葉酸含有組成物及び葉酸の安定化方法
【課題】ビタミンＢ群に属する葉酸は、様々な有益な作用を有するが、光等に対して極めて不安定であり、長期保存が困難である。したがって、本発明の課題は、葉酸の安定化である。
【解決手段】葉酸を安定化させるのに十分な量のポリフェノール、具体的には葉酸１モルに対して０．０５モル以上のポリフェノール類、好適にはエピガロカテキンガレート、エピカテキンガレート、エピガロカテキン及びエピカテキンから選ばれる１種以上のカテキン類を共存させる。
【解決手段】葉酸を安定化させるのに十分な量のポリフェノール、具体的には葉酸１モルに対して０．０５モル以上のポリフェノール類、好適にはエピガロカテキンガレート、エピカテキンガレート、エピガロカテキン及びエピカテキンから選ばれる１種以上のカテキン類を共存させる。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、安定化された葉酸含有組成物、特に飲料として有益な液体組成物、および葉酸の安定化方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
１．葉酸とは；
葉酸は、ほうれん草から始めて抽出されたビタミンＢ群に属する水溶性ビタミンであり、人参、かぼちゃ等の野菜、アボガド等の果物、豆類、牛乳、黄卵、レバー、などに多く含まれている。
葉酸が、赤血球の産生やタンパク質の代謝あるいは核酸（ＤＮＡやＲＮＡ）の産生に重要なかかわりを有し、体細胞の分化・増殖に不可欠であり、また糖やアミノ酸消費にも不可欠であるなど、多くの有益な作用を有することは既によく知られている。
更に詳しくは、例えば、葉酸の作用の１つとして、細胞の中でホモシステインがたんぱく質の合成に必要なメチオニンに変換される反応を助ける働きをすることが知られている。
また、葉酸は、上記のとおり、細胞の分化・増殖やＤＮＡ合成に不可欠なものであって、特に胎児の細胞増殖が盛んな妊娠初期は、大変重要である。近年では、受胎前後に十分量の葉酸を摂取することで二分脊椎や無脳症などの神経管閉鎖障害のリスクが低減できることが多くの研究から明らかになってきており、厚生労働省では一般成人で２４０μｇ／日、妊婦で４４０μｇ／日の葉酸を摂ることを推奨している。
【０００３】
また、葉酸は、ビタミンＢ１２と協働してヘモグロビンの合成を助け赤血球を作る作用を有する。したがって、葉酸とビタミンＢ１２からなる組成物は造血剤として有用である。さらに、同じく赤血球の産生に不可欠なビタミンＢ６が適切に吸収されるためにはビタミンＢ１２が必要なことから、赤血球の造血のためにはビタミンＢ１２、ビタミンＢ６及び葉酸の組み合わせが重要な意味を持っている。また、亜鉛が葉酸の吸収を促進する作用を有することから、葉酸組成物に加えて亜鉛を配合することは更に有効である。
【０００４】
葉酸に関しては、少なくとも適度に高い血中濃度のホモシステインと少なくとも適度に低い血中濃度の葉酸塩およびビタミンＢ12を有する閉塞性血管病またはアルツハイマー病の患者に対して、葉酸、葉酸塩またはその誘導体、および必要に応じてビタミンＢ12、および必要に応じて有機ニトレート（たとえばイソソルビドモノニトレートもしくはジニトレート）、またはＡＣＥ抑制剤もしくはアンギオテンシンIIアンタゴニスト、あるいはＮＥＰ／ＡＣＥ抑制剤またはこれらの２種以上の混合物を投与することからなる、閉塞性血管病またはアルツハイマー病の処置法も報告されている。したがって、葉酸とビタミンＢ12からなる医薬組成物は、上記のごとき赤血球増多作用があるのみならず、閉塞性血管病またはアルツハイマー病の治療薬としても有効である。（例えば、特許文献１参照。）
このように、胎児から高齢者に至るまで、葉酸は人体にとって重要な栄養素であり、近年葉酸摂取の必要性が益々高まっている。
【０００５】
２．葉酸化合物；
「葉酸」とは、狭義にはプロテイルモノグルタミン酸（合成葉酸）を指すが、広義には、補酵素型、すなわち還元型、一炭素単位置換型およびこれらのポリグルタミン酸の総称である。合成品（食品添加物）の葉酸は食物由来の葉酸に比べ、生体内の利用率が高いといわれている。これら合成品（食品添加物）は、ＢＡＳＦ武田ビタミン株式会社及びディー・エス・エムジャパン株式会社等から入手できる。また、食物由来の場合は、緑茶、烏龍茶、紅茶等の茶類、大豆、ソラマメ等の豆類、からし菜、ほうれん草、みずかけ菜、なば菜、グリーンアスパラガス、春菊、サツマイモ、ブロッコリー、チンゲン菜等の野菜、いちご、パパイヤ、オレンジ、ミカン等の果物類から定法に従って抽出したものが使用可能である。これら植物からの葉酸抽出は、茶葉の場合は、温水乃至熱湯で抽出することによって、豆類、野菜類、果物類の場合は、搾汁液から不溶性画分を除き、抽出液を回収することによって達成される。
【０００６】
３．葉酸化合物の化学構造；
葉酸化合物は、下記プテリン構造を有するものである。
【０００７】
【化１】
【０００８】
より詳しくは、葉酸は下記式で表される。
【０００９】
【化２】
【００１０】
上記において、グルタミン酸残基の不斉α−Ｃ原子がＳ−立体配置（αＳ）で存在するかまたはＲ−立体配置（αＲ）で存在し得る。葉酸エステルおよびその他の誘導体についても同様のことが言える。これらは（αＳ）−葉酸エステルおよび（αＲ）−葉酸エステルと呼ぶ。天然に産する葉酸 は（αＳ）−葉酸に相当する。
【００１１】
還元型のテトラヒドロ葉酸は下記式で表される。
【００１２】
【化３】
【００１３】
この場合グルタミン酸残基の不斉α−炭素原子がＳ−立体配置（αＳ）で存在するかまたはＲ−立体配置（αＲ）で存在し、そしてテトラヒドロプテリン残基中の６位の不斉炭素原子がＲ−立体配置（６Ｒ）で存在するかまたはＳ−立体配置（６Ｓ）で存在し得る。テトラヒドロ葉酸のジアステレオマーは（６Ｓ，αＳ）−、（６Ｓ，αＲ）−、（６Ｒ，αＳ）−および（６Ｒ，αＲ）−テトラヒドロ葉酸と呼ぶことができる。テトラヒドロ葉酸エステルおよびその他誘導体についても同様なことが言える。これらは（６Ｓ，αＳ）−、（６Ｓ，αＲ）−、（６Ｒ，αＳ）−および（６Ｒ，αＲ）−テトラヒドロ葉酸エステルと称することができる。天然に産するテトラヒドロ葉酸は（６Ｓ，αＳ）−テトラヒドロ葉酸に相当する。（例えば、特許文献２参照。）
【００１４】
その他、還元型葉酸の１つとして７，８−ジヒドロ葉酸も知られている。
また、５位及び／又は１０位が置換された葉酸も知られている。例えば、５−メチルテトラヒドロ葉酸
、５，１０−メチレンテトラヒドロ葉酸、５−ホルミルテトラヒドロ葉酸、５−ホルムイミノテトラヒドロ葉酸、１０−ホルミルテトラヒドロ葉酸、５，１０−メテニルテトラヒドロ葉酸等である。
また、還元型葉酸のあるものは、重合型のポリグルタミル葉酸（２から８グルタミン酸残基を有する。例えば、ジグルタミル葉酸、トリグルタミル葉酸、テトラグルタミル葉酸、ペンタグルタミル葉酸およびヘキサグルタミル葉酸等）としても知られている。
重合型のポリグルタミル葉酸の化学構造式は下記のとおりである。
【００１５】
【化４】
【００１６】
ここで、ｎは１乃至７の整数であり、５位及び１０位の窒素原子はメチル基、ホルミル基、ホルムイミノ基で置換されてもよく、あるいは５位、１０位が互いにメチレン基、メテニル基によって結合されて環を形成してもよい。
【００１７】
４．他のビタミンＢ類（ビタミンＢ12、ビタミンＢ６）；
上記葉酸は、ビタミンB6, B12, C がなくては十分にその効果を発揮しないとの報告もなされている。
また、これらビタミンＢ12やビタミンＢ６についても、様々な有益な作用を有することが知られている。
例えば、ビタミンＢ12は、水溶性であり、コバルトと結合されることによってその効果を発揮し、赤血球を形成乃至再生して貧血を防ぎ、成長を促進し、脂肪、炭水化物、たんぱく質の使用を適切にコントロールし、刺激に対する過敏な反応を抑制し、また集中力、記憶力を高め、精神を安定させる作用を有する。したがって、ビタミンＢ12が欠乏すると悪性貧血、神経障害を引き起こす。ビタミンＢ12も、葉酸と同様、光や酸、アルカリに対して不安定である。
ビタミンＢ６は、ピリドキシンとも呼ばれる水溶性のビタミンであり、摂取後８時間以内に排泄されることから毎日補給する必要がある。ビタミンＢ６は、ビタミンＢ12の存在下に適切に吸収され、抗体や赤血球の産生あるいは胃酸分泌に不可欠であり、たんぱく質と脂肪の適切な吸収を助け、必須アミノ酸のトリプトファンがビタミンＢ３（ナイアシン）に転換するのを助け、神経や皮膚のさまざまな障害の予防し、抗老化の核酸の正常な合成を促進する作用を有する。したがって、ビタミンＢ６が欠乏すると、貧血、脂漏性皮膚炎、舌炎の原因ともなる。しかしながら、ビタミンＢ６も、他のビタミンＢと同様、必ずしも安定ではなく長期保存が困難である等の問題を抱えている。
【００１８】
５．葉酸の安定性；
上記のとおり、近年、葉酸摂取の必要性が益々高まっているが、残念ながら葉酸は、必ずしも安定な化合物ではない。これら葉酸化合物が安定に存在し得るのは弱酸性から中性領域の限られた領域である。したがって、強酸性下では、葉酸は安定に存在することが不可能となる。また、葉酸は光によっても分解するので、ＰＥＴボトル飲料に適用するにあたっても問題があった。
このように天然物由来の葉酸等のビタミン類は、非常に不安定であって、酸のみならず、経時的に酸素、熱、光などにより分解し、ｐ−アミノ安息香酸、その他複雑な化合物を生じ、経時と共に葉酸量は低下してしまう傾向にあることが知られている。それ故、市販されている缶容器、紙容器、特にペットボトルなどの飲料においては、実際飲用する際には葉酸が必要摂取量をかなり下回る量しか含有していない場合がほとんどである。
【００１９】
６．葉酸の安定化；
これら問題を解決する方法として、例えば、酸に対する葉酸の安定化方法として、エリスリトール及び／又はトレハロースを配合する方法が提案されている。（例えば、特許文献３参照。）。
また、（６Ｒ）−、（６Ｓ）−又は（６Ｒ，Ｓ）−５，１０−メチレンテトラヒドロ葉酸及びその塩の安定化方法として、それら葉酸水性溶液に、α− 、β−又はγ−シクロデキストリン又はα−、β−
