【課題】本発明は、細胞内安定性や正常細胞への機能障害などから副作用を避けることができる抗がん剤またはＤＤＳとして使用可能な物質を提供することを課題とする。
【解決手段】本発明者らは、ＥＧＦＲに結合するペプチド配列等の結合ペプチドおよび溶解型ペプチド配列を用いて、ＥＧＦＲ等を過剰に発現するがん細胞を標的とする新規キメラペプチドを開発したことによって、かかる課題を解決した。特に、ＥＧＦ受容体結合ペプチド等と、細胞殺傷性ペプチドとを含むキメラペプチドを用いることによって、この課題を解決した。

【特許請求の範囲】
【請求項１】
受容体結合ペプチドと、細胞殺傷性ペプチドとを含むキメラペプチド。
【請求項２】
前記受容体結合ペプチドは、ＥＧＦ受容体結合ペプチド、インターロイキン４（ＩＬ−４）受容体結合ペプチド、インターロイキン１３（ＩＬ−１３）受容体結合ペプチド、ニューロピリン（ｎｅｕｒｏｐｉｌｉｎ）受容体結合ペプチド、ヒト上皮増殖因子受容体２型（ＨＥＲ２）結合ペプチド、血管上皮増殖因子受容体（ＶＥＧＦＲ）結合ペプチドおよびトランスフェリン受容体（Ｔｒａｎｓｆｅｒｒｉｎ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ，ＴｆＲ）結合ペプチドからなる群より選択される、請求項１に記載のキメラペプチド。
【請求項３】
ＥＧＦ受容体結合ペプチドと、細胞殺傷性ペプチドとを含む請求項１に記載のキメラペプチド。
【請求項４】
前記受容体結合ペプチドは、ＥＧＦ受容体結合ペプチドであり、アミノ酸配列ＹＨＷＹＧＹＴＰＱＮＶＩ（配列番号７）（ここで、アルファベットは、アミノ酸の１文字表示である。）またはその改変配列を有するものである、請求項１に記載のキメラペプチド。
【請求項５】
前記受容体結合ペプチドは、ＥＧＦ受容体結合ペプチドであり、
アミノ酸配列Ｘ_１Ｘ_２Ｘ_３Ｘ_４Ｘ_５Ｘ_６Ｘ_７Ｘ_８Ｘ_９Ｘ_１０Ｘ_１１Ｘ_１２（配列番号８）を有するものであって、ここで
Ｘ_１は、Ｙまたはそれに類似するアミノ酸であり；
Ｘ_２は、Ｈまたはそれに類似するアミノ酸であり；
Ｘ_３は、Ｗまたはそれに類似するアミノ酸であり；
Ｘ_４は、Ｙまたはそれに類似するアミノ酸であり；
Ｘ_５は、Ｇまたはそれに類似するアミノ酸であり；
Ｘ_６は、Ｙまたはそれに類似するアミノ酸であり；
Ｘ_７は、Ｔまたはそれに類似するアミノ酸であり；
Ｘ_８は、Ｐまたはそれに類似するアミノ酸であり；
Ｘ_９は、Ｑまたはそれに類似するアミノ酸であり；
Ｘ_１０は、Ｎまたはそれに類似するアミノ酸であり；
Ｘ_１１は、Ｖまたはそれに類似するアミノ酸であり；
Ｘ_１２は、Ｉまたはそれに類似するアミノ酸である、
請求項１に記載のキメラペプチド。
【請求項６】
前記受容体結合ペプチドは、ＥＧＦ受容体結合ペプチドであり、
アミノ酸配列Ｘ_１Ｘ_２Ｘ_３Ｘ_４Ｘ_５Ｘ_６Ｘ_７Ｘ_８Ｘ_９Ｘ_１０Ｘ_１１Ｘ_１２（配列番号８）を有するものであって、ここで
Ｘ_１は、Ｙまたはそれに類似するＯＨ基を有するアミノ酸または芳香族基を有するアミノ酸であり；
Ｘ_２は、Ｈまたはそれに類似するプラスチャージを有するアミノ酸であり；
Ｘ_３は、Ｗまたはそれに類似する芳香族を有するアミノ酸であり；
Ｘ_４は、Ｙまたはそれに類似するＯＨ基を有するアミノ酸であり；
