胃炎または胃潰瘍の予防及び治療に有用なラカンカ抽出物及びこれから分離されたモモルディカ・サポニンＩ
本発明は胃炎または胃潰瘍の予防及び治療用ラカンカ抽出物及びこれから分離されたモモルディカ・サポニンＩに関する。前記ラカンカ抽出物及びこれから分離されたモモルディカ・サポニンＩはアルコールにより誘導される胃粘膜の損傷を防ぎ、胃酸の分泌を抑制するため、胃炎または胃潰瘍の予防及び治療において効果的である。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は胃炎または胃潰瘍の予防及び治療に有用なラカンカ（Ｍｏｍｏｒｄｉｃａｅ ｓｅｍｅｎ）抽出物、及びこれから分離されたモモルディカ・サポニンＩ（ｍｏｍｏｒｄｉｃａ ｓａｐｏｎｉｎ Ｉ）に関する。
【背景技術】
【０００２】
胃を保護する胃粘膜層は様々な種類の因子により損傷を受け易い。代表的な因子として、胃酸、アルコール類、アスピリンなどの非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、ヘリコバクター・ピロリなどの細菌［Suzuki. M.及びS. Miura, Nippon Rinsho, 15(12)，3154-3158，1993］、ストレスにより引き起こされた胃粘膜の微細循環障害と低血圧［Tadaoki Mizuno, Yokohama Med.Bull., 38（3,4），87-97，1987］などがある。このような要因により粘膜層が損傷された時、発赤、出血、及び浮腫を同伴する炎症が発生する。損傷がひどい場合、粘膜下層及び筋肉層まで損傷された時、これを胃潰瘍と言う。更に、似た要因により、胃と直接連結されている十二指腸も炎症または潰瘍が発生し得る。
【０００３】
一方、これらの因子により引き起こされた胃と十二指腸の炎症及び潰瘍を治療するためには、胃酸の分泌抑制、ヘリコバクター・ピロリの増殖抑制、粘液の分泌促進、上皮細胞の再生促進、抗炎症などの効能を有する薬物が必要である。現在最も代表的な胃炎及び胃潰瘍の治療剤としては、胃酸分泌抑制の効能を有するＨ２拮抗薬とプロトンポンプ阻害剤であり、これらの薬剤は臨床効果が優れていることが立証された［J. Int. Med. Res. 17(suppl.) 9A，1989；Meth. Find. Exp. Clin. Pharmacol. 11(suppl. 1) 87，1989；N. Eng. J. Med. 323：1672, 1990］。しかしながら、このような胃酸分泌抑制剤は薬剤の投与終了後、再発率が高いという短所を持っている［Drug Intell. Clin. Pharm. 21: 493, 1987, Gut 30: 449, 1989 Yale J. Biol. Med. 65: 649, 1992］。
【０００４】
胃炎誘発因子の再攻撃に抵抗することができるように粘膜組織の再生を促進させる粘膜保護剤は、胃炎治療剤の重要な要素である。胃粘膜保護剤として現在、レバミピド、ソファルコンなどの薬物が開発されているが、これらの薬剤は作用が比較的遅いため、長期間多量の薬剤を服用しなければならず、改善された薬物の開発が必要である。
【０００５】
動物モデルを使用して胃炎治療の効能を評価するための代表的な方法として、非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）またはエタノールの使用により胃粘膜を損傷させた後、その回復速度を観察する方法がある。このような実験モデル実験を通して様々な生薬抽出物が胃炎治療剤として開発可能性があると報告されている。特に、優れた胃炎治療効果を有するヨモギ（Ａｒｔｅｍｉｓｉａ Ｓｐｐｓ）抽出物について特許出願され［大韓民国第１０−１９９５−００２１９５７号］、東亜製薬（韓国）がスティレン（登録商標）という医薬品名で開発した。
【０００６】
本発明で使用する生薬であるラカンカ（Ｍｏｍｏｒｄｉｃａｅ Ｓｅｍｅｎ）は中国南部地方とベトナムに広く分布する多年生つる植物であるラカンカの成熟した種子である。９〜１１月頃に果実を採取して半分に切り、片方を乾かした時に種子を取り出すか、または、果実をつぼに入れて、果皮が腐敗した時、種子を取り出す。ラカンカは消炎作用が良く、リウマチ痛、筋肉痙攣などに対して効果があることが知られている。現在、ラカンカ抽出物に含有される成分としては、ステロール、オレアノール酸、モモルディン酸（ｍｏｍｏｒｄｉｃ ａｃｉｄ）などが知られている。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明の発明者は、胃炎治療剤を開発するために研究した結果、ラットを使用して、ラカンカ抽出物とこれから分離されたモモルディカ・サポニンＩを処理すると、ジクロフェナクとアルコールにより誘発される胃粘膜の損傷が減少することを発見し、更に、ラカンカ抽出物とモモルディカ・サポニンを投与すると、胃の酸度が低下することを発見し、本発明を完成するに至った。
【０００８】
従って、本発明の目的はラカンカ抽出物またはモモルディカ・サポニンＩを有効成分として含有し、胃粘膜保護活性が優れ、胃酸抑制効能を有する、胃炎または胃潰瘍の予防及び治療用薬剤を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明は、ラカンカ抽出物を有効成分として含有する胃炎または胃潰瘍の予防及び治療用薬剤に関する。
【００１０】
更に、本発明は下記化学式１に表されるモモルディカ・サポニンＩを有効成分として含有する胃炎または胃潰瘍の予防及び治療用薬剤に関する。
【００１１】
【化１】
【００１２】
このような本発明を更に詳しく説明すると下記の通りである。
【００１３】
本発明はアルコールと、ジクロフェナクなどの非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）により引き起こされる胃粘膜損傷の抑制活性、及び胃酸分泌の抑制活性が良い胃炎または胃潰瘍の予防及び治療に有用なラカンカ抽出物及びこれから分離されたモモルディカ・サポニンＩを含有する薬剤に関する。
【００１４】
本発明によるラカンカ抽出物は、ラカンカ生薬重量の３〜１０倍の水またはアルコール水溶液で抽出して得られ、生薬を抽出する通常の方法により得られる。この時、前記アルコールとしては炭素数１〜６のアルコールが好ましく、更に好ましくは、メタノール、エタノール、ブタノールなどを使用する。
【００１５】
前記ラカンカ抽出物を凍結乾燥させることで、粉末状の抽出物を得る。この抽出物はジクロフェナク及びアルコールにより誘発される胃粘膜損傷の抑制及び治療活性が優れているため、胃炎または胃潰瘍の予防及び治療剤として非常に有用であることが期待される。
【００１６】
更に、本発明によるモモルディカ・サポニンＩは、極性溶媒を使用する通常的な方法を用いてラカンカから効率的に分離することができる。極性溶媒としては蒸留水またはアルコール水溶液を使用する。この時、アルコールとしては炭素数１〜６のアルコールが好ましく、更に好ましくは、メタノール、エタノール、ブタノールなどを使用する。
【００１７】
特に、より高い純度でモモルディカ・サポニンＩを得るために、カラムクロマトグラフィを行うことができる。具体的に、オクタデシルシリル化シリカ樹脂などを使用してカラムクロマトグラフィを準備した後、７０％（ｖ／ｖ）のメタノール水溶液などの適切な溶媒で、選択的にサポニンの濃度が高い分画物を分離することができる。
