視神経障害抑制剤及びそれを含有する飲食品
【課題】優れた視神経障害抑制作用（視神経細胞減少抑制作用等）を有し、かつ、安全性の高い視神経障害抑制剤、及び、前記視神経障害抑制剤を利用した飲食品を提供すること。
【解決手段】ツルレンゲ（Ａｓｔｒａｇａｌｕｓ ｃｏｍｐｌａｎａｔｕｓ Ｒ．Ｂｒ．）の抽出物を含有することを特徴とする視神経障害抑制剤、及び、前記視神経障害抑制剤を含有することを特徴とする飲食品である。
【解決手段】ツルレンゲ（Ａｓｔｒａｇａｌｕｓ ｃｏｍｐｌａｎａｔｕｓ Ｒ．Ｂｒ．）の抽出物を含有することを特徴とする視神経障害抑制剤、及び、前記視神経障害抑制剤を含有することを特徴とする飲食品である。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ツルレンゲの抽出物を含有する視神経障害抑制剤、及び、前記視神経障害抑制剤を含有する飲食品に関する。
【背景技術】
【０００２】
網膜は、視覚的な映像を神経信号に変換する機能を有する組織であり、視機能に関わる重要な役割を果たしている。網膜は、外側から、網膜色素上皮層、視細胞層、外境界膜、外顆粒層、外網状層、内顆粒層、内網状層、神経節細胞層（視神経細胞層）、神経線維層、内境界膜の１０層からなり、これらの層構造の中には、視細胞、双極細胞、水平細胞、アマクリン細胞、神経節細胞（視神経細胞）の５種類の神経細胞が存在している。目に入った光は、視細胞で神経信号に変換され、その信号は双極細胞、水平細胞、双極細胞、アマクリン細胞を経て、最終的に神経節細胞（視神経細胞）の軸策（視神経）を経て、脳中枢に伝えられる。
【０００３】
この網膜が、例えば虚血状態となると、網膜上にある視神経細胞がダメージを受けて減少し、視神経障害が引き起こされる。視神経障害は視力低下などの重大な問題を引き起こすため、このような視神経障害を防ぐ技術について、従来から広く研究が行われており、例えば、プロポリス抽出物を有効成分とする視機能障害改善剤（特許文献１）；セクレターゼ阻害剤を有効成分とする網膜神経細胞保護剤（特許文献２）；特定のスルファメート誘導体を有効成分とする視神経細胞保護剤（特許文献３）；インターロイキン−１阻害活性を有する化合物を有効成分とする視神経細胞保護剤（特許文献４）；などが報告されている。
【０００４】
網膜虚血を発症し、視神経障害が引き起こされ得る眼病は数多く存在し、一例では、糖尿病性網膜症、高血圧網膜症、動脈硬化性網膜症、網膜静脈閉塞症などが挙げられる。また近年、緑内障においても、網膜血流循環障害による視神経細胞死に起因して、視野障害が進行することが報告がされており、視神経細胞死を抑制することが緑内障の治療につながるという考え方が確立されつつある。
このようなことから、網膜虚血などに起因する視神経細胞の減少を防ぎ、視神経障害を抑制することのできる薬剤は、様々な眼病の治療又は予防に効果を奏することができることが期待され、したがって、更に新たな視神経障害抑制剤の開発が、未だ望まれているのが現状である。
【０００５】
【特許文献１】特開２００６−２４８９４６号公報
【特許文献２】特開２００５−３３０２６０号公報
【特許文献３】特開２００４−３３１５０２号公報
【特許文献４】特開２００２−１５４９８５号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、前記従来における諸問題を解決し、以下の目的を達成することを課題とする。即ち、本発明は、優れた視神経障害抑制作用（視神経細胞減少抑制作用等）を有し、かつ、安全性の高い視神経障害抑制剤、及び、前記視神経障害抑制剤を利用した飲食品を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは、前記課題を解決するために鋭意検討を行った結果、ツルレンゲ（Ａｓｔｒａｇａｌｕｓ ｃｏｍｐｌａｎａｔｕｓ Ｒ．Ｂｒ．）の抽出物が、優れた視神経障害抑制作用（視神経細胞減少抑制作用等）を有することを見出し、本発明の完成に至った。 ツルレンゲ（Ａｓｔｒａｇａｌｕｓ ｃｏｍｐｌａｎａｔｕｓ Ｒ．Ｂｒ．）は、マメ科ゲンゲ属の植物であり、ツルゲンゲとも呼ばれ、中国などの山野に生える多年草である。草丈は１ｍ以上、全体が短い剛毛に覆われ、茎はやや扁平で地上をはうように生える。ツルレンゲの種子は円みのある腎臓形で、沙苑子（シャエンシ）とも呼ばれ、肝機能や腎機能を補うなどの薬効があるとされている。しかしながら、ツルレンゲの抽出物が、優れた視神経障害抑制作用を有することは従来全く知られておらず、本発明者らによる新たな知見である。
【０００８】
本発明は、本発明者らの前記知見に基づくものであり、前記課題を解決するための手段としては、以下の通りである。即ち、
＜１＞ ツルレンゲ（Ａｓｔｒａｇａｌｕｓ ｃｏｍｐｌａｎａｔｕｓ Ｒ．Ｂｒ．）の抽出物を含有することを特徴とする視神経障害抑制剤である。
＜２＞ 視神経細胞減少抑制作用を有する前記＜１＞に記載の視神経障害抑制剤である。
＜３＞ 前記＜１＞から＜２＞のいずれかに記載の視神経障害抑制剤を含有することを特徴とする飲食品である。
【発明の効果】
【０００９】
本発明によると、従来における諸問題を解決し、前記目的を達成することができ、優れた視神経障害抑制作用（視神経細胞減少抑制作用等）を有し、かつ、安全性の高い視神経障害抑制剤、及び、前記視神経障害抑制剤を利用した飲食品を提供することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１０】
（視神経障害抑制剤）
本発明の視神経障害抑制剤は、ツルレンゲの抽出物を含有してなり、更に必要に応じて適宜その他の成分を含有してなる。
【００１１】
前記視神経障害抑制剤は、視神経細胞減少抑制作用、特に、網膜虚血による視神経細胞の減少を抑制する作用を、少なくとも有するものである。なお、本明細書中において、前記「視神経細胞」を、「神経節細胞」或いは単に「神経細胞」等と称することがある。
前記ツルレンゲの抽出物中に存在すると考えられる、視神経細胞減少抑制作用を発揮する物質の詳細については不明であるが、前記ツルレンゲの抽出物が、このような優れた作用を有し、視神経障害抑制剤として有用であることは、従来には全く知られておらず、本発明者らによる新たな知見である。
【００１２】
前記ツルレンゲ（Ａｓｔｒａｇａｌｕｓ ｃｏｍｐｌａｎａｔｕｓ Ｒ．Ｂｒ．）は、マメ科ゲンゲ属の植物であり、ツルゲンゲとも呼ばれ、中国などの山野に生える多年草である。草丈は１ｍ以上、全体が短い剛毛に覆われ、茎はやや扁平で地上をはうように生える。ツルレンゲの種子は円みのある腎臓形で、沙苑子（シャエンシ）とも呼ばれ、肝機能や腎機能を補うなどの薬効があるとされている。