又はγ−シクロデキストリンの誘導体を添加して安定化する方法も提案されている。（例えば、特許文献４参照。）
また、５，６，７，８−テトラヒドロ葉酸およびその誘導体の安定化法方法として、これら化合物の粉末を、不活性ガスの存在下脱酸素剤を共存させて、外気遮断して低温保存することによる安定化方法も提案されている。（例えば、特許文献５参照。）
しかしながら、これら安定化方法は、葉酸の安定化という観点においては目的を達成し得るものの、サイクロデキストリン等の配合剤はあくまで安定化のための第３成分以上の役割を演じるものではなかった。
【特許文献１】特表２００１−５０４１０４号公報
【特許文献２】特表２００３−５０４３７０号公報
【特許文献３】特開２００２−０９７１４１号公報
【特許文献４】特開平０７−０１８０８４号公報
【特許文献５】特開平０６−０６５２４３号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００２０】
本発明の目的は、単なる葉酸の安定化に止まらず、薬学的に有効な第３成分を用いることによってこれら葉酸を安定化することであり、他の目的は薬学的に有効な第３成分を含む安定化されたビタミンＢ類含有組成物、特に葉酸含有組成物を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００２１】
本発明者らは、上記課題を解決するために鋭意研究を重ねた結果、本発明を完成するに到った。より詳しくは、本発明者らは、既に、多年にわたって食用に供され、人体に対する安全性が確認されている食品素材を調べ、ビタミンＢ類、特に葉酸の安定化成分として利用価値のあるものを検討した。その結果、ポリフェノール類化合物にビタミンＢ類、特に葉酸に対する強い安定化作用、特に水溶液中における葉酸等の光に対する安定化作用を有することを見出して本発明に至ったものである。
より具体的には、本発明は以下のとおりである。
【００２２】
１．葉酸を安定化させるのに十分な量のポリフェノール類を含んでなる安定化された葉酸含有組成物。
２．飲料組成物である上記１に記載の葉酸含有組成物。
３．葉酸濃度が２４μｇ／５００ｍＬ乃至４，８００μｇ／５００ｍＬである上記２に記載の葉酸含有組成物。
４．葉酸１モルに対して０．０５モル以上のポリフェノール類を含有してなる上記１乃至３に記載の葉酸含有組成物。
５．葉酸濃度が２４μｇ／５００ｍＬ乃至４，８００μｇ／５００ｍＬであり、ポリフェノール類含量が１００μｇ／５００ｍＬ乃至１，０００ｍｇ／５００ｍＬであり、かつ葉酸１モルに対して０．０５モル以上のポリフェノール類を含有してなる上記３に記載の葉酸含有組成物。
６．葉酸濃度が２００μｇ／５００ｍＬ乃至４，８００μｇ／５００ｍＬである上記５に記載の葉酸含有組成物。
７．さらに葉酸１重量部に対して０．００５乃至０．０５重量倍量のビタミンＢ12、３乃至１０重量倍量のビタミンＢ６及び１０乃至５０重量倍量の亜鉛から選ばれる少なくとも１種を含有する上記１乃至６に記載の葉酸含有組成物。
８．葉酸が、葉酸、ジヒドロ葉酸、テトラヒドロ葉酸及びその誘導体、重合型のポリグルタメート及びその誘導体、そのエステル体及びその塩から選ばれる１種以上の葉酸である上記１乃至７に記載の葉酸含有組成物。
９．ポリフェノール類が、茶由来のエピガロカテキンガレート、エピカテキンガレート、エピガロカテキン及びエピカテキンから選ばれる１種以上のカテキン類である上記１乃至８に記載の葉酸含有組成物。
１０．ポリフェノール類が、エピカテキンガレートである上記９に記載の葉酸含有組成物。
１１．葉酸と、該葉酸を安定化させるのに十分な量のポリフェノール類とを配合することを特徴とする葉酸含有組成物の安定化方法。
１２．ポリフェノール類含量が、葉酸１モルに対して０．０５モル以上である上記１１に記載の葉酸含有組成物の安定化方法。
【発明の効果】
【００２３】
本発明は、安定化剤としてポリフェノール類化合物を用いることにより、葉酸を安定化し得たものであり、ポリフェノール類自体の効能・効果、薬効を併せて期待することができる。また、ポリフェノール類は、緑茶等に含まれるものであり安全性も確認されていることから、長期に摂取した場合においても何ら問題がない。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２４】
以下に、本発明の実施の態様について説明する。
本明細書において使用する用語の意味は以下のとおりである。
【００２５】
「安定化された葉酸含有組成物」とは、葉酸が安定した状態で存在し得る葉酸含有組成物を意味し、形態的には、飲料や食品に添加するための葉酸及びポリフェノール類を含有してなる配合用原体としての固体組成物（粉末、錠剤等）、これら固体粉末組成物を飲料用原液に加えてなる飲料等の液体組成物、あるいはこれら固体粉末組成物をガムや飴等の食品に加えてなるガムや飴等の固形組成物として存在し得る。用途面から見た場合、該組成物は、医薬組成物；医薬部外品組成物；薬理効果を備えたいわゆる健康食品（サプリメント）；飲料や食品に添加するための配合用組成物（食品添加物）；該配合用組成物を添加して飲料とした飲料組成物；又は該配合用組成物を添加して食品とした食品組成物（栄養機能食品、特定保健用食品、機能性食品。）等に区分することができる。
【００２６】
医薬組成物、医薬部外品組成物、薬理効果を備えたいわゆる健康食品（サプリメント）とする場合は、結合剤等の配合剤を適宜加えることによって、定法に従って、タブレット、カプセル、顆粒等の形態とすることにより、より一層摂取し易くすることができる。
配合用組成物として使用する場合は、粉末状の原体のままでもよいし、これを定法に従ってタブレット、カプセル、顆粒等の形態に加工して用いてもよい。
【００２７】
飲料組成物は、好ましくは容器詰飲料組成物であり、例えば、緑茶、ウーロン茶、紅茶等の茶飲料；リンゴジュース、グレープフルーツジュース、オレンジジュース等のジュース類；果汁配合飲料；野菜汁配合飲料；コーヒー飲料；ココア飲料；牛乳等の乳飲料；コーラ、サイダー等の炭酸飲料；スポーツ飲料；豆乳；ミネラルウォーター；ニアウォーター飲料；ダイエットサポート飲料；栄養補給飲料等である。また、ビール、発泡酒、ワイン、日本酒等のアルコール飲料であってもよい。これら飲料用組成物は、緑茶、ウーロン茶、紅茶等の茶飲料乃至その原材料（例えば、茶抽出液）に、上記配合用組成物を適量配合することによって製造することができる。茶飲料の場合は、茶飲料それ自体にカテキン等のポリフェノール類が含有されているので、結果的に葉酸を安定化されうる範囲で適量配合することによっても製造することができる。
【００２８】
食品組成物は、上記配合用組成物を原材料に適量配合して定法に従って加工することによって得られる菓子、パン、ヨーグルト、ゼリー、冷菓、キャンデイ、ガム等である。
【００２９】
上記「安定化された葉酸含有組成物」は、好ましくは、ジュース類；果汁配合飲料；野菜汁配合飲料；乳飲料；茶飲料等の飲料組成物である。
【００３０】
また、上記「飲料組成物」は、葉酸、ポリフェノール類化合物に併せて、食品添加物として使用可能な各種の甘味料、酸味料、無機酸塩、無機酸塩類、有機酸、栄養強化剤、酸化防止剤、香料、色素類、乳化剤、保存料、調味料、脂質類、タンパク質類、ペプチド類、多糖類、食物繊維類、果汁エキス類、野菜エキス類、花蜜エキス類、pH調整剤等を単独或いは併用して配合してもよい。
甘味料としては、例えば、砂糖、ブドウ糖、果糖、異性化液糖、グリチルリチン、ステビア、アスパルテーム、フラクトオリゴ糖、環状オリゴ糖、人工甘味料等が挙げられる。
酸味料としては、天然成分から抽出した果汁類の他、クエン酸、酒石酸、リンゴ酸、乳酸、フマル酸、リン酸が挙げられる。
無機酸類、無機酸塩類としては、リン酸、リン酸二ナトリウム、メタリン酸ナトリウム、ポリリン酸ナトリウム等が挙げられる。有機酸類、有機酸塩類としてはクエン酸、コハク酸、イタコン酸、リンゴ酸、クエン酸ナトリウム等が挙げられる。
また、栄養強化剤として、β−カロテン、ビタミンＡ、葉酸以外の他のビタミンＢ類（例えば、ビタミンＢ1、ビタミンＢ2、ナイアシン、パントテン酸等）、ビオチン、ビタミンC、ビタミンD、ビタミンＥ、コエンザイムQ10、α-リポ酸、カルニチン、カルシウム、鉄、マグネシウム、亜鉛、銅等が挙げられる。
容器詰飲料に使用される容器は、一般の飲料と同様に、ポリエチレンテレフタレートを主成分とする成形容器（いわゆるＰＥＴボトル）、金属管、金属箔やプラスチックフィルムと複合された紙容器、瓶等の通常の形態で提供することができる。好ましくはＰＥＴボトルである。また、ここでいう容器詰飲料とは希釈せずに飲用できるものをいう。
【００３１】
「葉酸」とは、上記した葉酸；テトラヒドロ葉酸、ジヒドロ葉酸；５位及び／又は１０位が置換された置換テトラヒドロ葉酸；及び、重合型のポリグルタメート（２から８のグルタミン酸残基を有する）を意味する。具体例としては、葉酸、７，８−ジヒドロ葉酸、５，６，７，８−テトラヒドロ葉酸、５−メチルテトラヒドロ葉酸、５，１０−メチレンテトラヒドロ葉酸、５，１０−メテニルテトラヒドロ葉酸、５，１０−ホルムイミノテトラヒドロ葉酸、５−ホルミルテトラヒドロ葉酸（ロイコボリン）、５−ホルミルイミノテトラヒドロ葉酸、１０−ホルミルテトラヒドロ葉酸、重合型のポリグルタミル葉酸（２から８のグルタミン酸残基を有する）、それらのエステル体、及びそれらの塩、それらの混合物を挙げることができる。
重合型のポリグルタミル葉酸としては、例えば、５−ホルムイミノ−（６Ｓ）−テトラヒドロ葉酸等のテトラヒドロ葉酸のジグルタミル、トリグルタミル、テトラグルタミル、ペンタグルタミルおよびヘキサグルタミル誘導体等を挙げることができる。
また、特に限定のない限り、用語「葉酸」は 、両方のエナンチオマー（αＳ）および（αＲ）を包含し、そしてテトラヒドロ葉酸については、そのジアステレオマー（（６Ｓ，αＳ）、（６Ｓ，αＲ）、（６Ｒ，αＳ）および（６Ｒ，αＲ））を包含する。
テトラヒドロ葉酸誘導体、重合型のポリグルタミル葉酸誘導体における誘導体とは、５位及び／又は１０位における置換体を意味する。