【００１８】
前記モモルディカ・サポニンＩはアルコールまたはジクロフェナクにより誘発される胃粘膜損傷の抑制及び治療効果が優れ、胃酸の分泌を抑制するため、胃炎または胃潰瘍の予防及び治療剤として非常に有用である。
【００１９】
本発明によるラカンカ抽出物またはモモルディカ・サポニンＩは、通常の製造方法にて、錠剤またはカプセル剤などに剤形化するが、錠剤を製造する時、ラクトース、微細結晶セルロース、ステアリン酸マグネシウムなどを含む基剤（ｍａｔｒｉｘ）と、本発明の有効成分であるラカンカ抽出物またはモモルディカ・サポニンＩを、２〜１０：１の比率で使用すれば、胃炎または胃潰瘍の予防及び治療において活性を有する錠剤を製造することができる。
【００２０】
有効成分はそれ自体でも使用することができるが、薬学的に許容可能な担体、賦形剤、希釈剤などと混合した後、粉末、顆粒、カプセルに剤形化して得ることも可能である。更に、本発明によるラカンカ抽出物またはモモルディカ・サポニンＩの量は体内吸収度、体重、患者の年齢、性別、健康状態、食餌、投与時間、投与方法、疾患の重症度などにより異なる。一般的に、ラカンカ抽出物は体重１ｋｇ当り０．１〜１０ｍｇ程度が好ましく、モモルディカ・サポニンＩは体重１ｋｇ当り０．０５〜１ｍｇ程度であることが好ましい。単位投与型製剤は、薬剤投与を観察する専門家の判断または個人の要求に応じて、専門化された投薬法、または一定間隔で数回投与することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２１】
以下、本発明は下記実施例に依拠して更に詳しく説明するが、本発明がこれに限定されるものではない。しかしながら、当業者がこの開示を考慮して、現在の発明の基本概念および範囲内で変更や改善をすることは、明らかである。
【００２２】
製造例１：ラカンカ抽出物の製造
薬草市場で購入したラカンカ１ｋｇ（乾燥重量）に５Ｌの５０％エタノール水溶液を加え、４時間、８０℃の温度を維持しながら抽出した。この過程を２度実施して生薬抽出物を獲得した。抽出液は濾過して、回転蒸発器を用いて６０℃で減圧濃縮した後、真空オーブンで溶媒を完全に除去した後、粉末状のエタノール抽出物２１ｇを獲得した。
【００２３】
製造例２：モモルディカ・サポニンＩ含有抽出物の製造
薬草市場で購入したラカンカ１ｋｇ（乾燥重量）を破砕した後、５Ｌの１０％エタノール水溶液を加え、３時間、８０℃を維持した水浴で抽出し、この過程を２度実施した。抽出液は濾過して、回転蒸発器を用いて６０℃で減圧濃縮した後、真空オーブンで溶媒を完全に除去した後、粉末状のモモルディカ・サポニンＩ含有抽出物３５〜４５ｇを獲得した。
【００２４】
製造例３：モモルディカ・サポニンＩ分画物の製造
有機溶媒（アセトン）を使用した沈殿法を通して、製造例２で製造された抽出物からモモルディカ・サポニンＩを効率的に分離した。製造例２の抽出物１０ｇを１００ｍＬの精製水に溶解した後、１００ｍＬのアセトンを添加して、５０％（ｖ／ｖ）アセトン水溶液を得た。沈殿物を濾過した後、更に４００ｍＬのアセトンを濾過液に添加し、８０％（ｖ／ｖ）アセトン水溶液を得た。新たに形成した沈殿物を濾紙を利用して分離した後、乾燥させた。
【００２５】
製造例４：モモルディカ・サポニンＩ分画物の製造
前記製造例２で製造された抽出物または製造例３で製造された分画物に対して、オクタデシルシリル化したシリカ樹脂（ＹＭＣ＊ＧＥＬ ＯＤＳ−Ａ １２ｎｍ、Ｓ−１５０ ｍ）を用いてカラムクロマトグラフィを実施した。樹脂の量は２５０ｇ、または抽出物または分画物の重量の２５倍であり、１０％（ｖ／ｖ）と４０％（ｖ／ｖ）メタノール水溶液を各々、樹脂体積の２〜３倍の量を流した後、７０％（ｖ／ｖ）のメタノール水溶液を樹脂体積の２〜３倍の量を流し、その結果、溶出分画物を収得し、この分画物を減圧下で濃縮し、真空オーブンで溶媒を完全に除去した。
【００２６】
製造例５：モモルディカ・サポニンＩの分離
前記製造例４の７０％（ｖ／ｖ）メタノール水溶液分画物からモモルディカ・サポニンＩを分離した。アセトニトリルと水の混合溶媒（２９：７１、０．１％トリフルオロ酢酸）を使用して高速液体クロマトグラフィを実施した。９．５ｍＬ／分の速度で溶出させ、約４５分でのサポニンピークのみを取った。この分画物を減圧下で濃縮し、真空オーブンで溶媒を完全に除去した。ＹＭＣ Ｊ‘Ｓｐｈｅｒｅ ＯＤＳ−Ｈ８０カラムを使用し、測定波長は２１０ｎｍであった。
【００２７】
質量分析とＮＭＲ分光法データを既存文献［Iwamoto，Okabe，Yamauchi，Tanaka，Tokutani，Hara，Mihashi，Higuchi．Studies on the constituents of Momordica cochinchinensis Spreng.I. Isolation and characterization of the seed saponins, Momordica saponin Ｉ and II. Chemical & pharmaceutical bulletin 1985, 33(2)：464-478］のデータと比較した結果、ラカンカに存在すると報告されたモモルディカ・サポニンＩ；３−Ｏ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル（１−＞２）−［α−Ｌ−ラムノピラノシル（１−＞３）］−β−Ｄ−グルコピラノシド−２８−Ｏ−β−Ｄ−キシロピラノシル（１−＞３）−β−Ｄ−グルコピラノシル（１−＞３）−［β−Ｄ−キシロピラノシル（１−＞４）］−α−Ｌ−ラムノピラノシル（１−＞２）−β−Ｄ−フコピラノシルジプソゲニン）のデータと一致することを確認した。
【００２８】
【化２】
分子量：１６７３．７７
融点：２４１−２４４℃
旋光度：［α］１９Ｄ＝−１４．８°（Ｃ０．７、ＭｅＯＨ：Ｈ2Ｏ＝１：２）
【００２９】
前記製造例２〜４の抽出物または分画物中のモモルディカ・サポニンＩの含量は下記表１の通りである。
【００３０】
【表１】
【００３１】
実施例１：ラカンカ抽出物のアルコールにより誘発された胃損傷の抑制効果
１００％エタノールを胃損傷誘発因子として使用したラットモデル実験を行い、ラカンカ抽出物の胃粘膜の保護効能を評価した。製造例１のラカンカ抽出物を０．５％カルボキシメチルセルロース水溶液に１０ｍｇ／ｍＬの濃度で溶かして試験薬物として使用した。１０ｍｇ／ｍＬの濃度で０．５％カルボキシメチルセルロース水溶液に溶解されたスティレン（ヨモギ抽出物、東亜製薬（韓））とムコスタ（レバミピド、韓国大塚製薬）を対照薬物として使用した。
【００３２】
特定病原体未感染（ＳＰＦ）の７週齢雄Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットをチャールズ・リバーから購入し、１週間の順応期間を経た後、体重が２２０〜２２５ｇである健康なラットを実験で使用した。各グループ当り５匹ずつとなるように区分した後、水を自由に摂取することができる状態で１８時間絶食させ、ラカンカ抽出物と、対照薬物であるスティレン及びムコスタを各々１００ｍｇ／ｋｇの量を投与した。試験薬物を投与してから１時間後に、１００％エタノール１．５ｍＬを経口投与し、６時間後に薬物の胃損傷予防効能を評価するために、ラットにエーテルで麻酔をかけ、胃を摘出した。胃を大弯部に沿って切開して開いた後、肉眼で観察した。胃の損傷を発赤、充血、出血、糜爛及び浮腫に細分した後、それぞれを０〜３の範囲で損傷の重症度を評価した。