前記ツルレンゲは、中国の遼寧、吉林、河北、陜西、甘粛、山西、内モンゴル等の山野に生え、これらの地域から容易に入手可能である。
【００１３】
抽出原料となる前記ツルレンゲの部位としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、ツルレンゲの葉部、花部、茎部、果実、種子、根部などを用いることができる。これらの中でも、種子が特に好ましい。
【００１４】
抽出原料である前記ツルレンゲは、例えば、乾燥した後に、そのままの状態で、又は粗砕機を用いて粉砕した状態で、溶媒抽出に供することができる。前記乾燥は、例えば、天日で行ってもよいし、通常使用される乾燥機を用いて行ってもよい。なお、前記ツルレンゲは、ヘキサン、ベンゼン等の非極性溶媒によって脱脂等の前処理を施してから抽出原料として使用してもよい。脱脂等の前処理を行うことにより、ツルレンゲの極性溶媒による抽出処理を、効率よく行うことができる。
【００１５】
前記ツルレンゲの抽出物は、植物の抽出に一般に用いられる方法を利用することによって、容易に得ることができる。なお、前記ツルレンゲの抽出物には、ツルレンゲの抽出液、該抽出液の希釈液若しくは濃縮液、該抽出液の乾燥物、又は、これらの粗精製物若しくは精製物のいずれもが含まれる。
【００１６】
抽出に用いる溶媒としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、水、親水性有機溶媒、又は、これらの混合溶媒等を用いることができる。
【００１７】
前記抽出溶媒として使用し得る水としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、純水、水道水、井戸水、鉱泉水、鉱水、温泉水、湧水、淡水等の他、これらに各種処理を施したものが含まれる。水に施す処理としては、例えば、精製、加熱、殺菌、ろ過、イオン交換、浸透圧の調整、緩衝化等が含まれる。なお、前記抽出溶媒として使用し得る水には、精製水、熱水、イオン交換水、生理食塩水、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水等も含まれる。
【００１８】
前記抽出溶媒として使用し得る親水性有機溶媒としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、メタノール、エタノール、プロピルアルコール、イソプロピルアルコール等の炭素数１〜５の低級アルコール；アセトン、メチルエチルケトン等の低級脂肪族ケトン；１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン等の炭素数２〜５の多価アルコールなどが挙げられ、これら親水性有機溶媒と水との混合溶媒なども用いることができる。なお、前記水と前記親水性有機溶媒との混合溶媒を使用する際には、低級アルコールの場合は水１０質量部に対して１質量部〜９０質量部、低級脂肪族ケトンの場合は水１０質量部に対して１質量部〜４０質量部を混合したものを使用することが好ましい。また、多価アルコールの場合は水１０質量部に対して１質量部〜９０質量部を混合したものを使用することが好ましい。
【００１９】
抽出原料である前記ツルレンゲから、視神経細胞減少抑制作用を少なくとも有する抽出物を抽出するにあたって、特殊な抽出方法を採用する必要はなく、室温又は還流加熱下で、任意の抽出装置を用いて抽出することができる。
具体的には、抽出溶媒を満たした処理槽内に、抽出原料としてのツルレンゲを投入し、更に必要に応じて時々攪拌しながら、３０分間〜２時間静置して可溶性成分を溶出した後、ろ過して固形物を除去し、得られた抽出液から抽出溶媒を留去し、乾燥することにより抽出物を得ることができる。抽出溶媒量は通常、抽出原料の５〜１５倍量（質量比）である。抽出条件は、抽出溶媒として水を用いた場合には、通常５０℃〜９５℃にて１〜４時間程度である。また、抽出溶媒として水とエタノールとの混合溶媒を用いた場合には、通常４０℃〜９０℃にて３０分間〜４時間程度である。なお、溶媒で抽出することにより得られる抽出液は、抽出溶媒が安全性の高いものであれば、そのまま本発明の視神経障害抑制剤として用いることができる。
【００２０】
抽出により得られるツルレンゲの抽出液は、該抽出液の希釈液若しくは濃縮液、該抽出液の乾燥物、又はこれらの粗精製物若しくは精製物を得るため、常法に従って希釈、濃縮、乾燥、精製等の処理を施してもよい。なお、得られるツルレンゲの抽出液は、そのままでも視神経障害抑制剤として使用することができるが、濃縮液又はその乾燥物としたものの方が利用しやすい。抽出液の乾燥物を得るにあたっては、常法を利用することができ、また、吸湿性を改善するためにデキストリン、シクロデキストリン等のキャリアーを添加してもよい。また、ツルレンゲの抽出物の生理活性の低下を招かない範囲で、脱色、脱臭等を目的とする精製を行うことも可能であるが、未精製のままでも実用上支障はない。なお、精製は、具体的には、活性炭処理、吸着樹脂処理、イオン交換樹脂処理等によって行うことができる。
【００２１】
以上のようにして得られるツルレンゲの抽出物は、視神経細胞減少抑制作用を少なくとも有しており、この作用に基づいて、本発明の視神経障害抑制剤の有効成分として好適に利用可能である。
なお、前記視神経障害抑制剤中の、前記ツルレンゲの抽出物の含有量としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、また、前記視神経障害抑制剤は、前記ツルレンゲの抽出物そのものであってもよい。
【００２２】
また、前記視神経障害抑制剤中に含まれ得る、前記ツルレンゲの抽出物以外のその他の成分としても、本発明の効果を損なわない範囲内であれば、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、前記ツルレンゲの抽出物を所望の濃度に希釈等するための、生理食塩液などが挙げられる。また、前記視神経障害抑制剤中の前記その他の成分の含有量にも、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。
【００２３】
本発明の視神経障害抑制剤は、優れた視神経障害抑制作用を有すると共に、安全性に優れるため、例えば、後述する本発明の飲食品などへの利用に好適である。
【００２４】
（飲食品）
