血栓予防組成物
【課題】 現在、血栓症を解決するために、血栓の生成を抑制する抗血栓剤及び血栓形成予防剤と、生成された血栓を溶解させる血栓溶解剤の研究開発が主に行われている。医薬品が血栓の生成予防に使用されてはいるものの、血栓除去にあまり著しい効果を現わすことが無く、深刻な副作用を誘発するため、最近では、医薬品による治療よりは食生活を通じて病気を予防し、体質を調節又は活性化させる機能を持った成分又は食品成分に対する研究も注目されるようになってきている。本発明は、幅広い飲食品に使用可能な血栓予防組成物及びそれを含有する飲食品、医薬部外品及び医薬品を提供することを目的とする。
【解決手段】 ひじき又はその抽出物を含有することにより上記課題を解決する。
【解決手段】 ひじき又はその抽出物を含有することにより上記課題を解決する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ひじき又はその抽出物を含有する血栓予防組成物及びそれを含有する飲食品及び医薬品に関する。
【背景技術】
【０００２】
血栓は、フィブリノーゲンというタンパク質が活性化され、フィブリンに転換されながら、血小板、白血球等と共に、不溶性の重合体となって血管の内壁に固まってできる。身体が正常なときには、この血栓のもととなるフィブリンを溶かす働きをする線溶酵素が血栓予防をして、線溶酵素が不足するとフィブリンを溶解できなくなり、血栓ができるようになる。
形成された血栓は血管に沈着し、血管の断面積を減少させ、血液の循環を阻害し、その結果、血液が細胞及び組職で栄養分と酸素を正常に供給することができず、また、細胞及び組織の老廃物を排出できなくなり、毒性が蓄積される等の問題点が発生するようになる。
血管の中で、血栓といわれる血液の固まりが引き起こす症状を広義の血栓症（以下、単に「血栓症」と記載した場合は、広義の血栓症をいう）と呼び、血栓が原因になって起こる病態は狭義の血栓症と塞栓症に分けられる。狭義の血栓症は血栓が形成個所で血流を部分的にあるいは完全に閉塞することによる症状で、塞栓症は血栓が形成個所から剥がれて血流によって移動し、他の個所で血流を部分的にあるいは完全に閉塞することによって起こる病態のことを指す。
このような血栓症は血栓が生じた血管の部位によって多様な疾病を誘発するようになる。その中でも特に脳血管や心臓血管に生じた場合には脳卒中、脳出血、脳梗塞、心不全症、心筋梗塞、心臓麻痺等深刻な症状が発生し、半身不随を引き起こし、ひどい場合には死亡することもある。
【０００３】
現在、血栓症を解決するために、血栓の生成を抑制する抗血栓剤及び血栓形成予防剤と、生成された血栓を溶解させる血栓溶解剤の研究開発が主に行われている。
抗血栓剤又は血栓形成予防剤としては、血管壁への血小板の付着を阻害することで血液の凝固を阻害するアスピリンと、体内の内因性血液凝固経路を遮断するヘパリン（Ｈｅｐａｒｉｎ）、クマリン（Ｃｏｕｍａｒｉｎ）等が現在臨床で使われている。また最近はエイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）、プロスタサイクリン（Ｐｒｏｓｔａｃｙｃｌｉｎｅ；ＰＧ１２）誘導体等が商品化されている。しかし、これら薬剤は特異性がないため、生体内においては血栓以外の部分にも影響を及ぼし、生体内に残存した場合、出血等を引き起こす可能性がある。その他に、ヒルジン（ｈｉｒｕｄｉｎ）、合成抗トロンビン（ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ ａｎｔｉｔｈｒｏｍｂｉｎ）、チクロピジン（Ｔｉｃｌｏｐｉｄｉｎ）等の抗血栓活性も報告されているが、まだ実用化には至っていない。
血栓溶解剤としては、ストレプトキナーゼ（ｓｔｒｅｐｔｏｋｉｎａｓｅ）、ウロキナーゼ（ｕｒｏｋｉｎａｓｅ）のようなプラスミノゲンアクチベーター（ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ ａｃｔｉｖａｔｏｒ）を血栓が生成された患者に静脈注射して、体内の血栓溶解系を活性化する治療法が一般的に使われている。これらが血栓を溶解させる効果は、幾多の臨床実験で立証されたが、抗血栓剤又は血栓形成予防剤と同様、血栓に対する特異性が無く、血栓を治療する間に全身出血する等の副作用がある。また組職型プラスミノゲンアクチベーター（ｔｉｓｓｕｅ−ｔｙｐｅ ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ ａｃｔｉｖａｔｏｒ，ｔＰＡ）は血栓に対する選択性が高く、理想的な血栓溶解剤と考えられたが、実際に臨床治療に適用した結果、程度の差はあるが相変らず全身出血等の副作用があった。また血液内での半減期が非常に短く、薬効の持続時間が短いため、体内で薬効を維持するためには投与量が多くなければならず、そのため治療費用が従来の血栓溶解剤に比べ非常に高いという問題点がある。
【０００４】
このような医薬品が血栓の生成予防に使用されてはいるものの、血栓除去にあまり著しい効果を現わすことが無く、深刻な副作用を誘発するため、最近では、医薬品による治療よりは食生活を通じて病気を予防し、体質を調節又は活性化させる機能を持った成分又は食品成分に対する研究も注目されるようになってきている。
食品成分としては、ナットウキナーゼや多価不飽和脂肪酸、グルコサミン、タマネギの薄皮（例えば、特許文献１参照。）等の素材が知られているが、風味や性状等に問題があり、幅広く食品に応用できなかった。
また、最近では、キウイフルーツ抽出物（例えば、特許文献２参照。）についての特許が公開されたが、中性域での活性が弱いという欠点がある。
【０００５】
【特許文献１】特開２００２−１７１９３４号公報（第２頁）
【特許文献２】特開２００３−１７１２９４号公報（第２頁−５頁）
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明の課題は、幅広い飲食品に使用可能な血栓予防組成物及びそれを含有する飲食品、医薬部外品及び医薬品を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは様々な天然植物を利用して抗凝固成分を捜す目的で、多角的に研究検討した結果、ひじき又はその抽出物の酵素処理物に優れた抗凝固効果があることを見出し、本発明を完成させた。
【発明の効果】
【０００８】
本発明で得られたひじき又はその抽出物を含有する血栓予防組成物は、活性化部分トロンボプラスチン時間（Ａｃｔｉｖａｔｅｄ Ｐａｒｔｉａｌ Ｔｈｒｏｍｂｏｐｌａｓｔｉｎ Ｔｉｍｅ；ＡＰＴＴ）を測定した結果から、内因性経路に関与する因子を不活性化して、フィブリン形成を阻害し、血管内の血栓生成を抑制する効果が高いことがわかった。
特にひじきは、昔から人間が日常食生活に使用してきた天然植物由来なので、従来使用していた薬剤とは違い、体内で出血を起こす副作用が無く安全である。
本発明はひじき又はその抽出物を含有する血栓予防組成物を各種飲食品及び医薬品等に利用して、血栓の生成を抑制することで脳出血、脳梗塞、心筋梗塞、動脈硬化及び冠状動脈症のような心血関係疾患を予防することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００９】
