蛍光測定装置及び蛍光測定方法
【課題】測定対象物にレーザ光を照射した際に発せられる蛍光強度を高めることを目的とする。
【解決手段】所定の方向に移動する測定対象物にレーザ光を照射した際に発せられる蛍光を受光する蛍光測定装置である。この蛍光測定装置は、測定対象物に電界を印加する電界印加部と、電界印加部が測定対象物に電界を印加する位置よりも、所定の方向の下流の位置において、測定対象物に直線偏光のレーザ光を照射するレーザ光照射部と、測定対象物がレーザ光を照射された際に発せられる蛍光を受光する受光部と、を備えることを特徴とする。
【解決手段】所定の方向に移動する測定対象物にレーザ光を照射した際に発せられる蛍光を受光する蛍光測定装置である。この蛍光測定装置は、測定対象物に電界を印加する電界印加部と、電界印加部が測定対象物に電界を印加する位置よりも、所定の方向の下流の位置において、測定対象物に直線偏光のレーザ光を照射するレーザ光照射部と、測定対象物がレーザ光を照射された際に発せられる蛍光を受光する受光部と、を備えることを特徴とする。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、所定の方向に移動する測定対象物にレーザ光を照射した際に発せられる蛍光を受光する蛍光測定装置及び蛍光測定方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
測定対象物にレーザ光を照射し、測定対象物が発する蛍光を受光して、測定対象物の情報を取得する蛍光測定装置が知られている。
蛍光測定装置を用いたフローサイトメータは、蛍光試薬でラベル化された細胞、ＤＮＡ、ＲＮＡ、酵素、蛋白等の測定対象物をシース液に流す。この測定対象物にレーザ光を照射することにより、測定対象物に付与された蛍光色素は蛍光を発する。フローサイトメータは、この蛍光を受光することにより、測定対象物の情報を取得することができる。
【０００３】
また、レーザ光を測定対象物に照射し測定対象物が発する蛍光を受光することにより蛍光緩和時定数を取得する蛍光測定装置が知られている（特許文献１）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特開２００７−１０１３９７号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
測定対象物が発する蛍光を受光する蛍光測定装置においては、測定対象物にレーザ光を照射した際に発せられる蛍光強度が高いほど、測定対象物の情報をより正確に取得することができる。そのため、測定対象物にレーザ光を照射した際に発せられる蛍光強度を高めることができる蛍光測定装置が求められている。
【０００６】
本発明は、測定対象物にレーザ光を照射した際に発せられる蛍光強度を従来よりも高めることができる蛍光測定装置及び蛍光測定方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明の蛍光測定装置は、所定の方向に移動する測定対象物にレーザ光を照射した際に発せられる蛍光を受光する蛍光測定装置であって、前記測定対象物に電界を印加する電界印加部と、前記電界印加部が前記測定対象物に電界を印加する位置よりも、前記所定の方向の下流の位置において、前記測定対象物に直線偏光のレーザ光を照射するレーザ光照射部と、前記測定対象物が前記レーザ光を照射された際に発せられる蛍光を受光する受光部と、を備えることを特徴とする。
【０００８】
また、前記レーザ光照射部は、レーザ光の偏光方向を変える波長板を含むことが好ましい。
【０００９】
また、前記受光部が受光した蛍光に基づいて、前記測定対象物が発する蛍光強度を求めるデータ処理部と、前記データ処理部が求めた蛍光強度に基づいて、前記レーザ光照射部が前記測定対象物に照射するレーザ光の偏光方向を制御する制御部と、を備えることが好ましい。
【００１０】
また、前記受光部が受光した蛍光に基づいて、前記測定対象物が発する蛍光強度を求めるデータ処理部と、前記データ処理部が求めた蛍光強度に基づいて、前記電界印加部が前記測定対象物に印加する電界の方向を制御する制御部と、を備えることが好ましい。
【００１１】
また、前記電界印加部は、異なる複数の方向に電界を印加するように配列された複数の電極を含むことが好ましい。
【００１２】
また、本発明の蛍光測定方法は、所定の方向に移動する測定対象物にレーザ光を照射した際に発せられる蛍光を受光する蛍光測定方法であって、前記測定対象物に電界を印加する電界印加工程と、前記電界印加工程の後に、前記測定対象物に直線偏光のレーザ光を照射する照射工程と、前記測定対象物が前記レーザ光を照射された際に発せられる蛍光を受光する受光工程と、を有することを特徴とする。
【００１３】
また、前記受光工程において受光した蛍光に基づいて、前記測定対象物が発する蛍光強度を求めるデータ処理工程と、前記データ処理工程において求めた蛍光強度に基づいて、前記測定対象物に照射する前記レーザ光の偏光方向を制御する制御工程と、を有することが好ましい。
【００１４】
また、前記受光工程において受光した蛍光に基づいて、前記測定対象物が発する蛍光強度を求めるデータ処理工程と、前記データ処理工程において求めた蛍光強度に基づいて、前記測定対象物に電界を印加する方向を制御する制御工程と、を有することが好ましい。
【発明の効果】
【００１５】
本発明の蛍光測定装置、蛍光測定方法によれば、測定対象物にレーザ光を照射した際に発せられる蛍光強度を従来よりも高めることができる。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１】本実施形態のフローサイトメータの一例を示す概略構成図である。
【図２】図１に示されるレーザ光照射部の一例を示す概略構成図である。
【図３】本実施形態の蛍光測定方法の一例を示すフローチャートである。
【図４】（ａ）は、電界を印加される前の細胞の状態を示す図であり、（ｂ）は、電界を印加された後の細胞の状態を示す図である。
【図５】図１に示される電界印加部の一例を示す断面図である。
【図６】本実施形態の蛍光測定方法の一例を示すフローチャートである。
【図７】変形例１のレーザ光照射部の一例を示す概略構成図である。
【図８】変形例２の電界印加部の一例を示す断面図である。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
以下、本発明の蛍光測定装置、蛍光測定方法を適用したフローサイトメータについて、実施形態に基づいて説明する。
＜第１の実施形態＞
（フローサイトメータの構成）
まず、図１を参照して、本実施形態のフローサイトメータの構成について説明する。図１は、本実施形態のフローサイトメータの一例を示す概略構成図である。フローサイトメータは、測定対象物にレーザ光を照射し、レーザ光を照射された測定対象物が発する蛍光を受光することにより、測定対象物の情報を取得することができる。
図１に示されるように、本実施形態のフローサイトメータは、液体供給装置１０と、フローセル２２と、電界印加部４０と、レーザ光照射部５０と、受光部６０、６２と、データ処理部７０と、制御部８０と、を備える。
