胚体内胚葉細胞を含む細胞集団における細胞を、腸管に由来する組織及び／又は器官を形成することが可能な細胞へ分化させるのに有用な１つ又は複数の分化因子を同定する方法が本明細書中で開示される。

【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒト細胞を含む細胞集団におけるヒト胚体内胚葉細胞の分化を促進することが可能な分化因子を同定する方法であって、
ヒト胚体内胚葉細胞を含む細胞集団を得る工程と、
候補分化因子を前記細胞集団へ供給する工程と、
第１の時点で前記細胞集団におけるマーカーの発現を測定する工程と、
第２の時点で前記細胞集団における同一マーカーの発現を測定する工程と、
前記第２の時点での前記細胞集団における前記マーカーの発現が、前記第１の時点での該細胞集団における該マーカーの発現と比較して増大又は減少されているかを判定する工程
とを含み、該第２の時点が前記第１の時点の後であり、また該第２の時点が前記細胞集団に前記候補分化因子を供給することの後であり、該細胞集団における該マーカーの発現の増大又は減少は、前記候補分化因子が、前記ヒト胚体内胚葉細胞の分化を促進することが可能であることを示す、前記方法。
【請求項２】
前記ヒト胚体内胚葉細胞が、前記細胞集団における前記ヒト細胞の少なくとも約１０％を構成する、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
ヒトフィーダー細胞が前記細胞集団中に存在し、該フィーダー細胞以外の前記ヒト細胞の少なくとも約１０％が胚体内胚葉細胞である、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記ヒト胚体内胚葉細胞が、前記細胞集団における前記ヒト細胞の少なくとも約９０％を構成する、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記ヒトフィーダー細胞が前記細胞集団中に存在し、前記フィーダー細胞以外の前記ヒト細胞の少なくとも約９０％が胚体内胚葉細胞である、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記ヒト胚体内胚葉細胞が、前記候補分化因子に応答して、腸管に由来する細胞、組織又は器官へ分化する、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記ヒト胚体内胚葉細胞が、前記候補分化因子に応答して、膵臓前駆体細胞へ分化する、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記マーカーが、膵臓−十二指腸ホメオボックス因子−１（ＰＤＸ１）、ホメオボックスＡ１３（ＨＯＸＡ１３）及びホメオボックスＣ６（ＨＯＸＣ６）から成る群から選択される、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記ヒト胚体内胚葉細胞が、前記候補分化因子に応答して、肝臓前駆体細胞へ分化する、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
前記マーカーが、アルブミン、プロスペロ(prospero)関連ホメオボックス１（ＰＲＯＸ１）及び肝細胞特異的抗原（ＨＳＡ）から成る群から選択される、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記ヒト胚体内胚葉細胞が、前記候補分化因子に応答して、肺前駆体細胞へ分化する、請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
前記マーカーが、甲状腺転写因子１（ＴＩＴＦ１）である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記ヒト胚体内胚葉細胞が、前記候補分化因子に応答して、腸前駆体細胞へ分化する、請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
前記マーカーが、ビリン及びコーダル型ホメオボックス転写因子２（ＣＤＸ２）から成る群から選択される、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記第１の時点が、前記候補分化因子を前記細胞集団へ供給することより前である、請求項１に記載の方法。
【請求項１６】
前記第１の時点が、前記候補分化因子を前記細胞集団へ供給するのとほぼ同時である、請求項１に記載の方法。
【請求項１７】
前記第１の時点が、前記候補分化因子を前記細胞集団へ供給することの後である、請求項１に記載の方法。
【請求項１８】
前記マーカーの発現が増大される、請求項１に記載の方法。
【請求項１９】
前記マーカーの発現が減少される、請求項１に記載の方法。
【請求項２０】
前記マーカーの発現が、定量的ポリメラーゼ連鎖反応（Ｑ−ＰＣＲ）により測定される、請求項１に記載の方法。
【請求項２１】
前記マーカーの発現が、免疫細胞化学により測定される、請求項１に記載の方法。
【請求項２２】
前記マーカーが、膵臓−十二指腸ホメオボックス因子−１（ＰＤＸ１）、ホメオボックスＡ１３（ＨＯＸＡ１３）及びホメオボックスＣ６（ＨＯＸＣ６）から成る群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項２３】
前記マーカーが、アルブミン、プロスペロ関連ホメオボックス１（ＰＲＯＸ１）及び肝細胞特異的抗原（ＨＳＡ）から成る群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項２４】
前記マーカーが、ビリン及びコーダル型ホメオボックス転写因子２（ＣＤＸ２）から成る群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項２５】
前記マーカーが、甲状腺転写因子１（ＴＩＴＦ１）である、請求項１に記載の方法。
【請求項２６】
前記分化因子が前腸分化因子を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項２７】
前記分化因子が小分子を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項２８】
前記分化因子がレチノイドを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項２９】
前記分化因子がレチノイン酸を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３０】
前記分化因子がポリペプチドを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３１】
前記分化因子が成長因子を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３２】
前記分化因子がＦＧＦ−１０を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３３】
前記分化因子がＦＧＦ−２を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３４】
前記分化因子がＷｎｔ３Ｂを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３５】
前記分化因子が前腸分化因子ではない、請求項１に記載の方法。
【請求項３６】
前記分化因子がレチノイドではない、請求項１に記載の方法。
【請求項３７】
前記分化因子がレチノイン酸ではない、請求項１に記載の方法。
【請求項３８】
前記分化因子が、約０．１ｎｇ／ｍｌ〜約１０ｍｇ／ｍｌの濃度で前記細胞集団へ供給される、請求項１に記載の方法。
【請求項３９】
前記分化因子が、約１ｎｇ／ｍｌ〜約１ｍｇ／ｍｌの濃度で前記細胞集団へ供給される、請求項１に記載の方法。
【請求項４０】
前記分化因子が、約１０ｎｇ／ｍｌ〜約１００μｇ／ｍｌの濃度で前記細胞集団へ供給される、請求項１に記載の方法。
【請求項４１】
前記分化因子が、約１００ｎｇ／ｍｌ〜約１０μｇ／ｍｌの濃度で前記細胞集団へ供給される、請求項１に記載の方法。
【請求項４２】
前記分化因子が、約１μｇ／ｍｌの濃度で前記細胞集団へ供給される、請求項１に記載の方法。
【請求項４３】
前記分化因子が、約１００ｎｇ／ｍｌの濃度で前記細胞集団へ供給される、請求項１に記載の方法。