本願発明に用いるひじきとは、学名：ヒジキア・フシフォルミス（Ｈｉｊｉｋｉａ ｆｕｓｉｆｏｒｕｍｉｓ）といい、褐藻類、ホンダワラ科に属する海藻である。北海道日高地方以南の太平洋岸、瀬戸内海、兵庫県付近以西の日本海側、九州沿岸に分布する日本近海の特産である。乾物は黒褐色であるが、生の時は黄褐色をしている。ひじきは波の荒い外洋の岩礁上、低潮線付近に生育し、体は濃緑褐色、根は絡み合った繊維状でよく発達し、岩上を這うように成長する。体の茎は軟骨質で円柱状、太さ３〜４ｍｍ、長さ０．５〜１ｍｍであり、茎から細長い円柱状の葉と小枝を側出し、葉は幼体では多肉質で平たく、成体では葉は線形となり３〜１０ｃｍ、多くは先端が尖り、中がしっかりしているが、しばしば先端が膨らむ棍棒状になったり、中空で気泡をかねるものもあり、春から初夏にかけて繁茂する。渋みが多くそのまま生では食べられないが、鉄釜で数時間水煮することによって渋みが取れ、色素も除かれ、これを日光で乾燥したのが「干しひじき」である。干しひじきのうち小枝部分だけを集めたものが「芽ひじき、米ひじき又は姫ひじき」、茎状の長い部分（主軸部分）ものを「長ひじき」と呼ばれている。芽ひじきは水につけて戻すと、かさで３倍、重さで約６倍になる。また、別称としてひずきも、ねいり、ちょうせんひじき、みちひじき等とも称されている。
【００１０】
本発明において、ひじきの部位としては、特に限定されるものではないが、小枝部分及び主軸部分が用いられる。その形態は、特に限定するものではなく、生ひじき、干しひじき、乾燥ひじき、ひじき粉末等のいずれでも良い。
ひじき粉末の場合は、そのままでも使用できるが、水不溶性成分を含んでいるので、抽出により、水不溶性成分が除去されていることが好ましい。
抽出の際、生ひじき、干しひじき、乾燥ひじきを使用する場合は、抽出効率を高めるためにミキサー等により破砕、均質化したものを用いることが好ましい。
干しひじき又は乾燥ひじきを使用する場合は、抽出効率を高めるために４０メッシュ以下の粒度になるように粉砕されていることが好ましい。
【００１１】
抽出方法は、抽出溶媒、抽出温度等、特に限定されるものではなく、抽出溶媒としては、水、塩基、酸、親水性溶媒、アセトンを使うことができる。親水性溶媒はメチルアルコール、エチルアルコール、ｎ−プロピルアルコール、イソプロピルアルコール、ブチルアルコールの低級アルコール群より選ばれる１種類以上が操作性、抽出効率の点から好ましい。特に好ましくは、水、塩基、酸のいずれかである。
酸又は塩基を抽出溶媒に使用する場合、抽出物を中和させることが好ましい。中和反応によって生成された塩は、透析法やゲル濾過等、公知の方法により、取り除くことができる。水を抽出溶媒として用いた場合には、上記のような中和反応は必要なく、生成された塩を取り除く必要もないため、水を用いることが更に好ましい。
この時使用する酸としては、特に限定するものではなく、大部分の酸を使うことができるが、好ましくは、入手しやすい及び操作性点により塩酸、硫酸より選ばれる１種又は両者の併用である。
また、塩基としては、特に限定するものではなく、大部分の塩基を使うことができるが、好ましくは、水酸化ナトリウム、水酸化カリウムより選ばれる１種又は両者の併用である。
抽出に使用される酸又は塩基の濃度は、特に限定するものではなく、酸又は塩基の強さによって変化するが、操作性及び抽出効率の点より、０．０１〜０．５モルの濃度を使用することが好ましい。
【００１２】
上記の抽出物は、そのままでも使用できるが、濾過、遠心分離及び分留により、不溶性物質及び溶媒を取り除くことにより、血栓予防効果が高くなり、応用範囲も広がるので好ましい。
不溶性物質及び溶媒を取り除いた後、果汁又は抽出液をそのまま又は濃縮した後に有機溶媒用いて分配を行い、それぞれの溶媒可溶画分を得る。これら溶媒可溶画分は、更に血栓予防効果が高くなるので好ましい。有機溶媒としてはメチルアルコール、エチルアルコール、ｎ−プロピルアルコール、イソプロピルアルコール、ブチルアルコールの低級アルコールや酢酸エチル、酢酸ブチル、ジエチルエーテル、メチルエーテル、メチルイソブチルケトン、ヘキサン、アセトン又はクロロホルムが使用できる。また可溶画分の純度を上げる為には、他の疎水性溶媒による分配を組み合わせることもできる。これら溶媒の濃度としては、特に限定するものではないが、収率及び効果の点より、終濃度として２０〜８０％が好ましく、２０〜６０％が更に好ましい。
さらに純度を高める為に、フェノール系、スチレン系、アクリル酸系、エポキシアミン系、ピリジン系、メタクリル系など母体とした疎水性樹脂を用いることも可能である。その場合、樹脂吸着後の溶離液としては、メチルアルコール、エチルアルコール、ｎ−プロピルアルコール、イソプロピルアルコール、ブチルアルコールなどの低級アルコール及びアセトンを単独又は水溶液として使用できる。
抽出物及び画分はそのままでの使用も可能だが、必要であれば噴霧乾燥や凍結乾燥等の手段により乾燥粉末化させて使用することも可能である。
【００１３】
本願発明において血栓予防効果は、例えば、内因性血液凝固システムに対する抗血液凝固活性を測定する方法である活性化部分トロンボプラスチン時間（ＡＰＴＴ）を測定することにより確認することができる。
【００１４】
本願発明の血栓予防組成物は、飲食品、医薬品、飼料等に応用でき、好ましくは、人が手軽に摂食できる飲食品又は医薬品が好ましい。
本願発明における飲食品とは溶液、懸濁物、粉末、固体成形物等経口摂取可能な形態であれば良く特に限定するものではない。より具体的には、即席麺、レトルト食品、缶詰、電子レンジ食品、即席スープ・みそ汁類、フリーズドライ食品等の即席食品類、清涼飲料、果汁飲料、野菜飲料、豆乳飲料、コーヒー飲料、茶飲料、粉末飲料、濃縮飲料、栄養飲料、アルコール飲料等の飲料類、パン、パスタ、麺、ケーキミックス、から揚げ粉、パン粉等の小麦粉製品、飴、キャラメル、チューイングガム、チョコレート、クッキー、ビスケット、ケーキ、パイ、スナック、クラッカー、和菓子、デザート菓子等の菓子類、ソース、トマト加工調味料、風味調味料、調理ミックス、たれ類、ドレッシング類、つゆ類、カレー・シチューの素等の調味料、加工油脂、バター、マーガリン、マヨネーズ等の油脂類、乳飲料、ヨーグルト類、乳酸菌飲料、アイスクリーム類、クリーム類等の乳製品、冷凍食品、魚肉ハム・ソーセージ、水産練り製品等の水産加工品、畜肉ハム・ソーセージ等の畜産加工品、農産缶詰、ジャム・マーマレード類、漬け物、煮豆、シリアル等の農産加工品、栄養食品、錠剤、カプセル等が例示される。
【００１５】
本願発明の血栓予防組成物の飲食品としての摂取量は、本発明の病気の状態、病人の体重、年齢、体質、体調等によって調整されるべきであるが、一般に１日あたり、血栓予防組成物として０．０５ｇ〜２０ｇ、好ましくは０．１ｇ〜５ｇの範囲で適宜選択することができる。これを病気の状態や食品等の形態によって１日１回ないし数回にわけて摂取することができる。
【００１６】
本願発明において、血栓予防組成物又は、それを含有する飲食品等に加工する際に、各種栄養成分を強化することができる。
強化できる栄養成分としては、ビタミンＡ、ビタミンＢ１、ビタミンＢ２、ビタミンＢ６、ビタミンＢ１２、ビタミンＣ、ビタミンＤ、ビタミンＥ、ナイアシン（ニコチン酸）、パントテン酸、葉酸等のビタミン類、リジン、スレオニン、トリプトファン等の必須アミノ酸類や、カルシウム、マグネシウム、鉄、亜鉛、銅等のミネラル類及び、例えば、α−リノレン酸、ＥＰＡ、ＤＨＡ、月見草油、オクタコサノール、カゼインホスホペプチド（ＣＰＰ）、カゼインカルシウムペプチド（ＣＣＰ）、水溶性食物繊維、不溶性食物繊維、オリゴ糖等の人の健康に寄与する物質類、その他の食品や食品添加物として認可されている有用物質の１種又は２種以上が使用できる。
【００１７】
本願発明における医薬部外品及び医薬品とは、経口または非経口投与に適した賦形剤、その他の添加剤を用いて、常法に従って、経口製剤または注射剤として調製することができる。好ましいのは、経口製剤であり、最も好ましいのは、容易に服用でき且つ保存、持ち運びに便利な経口固形製剤である。