本発明の飲食品は、前記した本発明の視神経障害抑制剤を含有してなり、更に必要に応じて適宜その他の成分を含有してなる。
ここで、前記飲食品とは、人の健康に危害を加えるおそれが少なく、通常の社会生活において、経口又は消化管投与により摂取されるものをいい、行政区分上の食品、医薬品、医薬部外品、などの区分に制限されるものではなく、例えば、経口的に摂取される一般食品、健康食品、保健機能食品、医薬部外品、医薬品などを幅広く含むものを意味する。
前記飲食品は、ツルレンゲの抽出物を、その活性を妨げないように任意の飲食物に配合したものであってもよいし、ツルレンゲの抽出物を主成分とする栄養補助食品であってもよい。また、前記飲食品は、ツルレンゲの抽出物そのものであってもよい。
【００２５】
前記飲食品としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、清涼飲料、炭酸飲料、栄養飲料、果実飲料、乳酸飲料等の飲料；アイスクリーム、アイスシャーベット、かき氷等の冷菓；そば、うどん、はるさめ、ぎょうざの皮、しゅうまいの皮、中華麺、即席麺等の麺類；飴、キャンディー、ガム、チョコレート、錠菓、スナック菓子、ビスケット、ゼリー、ジャム、クリーム、焼き菓子、パン等の菓子類；カニ、サケ、アサリ、マグロ、イワシ、エビ、カツオ、サバ、クジラ、カキ、サンマ、イカ、アカガイ、ホタテ、アワビ、ウニ、イクラ、トコブシ等の水産物；かまぼこ、ハム、ソーセージ等の水産・畜産加工食品；加工乳、発酵乳等の乳製品；サラダ油、てんぷら油、マーガリン、マヨネーズ、ショートニング、ホイップクリーム、ドレッシング等の油脂及び油脂加工食品；ソース、たれ等の調味料；カレー、シチュー、親子丼、お粥、雑炊、中華丼、かつ丼、天丼、うな丼、ハヤシライス、おでん、マーボドーフ、牛丼、ミートソース、玉子スープ、オムライス、餃子、シューマイ、ハンバーグ、ミートボール等のレトルトパウチ食品；種々の形態の健康食品や栄養補助食品；錠剤、カプセル剤、ドリンク剤、トローチ等の医薬品、医薬部外品などが挙げられる。
【００２６】
前記その他の成分としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、前記飲食品を製造するにあたって通常用いられる、補助的原料又は添加物などが挙げられる。
前記補助的原料又は添加物としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、ブドウ糖、果糖、ショ糖、マルトース、ソルビトール、ステビオサイド、ルブソサイド、コーンシロップ、乳糖、クエン酸、酒石酸、リンゴ酸、コハク酸、乳酸、Ｌ−アスコルビン酸、ｄｌ−α−トコフェロール、エリソルビン酸ナトリウム、グリセリン、プロピレングリコール、グリセリン脂肪酸エステル、ポリグリセリン脂肪酸エステル、ショ糖脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステル、アラビアガム、カラギーナン、カゼイン、ゼラチン、ペクチン、寒天、ビタミンＢ類、ニコチン酸アミド、パントテン酸カルシウム、アミノ酸類、カルシウム塩類、色素、香料、保存剤などが挙げられる。
【００２７】
前記飲食品中の、前記視神経障害抑制剤の含有量としては、対象となる飲食品の種類に応じて異なり、一概には規定することができないが、例えば、飲食品本来の味を損なわない範囲で任意の飲食物に配合することを目的とする場合には、有効成分であるツルレンゲの抽出物の量として、０．００１質量％〜５０質量％が好ましく、０．０１質量％〜２０質量％がより好ましい。また、例えば、ツルレンゲの抽出物を主成分とする顆粒、錠剤、カプセル形態等の栄養補助飲食品を製造することを目的とする場合には、有効成分であるツルレンゲの抽出物の量として、０．０１質量％〜１００質量％が好ましく、５質量％〜１００質量％がより好ましい。
【００２８】
（効果）
本発明の視神経障害抑制剤、及び、本発明の飲食品は、日常的に経口摂取することが可能であり、有効成分であるツルレンゲの抽出物の働きによって、少なくとも、視神経細胞減少抑制作用、特に、網膜虚血による視神経細胞の減少を抑制する作用を、極めて効果的に発揮させることができるものである。そのため、本発明の視神経障害抑制剤、及び、本発明の飲食品は、例えば、網膜虚血等による視神経障害が引き起こされ得る種々の眼病の治療又は予防のために、広く有効であると考えられる。このような眼病としては、例えば、糖尿病性網膜症、高血圧網膜症、動脈硬化性網膜症、網膜静脈閉塞症などが挙げられる。また近年、緑内障においても、網膜血流循環障害による視神経細胞死に起因して、視野障害が進行することが報告がされており、本発明の視神経障害抑制剤、及び、本発明の飲食品は、このような緑内障の治療又は予防のためにも有効であると考えられる。
なお、本発明の視神経障害抑制剤、及び、本発明の飲食品は、ヒトに対して好適に適用されるものであるが、その作用効果が奏される限り、ヒト以外の動物（例えば、マウス、ラット、ハムスター、イヌ、ネコ、ウシ、ブタ、サルなど）に対して適用することも可能である。また、本発明の視神経障害抑制剤、及び、本発明の飲食品は、天然由来のツルレンゲの抽出物を有効成分としたものであり、安全性に優れる点でも、有利である。
【実施例】
【００２９】
以下、本発明の実施例を説明するが、本発明は、これらの実施例に何ら限定されるものではない。
【００３０】
（製造例１：ツルレンゲの水抽出物の製造）
抽出原料としてツルレンゲの種子の粉砕物１，０００ｇを、水５，０００ｍＬに投入し、攪拌しながら２時間、９０℃に保った後、ろ過した。ろ液を６０℃で減圧下に濃縮し、更に減圧乾燥機で乾燥して、抽出物（粉末状）を得た。得られた抽出物の収率を表１に示す。
【００３１】
（製造例２：ツルレンゲの３０質量％エタノール抽出物の製造）
抽出原料としてツルレンゲの種子１，０００ｇを、３０質量％エタノール（水とエタノールとの質量比７：３）５，０００ｍＬに投入し、攪拌しながら２時間、還流下に保った後、ろ過した。ろ液を６０℃で減圧下に濃縮し、更に減圧乾燥機で乾燥して、抽出物（粉末状）を得た。得られた抽出物の収率を表１に示す。
【００３２】
（製造例３：ツルレンゲの７０質量％エタノール抽出物の製造）
抽出原料としてツルレンゲの種子１，０００ｇを、７０質量％エタノール（水とエタノールとの質量比３：７）５，０００ｍＬに投入し、攪拌しながら２時間、還流下に保った後、ろ過した。ろ液を６０℃で減圧下に濃縮し、更に減圧乾燥機で乾燥して、抽出物（粉末状）を得た。得られた抽出物の収率を表１に示す。
【００３３】
【表１】
【００３４】