Ｘ_５は、Ｇまたはそれに類似する脂肪族系側鎖を有するアミノ酸であり；
Ｘ_６は、Ｙまたはそれに類似するＯＨ基を有するアミノ酸であり；
Ｘ_７は、Ｔまたはそれに類似するＯＨ基を有するアミノ酸であり；
Ｘ_８は、Ｐまたはそれに類似するイミノ酸系のアミノ酸であり；
Ｘ_９は、Ｑまたはそれに類似するアミド系のアミノ酸であり；
Ｘ_１０は、Ｎまたはそれに類似するＯＨ基を有するアミノ酸であり；
Ｘ_１１は、Ｖまたはそれに類似する脂肪族系側鎖を有するアミノ酸であり；
Ｘ_１２は、Ｉまたはそれに類似する脂肪族系側鎖を有するアミノ酸である、
請求項１に記載のキメラペプチド。
【請求項７】
前記受容体結合ペプチドは、ＥＧＦ受容体結合ペプチドであり、
アミノ酸配列Ｘ_１Ｘ_２Ｘ_３Ｘ_４Ｘ_５Ｘ_６Ｘ_７Ｘ_８Ｘ_９Ｘ_１０Ｘ_１１Ｘ_１２（配列番号８）を有するものであって、ここで
Ｘ_１は、Ｙまたはそれに類似するＳ、ＨもしくはＦであるアミノ酸であり；
Ｘ_２は、Ｈまたはそれに類似するＲもしくはＫであるアミノ酸であり；
Ｘ_３は、Ｗまたはそれに類似するＹ、ＦもしくはＨであるアミノ酸であり；
Ｘ_４は、Ｙまたはそれに類似するＳ、ＨもしくはＦであるアミノ酸であり；
Ｘ_５は、Ｇまたはそれに類似するＡ、Ｖ、ＩもしくはＬであるアミノ酸であり；
Ｘ_６は、Ｙまたはそれに類似するＳ、ＨもしくはＦであるアミノ酸であり；
Ｘ_７は、Ｔまたはそれに類似するＳ、ＨもしくはＦであるアミノ酸であり；
Ｘ_８は、Ｐまたはそれに類似するヒドロキシルプロリンであるアミノ酸であり；
Ｘ_９は、Ｑまたはそれに類似するＮであるアミノ酸であり；
Ｘ_１０は、Ｎまたはそれに類似するＳ、ＨもしくはＦであるアミノ酸であり；
Ｘ_１１は、Ｖまたはそれに類似するＧ、Ａ、ＬもしくはＩであるアミノ酸であり；
Ｘ_１２は、Ｉまたはそれに類似するＧ、Ａ、ＶもしくはＬであるアミノ酸である、
請求項１に記載のキメラペプチド。
【請求項８】
前記配列において、Ｘ_２は、Ｈまたはそれに類似するＲもしくはＫであるアミノ酸である、請求項５に記載のキメラペプチド。
【請求項９】
前記ＥＧＦ受容体結合ペプチドは、ＹＲＷＹＧＹＴＰＱＮＶＩ（配列番号９）またはＹＫＷＹＧＹＴＰＱＮＶＩ（配列番号１０）を有する、請求項３に記載のキメラペプチド。
【請求項１０】
前記細胞殺傷性ペプチドは、細胞膜溶解性ペプチド、細胞膜電位不安定化ペプチド、細胞膜溶解・核酸結合ペプチドおよびミトコンドリア膜崩壊ペプチドからなる群より選択される、請求項１に記載のキメラペプチド。
【請求項１１】
前記細胞膜溶解性ペプチドは、ＫおよびＬのみからなる１０〜２０個連なったアミノ酸配列を有し、該アミノ酸は、Ｌ体、Ｄ体もしくはＤＬ混合である、請求項１０に記載のキメラペプチド。
【請求項１２】
前記細胞膜溶解性ペプチドは、ＫＬＬＬＫＬＬＫＫＬＬＫＬＬＫＫＫ（配列番号４８）であり、該アミノ酸は、Ｌ体、Ｄ体もしくはＤＬ混合である、請求項１１に記載のキメラペプチド。
【請求項１３】
前記細胞膜電位不安定化ペプチドは、ＦＬＫＬＬＫＫＬＡＡＫＬＦ（配列番号１１）である、請求項１０に記載のキメラペプチド。
【請求項１４】
前記細胞膜溶解・核酸結合ペプチドは、ＲＬＬＲＲＬＬＲＲＬＬＲＲＬＬＲＲＬＬＲ（配列番号１２）またはＲＬＬＲＲＬＬＲＲＬＬＲＫ（配列番号１３）である、請求項１０に記載のキメラペプチド。
