本発明は、様々なヒト疾患、特に望しくない細胞が大量または過剰にあることによって特徴づけられる疾患の治療のための、コレラ菌由来の組換え外毒素を特徴とする。

【特許請求の範囲】
【請求項１】
SEQ ID NO: 1と80％よりも高い配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、組換えコレラ菌（Vibrio cholerae）外毒素（VCE）。
【請求項２】
前記アミノ酸配列がSEQ ID NO: 1と90％よりも高い配列同一性を有する、請求項1記載のVCE。
【請求項３】
前記アミノ酸配列がSEQ ID NO: 1と95％よりも高い同一性を有する、請求項1記載のVCE。
【請求項４】
前記アミノ酸配列がSEQ ID NO: 1と100％の配列同一性を有する、請求項1記載のVCE。
【請求項５】
請求項1記載のVCEをコードする配列を含むベクター。
【請求項６】
請求項1記載のVCEをコードする配列を含む宿主細胞。
【請求項７】
請求項1記載のVCEに特異的に結合する抗体。
【請求項８】
モノクローナル抗体である、請求項7記載の抗体。
【請求項９】
VCEの断片を含むタンパク質であって、該断片がSEQ ID NO: 2と80％よりも高い配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、タンパク質。
【請求項１０】
前記断片がSEQ ID NO: 2と90％よりも高い配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項9記載のタンパク質。
【請求項１１】
前記断片がSEQ ID NO: 2と95％よりも高い配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項9記載のタンパク質。
【請求項１２】
前記断片がSEQ ID NO: 2と100％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項9記載のタンパク質。
【請求項１３】
前記断片がADPリボシル化活性を含む、請求項9記載のタンパク質。
【請求項１４】
細胞膜トランスロケーション活性を含む、請求項13記載のタンパク質。
【請求項１５】
前記断片が前記細胞膜トランスロケーション活性を有するVCE細胞膜トランスロケーションドメインを含む、請求項14記載のタンパク質。
【請求項１６】
前記断片の天然のフリン切断部位が修飾可能な活性化ドメインで置き換えられており、該修飾可能な活性化ドメインが外因性酵素の基質を含む、請求項15記載のタンパク質。
【請求項１７】
前記修飾可能な活性化ドメインがグランザイムB活性の基質を含む、請求項16記載のタンパク質。
【請求項１８】
VCE細胞結合ドメインを含まない、請求項14記載のタンパク質。
【請求項１９】
請求項9記載のタンパク質をコードする配列を含むベクター。
【請求項２０】
請求項9記載のタンパク質をコードする配列を含む宿主細胞。
【請求項２１】
請求項9記載のタンパク質を特異的に結合する抗体。
【請求項２２】
融合タンパク質である、請求項9記載のタンパク質。
【請求項２３】
非天然の細胞標的化部分を含む、請求項22記載の融合タンパク質。
【請求項２４】
前記非天然の細胞標的化部分が抗体、またはその機能性断片である、請求項23記載の融合タンパク質。
【請求項２５】
前記非天然の細胞標的化部分が人工的に多様化したポリペプチド結合因子である、請求項23記載の融合タンパク質。
【請求項２６】
前記非天然の細胞標的化部分が受容体のリガンドである、請求項23記載の融合タンパク質。
【請求項２７】
前記非天然の細胞標的化部分が、癌細胞上で発現される細胞表面標的を認識する、請求項23記載の融合タンパク質。
【請求項２８】
前記非天然の細胞標的化部分が、造血細胞、リンパ球、および侵害受容ニューロンからなる群より選択される細胞を認識する、請求項23記載の融合タンパク質。
【請求項２９】
修飾可能な活性化ドメインをさらに含む融合タンパク質であって、該修飾可能な活性化ドメインが外因性酵素の基質を含む、請求項22記載の融合タンパク質。
【請求項３０】
前記酵素がプロテアーゼである、請求項29記載の融合タンパク質。
【請求項３１】
前記プロテアーゼが外因性ヒトプロテアーゼである、請求項30記載の融合タンパク質。
【請求項３２】
前記プロテアーゼが非ヒトプロテアーゼである、請求項30記載の融合タンパク質。
【請求項３３】
前記プロテアーゼが非哺乳動物プロテアーゼである、請求項32記載の融合タンパク質。
【請求項３４】
前記プロテアーゼがウイルスプロテアーゼである、請求項33記載の融合タンパク質。
【請求項３５】
前記修飾可能な活性化ドメインがプロテアーゼ切断部位の翻訳後修飾を含む、請求項29記載の融合タンパク質。