（実施例１：視神経細胞減少抑制作用試験）
製造例１〜３の各ツルレンゲ抽出物を被験試料として用い、下記の試験法により、ツルレンゲ抽出物のラット網膜虚血モデルにおける視神経細胞減少抑制作用を試験した。
【００３５】
（１）使用動物及び飼育条件
実験動物には、６週齢、１６５〜１９６ｇの雄性ＳＤ系ラット（ＳＰＦ：日本チャールズ・リバー株式会社）を使用した。動物は実験期間を通じて、温度２０〜２６℃、相対湿度４０〜７０％、換気回数１０〜２０回／時間、照明時間１２時間（７：００〜１９：００）の範囲内に設定したクリーン飼育室内の、ステンレス製ハンガーラック（株式会社ケアリー）に設置されたステンレス製ケージに、２〜３匹ずつ収容して飼育した。飼料には放射線滅菌された粉末飼料（ＦＲ−２，株式会社船橋農場）を使用し、飲料水には上水道水を給水瓶により、それぞれ自由に摂取させた。
各群（各ツルレンゲ抽出物１６５０ｍｇ／ｋｇ投与群；注射用水投与群）につき、ラット１０匹を用い、実験を行った。ラットは、馴化終了時の体重をもとに、完全無作為抽出法により各群にランダムに割り当てた。
【００３６】
（２）被験物質の調製
各ツルレンゲ抽出物１６５０ｍｇ／ｋｇ投与群で使用する投与液は、各ツルレンゲ抽出物の粉末を乳棒及び乳鉢で注射用水に溶解し、２０ｍＬ中にツルレンゲ抽出物が１６５０ｍｇ含まれるように調製した。各投与液は全て用事に調製した。
【００３７】
（３）ラット網膜虚血モデルの作製及び被験物質の投与
ラットの体重を測定の後、ペントバルビタールナトリウム（５０〜７５ｍｇ／ｋｇ）を腹腔内投与し、麻酔した。ラットを固定台に固定し、ラットの体温を体温コントローラーを用いて３７℃前後に保った。ラットの眼の位置から液面が１７０±５ｃｍの高さになるように、生理食塩液（株式会社大塚製薬工場）のボトルをつり上げ、１７３．３ｈＰａ（１３０ｍｍＨｇ）前後の圧力がかけられるようにし、ボトルに延長チューブを接続して、その先端には注射針（２７ｇａｕｇｅ×３／４ｉｎｃｈ）を装着した。ミドリンＰ点眼液でラットの瞳を散瞳させた後、ピンセットで瞼を開きながら針を鼻側から前眼房内に刺入し、４５分間の虚血負荷を行った。
各群における被験物質の投与は、虚血前７日間及び虚血後７日間（１日１回、計１４日間）、ディスポーザブル注射筒及び経口ゾンデを用いて、経口投与により行った。投与期間中、体重は週２回測定し、投与液量は測定日の体重に基づき、個体別に算出した。なお、虚血及び剖検は、被験物質投与の１時間後に行った。全例、左眼を処置眼とし、右眼をコントロール（無処置眼）とした。
【００３８】
（４）一般状態の観察及び病理学的検査
投与期間中は、全例について一般状態及び生死を１日１回観察した。
剖検日にラットを麻酔致死した後、眼球を摘出し、網膜虚血による視神経障害の病理学的検討を行った。摘出眼球（左：処置眼、右：無処置眼）をＤａｖｉｄｓｏｎ液で固定後、視神経乳頭部を通る横断面でパラフィン切片を作製し、ヘマトキシリン・エオジン染色標本を作製した。全例の視神経乳頭より０．５ｍｍの部位を中心として、２０倍の対物レンズを用いてディジタル写真撮影を行った。撮影した写真（画像幅：３７９．２３μｍ）を用いて、神経細胞層（視神経細胞層、神経節細胞層）の神経細胞数（視神経細胞数、神経節細胞数）を算定し、１ｍｍ幅当たりの神経細胞数（ＧＣＬ，ｃｅｌｌ／ｍｍ）を算出した。結果を表２に示す。
【００３９】
（５）統計学的方法
測定値は各群ごとに平均値±標準誤差で表した。統計学的手法は、Ｆ検定により分散に一様性が認められた場合はＳｔｕｄｅｎｔのｔ検定を、分散に一様性が認められなかった場合はＡｓｐｉｎ−Ｗｅｌｃｈのｔ検定を用いた。有意水準は５％で表示した。統計解析にはＥｘｃｅｌ９７及び２００４（マイクロソフト株式会社）、市販の統計プログラムＳＡＳ ＳＹＳＴＥＭ（Ｖｅｒ．８．０２；株式会社ＳＡＳインスティチュートジャパン）、ＳＡＳ統計処理システム（株式会社住商情報システム）及びＥＸＳＡＳ（ｖｅｒ．７．１６；株式会社サイエンティスト社）を使用した。
【００４０】
【表２】
【００４１】
表２の結果から、ツルレンゲ抽出物１６５０ｍｇ／ｋｇ投与群の処置眼（左）では、注射用水群の処置眼（左）に比べて、神経細胞数（ＧＣＬ，ｃｅｌｌ／ｍｍ）で有意な増加が認められたことがわかる。
【００４２】
以上、前記実施例１の結果から、ツルレンゲ抽出物は、網膜虚血による神経細胞の減少を抑制する、強い作用を有していることが認められた。このことから、ツルレンゲ抽出物は、視神経障害抑制剤として非常に有用であり、網膜虚血等による視神経障害が引き起こされ得る種々の眼病の治療又は予防を目的とした、健康食品、栄養補助食品などに幅広く利用可能であることが示唆された。
【００４３】
（配合実施例１：錠剤状栄養補助食品）
下記の混合物を打錠して、錠剤状栄養補助食品を製造した。
・製造例２のツルレンゲ３０質量％エタノール抽出物・・・１１質量％
・粉糖（ショ糖）・・・５２質量％
・グアガム分解物・・・３３質量％
・グリセリン脂肪酸エステル・・・４質量％
【００４４】
（配合実施例２：顆粒状栄養補助食品）
下記の混合物を顆粒状に形成して、栄養補助食品を製造した。
・製造例１のツルレンゲ水抽出物・・・６．７質量％
・ビートオリゴ糖・・・５９．３質量％
・ビタミンＣ・・・３３．３質量％
・ステビア抽出物・・・０．７質量％
【００４５】
（配合実施例３：ソフトカプセル状栄養補助食品）
下記の混合物をソフトカプセルに充填して、栄養補助食品を製造した。
・製造例２のツルレンゲ３０質量％エタノール抽出物・・・３８質量％
・植物油・・・３８質量％
・グリセリン脂肪酸エステル・・・４質量％
・ミツロウ・・・２０質量％
【産業上の利用可能性】
【００４６】
本発明の視神経障害抑制剤は、ツルレンゲの抽出物を含むことから、優れた視神経障害抑制作用を有し、かつ、安全性にも優れたものである。したがって、本発明の視神経障害抑制剤は、例えば、網膜虚血等による視神経障害が引き起こされ得る種々の眼病の治療又は予防を目的とした、健康食品、栄養補助食品などに幅広く利用可能である。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ツルレンゲの抽出物を含有する視神経障害抑制剤、及び、前記視神経障害抑制剤を含有する飲食品に関する。
【背景技術】
【０００２】