経口固形製剤としては、錠剤、散剤、細粒剤、顆粒剤、カプセル剤、丸剤、徐放剤等が用いられる。このような固形製剤においては、適宜の薬理学的に許容され得る坦体、賦形剤（例えばデンプン、乳糖、白糖、炭酸カルシウム、リン酸カルシウムなど）、結合剤（例えばデンプン、アラビアゴム、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、結晶セルロース、アルギン酸、ゼラチン、ポリビニルピロリドンなど）、滑沢剤（例えばステアリン酸、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウムなど）、崩壊剤（例えばカルボキシメチルセルロース、タルクなど）、などと混合し、常法により錠剤、散剤、細粒剤、顆粒剤、カプセル剤、丸剤、徐放剤等を調整することが出来る。経口液状製剤は、製薬学的に許容される乳濁剤、溶液剤、懸濁剤、シロップ剤、エリキシル剤等を含み、一般的に用いられる不活性な希釈剤、例えば精製水、エタノールを含む。この組成物は不活性な希釈剤以外に湿潤剤、懸濁剤のような補助剤、甘味剤、風味剤、芳香剤、防腐剤を含有していてもよい。
非経口投与しての注射剤としては、無菌の水性又は非水性の溶液剤、懸濁剤、乳濁剤を包含する。水性の溶液剤、懸濁剤の希釈剤としては、例えば注射用蒸留水及び生理食塩水が含まれる。非水溶性の溶液剤、懸濁剤の希釈剤としては、例えばプロピレングリコール、ポリエチレングリコール、オリーブ油のような植物油、エタノールのようなアルコール類、ポリソルベート８０等がある。このような組成物は、さらに防腐剤、湿潤剤、乳化剤、分散剤、安定化剤（例えばラクトース）、溶解補助剤（例えば、グルタミン酸、アスパラギン酸）のような補助剤を含んでもよい。これらは例えばバクテリア保管フィルターを通す濾過、殺菌剤の配合又は照射によって無菌化される。これらはまた無菌の固体組成物を製造し、使用前に無菌水又は無菌の注射用溶媒に溶解して使用することもできる。
本願発明の血栓予防組成物の医薬品としての投与量は、投与ルート、疾患の症状、投与対象の年齢、性別等を考慮して個々の場合に応じて適宜決定されるが、通常、成人においては体重１Ｋｇ当たり１ｍｇ〜４０ｍｇ／日、好ましくは２ｍｇ〜１０ｍｇ／日である。
【００１８】
以下本発明を、実施例にて詳細に説明するが、次の実施例は、本発明の範囲を限定するものではない。
【実施例】
【００１９】
（実施例１）血栓予防組成物の調製１
乾燥ひじきを４０メッシュ以下に粉砕し、その粉末１００ｇに、蒸留水３Ｌを加え、１００℃で３時間抽出した。その後、遠心分離（８５００ｒｐｍ、１０分間）し、その上清を濾過し、抽出物と残渣を分離した。その濾液を減圧濃縮し、その後、凍結乾燥し、本願発明の血栓予防組成物Ａ２３．８ｇを得た。収率は２３．８％であった。
【００２０】
（試験例１）血栓予防効果の確認
本願発明の血栓予防組成物Ａの血栓予防効果を人間の血液から分離した乏血小板血漿（Ｐｌａｔｅｌｅｔ Ｐｏｏｒ Ｐｌａｓｍａ， ＰＰＰ）を利用して血液凝固測定計（Ｃｏａｇｕｌｏｍｅｔｅｒ）によりＡＰＴＴを測定し、評価した。
反応キュベットに、本願発明の血栓予防組成物Ａの濃度を固形分濃度として、０．０７５、０．１５、０．３、０．５ｍｇ／ｍＬと調整した試料１０μＬとＰＰＰ４０μＬを加え、３７℃で１分間反応させた。その後ＡＰＴＴ試薬５０μＬを加えて、さらに３７℃で２分間反応させた後、２５ｍＭ塩化カルシウム５０μＬを加えて、血漿が凝固されるまでの時間を測定し、ＡＰＴＴとした。
その結果を、下記表１に示す。
この時、対照に試料として０．０５、０．１、０．２及び０．３Ｕ／ｍＬに調整したヘパリンを用いて、同じ方法でＡＰＴＴを測定した。このヘパリンの濃度とヘパリンのＡＰＴＴと関係から下記のヘパリン様活性値（Ｕ／ｍｇ）の計算式を求め、その計算式に当てはめて各試料濃度におけるヘパリン（１Ｕ／ｍＬ）に対するヘパリン様活性値を求めた。
その結果を、下記表２に示す。
ヘパリン様活性値（Ｕ／ｍｇ）＝（０．１６４８×Ｌｏｇ（試料のＡＰＴＴ））／試料濃度（ｍｇ／ｍＬ）
【００２１】
【表１】
【００２２】
【表２】
【００２３】
表２の結果により、本願発明の血栓予防組成物Ａは、血栓予防組成物の濃度の増加と共にＡＰＴＴは増加し、抗血液凝固剤として使用されているヘパリンに換算したヘパリン様活性値は平均０．３６Ｕ／ｍｇと高い抗血液凝固効果を示すことが確認できた。
【００２４】
（実施例２）血栓予防組成物の調製２
乾燥ひじきを４０メッシュ以下に粉砕し、その粉末２００ｇに、蒸留水６Ｌを加え、１００℃で３時間抽出した。遠心分離（８５００ｒｐｍ、１０分間）し、その上清を濾過し、抽出物と残渣を分離した。その後、その残渣に蒸留水６Ｌを加え、同条件でもう１回繰り返し抽出し、それぞれの抽出液をあわせた後、減圧濃縮し、４００ｍＬとした。この濃縮液にエタノールを加え、５００ｍＬになるように調製（最終エタノール濃度２０％）した後、室温で２４時間静置して、不溶性成分を沈殿させた。遠心分離（８５００ｒｐｍ、１０分間）で沈澱物を分離し、その沈澱物に蒸留水１Ｌを加え再溶解し、濾過して不溶性成分を除去した。その濾液を減圧濃縮後、凍結乾燥して本願発明の血栓予防組成物Ｂ１６．４ｇを得た。また、同様にして得た濃縮液にエタノールを加え、最終エタノール濃度を６０％及び８０％とした時の不溶性成分を沈殿させ、同様の操作をして本願発明の血栓予防組成物Ｃ２１．４ｇ及びＤ２５．２ｇを得た。また、最終エタノール濃度６０％の上清にエタノールを加えてエタノールの終濃度を８０％にして沈殿させ、同様の操作をして本願発明の血栓予防組成物Ｅ２．８ｇを得た。
（実施例３）血栓予防組成物の調製３
乾燥ひじきを４０メッシュ以下に粉砕し、その粉末１００ｇに、５０％エタノール水３Ｌを加え、室温℃で３日間放置し、抽出した。その後、遠心分離（８５００ｒｐｍ、１０分間）し、その上清を濾過し、抽出物と残渣を分離した。その濾液を減圧濃縮し、その後、凍結乾燥し、本願発明の血栓予防組成物Ｆ２１．１ｇを得た。収率は２１．１％であった。
【００２５】
（試験例２）血栓予防効果の確認
実施例１で得られた血栓予防組成物Ａ、実施例２で得られた血栓予防組成物Ｂ、Ｄ、Ｅ及び実施例３で得られた血栓予防組成物Ｆについて固形分濃度として０．２ｍｇ／ｍＬの濃度で、ＡＰＴＴを測定した。そして試験例１のヘパリン様活性値（Ｕ／ｍｇ）の計算式に当てはめて各血栓予防組成物のヘパリン様活性値を求めた。また、実施例２における８０％エタノールでの上清画分についても同様して試料を調整しヘパリン様活性値を求めた。その結果を表３に示す。
【００２６】
【表３】
【００２７】
表２より、実施例２において得たエタノール沈殿成分について高いヘパリン様活性値を示すことが確認でき、優れた抗血液凝固効果は水抽出物のエタノールによる沈殿部分に含まれることがわかった。
【００２８】
（実施例４）血栓予防組成物含有食品（錠菓）の調製
実施例１で得られた血栓予防組成物Ａ５ｇ、乳糖３０ｇ、ＤＨＡ含有粉末油脂（サンコートＤＹ−５；太陽化学株式会社製）１２ｇ、ショ糖脂肪酸エステル４ｇ、ヨーグルト香料４ｇを混合し、この混合物をロータリー式打錠機を用いて加圧成形して１錠が３００ｍｇの本願発明の血栓予防組成物含有飲食品（錠菓）を得た。
【００２９】
（実施例５）血栓予防組成物含有飲料の調製