【００３３】
【表２】
【００３４】
前記表２から分かるように、ラカンカ抽出物がアルコールにより誘発された胃粘膜損傷に対して優れた予防効能を持っていることが分かる。
【００３５】
実施例２：モモルディカ・サポニンＩのアルコールにより誘発された胃損傷の抑制効果
１００％エタノールを胃損傷誘発因子として使用したラットモデル実験を行い、モモルディカ・サポニンＩの胃粘膜の保護効能を評価した。製造例５で分離されたモモルディカ・サポニンＩを０．５％カルボキシメチルセルロース水溶液に２ｍｇ／ｍＬの濃度で溶かして試験薬物として使用した。１０ｍｇ／ｍＬの濃度で０．５％カルボキシメチルセルロース水溶液に溶解されたムコスタ（レバミピド、韓国大塚製薬）を対照薬物として使用した。
【００３６】
特定病原体未感染（ＳＰＦ）の７週齢雄Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットをチャールズ・リバーから購入し、１週間の順応期間を経た後、体重が２２０〜２２５ｇである健康なラットを実験で使用した。各グループ当り５匹ずつとなるように区分した後、水を自由に摂取することができる状態で１８時間絶食させ、モモルディカ・サポニンＩを２０ｍｇ／ｋｇの容量で投与し、対照薬物であるムコスタは１００ｍｇ／ｋｇの容量で投与した。試験薬物を投与してから３０分後に、１００％エタノール１．５ｍＬを経口投与し、３時間後に、薬物の胃損傷予防効能を評価するために、ラットにエーテルで麻酔をかけた後、胃を摘出した。胃を大弯部に沿って切開して開いた後、肉眼で観察した。胃の損傷を発赤、充血、出血、糜爛及び浮腫に細分した後、それぞれを０〜３の範囲（数値が高いほど損傷がひどい）で損傷の重症度を評価した。
【００３７】
【表３】
【００３８】
前記表３から分かるように、モモルディカ・サポニンＩがアルコールにより誘発される胃粘膜損傷に対して優れた予防効能を持つことが分かる。
【００３９】
実施例３：ラカンカ抽出物のジクロフェナクにより誘発された胃損傷の治療効果
胃損傷誘発因子として代表的な非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）であるジクロフェナクを使用してラットモデル実験を行い、製造例１のラカンカ抽出物の胃炎治療効能を評価した。
【００４０】
ラカンカ抽出物を０．５％カルボキシメチルセルロース水溶液に１０ｍｇ／ｍＬの濃度で溶かし、試験薬物として使用した。０．５％カルボキシメチルセルロース水溶液に１０ｍｇ／ｍＬの濃度で溶解されたスティレン（ヨモギ抽出物、東亜製薬（韓））とムコスタ（レバミピド、韓国大塚製薬）を対照薬物として使用した。
【００４１】
特定病原体未感染（ＳＰＦ）の７週齢雄Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットをチャールズ・リバーから購入し、１週間の順応期間を経た後、体重が２２０〜２２５ｇである健康なラットを実験で使用した。各グループ当り５匹ずつとなるように区分した後、水を自由に摂取することができる状態で１８時間絶食させ、ジクロフェナクを４０ｍｇ／ｋｇの容量で経口投与した。胃損傷を誘発されてから６時間後、ラカンカ抽出物と、対照薬物であるスティレン及びムコスタを各々１００ｍｇ／ｋｇの容量を投与した。１８時間後に、薬物の胃炎治療効能を評価するために、ラットにエーテルで麻酔をかけた後、胃を摘出した。胃を大弯部に沿って切開して開いた後、肉眼で観察した。胃の損傷を発赤、充血、出血、糜爛、浮腫に細分した後、それぞれを０〜３の範囲で損傷の重症度を評価した。
【００４２】
【表４】
【００４３】
前記表４から分かるように、製造例１のラカンカ抽出物が損傷された胃粘膜に対して優れた治療効能を持つことが分かる。
【００４４】
実施例４：ラカンカ抽出物のジクロフェナクにより誘発される胃損傷の抑制効果
実施例３とは異なり、ジクロフェナクと試験薬物を同時に投与し、６時間後に胃粘膜の損傷程度を観察した。この時、ジクロフェナンと試験薬物と直接的な相互作用を防ぐために、試験薬物は腹腔で投与した。前記実施例３と同様に、ジクロフェナクと試験薬物は０．５％カルボキシメチルセルロース水溶液に１０ｍｇ／ｍＬの濃度で溶解した。
【００４５】
特定病原体未感染（ＳＰＦ）の７週齢雄Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットをチャールズ・リバーから購入し、１週間の順応期間を経た後、体重が２２０〜２２５ｇである健康なラットを実験で使用した。各グループ当り５匹ずつとなるように区分した後、水を自由に摂取することができる状態で１８時間絶食させ、ジクロフェナクを４０ｍｇ／ｋｇの濃度で経口投与し、同時に、試験薬物であるラカンカ抽出物と、対照薬物であるスティレンとムコスタを１００ｍｇ／ｋｇの容量で腹腔投与した。試験薬物を投与してから６時間後に、薬物の胃炎治療効能を評価するために、ラットにエーテルで麻酔をかけた後、胃を摘出した。胃を大弯部に沿って切開して開いた後、肉眼で観察した。胃の損傷を発赤、充血、出血、糜爛及び浮腫に細分した後、それぞれを０〜３の範囲で損傷の重症度を評価した。
【００４６】
【表５】
【００４７】
前記表５から分かるように、ラカンカ抽出物が損傷された胃粘膜を治療する効能だけでなく、ジクロフェナクのようなＮＳＡＩＤ薬物と共に投与する場合、ＮＳＡＩＤ薬物により誘発される胃粘膜損傷を減少させることが分かる。
【００４８】
実施例５：モモルディカ・サポニンＩのジクロフェナクにより誘発される胃損傷の保護効果
ジクロフェナクと試験薬物を同時に投与し、４時間後に胃粘膜の損傷程度を観察した。ジクロフェナクは０．５％カルボキシメチルセルロース水溶液に４０ｍｇ／ｍＬの濃度で溶解し、試験薬物は実施例２と同様に準備した。
【００４９】
特定病原体未感染（ＳＰＦ）の７週齢雄Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットをチャールズ・リバーから購入し、１週間の順応期間を経た後、体重が２２０〜２２５ｇである健康なラットを実験で使用した。各グループ当り５匹ずつとなるように区分した後、水を自由に摂取することができる状態で１８時間絶食させ、ジクロフェナクを４０ｍｇ／ｋｇの容量で経口投与し、同時に、試験薬物であるモモルディカ・サポニンＩを２０ｍｇ／ｋｇの容量で投与し、対照薬物であるムコスタを１００ｍｇ／ｋｇの容量で経口投与した。試験薬物を投与してから４時間後に、薬物の胃損傷の治療効能を評価するために、ラットにエーテルで麻酔をかけた後、胃を摘出した。胃を大弯部に沿って切開して開いた後、肉眼で観察した。胃の損傷を発赤、充血、出血、糜爛及び浮腫に細分した後、それぞれを０〜３の範囲（数値が高いほど損傷がひどい）で損傷の重症度を評価した。
【００５０】
【表６】
【００５１】
前記表６から分かるように、モモルディカ・サポニンＩがジクロフェナクのようなＮＳＡＩＤ薬物により誘発される胃粘膜損傷を減少させることが分かる。
【００５２】
実施例６：モモルディカ・サポニンＩのラットにおいての胃酸分泌抑制実験
