繊維性基体の表面を被覆する方法
テキスタイル基体及び革から選ばれる繊維性基体が、少なくとも１種のヒドロホビンを使用して被覆される。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、テキスタイル基体及び革から選ばれる繊維性基体の表面を、少なくとも１種のヒドロホビンを使用して被覆する方法に関する。更に、本発明は、テキスタイル基体及び革から選ばれる、被覆された繊維性基体に関し、及び本発明に従う繊維性基体を使用してガーメントを製造する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
テキスタイル、例えば、ポリエステル、ポリアクリル、ポリアミドを、「ふわふわ」した感触で使用するために、プロテイン（protein）又はポリペプチド、特に水中に溶解した酸化ウールで処理することが、特許文献１（ＷＯ０２／５９４１３）から公知である。しかし、特許文献１（ＷＯ０２／５９４１３）に従って仕上られたテキスタイルが、第１に、不愉快な手触りを有していることがしばしば観察されている。また、一工程製造（単独工程での製造）で、均一な塗装（施し）を行なうことが困難であることも観察されている（１０頁）。均一な塗装を行う上での、この困難性を回避するために、特にエピクロロヒドリンを使用した非常に複雑な多工程が提案されている。しかしながら、エピクロロヒドリンの使用は、通常、望ましくない。
【０００３】
【特許文献１】ＷＯ０２／５９４１３
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本発明の目的は、従来技術の不利な点が回避可能な方法を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
この目的は、冒頭に述べた方法によって達成されることが見出された。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００６】
冒頭に定義した方法は、１つ以上の表面（この表面は、平坦であって良く、又は織られたものであって良い。）から開始される。被覆されるべき表面は、テキスタイル基体及び革から選ばれる繊維性基体の一部を形成する。
【０００７】
本発明の目的のためのテキスタイル基体は、テキスタイルファイバー、テキスタイル中間体、及び最終製造物及びこれらから製造された、仕上られた製品であり、これらには、服装工業用のテキスタイルと同様、例えば、カーペット及び他のホームテキスタイル及び工業的な目的のためのテキスタイル構造物が含まれる。これらは、例えば、ステープル等の形ができあがっていない構造物、ツイン、フィラメント、ヤーン、ライン、ストリング、レース、ブライド、縄類等の線状構造物、及び例えば、フェルト、織布（woven）、形成−ループニット、不織布、及び詰綿等の３次元構造物を含む。テキスタイル基体は、天然由来の材料であって良く、例えば、コットン、ウール、又は亜麻、又はブレンドの材料であって良く、例えば、コットン／ポリエステル、コットン／ポリアミドであって良い。好ましくは、本発明の目的のために、テキスタイル／複数種類のテキスタイルは、ポリアクリロニトリル、ポリアミド、及び特に、ポリエステル、又は以下のブレンド、すなわち、天然由来の材料とポリアクリロニトリル、ポリアミド及び特にポリエステルのブレンドである。
【０００８】
本発明の目的のための革は、なめした、又は仕上られた動物の皮（hide）が好ましく、及びいわゆるスプリットレザー（split leather）も好ましい。
【０００９】
本発明の目的のための被覆は、本発明に従い被覆されるべき基体の面積の少なくとも１０％、好ましくは少なくとも２５％、及びより好ましくは少なくとも５０％を覆う（カバーする）少なくとも１種のヒドロホビンの単分子層（monomolecular layer）を意味する。繊維性基体の被覆の程度は、通常の方法、例えば顕微鏡による手法によって測定される。
【００１０】
本発明は、繊維性基体の被覆表面用に、少なくとも１種のヒドロホビンを使用する。単一種のヒドロホビンを使用可能であり、又は異なる複数種類のヒドロホビンを使用することが可能である。
【００１１】
ヒドロホビンは、公知のプロテイン（protein）であり、好ましくは小ペプチド（スモールペプチド）で、糸状菌（filamentous fungi）例えば、シゾフィラムコムネ（Schizophyllum commune）に特有のものである。通常、これらは８個のシステインを有している。ヒドロホビンは、天然の原料から単離することができる。しかし、ヒドロホビンは、化学的及び／又は生物工学的な生成手段で、非天然由来（non-naturally-occurring）のヒドロホビンを合成することもできる。
【００１２】
ここで使用される「ヒドロホビン」という用語は、一般構造式（Ｉ）、
Ｘn−Ｃ1−Ｘ1-50−Ｃ2−Ｘ0-5−Ｃ3−Ｘ1-100−Ｃ4−Ｘ1-100−Ｃ5−Ｘ1-50−Ｃ6−Ｘ0-5−Ｃ7−Ｘ1-50−Ｃ8−Ｘm （Ｉ）
（但し、Ｘは、２０種の天然由来のアミノ酸（Ｐｈｅ、Ｌｅｕ、Ｓｅｒ、Ｔｙｒ、Ｃｙｓ、Ｔｒｐ、Ｐｒｏ、Ｈｉｓ、Ｇｌｎ、Ａｒｇ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｌｙｓ、Ｖａｌ、Ａｌａ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｇｌｙ）であって良い。）のプロテインを意味することが好ましい。各Ｘは、同一であって良く、異なっていても良い。Ｘに続く指数（indice）は、各場合においてアミノ酸の数を表し、Ｃは、システイン、アラニン、セリン、グリシン、メチオニン、又はトレオニンを表し（但し、Ｃで定義されるアミノ酸の少なくとも４個がシステインである。）、そして、指数ｎ及びｍは、独立して０〜５００の範囲の自然数、好ましくは１５〜３００の範囲の自然数である。
【００１３】
本発明の１実施の形態では、使用するヒドロホビンは、ガラス表面にヒドロホビンを被覆した後、水の滴（５μｌ）の接触角度が、少なくとも２０°、好ましくは２５°、及び特に好ましくは３０°増加する（各場合、室温で測定）という特性によって特徴づけられる（但し、上記接触角度の増加は、同一の大きさの水の滴と、被覆を行なっていないガラス表面との接触角度と比較してのものである。）。
【００１４】
Ｃ1〜Ｃ8で表されたアミノ酸は、システインが好ましいが、しかし、これらは、内容（bulk）が類似した他のアミノ酸であっても良く、好ましくは、アラニン、セリン、トレオニン、メチオニン又はグリシンであっても良い。しかしながら、Ｃ1〜Ｃ8の箇所の、少なくとも４箇所、好ましくは少なくとも５箇所、より好ましくは少なくとも６箇所、及び特に７箇所が、システインで構成されているべきである。本発明に従うプロテイン中のシステインは、還元された状態で存在して良く、又は互いに二硫化ブリッジを形成して存在して良い。Ｃ−Ｃブリッジを分子間で形成することが特に好ましく、特に少なくとも１個、好ましくは２個、より好ましくは３個及び最も好ましくは４個の分子間二硫化ブリッジを含むものである。上述した、システインを、内容（bulk）が類似したアミノ酸で交換する場合、互いに二硫化ブリッジを形成可能なものが、そのようなＣ−箇所に、対となって交換されることが有利である。
【００１５】
従って、システイン、セリン（serine）、アラニン、グリシン、メチオニン、又はトレオノンがＸで示された位置にも使用される場合、一般式における、個々のＣ−箇所の番号付けは、変化して良い。
【００１６】
一般式（ＩＩ）、
Ｘn−Ｃ1−Ｘ3-25−Ｃ2−Ｘ0-2−Ｃ3−Ｘ5-50−Ｃ4−Ｘ2-35−Ｃ5−Ｘ2-15−Ｃ6−Ｘ0-2−Ｃ7−Ｘ3-35−Ｃ8−Ｘm （ＩＩ）
（但し、Ｘ、Ｃ及びＸとＣに続く指数は、上記に定義したものであり、しかし、指数ｎとｍは、０〜３００の範囲の数を表す。）のプロテインを使用することが好ましく、そしてこのプロテインは、更に上述した接触角の変化で区別可能であり、そして、更に、Ｃで定義される（表される）アミノ酸の内、少なくとも６個がシステインである。Ｃで表されるアミノ酸の全てがシステインであることが特に好ましい。
【００１７】
一般式（ＩＩＩ）、
Ｘn−Ｃ1−Ｘ5-9−Ｃ2−Ｃ3−Ｘ11-39−Ｃ4−Ｘ2-23−Ｃ5−Ｘ5-9−Ｃ6−Ｃ7−Ｘ6-18−Ｃ8−Ｘm （ＩＩＩ）
（但し、Ｘ、Ｃ及びＸとＣに続く指数は、上記に定義したものであり、しかし、指数ｎとｍは、０〜２００の範囲の数を表す。）のプロテインを使用することが好ましく、そしてこのプロテインは、更に上述した接触角の変化で区別可能なものである。
【００１８】
残基（残留物：residue）、Ｘn及びＸmは、ペプチド配列であって良く、このペプチド配列は、ヒドロホビンに自然に結合していても良い。しかしながら、残基ＸnとＸmの何れか、又は両方がペプチド配列と自然には結合しないペプチド配列であっても良い。ここで、ＸnとＸm内で、ヒドロホビン中に自然に発生（存在）するペプチド配列が、ヒドロホビン中には自然には発生しないペプチド配列によって延長（増量）されている場合も含まれる。
【００１９】
Ｘn及び／又はＸmが、ヒドロホビンと自然には結合しないペプチド配列である場合、このような配列（シーケンス）の長さは通常、少なくとも２０アミノ酸であり、この長さは、少なくとも３５アミノ酸であることが好ましく、少なくとも５０アミノ酸であることがより好ましく、そして、少なくとも１００アミノ酸であることが最も好ましい。ヒドロホビンと自然には結合しないこの種の残基は、以降、融合相手部分（fusion partner portion）とも称される。このことは、本発明に従い使用されるプロテインは、少なくとも１種のヒドロホビン部分（hidorohobin portion）と、融合相手部分（これらは、この状態では自然には一緒に発生しない。）とから構成されて良いことを説明することを意図している。
【００２０】
この融合相手部分は、多種のプロテインから選ばれて良い。複数の融合相手部分が１個のヒドロホビン部分、例えば、ヒドロホビン部分のアミノ末端基（アミノ末端部分）（Ｘn）、又はカルボキシル末端基（Ｘm）と結合することも可能である。しかし、例えば、２個の融合相手部分が、本発明に従い使用されるプロテインの１箇所（Ｘn又はＸm）と結合することも可能である。
【００２１】
特に適切な融合相手部分は、微生物（microorganismus）、特にＥ．コイル又はバチルスサブチリス中に天然に発生するプロテインである。このような融合相手部分の例は、配列ｙａａｄ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５及び１６）、ｙａａｅ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７及び１８）及びチオレドキシン（thioredoxin）である。同様に、非常に適切なものは、上述した配列の断片又は誘導体で、これは、上述した配列の１部分のみ、好ましくは７０％〜９９％及び、より好ましくは８０〜９８％のものを含み、又は、上述した配列に対して、個々のアミノ酸又はヌクレオチドが取替えられているものであっても良い（なお、百分率は、全てアミノ酸の数に対してである）。
【００２２】
本発明に従い使用されるプロテインは、そのポリペプチド配列において、例えば、グリコシル化、アセチル化によって、又は他に、例えばグルタルアルデヒドでの化学的な架橋によって、追加的に修飾（改変：modify）されていても良い。
【００２３】
本発明に従い使用されるプロテインの特性の一つには、表面（surface）がこのプロテインで被覆された場合には、表面特性が変化することが挙げられる。表面特性の変化は、表面をプロテインで被覆する前と後で、水の滴の接触角を測定し、そしてこの２つの測定値の差を測定（計算）することにより、実験的に確かめることができる。
【００２４】
この技術分野の当業者は、接触角の測定を行う方法を知っているものと考えられる。この説明した接触角の測定の正確な実験条件は、実施例部分に記載されている。
【００２５】
今日までに知られているヒドロホビンのヒドロホビン部分には、極性及び非極性（apolar）アミノ酸の部分（箇所：position）が含まれて（保存されて）おり、これは、特徴的なヒドロホビンプロット（hydrophobicity plot）を提供する。生物物理的特長及び疎水性（hudrophobicity）の差異により、今日までに知られているヒドロホビンは、クラスＩとＩＩ（Ｗａｓｓｅｌｓ ｅｔ ａｌ．， Ａｎｎ． Ｒｅｖ．Ｐｈｙｔｏｐａｔｈｏｌ．，１９９４，３２，４１３−４３７）の２種類に分けられる。
【００２６】
クラスＩのヒドロホビンの（集められた）被膜は、不溶性の傾向が非常に強く（例えば、ナトリウムｎ−ドデシルサルフェート（ＳＤＳ）の１質量％の水溶液に、８０℃に昇温させても不溶性である。）であり、そして、濃縮トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）又は蟻酸でのみ解離可能である。これに対して、クラスＩＩのヒドロホビンの（集められた）型は、より不安定である（安定性に劣る）。これらは、エタノールの６０質量％（溶液）又はＳＤＳの１質量％（溶液）（それぞれ、水中のもので、室温である。）に溶解可能である。
【００２７】
アミノ酸配列を比較した場合、システインＣ3とシステインＣ4との間の領域の長さは、クラスＩのヒドロホビンよりもクラスＩＩのヒドロホビンの方が明らかに短いことがわかる。更に、クラスＩＩのヒドロホビンは、クラスＩのヒドロホビンよりも、より荷電された（charged）アミノ酸を有している。
【００２８】
本発明を実施するための、特に好ましいヒドロホビンは、タイプｄｅｗＡ、ｒｏｄＡ、ｈｙｐＡ、ｈｙｐＢ、ｓｃ３、ｂａｓｆ１、ｂａｓｆ２のもので、これらは以下に列挙する配列に構造的な特徴を有している。これら（上記好ましいヒドロホビン）は一部分のみ、又はこれらの誘導体であって良い。ヒドロホビン部分の複数を結合させることも可能であり、これについては、２又は３個の同一又は異なる構造物を一緒に、及び対応する適切なポリペプチド配列（このポリペプチド配列は、自然にはヒドロホビンと結合しないものである。）に結合することが好ましい。
【００２９】
本発明を行うために適切なものは、更に、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０，２２，２４中に示されたポリペルチド配列を有する融合プロテイン（fusion protein）、及びそのためにコードする核酸配列（nucleic acid sequence）を有する融合プロテインであり、特にＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９，２１，２３に従う配列を有するものである。特に好ましい実施の形態として、更に、プロテインは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２，２２又は２４中に示されたポリペプチド配列から出発して、全てのアミノ酸の、少なくとも１から１０以下、好ましくは５以下、特に好ましくは５％を、変換（置換）、挿入（差込：insertion）又は削除（deletion）することにより得られ、且つ出発プロテインの生物学的特性を少なくとも５０％有しているプロテインを含む。本発明に従い使用されるプロテインの生物学的特性は、ここでは、上述した接触角度が少なくとも２０°変化することを意味するものとして理解される。
【００３０】
本発明に従い使用されるプロテインは、ペプチド合成の通常の技術（例えば、メリフィールド（Merrifield）固相合成）によって化学的に製造可能である。
【００３１】
自然に発生するヒドロホビンは、適切な方法を使用して、天然原料から分離することができる。例えば、Ｗｏｓｔｅｎ ｅｔ． ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏ．６３，１２２−１２９（１９９４）又はＷＯ９６／４１８８２が参照可能である。
【００３２】
融合プロテインは、遺伝子工学法によって製造可能であることが好ましく、この遺伝子工学法では、融合相手のため、及びヒドロホビン部分のためにコードする核酸配列、特にＤＮＡ配列が（互いに）組合され、これにより、ホスト有機体（宿主有機体：host organism）中で、組合された核酸配列の遺伝子発現（expression）により、所望のプロテインが形成されるものである。このような製造方法は、本願の出願人による、先願のＤＥ１０２００５００７４８０．４に開示されている。
【００３３】