実施例２で得られた血栓予防組成物Ｂ５ｇ及び、１／５濃縮グレープフルーツ透明果汁２．１ｇ、エリスリトール３０ｇ、クエン酸結晶２．５ｇ、クエン酸三ナトリウム０．５ｇ、Ｌ−アスコルビン酸０．５ｇ、乳酸カルシウム１．９３ｇ、ＣＣＰ０．１５ｇ、グレープフルーツ香料１．０を水に混合溶解して、全量を１０００ｍＬとし、それを１００ｍＬの瓶に充填し、キャップで密栓した後、９０℃、３０分間加熱殺菌をして、本願発明の血栓予防組成物含有飲食品を得た。
【００３０】
（実施例６）血栓予防組成物含有飲料（野菜果汁混合飲料）の調製
実施例２で得られた血栓予防組成物Ａ０．２ｇ及び、グアーガム分解物（サンファイバーＲ；太陽化学株式会社製）３ｇを市販の野菜果汁混合飲料１００ｍＬに添加混合溶解して、本願発明の血栓予防組成物含有飲食品（野菜果汁混合飲料）を得た。
【００３１】
（実施例７）血栓予防組成物含有クッキーの調製
実施例２で得られた血栓予防組成物Ｄ４ｇ及び、市販のケーキミックス粉２００ｇを容器に入れた後、バター３５ｇを入れ、木杓子で混ぜ合わせた。それに溶き卵２５ｇを加えて、なめらかな生地になるまで良く練った。小麦粉を振った台の上に生地を取り出し、さらに小麦粉を振って麺棒で５ｍｍの厚さに伸ばし、丸型で抜き、それを１７０℃のオーブンで１０分間焼いて、１個約５ｇの本願発明の血栓予防組成物含有クッキーを得た。
【００３２】
（実施例８）血栓予防組成物含有ヨーグルトの調製
実施例２で得られた血栓予防組成物Ｃ１０ｇ、市販の脱脂乳（明治乳業社製。蛋白質含量３４％）０．９５ｋｇ、及び市販の無塩バター（雪印乳業社製）０．３５ｋｇを温水８Ｌに溶解し、均質化し、全量を１０Ｌに調整した。次いで、９０℃で１５分間加熱殺菌し、冷却し、市販の乳酸菌スターター（ハンゼン社製）０．０３ｋｇ（ストレプトコッカス・サーモフィラス０．０２ｋｇ及びラクトバシラス・ブルガリクス０．０１ｋｇ）を接種し、均一に混合し、１００ｍＬの容器に分注，充填し、密封し、３７℃で２０時間発酵させ、のち冷却し、本願発明の血栓予防組成物含有ヨーグルトを得た。
【００３３】
（実施例９）血栓予防組成物含有経口流動食の調製
カゼインナトリウム（ＤＭＶ社製）１００ｇ、卵白酵素分解物（太陽化学社製）８５ｇ、デキストリン（松谷化学社製）２００ｇ水２Ｌに溶解し、水相をタンク内に調製した。これとは別に、ＭＣＴ（花王社製）９０ｇ、パーム油（不二製油社製）３５ｇ、サフラワー油（太陽油脂社製）３５ｇ、レシチン（太陽化学社製）１．４ｇ、消泡剤（太陽化学社製）２ｇを混合溶解し、油相を調製した。タンク内の水相に油相を添加し、攪拌して混合した後、７０℃に加温し、更に、ホモゲナイザーにより１４．７ＭＰａの圧力で均質化した。次いで、９０℃で１０分間殺菌した後、濃縮し、噴霧乾燥して、中間製品粉末約５１０ｇを調製した。この中間製品粉末５００ｇに実施例２で得られた血栓予防組成物Ｂ１０ｇ、デキストリン（松谷化学社製）３９０ｇ、グアーガム分解物（サンファイバーＲ；太陽化学株式会社製）４５ｇ、少量のビタミンとミネラルおよび粉末香料を添加し、均一に混合して、血栓予防組成物を含有する経口流動食約９５０ｇを得た。
【００３４】
（実施例１０）血栓予防組成物含有錠剤の調製
実施例３で得られた血栓予防組成物Ｆ１０ｇ、結晶セルロース５ｇ、トウモロコシデンプン１３．８ｇ、乳糖３２．５ｇ、ヒドロキシプロピルセルロース３．３ｇを混合し、顆粒化した。この顆粒化物にステアリン酸マグネシウム１．０ｇを加え、均一に混合し、この混合物をロータリー式打錠機を用いて加圧成形して一錠が１３０ｍｇの本願発明の血栓予防組成物含有錠剤を得た。
【００３５】
本発明の実施態様ならびに目的生成物を挙げれば以下の通りである。
（１） ひじき又はその抽出物を含有することを特徴とする血栓予防組成物。
（２） ひじき抽出物が、ひじきから水、塩基、酸、親水性溶媒により抽出されていることをより抽出されていることを特徴とする前記（１）記載の血栓予防組成物。
（３） ひじき抽出物が、ひじきから水により抽出されていることを特徴とする前記（１）又は（２）記載の血栓予防組成物。
（４） 親水性溶媒がメチルアルコール、エチルアルコール、ｎ−プロピルアルコール、イソプロピルアルコール、ブチルアルコールの群より選ばれる少なくとも１種類以上の低級アルコールであることを特徴とする前記（１）又は（２）の血栓予防組成物。
（５） ひじき抽出物から有機溶媒のいずれか１種類又は２種類以上により分画されていることを特徴とする前記（１）〜（４）いずれか記載の血栓予防組成物。
（６） 有機溶媒がメチルアルコール、エチルアルコール、ｎ−プロピルアルコール、イソプロピルアルコール、ブチルアルコール、酢酸エチル、酢酸ブチル、ジエチルエーテル、メチルエーテル、メチルイソブチルケトン、ヘキサン、又はクロロホルムからなる群より選ばれる少なくとも１種であることを特徴とする前記（４）記載の血栓予防組成物。
（７） ひじき又はその抽出物がエタノールにより分画されていることを特徴とする前記（１）〜（４）いずれか記載の血栓予防組成物。
（８） ひじき又はその抽出物が、エタノールにより沈殿成分として分画されていることを特徴とする前記（１）〜（４）いずれか記載の血栓予防組成物。
（９） ひじき又はその抽出物が、エタノールで分画する際のエタノール濃度が、２０〜８０％であり、その沈殿画分であることを特徴とする前記（８）記載の血栓予防組成物。
（１０） ひじき又はその抽出物が、エタノールで分画する際のエタノール濃度が、２０〜６０％であり、その沈殿画分であることを特徴とする前記（８）記載の血栓予防組成物。
（１１） ひじき又はその抽出物が、疎水性樹脂を用いたクロマトグラフィーやカラムにより純度を高めることを特徴とする前記（１）〜（１０）いずれか記載の血栓予防組成物。
（１２） 疎水性樹脂が、フェノール系、スチレン系、アクリル酸系、エポキシアミン系、ピリジン系、メタクリル系など母体とする特徴とする前記（１３）記載の血栓予防組成物。
（１３） 前記（１）〜（１２）いずれか記載の血栓予防組成物を含有することを特徴とする飲食品。
（１４） 前記（１）〜（１２）いずれか記載の血栓予防組成物を含有することを特徴とする医薬品。
（１５） 前記（１）〜（１２）いずれか記載の血栓予防組成物を含有することを特徴とする医薬品。
（１６） 前記（１）〜（１２）いずれか記載の血栓予防組成物を含有することを特徴とする飼料。
【産業上の利用可能性】
【００３６】
本発明で得られたひじき抽出物を含有するの血栓予防組成物は、血液凝固体系の内因性経路に関与する多くの因子または最終段階であるフィブリンの形成を阻害し、血栓の生成を抑制する血栓予防効果が高く、各種飲食品及び医薬品等に利用して、血栓の生成を抑制することで脳出血、脳梗塞、心筋梗塞、動脈硬化及び冠状動脈症のような心血関係疾患を予防することができる。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ひじき又はその抽出物を含有する血栓予防組成物及びそれを含有する飲食品及び医薬品に関する。
【背景技術】
【０００２】
血栓は、フィブリノーゲンというタンパク質が活性化され、フィブリンに転換されながら、血小板、白血球等と共に、不溶性の重合体となって血管の内壁に固まってできる。身体が正常なときには、この血栓のもととなるフィブリンを溶かす働きをする線溶酵素が血栓予防をして、線溶酵素が不足するとフィブリンを溶解できなくなり、血栓ができるようになる。
形成された血栓は血管に沈着し、血管の断面積を減少させ、血液の循環を阻害し、その結果、血液が細胞及び組職で栄養分と酸素を正常に供給することができず、また、細胞及び組織の老廃物を排出できなくなり、毒性が蓄積される等の問題点が発生するようになる。