網膜は、視覚的な映像を神経信号に変換する機能を有する組織であり、視機能に関わる重要な役割を果たしている。網膜は、外側から、網膜色素上皮層、視細胞層、外境界膜、外顆粒層、外網状層、内顆粒層、内網状層、神経節細胞層（視神経細胞層）、神経線維層、内境界膜の１０層からなり、これらの層構造の中には、視細胞、双極細胞、水平細胞、アマクリン細胞、神経節細胞（視神経細胞）の５種類の神経細胞が存在している。目に入った光は、視細胞で神経信号に変換され、その信号は双極細胞、水平細胞、双極細胞、アマクリン細胞を経て、最終的に神経節細胞（視神経細胞）の軸策（視神経）を経て、脳中枢に伝えられる。
【０００３】
この網膜が、例えば虚血状態となると、網膜上にある視神経細胞がダメージを受けて減少し、視神経障害が引き起こされる。視神経障害は視力低下などの重大な問題を引き起こすため、このような視神経障害を防ぐ技術について、従来から広く研究が行われており、例えば、プロポリス抽出物を有効成分とする視機能障害改善剤（特許文献１）；セクレターゼ阻害剤を有効成分とする網膜神経細胞保護剤（特許文献２）；特定のスルファメート誘導体を有効成分とする視神経細胞保護剤（特許文献３）；インターロイキン−１阻害活性を有する化合物を有効成分とする視神経細胞保護剤（特許文献４）；などが報告されている。
【０００４】
網膜虚血を発症し、視神経障害が引き起こされ得る眼病は数多く存在し、一例では、糖尿病性網膜症、高血圧網膜症、動脈硬化性網膜症、網膜静脈閉塞症などが挙げられる。また近年、緑内障においても、網膜血流循環障害による視神経細胞死に起因して、視野障害が進行することが報告がされており、視神経細胞死を抑制することが緑内障の治療につながるという考え方が確立されつつある。
このようなことから、網膜虚血などに起因する視神経細胞の減少を防ぎ、視神経障害を抑制することのできる薬剤は、様々な眼病の治療又は予防に効果を奏することができることが期待され、したがって、更に新たな視神経障害抑制剤の開発が、未だ望まれているのが現状である。
【０００５】
【特許文献１】特開２００６−２４８９４６号公報
【特許文献２】特開２００５−３３０２６０号公報
【特許文献３】特開２００４−３３１５０２号公報
【特許文献４】特開２００２−１５４９８５号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、前記従来における諸問題を解決し、以下の目的を達成することを課題とする。即ち、本発明は、優れた視神経障害抑制作用（視神経細胞減少抑制作用等）を有し、かつ、安全性の高い視神経障害抑制剤、及び、前記視神経障害抑制剤を利用した飲食品を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは、前記課題を解決するために鋭意検討を行った結果、ツルレンゲ（Ａｓｔｒａｇａｌｕｓ ｃｏｍｐｌａｎａｔｕｓ Ｒ．Ｂｒ．）の抽出物が、優れた視神経障害抑制作用（視神経細胞減少抑制作用等）を有することを見出し、本発明の完成に至った。 ツルレンゲ（Ａｓｔｒａｇａｌｕｓ ｃｏｍｐｌａｎａｔｕｓ Ｒ．Ｂｒ．）は、マメ科ゲンゲ属の植物であり、ツルゲンゲとも呼ばれ、中国などの山野に生える多年草である。草丈は１ｍ以上、全体が短い剛毛に覆われ、茎はやや扁平で地上をはうように生える。ツルレンゲの種子は円みのある腎臓形で、沙苑子（シャエンシ）とも呼ばれ、肝機能や腎機能を補うなどの薬効があるとされている。しかしながら、ツルレンゲの抽出物が、優れた視神経障害抑制作用を有することは従来全く知られておらず、本発明者らによる新たな知見である。
【０００８】
本発明は、本発明者らの前記知見に基づくものであり、前記課題を解決するための手段としては、以下の通りである。即ち、
＜１＞ ツルレンゲ（Ａｓｔｒａｇａｌｕｓ ｃｏｍｐｌａｎａｔｕｓ Ｒ．Ｂｒ．）の抽出物を含有することを特徴とする視神経障害抑制剤である。
＜２＞ 視神経細胞減少抑制作用を有する前記＜１＞に記載の視神経障害抑制剤である。
＜３＞ 前記＜１＞から＜２＞のいずれかに記載の視神経障害抑制剤を含有することを特徴とする飲食品である。
【発明の効果】
【０００９】
本発明によると、従来における諸問題を解決し、前記目的を達成することができ、優れた視神経障害抑制作用（視神経細胞減少抑制作用等）を有し、かつ、安全性の高い視神経障害抑制剤、及び、前記視神経障害抑制剤を利用した飲食品を提供することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１０】
（視神経障害抑制剤）
本発明の視神経障害抑制剤は、ツルレンゲの抽出物を含有してなり、更に必要に応じて適宜その他の成分を含有してなる。
【００１１】
前記視神経障害抑制剤は、視神経細胞減少抑制作用、特に、網膜虚血による視神経細胞の減少を抑制する作用を、少なくとも有するものである。なお、本明細書中において、前記「視神経細胞」を、「神経節細胞」或いは単に「神経細胞」等と称することがある。
前記ツルレンゲの抽出物中に存在すると考えられる、視神経細胞減少抑制作用を発揮する物質の詳細については不明であるが、前記ツルレンゲの抽出物が、このような優れた作用を有し、視神経障害抑制剤として有用であることは、従来には全く知られておらず、本発明者らによる新たな知見である。
【００１２】
前記ツルレンゲ（Ａｓｔｒａｇａｌｕｓ ｃｏｍｐｌａｎａｔｕｓ Ｒ．Ｂｒ．）は、マメ科ゲンゲ属の植物であり、ツルゲンゲとも呼ばれ、中国などの山野に生える多年草である。草丈は１ｍ以上、全体が短い剛毛に覆われ、茎はやや扁平で地上をはうように生える。ツルレンゲの種子は円みのある腎臓形で、沙苑子（シャエンシ）とも呼ばれ、肝機能や腎機能を補うなどの薬効があるとされている。
前記ツルレンゲは、中国の遼寧、吉林、河北、陜西、甘粛、山西、内モンゴル等の山野に生え、これらの地域から容易に入手可能である。
【００１３】
抽出原料となる前記ツルレンゲの部位としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、ツルレンゲの葉部、花部、茎部、果実、種子、根部などを用いることができる。これらの中でも、種子が特に好ましい。
【００１４】
抽出原料である前記ツルレンゲは、例えば、乾燥した後に、そのままの状態で、又は粗砕機を用いて粉砕した状態で、溶媒抽出に供することができる。前記乾燥は、例えば、天日で行ってもよいし、通常使用される乾燥機を用いて行ってもよい。なお、前記ツルレンゲは、ヘキサン、ベンゼン等の非極性溶媒によって脱脂等の前処理を施してから抽出原料として使用してもよい。脱脂等の前処理を行うことにより、ツルレンゲの極性溶媒による抽出処理を、効率よく行うことができる。
【００１５】