上述した製造方法のために適切なホスト有機体（生成有機体）は、原核生物（prokaryotes）（始原（Archaea）を含む）又は真核生物（eukaryotes）であって良く、特にハロバクテリア含有バクテリア及びｍｅｔａｎｏｃｏｃｃｉ、フンギ（菌）、インセクトセル（昆虫細胞）、植物細胞、及び哺乳類細胞、より好ましくはＥｓｃｅｒｉｃｈｉａコイル、バチルスサブチリス、バチルスメガテリウム（megaterium）、アスペルギルスオリジア（Aspergillus oryzea）、アスペルギルスニドランス（Aspergillus nidulans）、アスペルギルスニガー（Aspergillus niger）、ピキアパトリス（Pichia pastoris）、シュードモナス（Pseudomonas）種（spec．）、ラクトバシリ（Lactobaclli）、ハンセヌラポリモルファ（Hansenula polymorpha）、トリコデルマレーゼイ（Trichoderma reesei）、ＳＦ９（及び関連する細胞）等であって良い。
【００３４】
更に、本発明の枠内で、ヒドロホビンとして、更に遺伝子発現構築体（expression construct）を使用可能であり、この遺伝子発現構築体は、遺伝子制御下に調節（規定）される核酸配列、本発明に従い使用されるプロテインをコードする核酸配列、及びこれら遺伝子発現構築体を少なくとも１種含むベクターを含むものである。
【００３５】
使用する遺伝子発現構築体は、好ましくは、それぞれコード配列（暗号配列：coding sequence）の５’−上流側に、（１つの）プロモーター（promoter）を含み、及び（それぞれコード配列の）３’−下流側に、末端配列（ターミネーター配列）を含み、及び所望により、通常の別の調節エレメント（regulatory element）を含み、それぞれは、実質的に（操作上）、コード配列と結合している。
【００３６】
上記「実質的に（操作上）結合」された状態では、プロモーター、コード配列（コード化配列：coding sequence）、ターミネーター、及び所望により別の調節エレメントの配列的な配置が、以下のようになっている、すなわち、コード配列の遺伝子発現において、各調節エレメントが、その機能を規定に従い発揮され得る（満たされ得る）ようになっていると理解される。
【００３７】
結合可能なことが明らかな配列の例は、標的（targeting）配列、及びエンハンサー（enhancer）、ポリアデニル化シグナル等である。更なる調節エレメントは、選択性（selectable）マーカー、増幅（amplification）シグナル、複製の原点（origin）等である。適切な調節エレメント配列は、例えば、Ｇｏｅｄｄｅｌ，Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ １８５， Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ， Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ， ＣＡ（１９９０）に記載されている。
【００３８】
これらの調節配列（regulatory sequence）に加え、これら配列の自然の調節（regulation）が、実際の構造遺伝子の上流（upstream）に存在しても良く、及び適切であれば、自然調節が排除（スイッチオフ）され、そして遺伝子の発現が、高められるように遺伝子上、修飾（改変）されて良い。
【００３９】
好ましい核酸構築体は、上述したエンハンサーの配列を１種以上含むことが有利であっても良い。ここで、このエンハンサーの配列は、プロモーターと機能的に結合しており、そして、核酸配列の発現を高めることができるものである。また、ＤＮＡ配列の３’エンドに、更に、調節エレメント又はターミネータ等の、有利な配列が挿入されても良い。
【００４０】
核酸は、１個以上のコピーの状態で構築体中に含まれても良い。構築体（construct）は、更に、抗生物質耐性（antibiotic resistance）又は栄養要求性相補遺伝子（auxotrophy−complemeting gene）等の付加的なマーカー（marker）を（場合により、構築体上で選択するために）含んでも良い。
【００４１】
この方法のために有利な調節配列は、例えば、ｃｏｓ、ｔａｃ、ｔｒｐ、ｔｅｔ、ｔｒｐ、ｔｅｔ、ｌｐｐ、ｌａｃ、ｌｐｐ−ｌａｃ、ｌａｃｌｑ−Ｔ７、Ｔ５、Ｔ３、ｇａｌ、ｔｒｃ、ａｒａ、ｒｈａＰ（ｒｈａＰＢＡＤ）ＳＰ６、ｌａｍｂｄａ−ＰＲ又はｉｍｌａｍｂｄａ−Ｐプロモーター等のプロモーター中に存在する（ここで、プロモーターは、グラム陰性（Gram−negative）バクテリア中に使用することが有利である）。更に、有利な調節配列は、例えば、グラム陽性（Gram−positive）プロモーターのａｍｙ及びＳＰ０２中に、イースト（yeast）又は菌（fungal）プロモーターＡＤＣ１、ＭＦａｌｐｈａ、ＡＣ、Ｐ−６０、ＣＹＣ１、ＧＡＰＤＨ、ＴＥＦ、ｒｐ２８、ＡＤＨ中に存在する。
【００４２】
調節のために、人工的なプロモーターを使用することも可能である。
【００４３】
ホスト有機体（宿主有機体）中で発現するために、核酸構築体は、ベクター中に有利に装入される。ここで、このベクターは、例えば、プラスミド又はファージ（phage）等のものであり、これらは、ホスト（宿主：host）中に遺伝子の最適な発現を可能にするものである。
【００４４】
ベクターは、プラスミド（plasmid）及びファージと同様、更に、それ自身公知のベクターを含む。この公知のベクターは、例えば、ＳＶ４０、ＣＭＶ等のウィルス、バキョロウィルス（baculovirus）及びアデノウィルス（adenovirus）、トランスポゾン（transposons）、ＩＳ要素、ファスミド（phasmids）、コスミド（cosmids）、及び直線状又は環式ＤＮＡ、及び又、アグロバクテリウム（Agrobacterium）系である。
【００４５】
これらのベクターは、ホスト有機体内で、内因的に再現（複製）されて良く、又は染色体的に再現されて良い。これらベクターは、本発明の別の形態を構成する。適切なプラスミド（plasmid）の例は、Ｅコイル、ｐＬＧ３３８、ｐＡＣＹＣ１８４、ｐＢＲ３２２、ｐＵＣ１８、ｐＵＣ１９、ｐＫＣ３０、ｐＲｅｐ４、ｐＨＳ１、ｐＫＫ２２３−３、ｐＤＨＥ１９．２、ｐＨＳ２、ｐＰＬｃ２３６、ｐＭＢＬ２４、ｐＬＧ２００、ｐＵＲ２９０、ｐｌＮ−ＩＩＩ”３−Ｂ１、ｔｇｔ１１又はｐＢｄＣｌ中のもの、ストレプトミセス（Streptomyces）、ｐｌＪ１０１、ｐｌＪ３６４、ｐｌＪ７０２、又はｐｌＪ３６１中のもの、バチウス（Bacillus） ｐＵＢ１１０、ｐＣ１９４、又はｐＢＤ２１４中のもの、コリネバクテリウム（Corynebacterium） ｐＳＡ７７又はｐＡＪ６６７中のもの、菌（フンギ）ｐＡＬＳ１、ｐｌＬ２又はｐＢＢ１１６中のもの、イースト（yeasts）２アルファ、ｐＡＧ−１、ＹＥｐ６、ＹＥｐ１３、又はｐＥＭＢＬＹｅ２３中のもの、又は植物ｐＬＧＶ２３、ｐＧＨｌａｃ＋、ｐＢＩＮ１９、ｐＡＫ２００４又はｐＤＨ５１中のものである。上述したプラスミドは、可能なプラスミドの小部分を選択して示したものである。更なるプラスミドは、それ自身公知であり、そして、例えば、ｂｏｏｋ Ｃｌｏｎｉｎｇ Ｖｅｃｔｏｒｓ（Ｅｄｓ．Ｐｏｕｗｅｌｓ Ｐ．Ｈ．ｅｔ ａｌ． Ｅｌｓｅｖｉｅｒ， Ａｍｓｔｅｒｄａｍ−Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ−Ｏｘｆｏｒｄ、１９８５、ＩＳＢＮ ０４４４９０４０１８）に見出される。
【００４６】
存在する他の遺伝子を発現させるために、核酸構築体は、更に、３’−及び／又は５’−ターミナル調節配列を含み、ホスト又は遺伝子（遺伝子は複数種類の場合を含む）の選択に従い、最適の発現のために選択された発現を高めることが有利である。
【００４７】
これら調節配列は、目標とする遺伝子の発現とプロテイン発現を可能にすることを意図している。ホスト有機体に依存して、このことは、例えば、遺伝子が、誘導（induction）の後にのみ発現又は過剰発現（overexpress）されて良いことを意味して良く、又は直ちに発現又は過剰発現されて良いことを意味して良い。
【００４８】
調節配列或いはファクター（因子：factor）は、これにより好ましくは、導入された遺伝子発現に積極的な影響を及ぼすことが可能であり、そしてこれにより、高めることができる。従って、転写シグナル、例えばプロモーター及び／又はエンハンサーを使用することにより、調節エレメントの強化を転写領域（transcription level）上で有利に行うことができる。しかしながら、これに加え、例えば、ｍＲＮＡの安定性を改良することにより、翻訳を高めることも可能である。
【００４９】
ベクターの他の形態では、核酸構築体又は核酸を含むベクターは、直線状（直鎖状）ＤＮＡの状態で、微生物中に有利に導入されても良く、そしてヘテローグ（異種又は相異：heterologous）又はホモローグ（同種又は相同：homologous）の組換えを介して、ホスト有機体のゲノムに統合されても良い。この直線状ＤＮＡは、プラスミド等の直線化ベクターで構成されて良く、又は核酸構築体又は核酸のみよって構成されても良い。
【００５０】
ヘテローグ遺伝子の、有機体中での最適の発現のために、有機体中で使用される特定の「コドン（codon）使用」に従い、核酸配列を修飾することが有利である。「コドン使用」は、対象となる有機体の、他の既に知られている遺伝子をコンピュータ解析することにより容易に決定することができる。
【００５１】
発現カセットは、適切なプロモーターを適切なコード核酸配列（coding nucleotide sequenve）及びターミネータ又はポリアデニル化シグナルに融合されることにより製造される。例えば、Ｔ．Ｍａｎｉａｔｉｓ，Ｅ．Ｆ．Ｆｒｉｔｓｃｈ ａｎｄＪ．Ｓａｍｂｒｏｏｋ， Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ， ＮＹ（１９８９）に、及びまた、Ｔ．Ｊ．Ｓｉｌｈａｖｙ，Ｍ．Ｌ．Ｂｅｒｍａｎ ａｎｄ Ｌ．Ｗ．Ｅｎｑｕｉｓｔ， Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ ｗｉｔｈ Ｇｅｎｅ Ｆｕｓｉｏｎｓ， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ（１９８４）中に、及びＡｕｓｕｂｅｌ， Ｆ．Ｍ．ｅｔａｌ．， Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ， Ｇｒｅｅｎｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ａｓｓｏｃ． ａｎｄ Ｗｉｌｅｙ Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ（１９８７）中に記載された、通常の組換え及びクローン技術がこの目的のために使用される。
【００５２】
適切なホスト有機体内で発現を達成するために、組換え核酸構築体又は遺伝子構築体が、ホスト中で遺伝子の最適の発現を提供するホスト特殊ベクター（host-specific vector）に有利に挿入される。ベクターは、それ自身は公知であり、そして例えば、「Ｃｌｏｎｉｎｇ Ｖｅｃｔｏｒｓ」（Ｐｏｕｗｅｌｓ Ｐ．Ｈ． ｅｔａｌ．，Ｅｄｓ，Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，Ａｍｓｔｅｒｄａｍ−Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ−Ｏｘｆｏｒｄ，１９８５）から得ることができる。
【００５３】
例えば、少なくとも１種のベクターで形質転換（transform）され、そして、本発明に従い使用されるプロテインを製造するために使用されて良い組換え微生物を、ベクターの補助下に製造することができる。有利なことに、上述した組換え発現構築体は、適切なホストシステム（宿主系）に導入され、そして発現される。これに関連して、特定の発現系中に発現するべき核酸を発生させるために、当業者にとって公知の、通常のクローン化法及びトランスフェクション法、例えば、共析出（coprecipitation）、プロトプラスト融合、エレクトロポーレイション、レトロウィルストランスフェクション等の方法を使用することが好ましい。適切な系（system）は、例えば、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、 Ｆ．Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．， Ｅｄｓ．，Ｗｉｌｅｙ Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ １９９７又はＳａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ． ２ｎｄ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ，１９８９に記載されている。
【００５４】
ホモローグに組換えられた微生物を製造することも可能である。この目的のために、本発明に従い使用される遺伝子の少なくとも１切片（区分：section）又は、コード配列の１切片を含むベクターが、このために製造される。ここで、適切であれば、この配列を修飾（改変）、例えば機能的に分解（disrupt）するために（ノックアウトベクター）、少なくとも１種のアミノ酸−削除、−付加、又は−置換が導入される。導入された配列は、例えば、関連する微生物からのホモローグ（ホモログ変換）であっても良く、又哺乳類、イースト、又はインセクトのソース（供給源）から誘導されても良い。この代わりに、ホモローグ性組換えのために使用されるベクターは、以下のように設計されて良い。すなわち、ホモローグ性組換えの場合、内生的な遺伝子が、変異（mutate）するか、又は他に、代えられるが、しかし機能プロテインをなおエンコード（encode）するように設計されて良い（例えば、上流の調節領域が、これにより内生的なプロテインの発現が代えられるように、代えられていても良い。）。本発明に従い使用される遺伝子の、代えられた切片は、ホモローグ性組換えベクター中に存在する。ホモローグ性組換えのために適切なベクターの構成は、例えば、Ｔｈｏｍａｓ，Ｋ．Ｒ．及びＣａｐｅｃｃｈｉ，Ｍ．Ｒ．（１９８７）Ｃｅｌｌ５１：５０３に記載されている。
【００５５】
本発明に従い使用される核酸、又は核酸構築体のために適切な、組換えホスト有機体は、原則として、何れの原核性又は真核性有機体であっても良い。有利なことに、バクテリア、菌（フンギ）、又はイースト等の微生物が、ホスト有機体として使用される。グラム陽性又はグラム陰性バクテリア、好ましくは、科（ファミリー）、腸内細菌（Enterobacteriaceae）、シュードモナス（Pseudomonadaceae）、リゾビアセー（Rhizobiaceae）、ストレプミセトアセー（Streptomycetaceae）又はノカルジセアエ（Nocardiceae）、特に好ましくは、類（genera）、エシェキアノ（大腸菌：Escherichia）、シュードモナス（Pseudomonas）、ストレプトマイセス（Streptomyces）、ノルカルディア（Nocardia）、バークホルディア（Burkholderia）、サルモネラ（Salmonella）、アグロバクテリウム（Agrobacterium）又はロドコッカス（Rhdococcus）が有利に使用される。
【００５６】
融合プロテインの製造方法に使用される有機体は、ホスト有機体に依存して、当業者にとって公知の方法で栽培（飼育）又は培養される。微生物は、通常、炭素供給源（通常は砂糖の状態）、窒素供給源（通常は、イースト抽出物、又は硫化アンモニウムの塩等の有機窒素供給源の状態）、鉄塩、マンガン塩等の少量の要素（元素）、及び適切な場合には、ビタミンを含む液体媒体中で、０℃〜１００℃の温度、好ましくは１０℃〜６０℃の温度で、酸素の供給下に栽培（飼育）される。これに関連し、栄養液体のｐＨは、一定の値に維持されて良く、すなわち、培養の間調節しても、調節しなくても良い。培養は、非連続的（バッチ式：batchwise）、準バッチ式、又は連続的に行って良い。栄養剤は、発酵の初期に導入して良く、又、後に、準連続的又は連続的な方法で導入して良い。酵素は、実施例に記載した方法で有機体から分離して良く、又粗製抽出物として反応に使用して良い。
【００５７】