血管の中で、血栓といわれる血液の固まりが引き起こす症状を広義の血栓症（以下、単に「血栓症」と記載した場合は、広義の血栓症をいう）と呼び、血栓が原因になって起こる病態は狭義の血栓症と塞栓症に分けられる。狭義の血栓症は血栓が形成個所で血流を部分的にあるいは完全に閉塞することによる症状で、塞栓症は血栓が形成個所から剥がれて血流によって移動し、他の個所で血流を部分的にあるいは完全に閉塞することによって起こる病態のことを指す。
このような血栓症は血栓が生じた血管の部位によって多様な疾病を誘発するようになる。その中でも特に脳血管や心臓血管に生じた場合には脳卒中、脳出血、脳梗塞、心不全症、心筋梗塞、心臓麻痺等深刻な症状が発生し、半身不随を引き起こし、ひどい場合には死亡することもある。
【０００３】
現在、血栓症を解決するために、血栓の生成を抑制する抗血栓剤及び血栓形成予防剤と、生成された血栓を溶解させる血栓溶解剤の研究開発が主に行われている。
抗血栓剤又は血栓形成予防剤としては、血管壁への血小板の付着を阻害することで血液の凝固を阻害するアスピリンと、体内の内因性血液凝固経路を遮断するヘパリン（Ｈｅｐａｒｉｎ）、クマリン（Ｃｏｕｍａｒｉｎ）等が現在臨床で使われている。また最近はエイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）、プロスタサイクリン（Ｐｒｏｓｔａｃｙｃｌｉｎｅ；ＰＧ１２）誘導体等が商品化されている。しかし、これら薬剤は特異性がないため、生体内においては血栓以外の部分にも影響を及ぼし、生体内に残存した場合、出血等を引き起こす可能性がある。その他に、ヒルジン（ｈｉｒｕｄｉｎ）、合成抗トロンビン（ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ ａｎｔｉｔｈｒｏｍｂｉｎ）、チクロピジン（Ｔｉｃｌｏｐｉｄｉｎ）等の抗血栓活性も報告されているが、まだ実用化には至っていない。
血栓溶解剤としては、ストレプトキナーゼ（ｓｔｒｅｐｔｏｋｉｎａｓｅ）、ウロキナーゼ（ｕｒｏｋｉｎａｓｅ）のようなプラスミノゲンアクチベーター（ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ ａｃｔｉｖａｔｏｒ）を血栓が生成された患者に静脈注射して、体内の血栓溶解系を活性化する治療法が一般的に使われている。これらが血栓を溶解させる効果は、幾多の臨床実験で立証されたが、抗血栓剤又は血栓形成予防剤と同様、血栓に対する特異性が無く、血栓を治療する間に全身出血する等の副作用がある。また組職型プラスミノゲンアクチベーター（ｔｉｓｓｕｅ−ｔｙｐｅ ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ ａｃｔｉｖａｔｏｒ，ｔＰＡ）は血栓に対する選択性が高く、理想的な血栓溶解剤と考えられたが、実際に臨床治療に適用した結果、程度の差はあるが相変らず全身出血等の副作用があった。また血液内での半減期が非常に短く、薬効の持続時間が短いため、体内で薬効を維持するためには投与量が多くなければならず、そのため治療費用が従来の血栓溶解剤に比べ非常に高いという問題点がある。
【０００４】
このような医薬品が血栓の生成予防に使用されてはいるものの、血栓除去にあまり著しい効果を現わすことが無く、深刻な副作用を誘発するため、最近では、医薬品による治療よりは食生活を通じて病気を予防し、体質を調節又は活性化させる機能を持った成分又は食品成分に対する研究も注目されるようになってきている。
食品成分としては、ナットウキナーゼや多価不飽和脂肪酸、グルコサミン、タマネギの薄皮（例えば、特許文献１参照。）等の素材が知られているが、風味や性状等に問題があり、幅広く食品に応用できなかった。
また、最近では、キウイフルーツ抽出物（例えば、特許文献２参照。）についての特許が公開されたが、中性域での活性が弱いという欠点がある。
【０００５】
【特許文献１】特開２００２−１７１９３４号公報（第２頁）
【特許文献２】特開２００３−１７１２９４号公報（第２頁−５頁）
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明の課題は、幅広い飲食品に使用可能な血栓予防組成物及びそれを含有する飲食品、医薬部外品及び医薬品を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは様々な天然植物を利用して抗凝固成分を捜す目的で、多角的に研究検討した結果、ひじき又はその抽出物の酵素処理物に優れた抗凝固効果があることを見出し、本発明を完成させた。
【発明の効果】
【０００８】
本発明で得られたひじき又はその抽出物を含有する血栓予防組成物は、活性化部分トロンボプラスチン時間（Ａｃｔｉｖａｔｅｄ Ｐａｒｔｉａｌ Ｔｈｒｏｍｂｏｐｌａｓｔｉｎ Ｔｉｍｅ；ＡＰＴＴ）を測定した結果から、内因性経路に関与する因子を不活性化して、フィブリン形成を阻害し、血管内の血栓生成を抑制する効果が高いことがわかった。
特にひじきは、昔から人間が日常食生活に使用してきた天然植物由来なので、従来使用していた薬剤とは違い、体内で出血を起こす副作用が無く安全である。
本発明はひじき又はその抽出物を含有する血栓予防組成物を各種飲食品及び医薬品等に利用して、血栓の生成を抑制することで脳出血、脳梗塞、心筋梗塞、動脈硬化及び冠状動脈症のような心血関係疾患を予防することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００９】
本願発明に用いるひじきとは、学名：ヒジキア・フシフォルミス（Ｈｉｊｉｋｉａ ｆｕｓｉｆｏｒｕｍｉｓ）といい、褐藻類、ホンダワラ科に属する海藻である。北海道日高地方以南の太平洋岸、瀬戸内海、兵庫県付近以西の日本海側、九州沿岸に分布する日本近海の特産である。乾物は黒褐色であるが、生の時は黄褐色をしている。ひじきは波の荒い外洋の岩礁上、低潮線付近に生育し、体は濃緑褐色、根は絡み合った繊維状でよく発達し、岩上を這うように成長する。体の茎は軟骨質で円柱状、太さ３〜４ｍｍ、長さ０．５〜１ｍｍであり、茎から細長い円柱状の葉と小枝を側出し、葉は幼体では多肉質で平たく、成体では葉は線形となり３〜１０ｃｍ、多くは先端が尖り、中がしっかりしているが、しばしば先端が膨らむ棍棒状になったり、中空で気泡をかねるものもあり、春から初夏にかけて繁茂する。渋みが多くそのまま生では食べられないが、鉄釜で数時間水煮することによって渋みが取れ、色素も除かれ、これを日光で乾燥したのが「干しひじき」である。干しひじきのうち小枝部分だけを集めたものが「芽ひじき、米ひじき又は姫ひじき」、茎状の長い部分（主軸部分）ものを「長ひじき」と呼ばれている。芽ひじきは水につけて戻すと、かさで３倍、重さで約６倍になる。また、別称としてひずきも、ねいり、ちょうせんひじき、みちひじき等とも称されている。
【００１０】
本発明において、ひじきの部位としては、特に限定されるものではないが、小枝部分及び主軸部分が用いられる。その形態は、特に限定するものではなく、生ひじき、干しひじき、乾燥ひじき、ひじき粉末等のいずれでも良い。
ひじき粉末の場合は、そのままでも使用できるが、水不溶性成分を含んでいるので、抽出により、水不溶性成分が除去されていることが好ましい。
抽出の際、生ひじき、干しひじき、乾燥ひじきを使用する場合は、抽出効率を高めるためにミキサー等により破砕、均質化したものを用いることが好ましい。
干しひじき又は乾燥ひじきを使用する場合は、抽出効率を高めるために４０メッシュ以下の粒度になるように粉砕されていることが好ましい。
【００１１】