前記ツルレンゲの抽出物は、植物の抽出に一般に用いられる方法を利用することによって、容易に得ることができる。なお、前記ツルレンゲの抽出物には、ツルレンゲの抽出液、該抽出液の希釈液若しくは濃縮液、該抽出液の乾燥物、又は、これらの粗精製物若しくは精製物のいずれもが含まれる。
【００１６】
抽出に用いる溶媒としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、水、親水性有機溶媒、又は、これらの混合溶媒等を用いることができる。
【００１７】
前記抽出溶媒として使用し得る水としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、純水、水道水、井戸水、鉱泉水、鉱水、温泉水、湧水、淡水等の他、これらに各種処理を施したものが含まれる。水に施す処理としては、例えば、精製、加熱、殺菌、ろ過、イオン交換、浸透圧の調整、緩衝化等が含まれる。なお、前記抽出溶媒として使用し得る水には、精製水、熱水、イオン交換水、生理食塩水、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水等も含まれる。
【００１８】
前記抽出溶媒として使用し得る親水性有機溶媒としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、メタノール、エタノール、プロピルアルコール、イソプロピルアルコール等の炭素数１〜５の低級アルコール；アセトン、メチルエチルケトン等の低級脂肪族ケトン；１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン等の炭素数２〜５の多価アルコールなどが挙げられ、これら親水性有機溶媒と水との混合溶媒なども用いることができる。なお、前記水と前記親水性有機溶媒との混合溶媒を使用する際には、低級アルコールの場合は水１０質量部に対して１質量部〜９０質量部、低級脂肪族ケトンの場合は水１０質量部に対して１質量部〜４０質量部を混合したものを使用することが好ましい。また、多価アルコールの場合は水１０質量部に対して１質量部〜９０質量部を混合したものを使用することが好ましい。
【００１９】
抽出原料である前記ツルレンゲから、視神経細胞減少抑制作用を少なくとも有する抽出物を抽出するにあたって、特殊な抽出方法を採用する必要はなく、室温又は還流加熱下で、任意の抽出装置を用いて抽出することができる。
具体的には、抽出溶媒を満たした処理槽内に、抽出原料としてのツルレンゲを投入し、更に必要に応じて時々攪拌しながら、３０分間〜２時間静置して可溶性成分を溶出した後、ろ過して固形物を除去し、得られた抽出液から抽出溶媒を留去し、乾燥することにより抽出物を得ることができる。抽出溶媒量は通常、抽出原料の５〜１５倍量（質量比）である。抽出条件は、抽出溶媒として水を用いた場合には、通常５０℃〜９５℃にて１〜４時間程度である。また、抽出溶媒として水とエタノールとの混合溶媒を用いた場合には、通常４０℃〜９０℃にて３０分間〜４時間程度である。なお、溶媒で抽出することにより得られる抽出液は、抽出溶媒が安全性の高いものであれば、そのまま本発明の視神経障害抑制剤として用いることができる。
【００２０】
抽出により得られるツルレンゲの抽出液は、該抽出液の希釈液若しくは濃縮液、該抽出液の乾燥物、又はこれらの粗精製物若しくは精製物を得るため、常法に従って希釈、濃縮、乾燥、精製等の処理を施してもよい。なお、得られるツルレンゲの抽出液は、そのままでも視神経障害抑制剤として使用することができるが、濃縮液又はその乾燥物としたものの方が利用しやすい。抽出液の乾燥物を得るにあたっては、常法を利用することができ、また、吸湿性を改善するためにデキストリン、シクロデキストリン等のキャリアーを添加してもよい。また、ツルレンゲの抽出物の生理活性の低下を招かない範囲で、脱色、脱臭等を目的とする精製を行うことも可能であるが、未精製のままでも実用上支障はない。なお、精製は、具体的には、活性炭処理、吸着樹脂処理、イオン交換樹脂処理等によって行うことができる。
【００２１】
以上のようにして得られるツルレンゲの抽出物は、視神経細胞減少抑制作用を少なくとも有しており、この作用に基づいて、本発明の視神経障害抑制剤の有効成分として好適に利用可能である。
なお、前記視神経障害抑制剤中の、前記ツルレンゲの抽出物の含有量としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、また、前記視神経障害抑制剤は、前記ツルレンゲの抽出物そのものであってもよい。
【００２２】
また、前記視神経障害抑制剤中に含まれ得る、前記ツルレンゲの抽出物以外のその他の成分としても、本発明の効果を損なわない範囲内であれば、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、前記ツルレンゲの抽出物を所望の濃度に希釈等するための、生理食塩液などが挙げられる。また、前記視神経障害抑制剤中の前記その他の成分の含有量にも、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。
【００２３】
本発明の視神経障害抑制剤は、優れた視神経障害抑制作用を有すると共に、安全性に優れるため、例えば、後述する本発明の飲食品などへの利用に好適である。
【００２４】
（飲食品）
本発明の飲食品は、前記した本発明の視神経障害抑制剤を含有してなり、更に必要に応じて適宜その他の成分を含有してなる。
ここで、前記飲食品とは、人の健康に危害を加えるおそれが少なく、通常の社会生活において、経口又は消化管投与により摂取されるものをいい、行政区分上の食品、医薬品、医薬部外品、などの区分に制限されるものではなく、例えば、経口的に摂取される一般食品、健康食品、保健機能食品、医薬部外品、医薬品などを幅広く含むものを意味する。
前記飲食品は、ツルレンゲの抽出物を、その活性を妨げないように任意の飲食物に配合したものであってもよいし、ツルレンゲの抽出物を主成分とする栄養補助食品であってもよい。また、前記飲食品は、ツルレンゲの抽出物そのものであってもよい。
【００２５】