本発明に従い使用されるプロテイン又は機能的（functional）、生物学的に活性な部分は、組換え製造方法によって製造されても良く、ここで、この製造方法では、プロテインを製造する微生物が培養され、適切であれば、プロテインの発現が誘導され、そして上述したプロテインが培養から分離される。本発明に従い使用されるプロテインは、所望する場合には、この方法により工業規模で製造されて良い。組換え微生物は、公知の方法で培養され、そして、発酵されて良い。バクテリアは、例えば、ＴＢ媒体又はＬＢ媒体中で、及び２０℃〜４０℃の温度で、及び６〜９のｐＨで繁殖させて良い。適切な培養条件は、例えば、Ｔ．Ｍａｎｉａｔｉｓ，Ｅ．Ｆ．Ｆｒｉｔｓｃｈ ａｎｄ Ｊ．Ｓａｍｂｒｏｏｋ， Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ， ＮＹ（１９８９）に詳細に記載されている。
【００５８】
本発明に従い使用されるプロテインが、培養媒体に分泌（secrete）されない場合、細胞は分解（崩壊）され、そして、公知のプロテイン分離法により、生成物がリゼイド（溶解質：lysate）から得られる。細胞は、所望するように分解して良く、この分解は、高周波超音波を使用して、高圧を使用して、例えば、Ｆｒｅｎｃｈ圧力セル中で、ｏｓｍｏｌｙｓｉｓを使用して、洗浄剤（detergent）、溶菌（lytic）酵素又は有機溶媒の作用で、同質器（ホモナイザー）を使用して、又は上述した方法の２種以上を組合わせて行われる。
【００５９】
本発明に従い使用されるプロテインは、分子篩クロマトグラフィ（ゲル濾過）、例えばＱ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅクロマトグラフィ、イオン交換クロマトグラフィ、及び疎水性クロマトグラフィ等の公知のクロマトグラフィ法、及びウルトラ濾過、結晶化、塩化分離（salting-out）、透析（dialysis）及び自然ゲル電気泳動等の他の通常の方法を使用して精製して良い。適切な方法は、例えば、Ｃｏｏｐｅｒ，Ｆ．Ｇ．Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｃｈｅ Ａｒｂｅｉｔｓｍｅｔｈｏｄｅｎ， Ｖｅｒｌａｇ Ｗａｌｔｅｒ ｄｅ Ｇｒｕｙｔｅｒ， Ｂｅｒｌｉｎ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋに、又はＳｃｏｐｅｓ、Ｒ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ Ｖｅｒｌａｇ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ， Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ， Ｂｅｒｌｉｎに記載されている。
【００６０】
ベクター系（vector system）又はオリゴヌクレオチドを使用して組換えプロテインを分離（単離）することが有利であって良い。ここで、オリゴヌクレオチドは、（所定のヌクレオチド配列分）ｃＤＮＡを延長させる。そして、延長したｃＤＮＡで、変えられたポリペプチド又は融合プロテインをコードするもので、これは、例えば精製の簡素化に役立つ。この種の適切な修飾（modification）の例は、アンカーとして機能する、いわゆる「ｔａｇｓ」（例えば、ヘキサ−ヒスチジンアンカーとして公知の修飾）、又は、抗体の抗原として識別されているエピトピ（epitopes）（例えば、Ｈａｒｌｏｗ， Ｅ．ａｎｄ Ｌａｎｅ，Ｄ．，１９８８，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ．Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ（Ｎ．Ｙ．） Ｐｒｅｓｓに記載されている。）を含む。他の適切なｔａｇは、例えば、ＨＡ、ｃａｌｍｏｄｕｌｉｎ−ＢＤ、ＧＳＴ、ＭＢＤ；ｃｈｉｔｉｎ−ＢＤ、ｓｔｅｐｔａｖｉｄｉｎ−ＢＤ−ａｖｉ−ｔａｇ、Ｆｌａｇ−ｔａｇ、Ｔ７等である。これらのアンカーは、プロテインを、例えば、ポリマーマトリックス（ポリマーマトリックスは、例えば、クロマトグラフィカラムに詰め込まれても良い。）等の固定の基体（support）に留めるために使用されて良く、又は、微小滴定（microtiter）プレート又は他の基体に留めるために使用されても良い。対応する精製施行例（プロトコール）は、市販の類似するｔａｇの提供者から得られる。
【００６１】
上述のように製造されるプロテインは、融合プロテインとして直接的に使用して良く、又は切断（cleaving off）し、及び融合相手部分を除去した後、「純粋」なヒドロホビンとして使用しても良い。
【００６２】
融合相手部分の除去が意図される場合、可能な切断部位（cleavage site）（プロテアーゼ（タンパク質分解酵素）のための、特定の認識部位）を、融合プロテイン中、ヒドロホビン部分と、融合相手部分との間に挿入する（移入する）ことが有利である。適切な切断部位は、特に、他の場合では、ヒドロホビン部分中にも、融合相手部分中にも発生しないペプチド配列を含む。このことは、生命情報学機器を使用して容易に調査（確認）可能である。特に好ましくは、例えば、メチオニン上のＢｒＣＮ切断、又はファクター（因子）Ｘａ、エンテロキナーゼ（enterokonase）を有する切断を有するプロテアーゼ媒介（protease−mediated）切断、トロンビン（thrombin）、ＴＥＶ−切断（ｔａｂａｃｃｏ ｅｔｃｈ ウィルスプロテアーゼ）である。
【００６３】
表面を被覆するために、本発明に従い、ヒドロホビンを実質的に使用可能である。ヒドロホビンは水性処方物の状態で使用されることが好ましい。
【００６４】
本発明を行うためのヒドロホビンの選択は、基本的に制限されるものではない。１種のヒドロホビンを使用することが可能であり、又他に異なる複数種類のヒドロホビンを使用することも可能である。例えば、融合プロテイン、例えばｙａａｄ−Ｘａ−ｄｅｗＡ−ｈｉｓ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９）又はｙａａｄ−Ｘａ−ｒｏｄＡ−ｈｉｓ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１）を使用することができる。
【００６５】
ヒドロホビンは、上述したように、本発明に従い、テキスタイル基体及び革から選ばれる繊維性基体の表面を被覆するために使用される。
【００６６】
ヒドロホビンは上述したように、本発明に従い、テキスタイル基体及び革から選ばれる繊維性基体の表面を被覆するために使用される（この場合、エピクロロヒドリン等のアルキル化に強く作用する化合物、又はＤＭＤＨＥＵ等の架橋剤は用いられない）。
【００６７】
更に、本発明はテキスタイル基体及び革から選ばれる繊維性基体の表面を、少なくとも１種のヒドロホビンを使用して被覆する方法を提供する。ヒドロホビン、繊維性基体、テキスタイル基体及び革及び被覆は、全て上記に定義したものである。
【００６８】
本発明の１実施の形態では、本発明の方法は、被覆の対象となる繊維性基体を少なくとも１種の水性処方物、好ましくは、少なくとも１種のヒドロホビンを含む水溶液（aueous liquor）で被覆することにより行われる。
【００６９】
水溶液割合（liquor ratio）は、例えば、１０：１〜１０００：１であり、及び好ましくは７０：１〜５００：１の範囲である。
【００７０】
本発明の１実施の形態では、被覆の対象となる繊維性基体を、少なくとも１種のヒドロホビンを含む、少なくとも１種の水性処方物、好ましくは水溶液と、排出工程（exhaust process）により接触させることを含む。
【００７１】
本発明の他の実施の形態では、被覆の対象となる繊維性基体を、少なくとも１種のヒドロホビンを含む、少なくとも１種の水性処方物、好ましくは水溶液と、パッディング工程（padding process）により接触させることを含む。
【００７２】
本発明の１実施の形態では、繊維性基体、特にテキスタイル基体をヒドロホビンと、タンク中で、又は好ましくはパッドマングルを使用して接触させることを含む。
【００７３】
本発明の１実施の形態では、繊維性基体、特にテキスタイル基体をヒドロホビンと、０℃〜９０℃の温度範囲、好ましくは室温〜８５℃の温度範囲で接触させることを含む。
【００７４】
本発明の１実施の形態では、繊維性基体、特にテキスタイル基体をヒドロホビンと、タンク中で、又は好ましくはパッドマングルを使用して接触させ、そして次に、例えば２０〜１２０℃の温度範囲で乾燥させることを含む。
【００７５】
本発明の１実施の形態では、繊維性基体、特にテキスタイル基体をヒドロホビンと、タンク中で、又は好ましくはパッドマングルを使用して接触させ、そして次に、例えば２０〜１２０℃の温度範囲で、及び、５秒〜１５分の期間、及び好ましくは５分以下の期間乾燥させることを含む。適切な乾燥温度範囲は、例えば、２０℃〜１２０℃であり、そして好ましくは１０５℃以下である。温度が低くなる程、乾燥時間が長くなり、そしてこの逆も当てはまる。
【００７６】
本発明に従い、パッドマングルを使用して、繊維性基体をヒドロホビンと接触させるために、例えば、供給速度（適用速度）を０．１〜１０ｍ／分の範囲、及び好ましくは１〜５ｍ／分の範囲に選択し、及びロールの押圧力を０．５〜４バールの範囲、及び好ましくは１〜３バールの範囲に選択することが可能である。
【００７７】
本発明の１実施の形態では、繊維性基体（特に革）をヒドロホビンと、例えば、スプレーがけにより、少なくとも１種のヒドロホビンを含む水性処方物で、１回以上、繊維性基体を覆う（カバーする）ことにより接触させることを含む。
【００７８】
水性処方物は、１〜２４時間の範囲、及び好ましくは１２〜１７時間の範囲で繊維性基体に作用させて良い。
【００７９】
本発明の方法に使用される水性処方物は、溶媒又は水の混合物及び水混和性有機溶媒として、水を使用して製造することが好ましい。水混和性有機溶媒の例は、水混和性モノヒロリック（一価）又はポリヒドリック（多価）アルコール、例えば、メタノール、エタノール、ｎ−プロパノール、ｉ−プロパノール、エチレングリコール、プロピレングリコール、又はグリセロールを含む。これらは、エーテルアルコールであっても良い。例は、（ポリ）エチレンのモノアルキルエーテル又は、（ポリ）プロピレングリコール、例えばエチレングリコールモノブチルエーテルを含む。水溶性有機溶媒の特性（identity）と量は、それ自体は重要ではなく、そして、例えば、本発明に従い使用される水性処方物に対して１質量％〜５０質量％の範囲であって良い。
【００８０】
本発明の方法のために使用される水性処方物は、更に、本発明に従い使用される水性処方物に対して、０．１〜５質量％の無機塩、例えばＮａＣｌを含んでも良い。
【００８１】
本発明の好ましい１実施の形態では、本発明の方法を行うために、エピクロロヒドリン等の強いアルキル化合物を使用しないことを含む。
【００８２】
本発明の好ましい１実施の形態では、本発明の方法を行うために、例えば、Ｎ，Ｎ−ジメチルオール−４，５−ジヒドロキシエチレンウレア（ＤＭＤＨＥＵ）等の架橋剤を使用しないことを含む。
【００８３】
本発明に従う方法に使用される水性処方物及び好ましくは水溶液（liqur）を製造するために、合成、分離（単離）及び／又は精製に、ヒドロホビンを含んだ（ヒドロホビンの）水溶液を使用することが好ましい。これらは、なお、その純度に依存して、合成からの助剤（auxiliary）の残留分を含んでも良い。しかし、当然、物質として、例えば、フリーズ乾燥により最初にヒドロホビンを分離し、そして次の工程で初めてこれらを処方しても良い。
【００８４】
本発明に従い使用される水性処方物中に要求されるヒドロホビンの濃度は、被覆されるべき表面の特性及び／又は意図された使用に従い、決定することができる。しかし、ヒドロホビンが比較的低い濃度であることも、意図された効果を達成するのに充分であると考えられる。
【００８５】
本発明の１実施の形態では、本発明の方法は、少なくとも１種のヒドロホビンを１ｍｇ／ｌ〜１０ｇ／ｌ含む、少なくとも１種の水性処方物を使用する。
【００８６】
本発明の１実施の形態では、本発明の方法で使用される水性処方物、及び特に水溶液は、そのｐＨが、３〜９の範囲であり、及び好ましくは４〜８の範囲である。
【００８７】
本発明の１実施の形態では、被覆される繊維性基体が、ヒドロホビンと接触される前に前処理され、そしてこの後に初めて、ヒドロホビンと接触されることを含む。
【００８８】
前処理（予備処理）の例は、水で数分間リンスすることであり、完全にイオン除去された水でリンスすることが好ましく、５分〜５時間の範囲の期間リンスすることがより好ましい。
【００８９】
本発明の１実施の形態では、本発明に従い被覆される繊維性基体の表面を、少なくとも１種の活性物質を含む他の水性処方物で接触させて前処理することを含む。活性物質は、有機化学物質、例えば、アニオン性、カチオン性又は非イオン性洗浄剤、又は例えば、プロテアーゼ又はリパーゼ等の酵素から選ぶことができる。
【００９０】
本発明の１実施の形態では、本発明に従う前処理を、本発明に従い被覆される繊維性基体を漂白する（bleaching）ことにより行うことを含む。この実施の形態は、被覆される繊維性基体がコットン又はコットン合成繊維ブレンドを含む場合に好ましい。
【００９１】
本発明に従い使用される水性処方物は、更に、任意に、別の成分、例えば、添加剤及び／又は助剤を含んでも良い。このような成分の例は、酸又は塩基、例えば、カルボン酸、又はアンモニア、緩衝剤系、ポリマー、ＳｉＯ2又はシリケート等の無機粒子、例えば染料等の着色剤、香水又は殺生物剤を含む。添加剤の更なる例は、ＤＥ−Ａ１０１６０９９３、特に段落「００７４」〜「０１３１」に挙げられている。
【００９２】
本発明の方法は、繊維性基体の被覆された表面、及び好ましくは被覆されたテキスタイル基体又は革を提供し、ここで、被覆（被膜）は、少なくとも１種のヒドロホビンを含んだ汚れ防止（soil-repellent）被覆を含む。
【００９３】
被覆物（被膜）は、通常、被覆される表面上に、ヒドロホビンの少なくとも１種の単分子層（monomolecular layer）が含まれる。
【００９４】
本発明に従い処理された繊維性基体表面（繊維性基体は、テキスタイル基体及び革から選ばれる）は、柔らかい手触りと視覚的な均一被覆が改良されるだけでなく、汚れ防止性も改良する。
【００９５】
「汚れ」は、通常、公知の方法で、堅い（hard）表面が、固体及び／又は液体物質により、望ましくない汚れ（汚染）（汚れは、全ての種類を含む。）を受けることを意味している。汚れ（汚染物）の例は、脂肪、オイル、プロテイン、食品の残り物、ダスト又は土を含む。しかし、汚れは、例えば、水の硬度に由来する、水の乾燥後の「跡」等の石灰堆積物を含んでも良い。更なる例は、人用の洗浄及びケア組成物の残留物又は他に不溶性石灰石鹸（lime soap）の残留物であり、不溶性石灰石鹸は、水の硬度と結びついて、このような洗浄及びケア組成物から形成可能なもので、例えば、テキスタイル基体又は革等の繊維性基体の表面に堆積物を形成するものである。
【００９６】
汚れ防止効果は、原則として公知の方法で測定可能であり、この公知の方法は、例えば、ヒドロホビンで処理されていない表面と、ヒドロホビンで処理されている表面とを、リンス（すすぐこと）して、「汚れ」の分離性を比較することにより行われる。
【００９７】
本発明に従い使用される水性処方物は、例えば、１種以上のヒドロホビンを水及び／又は１種以上の上述した溶媒と混合させることにより製造可能である。所望により、更なる成分、例えば、添加剤及び／又は助剤を添加することが可能であり、この場合、ヒドロホビン及び水、所望により溶媒、及び所望により１種以上の更なる成分が加えられる順序は重要ではない。
【００９８】
本発明に従う処方物は、通常、エピクロロヒドリン等の強アルキル化合物、又は例えばＤＭＤＨＥＵ等の架橋剤を有しておらず、そして、分解することなく長期間、保存可能である。
【００９９】
本発明は、更に、テキスタイル基体及び革から選択され、且つ本発明に従い上述した方法により被覆された繊維性基体を提供する。これら（繊維性基体）は、卓越した汚れ防止特性を有しているだけでなく、良好な洗浄性、及び摩擦強さ、及び快適な手感触をも有している。これらは、例えば、ベッディング、掛け布、及びカーテン等のホームテキスタイル、浴室及び衛生テキスタイル、及びテーブルクロスを製造するのに有用であり、及び、更に、例えば、雨おおい（awing）、テント、ボートカバー、トラック防水布、自動車の屋根（cabriolet roof）等のアウトドア部門用のテキスタイルを製造するのに有利であり、及び特に、靴、ジャケット、コート、ズボン、プルオーバー、ストッキング、ベルト等の衣服用品、及び又例えば、ベッディング、掛け布、及びカーテン等のホームテキスタイル、浴室及び衛生テキスタイル、及びテーブルクロスを製造するのに有用である。本発明に従い被覆される革は、ブーツ等の衣服用品を製造するために、及びまた、工業的に使用するための革製品（empty article）を製造するために有用である。
【０１００】
以下に実施例を使用して本発明を説明する。