【００１８】
液体供給装置１０は、サンプル液タンク１２と、シース液タンク１４と、を備える。サンプル液タンク１２は、細胞などの測定対象物を含むサンプル液を収容する。後述するように、レーザ光照射部５０において測定対象物にレーザ光を照射し、その際に発せられる蛍光から測定対象物の情報を取得するため、サンプル液タンク１２に収容されるサンプル液に含まれる細胞３０には、予め蛍光色素３２が付与されている。蛍光色素３２は、例えば、ＣＦＰ（Cyan Fluorescent Protein）、ＹＦＰ（Yellow Fluorescent Protein）などが用いられる。
シース液タンク１４はシース液を収容する。サンプル液タンク１２とサンプル液管１８とは、配管１６で接続されている。また、シース液タンク１４とシース液管２０とは、配管１６で接続されている。
【００１９】
液体供給装置１０は、不図示のエアポンプを備える。エアポンプを用いてサンプル液タンク１２に収容されているサンプル液を加圧することにより、液体供給装置１０は、配管１６を介してサンプル液管１８にサンプル液を供給する。また、エアポンプを用いてシース液タンク１４に収容されているシース液を加圧することにより、液体供給装置１０は、配管１６を介してシース液管２０にシース液を供給する。
液体供給装置１０がサンプル液やシース液を加圧する大きさは、制御部８０により制御される。
【００２０】
サンプル液管１８の吐出口から吐出されたサンプル液は、シース液に囲まれ、フローセル２２の内部を流れる。フローセル２２の内部では、シース液に囲まれたサンプル液は流体力学的絞り込みを受け、サンプル液は細い液流となる。サンプル液の速度を調整することにより、細い液流のサンプル液の中に細胞を一列に流すことができる。このようにして、フローセル２２の内部を測定対象物が所定の方向に移動する。
【００２１】
電界印加部４０は、フローセル２２の内部を流れる測定対象物に電界を印加する。本実施形態の電界印加部４０は、２つの電極４２ａ，４２ｂを備える。２つの電極４２ａ，４２ｂの間に電圧を印加することにより、測定対象物に電界を印加することができる。
図１に示されるように、電界印加部４０は制御部８０と接続されている。後述するように、電界印加部４０が測定対象物に印加する電界の方向は、制御部８０により制御される。
【００２２】
レーザ光照射部５０は、測定対象物に直線偏光のレーザ光を照射する。図１に示されるように、レーザ光照射部５０が測定対象物にレーザ光を照射する位置は、電界印加部４０が測定対象物に電界を印加する位置よりも、フローセル２２の下流に位置する。
レーザ光照射部５０は制御部８０と接続されている。後述するように、レーザ光照射部５０が測定対象物に照射するレーザ光の偏光方向は制御部８０により制御される。
【００２３】
ここで、図２を参照して、レーザ光照射部５０の詳細な構成について説明する。図２は、本実施形態のレーザ光照射部５０の一例を示す概略構成図である。図２に示されるように、レーザ光照射部５０は、レーザ光源部５２と、波長板５４と、を含む。レーザ光源部５２は、例えば、直線偏光のレーザ光を発する半導体レーザである。
波長板５４は、例えば、直線偏光の偏光方向を変える半波長板である。図２に矢印で示されるように、波長板５４は、レーザ光源部５２から照射されたレーザ光の光軸の周りに回転することができる。波長板５４の角度は、制御部８０により制御される。
【００２４】
次に、図１に戻り、受光部６０，６２について説明する。
受光部６０は、フローセル２２にレーザ光が照射される位置を基準として、レーザ光照射部５０と反対側に配置される。受光部６０は、測定対象物にレーザ光が照射された際に生じる前方散乱光を受光する。受光部６０は、例えば、フォトダイオードなどの光電変換器を備える。受光部６０は、受光した前方散乱光を電気信号に変換して出力する。
受光部６０が出力する電気信号は、フローセル２２にレーザ光が照射される位置を測定対象物が通過するタイミングを知らせるトリガ信号として用いられる。
【００２５】
受光部６２は、フローセル２２にレーザ光が照射される位置を基準として、レーザ光照射部５０からレーザ光が照射される方向とフローセル２２内を測定対象物が流れる方向の相互に垂直な方向に配置される。受光部６２は、測定対象物にレーザ光が照射された際に発せられる蛍光を受光する。受光部６２は、例えば、光電子倍増管などの光電変換器を備える。受光部６２は、受光した蛍光を電気信号に変換して出力する。
受光部６２が出力する電気信号は、フローセル２２にレーザ光が照射される位置を通過する測定対象物を特定するための信号として用いられる。
【００２６】
次に、データ処理部７０について説明する。データ処理部７０は、受光部６２が受光した蛍光の情報を用いて、レーザ光を照射された測定対象物の情報を取得する。データ処理部７０は、受光部６０，６２から出力される電気信号の入力を受け、この電気信号をデジタル信号に変換する。また、データ処理部７０は、変換されたデジタル信号を用いて、測定対象物が発する蛍光の強度を求める。また、データ処理部７０は、変換されたデジタル信号を用いて、レーザ光を照射された測定対象物の情報を取得する。データ処理部７０により求められた各種データは、制御部８０に出力される。
【００２７】
次に、制御部８０について説明する。制御部８０は、フローサイトメータの全体の動作タイミングなどの制御を行う。
図１に示されるように、制御部８０は、液体供給装置１０がサンプル液やシース液を加圧する大きさを制御する。また、制御部８０は、レーザ光照射部５０が測定対象物に照射するレーザ光の偏光方向を制御する。
測定された測定対象物は、容器９０に回収される。
以上が本実施形態のフローサイトメータの概略構成である。
【００２８】
本実施形態の蛍光測定装置によれば、電界印加部４０により電界を印加された測定対象物に対し、レーザ光照射部５０が直線偏光のレーザ光を照射するため、測定対象物にレーザ光を照射した際に発せられる蛍光強度を高めることができる。
【００２９】
（蛍光測定方法）
次に、図３を参照して、本実施形態のフローサイトメータを用いた蛍光測定方法について説明する。図３は、本実施形態の蛍光測定方法の一例を示すフローチャートである。
まず、電界印加部４０が、フローセル２２の内部を流れる測定対象物に電界を印加する（ステップＳ１０１）。
【００３０】
ここで、図４を参照して、電界印加部４０が測定対象物に電界を印加することによる測定対象物の状態の変化について説明する。図４（ａ）は、電界を印加される前の細胞３０の状態を示す図であり、図４（ｂ）は、電界を印加された後の細胞３０の状態を示す図である。
上述したように、細胞３０には予め蛍光色素３２が付与されている。一般に、蛍光色素３２は双極子モーメントを有している。図４に示される矢印は双極子モーメントの方向を示す。図４（ａ）に示されるように、電界を印加される前の細胞３０の蛍光色素３２の双極子モーメントは、ランダムな方向を向いていると考えられる。細胞３０に印加される電界の方向と蛍光色素３２の双極子モーメントの方向の関係は定かではないが、図４（ｂ）に示されるように、電界印加部４０が細胞３０に電界を印加することにより、蛍光色素３２の双極子モーメントの方向は一定の方向を向くと考えられる。