モモルディカ・サポニンＩが胃酸分泌に及ぼす影響を評価するために、Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットにモモルディカ・サポニンを経口投与した後、胃の酸度を測定した。製造例４で分離されたモモルディカ・サポニンＩを０．５％カルボキシメチルセルロース水溶液に０．５、１．５及び４．５ｍｇ／ｍＬの濃度で溶解した。特定病原体未感染（ＳＰＦ）の７週齢雄Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットをチャールズ・リバーから購入し、１週間の順応期間を経た後、体重が２２０〜２２５ｇである健康なラットを実験で使用した。各グループ当り２匹ずつとなるように区分した後、水を自由に摂取することができる状態で１８時間絶食させ、モモルディカ・サポニンＩを５、１５及び４５ｍｇ／ｋｇの容量で投与した。試験薬物を投与してから１時間後に、ラットにエーテルで麻酔をかけた。胃から取り出した胃液０．５ｍＬを蒸留水で１０倍に希釈して、５ｍＬの試料を得た。希釈された胃液のｐＨをｐＨメーターで測定した。
【００５３】
【表７】
【００５４】
前記表７から分かるように、モモルディカ・サポニンＩが胃液の酸度を低減させるため、胃炎または胃潰瘍の治療に有用であることが分かる。
【００５５】
実施例７：ラカンカ抽出物のラットに対する経口投与の急性毒性実験
６週齢の特定病原未感染（ＳＰＦ）のＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットを使用して急性毒性実験を下記のように実施した。
【００５６】
グループ当り２匹ずつの動物に製造例１で製造されたラカンカ抽出物を１ｇ／ｋｇの容量で１回経口投与した。斃死可否、臨床症状及び体重変化を観察し、血液学的検査と血清生化学的検査を実施し、剖検して、腹腔臓器と胸腔臓器の異常を観察した。その結果、特記するほどの臨床症状や斃死した動物はなく、更に、体重変化、血液検査及び血清生化学検査、及び剖検でも毒性は発見されなかった。従って、本発明によるラカンカ抽出物は全てのラットで２，０００ｍｇ／ｋｇの容量まで毒性を示さず、最小経口投与致死量（ＬＤ50）は２，０００ｍｇ／ｋｇ以上である安全な物質と判断された。
【００５７】
実施例８：モモルディカ・サポニンＩのラットに対する経口投与の急性毒性実験
６週齢の特定病原未感染（ＳＰＦ）のＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットを使用して急性毒性実験を下記のように実施した。
【００５８】
グループ当り２匹ずつの動物に製造例５で分離されたモモルディカ・サポニンＩを４００ｍｇ／ｋｇの容量で１回経口投与した。斃死可否、臨床症状、体重変化を観察し、血液学的検査と血清生化学的検査を実施し、剖検して、腹腔臓器と胸腔臓器の異常を観察した。その結果、特記するほどの臨床症状や斃死した動物はなく、更に、体重変化、血液検査及び血清生化学検査、剖検でも毒性は発見されなかった。従って、本発明によるモモルディカ・サポニンＩは全てのラットで４００ｍｇ／ｋｇの容量まで毒性を示さず、最小経口投与致死量（ＬＤ50）は４００ｍｇ／ｋｇ以上である安全な物質と判断された。
【００５９】
製剤例１：ラカンカ抽出物含有錠剤の製造
本発明のラカンカ抽出物にて湿式顆粒法及び乾式顆粒法を経口投与用錠剤に製造した。
［組成］
ラカンカ抽出物（２００ｍｇ）、硬質無水ケイ酸（１０ｍｇ）、ステアリン酸マグネシウム（２ｍｇ）、微細結晶セルロース（５０ｍｇ）、デンプングリコール酸ナトリウム（２５ｍｇ）、コーンスターチ（１１３ｍｇ）、無水エタノール（適量）。
【００６０】
製剤例２：モモルディカ・サポニンＩ含有錠剤の製造
本発明のモモルディカ・サポニンＩにて湿式顆粒法及び乾式顆粒法により経口投与用錠剤を製造した。
［組成］
モモルディカ・サポニンＩ（２０ｍｇ）、硬質無水ケイ酸（１０ｍｇ）、ステアリン酸マグネシウム（２ｍｇ）、微細結晶セルロース（５０ｍｇ）、デンプングリコール酸ナトリウム（２５ｍｇ）、コーンスターチ（１１３ｍｇ）、無水エタノール（適量）。
【００６１】
製剤例３：ラカンカ抽出物含有軟膏剤の製造
本発明のラカンカ抽出物にて軟膏剤を製造した。
［組成］
ラカンカ抽出物（５ｇ）、パルミチン酸セチル（２０ｇ）、セタノール（４０ｇ）、ステアリル・アルコール（４０ｇ）、ミリスチン酸イソプロピル（８０ｇ）、モノステアリン酸ソルビタン（２０ｇ）、ポリソルベート（６０ｇ）、ｐ−ヒドロキシ安息香酸プロピル（１ｇ）、ｐ−ヒドロキシ安息香酸メチル（１ｇ）、リン酸及び精製水（適量）。
【００６２】
製剤例４：ラカンカ抽出物含有注射剤の製造
本発明のラカンカ抽出物にて注射剤を製造した。
［組成］
ラカンカ抽出物（１００ｍｇ）、マンニトール（１８０ｍｇ）、二リン酸ナトリウム（２５ｍｇ）、注射用水（２９７４ｍｇ）。
【００６３】
製剤例５：ラカンカ抽出物含有経皮剤の製造
本発明のラカンカ抽出物にて経皮剤を製造した。
［組成１］
ラカンカ抽出物（０．４ｇ）、ポリアクリル酸ナトリウム（１．３ｇ）、グリセリン（３．６ｇ）、水酸化アルミニウム（０．０４ｇ）、メチルパラベン（０．２ｇ）、水（１４ｇ）。
［組成２］
ラカンカ抽出物（０．８ｇ）、プロピレングリコール（１．６ｇ）、流動パラフィン（０．８ｇ）、ミリスチン酸イソプロピル（０．４ｇ）、ジェルバー（１６．４ｇ）。
【００６４】
製剤例６：モモルディカ・サポニンＩ含有経皮剤の製造
本発明のモモルディカ・サポニンＩにて経皮剤を製造した。
［組成１］
モモルディカ・サポニンＩ（２０ｍｇ）、ポリアクリル酸ナトリウム（１．３ｇ）、グリセリン（３．６ｇ）、水酸化アルミニウム（０．０４ｇ）、メチルパラベン（０．２ｇ）、水（１４ｇ）。
［組成２］
モモルディカ・サポニンＩ（４０ｍｇ）、プロピレングリコール（１．６ｇ）、流動パラフィン（０．８ｇ）、ミリスチン酸イソプロピル（０．４ｇ）、ジェルバー１４３０（１６．４ｇ）。
【産業上の利用可能性】
【００６５】
前述したとおり、本発明に係るラカンカ抽出物及びこれから分離されたモモルディカ・サポニンＩは、アルコールと非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）により誘発される胃粘膜損傷を予防する効果と、胃酸分泌を抑制する効果が優れているため、胃炎または胃潰瘍の予防及び治療において非常に有用である。
【技術分野】
【０００１】
本発明は胃炎または胃潰瘍の予防及び治療に有用なラカンカ（Ｍｏｍｏｒｄｉｃａｅ ｓｅｍｅｎ）抽出物、及びこれから分離されたモモルディカ・サポニンＩ（ｍｏｍｏｒｄｉｃａ ｓａｐｏｎｉｎ Ｉ）に関する。
【背景技術】
【０００２】
胃を保護する胃粘膜層は様々な種類の因子により損傷を受け易い。代表的な因子として、胃酸、アルコール類、アスピリンなどの非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、ヘリコバクター・ピロリなどの細菌［Suzuki. M.及びS. Miura, Nippon Rinsho, 15(12)，3154-3158，1993］、ストレスにより引き起こされた胃粘膜の微細循環障害と低血圧［Tadaoki Mizuno, Yokohama Med.Bull., 38（3,4），87-97，1987］などがある。このような要因により粘膜層が損傷された時、発赤、出血、及び浮腫を同伴する炎症が発生する。損傷がひどい場合、粘膜下層及び筋肉層まで損傷された時、これを胃潰瘍と言う。更に、似た要因により、胃と直接連結されている十二指腸も炎症または潰瘍が発生し得る。
【０００３】