パートＡ
本発明に従い使用されるヒドロホビンの製造と試験
実施例１
ｙａａｄ−Ｈｉｓ6／ｙａａＥ−Ｈｉｓ6のクローニングのための前処理
オリゴヌクレオチド Ｈａｌ５７０及びＨａｌ５７１（Ｈａｌ５７２／Ｈａｌ５７３）の補助下に、ポリメラーゼ鎖反応を行った。使用したテンプレートＤＮＡは、バクテリアバチルスサブチリスのゲノムのＤＮＡであった。得られたＰＣＲ断片（フラグメント）は、バチルスサブチルスの遺伝子ｙａａＤ／ｙａａＥのコード配列を含み、及び末端に、（各場合に）Ｎｃｏｌ及びＢｇＩＩＩ制限切断部位（restriction cleavage site）を含んでいた。このＰＣＲ部分を精製し、そして制限酵素Ｎｃｏｌ及びＢｇｌｌｌでカット（cut）した。このＤＮＡ部分は、「挿入（insert）」として使用され、そして、制限酵素Ｎｃｏｌ及びＢｇＩＩＩで、事前に直線化（直鎖化）されたベクターｐＱＥ６０（Ｑｉａｇｅｎ社より）内でクローン化された。このように得られたベクターｐＱＥ６０ＹＡＡＤ＃２／ｐＱＥ６０ＹａａＥ＃５は、プロテイン（このプロテインは、ＹＡＡＤ：：ＨＩＳ6及びＹＡＡＥ：：ＨＩＳ6で構成されている。）の発現に使用された。
【０１０１】
Ｈａｌ５７０：ｇｃｇｃｇｃｃｃａｔｇｇｃｔｃａａａｃａｇｇｔａｃｔｇａ
Ｈａｌ５７１：ｇｃａｇａｔｃｔｃｃａｇｃｃｇｃｇｔｔｃｔｔｇｃａｔａｃ
Ｈａｌ５７２：ｇｇｃｃａｔｇｇｇａｔｔａａｃａａｔａｇｇｔｇｔａｃｔａｇｇ
Ｈａｌ５７３：ｇｃａｇａｔｃｔｔａｃａａｇｔｇｃｃｔｔｔｔｇｃｔｔａｔａｔｔｃｃ
【０１０２】
実施例２
ｙａａｄヒドロホビンＤｅｗＡ−Ｈｉｓ6のクローン化
オリゴヌクレオチドＫａＭ４１６及びＫａＭ４１７でポリメラーゼ連鎖反応（chain reaction）を行った。使用したテンプレートＤＮＡは、糸状菌アスペルギルスニドランス（Aspergilus nidulans）のゲノムのＤＮＡであった。得られたＰＣＲフラグメントは、ヒドロホビン遺伝子ｄｅｗＡのコード配列、及びＮ−末端ファクターＸａプロテイナーゼ切断部位を含んでいた。このＰＣＲフラグメントを精製し、そして制限エンドヌクレアーザ（endonucleases）ＢａｍＨｌでカットした。このＤＮＡフラグメントは、「挿入」として使用され、そして、制限エンドヌクレアーザＢｇＩＩＩで、事前に直線化（直鎖化）されたベクターｐＱＥ６０ＹＡＡＤ＃２内でクローン化された。
【０１０３】
このように得られたベクター＃５０８は、融合プロテイン（この融合プロテインは、ＹＡＡＤ：：Ｘａ：：ｄｅｗＡ：：ＨＩＳ６で構成されている。）の発現に使用された。
【０１０４】
ＫａＭ４１６：ＧＣＡＧＣＣＣＡＴＣＡＧＧＧＡＴＣＣＣＴＣＡＧＣＣＴＴＧＧＴＡＣＣＡＧＣＧＣ
ＫａＭ４１７：ＣＣＣＧＴＡＧＣＴＡＧＴＧＧＡＴＣＣＡＴＴＧＡＡＧＧＣＣＧＣＡＴＧＡＡＧＴＴＣＴＣＣＧＴＣＴＣＣＧＣ
【０１０５】
実施例３
ｙａａｄヒドロホビンＲｏｄＡ−Ｈｉｓ6のクローン化（クローニング）
プラスミド＃５１３を、オリゴヌクレオチドＫａＭ４３４及びＫａＭ４３５を使用して、プラスミド＃５０８に類似してクローン化した。
【０１０６】
ＫａＭ４３４：ＧＣＴＡＡＧＣＧＧＡＴＣＣＡＴＴＧＡＡＧＧＣＣＧＣＡＴＧＡＡＧＴＴＣＴＣＣＡＴＴＧＣＴＧＣ
ＫａＭ４３５：ＣＣＡＡＴＧＧＧＧＡＴＣＣＧＡＧＧＡＴＧＧＡＧＣＣＡＡＧＧＧ
【０１０７】
実施例４
ｙａａｄヒドロホビンＢＡＳＦ１−Ｈｉｓ6のクローン化
プラスミド＃５０７を、オリゴヌクレオチドＫａＭ４１７及びＫａＭ４１８を使用して、プラスミド＃５０８に類似してクローン化した。テンプレートＤＮＡは、人工的に合成したＤＮＡ配列ヒドロホビンＢＡＳＦ１であった（アッペンディックス参照）。
【０１０８】
ＫａＭ４１７：
ＣＣＣＧＴＡＧＣＴＡＧＴＧＧＡＴＣＣＡＴＴＧＡＡＧＧＣＣＧＣＡＴＧＡＡＧＴＴＣＴＣＣＧＴＣＴＣＣＧＣ
ＫａＭ４１８：ＣＴＧＣＣＡＴＴＣＡＧＧＧＧＡＴＣＣＣＡＴＡＴＧＧＡＧＧＡＧＧＧＡＧＡＣＡＧ
【０１０９】
実施例５
ｙａａｄヒドロホビンＢＡＳＦ２−Ｈｉｓ6のクローン化
プラスミド＃５０６を、オリゴヌクレオチドＫａＭ４１７及びＫａＭ４１８を使用して、プラスミド＃５０８に類似してクローン化した。テンプレートＤＮＡは、人工的に合成したＤＮＡ配列ヒドロホビンＢＡＳＦ２であった（アッペンディックス参照）。
【０１１０】
ＫａＭ４１７：
ＣＣＣＧＴＡＧＣＴＡＧＴＧＧＡＴＣＣＡＴＴＧＡＡＧＧＣＣＧＣＡＴＧＡＡＧＴＴＣＴＣＣＧＴＣＴＣＣＧＣ
ＫａＭ４１８：ＣＴＧＣＣＡＴＴＣＡＧＧＧＧＡＴＣＣＣＡＴＡＴＧＧＡＧＧＡＧＧＧＡＧＡＣＡＧ
【０１１１】
実施例６
ｙａａｄヒドロホビンＳＣ３−Ｈｉｓ6のクローン化
プラスミド＃５２６を、オリゴヌクレオチドＫａＭ４６４及びＫａＭ４６５を使用して、プラスミド＃５０８に類似してクローン化した。使用したテンプレートＤＮＡは、Ｓｃｈｙｚｏｐｈｙｌｌｕｍ ｃｏｍｍｕｎｅ ｃＤＮＡであった（アッペンディックス参照）。
【０１１２】
ＫａＭ４６４：ＣＧＴＴＡＡＧＧＡＴＣＣＧＡＧＧＡＴＧＴＴＧＡＴＧＧＧＧＧＴＧＣ
ＫａＭ４６５：ＧＣＴＡＡＣＡＧＡＴＣＴＡＴＧＴＴＣＧＣＣＣＧＴＣＴＣＣＣＣＧＴＣＧＴ
【０１１３】
実施例７
組換えＥ．ｃｏｉｌ菌株ｙａａｄヒドロホビンＤｅｗＡ−Ｈｉｓ6の発酵
１５ｍｌＧｒｅｉｎｅｒチューブにおける、ｙａａｄヒドロホビンＤｅｗＡ−Ｈｉｓ6発現Ｅｃｏｉｌ菌株を使用した、３ｍｌのＬＢ液体媒体の接種（植え付け）。２００ｒｐｍ、３７℃で、シェーカー上で８時間にわたり培養。各場合、バッフル（baffle）が設けられた２１ｌ（２１リットル）のＥｒｌｅｎｍｅｙｅｒフラスコを使用し、そして、２５０ｍｌのＬＢ媒体（＋１００μ／ｍｌ アンピシリン（ampicillin））に、１ｍｌの前培養（preculture）を接種し、そして、シェーカー上において、１８０ｒｐｍ、３７℃で９時間培養した。２０ｌの発酵器（fermenter）において、１３．５ｌのＬＢ媒体（＋１００μｇ／ｍｌ アンピシリン（ampicillin））に、０．５ｌの前培養で接種した。〜３．５のＯＤ60nmで、１４０ｍｌの１００ｍＭ ＩＰＴＧを付加した。３時間後、発酵器を１０℃にまで冷却し、そして、遠心分離により、発酵器のブロース（培養液）を除去した。
【０１１４】
実施例８
組換えヒドロホビン融合プロテインの精製（Ｃ末端Ｈｉｓ６ｔａｇを有する、ヒドロホビン−融合プロテインの精製）
１００ｇのセルペレット（１００〜５００ｍｇのヒドロホビン）を、５０ｍＭナトリウムホスフェート緩衝液（バッファー）、ｐＨ７．５で、合計体積が２００ｍｌとし、そして、懸濁させた。懸濁を、Ｕｌｔｒａｔｕｒｒａｘ ｔｙｐｅ Ｔ２５（Ｊａｎｋｅ ａｎｄ Ｋｕｎｋｅｌ；ＩＫＡ−Ｌａｂｏｒｔｅｃｈｎｉｋ）で１０分間処理し、そして、次に、核酸を分解（degrade）するために、５００単位のベンゾナーゼ（benzonase）（Ｍｅｒｋ，Ｄａｒｍｓｔａｄｔ；ｏｒｄｅｒ Ｎｏ．１．０１６９７．０００１）で、室温で１時間培養した。セル破壊の前に、ガラスカートリッジ（Ｐ１）を使用して、濾過を行った。セルの破壊と残っているゲノムＤＮＡのせん断を目的として、１５００バールでホモナイザー器（Ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｚｅｒ Ｍ−１１０ＥＨ；Ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｃｓ Ｃｏｒｐ．）を２回作動させた。ホモジェネートを遠心分離（Ｓｏｒｖａｌｌ ＲＣ−５Ｂ，ＧＳＡ Ｒｏｔｏｒ、２５０ｍｌ遠心ブレーカー、６０分、４℃、１２０００ｒｐｍ、２３０００ｇ）し、上澄液（supernatant）を氷上に置き、そして、ペレットを１００ｍｌのナトリウムホスフェート緩衝液、ｐＨ７．５中に懸濁させた。遠心分離と懸濁を３回繰り返し、ここで、ナトリウムホスフェート環緩衝液は、３回目の繰り返し時に、１％ＳＤＳを含んでいた。再懸濁の後、この溶液を１時間攪拌させ、次に最終的な遠心分離を行った（Ｓｏｒｖａｌｌ ＲＣ−５Ｂ，ＧＳＡ Ｒｏｔｏｒ，２００ｍｌ遠心分離ブレーカー、６０分、４℃、１２０００ｒｐｍ、２３０００ｇ）。ＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析に従い、ヒドロホビンは、最終的な遠心分離の後、上澄液中に存在した（図１）。実験から、ヒドロホビンは、おそらく、対応するＥ．ｃｏｉｌ中に、封入体（inclusion body）の状態で存在していると考えられる。５０ｍｌのヒドロホビン含上澄液を、５０ｍｌのｎｉｃｋｅｌ−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ Ｈｉｇｈ Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ １７−５２６８−０２カラム（Ａｍｅｒｓｈａｍ）に導入し、これを、５０ｍＭ Ｔｒｉｓ−Ｃｌ緩衝液、ｐＨ８．０と平衡させた。カラムを５０ｍＭ Ｔｒｉｓ−Ｃｌ緩衝液、ｐＨ８．０で洗浄し、そして次に、ヒドロホビンを、２００ｍｌのイミダゾールを含む、５０ｍＭ Ｔｒｉｓ−Ｃｌ緩衝液、ｐＨ８．０で溶出（elute）した。イミダゾールを除去するために、この溶液を、５０ｍＭ Ｔｒｉｓ−Ｃｌ緩衝液、ｐＨ８．０に対して透析した。
【０１１５】
図１は、このように製造されたヒドロホビンＨＰ１の精製を示している。
【０１１６】
レーン１： ニッケル−セファロース（nickel−Sepharose）カラム（１：１０希釈）に供給した溶液
レーン２： 流通（Flow-through）＝洗浄工程の溶出
レーン３〜５： 溶出（elution）部分のＯＤ２８０ピーク
図１に示したヒドロホビンは、分子量が約５３ｋＤである。
【０１１７】
小さなバンドが、ヒドロホビンの分解生成物（減生生成物）を、部分的に示している。
【０１１８】
実施例９
技術試験；ガラス上での水滴の接触角度を変化させることによるヒドロホビンＨＰ１の特徴付
基体（substrate）
ガラス（ウィンドウガラス、南ドイツガラス、マンハイム、ドイツ）：
ヒドロホビン濃度：１００ｍｇ／ｌ
５０ｍＭナトリウムアセテート（ｐＨ４）＋０．１質量％のポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノロレート（sorbitan monolaurate）（水中）中で、１５時間（温度８０℃）、ガラス板について培養、次に、被覆、蒸留水での洗浄、
次に、培養：１０分／８０℃／１質量％の水性ナトリウムｎ−ドデシルスルフェート溶液（ＳＤＳ）、蒸留水での洗浄。
【０１１９】
このように得られた試料は、空気乾燥（室温）されて、そして室温で、５μｌの水滴の接触角（度）の測定に付された。
【０１２０】
接触角度の測定は、Ｄａｔａｐｈｙｓｉｃｓ Ｃｏｎｔａｃｔ Ａｎｇｌｅ Ｓｙｓｔｅｍ ＯＣＡ１５＋，Ｓｏｆｔｗａｒｅ ＳＣＡ２０．２．０．（２００２年１１月）で行った。測定は、製造者の指導に従い行われた。
【０１２１】
未処理のガラスは、接触角度が３０±５°であり；実施例８の機能性（官能性：functional）ヒドロホビン（ｙａａｄ−ｄｅｗＡ−ｈｉｓ6）での被覆では、接触角度が６７±５°であった。
【０１２２】
パートＢ
繊維性基体の表面を被覆するためのヒドロホビンＨＰ１の使用
実施例８に記載したように製造したヒドロホビン（溶融プロテイン）ＨＰ１（ｙａａｄ−Ｘａ−ｄｅｗＡ−ｈｉｓ）（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９）の溶液を使用試験に使用した。溶液中、ヒドロホビンＨＰ１の濃度：１００ｍｇ／ｌ（０．０２質量％）。
Ｂ．１ テキスタイル基体の、本発明による被覆
ホワイト織ポリエステルファブリック、ベース質量２２６ｇ／ｍ2を、最初に、完全にイオン除去された水で、４５分間すすぎ、そして次に、水中０．０２質量％のＨＰ１の水溶液中に浸し、そして８０℃で１７時間、処理した。この後、このように処理したポリエステルファブリックを、完全にイオン除去した水で１分間すすぎ、そして室温で乾燥させて、処理された、本発明に従う基体ＰＥＳ−ＨＰ１を得た。この基体は、非常に心地よい手感触を有していた。
【０１２３】
Ｂ．２ テキスタイル基体の、本発明による被覆
処理を、８０℃ではなく、室温で行ったこと以外は、Ｂ．１を繰り返した。それぞれが処理された基体ＰＥＳ−ＨＰ２を得た。この基体は、非常に心地よい手感触を有していた。
【０１２４】
使用した「汚れ（soil）」
試験のために、「汚れ」として以下のものを使用した：
トリオレイン
口紅
使用済エンジンオイル
それぞれが処理された基体ＰＥＳ−ＨＰ１を複数、それぞれ、上述した「汚れ」で１８時間、汚した（「汚れ」は、ｄｍ2当たり約０．１ｇ使用）。
【０１２５】
試験洗浄剤の製造、及び本発明に従うＰＥＳ−ＨＰ１の洗浄
以下のものを一緒に混合した：
５ｇのナトリウムｎ−ドセシルベンゼンスルホネート
５ｇのＣ13−Ｃ15オキソプロセスアルコール混合物（この混合物は、平均７等量のエチレンオキシド／モルでエトキシル化されている。）
５．８ｇの、（アクリル酸（７０質量％）とマレイン酸（３０質量％）のランダムコポリマーの）４０質量％の水溶液、ＮａＯＨで中和、ｐＨ７．９、Ｍw７００００ｇ／モルで中和。
【０１２６】
１．４ｇの凝乳状石鹸
１．２ｇのＴｙｌｏｓｅ ＣＲ１５００ｐカルボキシメチルセルロース
１４ｇのＮａ2ＣＯ3
３０ｇのゼオライトＡ
２１ｇのナトリウムペルボレートテトラヒドレート
６ｇのテトラナトリウムエチレンジアミンテトラアセテート
３．６ｇのナトリウムメタシリケートペンタヒドレート
７ｇのＮａ2ＳＯ4
これにより、洗浄剤１を得た。
【０１２７】
本発明に従い処理され、そしてその後に「汚れ」を付けられたＰＥＳ−ＨＰ１を洗浄した。この洗浄は、タイプＬａｕｎｄｅｒ−Ｏ−Ｍｅｔｅｒ（Ａｔｌａｓ，ＵＳＡ）の洗浄器内で行った。そして、この洗浄は、３回の予備洗浄サイクルと１回のメイン洗浄サイクルを使用して行った。硬度が３ｍｍｏｌ（Ｃａ：Ｍｇ：ＨＣＯ3 ４：１：８）の水を使用した（溶液比（liquor ratio）１２．５：１、４．５ｇの試験洗浄剤の添加 １／ｌ、水温４０℃）。合計洗浄時間：３０分。
【０１２８】
トリオレイン及びエンジンオイルの「汚れ」は、完全に除去され、口紅の残留物は、非常に僅かなもので、そして、拡大鏡を使用して初めて確認可能であった。
【０１２９】
表１
配列ネームのＤＮＡへの割当及び配列リスト中のポリペプチド配列
【０１３０】
【表１】
【図面の簡単な説明】
【０１３１】
【図１】ヒドロホビンＨＰ１の精製を示した図である。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、テキスタイル基体及び革から選ばれる繊維性基体の表面を、少なくとも１種のヒドロホビンを使用して被覆する方法に関する。更に、本発明は、テキスタイル基体及び革から選ばれる、被覆された繊維性基体に関し、及び本発明に従う繊維性基体を使用してガーメントを製造する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
テキスタイル、例えば、ポリエステル、ポリアクリル、ポリアミドを、「ふわふわ」した感触で使用するために、プロテイン（protein）又はポリペプチド、特に水中に溶解した酸化ウールで処理することが、特許文献１（ＷＯ０２／５９４１３）から公知である。しかし、特許文献１（ＷＯ０２／５９４１３）に従って仕上られたテキスタイルが、第１に、不愉快な手触りを有していることがしばしば観察されている。また、一工程製造（単独工程での製造）で、均一な塗装（施し）を行なうことが困難であることも観察されている（１０頁）。均一な塗装を行う上での、この困難性を回避するために、特にエピクロロヒドリンを使用した非常に複雑な多工程が提案されている。しかしながら、エピクロロヒドリンの使用は、通常、望ましくない。
【０００３】
【特許文献１】ＷＯ０２／５９４１３
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本発明の目的は、従来技術の不利な点が回避可能な方法を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
この目的は、冒頭に述べた方法によって達成されることが見出された。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００６】
冒頭に定義した方法は、１つ以上の表面（この表面は、平坦であって良く、又は織られたものであって良い。）から開始される。被覆されるべき表面は、テキスタイル基体及び革から選ばれる繊維性基体の一部を形成する。
【０００７】