【００３１】
図３に戻り、次に、レーザ光照射部５０が、測定対象物に直線偏光のレーザ光を照射する（ステップＳ１０２）。レーザ光照射部５０が照射するレーザ光の直線偏光の方向は、予め定められている。
次に、受光部６２が、測定対象物にレーザ光が照射された際に発せられる蛍光を受光する（ステップＳ１０３）。
次に、データ処理部７０が、受光部６２が受光した蛍光の情報を用いて、レーザ光を照射された測定対象物が発する蛍光の強度を取得する（ステップＳ１０４）。
次に、制御部８０が、所定数の蛍光強度を取得したか否かを判別する（ステップＳ１０５）。
【００３２】
ステップＳ１０５において、制御部８０が、所定数の蛍光強度を取得していないと判別した場合、制御部８０は、レーザ光照射部５０が測定対象物に照射するレーザ光の偏光方向を変更する（ステップＳ１０６）。具体的には、制御部８０が、波長板５４を回転させることにより、レーザ光の偏光方向を変更する。
次に、ステップＳ１０１に戻り、以後、ステップＳ１０５において、制御部８０が、所定数の蛍光強度を取得したと判別するまで、上述したステップＳ１０１〜Ｓ１０６を繰り返す。
【００３３】
測定対象物に電界を印加した際における蛍光色素３２の双極子モーメントの方向と、直線偏光のレーザ光の偏光方向とが所定の角度になると、レーザ光を照射された測定対象物が発する蛍光強度は強くなる。例えば、測定対象物に電界を印加した際における蛍光色素３２の双極子モーメントの方向と、直線偏光のレーザ光の偏光方向とが一致するときに、レーザ光を照射された測定対象物が発する蛍光強度は強くなると考えられる。そのため、レーザ光の偏光方向を変更した後にステップＳ１０４において測定対象物が発する蛍光強度を取得すると、レーザ光の偏光方向に応じた蛍光強度が取得される。
【００３４】
ステップＳ１０５において、制御部８０が、所定数の蛍光強度を取得したと判別した場合、制御部８０は、蛍光強度が大きくなる方向にレーザ光の偏光方向を制御する（ステップＳ１０７）。例えば、制御部８０は、ステップＳ１０４においてデータ処理部７０が取得した蛍光強度が最大となる位置に、波長板５４を回転させる。
【００３５】
以上説明したように、本実施形態の蛍光測定方法によれば、電界印加部４０により電界を印加された測定対象物に対し、レーザ光照射部５０が直線偏光のレーザ光を照射するため、測定対象物にレーザ光を照射した際に発せられる蛍光強度を高めることができる。
【００３６】
＜第２の実施形態＞
（フローサイトメータの構成）
第１の実施形態のフローサイトメータは、レーザ光照射部５０が照射する直線偏光のレーザ光の偏光方向を変えることにより、測定対象物にレーザ光を照射した際に発せられる蛍光強度を高めるものである。本実施形態のフローサイトメータは、レーザ光照射部５０が照射する直線偏光のレーザ光の偏光方向は一定であるが、電界印加部４０が測定対象物に印加する電界の方向を変えることにより、測定対象物にレーザ光を照射した際に発せられる蛍光強度を高めるものである。
【００３７】
本実施形態のフローサイトメータの構成は、基本的に図１を参照して説明したフローサイトメータの構成と同様である。以下の説明では、第１の実施形態のフローサイトメータと同様の部分の説明は省略し、本実施形態のフローサイトメータが第１の実施形態と異なる部分について主に説明する。
図１に示されるように、本実施形態のフローサイトメータは、液体供給装置１０と、フローセル２２と、電界印加部４０と、レーザ光照射部５０と、受光部６０、６２と、データ処理部７０と、制御部８０と、を備える。液体供給装置１０の構成は第１の実施形態と同様である。
【００３８】
電界印加部４０は、フローセル２２の内部を流れる測定対象物に電界を印加する。ここで、図５を参照して、本実施形態の電界印加部４０の具体的な構成について説明する。図５は、測定対象物がフローセル２２の内部を流れる方向と直交する方向における電界印加部４０の断面図の一例である。
図５に示されるように、本実施形態の電界印加部４０は、４つの電極４２ａ，４２ｂ，４２ｃ，４２ｄを備える。例えば、２つの電極４２ａ，４２ｂの間に電圧を印加することにより、図５の左右方向に電界を印加することができる。また、２つの電極４２ｃ，４２ｄの間に電圧を印加することにより、図５の上下方向に電界を印加することができる。
【００３９】
図１に示されるように、電界印加部４０は制御部８０と接続されている。具体的には、４つの電極４２ａ，４２ｂ，４２ｃ，４２ｄは、それぞれ制御部８０と接続されている。これにより、４つの電極４２ａ，４２ｂ，４２ｃ，４２ｄに印加される電位は個別に制御される。
【００４０】
レーザ光照射部５０の構成は、第１の実施形態と同様である。但し、本実施形態においては、レーザ光照射部５０が照射する直線偏光のレーザ光の偏光方向は一定であるため、直線偏光の偏光方向を変える波長板５４は必ずしも必要ではない。
受光部６０，６２、データ処理部７０の構成は、第１の実施形態と同様である。
【００４１】
次に、制御部８０について説明する。制御部８０は、フローサイトメータの全体の動作タイミングなどの制御を行う。
図１に示されるように、制御部８０は、液体供給装置１０がサンプル液やシース液を加圧する大きさを制御する。また、制御部８０は、電界印加部４０が測定対象物に印加する電界の方向を制御する。
以上が本実施形態のフローサイトメータの概略構成である。
【００４２】
本実施形態の蛍光測定装置によれば、電界印加部４０により電界を印加された測定対象物に対し、レーザ光照射部５０が直線偏光のレーザ光を照射するため、測定対象物にレーザ光を照射した際に発せられる蛍光強度を高めることができる。
【００４３】
（蛍光測定方法）
次に、図６を参照して、本実施形態のフローサイトメータを用いた蛍光測定方法について説明する。図６は、本実施形態の蛍光測定方法の一例を示すフローチャートである。
まず、電界印加部４０が、フローセル２２の内部を流れる測定対象物に電界を印加する（ステップＳ２０１）。例えば、制御部８０が、２つの電極４２ａ，４２ｂの間に電圧を印加することにより、図５の左右方向に電界を印加する。
次に、レーザ光照射部５０が、測定対象物に直線偏光のレーザ光を照射する（ステップＳ２０２）。レーザ光照射部５０が照射するレーザ光の直線偏光の方向は、予め定められている。
次に、受光部６２が、測定対象物にレーザ光が照射された際に発せられる蛍光を受光する（ステップＳ２０３）。
次に、データ処理部７０が、受光部６２が受光した蛍光の情報を用いて、レーザ光を照射された測定対象物が発する蛍光強度を取得する（ステップＳ２０４）。
次に、制御部８０が、所定数の蛍光強度を取得したか否かを判別する（ステップＳ２０５）。
【００４４】
ステップＳ２０５において、制御部８０が、所定数の蛍光強度を取得していないと判別した場合、制御部８０は、レーザ光照射部５０が測定対象物に印加する電界の方向を変更する（ステップＳ２０６）。例えば、図５の上下方向に電界を印加するために、制御部８０が、２つの電極４２ｃ，４２ｄを選択する。