一方、これらの因子により引き起こされた胃と十二指腸の炎症及び潰瘍を治療するためには、胃酸の分泌抑制、ヘリコバクター・ピロリの増殖抑制、粘液の分泌促進、上皮細胞の再生促進、抗炎症などの効能を有する薬物が必要である。現在最も代表的な胃炎及び胃潰瘍の治療剤としては、胃酸分泌抑制の効能を有するＨ２拮抗薬とプロトンポンプ阻害剤であり、これらの薬剤は臨床効果が優れていることが立証された［J. Int. Med. Res. 17(suppl.) 9A，1989；Meth. Find. Exp. Clin. Pharmacol. 11(suppl. 1) 87，1989；N. Eng. J. Med. 323：1672, 1990］。しかしながら、このような胃酸分泌抑制剤は薬剤の投与終了後、再発率が高いという短所を持っている［Drug Intell. Clin. Pharm. 21: 493, 1987, Gut 30: 449, 1989 Yale J. Biol. Med. 65: 649, 1992］。
【０００４】
胃炎誘発因子の再攻撃に抵抗することができるように粘膜組織の再生を促進させる粘膜保護剤は、胃炎治療剤の重要な要素である。胃粘膜保護剤として現在、レバミピド、ソファルコンなどの薬物が開発されているが、これらの薬剤は作用が比較的遅いため、長期間多量の薬剤を服用しなければならず、改善された薬物の開発が必要である。
【０００５】
動物モデルを使用して胃炎治療の効能を評価するための代表的な方法として、非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）またはエタノールの使用により胃粘膜を損傷させた後、その回復速度を観察する方法がある。このような実験モデル実験を通して様々な生薬抽出物が胃炎治療剤として開発可能性があると報告されている。特に、優れた胃炎治療効果を有するヨモギ（Ａｒｔｅｍｉｓｉａ Ｓｐｐｓ）抽出物について特許出願され［大韓民国第１０−１９９５−００２１９５７号］、東亜製薬（韓国）がスティレン（登録商標）という医薬品名で開発した。
【０００６】
本発明で使用する生薬であるラカンカ（Ｍｏｍｏｒｄｉｃａｅ Ｓｅｍｅｎ）は中国南部地方とベトナムに広く分布する多年生つる植物であるラカンカの成熟した種子である。９〜１１月頃に果実を採取して半分に切り、片方を乾かした時に種子を取り出すか、または、果実をつぼに入れて、果皮が腐敗した時、種子を取り出す。ラカンカは消炎作用が良く、リウマチ痛、筋肉痙攣などに対して効果があることが知られている。現在、ラカンカ抽出物に含有される成分としては、ステロール、オレアノール酸、モモルディン酸（ｍｏｍｏｒｄｉｃ ａｃｉｄ）などが知られている。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明の発明者は、胃炎治療剤を開発するために研究した結果、ラットを使用して、ラカンカ抽出物とこれから分離されたモモルディカ・サポニンＩを処理すると、ジクロフェナクとアルコールにより誘発される胃粘膜の損傷が減少することを発見し、更に、ラカンカ抽出物とモモルディカ・サポニンを投与すると、胃の酸度が低下することを発見し、本発明を完成するに至った。
【０００８】
従って、本発明の目的はラカンカ抽出物またはモモルディカ・サポニンＩを有効成分として含有し、胃粘膜保護活性が優れ、胃酸抑制効能を有する、胃炎または胃潰瘍の予防及び治療用薬剤を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明は、ラカンカ抽出物を有効成分として含有する胃炎または胃潰瘍の予防及び治療用薬剤に関する。
【００１０】
更に、本発明は下記化学式１に表されるモモルディカ・サポニンＩを有効成分として含有する胃炎または胃潰瘍の予防及び治療用薬剤に関する。
【００１１】
【化１】
【００１２】
このような本発明を更に詳しく説明すると下記の通りである。
【００１３】
本発明はアルコールと、ジクロフェナクなどの非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）により引き起こされる胃粘膜損傷の抑制活性、及び胃酸分泌の抑制活性が良い胃炎または胃潰瘍の予防及び治療に有用なラカンカ抽出物及びこれから分離されたモモルディカ・サポニンＩを含有する薬剤に関する。
【００１４】
本発明によるラカンカ抽出物は、ラカンカ生薬重量の３〜１０倍の水またはアルコール水溶液で抽出して得られ、生薬を抽出する通常の方法により得られる。この時、前記アルコールとしては炭素数１〜６のアルコールが好ましく、更に好ましくは、メタノール、エタノール、ブタノールなどを使用する。
【００１５】
前記ラカンカ抽出物を凍結乾燥させることで、粉末状の抽出物を得る。この抽出物はジクロフェナク及びアルコールにより誘発される胃粘膜損傷の抑制及び治療活性が優れているため、胃炎または胃潰瘍の予防及び治療剤として非常に有用であることが期待される。
【００１６】
更に、本発明によるモモルディカ・サポニンＩは、極性溶媒を使用する通常的な方法を用いてラカンカから効率的に分離することができる。極性溶媒としては蒸留水またはアルコール水溶液を使用する。この時、アルコールとしては炭素数１〜６のアルコールが好ましく、更に好ましくは、メタノール、エタノール、ブタノールなどを使用する。
【００１７】
特に、より高い純度でモモルディカ・サポニンＩを得るために、カラムクロマトグラフィを行うことができる。具体的に、オクタデシルシリル化シリカ樹脂などを使用してカラムクロマトグラフィを準備した後、７０％（ｖ／ｖ）のメタノール水溶液などの適切な溶媒で、選択的にサポニンの濃度が高い分画物を分離することができる。
【００１８】
前記モモルディカ・サポニンＩはアルコールまたはジクロフェナクにより誘発される胃粘膜損傷の抑制及び治療効果が優れ、胃酸の分泌を抑制するため、胃炎または胃潰瘍の予防及び治療剤として非常に有用である。
【００１９】
本発明によるラカンカ抽出物またはモモルディカ・サポニンＩは、通常の製造方法にて、錠剤またはカプセル剤などに剤形化するが、錠剤を製造する時、ラクトース、微細結晶セルロース、ステアリン酸マグネシウムなどを含む基剤（ｍａｔｒｉｘ）と、本発明の有効成分であるラカンカ抽出物またはモモルディカ・サポニンＩを、２〜１０：１の比率で使用すれば、胃炎または胃潰瘍の予防及び治療において活性を有する錠剤を製造することができる。
【００２０】
有効成分はそれ自体でも使用することができるが、薬学的に許容可能な担体、賦形剤、希釈剤などと混合した後、粉末、顆粒、カプセルに剤形化して得ることも可能である。更に、本発明によるラカンカ抽出物またはモモルディカ・サポニンＩの量は体内吸収度、体重、患者の年齢、性別、健康状態、食餌、投与時間、投与方法、疾患の重症度などにより異なる。一般的に、ラカンカ抽出物は体重１ｋｇ当り０．１〜１０ｍｇ程度が好ましく、モモルディカ・サポニンＩは体重１ｋｇ当り０．０５〜１ｍｇ程度であることが好ましい。単位投与型製剤は、薬剤投与を観察する専門家の判断または個人の要求に応じて、専門化された投薬法、または一定間隔で数回投与することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２１】
以下、本発明は下記実施例に依拠して更に詳しく説明するが、本発明がこれに限定されるものではない。しかしながら、当業者がこの開示を考慮して、現在の発明の基本概念および範囲内で変更や改善をすることは、明らかである。
【００２２】
製造例１：ラカンカ抽出物の製造