抽出方法は、抽出溶媒、抽出温度等、特に限定されるものではなく、抽出溶媒としては、水、塩基、酸、親水性溶媒、アセトンを使うことができる。親水性溶媒はメチルアルコール、エチルアルコール、ｎ−プロピルアルコール、イソプロピルアルコール、ブチルアルコールの低級アルコール群より選ばれる１種類以上が操作性、抽出効率の点から好ましい。特に好ましくは、水、塩基、酸のいずれかである。
酸又は塩基を抽出溶媒に使用する場合、抽出物を中和させることが好ましい。中和反応によって生成された塩は、透析法やゲル濾過等、公知の方法により、取り除くことができる。水を抽出溶媒として用いた場合には、上記のような中和反応は必要なく、生成された塩を取り除く必要もないため、水を用いることが更に好ましい。
この時使用する酸としては、特に限定するものではなく、大部分の酸を使うことができるが、好ましくは、入手しやすい及び操作性点により塩酸、硫酸より選ばれる１種又は両者の併用である。
また、塩基としては、特に限定するものではなく、大部分の塩基を使うことができるが、好ましくは、水酸化ナトリウム、水酸化カリウムより選ばれる１種又は両者の併用である。
抽出に使用される酸又は塩基の濃度は、特に限定するものではなく、酸又は塩基の強さによって変化するが、操作性及び抽出効率の点より、０．０１〜０．５モルの濃度を使用することが好ましい。
【００１２】
上記の抽出物は、そのままでも使用できるが、濾過、遠心分離及び分留により、不溶性物質及び溶媒を取り除くことにより、血栓予防効果が高くなり、応用範囲も広がるので好ましい。
不溶性物質及び溶媒を取り除いた後、果汁又は抽出液をそのまま又は濃縮した後に有機溶媒用いて分配を行い、それぞれの溶媒可溶画分を得る。これら溶媒可溶画分は、更に血栓予防効果が高くなるので好ましい。有機溶媒としてはメチルアルコール、エチルアルコール、ｎ−プロピルアルコール、イソプロピルアルコール、ブチルアルコールの低級アルコールや酢酸エチル、酢酸ブチル、ジエチルエーテル、メチルエーテル、メチルイソブチルケトン、ヘキサン、アセトン又はクロロホルムが使用できる。また可溶画分の純度を上げる為には、他の疎水性溶媒による分配を組み合わせることもできる。これら溶媒の濃度としては、特に限定するものではないが、収率及び効果の点より、終濃度として２０〜８０％が好ましく、２０〜６０％が更に好ましい。
さらに純度を高める為に、フェノール系、スチレン系、アクリル酸系、エポキシアミン系、ピリジン系、メタクリル系など母体とした疎水性樹脂を用いることも可能である。その場合、樹脂吸着後の溶離液としては、メチルアルコール、エチルアルコール、ｎ−プロピルアルコール、イソプロピルアルコール、ブチルアルコールなどの低級アルコール及びアセトンを単独又は水溶液として使用できる。
抽出物及び画分はそのままでの使用も可能だが、必要であれば噴霧乾燥や凍結乾燥等の手段により乾燥粉末化させて使用することも可能である。
【００１３】
本願発明において血栓予防効果は、例えば、内因性血液凝固システムに対する抗血液凝固活性を測定する方法である活性化部分トロンボプラスチン時間（ＡＰＴＴ）を測定することにより確認することができる。
【００１４】
本願発明の血栓予防組成物は、飲食品、医薬品、飼料等に応用でき、好ましくは、人が手軽に摂食できる飲食品又は医薬品が好ましい。
本願発明における飲食品とは溶液、懸濁物、粉末、固体成形物等経口摂取可能な形態であれば良く特に限定するものではない。より具体的には、即席麺、レトルト食品、缶詰、電子レンジ食品、即席スープ・みそ汁類、フリーズドライ食品等の即席食品類、清涼飲料、果汁飲料、野菜飲料、豆乳飲料、コーヒー飲料、茶飲料、粉末飲料、濃縮飲料、栄養飲料、アルコール飲料等の飲料類、パン、パスタ、麺、ケーキミックス、から揚げ粉、パン粉等の小麦粉製品、飴、キャラメル、チューイングガム、チョコレート、クッキー、ビスケット、ケーキ、パイ、スナック、クラッカー、和菓子、デザート菓子等の菓子類、ソース、トマト加工調味料、風味調味料、調理ミックス、たれ類、ドレッシング類、つゆ類、カレー・シチューの素等の調味料、加工油脂、バター、マーガリン、マヨネーズ等の油脂類、乳飲料、ヨーグルト類、乳酸菌飲料、アイスクリーム類、クリーム類等の乳製品、冷凍食品、魚肉ハム・ソーセージ、水産練り製品等の水産加工品、畜肉ハム・ソーセージ等の畜産加工品、農産缶詰、ジャム・マーマレード類、漬け物、煮豆、シリアル等の農産加工品、栄養食品、錠剤、カプセル等が例示される。
【００１５】
本願発明の血栓予防組成物の飲食品としての摂取量は、本発明の病気の状態、病人の体重、年齢、体質、体調等によって調整されるべきであるが、一般に１日あたり、血栓予防組成物として０．０５ｇ〜２０ｇ、好ましくは０．１ｇ〜５ｇの範囲で適宜選択することができる。これを病気の状態や食品等の形態によって１日１回ないし数回にわけて摂取することができる。
【００１６】
本願発明において、血栓予防組成物又は、それを含有する飲食品等に加工する際に、各種栄養成分を強化することができる。
強化できる栄養成分としては、ビタミンＡ、ビタミンＢ１、ビタミンＢ２、ビタミンＢ６、ビタミンＢ１２、ビタミンＣ、ビタミンＤ、ビタミンＥ、ナイアシン（ニコチン酸）、パントテン酸、葉酸等のビタミン類、リジン、スレオニン、トリプトファン等の必須アミノ酸類や、カルシウム、マグネシウム、鉄、亜鉛、銅等のミネラル類及び、例えば、α−リノレン酸、ＥＰＡ、ＤＨＡ、月見草油、オクタコサノール、カゼインホスホペプチド（ＣＰＰ）、カゼインカルシウムペプチド（ＣＣＰ）、水溶性食物繊維、不溶性食物繊維、オリゴ糖等の人の健康に寄与する物質類、その他の食品や食品添加物として認可されている有用物質の１種又は２種以上が使用できる。
【００１７】
本願発明における医薬部外品及び医薬品とは、経口または非経口投与に適した賦形剤、その他の添加剤を用いて、常法に従って、経口製剤または注射剤として調製することができる。好ましいのは、経口製剤であり、最も好ましいのは、容易に服用でき且つ保存、持ち運びに便利な経口固形製剤である。
経口固形製剤としては、錠剤、散剤、細粒剤、顆粒剤、カプセル剤、丸剤、徐放剤等が用いられる。このような固形製剤においては、適宜の薬理学的に許容され得る坦体、賦形剤（例えばデンプン、乳糖、白糖、炭酸カルシウム、リン酸カルシウムなど）、結合剤（例えばデンプン、アラビアゴム、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、結晶セルロース、アルギン酸、ゼラチン、ポリビニルピロリドンなど）、滑沢剤（例えばステアリン酸、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウムなど）、崩壊剤（例えばカルボキシメチルセルロース、タルクなど）、などと混合し、常法により錠剤、散剤、細粒剤、顆粒剤、カプセル剤、丸剤、徐放剤等を調整することが出来る。経口液状製剤は、製薬学的に許容される乳濁剤、溶液剤、懸濁剤、シロップ剤、エリキシル剤等を含み、一般的に用いられる不活性な希釈剤、例えば精製水、エタノールを含む。この組成物は不活性な希釈剤以外に湿潤剤、懸濁剤のような補助剤、甘味剤、風味剤、芳香剤、防腐剤を含有していてもよい。
非経口投与しての注射剤としては、無菌の水性又は非水性の溶液剤、懸濁剤、乳濁剤を包含する。水性の溶液剤、懸濁剤の希釈剤としては、例えば注射用蒸留水及び生理食塩水が含まれる。非水溶性の溶液剤、懸濁剤の希釈剤としては、例えばプロピレングリコール、ポリエチレングリコール、オリーブ油のような植物油、エタノールのようなアルコール類、ポリソルベート８０等がある。このような組成物は、さらに防腐剤、湿潤剤、乳化剤、分散剤、安定化剤（例えばラクトース）、溶解補助剤（例えば、グルタミン酸、アスパラギン酸）のような補助剤を含んでもよい。これらは例えばバクテリア保管フィルターを通す濾過、殺菌剤の配合又は照射によって無菌化される。これらはまた無菌の固体組成物を製造し、使用前に無菌水又は無菌の注射用溶媒に溶解して使用することもできる。