次に、ステップＳ２０１に戻り、以後、ステップＳ２０５において、制御部８０が、所定数の蛍光強度を取得したと判別するまで、上述したステップＳ２０１〜Ｓ２０６を繰り返す。
【００４５】
上述したように、測定対象物に電界を印加した際における蛍光色素３２の双極子モーメントの方向と、直線偏光のレーザ光の偏光方向とが一致するほど、レーザ光を照射された測定対象物が発する蛍光強度は強くなると考えられる。そのため、測定対象物に印加する電界の方向を変更した後にステップＳ２０４において測定対象物が発する蛍光強度を取得すると、電界を印加する方向に応じた蛍光強度が取得される。
【００４６】
ステップＳ２０５において、制御部８０が、所定数の蛍光強度を取得したと判別した場合、制御部８０は、蛍光強度が大きくなる方向に電界を印加する方向を制御する（ステップＳ２０７）。例えば、制御部８０は、ステップＳ２０４においてデータ処理部７０が取得した蛍光強度が最大となる方向に電界を印加するように、電圧を印加する電極を選択する。
以上説明したステップにより求めた条件で測定を行うことにより、測定対象物にレーザ光を照射した際に発せられる蛍光強度を高めることができる。
【００４７】
以上説明したように、本実施形態の蛍光測定方法によれば、電界印加部４０により電界を印加された測定対象物に対し、レーザ光照射部５０が直線偏光のレーザ光を照射するため、測定対象物にレーザ光を照射した際に発せられる蛍光強度を高めることができる。
【００４８】
（変形例１）
上述した実施形態においては、レーザ光源部５２が直線偏光のレーザ光を発する半導体レーザである場合の例について説明したが、レーザ光源部５２は直線偏光のレーザ光を発するレーザ光源に限定されるものではない。
レーザ光源部５２は、円偏光のレーザ光を発するレーザ光源であってもよい。図７は、本変形例のレーザ光照射部５０の一例を示す概略構成図である。図７に示される例では、レーザ光照射部５０は、円偏光のレーザ光を発するレーザ光源部５２と、偏光子５６と、を備える。偏光子５６は、円偏光から直線偏光を生成する。
本変形例のようなレーザ光照射部５０においても、測定対象物に直線偏光のレーザ光を照射することができる。
【００４９】
以上説明したように、本変形例のように、レーザ光照射部５０が円偏光のレーザ光を発するレーザ光源部５２と、偏光子５６とを備える場合であっても、本発明を適用することができる。
【００５０】
（変形例２）
上述した実施形態においては、測定対象物がフローセル２２の内部を流れる方向と直交する方向に、電界印加部４０が電界を印加する例について説明したが、電界印加部４０が電界を印加する方向はこれに限定されるものではない。
電界印加部４０は、測定対象物がフローセル２２の内部を流れる方向の成分を持つ電界を印加する構成であってもよい。図８は、本変形例において、測定対象物がフローセル２２の内部を流れる方向に沿った電界印加部４０の一例を示す断面図である。図８に示される例では、電界印加部４０は、４つの電極４２ａ，４２ｂ，４２ｃ，４２ｄを備える。
【００５１】
電界印加部４０は制御部８０と接続されている。具体的には、４つの電極４２ａ，４２ｂ，４２ｃ，４２ｄは、それぞれ制御部８０と接続されている。これにより、４つの電極４２ａ，４２ｂ，４２ｃ，４２ｄに印加される電位は個別に制御される。
例えば、２つの電極４２ａ，４２ｂの間に電圧を印加することにより、測定対象物がフローセル２２の内部を流れる方向と直交する方向に電界を印加することができる。また、２つの電極４２ａ，４２ｄの間に電圧を印加することにより、測定対象物がフローセル２２の内部を流れる方向の成分を持つ電界を印加することができる。
【００５２】
以上説明したように、本変形例のように、測定対象物がフローセル２２の内部を流れる方向の成分を持つ電界を電界印加部４０が印加する構成であっても、本発明を適用することができる。
【００５３】
以上、本発明の蛍光測定装置及び蛍光測定方法について詳細に説明したが、本発明は上記実施形態に限定されるものではない。以上説明した実施形態や変形例は、適宜、組み合わせることができ、また、本発明の主旨を逸脱しない範囲において、種々の改良や変更をしてもよいのはもちろんである。
【符号の説明】
【００５４】
１０ 液体供給装置
１２ サンプル液タンク
１４ シース液タンク
１６ 配管
１８ サンプル液管
２０ シース液管
２２ フローセル
３０ 細胞
３２ 蛍光色素
４０ 電界印加部
４２ａ，４２ｂ，４２ｃ，４２ｄ 電極
５０ レーザ光照射部
５２ レーザ光源部
５４ 波長板
５６ 偏光子
６０，６２ 受光部
７０ データ処理部
８０ 制御部
９０ 容器
【技術分野】
【０００１】
本発明は、所定の方向に移動する測定対象物にレーザ光を照射した際に発せられる蛍光を受光する蛍光測定装置及び蛍光測定方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
測定対象物にレーザ光を照射し、測定対象物が発する蛍光を受光して、測定対象物の情報を取得する蛍光測定装置が知られている。
蛍光測定装置を用いたフローサイトメータは、蛍光試薬でラベル化された細胞、ＤＮＡ、ＲＮＡ、酵素、蛋白等の測定対象物をシース液に流す。この測定対象物にレーザ光を照射することにより、測定対象物に付与された蛍光色素は蛍光を発する。フローサイトメータは、この蛍光を受光することにより、測定対象物の情報を取得することができる。
【０００３】
また、レーザ光を測定対象物に照射し測定対象物が発する蛍光を受光することにより蛍光緩和時定数を取得する蛍光測定装置が知られている（特許文献１）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特開２００７−１０１３９７号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
測定対象物が発する蛍光を受光する蛍光測定装置においては、測定対象物にレーザ光を照射した際に発せられる蛍光強度が高いほど、測定対象物の情報をより正確に取得することができる。そのため、測定対象物にレーザ光を照射した際に発せられる蛍光強度を高めることができる蛍光測定装置が求められている。
【０００６】
本発明は、測定対象物にレーザ光を照射した際に発せられる蛍光強度を従来よりも高めることができる蛍光測定装置及び蛍光測定方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明の蛍光測定装置は、所定の方向に移動する測定対象物にレーザ光を照射した際に発せられる蛍光を受光する蛍光測定装置であって、前記測定対象物に電界を印加する電界印加部と、前記電界印加部が前記測定対象物に電界を印加する位置よりも、前記所定の方向の下流の位置において、前記測定対象物に直線偏光のレーザ光を照射するレーザ光照射部と、前記測定対象物が前記レーザ光を照射された際に発せられる蛍光を受光する受光部と、を備えることを特徴とする。
【０００８】
また、前記レーザ光照射部は、レーザ光の偏光方向を変える波長板を含むことが好ましい。