本発明の目的のためのテキスタイル基体は、テキスタイルファイバー、テキスタイル中間体、及び最終製造物及びこれらから製造された、仕上られた製品であり、これらには、服装工業用のテキスタイルと同様、例えば、カーペット及び他のホームテキスタイル及び工業的な目的のためのテキスタイル構造物が含まれる。これらは、例えば、ステープル等の形ができあがっていない構造物、ツイン、フィラメント、ヤーン、ライン、ストリング、レース、ブライド、縄類等の線状構造物、及び例えば、フェルト、織布（woven）、形成−ループニット、不織布、及び詰綿等の３次元構造物を含む。テキスタイル基体は、天然由来の材料であって良く、例えば、コットン、ウール、又は亜麻、又はブレンドの材料であって良く、例えば、コットン／ポリエステル、コットン／ポリアミドであって良い。好ましくは、本発明の目的のために、テキスタイル／複数種類のテキスタイルは、ポリアクリロニトリル、ポリアミド、及び特に、ポリエステル、又は以下のブレンド、すなわち、天然由来の材料とポリアクリロニトリル、ポリアミド及び特にポリエステルのブレンドである。
【０００８】
本発明の目的のための革は、なめした、又は仕上られた動物の皮（hide）が好ましく、及びいわゆるスプリットレザー（split leather）も好ましい。
【０００９】
本発明の目的のための被覆は、本発明に従い被覆されるべき基体の面積の少なくとも１０％、好ましくは少なくとも２５％、及びより好ましくは少なくとも５０％を覆う（カバーする）少なくとも１種のヒドロホビンの単分子層（monomolecular layer）を意味する。繊維性基体の被覆の程度は、通常の方法、例えば顕微鏡による手法によって測定される。
【００１０】
本発明は、繊維性基体の被覆表面用に、少なくとも１種のヒドロホビンを使用する。単一種のヒドロホビンを使用可能であり、又は異なる複数種類のヒドロホビンを使用することが可能である。
【００１１】
ヒドロホビンは、公知のプロテイン（protein）であり、好ましくは小ペプチド（スモールペプチド）で、糸状菌（filamentous fungi）例えば、シゾフィラムコムネ（Schizophyllum commune）に特有のものである。通常、これらは８個のシステインを有している。ヒドロホビンは、天然の原料から単離することができる。しかし、ヒドロホビンは、化学的及び／又は生物工学的な生成手段で、非天然由来（non-naturally-occurring）のヒドロホビンを合成することもできる。
【００１２】
ここで使用される「ヒドロホビン」という用語は、一般構造式（Ｉ）、
Ｘn−Ｃ1−Ｘ1-50−Ｃ2−Ｘ0-5−Ｃ3−Ｘ1-100−Ｃ4−Ｘ1-100−Ｃ5−Ｘ1-50−Ｃ6−Ｘ0-5−Ｃ7−Ｘ1-50−Ｃ8−Ｘm （Ｉ）
（但し、Ｘは、２０種の天然由来のアミノ酸（Ｐｈｅ、Ｌｅｕ、Ｓｅｒ、Ｔｙｒ、Ｃｙｓ、Ｔｒｐ、Ｐｒｏ、Ｈｉｓ、Ｇｌｎ、Ａｒｇ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｌｙｓ、Ｖａｌ、Ａｌａ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｇｌｙ）であって良い。）のプロテインを意味することが好ましい。各Ｘは、同一であって良く、異なっていても良い。Ｘに続く指数（indice）は、各場合においてアミノ酸の数を表し、Ｃは、システイン、アラニン、セリン、グリシン、メチオニン、又はトレオニンを表し（但し、Ｃで定義されるアミノ酸の少なくとも４個がシステインである。）、そして、指数ｎ及びｍは、独立して０〜５００の範囲の自然数、好ましくは１５〜３００の範囲の自然数である。
【００１３】
本発明の１実施の形態では、使用するヒドロホビンは、ガラス表面にヒドロホビンを被覆した後、水の滴（５μｌ）の接触角度が、少なくとも２０°、好ましくは２５°、及び特に好ましくは３０°増加する（各場合、室温で測定）という特性によって特徴づけられる（但し、上記接触角度の増加は、同一の大きさの水の滴と、被覆を行なっていないガラス表面との接触角度と比較してのものである。）。
【００１４】
Ｃ1〜Ｃ8で表されたアミノ酸は、システインが好ましいが、しかし、これらは、内容（bulk）が類似した他のアミノ酸であっても良く、好ましくは、アラニン、セリン、トレオニン、メチオニン又はグリシンであっても良い。しかしながら、Ｃ1〜Ｃ8の箇所の、少なくとも４箇所、好ましくは少なくとも５箇所、より好ましくは少なくとも６箇所、及び特に７箇所が、システインで構成されているべきである。本発明に従うプロテイン中のシステインは、還元された状態で存在して良く、又は互いに二硫化ブリッジを形成して存在して良い。Ｃ−Ｃブリッジを分子間で形成することが特に好ましく、特に少なくとも１個、好ましくは２個、より好ましくは３個及び最も好ましくは４個の分子間二硫化ブリッジを含むものである。上述した、システインを、内容（bulk）が類似したアミノ酸で交換する場合、互いに二硫化ブリッジを形成可能なものが、そのようなＣ−箇所に、対となって交換されることが有利である。
【００１５】
従って、システイン、セリン（serine）、アラニン、グリシン、メチオニン、又はトレオノンがＸで示された位置にも使用される場合、一般式における、個々のＣ−箇所の番号付けは、変化して良い。
【００１６】
一般式（ＩＩ）、
Ｘn−Ｃ1−Ｘ3-25−Ｃ2−Ｘ0-2−Ｃ3−Ｘ5-50−Ｃ4−Ｘ2-35−Ｃ5−Ｘ2-15−Ｃ6−Ｘ0-2−Ｃ7−Ｘ3-35−Ｃ8−Ｘm （ＩＩ）
（但し、Ｘ、Ｃ及びＸとＣに続く指数は、上記に定義したものであり、しかし、指数ｎとｍは、０〜３００の範囲の数を表す。）のプロテインを使用することが好ましく、そしてこのプロテインは、更に上述した接触角の変化で区別可能であり、そして、更に、Ｃで定義される（表される）アミノ酸の内、少なくとも６個がシステインである。Ｃで表されるアミノ酸の全てがシステインであることが特に好ましい。
【００１７】
一般式（ＩＩＩ）、
Ｘn−Ｃ1−Ｘ5-9−Ｃ2−Ｃ3−Ｘ11-39−Ｃ4−Ｘ2-23−Ｃ5−Ｘ5-9−Ｃ6−Ｃ7−Ｘ6-18−Ｃ8−Ｘm （ＩＩＩ）
（但し、Ｘ、Ｃ及びＸとＣに続く指数は、上記に定義したものであり、しかし、指数ｎとｍは、０〜２００の範囲の数を表す。）のプロテインを使用することが好ましく、そしてこのプロテインは、更に上述した接触角の変化で区別可能なものである。
【００１８】
残基（残留物：residue）、Ｘn及びＸmは、ペプチド配列であって良く、このペプチド配列は、ヒドロホビンに自然に結合していても良い。しかしながら、残基ＸnとＸmの何れか、又は両方がペプチド配列と自然には結合しないペプチド配列であっても良い。ここで、ＸnとＸm内で、ヒドロホビン中に自然に発生（存在）するペプチド配列が、ヒドロホビン中には自然には発生しないペプチド配列によって延長（増量）されている場合も含まれる。
【００１９】
Ｘn及び／又はＸmが、ヒドロホビンと自然には結合しないペプチド配列である場合、このような配列（シーケンス）の長さは通常、少なくとも２０アミノ酸であり、この長さは、少なくとも３５アミノ酸であることが好ましく、少なくとも５０アミノ酸であることがより好ましく、そして、少なくとも１００アミノ酸であることが最も好ましい。ヒドロホビンと自然には結合しないこの種の残基は、以降、融合相手部分（fusion partner portion）とも称される。このことは、本発明に従い使用されるプロテインは、少なくとも１種のヒドロホビン部分（hidorohobin portion）と、融合相手部分（これらは、この状態では自然には一緒に発生しない。）とから構成されて良いことを説明することを意図している。
【００２０】
この融合相手部分は、多種のプロテインから選ばれて良い。複数の融合相手部分が１個のヒドロホビン部分、例えば、ヒドロホビン部分のアミノ末端基（アミノ末端部分）（Ｘn）、又はカルボキシル末端基（Ｘm）と結合することも可能である。しかし、例えば、２個の融合相手部分が、本発明に従い使用されるプロテインの１箇所（Ｘn又はＸm）と結合することも可能である。
【００２１】
特に適切な融合相手部分は、微生物（microorganismus）、特にＥ．コイル又はバチルスサブチリス中に天然に発生するプロテインである。このような融合相手部分の例は、配列ｙａａｄ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５及び１６）、ｙａａｅ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７及び１８）及びチオレドキシン（thioredoxin）である。同様に、非常に適切なものは、上述した配列の断片又は誘導体で、これは、上述した配列の１部分のみ、好ましくは７０％〜９９％及び、より好ましくは８０〜９８％のものを含み、又は、上述した配列に対して、個々のアミノ酸又はヌクレオチドが取替えられているものであっても良い（なお、百分率は、全てアミノ酸の数に対してである）。
【００２２】
本発明に従い使用されるプロテインは、そのポリペプチド配列において、例えば、グリコシル化、アセチル化によって、又は他に、例えばグルタルアルデヒドでの化学的な架橋によって、追加的に修飾（改変：modify）されていても良い。
【００２３】
本発明に従い使用されるプロテインの特性の一つには、表面（surface）がこのプロテインで被覆された場合には、表面特性が変化することが挙げられる。表面特性の変化は、表面をプロテインで被覆する前と後で、水の滴の接触角を測定し、そしてこの２つの測定値の差を測定（計算）することにより、実験的に確かめることができる。
【００２４】
この技術分野の当業者は、接触角の測定を行う方法を知っているものと考えられる。この説明した接触角の測定の正確な実験条件は、実施例部分に記載されている。
【００２５】
今日までに知られているヒドロホビンのヒドロホビン部分には、極性及び非極性（apolar）アミノ酸の部分（箇所：position）が含まれて（保存されて）おり、これは、特徴的なヒドロホビンプロット（hydrophobicity plot）を提供する。生物物理的特長及び疎水性（hudrophobicity）の差異により、今日までに知られているヒドロホビンは、クラスＩとＩＩ（Ｗａｓｓｅｌｓ ｅｔ ａｌ．， Ａｎｎ． Ｒｅｖ．Ｐｈｙｔｏｐａｔｈｏｌ．，１９９４，３２，４１３−４３７）の２種類に分けられる。
【００２６】
クラスＩのヒドロホビンの（集められた）被膜は、不溶性の傾向が非常に強く（例えば、ナトリウムｎ−ドデシルサルフェート（ＳＤＳ）の１質量％の水溶液に、８０℃に昇温させても不溶性である。）であり、そして、濃縮トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）又は蟻酸でのみ解離可能である。これに対して、クラスＩＩのヒドロホビンの（集められた）型は、より不安定である（安定性に劣る）。これらは、エタノールの６０質量％（溶液）又はＳＤＳの１質量％（溶液）（それぞれ、水中のもので、室温である。）に溶解可能である。
【００２７】
アミノ酸配列を比較した場合、システインＣ3とシステインＣ4との間の領域の長さは、クラスＩのヒドロホビンよりもクラスＩＩのヒドロホビンの方が明らかに短いことがわかる。更に、クラスＩＩのヒドロホビンは、クラスＩのヒドロホビンよりも、より荷電された（charged）アミノ酸を有している。
【００２８】
本発明を実施するための、特に好ましいヒドロホビンは、タイプｄｅｗＡ、ｒｏｄＡ、ｈｙｐＡ、ｈｙｐＢ、ｓｃ３、ｂａｓｆ１、ｂａｓｆ２のもので、これらは以下に列挙する配列に構造的な特徴を有している。これら（上記好ましいヒドロホビン）は一部分のみ、又はこれらの誘導体であって良い。ヒドロホビン部分の複数を結合させることも可能であり、これについては、２又は３個の同一又は異なる構造物を一緒に、及び対応する適切なポリペプチド配列（このポリペプチド配列は、自然にはヒドロホビンと結合しないものである。）に結合することが好ましい。
【００２９】
本発明を行うために適切なものは、更に、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０，２２，２４中に示されたポリペルチド配列を有する融合プロテイン（fusion protein）、及びそのためにコードする核酸配列（nucleic acid sequence）を有する融合プロテインであり、特にＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９，２１，２３に従う配列を有するものである。特に好ましい実施の形態として、更に、プロテインは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２，２２又は２４中に示されたポリペプチド配列から出発して、全てのアミノ酸の、少なくとも１から１０以下、好ましくは５以下、特に好ましくは５％を、変換（置換）、挿入（差込：insertion）又は削除（deletion）することにより得られ、且つ出発プロテインの生物学的特性を少なくとも５０％有しているプロテインを含む。本発明に従い使用されるプロテインの生物学的特性は、ここでは、上述した接触角度が少なくとも２０°変化することを意味するものとして理解される。
【００３０】
本発明に従い使用されるプロテインは、ペプチド合成の通常の技術（例えば、メリフィールド（Merrifield）固相合成）によって化学的に製造可能である。
【００３１】
自然に発生するヒドロホビンは、適切な方法を使用して、天然原料から分離することができる。例えば、Ｗｏｓｔｅｎ ｅｔ． ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏ．６３，１２２−１２９（１９９４）又はＷＯ９６／４１８８２が参照可能である。
【００３２】
融合プロテインは、遺伝子工学法によって製造可能であることが好ましく、この遺伝子工学法では、融合相手のため、及びヒドロホビン部分のためにコードする核酸配列、特にＤＮＡ配列が（互いに）組合され、これにより、ホスト有機体（宿主有機体：host organism）中で、組合された核酸配列の遺伝子発現（expression）により、所望のプロテインが形成されるものである。このような製造方法は、本願の出願人による、先願のＤＥ１０２００５００７４８０．４に開示されている。
【００３３】
上述した製造方法のために適切なホスト有機体（生成有機体）は、原核生物（prokaryotes）（始原（Archaea）を含む）又は真核生物（eukaryotes）であって良く、特にハロバクテリア含有バクテリア及びｍｅｔａｎｏｃｏｃｃｉ、フンギ（菌）、インセクトセル（昆虫細胞）、植物細胞、及び哺乳類細胞、より好ましくはＥｓｃｅｒｉｃｈｉａコイル、バチルスサブチリス、バチルスメガテリウム（megaterium）、アスペルギルスオリジア（Aspergillus oryzea）、アスペルギルスニドランス（Aspergillus nidulans）、アスペルギルスニガー（Aspergillus niger）、ピキアパトリス（Pichia pastoris）、シュードモナス（Pseudomonas）種（spec．）、ラクトバシリ（Lactobaclli）、ハンセヌラポリモルファ（Hansenula polymorpha）、トリコデルマレーゼイ（Trichoderma reesei）、ＳＦ９（及び関連する細胞）等であって良い。
【００３４】
更に、本発明の枠内で、ヒドロホビンとして、更に遺伝子発現構築体（expression construct）を使用可能であり、この遺伝子発現構築体は、遺伝子制御下に調節（規定）される核酸配列、本発明に従い使用されるプロテインをコードする核酸配列、及びこれら遺伝子発現構築体を少なくとも１種含むベクターを含むものである。
【００３５】
使用する遺伝子発現構築体は、好ましくは、それぞれコード配列（暗号配列：coding sequence）の５’−上流側に、（１つの）プロモーター（promoter）を含み、及び（それぞれコード配列の）３’−下流側に、末端配列（ターミネーター配列）を含み、及び所望により、通常の別の調節エレメント（regulatory element）を含み、それぞれは、実質的に（操作上）、コード配列と結合している。
【００３６】
上記「実質的に（操作上）結合」された状態では、プロモーター、コード配列（コード化配列：coding sequence）、ターミネーター、及び所望により別の調節エレメントの配列的な配置が、以下のようになっている、すなわち、コード配列の遺伝子発現において、各調節エレメントが、その機能を規定に従い発揮され得る（満たされ得る）ようになっていると理解される。
【００３７】
結合可能なことが明らかな配列の例は、標的（targeting）配列、及びエンハンサー（enhancer）、ポリアデニル化シグナル等である。更なる調節エレメントは、選択性（selectable）マーカー、増幅（amplification）シグナル、複製の原点（origin）等である。適切な調節エレメント配列は、例えば、Ｇｏｅｄｄｅｌ，Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ １８５， Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ， Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ， ＣＡ（１９９０）に記載されている。