本発明において、好ましい葉酸は、生体内の利用効率及び含有量のコントロールの観点からすると上記合成品（食品添加物）に分類される葉酸であり、具体的には、ＢＡＳＦ武田ビタミン株式会社製、ディー・エス・エムジャパン株式会社等から入手できる。化学構造面からすると、特に好ましいのはプテロイルモノグルタミン酸である。また、天然物由来の場合は、緑茶、烏龍茶、紅茶等の茶類、大豆、ソラマメ等の豆類、からし菜、ほうれん草、みずかけ菜、なば菜、グリーンアスパラガス、春菊、サツマイモ、ブロッコリー、チンゲン菜等の野菜、いちご、パパイヤ、オレンジ、ミカン等の果物類から得られるもの（抽出されるもの）が使用可能である。これら食物から葉酸を抽出する方法は、茶葉の場合は温水乃至熱湯で抽出する方法、豆類、野菜類、果物類の場合は搾汁液から不溶性画分を除き、抽出液を回収する方法等、公知の一般的な方法を採用することができる。場合によっては、抽出することなくジュース等としてそのまま使用することも可能である。
【００３２】
「ポリフェノール類」とは、水酸基を複数有するフェノール構造を有する一連の化合物を意味し、例えば、フラボン、フラボノール、フラバノン、フラバノール、アントシアニジン、イソフラボンを挙げることができる。具体的には、上記フラボンとしては、ルチン、ルテオリン等を、フラボノールとしてはケルセチン、ケンフェロール等を、フラバノンとしてはヘスペリジン、ナリンジン等を、フラバノールとしてはカテキン類等を、アントシアニジンとしてはシアニジン等を、イソフラボンとしてはゲニステイン、ゲニスチン、ダイゼイン等を挙げることができ、カテキン類としては、エピカテキン、エピガロカテキン、エピカテキンガレート、エピガロカテキンガレート、カテキン、ガロカテキン、カテキンガレート、ガロカテキンガレートを挙げることができる。
その他、クロロゲン酸類、プロトアントシアニジン類、テアフラビン類、テアルビジン類等を挙げることができる。
好ましいポリフェノール類化合物は、カテキン類であり、特に好ましくは茶由来のエピガロカテキンガレート、エピカテキンガレート、エピガロカテキンまたはエピカテキンであり、さらに好ましくはエピカテキンガレートである。
上記ポリフェノール類の由来は特に限定されるものではないが、中でも、茶、コーヒー、ココア、ワイン、ブドウ、リンゴ、ベリー類、チェリー、レモン、オレンジ、シークワーシャー、グレープフルーツ、メロン、タマネギ、ブロッコリー、ホウレンソウ、ニンジン、セロリ、ナス、ニンニク、キャベツ、メキャベツ、キュウリ、ソバ、玄米、大豆、小豆、大麦、バジル、タラゴン、ハッカ、オレガノ、タイム、セージ、ローズマリーおよびそれらの混合物に由来するもの、特に茶に由来するものは、飲料としての応用も容易であり、好適である。特に、茶に含まれるカテキン類は、水溶性に優れ、日常的に飲用される嗜好飲料としての実績からより好ましい。
これら植物原料からポリフェノール類を抽出する方法は、水乃至熱湯で抽出し、残渣をろ過する方法、あるいは搾汁液から不溶性物を取り除く方法等、公知乃至周知の一般的な方法を採用することができる。
【００３３】
「ビタミンＢ12」、「ビタミンＢ６」とは、特に限定されるものではなく、工業的に生産された市販品であっても、あるいは食物中に含まれる「ビタミンＢ12」、「ビタミンＢ６」それ自体であってもよい。
【００３４】
「亜鉛」とは、食品として、又は医薬品として使用できる亜鉛類、特に体内吸収性を有する亜鉛類であればよく、特に制限されるものでない。
【００３５】
次に、葉酸及びポリフェノール類の配合量について述べる。
厚生労働省の発表した食事摂取基準（２００５年版）によれば葉酸の１日の摂取推奨量は、体重、年令、健康、性別その他の因子に応じて異なるが、成人で２４０μｇ／日、妊婦で４４０μｇ／日である。
日常的な飲食物から摂取される葉酸の量を考慮すると本発明組成物中に包含される葉酸の最低含量は上記推奨量の約１／１０、即ち２４μｇ／日であり、また、過剰に摂取された葉酸は体外に排出されて無害であること、生体内での利用率が５０％と見積られる（葉酸は、小腸で消化酵素によって分解されて体内に吸収されるが、吸収・代謝過程で様々な段階を経ることにより生体内での利用率は５０％と見積られる。）こと等を考えるとその最高含量は成人推奨量の約２０倍、即ち４，８００μｇとすることができる。
この観点から、本発明の葉酸含有組成物からの適正な葉酸摂取量は、２４μｇ／日乃至４，８００μｇ／日であり、好ましく１００μｇ／日乃至４，８００μｇ／日、特に好ましくは２００μｇ／日乃至４，８００μｇ／日を目安とすることができる。
具体的には、飲料組成物である場合には、１日１本乃至２本を飲用するとして、２４μｇ／５００ｍＬ乃至４，８００μｇ／５００ｍＬ、好ましくは１００μｇ／５００ｍＬ乃至４，８００μｇ／５００ｍＬ、特に好ましくは２００μｇ／５００ｍＬ乃至４，８００μｇ／５００ｍＬである。PETボトル飲料の場合は、日光に曝される可能性が高いので、さらに高濃度の３００μｇ／５００ｍＬ乃至４，８００μｇ／５００ｍＬが好ましい。
医薬組成物、サプリメント、食品組成物の場合も、上記１日あたりの推奨量に基づいて適宜その含有量を決定すればよい。
なお、本発明のうち葉酸含有組成物の発明にあっては、葉酸に対するポリフェノール類の含量は安定化の観点からして重要であるが、葉酸それ自体の含有量は単に上記推奨量に基づいて適宜決定することができる。
【００３６】
「葉酸を安定化させるのに十分な量のポリフェノール類」等における「安定化」とは、２０℃、５，０００ルクスの蛍光灯（人工気象器）下に置いた場合に、少なくとも葉酸に対する安定化効果が見出せることを意味し、好ましくは、当該条件下に１週間置いた場合に、葉酸の存存率が少なくとも５０％以上、特に好ましくは７０％以上であることを意味する。
【００３７】
本発明の組成物に配合すべきポリフェノール類配合の下限値は葉酸の安定化に必要な最低量を意味し、その最低配合量（共存量）は、後述の実施例から明らかなとおり、葉酸に対しモル比で０．０５倍（ＥＣＧの場合、重量比で０．０５倍）、好ましくは葉酸に対しモル比で０．１倍（ＥＣＧの場合、重量比で０．１倍）である。一方、カテキン類等のポリフェノール類は無毒であり体脂肪低減等の効果があるものの、不必要に過剰に添加した場合には、カテキン類特有の苦渋味等の問題が発生することから、ポリフェノール類の含量は、１００ｍｇ／日乃至１，０００ｍｇ／日（飲料においては、１００ｍｇ／５００ｍＬ乃至１，０００ｍｇ／５００ｍＬ）とするのが好ましい。
例えば、葉酸が１００μｇ／日乃至４，８００μｇ／日（１００μｇ／５００ｍＬ乃至４，８００μｇ／５００ｍＬ）の場合、その安定化に必要なポリフェノール量の最低量は、ＥＣＧで０．０５倍の５μｇ／日乃至２４０μｇ／日（飲料の場合は、５μｇ／５００ｍＬ乃至２４０μｇ／５００ｍＬ）であり、好ましくは、その０．１倍量の１０μｇ／日乃至４８０μｇ／日（１０μｇ／５００ｍＬ乃至４８０μｇ／５００ｍＬ）である。
しなしながら、必要なポリフェノールを十分に摂取するという観点からすると、ポリフェノール含量は、１００ｍｇ／日乃至１，０００ｍｇ／日（飲料の場合は、１００ｍｇ／５００ｍＬ乃至１０００ｍｇ／５００ｍＬ）とするのが好ましい。このような含量であれば、上記から明らかなとおり、ポリフェノールの摂取も十分であり、かつ、結果的に葉酸も自ずと安定化される。
【００３８】
同じく厚生労働省の食事摂取基準（２００５年版）によれば、「ビタミンＢ12」の１日あたりの推奨量は２．４μｇ／日であり、他方、葉酸の推奨量が２４０μｇ（妊婦で４４０μｇ）であることから、「ビタミンＢ12」を配合する場合は、葉酸に対してその０．００５乃至０．０５重量倍量を配合することが好ましい。好ましくは、１．２μｇ／日乃至１２μｇ／日を目安とすることができる。具体的には、飲料組成物である場合には、１日１本乃至２本を飲用するとして、１．２μｇ／５００ｍＬ乃至１２μｇ／５００ｍＬ、である。
【００３９】
同じく厚生労働省の食事摂取基準（２００５年版）によれば、「ビタミンＢ６」の１日あたりの推奨量は成人男子で１．４ｍｇであり、他方、葉酸の推奨摂取量が２４０μｇ（妊婦で４４０μｇ）であることから、「ビタミンＢ６」を配合する場合は、葉酸に対してその３乃至１０重量倍量を配合することが好ましい。
【００４０】
「亜鉛」の１日あたりの推奨量は成人男子で９ｍｇ、女性７ｍｇであり、他方、葉酸の推奨量が２４０μｇ（妊婦で４４０μｇ）であり、更には本発明組成物においては亜鉛は必須ではなく補助的な役割を担うことから、「亜鉛」を配合する場合は、葉酸に対してその１０乃至５０重量倍量を配合することが好ましい。
【００４１】
本発明の葉酸含有組成物、特に飲料組成物は、遮光条件下での保管を組み合わせることにより、さらに葉酸安定化効果を高めることができる。遮光条件下での保管とは、遮光された箱等に透明または不透明の容器に入れた当該飲料の保管、および遮光性の容器に当該飲料を入れた保管など、飲料そのものに直接光を当てないような保管をいう。ここで、遮光条件とは、可視光の約５０％以上、好ましくは約７０％以上、より好ましくは約９０％以上がカットされる状態をいう。また、特に波長の短い光はエネルギーが高いため、波長約340nm以下の光が約８０％以上、より好ましくは約９０％以上カットされる状態が望ましい。例えば、金属製の缶容器中に充填された場合は、上記遮光条件をほぼ満足する。
【００４２】
本発明に用いられる葉酸は高速液体クロマトグラフィー法、微生物定量法、ELISA法により定量できる。また、本発明に用いられるポリフェノール類は、高速液体クロマトグラフィー法、酒石酸鉄比色法、フォーリンデニス法、フォーリンチオカルト法等により定量できる。
【００４３】
以下、本発明を実施例に基づいて更に詳細に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。
【実施例１】
【００４４】
１．葉酸の経時安定性試験；