【０００９】
また、前記受光部が受光した蛍光に基づいて、前記測定対象物が発する蛍光強度を求めるデータ処理部と、前記データ処理部が求めた蛍光強度に基づいて、前記レーザ光照射部が前記測定対象物に照射するレーザ光の偏光方向を制御する制御部と、を備えることが好ましい。
【００１０】
また、前記受光部が受光した蛍光に基づいて、前記測定対象物が発する蛍光強度を求めるデータ処理部と、前記データ処理部が求めた蛍光強度に基づいて、前記電界印加部が前記測定対象物に印加する電界の方向を制御する制御部と、を備えることが好ましい。
【００１１】
また、前記電界印加部は、異なる複数の方向に電界を印加するように配列された複数の電極を含むことが好ましい。
【００１２】
また、本発明の蛍光測定方法は、所定の方向に移動する測定対象物にレーザ光を照射した際に発せられる蛍光を受光する蛍光測定方法であって、前記測定対象物に電界を印加する電界印加工程と、前記電界印加工程の後に、前記測定対象物に直線偏光のレーザ光を照射する照射工程と、前記測定対象物が前記レーザ光を照射された際に発せられる蛍光を受光する受光工程と、を有することを特徴とする。
【００１３】
また、前記受光工程において受光した蛍光に基づいて、前記測定対象物が発する蛍光強度を求めるデータ処理工程と、前記データ処理工程において求めた蛍光強度に基づいて、前記測定対象物に照射する前記レーザ光の偏光方向を制御する制御工程と、を有することが好ましい。
【００１４】
また、前記受光工程において受光した蛍光に基づいて、前記測定対象物が発する蛍光強度を求めるデータ処理工程と、前記データ処理工程において求めた蛍光強度に基づいて、前記測定対象物に電界を印加する方向を制御する制御工程と、を有することが好ましい。
【発明の効果】
【００１５】
本発明の蛍光測定装置、蛍光測定方法によれば、測定対象物にレーザ光を照射した際に発せられる蛍光強度を従来よりも高めることができる。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１】本実施形態のフローサイトメータの一例を示す概略構成図である。
【図２】図１に示されるレーザ光照射部の一例を示す概略構成図である。
【図３】本実施形態の蛍光測定方法の一例を示すフローチャートである。
【図４】（ａ）は、電界を印加される前の細胞の状態を示す図であり、（ｂ）は、電界を印加された後の細胞の状態を示す図である。
【図５】図１に示される電界印加部の一例を示す断面図である。
【図６】本実施形態の蛍光測定方法の一例を示すフローチャートである。
【図７】変形例１のレーザ光照射部の一例を示す概略構成図である。
【図８】変形例２の電界印加部の一例を示す断面図である。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
以下、本発明の蛍光測定装置、蛍光測定方法を適用したフローサイトメータについて、実施形態に基づいて説明する。
＜第１の実施形態＞
（フローサイトメータの構成）
まず、図１を参照して、本実施形態のフローサイトメータの構成について説明する。図１は、本実施形態のフローサイトメータの一例を示す概略構成図である。フローサイトメータは、測定対象物にレーザ光を照射し、レーザ光を照射された測定対象物が発する蛍光を受光することにより、測定対象物の情報を取得することができる。
図１に示されるように、本実施形態のフローサイトメータは、液体供給装置１０と、フローセル２２と、電界印加部４０と、レーザ光照射部５０と、受光部６０、６２と、データ処理部７０と、制御部８０と、を備える。
【００１８】
液体供給装置１０は、サンプル液タンク１２と、シース液タンク１４と、を備える。サンプル液タンク１２は、細胞などの測定対象物を含むサンプル液を収容する。後述するように、レーザ光照射部５０において測定対象物にレーザ光を照射し、その際に発せられる蛍光から測定対象物の情報を取得するため、サンプル液タンク１２に収容されるサンプル液に含まれる細胞３０には、予め蛍光色素３２が付与されている。蛍光色素３２は、例えば、ＣＦＰ（Cyan Fluorescent Protein）、ＹＦＰ（Yellow Fluorescent Protein）などが用いられる。
シース液タンク１４はシース液を収容する。サンプル液タンク１２とサンプル液管１８とは、配管１６で接続されている。また、シース液タンク１４とシース液管２０とは、配管１６で接続されている。
【００１９】
液体供給装置１０は、不図示のエアポンプを備える。エアポンプを用いてサンプル液タンク１２に収容されているサンプル液を加圧することにより、液体供給装置１０は、配管１６を介してサンプル液管１８にサンプル液を供給する。また、エアポンプを用いてシース液タンク１４に収容されているシース液を加圧することにより、液体供給装置１０は、配管１６を介してシース液管２０にシース液を供給する。
液体供給装置１０がサンプル液やシース液を加圧する大きさは、制御部８０により制御される。
【００２０】
サンプル液管１８の吐出口から吐出されたサンプル液は、シース液に囲まれ、フローセル２２の内部を流れる。フローセル２２の内部では、シース液に囲まれたサンプル液は流体力学的絞り込みを受け、サンプル液は細い液流となる。サンプル液の速度を調整することにより、細い液流のサンプル液の中に細胞を一列に流すことができる。このようにして、フローセル２２の内部を測定対象物が所定の方向に移動する。
【００２１】
電界印加部４０は、フローセル２２の内部を流れる測定対象物に電界を印加する。本実施形態の電界印加部４０は、２つの電極４２ａ，４２ｂを備える。２つの電極４２ａ，４２ｂの間に電圧を印加することにより、測定対象物に電界を印加することができる。
図１に示されるように、電界印加部４０は制御部８０と接続されている。後述するように、電界印加部４０が測定対象物に印加する電界の方向は、制御部８０により制御される。
【００２２】
レーザ光照射部５０は、測定対象物に直線偏光のレーザ光を照射する。図１に示されるように、レーザ光照射部５０が測定対象物にレーザ光を照射する位置は、電界印加部４０が測定対象物に電界を印加する位置よりも、フローセル２２の下流に位置する。
レーザ光照射部５０は制御部８０と接続されている。後述するように、レーザ光照射部５０が測定対象物に照射するレーザ光の偏光方向は制御部８０により制御される。
【００２３】
ここで、図２を参照して、レーザ光照射部５０の詳細な構成について説明する。図２は、本実施形態のレーザ光照射部５０の一例を示す概略構成図である。図２に示されるように、レーザ光照射部５０は、レーザ光源部５２と、波長板５４と、を含む。レーザ光源部５２は、例えば、直線偏光のレーザ光を発する半導体レーザである。
波長板５４は、例えば、直線偏光の偏光方向を変える半波長板である。図２に矢印で示されるように、波長板５４は、レーザ光源部５２から照射されたレーザ光の光軸の周りに回転することができる。波長板５４の角度は、制御部８０により制御される。
【００２４】
次に、図１に戻り、受光部６０，６２について説明する。