【請求項１５】
前記ミトコンドリア膜崩壊ペプチドは、ＫＬＡＫＬＡＫＫＬＡＫＬＡＫ（配列番号４）である、請求項１０に記載のキメラペプチド。
【請求項１６】
前記細胞殺傷性ペプチドは、プラスチャージを持つアミノ酸と疎水性アミノ酸から構成され、両親媒性ヘリックス構造をとる１０から３０アミノ酸からなる配列を有する、請求項１に記載のキメラペプチド。
【請求項１７】
前記プラスチャージを持つアミノ酸は、Ｋ、ＲまたはＨであり、前記疎水性アミノ酸は、Ｉ、Ｌ、Ｖ、ＡまたはＦである、請求項１６に記載のキメラペプチド。
【請求項１８】
前記細胞殺傷性ペプチドは、ＫＬＬＬＫＬＬＫＫＬＬＫＬＬＫＫＫ（配列番号１）であり、ここで、各アミノ酸はＬ体またはＤ体であり、下線は、Ｄ体を示す、請求項１６に記載のキメラペプチド。
【請求項１９】
スペーサーペプチドをさらに有する、請求項１に記載のキメラペプチド。
【請求項２０】
前記スペーサーペプチドはグリシンまたはプロリンまたはその混合物が０〜５個連なった配列である、請求項１９に記載のキメラペプチド。
【請求項２１】
前記スペーサーペプチドはＧＧＧである、請求項１９に記載のキメラペプチド。
【請求項２２】
ＹＨＷＹＧＹＴＰＱＮＶＩＧＧＧＫＬＬＬＫＬＬＫＫＬＬＫＬＬＫＫＫ（配列番号２）の配列を有するものであり、下線は、Ｄ体を示す、請求項１に記載のキメラペプチド。
【請求項２３】
ＹＲＷＹＧＹＴＰＱＮＶＩＧＧＧＫＬＬＬＫＬＬＫＫＬＬＫＬＬＫＫＫ（配列番号４３）の配列を有するものであり、下線は、Ｄ体を示す、請求項１に記載のキメラペプチド。
【請求項２４】
前記受容体結合ペプチドは、インターロイキン４（ＩＬ−４）受容体結合ペプチドであり、アミノ酸配列ＫＱＬＩＲＦＬＫＲＬＤＲＮ（配列番号２６）またはその改変配列を有するものである、請求項１に記載のキメラペプチド。
【請求項２５】
前記受容体結合ペプチドは、インターロイキン１３（ＩＬ−１３）受容体結合ペプチドであり、アミノ酸配列ＫＤＬＬＬＨＬＫＫＬＦＲＥＧＱＦＮ（配列番号２８）またはその改変配列を有するものである、請求項１に記載のキメラペプチド。
【請求項２６】
前記受容体結合ペプチドは、ニューロピリン（ｎｅｕｒｏｐｉｌｉｎ）受容体結合ペプチドであり、アミノ酸配列ＮＹＱＷＶＰＹＱＧＲＶＰＹＰＲ（配列番号２９）またはその改変配列を有するものである、請求項１に記載のキメラペプチド。
【請求項２７】
前記受容体結合ペプチドは、ヒト上皮増殖因子受容体２型（ＨＥＲ２）結合ペプチドであり、アミノ酸配列ＹＣＤＧＦＹＡＣＹＭＤＶ（配列番号３０）またはその改変配列を有するものである、請求項１に記載のキメラペプチド。
【請求項２８】
前記受容体結合ペプチドは、血管上皮増殖因子受容体１（ＶＥＧＦＲ１）結合ペプチドであり、アミノ酸配列ＷＨＳＤＭＥＷＷＹＬＬＧ（配列番号３１）、ＶＥＰＮＣＤＩＨＶＭＷＥＷＥＣＦＥＲＬ−ＮＨ２（配列番号３２）もしくはＧＧＮＥＣＤＡＩＲＭＷＥＷＥＣＦＥＲＬ（配列番号３３）またはその改変配列を有するものである、請求項１に記載のキメラペプチド。
【請求項２９】