【００３８】
これらの調節配列（regulatory sequence）に加え、これら配列の自然の調節（regulation）が、実際の構造遺伝子の上流（upstream）に存在しても良く、及び適切であれば、自然調節が排除（スイッチオフ）され、そして遺伝子の発現が、高められるように遺伝子上、修飾（改変）されて良い。
【００３９】
好ましい核酸構築体は、上述したエンハンサーの配列を１種以上含むことが有利であっても良い。ここで、このエンハンサーの配列は、プロモーターと機能的に結合しており、そして、核酸配列の発現を高めることができるものである。また、ＤＮＡ配列の３’エンドに、更に、調節エレメント又はターミネータ等の、有利な配列が挿入されても良い。
【００４０】
核酸は、１個以上のコピーの状態で構築体中に含まれても良い。構築体（construct）は、更に、抗生物質耐性（antibiotic resistance）又は栄養要求性相補遺伝子（auxotrophy−complemeting gene）等の付加的なマーカー（marker）を（場合により、構築体上で選択するために）含んでも良い。
【００４１】
この方法のために有利な調節配列は、例えば、ｃｏｓ、ｔａｃ、ｔｒｐ、ｔｅｔ、ｔｒｐ、ｔｅｔ、ｌｐｐ、ｌａｃ、ｌｐｐ−ｌａｃ、ｌａｃｌｑ−Ｔ７、Ｔ５、Ｔ３、ｇａｌ、ｔｒｃ、ａｒａ、ｒｈａＰ（ｒｈａＰＢＡＤ）ＳＰ６、ｌａｍｂｄａ−ＰＲ又はｉｍｌａｍｂｄａ−Ｐプロモーター等のプロモーター中に存在する（ここで、プロモーターは、グラム陰性（Gram−negative）バクテリア中に使用することが有利である）。更に、有利な調節配列は、例えば、グラム陽性（Gram−positive）プロモーターのａｍｙ及びＳＰ０２中に、イースト（yeast）又は菌（fungal）プロモーターＡＤＣ１、ＭＦａｌｐｈａ、ＡＣ、Ｐ−６０、ＣＹＣ１、ＧＡＰＤＨ、ＴＥＦ、ｒｐ２８、ＡＤＨ中に存在する。
【００４２】
調節のために、人工的なプロモーターを使用することも可能である。
【００４３】
ホスト有機体（宿主有機体）中で発現するために、核酸構築体は、ベクター中に有利に装入される。ここで、このベクターは、例えば、プラスミド又はファージ（phage）等のものであり、これらは、ホスト（宿主：host）中に遺伝子の最適な発現を可能にするものである。
【００４４】
ベクターは、プラスミド（plasmid）及びファージと同様、更に、それ自身公知のベクターを含む。この公知のベクターは、例えば、ＳＶ４０、ＣＭＶ等のウィルス、バキョロウィルス（baculovirus）及びアデノウィルス（adenovirus）、トランスポゾン（transposons）、ＩＳ要素、ファスミド（phasmids）、コスミド（cosmids）、及び直線状又は環式ＤＮＡ、及び又、アグロバクテリウム（Agrobacterium）系である。
【００４５】
これらのベクターは、ホスト有機体内で、内因的に再現（複製）されて良く、又は染色体的に再現されて良い。これらベクターは、本発明の別の形態を構成する。適切なプラスミド（plasmid）の例は、Ｅコイル、ｐＬＧ３３８、ｐＡＣＹＣ１８４、ｐＢＲ３２２、ｐＵＣ１８、ｐＵＣ１９、ｐＫＣ３０、ｐＲｅｐ４、ｐＨＳ１、ｐＫＫ２２３−３、ｐＤＨＥ１９．２、ｐＨＳ２、ｐＰＬｃ２３６、ｐＭＢＬ２４、ｐＬＧ２００、ｐＵＲ２９０、ｐｌＮ−ＩＩＩ”３−Ｂ１、ｔｇｔ１１又はｐＢｄＣｌ中のもの、ストレプトミセス（Streptomyces）、ｐｌＪ１０１、ｐｌＪ３６４、ｐｌＪ７０２、又はｐｌＪ３６１中のもの、バチウス（Bacillus） ｐＵＢ１１０、ｐＣ１９４、又はｐＢＤ２１４中のもの、コリネバクテリウム（Corynebacterium） ｐＳＡ７７又はｐＡＪ６６７中のもの、菌（フンギ）ｐＡＬＳ１、ｐｌＬ２又はｐＢＢ１１６中のもの、イースト（yeasts）２アルファ、ｐＡＧ−１、ＹＥｐ６、ＹＥｐ１３、又はｐＥＭＢＬＹｅ２３中のもの、又は植物ｐＬＧＶ２３、ｐＧＨｌａｃ＋、ｐＢＩＮ１９、ｐＡＫ２００４又はｐＤＨ５１中のものである。上述したプラスミドは、可能なプラスミドの小部分を選択して示したものである。更なるプラスミドは、それ自身公知であり、そして、例えば、ｂｏｏｋ Ｃｌｏｎｉｎｇ Ｖｅｃｔｏｒｓ（Ｅｄｓ．Ｐｏｕｗｅｌｓ Ｐ．Ｈ．ｅｔ ａｌ． Ｅｌｓｅｖｉｅｒ， Ａｍｓｔｅｒｄａｍ−Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ−Ｏｘｆｏｒｄ、１９８５、ＩＳＢＮ ０４４４９０４０１８）に見出される。
【００４６】
存在する他の遺伝子を発現させるために、核酸構築体は、更に、３’−及び／又は５’−ターミナル調節配列を含み、ホスト又は遺伝子（遺伝子は複数種類の場合を含む）の選択に従い、最適の発現のために選択された発現を高めることが有利である。
【００４７】
これら調節配列は、目標とする遺伝子の発現とプロテイン発現を可能にすることを意図している。ホスト有機体に依存して、このことは、例えば、遺伝子が、誘導（induction）の後にのみ発現又は過剰発現（overexpress）されて良いことを意味して良く、又は直ちに発現又は過剰発現されて良いことを意味して良い。
【００４８】
調節配列或いはファクター（因子：factor）は、これにより好ましくは、導入された遺伝子発現に積極的な影響を及ぼすことが可能であり、そしてこれにより、高めることができる。従って、転写シグナル、例えばプロモーター及び／又はエンハンサーを使用することにより、調節エレメントの強化を転写領域（transcription level）上で有利に行うことができる。しかしながら、これに加え、例えば、ｍＲＮＡの安定性を改良することにより、翻訳を高めることも可能である。
【００４９】
ベクターの他の形態では、核酸構築体又は核酸を含むベクターは、直線状（直鎖状）ＤＮＡの状態で、微生物中に有利に導入されても良く、そしてヘテローグ（異種又は相異：heterologous）又はホモローグ（同種又は相同：homologous）の組換えを介して、ホスト有機体のゲノムに統合されても良い。この直線状ＤＮＡは、プラスミド等の直線化ベクターで構成されて良く、又は核酸構築体又は核酸のみよって構成されても良い。
【００５０】
ヘテローグ遺伝子の、有機体中での最適の発現のために、有機体中で使用される特定の「コドン（codon）使用」に従い、核酸配列を修飾することが有利である。「コドン使用」は、対象となる有機体の、他の既に知られている遺伝子をコンピュータ解析することにより容易に決定することができる。
【００５１】
発現カセットは、適切なプロモーターを適切なコード核酸配列（coding nucleotide sequenve）及びターミネータ又はポリアデニル化シグナルに融合されることにより製造される。例えば、Ｔ．Ｍａｎｉａｔｉｓ，Ｅ．Ｆ．Ｆｒｉｔｓｃｈ ａｎｄＪ．Ｓａｍｂｒｏｏｋ， Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ， ＮＹ（１９８９）に、及びまた、Ｔ．Ｊ．Ｓｉｌｈａｖｙ，Ｍ．Ｌ．Ｂｅｒｍａｎ ａｎｄ Ｌ．Ｗ．Ｅｎｑｕｉｓｔ， Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ ｗｉｔｈ Ｇｅｎｅ Ｆｕｓｉｏｎｓ， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ（１９８４）中に、及びＡｕｓｕｂｅｌ， Ｆ．Ｍ．ｅｔａｌ．， Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ， Ｇｒｅｅｎｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ａｓｓｏｃ． ａｎｄ Ｗｉｌｅｙ Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ（１９８７）中に記載された、通常の組換え及びクローン技術がこの目的のために使用される。
【００５２】
適切なホスト有機体内で発現を達成するために、組換え核酸構築体又は遺伝子構築体が、ホスト中で遺伝子の最適の発現を提供するホスト特殊ベクター（host-specific vector）に有利に挿入される。ベクターは、それ自身は公知であり、そして例えば、「Ｃｌｏｎｉｎｇ Ｖｅｃｔｏｒｓ」（Ｐｏｕｗｅｌｓ Ｐ．Ｈ． ｅｔａｌ．，Ｅｄｓ，Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，Ａｍｓｔｅｒｄａｍ−Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ−Ｏｘｆｏｒｄ，１９８５）から得ることができる。
【００５３】
例えば、少なくとも１種のベクターで形質転換（transform）され、そして、本発明に従い使用されるプロテインを製造するために使用されて良い組換え微生物を、ベクターの補助下に製造することができる。有利なことに、上述した組換え発現構築体は、適切なホストシステム（宿主系）に導入され、そして発現される。これに関連して、特定の発現系中に発現するべき核酸を発生させるために、当業者にとって公知の、通常のクローン化法及びトランスフェクション法、例えば、共析出（coprecipitation）、プロトプラスト融合、エレクトロポーレイション、レトロウィルストランスフェクション等の方法を使用することが好ましい。適切な系（system）は、例えば、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、 Ｆ．Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．， Ｅｄｓ．，Ｗｉｌｅｙ Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ １９９７又はＳａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ． ２ｎｄ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ，１９８９に記載されている。
【００５４】
ホモローグに組換えられた微生物を製造することも可能である。この目的のために、本発明に従い使用される遺伝子の少なくとも１切片（区分：section）又は、コード配列の１切片を含むベクターが、このために製造される。ここで、適切であれば、この配列を修飾（改変）、例えば機能的に分解（disrupt）するために（ノックアウトベクター）、少なくとも１種のアミノ酸−削除、−付加、又は−置換が導入される。導入された配列は、例えば、関連する微生物からのホモローグ（ホモログ変換）であっても良く、又哺乳類、イースト、又はインセクトのソース（供給源）から誘導されても良い。この代わりに、ホモローグ性組換えのために使用されるベクターは、以下のように設計されて良い。すなわち、ホモローグ性組換えの場合、内生的な遺伝子が、変異（mutate）するか、又は他に、代えられるが、しかし機能プロテインをなおエンコード（encode）するように設計されて良い（例えば、上流の調節領域が、これにより内生的なプロテインの発現が代えられるように、代えられていても良い。）。本発明に従い使用される遺伝子の、代えられた切片は、ホモローグ性組換えベクター中に存在する。ホモローグ性組換えのために適切なベクターの構成は、例えば、Ｔｈｏｍａｓ，Ｋ．Ｒ．及びＣａｐｅｃｃｈｉ，Ｍ．Ｒ．（１９８７）Ｃｅｌｌ５１：５０３に記載されている。
【００５５】
本発明に従い使用される核酸、又は核酸構築体のために適切な、組換えホスト有機体は、原則として、何れの原核性又は真核性有機体であっても良い。有利なことに、バクテリア、菌（フンギ）、又はイースト等の微生物が、ホスト有機体として使用される。グラム陽性又はグラム陰性バクテリア、好ましくは、科（ファミリー）、腸内細菌（Enterobacteriaceae）、シュードモナス（Pseudomonadaceae）、リゾビアセー（Rhizobiaceae）、ストレプミセトアセー（Streptomycetaceae）又はノカルジセアエ（Nocardiceae）、特に好ましくは、類（genera）、エシェキアノ（大腸菌：Escherichia）、シュードモナス（Pseudomonas）、ストレプトマイセス（Streptomyces）、ノルカルディア（Nocardia）、バークホルディア（Burkholderia）、サルモネラ（Salmonella）、アグロバクテリウム（Agrobacterium）又はロドコッカス（Rhdococcus）が有利に使用される。
【００５６】
融合プロテインの製造方法に使用される有機体は、ホスト有機体に依存して、当業者にとって公知の方法で栽培（飼育）又は培養される。微生物は、通常、炭素供給源（通常は砂糖の状態）、窒素供給源（通常は、イースト抽出物、又は硫化アンモニウムの塩等の有機窒素供給源の状態）、鉄塩、マンガン塩等の少量の要素（元素）、及び適切な場合には、ビタミンを含む液体媒体中で、０℃〜１００℃の温度、好ましくは１０℃〜６０℃の温度で、酸素の供給下に栽培（飼育）される。これに関連し、栄養液体のｐＨは、一定の値に維持されて良く、すなわち、培養の間調節しても、調節しなくても良い。培養は、非連続的（バッチ式：batchwise）、準バッチ式、又は連続的に行って良い。栄養剤は、発酵の初期に導入して良く、又、後に、準連続的又は連続的な方法で導入して良い。酵素は、実施例に記載した方法で有機体から分離して良く、又粗製抽出物として反応に使用して良い。
【００５７】
本発明に従い使用されるプロテイン又は機能的（functional）、生物学的に活性な部分は、組換え製造方法によって製造されても良く、ここで、この製造方法では、プロテインを製造する微生物が培養され、適切であれば、プロテインの発現が誘導され、そして上述したプロテインが培養から分離される。本発明に従い使用されるプロテインは、所望する場合には、この方法により工業規模で製造されて良い。組換え微生物は、公知の方法で培養され、そして、発酵されて良い。バクテリアは、例えば、ＴＢ媒体又はＬＢ媒体中で、及び２０℃〜４０℃の温度で、及び６〜９のｐＨで繁殖させて良い。適切な培養条件は、例えば、Ｔ．Ｍａｎｉａｔｉｓ，Ｅ．Ｆ．Ｆｒｉｔｓｃｈ ａｎｄ Ｊ．Ｓａｍｂｒｏｏｋ， Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ， ＮＹ（１９８９）に詳細に記載されている。
【００５８】
本発明に従い使用されるプロテインが、培養媒体に分泌（secrete）されない場合、細胞は分解（崩壊）され、そして、公知のプロテイン分離法により、生成物がリゼイド（溶解質：lysate）から得られる。細胞は、所望するように分解して良く、この分解は、高周波超音波を使用して、高圧を使用して、例えば、Ｆｒｅｎｃｈ圧力セル中で、ｏｓｍｏｌｙｓｉｓを使用して、洗浄剤（detergent）、溶菌（lytic）酵素又は有機溶媒の作用で、同質器（ホモナイザー）を使用して、又は上述した方法の２種以上を組合わせて行われる。
【００５９】
本発明に従い使用されるプロテインは、分子篩クロマトグラフィ（ゲル濾過）、例えばＱ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅクロマトグラフィ、イオン交換クロマトグラフィ、及び疎水性クロマトグラフィ等の公知のクロマトグラフィ法、及びウルトラ濾過、結晶化、塩化分離（salting-out）、透析（dialysis）及び自然ゲル電気泳動等の他の通常の方法を使用して精製して良い。適切な方法は、例えば、Ｃｏｏｐｅｒ，Ｆ．Ｇ．Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｃｈｅ Ａｒｂｅｉｔｓｍｅｔｈｏｄｅｎ， Ｖｅｒｌａｇ Ｗａｌｔｅｒ ｄｅ Ｇｒｕｙｔｅｒ， Ｂｅｒｌｉｎ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋに、又はＳｃｏｐｅｓ、Ｒ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ Ｖｅｒｌａｇ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ， Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ， Ｂｅｒｌｉｎに記載されている。
【００６０】