受光部６０は、フローセル２２にレーザ光が照射される位置を基準として、レーザ光照射部５０と反対側に配置される。受光部６０は、測定対象物にレーザ光が照射された際に生じる前方散乱光を受光する。受光部６０は、例えば、フォトダイオードなどの光電変換器を備える。受光部６０は、受光した前方散乱光を電気信号に変換して出力する。
受光部６０が出力する電気信号は、フローセル２２にレーザ光が照射される位置を測定対象物が通過するタイミングを知らせるトリガ信号として用いられる。
【００２５】
受光部６２は、フローセル２２にレーザ光が照射される位置を基準として、レーザ光照射部５０からレーザ光が照射される方向とフローセル２２内を測定対象物が流れる方向の相互に垂直な方向に配置される。受光部６２は、測定対象物にレーザ光が照射された際に発せられる蛍光を受光する。受光部６２は、例えば、光電子倍増管などの光電変換器を備える。受光部６２は、受光した蛍光を電気信号に変換して出力する。
受光部６２が出力する電気信号は、フローセル２２にレーザ光が照射される位置を通過する測定対象物を特定するための信号として用いられる。
【００２６】
次に、データ処理部７０について説明する。データ処理部７０は、受光部６２が受光した蛍光の情報を用いて、レーザ光を照射された測定対象物の情報を取得する。データ処理部７０は、受光部６０，６２から出力される電気信号の入力を受け、この電気信号をデジタル信号に変換する。また、データ処理部７０は、変換されたデジタル信号を用いて、測定対象物が発する蛍光の強度を求める。また、データ処理部７０は、変換されたデジタル信号を用いて、レーザ光を照射された測定対象物の情報を取得する。データ処理部７０により求められた各種データは、制御部８０に出力される。
【００２７】
次に、制御部８０について説明する。制御部８０は、フローサイトメータの全体の動作タイミングなどの制御を行う。
図１に示されるように、制御部８０は、液体供給装置１０がサンプル液やシース液を加圧する大きさを制御する。また、制御部８０は、レーザ光照射部５０が測定対象物に照射するレーザ光の偏光方向を制御する。
測定された測定対象物は、容器９０に回収される。
以上が本実施形態のフローサイトメータの概略構成である。
【００２８】
本実施形態の蛍光測定装置によれば、電界印加部４０により電界を印加された測定対象物に対し、レーザ光照射部５０が直線偏光のレーザ光を照射するため、測定対象物にレーザ光を照射した際に発せられる蛍光強度を高めることができる。
【００２９】
（蛍光測定方法）
次に、図３を参照して、本実施形態のフローサイトメータを用いた蛍光測定方法について説明する。図３は、本実施形態の蛍光測定方法の一例を示すフローチャートである。
まず、電界印加部４０が、フローセル２２の内部を流れる測定対象物に電界を印加する（ステップＳ１０１）。
【００３０】
ここで、図４を参照して、電界印加部４０が測定対象物に電界を印加することによる測定対象物の状態の変化について説明する。図４（ａ）は、電界を印加される前の細胞３０の状態を示す図であり、図４（ｂ）は、電界を印加された後の細胞３０の状態を示す図である。
上述したように、細胞３０には予め蛍光色素３２が付与されている。一般に、蛍光色素３２は双極子モーメントを有している。図４に示される矢印は双極子モーメントの方向を示す。図４（ａ）に示されるように、電界を印加される前の細胞３０の蛍光色素３２の双極子モーメントは、ランダムな方向を向いていると考えられる。細胞３０に印加される電界の方向と蛍光色素３２の双極子モーメントの方向の関係は定かではないが、図４（ｂ）に示されるように、電界印加部４０が細胞３０に電界を印加することにより、蛍光色素３２の双極子モーメントの方向は一定の方向を向くと考えられる。
【００３１】
図３に戻り、次に、レーザ光照射部５０が、測定対象物に直線偏光のレーザ光を照射する（ステップＳ１０２）。レーザ光照射部５０が照射するレーザ光の直線偏光の方向は、予め定められている。
次に、受光部６２が、測定対象物にレーザ光が照射された際に発せられる蛍光を受光する（ステップＳ１０３）。
次に、データ処理部７０が、受光部６２が受光した蛍光の情報を用いて、レーザ光を照射された測定対象物が発する蛍光の強度を取得する（ステップＳ１０４）。
次に、制御部８０が、所定数の蛍光強度を取得したか否かを判別する（ステップＳ１０５）。
【００３２】
ステップＳ１０５において、制御部８０が、所定数の蛍光強度を取得していないと判別した場合、制御部８０は、レーザ光照射部５０が測定対象物に照射するレーザ光の偏光方向を変更する（ステップＳ１０６）。具体的には、制御部８０が、波長板５４を回転させることにより、レーザ光の偏光方向を変更する。
次に、ステップＳ１０１に戻り、以後、ステップＳ１０５において、制御部８０が、所定数の蛍光強度を取得したと判別するまで、上述したステップＳ１０１〜Ｓ１０６を繰り返す。
【００３３】
測定対象物に電界を印加した際における蛍光色素３２の双極子モーメントの方向と、直線偏光のレーザ光の偏光方向とが所定の角度になると、レーザ光を照射された測定対象物が発する蛍光強度は強くなる。例えば、測定対象物に電界を印加した際における蛍光色素３２の双極子モーメントの方向と、直線偏光のレーザ光の偏光方向とが一致するときに、レーザ光を照射された測定対象物が発する蛍光強度は強くなると考えられる。そのため、レーザ光の偏光方向を変更した後にステップＳ１０４において測定対象物が発する蛍光強度を取得すると、レーザ光の偏光方向に応じた蛍光強度が取得される。
【００３４】
ステップＳ１０５において、制御部８０が、所定数の蛍光強度を取得したと判別した場合、制御部８０は、蛍光強度が大きくなる方向にレーザ光の偏光方向を制御する（ステップＳ１０７）。例えば、制御部８０は、ステップＳ１０４においてデータ処理部７０が取得した蛍光強度が最大となる位置に、波長板５４を回転させる。
【００３５】
以上説明したように、本実施形態の蛍光測定方法によれば、電界印加部４０により電界を印加された測定対象物に対し、レーザ光照射部５０が直線偏光のレーザ光を照射するため、測定対象物にレーザ光を照射した際に発せられる蛍光強度を高めることができる。
【００３６】
＜第２の実施形態＞
（フローサイトメータの構成）
第１の実施形態のフローサイトメータは、レーザ光照射部５０が照射する直線偏光のレーザ光の偏光方向を変えることにより、測定対象物にレーザ光を照射した際に発せられる蛍光強度を高めるものである。本実施形態のフローサイトメータは、レーザ光照射部５０が照射する直線偏光のレーザ光の偏光方向は一定であるが、電界印加部４０が測定対象物に印加する電界の方向を変えることにより、測定対象物にレーザ光を照射した際に発せられる蛍光強度を高めるものである。
【００３７】
本実施形態のフローサイトメータの構成は、基本的に図１を参照して説明したフローサイトメータの構成と同様である。以下の説明では、第１の実施形態のフローサイトメータと同様の部分の説明は省略し、本実施形態のフローサイトメータが第１の実施形態と異なる部分について主に説明する。