前記飲食品としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、清涼飲料、炭酸飲料、栄養飲料、果実飲料、乳酸飲料等の飲料；アイスクリーム、アイスシャーベット、かき氷等の冷菓；そば、うどん、はるさめ、ぎょうざの皮、しゅうまいの皮、中華麺、即席麺等の麺類；飴、キャンディー、ガム、チョコレート、錠菓、スナック菓子、ビスケット、ゼリー、ジャム、クリーム、焼き菓子、パン等の菓子類；カニ、サケ、アサリ、マグロ、イワシ、エビ、カツオ、サバ、クジラ、カキ、サンマ、イカ、アカガイ、ホタテ、アワビ、ウニ、イクラ、トコブシ等の水産物；かまぼこ、ハム、ソーセージ等の水産・畜産加工食品；加工乳、発酵乳等の乳製品；サラダ油、てんぷら油、マーガリン、マヨネーズ、ショートニング、ホイップクリーム、ドレッシング等の油脂及び油脂加工食品；ソース、たれ等の調味料；カレー、シチュー、親子丼、お粥、雑炊、中華丼、かつ丼、天丼、うな丼、ハヤシライス、おでん、マーボドーフ、牛丼、ミートソース、玉子スープ、オムライス、餃子、シューマイ、ハンバーグ、ミートボール等のレトルトパウチ食品；種々の形態の健康食品や栄養補助食品；錠剤、カプセル剤、ドリンク剤、トローチ等の医薬品、医薬部外品などが挙げられる。
【００２６】
前記その他の成分としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、前記飲食品を製造するにあたって通常用いられる、補助的原料又は添加物などが挙げられる。
前記補助的原料又は添加物としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、ブドウ糖、果糖、ショ糖、マルトース、ソルビトール、ステビオサイド、ルブソサイド、コーンシロップ、乳糖、クエン酸、酒石酸、リンゴ酸、コハク酸、乳酸、Ｌ−アスコルビン酸、ｄｌ−α−トコフェロール、エリソルビン酸ナトリウム、グリセリン、プロピレングリコール、グリセリン脂肪酸エステル、ポリグリセリン脂肪酸エステル、ショ糖脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステル、アラビアガム、カラギーナン、カゼイン、ゼラチン、ペクチン、寒天、ビタミンＢ類、ニコチン酸アミド、パントテン酸カルシウム、アミノ酸類、カルシウム塩類、色素、香料、保存剤などが挙げられる。
【００２７】
前記飲食品中の、前記視神経障害抑制剤の含有量としては、対象となる飲食品の種類に応じて異なり、一概には規定することができないが、例えば、飲食品本来の味を損なわない範囲で任意の飲食物に配合することを目的とする場合には、有効成分であるツルレンゲの抽出物の量として、０．００１質量％〜５０質量％が好ましく、０．０１質量％〜２０質量％がより好ましい。また、例えば、ツルレンゲの抽出物を主成分とする顆粒、錠剤、カプセル形態等の栄養補助飲食品を製造することを目的とする場合には、有効成分であるツルレンゲの抽出物の量として、０．０１質量％〜１００質量％が好ましく、５質量％〜１００質量％がより好ましい。
【００２８】
（効果）
本発明の視神経障害抑制剤、及び、本発明の飲食品は、日常的に経口摂取することが可能であり、有効成分であるツルレンゲの抽出物の働きによって、少なくとも、視神経細胞減少抑制作用、特に、網膜虚血による視神経細胞の減少を抑制する作用を、極めて効果的に発揮させることができるものである。そのため、本発明の視神経障害抑制剤、及び、本発明の飲食品は、例えば、網膜虚血等による視神経障害が引き起こされ得る種々の眼病の治療又は予防のために、広く有効であると考えられる。このような眼病としては、例えば、糖尿病性網膜症、高血圧網膜症、動脈硬化性網膜症、網膜静脈閉塞症などが挙げられる。また近年、緑内障においても、網膜血流循環障害による視神経細胞死に起因して、視野障害が進行することが報告がされており、本発明の視神経障害抑制剤、及び、本発明の飲食品は、このような緑内障の治療又は予防のためにも有効であると考えられる。
なお、本発明の視神経障害抑制剤、及び、本発明の飲食品は、ヒトに対して好適に適用されるものであるが、その作用効果が奏される限り、ヒト以外の動物（例えば、マウス、ラット、ハムスター、イヌ、ネコ、ウシ、ブタ、サルなど）に対して適用することも可能である。また、本発明の視神経障害抑制剤、及び、本発明の飲食品は、天然由来のツルレンゲの抽出物を有効成分としたものであり、安全性に優れる点でも、有利である。
【実施例】
【００２９】
以下、本発明の実施例を説明するが、本発明は、これらの実施例に何ら限定されるものではない。
【００３０】
（製造例１：ツルレンゲの水抽出物の製造）
抽出原料としてツルレンゲの種子の粉砕物１，０００ｇを、水５，０００ｍＬに投入し、攪拌しながら２時間、９０℃に保った後、ろ過した。ろ液を６０℃で減圧下に濃縮し、更に減圧乾燥機で乾燥して、抽出物（粉末状）を得た。得られた抽出物の収率を表１に示す。
【００３１】
（製造例２：ツルレンゲの３０質量％エタノール抽出物の製造）
抽出原料としてツルレンゲの種子１，０００ｇを、３０質量％エタノール（水とエタノールとの質量比７：３）５，０００ｍＬに投入し、攪拌しながら２時間、還流下に保った後、ろ過した。ろ液を６０℃で減圧下に濃縮し、更に減圧乾燥機で乾燥して、抽出物（粉末状）を得た。得られた抽出物の収率を表１に示す。
【００３２】
（製造例３：ツルレンゲの７０質量％エタノール抽出物の製造）
抽出原料としてツルレンゲの種子１，０００ｇを、７０質量％エタノール（水とエタノールとの質量比３：７）５，０００ｍＬに投入し、攪拌しながら２時間、還流下に保った後、ろ過した。ろ液を６０℃で減圧下に濃縮し、更に減圧乾燥機で乾燥して、抽出物（粉末状）を得た。得られた抽出物の収率を表１に示す。
【００３３】
【表１】
【００３４】
（実施例１：視神経細胞減少抑制作用試験）
製造例１〜３の各ツルレンゲ抽出物を被験試料として用い、下記の試験法により、ツルレンゲ抽出物のラット網膜虚血モデルにおける視神経細胞減少抑制作用を試験した。
【００３５】
（１）使用動物及び飼育条件
実験動物には、６週齢、１６５〜１９６ｇの雄性ＳＤ系ラット（ＳＰＦ：日本チャールズ・リバー株式会社）を使用した。動物は実験期間を通じて、温度２０〜２６℃、相対湿度４０〜７０％、換気回数１０〜２０回／時間、照明時間１２時間（７：００〜１９：００）の範囲内に設定したクリーン飼育室内の、ステンレス製ハンガーラック（株式会社ケアリー）に設置されたステンレス製ケージに、２〜３匹ずつ収容して飼育した。飼料には放射線滅菌された粉末飼料（ＦＲ−２，株式会社船橋農場）を使用し、飲料水には上水道水を給水瓶により、それぞれ自由に摂取させた。
各群（各ツルレンゲ抽出物１６５０ｍｇ／ｋｇ投与群；注射用水投与群）につき、ラット１０匹を用い、実験を行った。ラットは、馴化終了時の体重をもとに、完全無作為抽出法により各群にランダムに割り当てた。
【００３６】
（２）被験物質の調製