２０ｍＬの５０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ６）に葉酸（関東化学株式会社製。分子量４４１）１００μＭ（終濃度）となるように溶解した。この葉酸溶液に、ポリフェノール類化合物として、それぞれエピガロカテキン（ＥＧＣ；分子量３０６）（フナコシ株式会社製）（サンプル１）、エピガロカテキンガレート（ＥＧＣＧ；分子量４５８）（フナコシ株式会社製）（サンプル２）、エピカテキン（ＥＣ；分子量２９０）（フナコシ株式会社製）（サンプル３）およびエピカテキンガレート（ＥＣＧ；分子量４４２）（フナコシ株式会社製）（サンプル４）を１０μＭ（終濃度）添加して、サンプル１〜４とした。これらのサンプルを、２５℃、５，０００ルクスの人工気象器（日本医化機械製作所製）下に置くことにより、葉酸の経時安定性を試験した。
なお、ここでそれぞれの成分の重量換算値は、葉酸；４４．１ｍｇ、ＥＧＣ；３．０６ｍｇ、ＥＧＣＧ；４．５８ｍｇ、ＥＣ２．９ｍｇ、ＥＣＧ；４．４２ｍｇである。
同時に比較例として、葉酸溶液を暗黒下に置いたもの（光照射なし）（サンプル５）、２５℃、５，０００ルクスの人工気象器下に置いたポリフェノール類化合物なしの葉酸溶液（サンプル６）、ビタミンＣ（Ｌ−アスコルビン酸；和光純薬工業株式会社製）を１００μＭ（終濃度）のみ添加した葉酸溶液（サンプル７）も同様に試験した。
サンプルを一定時間置いた後、経時的に葉酸の測定を行った。また、対照として、同濃度のビタミンＣを用いて比較した。
【００４５】
２．葉酸の測定；
葉酸の測定は、紫外部吸収検出器を備えた高速液体クロマトグラフィーを用いて行った。内径４．６ｍｍ、長さ１５０ｍｍで粒子サイズ３μｍのＯＤＳカラム（和光純薬株式会社製）を用い、１２％アセトニトリル（０．０５％リン酸を含む）を流速０．８ｍＬ／分で通液した。サンプルは０．４５μｍのフィルターに通した後、２９０ｎｍでの紫外吸収をモニターリングすることにより葉酸の定量をした。
【００４６】
３．カテキンの測定；
カテキンの測定は電気化学検出器を備えた高速液体クロマトグラフィーを用いて行った。内径４．６ｍｍ、長さ１５０ｍｍで粒子サイズ３μｍのＯＤＳカラム（和光純薬株式会社製）を用い、１２％アセトニトリル（０．０５％リン酸、０．０１％エチレンジアミン四酢酸二ナトリウムを含む）を流速０．８ｍＬ／分で通液した。サンプルは０．４５μｍのフィルターを通した後、印加電圧５００ｍＶでの反応をモニターリングすることにより各カテキンの定量をした。
【００４７】
４．葉酸の経時安定性試験の結果；
上記経時安定性試験における結果（葉酸残存量）を図１に示す。
ポリフェノール類化合物なしの葉酸溶液（サンプル６）中の葉酸は、光照射条件下で1日目において全てが消失した。一方、ビタミンＣのみ添加した葉酸溶液（サンプル７）では、ビタミンＣの添加によって葉酸の劣化はやや抑制されたが、同濃度(１０μＭ)で比較した場合に、ポリフェノール類化合物としてカテキン各種を添加したサンプル１〜４において、より長く葉酸が残存していた。これらのことにより、カテキン等のポリフェノール類の添加により、葉酸の安定性が増加したといえる。
また、葉に含まれるカテキンの種類による葉酸の安定化の違いを検討した結果、葉酸に対して０．１モル倍濃度（ECGの場合、重量比で０．０１倍）でいずれのカテキン類も安定性改善の効果を有していた。また安定化の効果は、ＥＣＧ＞ＥＣ＞ＥＧＣＧ＞ＥＧＣの順に葉酸を安定化させる効果が高いことが分かった。
【実施例２】
【００４８】
１．ポリフェノールの濃度依存性試験
ポリフェノール類化合物としてエピカテキンガレート（ＥＣＧ）の濃度を変化させた場合の濃度依存効果を検討した。結果を図２に示す。
２０ｍＬの５０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ６）に葉酸（和光純薬工業株式会社製）１００μＭ（終濃度。４４．１ｍｇ／Ｌ）となるように溶解した。この葉酸溶液に、ポリフェノール類化合物として、エピカテキンガレート（ＥＣＧ；分子量４４２）（フナコシ株式会社製）を５μＭ（サンプル８。２．２１ｍｇ）、１０μＭ（サンプル９。４．４２ｍｇ）、２０μＭ（サンプル１０。８．８４ｍｇ）（終濃度）添加して、これらサンプルを２５℃、５，０００ルクスの人工気象器（日本医化機械製作所製）下に置くことにより、葉酸の経時安定性を試験した。
同時に比較例として、葉酸溶液を暗黒下に置いたもの（光照射なし）（サンプル１１）も同様に試験した。
サンプルを一定時間置いた後、経時的に葉酸の測定を行った。
その結果、最も濃度の低い５μＭ試験区（モル比で０．０５倍、ECGの場合、重量比で０．０５倍）でも葉酸の安定化効果が観察された。そして、その効果は添加量に依存しており、１０μＭ（モル比で０．１倍、ECGの場合、重量比で約０．１倍。）および２０μＭ、特に葉酸に対してモル比で０．２倍量の２０μＭではより高い葉酸安定化効果が見出された。
【実施例３】
【００４９】
葉酸を含む飲料を調整し、ポリフェノールによる安定化の試験を行った。各サンプルの製造方法は以下の通りである。
【００５０】
実施例Ａ
緑茶抽出物（テアフラン９０Ｓ、株式会社伊藤園製）を１ｇ／Ｌとなるようにイオン交換水に溶解し、葉酸（関東化学株式会社製）を終濃度で２２ｍｇ／Ｌとなるように添加した。この溶液１０ｍＬをネジ付き試験管に入れ、１２１℃、２０分間オートクレーブ処理した。
【００５１】
実施例Ｂ
ウーロン茶葉１００ｇに熱湯１Ｌを加え、１０分間放置後、茶葉を取り除いた。その後、５０００×ｇで２０分、室温で遠心分離を行い、濃縮・乾固した。このウーロン茶エキス末を４ｇ／Ｌとなるようにイオン交換水に溶解し、葉酸とビタミンＣをそれぞれ終濃度で４．４ｍｇ／Ｌ、０．３ｇ／Ｌをとなるように添加した。この溶液１０ｍＬをネジ付き試験管に入れ、１２１℃、２０分間オートクレーブ処理した。
【００５２】
実施例Ｃ
ダッタンソバ実を１００ｇに対し、１．２５Ｌの９５℃の熱水を加え、２０分間抽出した。抽出液を冷却後、そば実とメッシュろ過し、３０００回転で１５分間遠心分離した。このソバ抽出液を濃縮し、凍結乾燥した。このソバエキス末を１ｇ／Ｌとなるようにイオン交換水に懸濁させ、４．４ｍｇ／Ｌとなるように葉酸を添加した。この溶液１０ｍＬをネジ付き試験管に入れ、１２１℃、２０分間オートクレーブ処理した。
【００５３】
実施例Ｄ
麦茶１０ｇに対し、イオン交換水を１Ｌ加え、１０分間煮沸した。この麦茶抽出液に対し、葉酸を３３ｍｇ／Ｌとなるように添加し、この溶液１０ｍＬをネジ付き試験管に入れ、１２１℃、２０分間オートクレーブ処理した。
【００５４】
比較例
イオン交換水に葉酸を４４ｍｇ／Ｌとなるように添加し、１２１℃、２０分間オートクレーブ処理した。調製したサンプルを２５℃、５，０００ルクスの人工気象器に８日間置くことにより、葉酸の経時安定性を試験した。
【００５５】
ポリフェノール類の測定
ポリフェノール類の測定はフォーリンデニス法、高速液体クロマトグラフィー法を用いて行った。フォーリンデニス法は、タンニン酸（ナカライテスク株式会社）を標準物質とした。
【００５６】
結果を表１に示す。
【００５７】
【表１】
【００５８】
（結果）
比較例は、葉酸残存率が０になった一方で、実施例Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄの葉酸含有飲料は、それぞれ約７０％、７０％、８５％、５５％であり、特に実施例Ａ、Ｂ、Ｃでは約７０％、８５％の残存率という高い葉酸残存率を維持した。
【産業上の利用可能性】
【００５９】
本発明によれば、ポリフェノール類、特にカテキン類を共存させることにより葉酸を安定的に保持することができる。したがって、店頭等において照射条件下に曝されるＰＥＴボトル詰め葉酸含有飲料において効果的に適用できる。
【図面の簡単な説明】
【００６０】
【図１】ポリフェノール類化合物として各種カテキンを添加した場合の葉酸残存率を示すグラフである。（実施例１）
【図２】ポリフェノール類化合物としてエピカテキンガレートを添加した場合の、エピカテキンガレート濃度と葉酸残存率との関係を示すグラフである。（実施例２）
【技術分野】
【０００１】
本発明は、安定化された葉酸含有組成物、特に飲料として有益な液体組成物、および葉酸の安定化方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
１．葉酸とは；
葉酸は、ほうれん草から始めて抽出されたビタミンＢ群に属する水溶性ビタミンであり、人参、かぼちゃ等の野菜、アボガド等の果物、豆類、牛乳、黄卵、レバー、などに多く含まれている。
葉酸が、赤血球の産生やタンパク質の代謝あるいは核酸（ＤＮＡやＲＮＡ）の産生に重要なかかわりを有し、体細胞の分化・増殖に不可欠であり、また糖やアミノ酸消費にも不可欠であるなど、多くの有益な作用を有することは既によく知られている。
更に詳しくは、例えば、葉酸の作用の１つとして、細胞の中でホモシステインがたんぱく質の合成に必要なメチオニンに変換される反応を助ける働きをすることが知られている。
また、葉酸は、上記のとおり、細胞の分化・増殖やＤＮＡ合成に不可欠なものであって、特に胎児の細胞増殖が盛んな妊娠初期は、大変重要である。近年では、受胎前後に十分量の葉酸を摂取することで二分脊椎や無脳症などの神経管閉鎖障害のリスクが低減できることが多くの研究から明らかになってきており、厚生労働省では一般成人で２４０μｇ／日、妊婦で４４０μｇ／日の葉酸を摂ることを推奨している。
【０００３】
また、葉酸は、ビタミンＢ１２と協働してヘモグロビンの合成を助け赤血球を作る作用を有する。したがって、葉酸とビタミンＢ１２からなる組成物は造血剤として有用である。さらに、同じく赤血球の産生に不可欠なビタミンＢ６が適切に吸収されるためにはビタミンＢ１２が必要なことから、赤血球の造血のためにはビタミンＢ１２、ビタミンＢ６及び葉酸の組み合わせが重要な意味を持っている。また、亜鉛が葉酸の吸収を促進する作用を有することから、葉酸組成物に加えて亜鉛を配合することは更に有効である。
【０００４】