薬草市場で購入したラカンカ１ｋｇ（乾燥重量）に５Ｌの５０％エタノール水溶液を加え、４時間、８０℃の温度を維持しながら抽出した。この過程を２度実施して生薬抽出物を獲得した。抽出液は濾過して、回転蒸発器を用いて６０℃で減圧濃縮した後、真空オーブンで溶媒を完全に除去した後、粉末状のエタノール抽出物２１ｇを獲得した。
【００２３】
製造例２：モモルディカ・サポニンＩ含有抽出物の製造
薬草市場で購入したラカンカ１ｋｇ（乾燥重量）を破砕した後、５Ｌの１０％エタノール水溶液を加え、３時間、８０℃を維持した水浴で抽出し、この過程を２度実施した。抽出液は濾過して、回転蒸発器を用いて６０℃で減圧濃縮した後、真空オーブンで溶媒を完全に除去した後、粉末状のモモルディカ・サポニンＩ含有抽出物３５〜４５ｇを獲得した。
【００２４】
製造例３：モモルディカ・サポニンＩ分画物の製造
有機溶媒（アセトン）を使用した沈殿法を通して、製造例２で製造された抽出物からモモルディカ・サポニンＩを効率的に分離した。製造例２の抽出物１０ｇを１００ｍＬの精製水に溶解した後、１００ｍＬのアセトンを添加して、５０％（ｖ／ｖ）アセトン水溶液を得た。沈殿物を濾過した後、更に４００ｍＬのアセトンを濾過液に添加し、８０％（ｖ／ｖ）アセトン水溶液を得た。新たに形成した沈殿物を濾紙を利用して分離した後、乾燥させた。
【００２５】
製造例４：モモルディカ・サポニンＩ分画物の製造
前記製造例２で製造された抽出物または製造例３で製造された分画物に対して、オクタデシルシリル化したシリカ樹脂（ＹＭＣ＊ＧＥＬ ＯＤＳ−Ａ １２ｎｍ、Ｓ−１５０ ｍ）を用いてカラムクロマトグラフィを実施した。樹脂の量は２５０ｇ、または抽出物または分画物の重量の２５倍であり、１０％（ｖ／ｖ）と４０％（ｖ／ｖ）メタノール水溶液を各々、樹脂体積の２〜３倍の量を流した後、７０％（ｖ／ｖ）のメタノール水溶液を樹脂体積の２〜３倍の量を流し、その結果、溶出分画物を収得し、この分画物を減圧下で濃縮し、真空オーブンで溶媒を完全に除去した。
【００２６】
製造例５：モモルディカ・サポニンＩの分離
前記製造例４の７０％（ｖ／ｖ）メタノール水溶液分画物からモモルディカ・サポニンＩを分離した。アセトニトリルと水の混合溶媒（２９：７１、０．１％トリフルオロ酢酸）を使用して高速液体クロマトグラフィを実施した。９．５ｍＬ／分の速度で溶出させ、約４５分でのサポニンピークのみを取った。この分画物を減圧下で濃縮し、真空オーブンで溶媒を完全に除去した。ＹＭＣ Ｊ‘Ｓｐｈｅｒｅ ＯＤＳ−Ｈ８０カラムを使用し、測定波長は２１０ｎｍであった。
【００２７】
質量分析とＮＭＲ分光法データを既存文献［Iwamoto，Okabe，Yamauchi，Tanaka，Tokutani，Hara，Mihashi，Higuchi．Studies on the constituents of Momordica cochinchinensis Spreng.I. Isolation and characterization of the seed saponins, Momordica saponin Ｉ and II. Chemical & pharmaceutical bulletin 1985, 33(2)：464-478］のデータと比較した結果、ラカンカに存在すると報告されたモモルディカ・サポニンＩ；３−Ｏ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル（１−＞２）−［α−Ｌ−ラムノピラノシル（１−＞３）］−β−Ｄ−グルコピラノシド−２８−Ｏ−β−Ｄ−キシロピラノシル（１−＞３）−β−Ｄ−グルコピラノシル（１−＞３）−［β−Ｄ−キシロピラノシル（１−＞４）］−α−Ｌ−ラムノピラノシル（１−＞２）−β−Ｄ−フコピラノシルジプソゲニン）のデータと一致することを確認した。
【００２８】
【化２】
分子量：１６７３．７７
融点：２４１−２４４℃
旋光度：［α］１９Ｄ＝−１４．８°（Ｃ０．７、ＭｅＯＨ：Ｈ2Ｏ＝１：２）
【００２９】
前記製造例２〜４の抽出物または分画物中のモモルディカ・サポニンＩの含量は下記表１の通りである。
【００３０】
【表１】
【００３１】
実施例１：ラカンカ抽出物のアルコールにより誘発された胃損傷の抑制効果
１００％エタノールを胃損傷誘発因子として使用したラットモデル実験を行い、ラカンカ抽出物の胃粘膜の保護効能を評価した。製造例１のラカンカ抽出物を０．５％カルボキシメチルセルロース水溶液に１０ｍｇ／ｍＬの濃度で溶かして試験薬物として使用した。１０ｍｇ／ｍＬの濃度で０．５％カルボキシメチルセルロース水溶液に溶解されたスティレン（ヨモギ抽出物、東亜製薬（韓））とムコスタ（レバミピド、韓国大塚製薬）を対照薬物として使用した。
【００３２】
特定病原体未感染（ＳＰＦ）の７週齢雄Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットをチャールズ・リバーから購入し、１週間の順応期間を経た後、体重が２２０〜２２５ｇである健康なラットを実験で使用した。各グループ当り５匹ずつとなるように区分した後、水を自由に摂取することができる状態で１８時間絶食させ、ラカンカ抽出物と、対照薬物であるスティレン及びムコスタを各々１００ｍｇ／ｋｇの量を投与した。試験薬物を投与してから１時間後に、１００％エタノール１．５ｍＬを経口投与し、６時間後に薬物の胃損傷予防効能を評価するために、ラットにエーテルで麻酔をかけ、胃を摘出した。胃を大弯部に沿って切開して開いた後、肉眼で観察した。胃の損傷を発赤、充血、出血、糜爛及び浮腫に細分した後、それぞれを０〜３の範囲で損傷の重症度を評価した。
【００３３】
【表２】
【００３４】
前記表２から分かるように、ラカンカ抽出物がアルコールにより誘発された胃粘膜損傷に対して優れた予防効能を持っていることが分かる。
【００３５】
実施例２：モモルディカ・サポニンＩのアルコールにより誘発された胃損傷の抑制効果
１００％エタノールを胃損傷誘発因子として使用したラットモデル実験を行い、モモルディカ・サポニンＩの胃粘膜の保護効能を評価した。製造例５で分離されたモモルディカ・サポニンＩを０．５％カルボキシメチルセルロース水溶液に２ｍｇ／ｍＬの濃度で溶かして試験薬物として使用した。１０ｍｇ／ｍＬの濃度で０．５％カルボキシメチルセルロース水溶液に溶解されたムコスタ（レバミピド、韓国大塚製薬）を対照薬物として使用した。
【００３６】
特定病原体未感染（ＳＰＦ）の７週齢雄Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットをチャールズ・リバーから購入し、１週間の順応期間を経た後、体重が２２０〜２２５ｇである健康なラットを実験で使用した。各グループ当り５匹ずつとなるように区分した後、水を自由に摂取することができる状態で１８時間絶食させ、モモルディカ・サポニンＩを２０ｍｇ／ｋｇの容量で投与し、対照薬物であるムコスタは１００ｍｇ／ｋｇの容量で投与した。試験薬物を投与してから３０分後に、１００％エタノール１．５ｍＬを経口投与し、３時間後に、薬物の胃損傷予防効能を評価するために、ラットにエーテルで麻酔をかけた後、胃を摘出した。胃を大弯部に沿って切開して開いた後、肉眼で観察した。胃の損傷を発赤、充血、出血、糜爛及び浮腫に細分した後、それぞれを０〜３の範囲（数値が高いほど損傷がひどい）で損傷の重症度を評価した。
【００３７】
【表３】
【００３８】