図１に示されるように、本実施形態のフローサイトメータは、液体供給装置１０と、フローセル２２と、電界印加部４０と、レーザ光照射部５０と、受光部６０、６２と、データ処理部７０と、制御部８０と、を備える。液体供給装置１０の構成は第１の実施形態と同様である。
【００３８】
電界印加部４０は、フローセル２２の内部を流れる測定対象物に電界を印加する。ここで、図５を参照して、本実施形態の電界印加部４０の具体的な構成について説明する。図５は、測定対象物がフローセル２２の内部を流れる方向と直交する方向における電界印加部４０の断面図の一例である。
図５に示されるように、本実施形態の電界印加部４０は、４つの電極４２ａ，４２ｂ，４２ｃ，４２ｄを備える。例えば、２つの電極４２ａ，４２ｂの間に電圧を印加することにより、図５の左右方向に電界を印加することができる。また、２つの電極４２ｃ，４２ｄの間に電圧を印加することにより、図５の上下方向に電界を印加することができる。
【００３９】
図１に示されるように、電界印加部４０は制御部８０と接続されている。具体的には、４つの電極４２ａ，４２ｂ，４２ｃ，４２ｄは、それぞれ制御部８０と接続されている。これにより、４つの電極４２ａ，４２ｂ，４２ｃ，４２ｄに印加される電位は個別に制御される。
【００４０】
レーザ光照射部５０の構成は、第１の実施形態と同様である。但し、本実施形態においては、レーザ光照射部５０が照射する直線偏光のレーザ光の偏光方向は一定であるため、直線偏光の偏光方向を変える波長板５４は必ずしも必要ではない。
受光部６０，６２、データ処理部７０の構成は、第１の実施形態と同様である。
【００４１】
次に、制御部８０について説明する。制御部８０は、フローサイトメータの全体の動作タイミングなどの制御を行う。
図１に示されるように、制御部８０は、液体供給装置１０がサンプル液やシース液を加圧する大きさを制御する。また、制御部８０は、電界印加部４０が測定対象物に印加する電界の方向を制御する。
以上が本実施形態のフローサイトメータの概略構成である。
【００４２】
本実施形態の蛍光測定装置によれば、電界印加部４０により電界を印加された測定対象物に対し、レーザ光照射部５０が直線偏光のレーザ光を照射するため、測定対象物にレーザ光を照射した際に発せられる蛍光強度を高めることができる。
【００４３】
（蛍光測定方法）
次に、図６を参照して、本実施形態のフローサイトメータを用いた蛍光測定方法について説明する。図６は、本実施形態の蛍光測定方法の一例を示すフローチャートである。
まず、電界印加部４０が、フローセル２２の内部を流れる測定対象物に電界を印加する（ステップＳ２０１）。例えば、制御部８０が、２つの電極４２ａ，４２ｂの間に電圧を印加することにより、図５の左右方向に電界を印加する。
次に、レーザ光照射部５０が、測定対象物に直線偏光のレーザ光を照射する（ステップＳ２０２）。レーザ光照射部５０が照射するレーザ光の直線偏光の方向は、予め定められている。
次に、受光部６２が、測定対象物にレーザ光が照射された際に発せられる蛍光を受光する（ステップＳ２０３）。
次に、データ処理部７０が、受光部６２が受光した蛍光の情報を用いて、レーザ光を照射された測定対象物が発する蛍光強度を取得する（ステップＳ２０４）。
次に、制御部８０が、所定数の蛍光強度を取得したか否かを判別する（ステップＳ２０５）。
【００４４】
ステップＳ２０５において、制御部８０が、所定数の蛍光強度を取得していないと判別した場合、制御部８０は、レーザ光照射部５０が測定対象物に印加する電界の方向を変更する（ステップＳ２０６）。例えば、図５の上下方向に電界を印加するために、制御部８０が、２つの電極４２ｃ，４２ｄを選択する。
次に、ステップＳ２０１に戻り、以後、ステップＳ２０５において、制御部８０が、所定数の蛍光強度を取得したと判別するまで、上述したステップＳ２０１〜Ｓ２０６を繰り返す。
【００４５】
上述したように、測定対象物に電界を印加した際における蛍光色素３２の双極子モーメントの方向と、直線偏光のレーザ光の偏光方向とが一致するほど、レーザ光を照射された測定対象物が発する蛍光強度は強くなると考えられる。そのため、測定対象物に印加する電界の方向を変更した後にステップＳ２０４において測定対象物が発する蛍光強度を取得すると、電界を印加する方向に応じた蛍光強度が取得される。
【００４６】
ステップＳ２０５において、制御部８０が、所定数の蛍光強度を取得したと判別した場合、制御部８０は、蛍光強度が大きくなる方向に電界を印加する方向を制御する（ステップＳ２０７）。例えば、制御部８０は、ステップＳ２０４においてデータ処理部７０が取得した蛍光強度が最大となる方向に電界を印加するように、電圧を印加する電極を選択する。
以上説明したステップにより求めた条件で測定を行うことにより、測定対象物にレーザ光を照射した際に発せられる蛍光強度を高めることができる。
【００４７】
以上説明したように、本実施形態の蛍光測定方法によれば、電界印加部４０により電界を印加された測定対象物に対し、レーザ光照射部５０が直線偏光のレーザ光を照射するため、測定対象物にレーザ光を照射した際に発せられる蛍光強度を高めることができる。
【００４８】
（変形例１）
上述した実施形態においては、レーザ光源部５２が直線偏光のレーザ光を発する半導体レーザである場合の例について説明したが、レーザ光源部５２は直線偏光のレーザ光を発するレーザ光源に限定されるものではない。
レーザ光源部５２は、円偏光のレーザ光を発するレーザ光源であってもよい。図７は、本変形例のレーザ光照射部５０の一例を示す概略構成図である。図７に示される例では、レーザ光照射部５０は、円偏光のレーザ光を発するレーザ光源部５２と、偏光子５６と、を備える。偏光子５６は、円偏光から直線偏光を生成する。
本変形例のようなレーザ光照射部５０においても、測定対象物に直線偏光のレーザ光を照射することができる。
【００４９】
以上説明したように、本変形例のように、レーザ光照射部５０が円偏光のレーザ光を発するレーザ光源部５２と、偏光子５６とを備える場合であっても、本発明を適用することができる。
【００５０】
（変形例２）
上述した実施形態においては、測定対象物がフローセル２２の内部を流れる方向と直交する方向に、電界印加部４０が電界を印加する例について説明したが、電界印加部４０が電界を印加する方向はこれに限定されるものではない。
電界印加部４０は、測定対象物がフローセル２２の内部を流れる方向の成分を持つ電界を印加する構成であってもよい。図８は、本変形例において、測定対象物がフローセル２２の内部を流れる方向に沿った電界印加部４０の一例を示す断面図である。図８に示される例では、電界印加部４０は、４つの電極４２ａ，４２ｂ，４２ｃ，４２ｄを備える。
【００５１】
電界印加部４０は制御部８０と接続されている。具体的には、４つの電極４２ａ，４２ｂ，４２ｃ，４２ｄは、それぞれ制御部８０と接続されている。これにより、４つの電極４２ａ，４２ｂ，４２ｃ，４２ｄに印加される電位は個別に制御される。
例えば、２つの電極４２ａ，４２ｂの間に電圧を印加することにより、測定対象物がフローセル２２の内部を流れる方向と直交する方向に電界を印加することができる。また、２つの電極４２ａ，４２ｄの間に電圧を印加することにより、測定対象物がフローセル２２の内部を流れる方向の成分を持つ電界を印加することができる。