本願発明の血栓予防組成物の医薬品としての投与量は、投与ルート、疾患の症状、投与対象の年齢、性別等を考慮して個々の場合に応じて適宜決定されるが、通常、成人においては体重１Ｋｇ当たり１ｍｇ〜４０ｍｇ／日、好ましくは２ｍｇ〜１０ｍｇ／日である。
【００１８】
以下本発明を、実施例にて詳細に説明するが、次の実施例は、本発明の範囲を限定するものではない。
【実施例】
【００１９】
（実施例１）血栓予防組成物の調製１
乾燥ひじきを４０メッシュ以下に粉砕し、その粉末１００ｇに、蒸留水３Ｌを加え、１００℃で３時間抽出した。その後、遠心分離（８５００ｒｐｍ、１０分間）し、その上清を濾過し、抽出物と残渣を分離した。その濾液を減圧濃縮し、その後、凍結乾燥し、本願発明の血栓予防組成物Ａ２３．８ｇを得た。収率は２３．８％であった。
【００２０】
（試験例１）血栓予防効果の確認
本願発明の血栓予防組成物Ａの血栓予防効果を人間の血液から分離した乏血小板血漿（Ｐｌａｔｅｌｅｔ Ｐｏｏｒ Ｐｌａｓｍａ， ＰＰＰ）を利用して血液凝固測定計（Ｃｏａｇｕｌｏｍｅｔｅｒ）によりＡＰＴＴを測定し、評価した。
反応キュベットに、本願発明の血栓予防組成物Ａの濃度を固形分濃度として、０．０７５、０．１５、０．３、０．５ｍｇ／ｍＬと調整した試料１０μＬとＰＰＰ４０μＬを加え、３７℃で１分間反応させた。その後ＡＰＴＴ試薬５０μＬを加えて、さらに３７℃で２分間反応させた後、２５ｍＭ塩化カルシウム５０μＬを加えて、血漿が凝固されるまでの時間を測定し、ＡＰＴＴとした。
その結果を、下記表１に示す。
この時、対照に試料として０．０５、０．１、０．２及び０．３Ｕ／ｍＬに調整したヘパリンを用いて、同じ方法でＡＰＴＴを測定した。このヘパリンの濃度とヘパリンのＡＰＴＴと関係から下記のヘパリン様活性値（Ｕ／ｍｇ）の計算式を求め、その計算式に当てはめて各試料濃度におけるヘパリン（１Ｕ／ｍＬ）に対するヘパリン様活性値を求めた。
その結果を、下記表２に示す。
ヘパリン様活性値（Ｕ／ｍｇ）＝（０．１６４８×Ｌｏｇ（試料のＡＰＴＴ））／試料濃度（ｍｇ／ｍＬ）
【００２１】
【表１】
【００２２】
【表２】
【００２３】
表２の結果により、本願発明の血栓予防組成物Ａは、血栓予防組成物の濃度の増加と共にＡＰＴＴは増加し、抗血液凝固剤として使用されているヘパリンに換算したヘパリン様活性値は平均０．３６Ｕ／ｍｇと高い抗血液凝固効果を示すことが確認できた。
【００２４】
（実施例２）血栓予防組成物の調製２
乾燥ひじきを４０メッシュ以下に粉砕し、その粉末２００ｇに、蒸留水６Ｌを加え、１００℃で３時間抽出した。遠心分離（８５００ｒｐｍ、１０分間）し、その上清を濾過し、抽出物と残渣を分離した。その後、その残渣に蒸留水６Ｌを加え、同条件でもう１回繰り返し抽出し、それぞれの抽出液をあわせた後、減圧濃縮し、４００ｍＬとした。この濃縮液にエタノールを加え、５００ｍＬになるように調製（最終エタノール濃度２０％）した後、室温で２４時間静置して、不溶性成分を沈殿させた。遠心分離（８５００ｒｐｍ、１０分間）で沈澱物を分離し、その沈澱物に蒸留水１Ｌを加え再溶解し、濾過して不溶性成分を除去した。その濾液を減圧濃縮後、凍結乾燥して本願発明の血栓予防組成物Ｂ１６．４ｇを得た。また、同様にして得た濃縮液にエタノールを加え、最終エタノール濃度を６０％及び８０％とした時の不溶性成分を沈殿させ、同様の操作をして本願発明の血栓予防組成物Ｃ２１．４ｇ及びＤ２５．２ｇを得た。また、最終エタノール濃度６０％の上清にエタノールを加えてエタノールの終濃度を８０％にして沈殿させ、同様の操作をして本願発明の血栓予防組成物Ｅ２．８ｇを得た。
（実施例３）血栓予防組成物の調製３
乾燥ひじきを４０メッシュ以下に粉砕し、その粉末１００ｇに、５０％エタノール水３Ｌを加え、室温℃で３日間放置し、抽出した。その後、遠心分離（８５００ｒｐｍ、１０分間）し、その上清を濾過し、抽出物と残渣を分離した。その濾液を減圧濃縮し、その後、凍結乾燥し、本願発明の血栓予防組成物Ｆ２１．１ｇを得た。収率は２１．１％であった。
【００２５】
（試験例２）血栓予防効果の確認
実施例１で得られた血栓予防組成物Ａ、実施例２で得られた血栓予防組成物Ｂ、Ｄ、Ｅ及び実施例３で得られた血栓予防組成物Ｆについて固形分濃度として０．２ｍｇ／ｍＬの濃度で、ＡＰＴＴを測定した。そして試験例１のヘパリン様活性値（Ｕ／ｍｇ）の計算式に当てはめて各血栓予防組成物のヘパリン様活性値を求めた。また、実施例２における８０％エタノールでの上清画分についても同様して試料を調整しヘパリン様活性値を求めた。その結果を表３に示す。
【００２６】
【表３】
【００２７】
表２より、実施例２において得たエタノール沈殿成分について高いヘパリン様活性値を示すことが確認でき、優れた抗血液凝固効果は水抽出物のエタノールによる沈殿部分に含まれることがわかった。
【００２８】
（実施例４）血栓予防組成物含有食品（錠菓）の調製
実施例１で得られた血栓予防組成物Ａ５ｇ、乳糖３０ｇ、ＤＨＡ含有粉末油脂（サンコートＤＹ−５；太陽化学株式会社製）１２ｇ、ショ糖脂肪酸エステル４ｇ、ヨーグルト香料４ｇを混合し、この混合物をロータリー式打錠機を用いて加圧成形して１錠が３００ｍｇの本願発明の血栓予防組成物含有飲食品（錠菓）を得た。
【００２９】
（実施例５）血栓予防組成物含有飲料の調製
実施例２で得られた血栓予防組成物Ｂ５ｇ及び、１／５濃縮グレープフルーツ透明果汁２．１ｇ、エリスリトール３０ｇ、クエン酸結晶２．５ｇ、クエン酸三ナトリウム０．５ｇ、Ｌ−アスコルビン酸０．５ｇ、乳酸カルシウム１．９３ｇ、ＣＣＰ０．１５ｇ、グレープフルーツ香料１．０を水に混合溶解して、全量を１０００ｍＬとし、それを１００ｍＬの瓶に充填し、キャップで密栓した後、９０℃、３０分間加熱殺菌をして、本願発明の血栓予防組成物含有飲食品を得た。
【００３０】
（実施例６）血栓予防組成物含有飲料（野菜果汁混合飲料）の調製
実施例２で得られた血栓予防組成物Ａ０．２ｇ及び、グアーガム分解物（サンファイバーＲ；太陽化学株式会社製）３ｇを市販の野菜果汁混合飲料１００ｍＬに添加混合溶解して、本願発明の血栓予防組成物含有飲食品（野菜果汁混合飲料）を得た。
【００３１】
（実施例７）血栓予防組成物含有クッキーの調製
実施例２で得られた血栓予防組成物Ｄ４ｇ及び、市販のケーキミックス粉２００ｇを容器に入れた後、バター３５ｇを入れ、木杓子で混ぜ合わせた。それに溶き卵２５ｇを加えて、なめらかな生地になるまで良く練った。小麦粉を振った台の上に生地を取り出し、さらに小麦粉を振って麺棒で５ｍｍの厚さに伸ばし、丸型で抜き、それを１７０℃のオーブンで１０分間焼いて、１個約５ｇの本願発明の血栓予防組成物含有クッキーを得た。
【００３２】
（実施例８）血栓予防組成物含有ヨーグルトの調製
実施例２で得られた血栓予防組成物Ｃ１０ｇ、市販の脱脂乳（明治乳業社製。蛋白質含量３４％）０．９５ｋｇ、及び市販の無塩バター（雪印乳業社製）０．３５ｋｇを温水８Ｌに溶解し、均質化し、全量を１０Ｌに調整した。次いで、９０℃で１５分間加熱殺菌し、冷却し、市販の乳酸菌スターター（ハンゼン社製）０．０３ｋｇ（ストレプトコッカス・サーモフィラス０．０２ｋｇ及びラクトバシラス・ブルガリクス０．０１ｋｇ）を接種し、均一に混合し、１００ｍＬの容器に分注，充填し、密封し、３７℃で２０時間発酵させ、のち冷却し、本願発明の血栓予防組成物含有ヨーグルトを得た。
【００３３】
（実施例９）血栓予防組成物含有経口流動食の調製