前記表３から分かるように、モモルディカ・サポニンＩがアルコールにより誘発される胃粘膜損傷に対して優れた予防効能を持つことが分かる。
【００３９】
実施例３：ラカンカ抽出物のジクロフェナクにより誘発された胃損傷の治療効果
胃損傷誘発因子として代表的な非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）であるジクロフェナクを使用してラットモデル実験を行い、製造例１のラカンカ抽出物の胃炎治療効能を評価した。
【００４０】
ラカンカ抽出物を０．５％カルボキシメチルセルロース水溶液に１０ｍｇ／ｍＬの濃度で溶かし、試験薬物として使用した。０．５％カルボキシメチルセルロース水溶液に１０ｍｇ／ｍＬの濃度で溶解されたスティレン（ヨモギ抽出物、東亜製薬（韓））とムコスタ（レバミピド、韓国大塚製薬）を対照薬物として使用した。
【００４１】
特定病原体未感染（ＳＰＦ）の７週齢雄Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットをチャールズ・リバーから購入し、１週間の順応期間を経た後、体重が２２０〜２２５ｇである健康なラットを実験で使用した。各グループ当り５匹ずつとなるように区分した後、水を自由に摂取することができる状態で１８時間絶食させ、ジクロフェナクを４０ｍｇ／ｋｇの容量で経口投与した。胃損傷を誘発されてから６時間後、ラカンカ抽出物と、対照薬物であるスティレン及びムコスタを各々１００ｍｇ／ｋｇの容量を投与した。１８時間後に、薬物の胃炎治療効能を評価するために、ラットにエーテルで麻酔をかけた後、胃を摘出した。胃を大弯部に沿って切開して開いた後、肉眼で観察した。胃の損傷を発赤、充血、出血、糜爛、浮腫に細分した後、それぞれを０〜３の範囲で損傷の重症度を評価した。
【００４２】
【表４】
【００４３】
前記表４から分かるように、製造例１のラカンカ抽出物が損傷された胃粘膜に対して優れた治療効能を持つことが分かる。
【００４４】
実施例４：ラカンカ抽出物のジクロフェナクにより誘発される胃損傷の抑制効果
実施例３とは異なり、ジクロフェナクと試験薬物を同時に投与し、６時間後に胃粘膜の損傷程度を観察した。この時、ジクロフェナンと試験薬物と直接的な相互作用を防ぐために、試験薬物は腹腔で投与した。前記実施例３と同様に、ジクロフェナクと試験薬物は０．５％カルボキシメチルセルロース水溶液に１０ｍｇ／ｍＬの濃度で溶解した。
【００４５】
特定病原体未感染（ＳＰＦ）の７週齢雄Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットをチャールズ・リバーから購入し、１週間の順応期間を経た後、体重が２２０〜２２５ｇである健康なラットを実験で使用した。各グループ当り５匹ずつとなるように区分した後、水を自由に摂取することができる状態で１８時間絶食させ、ジクロフェナクを４０ｍｇ／ｋｇの濃度で経口投与し、同時に、試験薬物であるラカンカ抽出物と、対照薬物であるスティレンとムコスタを１００ｍｇ／ｋｇの容量で腹腔投与した。試験薬物を投与してから６時間後に、薬物の胃炎治療効能を評価するために、ラットにエーテルで麻酔をかけた後、胃を摘出した。胃を大弯部に沿って切開して開いた後、肉眼で観察した。胃の損傷を発赤、充血、出血、糜爛及び浮腫に細分した後、それぞれを０〜３の範囲で損傷の重症度を評価した。
【００４６】
【表５】
【００４７】
前記表５から分かるように、ラカンカ抽出物が損傷された胃粘膜を治療する効能だけでなく、ジクロフェナクのようなＮＳＡＩＤ薬物と共に投与する場合、ＮＳＡＩＤ薬物により誘発される胃粘膜損傷を減少させることが分かる。
【００４８】
実施例５：モモルディカ・サポニンＩのジクロフェナクにより誘発される胃損傷の保護効果
ジクロフェナクと試験薬物を同時に投与し、４時間後に胃粘膜の損傷程度を観察した。ジクロフェナクは０．５％カルボキシメチルセルロース水溶液に４０ｍｇ／ｍＬの濃度で溶解し、試験薬物は実施例２と同様に準備した。
【００４９】
特定病原体未感染（ＳＰＦ）の７週齢雄Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットをチャールズ・リバーから購入し、１週間の順応期間を経た後、体重が２２０〜２２５ｇである健康なラットを実験で使用した。各グループ当り５匹ずつとなるように区分した後、水を自由に摂取することができる状態で１８時間絶食させ、ジクロフェナクを４０ｍｇ／ｋｇの容量で経口投与し、同時に、試験薬物であるモモルディカ・サポニンＩを２０ｍｇ／ｋｇの容量で投与し、対照薬物であるムコスタを１００ｍｇ／ｋｇの容量で経口投与した。試験薬物を投与してから４時間後に、薬物の胃損傷の治療効能を評価するために、ラットにエーテルで麻酔をかけた後、胃を摘出した。胃を大弯部に沿って切開して開いた後、肉眼で観察した。胃の損傷を発赤、充血、出血、糜爛及び浮腫に細分した後、それぞれを０〜３の範囲（数値が高いほど損傷がひどい）で損傷の重症度を評価した。
【００５０】
【表６】
【００５１】
前記表６から分かるように、モモルディカ・サポニンＩがジクロフェナクのようなＮＳＡＩＤ薬物により誘発される胃粘膜損傷を減少させることが分かる。
【００５２】
実施例６：モモルディカ・サポニンＩのラットにおいての胃酸分泌抑制実験
モモルディカ・サポニンＩが胃酸分泌に及ぼす影響を評価するために、Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットにモモルディカ・サポニンを経口投与した後、胃の酸度を測定した。製造例４で分離されたモモルディカ・サポニンＩを０．５％カルボキシメチルセルロース水溶液に０．５、１．５及び４．５ｍｇ／ｍＬの濃度で溶解した。特定病原体未感染（ＳＰＦ）の７週齢雄Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットをチャールズ・リバーから購入し、１週間の順応期間を経た後、体重が２２０〜２２５ｇである健康なラットを実験で使用した。各グループ当り２匹ずつとなるように区分した後、水を自由に摂取することができる状態で１８時間絶食させ、モモルディカ・サポニンＩを５、１５及び４５ｍｇ／ｋｇの容量で投与した。試験薬物を投与してから１時間後に、ラットにエーテルで麻酔をかけた。胃から取り出した胃液０．５ｍＬを蒸留水で１０倍に希釈して、５ｍＬの試料を得た。希釈された胃液のｐＨをｐＨメーターで測定した。
【００５３】
【表７】
【００５４】
前記表７から分かるように、モモルディカ・サポニンＩが胃液の酸度を低減させるため、胃炎または胃潰瘍の治療に有用であることが分かる。
【００５５】
実施例７：ラカンカ抽出物のラットに対する経口投与の急性毒性実験
６週齢の特定病原未感染（ＳＰＦ）のＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットを使用して急性毒性実験を下記のように実施した。
【００５６】
グループ当り２匹ずつの動物に製造例１で製造されたラカンカ抽出物を１ｇ／ｋｇの容量で１回経口投与した。斃死可否、臨床症状及び体重変化を観察し、血液学的検査と血清生化学的検査を実施し、剖検して、腹腔臓器と胸腔臓器の異常を観察した。その結果、特記するほどの臨床症状や斃死した動物はなく、更に、体重変化、血液検査及び血清生化学検査、及び剖検でも毒性は発見されなかった。従って、本発明によるラカンカ抽出物は全てのラットで２，０００ｍｇ／ｋｇの容量まで毒性を示さず、最小経口投与致死量（ＬＤ50）は２，０００ｍｇ／ｋｇ以上である安全な物質と判断された。