【００５２】
以上説明したように、本変形例のように、測定対象物がフローセル２２の内部を流れる方向の成分を持つ電界を電界印加部４０が印加する構成であっても、本発明を適用することができる。
【００５３】
以上、本発明の蛍光測定装置及び蛍光測定方法について詳細に説明したが、本発明は上記実施形態に限定されるものではない。以上説明した実施形態や変形例は、適宜、組み合わせることができ、また、本発明の主旨を逸脱しない範囲において、種々の改良や変更をしてもよいのはもちろんである。
【符号の説明】
【００５４】
１０ 液体供給装置
１２ サンプル液タンク
１４ シース液タンク
１６ 配管
１８ サンプル液管
２０ シース液管
２２ フローセル
３０ 細胞
３２ 蛍光色素
４０ 電界印加部
４２ａ，４２ｂ，４２ｃ，４２ｄ 電極
５０ レーザ光照射部
５２ レーザ光源部
５４ 波長板
５６ 偏光子
６０，６２ 受光部
７０ データ処理部
８０ 制御部
９０ 容器
【特許請求の範囲】
【請求項１】
所定の方向に移動する測定対象物にレーザ光を照射した際に発せられる蛍光を受光する蛍光測定装置であって、
前記測定対象物に電界を印加する電界印加部と、
前記電界印加部が前記測定対象物に電界を印加する位置よりも、前記所定の方向の下流の位置において、前記測定対象物に直線偏光のレーザ光を照射するレーザ光照射部と、
前記測定対象物が前記レーザ光を照射された際に発せられる蛍光を受光する受光部と、を備えることを特徴とする蛍光測定装置。
【請求項２】
前記レーザ光照射部は、レーザ光の偏光方向を変える波長板を含む、請求項１に記載の蛍光測定装置。
【請求項３】
前記受光部が受光した蛍光に基づいて、前記測定対象物が発する蛍光強度を求めるデータ処理部と、
前記データ処理部が求めた蛍光強度に基づいて、前記レーザ光照射部が前記測定対象物に照射するレーザ光の偏光方向を制御する制御部と、
を備える、請求項１又は２に記載の蛍光測定装置。
【請求項４】
前記受光部が受光した蛍光に基づいて、前記測定対象物が発する蛍光強度を求めるデータ処理部と、
前記データ処理部が求めた蛍光強度に基づいて、前記電界印加部が前記測定対象物に印加する電界の方向を制御する制御部と、
を備える、請求項１乃至３のいずれかに記載の蛍光測定装置。
【請求項５】
前記電界印加部は、異なる複数の方向に電界を印加するように配列された複数の電極を含む、請求項１乃至４のいずれかに記載の蛍光測定装置。
【請求項６】
所定の方向に移動する測定対象物にレーザ光を照射した際に発せられる蛍光を受光する蛍光測定方法であって、
前記測定対象物に電界を印加する電界印加工程と、
前記電界印加工程の後に、前記測定対象物に直線偏光のレーザ光を照射する照射工程と、
前記測定対象物が前記レーザ光を照射された際に発せられる蛍光を受光する受光工程と、
を有することを特徴とする蛍光測定方法。
【請求項７】
前記受光工程において受光した蛍光に基づいて、前記測定対象物が発する蛍光強度を求めるデータ処理工程と、
前記データ処理工程において求めた蛍光強度に基づいて、前記測定対象物に照射する前記レーザ光の偏光方向を制御する制御工程と、
を有する、請求項６に記載の蛍光測定方法。
【請求項８】
前記受光工程において受光した蛍光に基づいて、前記測定対象物が発する蛍光強度を求めるデータ処理工程と、
前記データ処理工程において求めた蛍光強度に基づいて、前記測定対象物に電界を印加する方向を制御する制御工程と、
を有する、請求項６又は７に記載の蛍光測定方法。
【請求項１】
所定の方向に移動する測定対象物にレーザ光を照射した際に発せられる蛍光を受光する蛍光測定装置であって、
前記測定対象物に電界を印加する電界印加部と、
前記電界印加部が前記測定対象物に電界を印加する位置よりも、前記所定の方向の下流の位置において、前記測定対象物に直線偏光のレーザ光を照射するレーザ光照射部と、
前記測定対象物が前記レーザ光を照射された際に発せられる蛍光を受光する受光部と、を備えることを特徴とする蛍光測定装置。
【請求項２】
前記レーザ光照射部は、レーザ光の偏光方向を変える波長板を含む、請求項１に記載の蛍光測定装置。
【請求項３】
前記受光部が受光した蛍光に基づいて、前記測定対象物が発する蛍光強度を求めるデータ処理部と、
前記データ処理部が求めた蛍光強度に基づいて、前記レーザ光照射部が前記測定対象物に照射するレーザ光の偏光方向を制御する制御部と、
を備える、請求項１又は２に記載の蛍光測定装置。
【請求項４】
前記受光部が受光した蛍光に基づいて、前記測定対象物が発する蛍光強度を求めるデータ処理部と、
前記データ処理部が求めた蛍光強度に基づいて、前記電界印加部が前記測定対象物に印加する電界の方向を制御する制御部と、
を備える、請求項１乃至３のいずれかに記載の蛍光測定装置。
【請求項５】
前記電界印加部は、異なる複数の方向に電界を印加するように配列された複数の電極を含む、請求項１乃至４のいずれかに記載の蛍光測定装置。
【請求項６】
所定の方向に移動する測定対象物にレーザ光を照射した際に発せられる蛍光を受光する蛍光測定方法であって、
前記測定対象物に電界を印加する電界印加工程と、
前記電界印加工程の後に、前記測定対象物に直線偏光のレーザ光を照射する照射工程と、
前記測定対象物が前記レーザ光を照射された際に発せられる蛍光を受光する受光工程と、
を有することを特徴とする蛍光測定方法。
【請求項７】
前記受光工程において受光した蛍光に基づいて、前記測定対象物が発する蛍光強度を求めるデータ処理工程と、
前記データ処理工程において求めた蛍光強度に基づいて、前記測定対象物に照射する前記レーザ光の偏光方向を制御する制御工程と、
を有する、請求項６に記載の蛍光測定方法。
【請求項８】
前記受光工程において受光した蛍光に基づいて、前記測定対象物が発する蛍光強度を求めるデータ処理工程と、
前記データ処理工程において求めた蛍光強度に基づいて、前記測定対象物に電界を印加する方向を制御する制御工程と、
を有する、請求項６又は７に記載の蛍光測定方法。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【公開番号】特開２０１１−１４１１９０（Ｐ２０１１−１４１１９０Ａ）
【公開日】平成２３年７月２１日（２０１１．７．２１）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１０−１８４９（Ｐ２０１０−１８４９）
【出願日】平成２２年１月７日（２０１０．１．７）
【出願人】（０００００５９０２）三井造船株式会社 (1,723)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２３年７月２１日（２０１１．７．２１）
【国際特許分類】
【出願日】平成２２年１月７日（２０１０．１．７）
【出願人】（０００００５９０２）三井造船株式会社 (1,723)
【Ｆターム（参考）】
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