各ツルレンゲ抽出物１６５０ｍｇ／ｋｇ投与群で使用する投与液は、各ツルレンゲ抽出物の粉末を乳棒及び乳鉢で注射用水に溶解し、２０ｍＬ中にツルレンゲ抽出物が１６５０ｍｇ含まれるように調製した。各投与液は全て用事に調製した。
【００３７】
（３）ラット網膜虚血モデルの作製及び被験物質の投与
ラットの体重を測定の後、ペントバルビタールナトリウム（５０〜７５ｍｇ／ｋｇ）を腹腔内投与し、麻酔した。ラットを固定台に固定し、ラットの体温を体温コントローラーを用いて３７℃前後に保った。ラットの眼の位置から液面が１７０±５ｃｍの高さになるように、生理食塩液（株式会社大塚製薬工場）のボトルをつり上げ、１７３．３ｈＰａ（１３０ｍｍＨｇ）前後の圧力がかけられるようにし、ボトルに延長チューブを接続して、その先端には注射針（２７ｇａｕｇｅ×３／４ｉｎｃｈ）を装着した。ミドリンＰ点眼液でラットの瞳を散瞳させた後、ピンセットで瞼を開きながら針を鼻側から前眼房内に刺入し、４５分間の虚血負荷を行った。
各群における被験物質の投与は、虚血前７日間及び虚血後７日間（１日１回、計１４日間）、ディスポーザブル注射筒及び経口ゾンデを用いて、経口投与により行った。投与期間中、体重は週２回測定し、投与液量は測定日の体重に基づき、個体別に算出した。なお、虚血及び剖検は、被験物質投与の１時間後に行った。全例、左眼を処置眼とし、右眼をコントロール（無処置眼）とした。
【００３８】
（４）一般状態の観察及び病理学的検査
投与期間中は、全例について一般状態及び生死を１日１回観察した。
剖検日にラットを麻酔致死した後、眼球を摘出し、網膜虚血による視神経障害の病理学的検討を行った。摘出眼球（左：処置眼、右：無処置眼）をＤａｖｉｄｓｏｎ液で固定後、視神経乳頭部を通る横断面でパラフィン切片を作製し、ヘマトキシリン・エオジン染色標本を作製した。全例の視神経乳頭より０．５ｍｍの部位を中心として、２０倍の対物レンズを用いてディジタル写真撮影を行った。撮影した写真（画像幅：３７９．２３μｍ）を用いて、神経細胞層（視神経細胞層、神経節細胞層）の神経細胞数（視神経細胞数、神経節細胞数）を算定し、１ｍｍ幅当たりの神経細胞数（ＧＣＬ，ｃｅｌｌ／ｍｍ）を算出した。結果を表２に示す。
【００３９】
（５）統計学的方法
測定値は各群ごとに平均値±標準誤差で表した。統計学的手法は、Ｆ検定により分散に一様性が認められた場合はＳｔｕｄｅｎｔのｔ検定を、分散に一様性が認められなかった場合はＡｓｐｉｎ−Ｗｅｌｃｈのｔ検定を用いた。有意水準は５％で表示した。統計解析にはＥｘｃｅｌ９７及び２００４（マイクロソフト株式会社）、市販の統計プログラムＳＡＳ ＳＹＳＴＥＭ（Ｖｅｒ．８．０２；株式会社ＳＡＳインスティチュートジャパン）、ＳＡＳ統計処理システム（株式会社住商情報システム）及びＥＸＳＡＳ（ｖｅｒ．７．１６；株式会社サイエンティスト社）を使用した。
【００４０】
【表２】
【００４１】
表２の結果から、ツルレンゲ抽出物１６５０ｍｇ／ｋｇ投与群の処置眼（左）では、注射用水群の処置眼（左）に比べて、神経細胞数（ＧＣＬ，ｃｅｌｌ／ｍｍ）で有意な増加が認められたことがわかる。
【００４２】
以上、前記実施例１の結果から、ツルレンゲ抽出物は、網膜虚血による神経細胞の減少を抑制する、強い作用を有していることが認められた。このことから、ツルレンゲ抽出物は、視神経障害抑制剤として非常に有用であり、網膜虚血等による視神経障害が引き起こされ得る種々の眼病の治療又は予防を目的とした、健康食品、栄養補助食品などに幅広く利用可能であることが示唆された。
【００４３】
（配合実施例１：錠剤状栄養補助食品）
下記の混合物を打錠して、錠剤状栄養補助食品を製造した。
・製造例２のツルレンゲ３０質量％エタノール抽出物・・・１１質量％
・粉糖（ショ糖）・・・５２質量％
・グアガム分解物・・・３３質量％
・グリセリン脂肪酸エステル・・・４質量％
【００４４】
（配合実施例２：顆粒状栄養補助食品）
下記の混合物を顆粒状に形成して、栄養補助食品を製造した。
・製造例１のツルレンゲ水抽出物・・・６．７質量％
・ビートオリゴ糖・・・５９．３質量％
・ビタミンＣ・・・３３．３質量％
・ステビア抽出物・・・０．７質量％
【００４５】
（配合実施例３：ソフトカプセル状栄養補助食品）
下記の混合物をソフトカプセルに充填して、栄養補助食品を製造した。
・製造例２のツルレンゲ３０質量％エタノール抽出物・・・３８質量％
・植物油・・・３８質量％
・グリセリン脂肪酸エステル・・・４質量％
・ミツロウ・・・２０質量％
【産業上の利用可能性】
【００４６】
本発明の視神経障害抑制剤は、ツルレンゲの抽出物を含むことから、優れた視神経障害抑制作用を有し、かつ、安全性にも優れたものである。したがって、本発明の視神経障害抑制剤は、例えば、網膜虚血等による視神経障害が引き起こされ得る種々の眼病の治療又は予防を目的とした、健康食品、栄養補助食品などに幅広く利用可能である。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ツルレンゲ（Ａｓｔｒａｇａｌｕｓ ｃｏｍｐｌａｎａｔｕｓ Ｒ．Ｂｒ．）の抽出物を含有することを特徴とする視神経障害抑制剤。
【請求項２】
視神経細胞減少抑制作用を有する請求項１に記載の視神経障害抑制剤。
【請求項３】
請求項１から２のいずれかに記載の視神経障害抑制剤を含有することを特徴とする飲食品。
【請求項１】
ツルレンゲ（Ａｓｔｒａｇａｌｕｓ ｃｏｍｐｌａｎａｔｕｓ Ｒ．Ｂｒ．）の抽出物を含有することを特徴とする視神経障害抑制剤。
【請求項２】
視神経細胞減少抑制作用を有する請求項１に記載の視神経障害抑制剤。
【請求項３】
請求項１から２のいずれかに記載の視神経障害抑制剤を含有することを特徴とする飲食品。
【公開番号】特開２００９−１０７９４５（Ｐ２００９−１０７９４５Ａ）
【公開日】平成２１年５月２１日（２００９．５．２１）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００７−２７９６５６（Ｐ２００７−２７９６５６）
【出願日】平成１９年１０月２６日（２００７．１０．２６）
【出願人】（５９１０８２４２１）丸善製薬株式会社 (239)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２１年５月２１日（２００９．５．２１）
【国際特許分類】
【出願日】平成１９年１０月２６日（２００７．１０．２６）
【出願人】（５９１０８２４２１）丸善製薬株式会社 (239)
【Ｆターム（参考）】
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