葉酸に関しては、少なくとも適度に高い血中濃度のホモシステインと少なくとも適度に低い血中濃度の葉酸塩およびビタミンＢ12を有する閉塞性血管病またはアルツハイマー病の患者に対して、葉酸、葉酸塩またはその誘導体、および必要に応じてビタミンＢ12、および必要に応じて有機ニトレート（たとえばイソソルビドモノニトレートもしくはジニトレート）、またはＡＣＥ抑制剤もしくはアンギオテンシンIIアンタゴニスト、あるいはＮＥＰ／ＡＣＥ抑制剤またはこれらの２種以上の混合物を投与することからなる、閉塞性血管病またはアルツハイマー病の処置法も報告されている。したがって、葉酸とビタミンＢ12からなる医薬組成物は、上記のごとき赤血球増多作用があるのみならず、閉塞性血管病またはアルツハイマー病の治療薬としても有効である。（例えば、特許文献１参照。）
このように、胎児から高齢者に至るまで、葉酸は人体にとって重要な栄養素であり、近年葉酸摂取の必要性が益々高まっている。
【０００５】
２．葉酸化合物；
「葉酸」とは、狭義にはプロテイルモノグルタミン酸（合成葉酸）を指すが、広義には、補酵素型、すなわち還元型、一炭素単位置換型およびこれらのポリグルタミン酸の総称である。合成品（食品添加物）の葉酸は食物由来の葉酸に比べ、生体内の利用率が高いといわれている。これら合成品（食品添加物）は、ＢＡＳＦ武田ビタミン株式会社及びディー・エス・エムジャパン株式会社等から入手できる。また、食物由来の場合は、緑茶、烏龍茶、紅茶等の茶類、大豆、ソラマメ等の豆類、からし菜、ほうれん草、みずかけ菜、なば菜、グリーンアスパラガス、春菊、サツマイモ、ブロッコリー、チンゲン菜等の野菜、いちご、パパイヤ、オレンジ、ミカン等の果物類から定法に従って抽出したものが使用可能である。これら植物からの葉酸抽出は、茶葉の場合は、温水乃至熱湯で抽出することによって、豆類、野菜類、果物類の場合は、搾汁液から不溶性画分を除き、抽出液を回収することによって達成される。
【０００６】
３．葉酸化合物の化学構造；
葉酸化合物は、下記プテリン構造を有するものである。
【０００７】
【化１】
【０００８】
より詳しくは、葉酸は下記式で表される。
【０００９】
【化２】
【００１０】
上記において、グルタミン酸残基の不斉α−Ｃ原子がＳ−立体配置（αＳ）で存在するかまたはＲ−立体配置（αＲ）で存在し得る。葉酸エステルおよびその他の誘導体についても同様のことが言える。これらは（αＳ）−葉酸エステルおよび（αＲ）−葉酸エステルと呼ぶ。天然に産する葉酸 は（αＳ）−葉酸に相当する。
【００１１】
還元型のテトラヒドロ葉酸は下記式で表される。
【００１２】
【化３】
【００１３】
この場合グルタミン酸残基の不斉α−炭素原子がＳ−立体配置（αＳ）で存在するかまたはＲ−立体配置（αＲ）で存在し、そしてテトラヒドロプテリン残基中の６位の不斉炭素原子がＲ−立体配置（６Ｒ）で存在するかまたはＳ−立体配置（６Ｓ）で存在し得る。テトラヒドロ葉酸のジアステレオマーは（６Ｓ，αＳ）−、（６Ｓ，αＲ）−、（６Ｒ，αＳ）−および（６Ｒ，αＲ）−テトラヒドロ葉酸と呼ぶことができる。テトラヒドロ葉酸エステルおよびその他誘導体についても同様なことが言える。これらは（６Ｓ，αＳ）−、（６Ｓ，αＲ）−、（６Ｒ，αＳ）−および（６Ｒ，αＲ）−テトラヒドロ葉酸エステルと称することができる。天然に産するテトラヒドロ葉酸は（６Ｓ，αＳ）−テトラヒドロ葉酸に相当する。（例えば、特許文献２参照。）
【００１４】
その他、還元型葉酸の１つとして７，８−ジヒドロ葉酸も知られている。
また、５位及び／又は１０位が置換された葉酸も知られている。例えば、５−メチルテトラヒドロ葉酸
、５，１０−メチレンテトラヒドロ葉酸、５−ホルミルテトラヒドロ葉酸、５−ホルムイミノテトラヒドロ葉酸、１０−ホルミルテトラヒドロ葉酸、５，１０−メテニルテトラヒドロ葉酸等である。
また、還元型葉酸のあるものは、重合型のポリグルタミル葉酸（２から８グルタミン酸残基を有する。例えば、ジグルタミル葉酸、トリグルタミル葉酸、テトラグルタミル葉酸、ペンタグルタミル葉酸およびヘキサグルタミル葉酸等）としても知られている。
重合型のポリグルタミル葉酸の化学構造式は下記のとおりである。
【００１５】
【化４】
【００１６】
ここで、ｎは１乃至７の整数であり、５位及び１０位の窒素原子はメチル基、ホルミル基、ホルムイミノ基で置換されてもよく、あるいは５位、１０位が互いにメチレン基、メテニル基によって結合されて環を形成してもよい。
【００１７】
４．他のビタミンＢ類（ビタミンＢ12、ビタミンＢ６）；
上記葉酸は、ビタミンB6, B12, C がなくては十分にその効果を発揮しないとの報告もなされている。
また、これらビタミンＢ12やビタミンＢ６についても、様々な有益な作用を有することが知られている。
例えば、ビタミンＢ12は、水溶性であり、コバルトと結合されることによってその効果を発揮し、赤血球を形成乃至再生して貧血を防ぎ、成長を促進し、脂肪、炭水化物、たんぱく質の使用を適切にコントロールし、刺激に対する過敏な反応を抑制し、また集中力、記憶力を高め、精神を安定させる作用を有する。したがって、ビタミンＢ12が欠乏すると悪性貧血、神経障害を引き起こす。ビタミンＢ12も、葉酸と同様、光や酸、アルカリに対して不安定である。
ビタミンＢ６は、ピリドキシンとも呼ばれる水溶性のビタミンであり、摂取後８時間以内に排泄されることから毎日補給する必要がある。ビタミンＢ６は、ビタミンＢ12の存在下に適切に吸収され、抗体や赤血球の産生あるいは胃酸分泌に不可欠であり、たんぱく質と脂肪の適切な吸収を助け、必須アミノ酸のトリプトファンがビタミンＢ３（ナイアシン）に転換するのを助け、神経や皮膚のさまざまな障害の予防し、抗老化の核酸の正常な合成を促進する作用を有する。したがって、ビタミンＢ６が欠乏すると、貧血、脂漏性皮膚炎、舌炎の原因ともなる。しかしながら、ビタミンＢ６も、他のビタミンＢと同様、必ずしも安定ではなく長期保存が困難である等の問題を抱えている。
【００１８】
５．葉酸の安定性；
上記のとおり、近年、葉酸摂取の必要性が益々高まっているが、残念ながら葉酸は、必ずしも安定な化合物ではない。これら葉酸化合物が安定に存在し得るのは弱酸性から中性領域の限られた領域である。したがって、強酸性下では、葉酸は安定に存在することが不可能となる。また、葉酸は光によっても分解するので、ＰＥＴボトル飲料に適用するにあたっても問題があった。
このように天然物由来の葉酸等のビタミン類は、非常に不安定であって、酸のみならず、経時的に酸素、熱、光などにより分解し、ｐ−アミノ安息香酸、その他複雑な化合物を生じ、経時と共に葉酸量は低下してしまう傾向にあることが知られている。それ故、市販されている缶容器、紙容器、特にペットボトルなどの飲料においては、実際飲用する際には葉酸が必要摂取量をかなり下回る量しか含有していない場合がほとんどである。
【００１９】
６．葉酸の安定化；
これら問題を解決する方法として、例えば、酸に対する葉酸の安定化方法として、エリスリトール及び／又はトレハロースを配合する方法が提案されている。（例えば、特許文献３参照。）。
また、（６Ｒ）−、（６Ｓ）−又は（６Ｒ，Ｓ）−５，１０−メチレンテトラヒドロ葉酸及びその塩の安定化方法として、それら葉酸水性溶液に、α− 、β−又はγ−シクロデキストリン又はα−、β−
又はγ−シクロデキストリンの誘導体を添加して安定化する方法も提案されている。（例えば、特許文献４参照。）
また、５，６，７，８−テトラヒドロ葉酸およびその誘導体の安定化法方法として、これら化合物の粉末を、不活性ガスの存在下脱酸素剤を共存させて、外気遮断して低温保存することによる安定化方法も提案されている。（例えば、特許文献５参照。）
しかしながら、これら安定化方法は、葉酸の安定化という観点においては目的を達成し得るものの、サイクロデキストリン等の配合剤はあくまで安定化のための第３成分以上の役割を演じるものではなかった。
【特許文献１】特表２００１−５０４１０４号公報
【特許文献２】特表２００３−５０４３７０号公報
【特許文献３】特開２００２−０９７１４１号公報
【特許文献４】特開平０７−０１８０８４号公報
【特許文献５】特開平０６−０６５２４３号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００２０】
本発明の目的は、単なる葉酸の安定化に止まらず、薬学的に有効な第３成分を用いることによってこれら葉酸を安定化することであり、他の目的は薬学的に有効な第３成分を含む安定化されたビタミンＢ類含有組成物、特に葉酸含有組成物を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００２１】
本発明者らは、上記課題を解決するために鋭意研究を重ねた結果、本発明を完成するに到った。より詳しくは、本発明者らは、既に、多年にわたって食用に供され、人体に対する安全性が確認されている食品素材を調べ、ビタミンＢ類、特に葉酸の安定化成分として利用価値のあるものを検討した。その結果、ポリフェノール類化合物にビタミンＢ類、特に葉酸に対する強い安定化作用、特に水溶液中における葉酸等の光に対する安定化作用を有することを見出して本発明に至ったものである。
より具体的には、本発明は以下のとおりである。
【００２２】
１．葉酸を安定化させるのに十分な量のポリフェノール類を含んでなる安定化された葉酸含有組成物。
２．飲料組成物である上記１に記載の葉酸含有組成物。
３．葉酸濃度が２４μｇ／５００ｍＬ乃至４，８００μｇ／５００ｍＬである上記２に記載の葉酸含有組成物。
４．葉酸１モルに対して０．０５モル以上のポリフェノール類を含有してなる上記１乃至３に記載の葉酸含有組成物。
５．葉酸濃度が２４μｇ／５００ｍＬ乃至４，８００μｇ／５００ｍＬであり、ポリフェノール類含量が１００μｇ／５００ｍＬ乃至１，０００ｍｇ／５００ｍＬであり、かつ葉酸１モルに対して０．０５モル以上のポリフェノール類を含有してなる上記３に記載の葉酸含有組成物。
６．葉酸濃度が２００μｇ／５００ｍＬ乃至４，８００μｇ／５００ｍＬである上記５に記載の葉酸含有組成物。
７．さらに葉酸１重量部に対して０．００５乃至０．０５重量倍量のビタミンＢ12、３乃至１０重量倍量のビタミンＢ６及び１０乃至５０重量倍量の亜鉛から選ばれる少なくとも１種を含有する上記１乃至６に記載の葉酸含有組成物。