カゼインナトリウム（ＤＭＶ社製）１００ｇ、卵白酵素分解物（太陽化学社製）８５ｇ、デキストリン（松谷化学社製）２００ｇ水２Ｌに溶解し、水相をタンク内に調製した。これとは別に、ＭＣＴ（花王社製）９０ｇ、パーム油（不二製油社製）３５ｇ、サフラワー油（太陽油脂社製）３５ｇ、レシチン（太陽化学社製）１．４ｇ、消泡剤（太陽化学社製）２ｇを混合溶解し、油相を調製した。タンク内の水相に油相を添加し、攪拌して混合した後、７０℃に加温し、更に、ホモゲナイザーにより１４．７ＭＰａの圧力で均質化した。次いで、９０℃で１０分間殺菌した後、濃縮し、噴霧乾燥して、中間製品粉末約５１０ｇを調製した。この中間製品粉末５００ｇに実施例２で得られた血栓予防組成物Ｂ１０ｇ、デキストリン（松谷化学社製）３９０ｇ、グアーガム分解物（サンファイバーＲ；太陽化学株式会社製）４５ｇ、少量のビタミンとミネラルおよび粉末香料を添加し、均一に混合して、血栓予防組成物を含有する経口流動食約９５０ｇを得た。
【００３４】
（実施例１０）血栓予防組成物含有錠剤の調製
実施例３で得られた血栓予防組成物Ｆ１０ｇ、結晶セルロース５ｇ、トウモロコシデンプン１３．８ｇ、乳糖３２．５ｇ、ヒドロキシプロピルセルロース３．３ｇを混合し、顆粒化した。この顆粒化物にステアリン酸マグネシウム１．０ｇを加え、均一に混合し、この混合物をロータリー式打錠機を用いて加圧成形して一錠が１３０ｍｇの本願発明の血栓予防組成物含有錠剤を得た。
【００３５】
本発明の実施態様ならびに目的生成物を挙げれば以下の通りである。
（１） ひじき又はその抽出物を含有することを特徴とする血栓予防組成物。
（２） ひじき抽出物が、ひじきから水、塩基、酸、親水性溶媒により抽出されていることをより抽出されていることを特徴とする前記（１）記載の血栓予防組成物。
（３） ひじき抽出物が、ひじきから水により抽出されていることを特徴とする前記（１）又は（２）記載の血栓予防組成物。
（４） 親水性溶媒がメチルアルコール、エチルアルコール、ｎ−プロピルアルコール、イソプロピルアルコール、ブチルアルコールの群より選ばれる少なくとも１種類以上の低級アルコールであることを特徴とする前記（１）又は（２）の血栓予防組成物。
（５） ひじき抽出物から有機溶媒のいずれか１種類又は２種類以上により分画されていることを特徴とする前記（１）〜（４）いずれか記載の血栓予防組成物。
（６） 有機溶媒がメチルアルコール、エチルアルコール、ｎ−プロピルアルコール、イソプロピルアルコール、ブチルアルコール、酢酸エチル、酢酸ブチル、ジエチルエーテル、メチルエーテル、メチルイソブチルケトン、ヘキサン、又はクロロホルムからなる群より選ばれる少なくとも１種であることを特徴とする前記（４）記載の血栓予防組成物。
（７） ひじき又はその抽出物がエタノールにより分画されていることを特徴とする前記（１）〜（４）いずれか記載の血栓予防組成物。
（８） ひじき又はその抽出物が、エタノールにより沈殿成分として分画されていることを特徴とする前記（１）〜（４）いずれか記載の血栓予防組成物。
（９） ひじき又はその抽出物が、エタノールで分画する際のエタノール濃度が、２０〜８０％であり、その沈殿画分であることを特徴とする前記（８）記載の血栓予防組成物。
（１０） ひじき又はその抽出物が、エタノールで分画する際のエタノール濃度が、２０〜６０％であり、その沈殿画分であることを特徴とする前記（８）記載の血栓予防組成物。
（１１） ひじき又はその抽出物が、疎水性樹脂を用いたクロマトグラフィーやカラムにより純度を高めることを特徴とする前記（１）〜（１０）いずれか記載の血栓予防組成物。
（１２） 疎水性樹脂が、フェノール系、スチレン系、アクリル酸系、エポキシアミン系、ピリジン系、メタクリル系など母体とする特徴とする前記（１３）記載の血栓予防組成物。
（１３） 前記（１）〜（１２）いずれか記載の血栓予防組成物を含有することを特徴とする飲食品。
（１４） 前記（１）〜（１２）いずれか記載の血栓予防組成物を含有することを特徴とする医薬品。
（１５） 前記（１）〜（１２）いずれか記載の血栓予防組成物を含有することを特徴とする医薬品。
（１６） 前記（１）〜（１２）いずれか記載の血栓予防組成物を含有することを特徴とする飼料。
【産業上の利用可能性】
【００３６】
本発明で得られたひじき抽出物を含有するの血栓予防組成物は、血液凝固体系の内因性経路に関与する多くの因子または最終段階であるフィブリンの形成を阻害し、血栓の生成を抑制する血栓予防効果が高く、各種飲食品及び医薬品等に利用して、血栓の生成を抑制することで脳出血、脳梗塞、心筋梗塞、動脈硬化及び冠状動脈症のような心血関係疾患を予防することができる。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ひじき又はその抽出物を含有することを特徴とする血栓予防組成物。
【請求項２】
ひじき抽出物が、ひじきから水、塩基、酸、親水性溶媒、アセトンからなる群より選ばれる少なくとも１種により抽出されていることを特徴とする請求項１記載の血栓予防組成物。
【請求項３】
有機溶媒がメチルアルコール、エチルアルコール、ｎ−プロピルアルコール、イソプロピルアルコール、ブチルアルコール、酢酸エチル、酢酸ブチル、ジエチルエーテル、メチルエーテル、メチルイソブチルケトン、ヘキサン、又はクロロホルムからなる群より選ばれる少なくとも１種であることを特徴とする請求項２記載の血栓予防組成物。
【請求項４】
請求項１〜３いずれか記載の血栓予防組成物を含有することを特徴とする飲食品。
【請求項５】
請求項１〜３いずれか記載の血栓予防組成物を含有することを特徴とする医薬部外品。
【請求項６】
請求項１〜３いずれか記載の血栓予防組成物を含有することを特徴とする医薬品。
【請求項１】
ひじき又はその抽出物を含有することを特徴とする血栓予防組成物。
【請求項２】
ひじき抽出物が、ひじきから水、塩基、酸、親水性溶媒、アセトンからなる群より選ばれる少なくとも１種により抽出されていることを特徴とする請求項１記載の血栓予防組成物。
【請求項３】
有機溶媒がメチルアルコール、エチルアルコール、ｎ−プロピルアルコール、イソプロピルアルコール、ブチルアルコール、酢酸エチル、酢酸ブチル、ジエチルエーテル、メチルエーテル、メチルイソブチルケトン、ヘキサン、又はクロロホルムからなる群より選ばれる少なくとも１種であることを特徴とする請求項２記載の血栓予防組成物。
【請求項４】
請求項１〜３いずれか記載の血栓予防組成物を含有することを特徴とする飲食品。
【請求項５】
請求項１〜３いずれか記載の血栓予防組成物を含有することを特徴とする医薬部外品。
【請求項６】
請求項１〜３いずれか記載の血栓予防組成物を含有することを特徴とする医薬品。
【公開番号】特開２００６−８９３８３（Ｐ２００６−８９３８３Ａ）
【公開日】平成１８年４月６日（２００６．４．６）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００４−２７３３３６（Ｐ２００４−２７３３３６）
【出願日】平成１６年９月２１日（２００４．９．２１）
【出願人】（０００２０４１８１）太陽化学株式会社 (244)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成１８年４月６日（２００６．４．６）
【国際特許分類】
【出願日】平成１６年９月２１日（２００４．９．２１）
【出願人】（０００２０４１８１）太陽化学株式会社 (244)
【Ｆターム（参考）】
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