ベクター系（vector system）又はオリゴヌクレオチドを使用して組換えプロテインを分離（単離）することが有利であって良い。ここで、オリゴヌクレオチドは、（所定のヌクレオチド配列分）ｃＤＮＡを延長させる。そして、延長したｃＤＮＡで、変えられたポリペプチド又は融合プロテインをコードするもので、これは、例えば精製の簡素化に役立つ。この種の適切な修飾（modification）の例は、アンカーとして機能する、いわゆる「ｔａｇｓ」（例えば、ヘキサ−ヒスチジンアンカーとして公知の修飾）、又は、抗体の抗原として識別されているエピトピ（epitopes）（例えば、Ｈａｒｌｏｗ， Ｅ．ａｎｄ Ｌａｎｅ，Ｄ．，１９８８，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ．Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ（Ｎ．Ｙ．） Ｐｒｅｓｓに記載されている。）を含む。他の適切なｔａｇは、例えば、ＨＡ、ｃａｌｍｏｄｕｌｉｎ−ＢＤ、ＧＳＴ、ＭＢＤ；ｃｈｉｔｉｎ−ＢＤ、ｓｔｅｐｔａｖｉｄｉｎ−ＢＤ−ａｖｉ−ｔａｇ、Ｆｌａｇ−ｔａｇ、Ｔ７等である。これらのアンカーは、プロテインを、例えば、ポリマーマトリックス（ポリマーマトリックスは、例えば、クロマトグラフィカラムに詰め込まれても良い。）等の固定の基体（support）に留めるために使用されて良く、又は、微小滴定（microtiter）プレート又は他の基体に留めるために使用されても良い。対応する精製施行例（プロトコール）は、市販の類似するｔａｇの提供者から得られる。
【００６１】
上述のように製造されるプロテインは、融合プロテインとして直接的に使用して良く、又は切断（cleaving off）し、及び融合相手部分を除去した後、「純粋」なヒドロホビンとして使用しても良い。
【００６２】
融合相手部分の除去が意図される場合、可能な切断部位（cleavage site）（プロテアーゼ（タンパク質分解酵素）のための、特定の認識部位）を、融合プロテイン中、ヒドロホビン部分と、融合相手部分との間に挿入する（移入する）ことが有利である。適切な切断部位は、特に、他の場合では、ヒドロホビン部分中にも、融合相手部分中にも発生しないペプチド配列を含む。このことは、生命情報学機器を使用して容易に調査（確認）可能である。特に好ましくは、例えば、メチオニン上のＢｒＣＮ切断、又はファクター（因子）Ｘａ、エンテロキナーゼ（enterokonase）を有する切断を有するプロテアーゼ媒介（protease−mediated）切断、トロンビン（thrombin）、ＴＥＶ−切断（ｔａｂａｃｃｏ ｅｔｃｈ ウィルスプロテアーゼ）である。
【００６３】
表面を被覆するために、本発明に従い、ヒドロホビンを実質的に使用可能である。ヒドロホビンは水性処方物の状態で使用されることが好ましい。
【００６４】
本発明を行うためのヒドロホビンの選択は、基本的に制限されるものではない。１種のヒドロホビンを使用することが可能であり、又他に異なる複数種類のヒドロホビンを使用することも可能である。例えば、融合プロテイン、例えばｙａａｄ−Ｘａ−ｄｅｗＡ−ｈｉｓ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９）又はｙａａｄ−Ｘａ−ｒｏｄＡ−ｈｉｓ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１）を使用することができる。
【００６５】
ヒドロホビンは、上述したように、本発明に従い、テキスタイル基体及び革から選ばれる繊維性基体の表面を被覆するために使用される。
【００６６】
ヒドロホビンは上述したように、本発明に従い、テキスタイル基体及び革から選ばれる繊維性基体の表面を被覆するために使用される（この場合、エピクロロヒドリン等のアルキル化に強く作用する化合物、又はＤＭＤＨＥＵ等の架橋剤は用いられない）。
【００６７】
更に、本発明はテキスタイル基体及び革から選ばれる繊維性基体の表面を、少なくとも１種のヒドロホビンを使用して被覆する方法を提供する。ヒドロホビン、繊維性基体、テキスタイル基体及び革及び被覆は、全て上記に定義したものである。
【００６８】
本発明の１実施の形態では、本発明の方法は、被覆の対象となる繊維性基体を少なくとも１種の水性処方物、好ましくは、少なくとも１種のヒドロホビンを含む水溶液（aueous liquor）で被覆することにより行われる。
【００６９】
水溶液割合（liquor ratio）は、例えば、１０：１〜１０００：１であり、及び好ましくは７０：１〜５００：１の範囲である。
【００７０】
本発明の１実施の形態では、被覆の対象となる繊維性基体を、少なくとも１種のヒドロホビンを含む、少なくとも１種の水性処方物、好ましくは水溶液と、排出工程（exhaust process）により接触させることを含む。
【００７１】
本発明の他の実施の形態では、被覆の対象となる繊維性基体を、少なくとも１種のヒドロホビンを含む、少なくとも１種の水性処方物、好ましくは水溶液と、パッディング工程（padding process）により接触させることを含む。
【００７２】
本発明の１実施の形態では、繊維性基体、特にテキスタイル基体をヒドロホビンと、タンク中で、又は好ましくはパッドマングルを使用して接触させることを含む。
【００７３】
本発明の１実施の形態では、繊維性基体、特にテキスタイル基体をヒドロホビンと、０℃〜９０℃の温度範囲、好ましくは室温〜８５℃の温度範囲で接触させることを含む。
【００７４】
本発明の１実施の形態では、繊維性基体、特にテキスタイル基体をヒドロホビンと、タンク中で、又は好ましくはパッドマングルを使用して接触させ、そして次に、例えば２０〜１２０℃の温度範囲で乾燥させることを含む。
【００７５】
本発明の１実施の形態では、繊維性基体、特にテキスタイル基体をヒドロホビンと、タンク中で、又は好ましくはパッドマングルを使用して接触させ、そして次に、例えば２０〜１２０℃の温度範囲で、及び、５秒〜１５分の期間、及び好ましくは５分以下の期間乾燥させることを含む。適切な乾燥温度範囲は、例えば、２０℃〜１２０℃であり、そして好ましくは１０５℃以下である。温度が低くなる程、乾燥時間が長くなり、そしてこの逆も当てはまる。
【００７６】
本発明に従い、パッドマングルを使用して、繊維性基体をヒドロホビンと接触させるために、例えば、供給速度（適用速度）を０．１〜１０ｍ／分の範囲、及び好ましくは１〜５ｍ／分の範囲に選択し、及びロールの押圧力を０．５〜４バールの範囲、及び好ましくは１〜３バールの範囲に選択することが可能である。
【００７７】
本発明の１実施の形態では、繊維性基体（特に革）をヒドロホビンと、例えば、スプレーがけにより、少なくとも１種のヒドロホビンを含む水性処方物で、１回以上、繊維性基体を覆う（カバーする）ことにより接触させることを含む。
【００７８】
水性処方物は、１〜２４時間の範囲、及び好ましくは１２〜１７時間の範囲で繊維性基体に作用させて良い。
【００７９】
本発明の方法に使用される水性処方物は、溶媒又は水の混合物及び水混和性有機溶媒として、水を使用して製造することが好ましい。水混和性有機溶媒の例は、水混和性モノヒロリック（一価）又はポリヒドリック（多価）アルコール、例えば、メタノール、エタノール、ｎ−プロパノール、ｉ−プロパノール、エチレングリコール、プロピレングリコール、又はグリセロールを含む。これらは、エーテルアルコールであっても良い。例は、（ポリ）エチレンのモノアルキルエーテル又は、（ポリ）プロピレングリコール、例えばエチレングリコールモノブチルエーテルを含む。水溶性有機溶媒の特性（identity）と量は、それ自体は重要ではなく、そして、例えば、本発明に従い使用される水性処方物に対して１質量％〜５０質量％の範囲であって良い。
【００８０】
本発明の方法のために使用される水性処方物は、更に、本発明に従い使用される水性処方物に対して、０．１〜５質量％の無機塩、例えばＮａＣｌを含んでも良い。
【００８１】
本発明の好ましい１実施の形態では、本発明の方法を行うために、エピクロロヒドリン等の強いアルキル化合物を使用しないことを含む。
【００８２】
本発明の好ましい１実施の形態では、本発明の方法を行うために、例えば、Ｎ，Ｎ−ジメチルオール−４，５−ジヒドロキシエチレンウレア（ＤＭＤＨＥＵ）等の架橋剤を使用しないことを含む。
【００８３】
本発明に従う方法に使用される水性処方物及び好ましくは水溶液（liqur）を製造するために、合成、分離（単離）及び／又は精製に、ヒドロホビンを含んだ（ヒドロホビンの）水溶液を使用することが好ましい。これらは、なお、その純度に依存して、合成からの助剤（auxiliary）の残留分を含んでも良い。しかし、当然、物質として、例えば、フリーズ乾燥により最初にヒドロホビンを分離し、そして次の工程で初めてこれらを処方しても良い。
【００８４】
本発明に従い使用される水性処方物中に要求されるヒドロホビンの濃度は、被覆されるべき表面の特性及び／又は意図された使用に従い、決定することができる。しかし、ヒドロホビンが比較的低い濃度であることも、意図された効果を達成するのに充分であると考えられる。
【００８５】
本発明の１実施の形態では、本発明の方法は、少なくとも１種のヒドロホビンを１ｍｇ／ｌ〜１０ｇ／ｌ含む、少なくとも１種の水性処方物を使用する。
【００８６】
本発明の１実施の形態では、本発明の方法で使用される水性処方物、及び特に水溶液は、そのｐＨが、３〜９の範囲であり、及び好ましくは４〜８の範囲である。
【００８７】
本発明の１実施の形態では、被覆される繊維性基体が、ヒドロホビンと接触される前に前処理され、そしてこの後に初めて、ヒドロホビンと接触されることを含む。
【００８８】
前処理（予備処理）の例は、水で数分間リンスすることであり、完全にイオン除去された水でリンスすることが好ましく、５分〜５時間の範囲の期間リンスすることがより好ましい。
【００８９】
本発明の１実施の形態では、本発明に従い被覆される繊維性基体の表面を、少なくとも１種の活性物質を含む他の水性処方物で接触させて前処理することを含む。活性物質は、有機化学物質、例えば、アニオン性、カチオン性又は非イオン性洗浄剤、又は例えば、プロテアーゼ又はリパーゼ等の酵素から選ぶことができる。
【００９０】
本発明の１実施の形態では、本発明に従う前処理を、本発明に従い被覆される繊維性基体を漂白する（bleaching）ことにより行うことを含む。この実施の形態は、被覆される繊維性基体がコットン又はコットン合成繊維ブレンドを含む場合に好ましい。
【００９１】
本発明に従い使用される水性処方物は、更に、任意に、別の成分、例えば、添加剤及び／又は助剤を含んでも良い。このような成分の例は、酸又は塩基、例えば、カルボン酸、又はアンモニア、緩衝剤系、ポリマー、ＳｉＯ2又はシリケート等の無機粒子、例えば染料等の着色剤、香水又は殺生物剤を含む。添加剤の更なる例は、ＤＥ−Ａ１０１６０９９３、特に段落「００７４」〜「０１３１」に挙げられている。
【００９２】
本発明の方法は、繊維性基体の被覆された表面、及び好ましくは被覆されたテキスタイル基体又は革を提供し、ここで、被覆（被膜）は、少なくとも１種のヒドロホビンを含んだ汚れ防止（soil-repellent）被覆を含む。
【００９３】
被覆物（被膜）は、通常、被覆される表面上に、ヒドロホビンの少なくとも１種の単分子層（monomolecular layer）が含まれる。
【００９４】
本発明に従い処理された繊維性基体表面（繊維性基体は、テキスタイル基体及び革から選ばれる）は、柔らかい手触りと視覚的な均一被覆が改良されるだけでなく、汚れ防止性も改良する。
【００９５】
「汚れ」は、通常、公知の方法で、堅い（hard）表面が、固体及び／又は液体物質により、望ましくない汚れ（汚染）（汚れは、全ての種類を含む。）を受けることを意味している。汚れ（汚染物）の例は、脂肪、オイル、プロテイン、食品の残り物、ダスト又は土を含む。しかし、汚れは、例えば、水の硬度に由来する、水の乾燥後の「跡」等の石灰堆積物を含んでも良い。更なる例は、人用の洗浄及びケア組成物の残留物又は他に不溶性石灰石鹸（lime soap）の残留物であり、不溶性石灰石鹸は、水の硬度と結びついて、このような洗浄及びケア組成物から形成可能なもので、例えば、テキスタイル基体又は革等の繊維性基体の表面に堆積物を形成するものである。
【００９６】
汚れ防止効果は、原則として公知の方法で測定可能であり、この公知の方法は、例えば、ヒドロホビンで処理されていない表面と、ヒドロホビンで処理されている表面とを、リンス（すすぐこと）して、「汚れ」の分離性を比較することにより行われる。
【００９７】
本発明に従い使用される水性処方物は、例えば、１種以上のヒドロホビンを水及び／又は１種以上の上述した溶媒と混合させることにより製造可能である。所望により、更なる成分、例えば、添加剤及び／又は助剤を添加することが可能であり、この場合、ヒドロホビン及び水、所望により溶媒、及び所望により１種以上の更なる成分が加えられる順序は重要ではない。
【００９８】
本発明に従う処方物は、通常、エピクロロヒドリン等の強アルキル化合物、又は例えばＤＭＤＨＥＵ等の架橋剤を有しておらず、そして、分解することなく長期間、保存可能である。
【００９９】
本発明は、更に、テキスタイル基体及び革から選択され、且つ本発明に従い上述した方法により被覆された繊維性基体を提供する。これら（繊維性基体）は、卓越した汚れ防止特性を有しているだけでなく、良好な洗浄性、及び摩擦強さ、及び快適な手感触をも有している。これらは、例えば、ベッディング、掛け布、及びカーテン等のホームテキスタイル、浴室及び衛生テキスタイル、及びテーブルクロスを製造するのに有用であり、及び、更に、例えば、雨おおい（awing）、テント、ボートカバー、トラック防水布、自動車の屋根（cabriolet roof）等のアウトドア部門用のテキスタイルを製造するのに有利であり、及び特に、靴、ジャケット、コート、ズボン、プルオーバー、ストッキング、ベルト等の衣服用品、及び又例えば、ベッディング、掛け布、及びカーテン等のホームテキスタイル、浴室及び衛生テキスタイル、及びテーブルクロスを製造するのに有用である。本発明に従い被覆される革は、ブーツ等の衣服用品を製造するために、及びまた、工業的に使用するための革製品（empty article）を製造するために有用である。
【０１００】
以下に実施例を使用して本発明を説明する。
パートＡ
本発明に従い使用されるヒドロホビンの製造と試験
実施例１
ｙａａｄ−Ｈｉｓ6／ｙａａＥ−Ｈｉｓ6のクローニングのための前処理
オリゴヌクレオチド Ｈａｌ５７０及びＨａｌ５７１（Ｈａｌ５７２／Ｈａｌ５７３）の補助下に、ポリメラーゼ鎖反応を行った。使用したテンプレートＤＮＡは、バクテリアバチルスサブチリスのゲノムのＤＮＡであった。得られたＰＣＲ断片（フラグメント）は、バチルスサブチルスの遺伝子ｙａａＤ／ｙａａＥのコード配列を含み、及び末端に、（各場合に）Ｎｃｏｌ及びＢｇＩＩＩ制限切断部位（restriction cleavage site）を含んでいた。このＰＣＲ部分を精製し、そして制限酵素Ｎｃｏｌ及びＢｇｌｌｌでカット（cut）した。このＤＮＡ部分は、「挿入（insert）」として使用され、そして、制限酵素Ｎｃｏｌ及びＢｇＩＩＩで、事前に直線化（直鎖化）されたベクターｐＱＥ６０（Ｑｉａｇｅｎ社より）内でクローン化された。このように得られたベクターｐＱＥ６０ＹＡＡＤ＃２／ｐＱＥ６０ＹａａＥ＃５は、プロテイン（このプロテインは、ＹＡＡＤ：：ＨＩＳ6及びＹＡＡＥ：：ＨＩＳ6で構成されている。）の発現に使用された。
【０１０１】
Ｈａｌ５７０：ｇｃｇｃｇｃｃｃａｔｇｇｃｔｃａａａｃａｇｇｔａｃｔｇａ
Ｈａｌ５７１：ｇｃａｇａｔｃｔｃｃａｇｃｃｇｃｇｔｔｃｔｔｇｃａｔａｃ
Ｈａｌ５７２：ｇｇｃｃａｔｇｇｇａｔｔａａｃａａｔａｇｇｔｇｔａｃｔａｇｇ
Ｈａｌ５７３：ｇｃａｇａｔｃｔｔａｃａａｇｔｇｃｃｔｔｔｔｇｃｔｔａｔａｔｔｃｃ
【０１０２】
実施例２
ｙａａｄヒドロホビンＤｅｗＡ−Ｈｉｓ6のクローン化
オリゴヌクレオチドＫａＭ４１６及びＫａＭ４１７でポリメラーゼ連鎖反応（chain reaction）を行った。使用したテンプレートＤＮＡは、糸状菌アスペルギルスニドランス（Aspergilus nidulans）のゲノムのＤＮＡであった。得られたＰＣＲフラグメントは、ヒドロホビン遺伝子ｄｅｗＡのコード配列、及びＮ−末端ファクターＸａプロテイナーゼ切断部位を含んでいた。このＰＣＲフラグメントを精製し、そして制限エンドヌクレアーザ（endonucleases）ＢａｍＨｌでカットした。このＤＮＡフラグメントは、「挿入」として使用され、そして、制限エンドヌクレアーザＢｇＩＩＩで、事前に直線化（直鎖化）されたベクターｐＱＥ６０ＹＡＡＤ＃２内でクローン化された。
【０１０３】
このように得られたベクター＃５０８は、融合プロテイン（この融合プロテインは、ＹＡＡＤ：：Ｘａ：：ｄｅｗＡ：：ＨＩＳ６で構成されている。）の発現に使用された。