【請求項３６】
前記修飾可能な活性化ドメインが翻訳後修飾を除去可能な酵素の基質を含む、請求項29記載の融合タンパク質。
【請求項３７】
前記修飾可能な活性化ドメインがグランザイムB活性の基質を含む、請求項29記載の融合タンパク質。
【請求項３８】
標的細胞を破壊する方法であって、該標的細胞をVCEの断片を含むタンパク質と接触させる段階を含み、該断片はSEQ ID NO: 2と80％よりも高い配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、方法。
【請求項３９】
前記断片がSEQ ID NO: 2と90％よりも高い配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項38記載の方法。
【請求項４０】
前記断片がSEQ ID NO: 2と95％よりも高い配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項38記載の方法。
【請求項４１】
前記断片がSEQ ID NO: 2と100％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項38記載の方法。
【請求項４２】
前記断片がADPリボシル化活性を含む、請求項38記載の方法。
【請求項４３】
タンパク質が細胞膜トランスロケーション活性を含む、請求項42記載の方法。
【請求項４４】
前記断片が前記細胞膜トランスロケーション活性を有するVCE細胞膜トランスロケーションドメインを含む、請求項43記載の方法。
【請求項４５】
前記断片の天然のフリン切断部位が修飾可能な活性化ドメインで置き換えられており、該修飾可能な活性化ドメインが外因性酵素の基質を含む、請求項44記載の方法。
【請求項４６】
前記修飾可能な活性化ドメインがグランザイムB活性の基質を含む、請求項45記載の方法。
【請求項４７】
前記タンパク質がVCE細胞結合ドメインを含まない、請求項43記載の方法。
【請求項４８】
前記タンパク質が融合タンパク質である、請求項38記載の方法。
【請求項４９】
前記融合タンパク質が非天然の細胞標的化部分を含む、請求項48記載の方法。
【請求項５０】
前記非天然の細胞標的化部分が抗体、またはその機能性断片である、請求項49記載の方法。
【請求項５１】
前記非天然の細胞標的化部分が人工的に多様化したポリペプチド結合因子である、請求項49記載の方法。
【請求項５２】
前記非天然の細胞標的化部分が受容体のリガンドである、請求項49記載の方法。
【請求項５３】
前記非天然の細胞標的化部分が癌細胞上で発現される細胞表面標的を認識する、請求項49記載の方法。
【請求項５４】
前記非天然の細胞標的化部分が造血細胞、リンパ球、および侵害受容ニューロンからなる群より選択される細胞を認識する、請求項49記載の方法。
【請求項５５】
修飾可能な活性化ドメインをさらに含み、該修飾可能な活性化ドメインは外因性酵素の基質を含む、請求項48記載の方法。
【請求項５６】
前記酵素がプロテアーゼである、請求項55記載の方法。
【請求項５７】
前記プロテアーゼが外因性ヒトプロテアーゼである、請求項56記載の方法。
【請求項５８】
前記プロテアーゼが非ヒトプロテアーゼである、請求項56記載の融合タンパク質。
【請求項５９】
前記プロテアーゼが非哺乳動物プロテアーゼである、請求項58記載の方法。
【請求項６０】
前記プロテアーゼがウイルスプロテアーゼである、請求項59記載の方法。
【請求項６１】
前記修飾可能な活性化ドメインがプロテアーゼ切断部位の翻訳後修飾を含む、請求項55記載の方法。
【請求項６２】
前記修飾可能な活性化ドメインが翻訳後修飾を除去可能な酵素の基質を含む、請求項55記載の方法。
【請求項６３】
前記修飾可能な活性化ドメインがグランザイムB活性の基質を含む、請求項55記載の方法。

【図１】

【図２】

【図３】

【図４】

【図５】

【図６】

【図７】

【図８】

【図９】

【図１０】

【図１１】

【図１２】

【図１３】

【公表番号】特表２０１０−５３４０６１（Ｐ２０１０−５３４０６１Ａ）
【公表日】平成２２年１１月４日（２０１０．１１．４）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１０−５１７０２３（Ｐ２０１０−５１７０２３）
【出願日】平成２０年７月１８日（２００８．７．１８）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００８／００８７８６
【国際公開番号】ＷＯ２００９／０１４６５０
【国際公開日】平成２１年１月２９日（２００９．１．２９）
【出願人】（５９２０１７６３３）ザ　ジェネラル　ホスピタル　コーポレイション (177)
【Ｆターム（参考）】