８．葉酸が、葉酸、ジヒドロ葉酸、テトラヒドロ葉酸及びその誘導体、重合型のポリグルタメート及びその誘導体、そのエステル体及びその塩から選ばれる１種以上の葉酸である上記１乃至７に記載の葉酸含有組成物。
９．ポリフェノール類が、茶由来のエピガロカテキンガレート、エピカテキンガレート、エピガロカテキン及びエピカテキンから選ばれる１種以上のカテキン類である上記１乃至８に記載の葉酸含有組成物。
１０．ポリフェノール類が、エピカテキンガレートである上記９に記載の葉酸含有組成物。
１１．葉酸と、該葉酸を安定化させるのに十分な量のポリフェノール類とを配合することを特徴とする葉酸含有組成物の安定化方法。
１２．ポリフェノール類含量が、葉酸１モルに対して０．０５モル以上である上記１１に記載の葉酸含有組成物の安定化方法。
【発明の効果】
【００２３】
本発明は、安定化剤としてポリフェノール類化合物を用いることにより、葉酸を安定化し得たものであり、ポリフェノール類自体の効能・効果、薬効を併せて期待することができる。また、ポリフェノール類は、緑茶等に含まれるものであり安全性も確認されていることから、長期に摂取した場合においても何ら問題がない。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２４】
以下に、本発明の実施の態様について説明する。
本明細書において使用する用語の意味は以下のとおりである。
【００２５】
「安定化された葉酸含有組成物」とは、葉酸が安定した状態で存在し得る葉酸含有組成物を意味し、形態的には、飲料や食品に添加するための葉酸及びポリフェノール類を含有してなる配合用原体としての固体組成物（粉末、錠剤等）、これら固体粉末組成物を飲料用原液に加えてなる飲料等の液体組成物、あるいはこれら固体粉末組成物をガムや飴等の食品に加えてなるガムや飴等の固形組成物として存在し得る。用途面から見た場合、該組成物は、医薬組成物；医薬部外品組成物；薬理効果を備えたいわゆる健康食品（サプリメント）；飲料や食品に添加するための配合用組成物（食品添加物）；該配合用組成物を添加して飲料とした飲料組成物；又は該配合用組成物を添加して食品とした食品組成物（栄養機能食品、特定保健用食品、機能性食品。）等に区分することができる。
【００２６】
医薬組成物、医薬部外品組成物、薬理効果を備えたいわゆる健康食品（サプリメント）とする場合は、結合剤等の配合剤を適宜加えることによって、定法に従って、タブレット、カプセル、顆粒等の形態とすることにより、より一層摂取し易くすることができる。
配合用組成物として使用する場合は、粉末状の原体のままでもよいし、これを定法に従ってタブレット、カプセル、顆粒等の形態に加工して用いてもよい。
【００２７】
飲料組成物は、好ましくは容器詰飲料組成物であり、例えば、緑茶、ウーロン茶、紅茶等の茶飲料；リンゴジュース、グレープフルーツジュース、オレンジジュース等のジュース類；果汁配合飲料；野菜汁配合飲料；コーヒー飲料；ココア飲料；牛乳等の乳飲料；コーラ、サイダー等の炭酸飲料；スポーツ飲料；豆乳；ミネラルウォーター；ニアウォーター飲料；ダイエットサポート飲料；栄養補給飲料等である。また、ビール、発泡酒、ワイン、日本酒等のアルコール飲料であってもよい。これら飲料用組成物は、緑茶、ウーロン茶、紅茶等の茶飲料乃至その原材料（例えば、茶抽出液）に、上記配合用組成物を適量配合することによって製造することができる。茶飲料の場合は、茶飲料それ自体にカテキン等のポリフェノール類が含有されているので、結果的に葉酸を安定化されうる範囲で適量配合することによっても製造することができる。
【００２８】
食品組成物は、上記配合用組成物を原材料に適量配合して定法に従って加工することによって得られる菓子、パン、ヨーグルト、ゼリー、冷菓、キャンデイ、ガム等である。
【００２９】
上記「安定化された葉酸含有組成物」は、好ましくは、ジュース類；果汁配合飲料；野菜汁配合飲料；乳飲料；茶飲料等の飲料組成物である。
【００３０】
また、上記「飲料組成物」は、葉酸、ポリフェノール類化合物に併せて、食品添加物として使用可能な各種の甘味料、酸味料、無機酸塩、無機酸塩類、有機酸、栄養強化剤、酸化防止剤、香料、色素類、乳化剤、保存料、調味料、脂質類、タンパク質類、ペプチド類、多糖類、食物繊維類、果汁エキス類、野菜エキス類、花蜜エキス類、pH調整剤等を単独或いは併用して配合してもよい。
甘味料としては、例えば、砂糖、ブドウ糖、果糖、異性化液糖、グリチルリチン、ステビア、アスパルテーム、フラクトオリゴ糖、環状オリゴ糖、人工甘味料等が挙げられる。
酸味料としては、天然成分から抽出した果汁類の他、クエン酸、酒石酸、リンゴ酸、乳酸、フマル酸、リン酸が挙げられる。
無機酸類、無機酸塩類としては、リン酸、リン酸二ナトリウム、メタリン酸ナトリウム、ポリリン酸ナトリウム等が挙げられる。有機酸類、有機酸塩類としてはクエン酸、コハク酸、イタコン酸、リンゴ酸、クエン酸ナトリウム等が挙げられる。
また、栄養強化剤として、β−カロテン、ビタミンＡ、葉酸以外の他のビタミンＢ類（例えば、ビタミンＢ1、ビタミンＢ2、ナイアシン、パントテン酸等）、ビオチン、ビタミンC、ビタミンD、ビタミンＥ、コエンザイムQ10、α-リポ酸、カルニチン、カルシウム、鉄、マグネシウム、亜鉛、銅等が挙げられる。
容器詰飲料に使用される容器は、一般の飲料と同様に、ポリエチレンテレフタレートを主成分とする成形容器（いわゆるＰＥＴボトル）、金属管、金属箔やプラスチックフィルムと複合された紙容器、瓶等の通常の形態で提供することができる。好ましくはＰＥＴボトルである。また、ここでいう容器詰飲料とは希釈せずに飲用できるものをいう。
【００３１】
「葉酸」とは、上記した葉酸；テトラヒドロ葉酸、ジヒドロ葉酸；５位及び／又は１０位が置換された置換テトラヒドロ葉酸；及び、重合型のポリグルタメート（２から８のグルタミン酸残基を有する）を意味する。具体例としては、葉酸、７，８−ジヒドロ葉酸、５，６，７，８−テトラヒドロ葉酸、５−メチルテトラヒドロ葉酸、５，１０−メチレンテトラヒドロ葉酸、５，１０−メテニルテトラヒドロ葉酸、５，１０−ホルムイミノテトラヒドロ葉酸、５−ホルミルテトラヒドロ葉酸（ロイコボリン）、５−ホルミルイミノテトラヒドロ葉酸、１０−ホルミルテトラヒドロ葉酸、重合型のポリグルタミル葉酸（２から８のグルタミン酸残基を有する）、それらのエステル体、及びそれらの塩、それらの混合物を挙げることができる。
重合型のポリグルタミル葉酸としては、例えば、５−ホルムイミノ−（６Ｓ）−テトラヒドロ葉酸等のテトラヒドロ葉酸のジグルタミル、トリグルタミル、テトラグルタミル、ペンタグルタミルおよびヘキサグルタミル誘導体等を挙げることができる。
また、特に限定のない限り、用語「葉酸」は 、両方のエナンチオマー（αＳ）および（αＲ）を包含し、そしてテトラヒドロ葉酸については、そのジアステレオマー（（６Ｓ，αＳ）、（６Ｓ，αＲ）、（６Ｒ，αＳ）および（６Ｒ，αＲ））を包含する。
テトラヒドロ葉酸誘導体、重合型のポリグルタミル葉酸誘導体における誘導体とは、５位及び／又は１０位における置換体を意味する。
本発明において、好ましい葉酸は、生体内の利用効率及び含有量のコントロールの観点からすると上記合成品（食品添加物）に分類される葉酸であり、具体的には、ＢＡＳＦ武田ビタミン株式会社製、ディー・エス・エムジャパン株式会社等から入手できる。化学構造面からすると、特に好ましいのはプテロイルモノグルタミン酸である。また、天然物由来の場合は、緑茶、烏龍茶、紅茶等の茶類、大豆、ソラマメ等の豆類、からし菜、ほうれん草、みずかけ菜、なば菜、グリーンアスパラガス、春菊、サツマイモ、ブロッコリー、チンゲン菜等の野菜、いちご、パパイヤ、オレンジ、ミカン等の果物類から得られるもの（抽出されるもの）が使用可能である。これら食物から葉酸を抽出する方法は、茶葉の場合は温水乃至熱湯で抽出する方法、豆類、野菜類、果物類の場合は搾汁液から不溶性画分を除き、抽出液を回収する方法等、公知の一般的な方法を採用することができる。場合によっては、抽出することなくジュース等としてそのまま使用することも可能である。
【００３２】
「ポリフェノール類」とは、水酸基を複数有するフェノール構造を有する一連の化合物を意味し、例えば、フラボン、フラボノール、フラバノン、フラバノール、アントシアニジン、イソフラボンを挙げることができる。具体的には、上記フラボンとしては、ルチン、ルテオリン等を、フラボノールとしてはケルセチン、ケンフェロール等を、フラバノンとしてはヘスペリジン、ナリンジン等を、フラバノールとしてはカテキン類等を、アントシアニジンとしてはシアニジン等を、イソフラボンとしてはゲニステイン、ゲニスチン、ダイゼイン等を挙げることができ、カテキン類としては、エピカテキン、エピガロカテキン、エピカテキンガレート、エピガロカテキンガレート、カテキン、ガロカテキン、カテキンガレート、ガロカテキンガレートを挙げることができる。
その他、クロロゲン酸類、プロトアントシアニジン類、テアフラビン類、テアルビジン類等を挙げることができる。
好ましいポリフェノール類化合物は、カテキン類であり、特に好ましくは茶由来のエピガロカテキンガレート、エピカテキンガレート、エピガロカテキンまたはエピカテキンであり、さらに好ましくはエピカテキンガレートである。
上記ポリフェノール類の由来は特に限定されるものではないが、中でも、茶、コーヒー、ココア、ワイン、ブドウ、リンゴ、ベリー類、チェリー、レモン、オレンジ、シークワーシャー、グレープフルーツ、メロン、タマネギ、ブロッコリー、ホウレンソウ、ニンジン、セロリ、ナス、ニンニク、キャベツ、メキャベツ、キュウリ、ソバ、玄米、大豆、小豆、大麦、バジル、タラゴン、ハッカ、オレガノ、タイム、セージ、ローズマリーおよびそれらの混合物に由来するもの、特に茶に由来するものは、飲料としての応用も容易であり、好適である。特に、茶に含まれるカテキン類は、水溶性に優れ、日常的に飲用される嗜好飲料としての実績からより好ましい。
