例としては、ラクトース、デキストリン、スクロース、マンニトール、コーンスターチ、ソルビトール、結晶性セルロース、ポリビニルピロリドン、デキストリン、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース塩、ステアリン酸及びその塩、タルクなどの添加剤であり、これらの組合せが挙げられる。さらに、香辛料、甘味料などを添加してもよい。またさらに、必要に応じて他の薬剤や食品粉砕物、食品抽出物を添加してもよい。
【００３８】
本発明の細胞分化促進剤の投与剤形も特に限定されず、日本薬局方に従って適切な剤形に製造される。具体的には、カプセル剤、錠剤、粉剤、除放剤などの剤形に製造される。
【００３９】
本発明の前駆脂肪細胞から脂肪細胞への細胞分化促進活性を有する飲食品は、上記した本発明の細胞分化促進活性を有する組成物を含有するものである。該組成物の含有量は１日あたりの摂取量が0.01〜100mg/kgになるようそれぞれの飲食品の形態に合わせて設定すればよく、さらには0.1〜10mg/kgが好ましく、0.5〜5mg/kgが最も好ましい。
【００４０】
本発明の細胞分化促進活性を有する飲食品に混合され得る他の材料としては、一般に食品用材料として使用され得るものが挙げられる。例としては、米、小麦、トウモロコシ、ジャガイモ、昆布などから得られる多糖類、大豆や乳製品、動物原料などから得られるタンパク質、グルコース、ラクトース、フルクトース、スクロース、マンニトール、キシリトールや各種オリゴ糖などの糖類、ならびにこれらの組合せが挙げられる。さらに、香辛料、着色料、甘味料、酸味料、食用油、ビタミンや他の食品破砕物、食品抽出物などを添加してもよい。これら適切な材料および添加剤は単独または組合せて使用される。またさらに、必要に応じて水を添加して所望の形状に加工してもよい。
【００４１】
本発明の飲食品の具体例としては、菓子類（ガム、キャンディー、キャラメル、チョコレート、クッキー、スナック菓子、ゼリー、グミ、錠菓等）、麺類（そば、うどん、ラーメン等）、乳製品（ミルク、アイスクリーム、ヨーグルト等）、調味料（味噌、醤油等）、スープ類、飲料（ジュース、コーヒー、紅茶、茶、炭酸飲料、スポーツ飲料等）をはじめとする一般食品や健康食品（錠剤、カプセル等）、栄養補助食品（栄養ドリンク等）などが挙げられるがこれらに限定されるものではない。また、インスタント食品に本発明の抽出物を添加しても良い。例えば、抽出物を粉末セルロースとともにスプレードライまたは凍結乾燥したものを、粉末、顆粒、打錠または溶液にすることで容易に飲食品に含有させることができる。
【実施例】
【００４２】
以下、本発明を実施例によりさらに詳細に説明する。
【００４３】
なお、前駆脂肪細胞から脂肪細胞への細胞分化促進活性の測定は以下のようにして行った。すなわち、24ウェルのタイタープレートの各ウェルに１０％FBS入りDMEM培地（GIBCO社製、グルコース4.5mg/mL含有）0.5mLと前駆脂肪細胞株3T3-L1細胞（ヒューマンサイエンス振興財団）を2.5×104個加え、コンフルエントになるまで培養する。底部に細胞が付着した各ウェルに１０％FBS入りDMEM培地（グルコース 4.5mg/mL含有）と検体（7.5μl）を添加して6日間培養した。陽性対照としてはインシュリン溶液(終濃度10μg/mL)、デキサメタゾン溶液（終濃度1μM）及びイソブチルメチルキサンチン溶液（終濃度0.5mM）を用いた。陰性対照としては検体の各溶媒を用いた。
【００４４】
約１週間培養を行い、各ウェルの上清を除去して細胞表面をPBS溶液で洗浄した。このウェルに2%トリトン-X100を120μl添加して30分間放置し、プレートに蓋をして15分間超音波処理を行った。細胞破砕液を回収し、細胞内に蓄積されたトリグリセリド含量を測定した。トリグリセリドはLタイプワコーTG/H（和光純薬製）測定キットを使用し、600-700nmの吸光度変化からトリグリセリド量を算出した。
【００４５】
実施例１〔スプラウト抽出物の調製〕
ブロッコリー、ケール、キャベツ、カイワレ、ソバ、緑豆の種子を１５℃〜２５℃の水に浸漬させ、２〜５日間、間接日光照射にて発芽させた後、芽を１０〜３０ｍｍに成長させた全草（芽、種子、根）を80℃で熱風乾燥し、回転刃付ブレンダーで破砕処理を行い、1mm以下の破砕物を得た。この破砕物１ｇに対してエタノール１０ｍｌを添加し、４℃にて室温で5時間攪拌して抽出処理を行った。また、ブロッコリーについてはエタノールに代えて水、メタノール、イソプロパノール、ヘキサン、酢酸エチル、アセトン、ジエチルエーテルそれぞれ単独の溶媒を用いて同様の抽出処理を行った。これらの各抽出物を遠心分離（3000rpm、10分間）して上清を回収し、上清を減圧下で乾燥させ、本発明の細胞分化促進活性を有する組成物を得た。固形分含量を測定した後、この乾燥物を再度、各抽出溶媒１０ｍｌに溶解し、細胞分化促進活性を測定した。