【０１０４】
ＫａＭ４１６：ＧＣＡＧＣＣＣＡＴＣＡＧＧＧＡＴＣＣＣＴＣＡＧＣＣＴＴＧＧＴＡＣＣＡＧＣＧＣ
ＫａＭ４１７：ＣＣＣＧＴＡＧＣＴＡＧＴＧＧＡＴＣＣＡＴＴＧＡＡＧＧＣＣＧＣＡＴＧＡＡＧＴＴＣＴＣＣＧＴＣＴＣＣＧＣ
【０１０５】
実施例３
ｙａａｄヒドロホビンＲｏｄＡ−Ｈｉｓ6のクローン化（クローニング）
プラスミド＃５１３を、オリゴヌクレオチドＫａＭ４３４及びＫａＭ４３５を使用して、プラスミド＃５０８に類似してクローン化した。
【０１０６】
ＫａＭ４３４：ＧＣＴＡＡＧＣＧＧＡＴＣＣＡＴＴＧＡＡＧＧＣＣＧＣＡＴＧＡＡＧＴＴＣＴＣＣＡＴＴＧＣＴＧＣ
ＫａＭ４３５：ＣＣＡＡＴＧＧＧＧＡＴＣＣＧＡＧＧＡＴＧＧＡＧＣＣＡＡＧＧＧ
【０１０７】
実施例４
ｙａａｄヒドロホビンＢＡＳＦ１−Ｈｉｓ6のクローン化
プラスミド＃５０７を、オリゴヌクレオチドＫａＭ４１７及びＫａＭ４１８を使用して、プラスミド＃５０８に類似してクローン化した。テンプレートＤＮＡは、人工的に合成したＤＮＡ配列ヒドロホビンＢＡＳＦ１であった（アッペンディックス参照）。
【０１０８】
ＫａＭ４１７：
ＣＣＣＧＴＡＧＣＴＡＧＴＧＧＡＴＣＣＡＴＴＧＡＡＧＧＣＣＧＣＡＴＧＡＡＧＴＴＣＴＣＣＧＴＣＴＣＣＧＣ
ＫａＭ４１８：ＣＴＧＣＣＡＴＴＣＡＧＧＧＧＡＴＣＣＣＡＴＡＴＧＧＡＧＧＡＧＧＧＡＧＡＣＡＧ
【０１０９】
実施例５
ｙａａｄヒドロホビンＢＡＳＦ２−Ｈｉｓ6のクローン化
プラスミド＃５０６を、オリゴヌクレオチドＫａＭ４１７及びＫａＭ４１８を使用して、プラスミド＃５０８に類似してクローン化した。テンプレートＤＮＡは、人工的に合成したＤＮＡ配列ヒドロホビンＢＡＳＦ２であった（アッペンディックス参照）。
【０１１０】
ＫａＭ４１７：
ＣＣＣＧＴＡＧＣＴＡＧＴＧＧＡＴＣＣＡＴＴＧＡＡＧＧＣＣＧＣＡＴＧＡＡＧＴＴＣＴＣＣＧＴＣＴＣＣＧＣ
ＫａＭ４１８：ＣＴＧＣＣＡＴＴＣＡＧＧＧＧＡＴＣＣＣＡＴＡＴＧＧＡＧＧＡＧＧＧＡＧＡＣＡＧ
【０１１１】
実施例６
ｙａａｄヒドロホビンＳＣ３−Ｈｉｓ6のクローン化
プラスミド＃５２６を、オリゴヌクレオチドＫａＭ４６４及びＫａＭ４６５を使用して、プラスミド＃５０８に類似してクローン化した。使用したテンプレートＤＮＡは、Ｓｃｈｙｚｏｐｈｙｌｌｕｍ ｃｏｍｍｕｎｅ ｃＤＮＡであった（アッペンディックス参照）。
【０１１２】
ＫａＭ４６４：ＣＧＴＴＡＡＧＧＡＴＣＣＧＡＧＧＡＴＧＴＴＧＡＴＧＧＧＧＧＴＧＣ
ＫａＭ４６５：ＧＣＴＡＡＣＡＧＡＴＣＴＡＴＧＴＴＣＧＣＣＣＧＴＣＴＣＣＣＣＧＴＣＧＴ
【０１１３】
実施例７
組換えＥ．ｃｏｉｌ菌株ｙａａｄヒドロホビンＤｅｗＡ−Ｈｉｓ6の発酵
１５ｍｌＧｒｅｉｎｅｒチューブにおける、ｙａａｄヒドロホビンＤｅｗＡ−Ｈｉｓ6発現Ｅｃｏｉｌ菌株を使用した、３ｍｌのＬＢ液体媒体の接種（植え付け）。２００ｒｐｍ、３７℃で、シェーカー上で８時間にわたり培養。各場合、バッフル（baffle）が設けられた２１ｌ（２１リットル）のＥｒｌｅｎｍｅｙｅｒフラスコを使用し、そして、２５０ｍｌのＬＢ媒体（＋１００μ／ｍｌ アンピシリン（ampicillin））に、１ｍｌの前培養（preculture）を接種し、そして、シェーカー上において、１８０ｒｐｍ、３７℃で９時間培養した。２０ｌの発酵器（fermenter）において、１３．５ｌのＬＢ媒体（＋１００μｇ／ｍｌ アンピシリン（ampicillin））に、０．５ｌの前培養で接種した。〜３．５のＯＤ60nmで、１４０ｍｌの１００ｍＭ ＩＰＴＧを付加した。３時間後、発酵器を１０℃にまで冷却し、そして、遠心分離により、発酵器のブロース（培養液）を除去した。
【０１１４】
実施例８
組換えヒドロホビン融合プロテインの精製（Ｃ末端Ｈｉｓ６ｔａｇを有する、ヒドロホビン−融合プロテインの精製）
１００ｇのセルペレット（１００〜５００ｍｇのヒドロホビン）を、５０ｍＭナトリウムホスフェート緩衝液（バッファー）、ｐＨ７．５で、合計体積が２００ｍｌとし、そして、懸濁させた。懸濁を、Ｕｌｔｒａｔｕｒｒａｘ ｔｙｐｅ Ｔ２５（Ｊａｎｋｅ ａｎｄ Ｋｕｎｋｅｌ；ＩＫＡ−Ｌａｂｏｒｔｅｃｈｎｉｋ）で１０分間処理し、そして、次に、核酸を分解（degrade）するために、５００単位のベンゾナーゼ（benzonase）（Ｍｅｒｋ，Ｄａｒｍｓｔａｄｔ；ｏｒｄｅｒ Ｎｏ．１．０１６９７．０００１）で、室温で１時間培養した。セル破壊の前に、ガラスカートリッジ（Ｐ１）を使用して、濾過を行った。セルの破壊と残っているゲノムＤＮＡのせん断を目的として、１５００バールでホモナイザー器（Ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｚｅｒ Ｍ−１１０ＥＨ；Ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｃｓ Ｃｏｒｐ．）を２回作動させた。ホモジェネートを遠心分離（Ｓｏｒｖａｌｌ ＲＣ−５Ｂ，ＧＳＡ Ｒｏｔｏｒ、２５０ｍｌ遠心ブレーカー、６０分、４℃、１２０００ｒｐｍ、２３０００ｇ）し、上澄液（supernatant）を氷上に置き、そして、ペレットを１００ｍｌのナトリウムホスフェート緩衝液、ｐＨ７．５中に懸濁させた。遠心分離と懸濁を３回繰り返し、ここで、ナトリウムホスフェート環緩衝液は、３回目の繰り返し時に、１％ＳＤＳを含んでいた。再懸濁の後、この溶液を１時間攪拌させ、次に最終的な遠心分離を行った（Ｓｏｒｖａｌｌ ＲＣ−５Ｂ，ＧＳＡ Ｒｏｔｏｒ，２００ｍｌ遠心分離ブレーカー、６０分、４℃、１２０００ｒｐｍ、２３０００ｇ）。ＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析に従い、ヒドロホビンは、最終的な遠心分離の後、上澄液中に存在した（図１）。実験から、ヒドロホビンは、おそらく、対応するＥ．ｃｏｉｌ中に、封入体（inclusion body）の状態で存在していると考えられる。５０ｍｌのヒドロホビン含上澄液を、５０ｍｌのｎｉｃｋｅｌ−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ Ｈｉｇｈ Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ １７−５２６８−０２カラム（Ａｍｅｒｓｈａｍ）に導入し、これを、５０ｍＭ Ｔｒｉｓ−Ｃｌ緩衝液、ｐＨ８．０と平衡させた。カラムを５０ｍＭ Ｔｒｉｓ−Ｃｌ緩衝液、ｐＨ８．０で洗浄し、そして次に、ヒドロホビンを、２００ｍｌのイミダゾールを含む、５０ｍＭ Ｔｒｉｓ−Ｃｌ緩衝液、ｐＨ８．０で溶出（elute）した。イミダゾールを除去するために、この溶液を、５０ｍＭ Ｔｒｉｓ−Ｃｌ緩衝液、ｐＨ８．０に対して透析した。
【０１１５】
図１は、このように製造されたヒドロホビンＨＰ１の精製を示している。
【０１１６】
レーン１： ニッケル−セファロース（nickel−Sepharose）カラム（１：１０希釈）に供給した溶液
レーン２： 流通（Flow-through）＝洗浄工程の溶出
レーン３〜５： 溶出（elution）部分のＯＤ２８０ピーク
図１に示したヒドロホビンは、分子量が約５３ｋＤである。
【０１１７】
小さなバンドが、ヒドロホビンの分解生成物（減生生成物）を、部分的に示している。
【０１１８】
実施例９
技術試験；ガラス上での水滴の接触角度を変化させることによるヒドロホビンＨＰ１の特徴付
基体（substrate）
ガラス（ウィンドウガラス、南ドイツガラス、マンハイム、ドイツ）：
ヒドロホビン濃度：１００ｍｇ／ｌ
５０ｍＭナトリウムアセテート（ｐＨ４）＋０．１質量％のポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノロレート（sorbitan monolaurate）（水中）中で、１５時間（温度８０℃）、ガラス板について培養、次に、被覆、蒸留水での洗浄、
次に、培養：１０分／８０℃／１質量％の水性ナトリウムｎ−ドデシルスルフェート溶液（ＳＤＳ）、蒸留水での洗浄。
【０１１９】
このように得られた試料は、空気乾燥（室温）されて、そして室温で、５μｌの水滴の接触角（度）の測定に付された。
【０１２０】
接触角度の測定は、Ｄａｔａｐｈｙｓｉｃｓ Ｃｏｎｔａｃｔ Ａｎｇｌｅ Ｓｙｓｔｅｍ ＯＣＡ１５＋，Ｓｏｆｔｗａｒｅ ＳＣＡ２０．２．０．（２００２年１１月）で行った。測定は、製造者の指導に従い行われた。
【０１２１】
未処理のガラスは、接触角度が３０±５°であり；実施例８の機能性（官能性：functional）ヒドロホビン（ｙａａｄ−ｄｅｗＡ−ｈｉｓ6）での被覆では、接触角度が６７±５°であった。
【０１２２】
パートＢ
繊維性基体の表面を被覆するためのヒドロホビンＨＰ１の使用
実施例８に記載したように製造したヒドロホビン（溶融プロテイン）ＨＰ１（ｙａａｄ−Ｘａ−ｄｅｗＡ−ｈｉｓ）（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９）の溶液を使用試験に使用した。溶液中、ヒドロホビンＨＰ１の濃度：１００ｍｇ／ｌ（０．０２質量％）。
Ｂ．１ テキスタイル基体の、本発明による被覆
ホワイト織ポリエステルファブリック、ベース質量２２６ｇ／ｍ2を、最初に、完全にイオン除去された水で、４５分間すすぎ、そして次に、水中０．０２質量％のＨＰ１の水溶液中に浸し、そして８０℃で１７時間、処理した。この後、このように処理したポリエステルファブリックを、完全にイオン除去した水で１分間すすぎ、そして室温で乾燥させて、処理された、本発明に従う基体ＰＥＳ−ＨＰ１を得た。この基体は、非常に心地よい手感触を有していた。
【０１２３】
Ｂ．２ テキスタイル基体の、本発明による被覆
処理を、８０℃ではなく、室温で行ったこと以外は、Ｂ．１を繰り返した。それぞれが処理された基体ＰＥＳ−ＨＰ２を得た。この基体は、非常に心地よい手感触を有していた。
【０１２４】
使用した「汚れ（soil）」
試験のために、「汚れ」として以下のものを使用した：
トリオレイン
口紅
使用済エンジンオイル
それぞれが処理された基体ＰＥＳ−ＨＰ１を複数、それぞれ、上述した「汚れ」で１８時間、汚した（「汚れ」は、ｄｍ2当たり約０．１ｇ使用）。
【０１２５】
試験洗浄剤の製造、及び本発明に従うＰＥＳ−ＨＰ１の洗浄
以下のものを一緒に混合した：
５ｇのナトリウムｎ−ドセシルベンゼンスルホネート
５ｇのＣ13−Ｃ15オキソプロセスアルコール混合物（この混合物は、平均７等量のエチレンオキシド／モルでエトキシル化されている。）
５．８ｇの、（アクリル酸（７０質量％）とマレイン酸（３０質量％）のランダムコポリマーの）４０質量％の水溶液、ＮａＯＨで中和、ｐＨ７．９、Ｍw７００００ｇ／モルで中和。
【０１２６】
１．４ｇの凝乳状石鹸
１．２ｇのＴｙｌｏｓｅ ＣＲ１５００ｐカルボキシメチルセルロース
１４ｇのＮａ2ＣＯ3
３０ｇのゼオライトＡ
２１ｇのナトリウムペルボレートテトラヒドレート
６ｇのテトラナトリウムエチレンジアミンテトラアセテート
３．６ｇのナトリウムメタシリケートペンタヒドレート
７ｇのＮａ2ＳＯ4
これにより、洗浄剤１を得た。
【０１２７】
本発明に従い処理され、そしてその後に「汚れ」を付けられたＰＥＳ−ＨＰ１を洗浄した。この洗浄は、タイプＬａｕｎｄｅｒ−Ｏ−Ｍｅｔｅｒ（Ａｔｌａｓ，ＵＳＡ）の洗浄器内で行った。そして、この洗浄は、３回の予備洗浄サイクルと１回のメイン洗浄サイクルを使用して行った。硬度が３ｍｍｏｌ（Ｃａ：Ｍｇ：ＨＣＯ3 ４：１：８）の水を使用した（溶液比（liquor ratio）１２．５：１、４．５ｇの試験洗浄剤の添加 １／ｌ、水温４０℃）。合計洗浄時間：３０分。
【０１２８】
トリオレイン及びエンジンオイルの「汚れ」は、完全に除去され、口紅の残留物は、非常に僅かなもので、そして、拡大鏡を使用して初めて確認可能であった。
【０１２９】
表１
配列ネームのＤＮＡへの割当及び配列リスト中のポリペプチド配列
【０１３０】
【表１】
【図面の簡単な説明】
【０１３１】
【図１】ヒドロホビンＨＰ１の精製を示した図である。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
テキスタイル基体及び革から選ばれる繊維性基体を、少なくとも１種のヒドロホビンを使用して被覆する方法。
【請求項２】
少なくとも１種のヒドロホビンを含む、少なくとも１種の水性処方物に、繊維性材料を接触させることにより行なわれることを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項３】
パッドマングルを使用して行なわれることを特徴とする請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
１ｍｇ／ｌ〜１０ｇ／ｌの範囲で、少なくとも１種のヒドロホビンを含む、少なくとも１種の水性処方物を使用することを特徴とする請求項１〜３の何れか１項に記載の方法。
【請求項５】
前記繊維性基体を前処理した後にヒドロホビンと接触させることを特徴とする請求項１〜４の何れか１項に記載の方法。
【請求項６】
前記繊維性基体をヒドロホビンと接触させた後に、２０℃〜１２０℃の範囲の温度で乾燥させることを特徴とする請求項１〜５の何れか１項に記載の方法。
【請求項７】
請求項１〜６の何れか１項に記載の方法に従い被覆された繊維性基体。
【請求項８】
少なくとも請求項７に記載の繊維性基体を使用して製造された、衣服又は工業的に使用されるためのガーメント、ホームテキスタイル、工業用テキスタイル、革製品。
【請求項９】
テキスタイル基体及び革から選ばれる繊維性基体の表面を被覆するために、ヒドロホビンを使用する方法。
【請求項１】
テキスタイル基体及び革から選ばれる繊維性基体を、少なくとも１種のヒドロホビンを使用して被覆する方法。
【請求項２】
少なくとも１種のヒドロホビンを含む、少なくとも１種の水性処方物に、繊維性材料を接触させることにより行なわれることを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項３】
パッドマングルを使用して行なわれることを特徴とする請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
１ｍｇ／ｌ〜１０ｇ／ｌの範囲で、少なくとも１種のヒドロホビンを含む、少なくとも１種の水性処方物を使用することを特徴とする請求項１〜３の何れか１項に記載の方法。
【請求項５】
前記繊維性基体を前処理した後にヒドロホビンと接触させることを特徴とする請求項１〜４の何れか１項に記載の方法。
【請求項６】
前記繊維性基体をヒドロホビンと接触させた後に、２０℃〜１２０℃の範囲の温度で乾燥させることを特徴とする請求項１〜５の何れか１項に記載の方法。
【請求項７】
請求項１〜６の何れか１項に記載の方法に従い被覆された繊維性基体。
【請求項８】
少なくとも請求項７に記載の繊維性基体を使用して製造された、衣服又は工業的に使用されるためのガーメント、ホームテキスタイル、工業用テキスタイル、革製品。
【請求項９】
テキスタイル基体及び革から選ばれる繊維性基体の表面を被覆するために、ヒドロホビンを使用する方法。
【図１】
【公表番号】特表２００８−５４５８９５（Ｐ２００８−５４５８９５Ａ）
【公表日】平成２０年１２月１８日（２００８．１２．１８）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００８−５１５１９３（Ｐ２００８−５１５１９３）
【出願日】平成１８年５月３１日（２００６．５．３１）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２００６／０６２７８５
【国際公開番号】ＷＯ２００６／１３１４７８
【国際公開日】平成１８年１２月１４日（２００６．１２．１４）
【出願人】（５０８０２０１５５）ビーエーエスエフ ソシエタス・ヨーロピア (2,842)
【氏名又は名称原語表記】ＢＡＳＦ ＳＥ
【住所又は居所原語表記】Ｄ−６７０５６ Ｌｕｄｗｉｇｓｈａｆｅｎ， Ｇｅｒｍａｎｙ
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２０年１２月１８日（２００８．１２．１８）
【国際特許分類】
【出願日】平成１８年５月３１日（２００６．５．３１）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２００６／０６２７８５
【国際公開番号】ＷＯ２００６／１３１４７８
【国際公開日】平成１８年１２月１４日（２００６．１２．１４）
【出願人】（５０８０２０１５５）ビーエーエスエフ ソシエタス・ヨーロピア (2,842)
【氏名又は名称原語表記】ＢＡＳＦ ＳＥ
【住所又は居所原語表記】Ｄ−６７０５６ Ｌｕｄｗｉｇｓｈａｆｅｎ， Ｇｅｒｍａｎｙ
【Ｆターム（参考）】
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