これら植物原料からポリフェノール類を抽出する方法は、水乃至熱湯で抽出し、残渣をろ過する方法、あるいは搾汁液から不溶性物を取り除く方法等、公知乃至周知の一般的な方法を採用することができる。
【００３３】
「ビタミンＢ12」、「ビタミンＢ６」とは、特に限定されるものではなく、工業的に生産された市販品であっても、あるいは食物中に含まれる「ビタミンＢ12」、「ビタミンＢ６」それ自体であってもよい。
【００３４】
「亜鉛」とは、食品として、又は医薬品として使用できる亜鉛類、特に体内吸収性を有する亜鉛類であればよく、特に制限されるものでない。
【００３５】
次に、葉酸及びポリフェノール類の配合量について述べる。
厚生労働省の発表した食事摂取基準（２００５年版）によれば葉酸の１日の摂取推奨量は、体重、年令、健康、性別その他の因子に応じて異なるが、成人で２４０μｇ／日、妊婦で４４０μｇ／日である。
日常的な飲食物から摂取される葉酸の量を考慮すると本発明組成物中に包含される葉酸の最低含量は上記推奨量の約１／１０、即ち２４μｇ／日であり、また、過剰に摂取された葉酸は体外に排出されて無害であること、生体内での利用率が５０％と見積られる（葉酸は、小腸で消化酵素によって分解されて体内に吸収されるが、吸収・代謝過程で様々な段階を経ることにより生体内での利用率は５０％と見積られる。）こと等を考えるとその最高含量は成人推奨量の約２０倍、即ち４，８００μｇとすることができる。
この観点から、本発明の葉酸含有組成物からの適正な葉酸摂取量は、２４μｇ／日乃至４，８００μｇ／日であり、好ましく１００μｇ／日乃至４，８００μｇ／日、特に好ましくは２００μｇ／日乃至４，８００μｇ／日を目安とすることができる。
具体的には、飲料組成物である場合には、１日１本乃至２本を飲用するとして、２４μｇ／５００ｍＬ乃至４，８００μｇ／５００ｍＬ、好ましくは１００μｇ／５００ｍＬ乃至４，８００μｇ／５００ｍＬ、特に好ましくは２００μｇ／５００ｍＬ乃至４，８００μｇ／５００ｍＬである。PETボトル飲料の場合は、日光に曝される可能性が高いので、さらに高濃度の３００μｇ／５００ｍＬ乃至４，８００μｇ／５００ｍＬが好ましい。
医薬組成物、サプリメント、食品組成物の場合も、上記１日あたりの推奨量に基づいて適宜その含有量を決定すればよい。
なお、本発明のうち葉酸含有組成物の発明にあっては、葉酸に対するポリフェノール類の含量は安定化の観点からして重要であるが、葉酸それ自体の含有量は単に上記推奨量に基づいて適宜決定することができる。
【００３６】
「葉酸を安定化させるのに十分な量のポリフェノール類」等における「安定化」とは、２０℃、５，０００ルクスの蛍光灯（人工気象器）下に置いた場合に、少なくとも葉酸に対する安定化効果が見出せることを意味し、好ましくは、当該条件下に１週間置いた場合に、葉酸の存存率が少なくとも５０％以上、特に好ましくは７０％以上であることを意味する。
【００３７】
本発明の組成物に配合すべきポリフェノール類配合の下限値は葉酸の安定化に必要な最低量を意味し、その最低配合量（共存量）は、後述の実施例から明らかなとおり、葉酸に対しモル比で０．０５倍（ＥＣＧの場合、重量比で０．０５倍）、好ましくは葉酸に対しモル比で０．１倍（ＥＣＧの場合、重量比で０．１倍）である。一方、カテキン類等のポリフェノール類は無毒であり体脂肪低減等の効果があるものの、不必要に過剰に添加した場合には、カテキン類特有の苦渋味等の問題が発生することから、ポリフェノール類の含量は、１００ｍｇ／日乃至１，０００ｍｇ／日（飲料においては、１００ｍｇ／５００ｍＬ乃至１，０００ｍｇ／５００ｍＬ）とするのが好ましい。
例えば、葉酸が１００μｇ／日乃至４，８００μｇ／日（１００μｇ／５００ｍＬ乃至４，８００μｇ／５００ｍＬ）の場合、その安定化に必要なポリフェノール量の最低量は、ＥＣＧで０．０５倍の５μｇ／日乃至２４０μｇ／日（飲料の場合は、５μｇ／５００ｍＬ乃至２４０μｇ／５００ｍＬ）であり、好ましくは、その０．１倍量の１０μｇ／日乃至４８０μｇ／日（１０μｇ／５００ｍＬ乃至４８０μｇ／５００ｍＬ）である。
しなしながら、必要なポリフェノールを十分に摂取するという観点からすると、ポリフェノール含量は、１００ｍｇ／日乃至１，０００ｍｇ／日（飲料の場合は、１００ｍｇ／５００ｍＬ乃至１０００ｍｇ／５００ｍＬ）とするのが好ましい。このような含量であれば、上記から明らかなとおり、ポリフェノールの摂取も十分であり、かつ、結果的に葉酸も自ずと安定化される。
【００３８】
同じく厚生労働省の食事摂取基準（２００５年版）によれば、「ビタミンＢ12」の１日あたりの推奨量は２．４μｇ／日であり、他方、葉酸の推奨量が２４０μｇ（妊婦で４４０μｇ）であることから、「ビタミンＢ12」を配合する場合は、葉酸に対してその０．００５乃至０．０５重量倍量を配合することが好ましい。好ましくは、１．２μｇ／日乃至１２μｇ／日を目安とすることができる。具体的には、飲料組成物である場合には、１日１本乃至２本を飲用するとして、１．２μｇ／５００ｍＬ乃至１２μｇ／５００ｍＬ、である。
【００３９】
同じく厚生労働省の食事摂取基準（２００５年版）によれば、「ビタミンＢ６」の１日あたりの推奨量は成人男子で１．４ｍｇであり、他方、葉酸の推奨摂取量が２４０μｇ（妊婦で４４０μｇ）であることから、「ビタミンＢ６」を配合する場合は、葉酸に対してその３乃至１０重量倍量を配合することが好ましい。
【００４０】
「亜鉛」の１日あたりの推奨量は成人男子で９ｍｇ、女性７ｍｇであり、他方、葉酸の推奨量が２４０μｇ（妊婦で４４０μｇ）であり、更には本発明組成物においては亜鉛は必須ではなく補助的な役割を担うことから、「亜鉛」を配合する場合は、葉酸に対してその１０乃至５０重量倍量を配合することが好ましい。
【００４１】
本発明の葉酸含有組成物、特に飲料組成物は、遮光条件下での保管を組み合わせることにより、さらに葉酸安定化効果を高めることができる。遮光条件下での保管とは、遮光された箱等に透明または不透明の容器に入れた当該飲料の保管、および遮光性の容器に当該飲料を入れた保管など、飲料そのものに直接光を当てないような保管をいう。ここで、遮光条件とは、可視光の約５０％以上、好ましくは約７０％以上、より好ましくは約９０％以上がカットされる状態をいう。また、特に波長の短い光はエネルギーが高いため、波長約340nm以下の光が約８０％以上、より好ましくは約９０％以上カットされる状態が望ましい。例えば、金属製の缶容器中に充填された場合は、上記遮光条件をほぼ満足する。
【００４２】
本発明に用いられる葉酸は高速液体クロマトグラフィー法、微生物定量法、ELISA法により定量できる。また、本発明に用いられるポリフェノール類は、高速液体クロマトグラフィー法、酒石酸鉄比色法、フォーリンデニス法、フォーリンチオカルト法等により定量できる。
【００４３】
以下、本発明を実施例に基づいて更に詳細に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。
【実施例１】
【００４４】
１．葉酸の経時安定性試験；
２０ｍＬの５０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ６）に葉酸（関東化学株式会社製。分子量４４１）１００μＭ（終濃度）となるように溶解した。この葉酸溶液に、ポリフェノール類化合物として、それぞれエピガロカテキン（ＥＧＣ；分子量３０６）（フナコシ株式会社製）（サンプル１）、エピガロカテキンガレート（ＥＧＣＧ；分子量４５８）（フナコシ株式会社製）（サンプル２）、エピカテキン（ＥＣ；分子量２９０）（フナコシ株式会社製）（サンプル３）およびエピカテキンガレート（ＥＣＧ；分子量４４２）（フナコシ株式会社製）（サンプル４）を１０μＭ（終濃度）添加して、サンプル１〜４とした。これらのサンプルを、２５℃、５，０００ルクスの人工気象器（日本医化機械製作所製）下に置くことにより、葉酸の経時安定性を試験した。
なお、ここでそれぞれの成分の重量換算値は、葉酸；４４．１ｍｇ、ＥＧＣ；３．０６ｍｇ、ＥＧＣＧ；４．５８ｍｇ、ＥＣ２．９ｍｇ、ＥＣＧ；４．４２ｍｇである。
同時に比較例として、葉酸溶液を暗黒下に置いたもの（光照射なし）（サンプル５）、２５℃、５，０００ルクスの人工気象器下に置いたポリフェノール類化合物なしの葉酸溶液（サンプル６）、ビタミンＣ（Ｌ−アスコルビン酸；和光純薬工業株式会社製）を１００μＭ（終濃度）のみ添加した葉酸溶液（サンプル７）も同様に試験した。
サンプルを一定時間置いた後、経時的に葉酸の測定を行った。また、対照として、同濃度のビタミンＣを用いて比較した。
【００４５】
２．葉酸の測定；
葉酸の測定は、紫外部吸収検出器を備えた高速液体クロマトグラフィーを用いて行った。内径４．６ｍｍ、長さ１５０ｍｍで粒子サイズ３μｍのＯＤＳカラム（和光純薬株式会社製）を用い、１２％アセトニトリル（０．０５％リン酸を含む）を流速０．８ｍＬ／分で通液した。サンプルは０．４５μｍのフィルターに通した後、２９０ｎｍでの紫外吸収をモニターリングすることにより葉酸の定量をした。
【００４６】
３．カテキンの測定；
カテキンの測定は電気化学検出器を備えた高速液体クロマトグラフィーを用いて行った。内径４．６ｍｍ、長さ１５０ｍｍで粒子サイズ３μｍのＯＤＳカラム（和光純薬株式会社製）を用い、１２％アセトニトリル（０．０５％リン酸、０．０１％エチレンジアミン四酢酸二ナトリウムを含む）を流速０．８ｍＬ／分で通液した。サンプルは０．４５μｍのフィルターを通した後、印加電圧５００ｍＶでの反応をモニターリングすることにより各カテキンの定量をした。
【００４７】
４．葉酸の経時安定性試験の結果；
上記経時安定性試験における結果（葉酸残存量）を図１に示す。
ポリフェノール類化合物なしの葉酸溶液（サンプル６）中の葉酸は、光照射条件下で1日目において全てが消失した。一方、ビタミンＣのみ添加した葉酸溶液（サンプル７）では、ビタミンＣの添加によって葉酸の劣化はやや抑制されたが、同濃度(１０μＭ)で比較した場合に、ポリフェノール類化合物としてカテキン各種を添加したサンプル１〜４において、より長く葉酸が残存していた。これらのことにより、カテキン等のポリフェノール類の添加により、葉酸の安定性が増加したといえる。