【００５７】
実施例８：モモルディカ・サポニンＩのラットに対する経口投与の急性毒性実験
６週齢の特定病原未感染（ＳＰＦ）のＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットを使用して急性毒性実験を下記のように実施した。
【００５８】
グループ当り２匹ずつの動物に製造例５で分離されたモモルディカ・サポニンＩを４００ｍｇ／ｋｇの容量で１回経口投与した。斃死可否、臨床症状、体重変化を観察し、血液学的検査と血清生化学的検査を実施し、剖検して、腹腔臓器と胸腔臓器の異常を観察した。その結果、特記するほどの臨床症状や斃死した動物はなく、更に、体重変化、血液検査及び血清生化学検査、剖検でも毒性は発見されなかった。従って、本発明によるモモルディカ・サポニンＩは全てのラットで４００ｍｇ／ｋｇの容量まで毒性を示さず、最小経口投与致死量（ＬＤ50）は４００ｍｇ／ｋｇ以上である安全な物質と判断された。
【００５９】
製剤例１：ラカンカ抽出物含有錠剤の製造
本発明のラカンカ抽出物にて湿式顆粒法及び乾式顆粒法を経口投与用錠剤に製造した。
［組成］
ラカンカ抽出物（２００ｍｇ）、硬質無水ケイ酸（１０ｍｇ）、ステアリン酸マグネシウム（２ｍｇ）、微細結晶セルロース（５０ｍｇ）、デンプングリコール酸ナトリウム（２５ｍｇ）、コーンスターチ（１１３ｍｇ）、無水エタノール（適量）。
【００６０】
製剤例２：モモルディカ・サポニンＩ含有錠剤の製造
本発明のモモルディカ・サポニンＩにて湿式顆粒法及び乾式顆粒法により経口投与用錠剤を製造した。
［組成］
モモルディカ・サポニンＩ（２０ｍｇ）、硬質無水ケイ酸（１０ｍｇ）、ステアリン酸マグネシウム（２ｍｇ）、微細結晶セルロース（５０ｍｇ）、デンプングリコール酸ナトリウム（２５ｍｇ）、コーンスターチ（１１３ｍｇ）、無水エタノール（適量）。
【００６１】
製剤例３：ラカンカ抽出物含有軟膏剤の製造
本発明のラカンカ抽出物にて軟膏剤を製造した。
［組成］
ラカンカ抽出物（５ｇ）、パルミチン酸セチル（２０ｇ）、セタノール（４０ｇ）、ステアリル・アルコール（４０ｇ）、ミリスチン酸イソプロピル（８０ｇ）、モノステアリン酸ソルビタン（２０ｇ）、ポリソルベート（６０ｇ）、ｐ−ヒドロキシ安息香酸プロピル（１ｇ）、ｐ−ヒドロキシ安息香酸メチル（１ｇ）、リン酸及び精製水（適量）。
【００６２】
製剤例４：ラカンカ抽出物含有注射剤の製造
本発明のラカンカ抽出物にて注射剤を製造した。
［組成］
ラカンカ抽出物（１００ｍｇ）、マンニトール（１８０ｍｇ）、二リン酸ナトリウム（２５ｍｇ）、注射用水（２９７４ｍｇ）。
【００６３】
製剤例５：ラカンカ抽出物含有経皮剤の製造
本発明のラカンカ抽出物にて経皮剤を製造した。
［組成１］
ラカンカ抽出物（０．４ｇ）、ポリアクリル酸ナトリウム（１．３ｇ）、グリセリン（３．６ｇ）、水酸化アルミニウム（０．０４ｇ）、メチルパラベン（０．２ｇ）、水（１４ｇ）。
［組成２］
ラカンカ抽出物（０．８ｇ）、プロピレングリコール（１．６ｇ）、流動パラフィン（０．８ｇ）、ミリスチン酸イソプロピル（０．４ｇ）、ジェルバー（１６．４ｇ）。
【００６４】
製剤例６：モモルディカ・サポニンＩ含有経皮剤の製造
本発明のモモルディカ・サポニンＩにて経皮剤を製造した。
［組成１］
モモルディカ・サポニンＩ（２０ｍｇ）、ポリアクリル酸ナトリウム（１．３ｇ）、グリセリン（３．６ｇ）、水酸化アルミニウム（０．０４ｇ）、メチルパラベン（０．２ｇ）、水（１４ｇ）。
［組成２］
モモルディカ・サポニンＩ（４０ｍｇ）、プロピレングリコール（１．６ｇ）、流動パラフィン（０．８ｇ）、ミリスチン酸イソプロピル（０．４ｇ）、ジェルバー１４３０（１６．４ｇ）。
【産業上の利用可能性】
【００６５】
前述したとおり、本発明に係るラカンカ抽出物及びこれから分離されたモモルディカ・サポニンＩは、アルコールと非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）により誘発される胃粘膜損傷を予防する効果と、胃酸分泌を抑制する効果が優れているため、胃炎または胃潰瘍の予防及び治療において非常に有用である。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ラカンカ（Ｍｏｍｏｒｄｉｃａｅ ｓｅｍｅｎ）抽出物を有効成分として含有することを特徴とする胃炎または胃潰瘍の予防及び治療用薬剤。
【請求項２】
前記ラカンカ抽出物は、ラカンカを水またはアルコール水溶液で抽出して得られることを特徴とする、請求項１記載の薬剤。
【請求項３】
前記アルコールは炭素数１〜６のアルコールであることを特徴とする、請求項２記載の薬剤。
【請求項４】
下記化学式１に表されるモモルディカ・サポニンＩ（ｍｏｍｏｒｄｉｃａ ｓａｐｏｎｉｎ Ｉ）を有効成分として含有することを特徴とする胃炎または胃潰瘍の予防及び治療用薬剤。
【化１】
【請求項５】
前記薬剤は、体重１ｋｇ当り０．０５〜１ｍｇのモモルディカ・サポニンＩを含有することを特徴とする、請求項４記載の薬剤。
【請求項１】
ラカンカ（Ｍｏｍｏｒｄｉｃａｅ ｓｅｍｅｎ）抽出物を有効成分として含有することを特徴とする胃炎または胃潰瘍の予防及び治療用薬剤。
【請求項２】
前記ラカンカ抽出物は、ラカンカを水またはアルコール水溶液で抽出して得られることを特徴とする、請求項１記載の薬剤。
【請求項３】
前記アルコールは炭素数１〜６のアルコールであることを特徴とする、請求項２記載の薬剤。
【請求項４】
下記化学式１に表されるモモルディカ・サポニンＩ（ｍｏｍｏｒｄｉｃａ ｓａｐｏｎｉｎ Ｉ）を有効成分として含有することを特徴とする胃炎または胃潰瘍の予防及び治療用薬剤。
【化１】
【請求項５】
前記薬剤は、体重１ｋｇ当り０．０５〜１ｍｇのモモルディカ・サポニンＩを含有することを特徴とする、請求項４記載の薬剤。
【公表番号】特表２００９−５２００２０（Ｐ２００９−５２００２０Ａ）
【公表日】平成２１年５月２１日（２００９．５．２１）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００８−５４７１０８（Ｐ２００８−５４７１０８）
【出願日】平成１８年１２月２０日（２００６．１２．２０）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＫＲ２００６／００５６０３
【国際公開番号】ＷＯ２００７／０７３０９６
【国際公開日】平成１９年６月２８日（２００７．６．２８）
【出願人】（５０５０５３９４７）エスケー ケミカルズ カンパニー リミテッド (16)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２１年５月２１日（２００９．５．２１）
【国際特許分類】
【出願日】平成１８年１２月２０日（２００６．１２．２０）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＫＲ２００６／００５６０３
【国際公開番号】ＷＯ２００７／０７３０９６
【国際公開日】平成１９年６月２８日（２００７．６．２８）
【出願人】（５０５０５３９４７）エスケー ケミカルズ カンパニー リミテッド (16)
【Ｆターム（参考）】
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