【図１】

【図２】

【図３】

【図４】

【図５】

【図６】

【図７】

【図８】

【図９】

【図１０】

【図１１】

【図１２】

【図１３】

【図１４】

【図１５】

【図１６】

【図１７】

【図１８】

【図１９】

【図２０】

【図２１】

【図２２】

【図２３】

【図２４】

【図２５】

【図２６】

【図２７】

【図２８】

【図２９】

【図３０】

【図３１】

【図３２】

【図３３】

【図３４−１】

【図３４−２】

【図３４−３】

【図３５】

【図３６】

【図３７】

【図３８】

【図３９】

【図４０】

【図４１】

【図４２】

【図４３】

【図４４】

【図４５】

【図４６】

【図４７】

【図４８】

【図４９】

【図５０】

【図５１】

【図５２−１】

【図５２−２】

【公表番号】特表２００８−５０５６３８（Ｐ２００８−５０５６３８Ａ）
【公表日】平成２０年２月２８日（２００８．２．２８）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００７−５２０３４０（Ｐ２００７−５２０３４０）
【出願日】平成１７年６月２３日（２００５．６．２３）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００５／０２２６０４
【国際公開番号】ＷＯ２００６／０１６９９９
【国際公開日】平成１８年２月１６日（２００６．２．１６）
【出願人】（５０３４３１７９２）サイセラ，インコーポレイテッド (9)
【Ｆターム（参考）】