また、葉に含まれるカテキンの種類による葉酸の安定化の違いを検討した結果、葉酸に対して０．１モル倍濃度（ECGの場合、重量比で０．０１倍）でいずれのカテキン類も安定性改善の効果を有していた。また安定化の効果は、ＥＣＧ＞ＥＣ＞ＥＧＣＧ＞ＥＧＣの順に葉酸を安定化させる効果が高いことが分かった。
【実施例２】
【００４８】
１．ポリフェノールの濃度依存性試験
ポリフェノール類化合物としてエピカテキンガレート（ＥＣＧ）の濃度を変化させた場合の濃度依存効果を検討した。結果を図２に示す。
２０ｍＬの５０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ６）に葉酸（和光純薬工業株式会社製）１００μＭ（終濃度。４４．１ｍｇ／Ｌ）となるように溶解した。この葉酸溶液に、ポリフェノール類化合物として、エピカテキンガレート（ＥＣＧ；分子量４４２）（フナコシ株式会社製）を５μＭ（サンプル８。２．２１ｍｇ）、１０μＭ（サンプル９。４．４２ｍｇ）、２０μＭ（サンプル１０。８．８４ｍｇ）（終濃度）添加して、これらサンプルを２５℃、５，０００ルクスの人工気象器（日本医化機械製作所製）下に置くことにより、葉酸の経時安定性を試験した。
同時に比較例として、葉酸溶液を暗黒下に置いたもの（光照射なし）（サンプル１１）も同様に試験した。
サンプルを一定時間置いた後、経時的に葉酸の測定を行った。
その結果、最も濃度の低い５μＭ試験区（モル比で０．０５倍、ECGの場合、重量比で０．０５倍）でも葉酸の安定化効果が観察された。そして、その効果は添加量に依存しており、１０μＭ（モル比で０．１倍、ECGの場合、重量比で約０．１倍。）および２０μＭ、特に葉酸に対してモル比で０．２倍量の２０μＭではより高い葉酸安定化効果が見出された。
【実施例３】
【００４９】
葉酸を含む飲料を調整し、ポリフェノールによる安定化の試験を行った。各サンプルの製造方法は以下の通りである。
【００５０】
実施例Ａ
緑茶抽出物（テアフラン９０Ｓ、株式会社伊藤園製）を１ｇ／Ｌとなるようにイオン交換水に溶解し、葉酸（関東化学株式会社製）を終濃度で２２ｍｇ／Ｌとなるように添加した。この溶液１０ｍＬをネジ付き試験管に入れ、１２１℃、２０分間オートクレーブ処理した。
【００５１】
実施例Ｂ
ウーロン茶葉１００ｇに熱湯１Ｌを加え、１０分間放置後、茶葉を取り除いた。その後、５０００×ｇで２０分、室温で遠心分離を行い、濃縮・乾固した。このウーロン茶エキス末を４ｇ／Ｌとなるようにイオン交換水に溶解し、葉酸とビタミンＣをそれぞれ終濃度で４．４ｍｇ／Ｌ、０．３ｇ／Ｌをとなるように添加した。この溶液１０ｍＬをネジ付き試験管に入れ、１２１℃、２０分間オートクレーブ処理した。
【００５２】
実施例Ｃ
ダッタンソバ実を１００ｇに対し、１．２５Ｌの９５℃の熱水を加え、２０分間抽出した。抽出液を冷却後、そば実とメッシュろ過し、３０００回転で１５分間遠心分離した。このソバ抽出液を濃縮し、凍結乾燥した。このソバエキス末を１ｇ／Ｌとなるようにイオン交換水に懸濁させ、４．４ｍｇ／Ｌとなるように葉酸を添加した。この溶液１０ｍＬをネジ付き試験管に入れ、１２１℃、２０分間オートクレーブ処理した。
【００５３】
実施例Ｄ
麦茶１０ｇに対し、イオン交換水を１Ｌ加え、１０分間煮沸した。この麦茶抽出液に対し、葉酸を３３ｍｇ／Ｌとなるように添加し、この溶液１０ｍＬをネジ付き試験管に入れ、１２１℃、２０分間オートクレーブ処理した。
【００５４】
比較例
イオン交換水に葉酸を４４ｍｇ／Ｌとなるように添加し、１２１℃、２０分間オートクレーブ処理した。調製したサンプルを２５℃、５，０００ルクスの人工気象器に８日間置くことにより、葉酸の経時安定性を試験した。
【００５５】
ポリフェノール類の測定
ポリフェノール類の測定はフォーリンデニス法、高速液体クロマトグラフィー法を用いて行った。フォーリンデニス法は、タンニン酸（ナカライテスク株式会社）を標準物質とした。
【００５６】
結果を表１に示す。
【００５７】
【表１】
【００５８】
（結果）
比較例は、葉酸残存率が０になった一方で、実施例Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄの葉酸含有飲料は、それぞれ約７０％、７０％、８５％、５５％であり、特に実施例Ａ、Ｂ、Ｃでは約７０％、８５％の残存率という高い葉酸残存率を維持した。
【産業上の利用可能性】
【００５９】
本発明によれば、ポリフェノール類、特にカテキン類を共存させることにより葉酸を安定的に保持することができる。したがって、店頭等において照射条件下に曝されるＰＥＴボトル詰め葉酸含有飲料において効果的に適用できる。
【図面の簡単な説明】
【００６０】
【図１】ポリフェノール類化合物として各種カテキンを添加した場合の葉酸残存率を示すグラフである。（実施例１）
【図２】ポリフェノール類化合物としてエピカテキンガレートを添加した場合の、エピカテキンガレート濃度と葉酸残存率との関係を示すグラフである。（実施例２）
【特許請求の範囲】
【請求項１】
葉酸を安定化させるのに十分な量のポリフェノール類を含んでなる安定化された葉酸含有組成物。
【請求項２】
飲料組成物である請求項１に記載の葉酸含有組成物。
【請求項３】
葉酸濃度が２４μｇ／５００ｍＬ乃至４，８００μｇ／５００ｍＬである請求項２に記載の葉酸含有組成物。
【請求項４】
葉酸１モルに対して０．０５モル以上のポリフェノール類を含有してなる請求項１乃至３に記載の葉酸含有組成物。
【請求項５】
葉酸濃度が２４μｇ／５００ｍＬ乃至４，８００μｇ／５００ｍＬであり、ポリフェノール類含量が１００μｇ／５００ｍＬ乃至１，０００ｍｇ／５００ｍＬであり、かつ葉酸１モルに対して０．０５モル以上のポリフェノール類を含有してなる請求項３に記載の葉酸含有組成物。
【請求項６】
葉酸濃度が２００μｇ／５００ｍＬ乃至４，８００μｇ／５００ｍＬである請求項５に記載の葉酸含有組成物。
【請求項７】
さらに葉酸１重量部に対して０．００５乃至０．０５重量倍量のビタミンＢ12、３乃至１０重量倍量のビタミンＢ６及び１０乃至５０重量倍量の亜鉛から選ばれる少なくとも１種を含有する請求項１乃至６に記載の葉酸含有組成物。
【請求項８】
葉酸が、葉酸、ジヒドロ葉酸、テトラヒドロ葉酸及びその誘導体、重合型のポリグルタメート及びその誘導体、そのエステル体及びその塩から選ばれる１種以上の葉酸である請求項１乃至７に記載の葉酸含有組成物。
【請求項９】
ポリフェノール類が、茶由来のエピガロカテキンガレート、エピカテキンガレート、エピガロカテキン及びエピカテキンから選ばれる１種以上のカテキン類である請求項１乃至８に記載の葉酸含有組成物。
【請求項１０】
ポリフェノール類が、エピカテキンガレートである請求項９に記載の葉酸含有組成物。
【請求項１１】
葉酸と、該葉酸を安定化させるのに十分な量のポリフェノール類とを配合することを特徴とする葉酸含有組成物の安定化方法。
【請求項１２】
ポリフェノール類含量が、葉酸１モルに対して０．０５モル以上である請求項１１に記載の葉酸含有組成物の安定化方法。
【請求項１】
葉酸を安定化させるのに十分な量のポリフェノール類を含んでなる安定化された葉酸含有組成物。
【請求項２】
飲料組成物である請求項１に記載の葉酸含有組成物。
【請求項３】
葉酸濃度が２４μｇ／５００ｍＬ乃至４，８００μｇ／５００ｍＬである請求項２に記載の葉酸含有組成物。
【請求項４】
葉酸１モルに対して０．０５モル以上のポリフェノール類を含有してなる請求項１乃至３に記載の葉酸含有組成物。
【請求項５】
葉酸濃度が２４μｇ／５００ｍＬ乃至４，８００μｇ／５００ｍＬであり、ポリフェノール類含量が１００μｇ／５００ｍＬ乃至１，０００ｍｇ／５００ｍＬであり、かつ葉酸１モルに対して０．０５モル以上のポリフェノール類を含有してなる請求項３に記載の葉酸含有組成物。
【請求項６】
葉酸濃度が２００μｇ／５００ｍＬ乃至４，８００μｇ／５００ｍＬである請求項５に記載の葉酸含有組成物。
【請求項７】
さらに葉酸１重量部に対して０．００５乃至０．０５重量倍量のビタミンＢ12、３乃至１０重量倍量のビタミンＢ６及び１０乃至５０重量倍量の亜鉛から選ばれる少なくとも１種を含有する請求項１乃至６に記載の葉酸含有組成物。
【請求項８】
葉酸が、葉酸、ジヒドロ葉酸、テトラヒドロ葉酸及びその誘導体、重合型のポリグルタメート及びその誘導体、そのエステル体及びその塩から選ばれる１種以上の葉酸である請求項１乃至７に記載の葉酸含有組成物。
【請求項９】
ポリフェノール類が、茶由来のエピガロカテキンガレート、エピカテキンガレート、エピガロカテキン及びエピカテキンから選ばれる１種以上のカテキン類である請求項１乃至８に記載の葉酸含有組成物。
【請求項１０】
ポリフェノール類が、エピカテキンガレートである請求項９に記載の葉酸含有組成物。
【請求項１１】
葉酸と、該葉酸を安定化させるのに十分な量のポリフェノール類とを配合することを特徴とする葉酸含有組成物の安定化方法。
【請求項１２】
ポリフェノール類含量が、葉酸１モルに対して０．０５モル以上である請求項１１に記載の葉酸含有組成物の安定化方法。
【図１】
【図２】
【図２】
【公開番号】特開２００６−２９６３７９（Ｐ２００６−２９６３７９Ａ）
【公開日】平成１８年１１月２日（２００６．１１．２）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００５−１２７０１４（Ｐ２００５−１２７０１４）
【出願日】平成１７年４月２５日（２００５．４．２５）
【出願人】（５９１０１４９７２）株式会社 伊藤園 (213)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成１８年１１月２日（２００６．１１．２）
【国際特許分類】
【出願日】平成１７年４月２５日（２００５．４．２５）
【出願人】（５９１０１４９７２）株式会社 伊藤園 (213)
【Ｆターム（参考）】
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