【００４６】
結果を表１に示した。表１の結果から、アブラナ科植物のスプラウトの水、アルコール類及びアセトン抽出物には強い細胞分化促進活性があり、中でもブロッコリーが最も効果が高かった。
【００４７】
【表１】
【００４８】
実施例２
上記実施例１で得たブロッコリースプラウトのエタノール抽出物を終固形分濃度が２５、５０、２００μg/mlとなるように加える以外は同様にして、3T3-L1細胞を用いてトリグリセリドを細胞内に蓄積させ、トリグリセリド量を測定した。結果を表２に示した。表２の結果から、ブロッコリースプラウトのエタノール抽出画分は濃度依存的に細胞分化促進活性が高くなることが明らかとなった。また破砕前の細胞を顕微鏡下で観察すると、細胞内に油滴を蓄積している状況が確認され、分化誘導されていることが確認された。
【００４９】
【表２】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
アブラナ科植物のスプラウトから得られることを特徴とする前駆脂肪細胞から脂肪細胞への細胞分化促進活性を有する組成物。
【請求項２】
アブラナ科植物が、アブラナ属植物である請求項１記載の細胞分化促進活性を有する組成物。
【請求項３】
アブラナ科植物のスプラウトを平均粒径１ｍｍ以下に破砕して破砕物を得ることを特徴とする請求項１又は２記載の細胞分化促進活性を有する組成物の製造方法。
【請求項４】
アブラナ科植物のスプラウトから溶媒を用いて抽出物を得ることを特徴とする請求項１又は２記載の細胞分化促進活性を有する組成物の製造方法。
【請求項５】
溶媒が、水、メタノール、エタノール、イソプロパノール、ヘキサン、酢酸エチル、アセトン、エーテル類及び二酸化炭素からなる群から選ばれる１種の溶媒又は２種以上を混合した溶媒である請求項４記載の細胞分化促進活性を有する組成物の製造方法。
【請求項６】
請求項１又は２記載の組成物を有効成分とすることを特徴とする前駆脂肪細胞から脂肪細胞への細胞分化促進剤。
【請求項７】
請求項１又は２記載の組成物を含有することを特徴とする前駆脂肪細胞から脂肪細胞への細胞分化促進活性を有する飲食品。
【請求項１】
アブラナ科植物のスプラウトから得られることを特徴とする前駆脂肪細胞から脂肪細胞への細胞分化促進活性を有する組成物。
【請求項２】
アブラナ科植物が、アブラナ属植物である請求項１記載の細胞分化促進活性を有する組成物。
【請求項３】
アブラナ科植物のスプラウトを平均粒径１ｍｍ以下に破砕して破砕物を得ることを特徴とする請求項１又は２記載の細胞分化促進活性を有する組成物の製造方法。
【請求項４】
アブラナ科植物のスプラウトから溶媒を用いて抽出物を得ることを特徴とする請求項１又は２記載の細胞分化促進活性を有する組成物の製造方法。
【請求項５】
溶媒が、水、メタノール、エタノール、イソプロパノール、ヘキサン、酢酸エチル、アセトン、エーテル類及び二酸化炭素からなる群から選ばれる１種の溶媒又は２種以上を混合した溶媒である請求項４記載の細胞分化促進活性を有する組成物の製造方法。
【請求項６】
請求項１又は２記載の組成物を有効成分とすることを特徴とする前駆脂肪細胞から脂肪細胞への細胞分化促進剤。
【請求項７】
請求項１又は２記載の組成物を含有することを特徴とする前駆脂肪細胞から脂肪細胞への細胞分化促進活性を有する飲食品。
【公開番号】特開２００７−７０２７４（Ｐ２００７−７０２７４Ａ）
【公開日】平成１９年３月２２日（２００７．３．２２）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００５−２５７８５９（Ｐ２００５−２５７８５９）
【出願日】平成１７年９月６日（２００５．９．６）
【出願人】（０００００４５０３）ユニチカ株式会社 (1,214)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成１９年３月２２日（２００７．３．２２）
【国際特許分類】
【出願日】平成１７年９月６日（２００５．９．６）
【出願人】（０００００４５０３）ユニチカ株式会社 (1,214)
【Ｆターム（参考）】
[ Back to top ]