前記受容体結合ペプチドは、トランスフェリン受容体（Ｔｒａｎｓｆｅｒｒｉｎ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ，ＴｆＲ）結合ペプチドであり、アミノ酸配列ＴＨＲＰＰＭＷＳＰＶＷＰ（配列番号３４）またはその改変配列を有するものである、請求項１に記載のキメラペプチド。
【請求項３０】
前記受容体結合ペプチドは、繊維芽細胞増殖因子受容体（ＦＧＦＲ）結合ペプチドであり、ＭＱＬＰＬＡＴ（配列番号５）またはＡＡＶＡＬＬＰＡＶＬＬＡＬＬＡＰ（配列番号６）であるか；ニューロピリン１（ＮＲＰ１）／血管内皮細胞増殖因子受容体２（ＶＥＧＦＲ２）結合ペプチドであり、ＡＴＷＬＰＰＲ（配列番号３６）であるか；エフリンＢ１（ＥｐｈＢ１）結合ペプチドであり、ＥＷＬＳ（配列番号３７）であるか；エフリンＢ２（ＥｐｈＢ２）結合ペプチドであり、ＳＮＥＷ（配列番号３８）であるか；インターロイキン１１受容体（ＩＬ１１Ｒ）結合ペプチドであり、ＣＧＲＲＡＧＧＳＣ（環状）（配列番号２２）であるか；グルコース調節タンパク質７８（ＧＲＰ７８）結合ペプチドであり、ＷＤＬＡＷＭＦＲＬＰＶＧ（配列番号３９）またはＣＴＶＡＬＰＧＧＹＶＲＶＣ（環状）（配列番号４０）であるか；前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）結合ペプチドであり、ＣＱＫＨＨＮＹＬＣ（配列番号３５）であるか、あるいは、これらの改変配列である、請求項１に記載のキメラペプチド。
【請求項３１】
配列番号２、１４、２１、４２、４３または２１からなる群より選択される配列またはその改変配列を有する、請求項１に記載のキメラペプチド。
【請求項３２】
配列番号１５に示す配列またはその改変配列を有する、請求項１に記載のキメラペプチド。
【請求項３３】
配列番号１６に示す配列またはその改変配列を有する、請求項１に記載のキメラペプチド。
【請求項３４】
配列番号１７に示す配列またはその改変配列を有する、請求項１に記載のキメラペプチド。
【請求項３５】
配列番号１８または４４に示す配列またはその改変配列を有する、請求項１に記載のキメラペプチド。
【請求項３６】
配列番号１９に示す配列またはその改変配列を有する、請求項１に記載のキメラペプチド。
【請求項３７】
配列番号２０、４６または４７に示す配列またはその改変配列を有する、請求項１に記載のキメラペプチド。
【請求項３８】
請求項１〜３７のいずれかに記載のキメラペプチドをコードする核酸。
【請求項３９】
請求項１〜３７のいずれかに記載のキメラペプチドをコードする核酸を含むベクター。
【請求項４０】
請求項１〜３７のいずれかに記載のキメラペプチドをコードする核酸を含む細胞。
【請求項４１】
請求項１〜３７に記載のキメラペプチドを含む医薬組成物。
【請求項４２】
請求項１〜３７に記載のキメラペプチドを含む抗がん剤。
【請求項４３】
請求項１〜３７に記載のキメラペプチドの、医薬組成物の製造のための使用。
【請求項４４】
請求項１〜３７に記載のキメラペプチドの、抗がん剤の製造のための使用。
【請求項４５】
請求項１〜３７に記載のキメラペプチドを投与する工程を包含する治療方法。
【請求項４６】
請求項１〜３７に記載のキメラペプチドを投与する工程を包含するがんの治療方法。
【請求項４７】
ＥＧＦ受容体結合ペプチドがターゲットとするアミノ酸配列を用いる、医薬のスクリーニング方法。
【請求項４８】
ＥＧＦ受容体結合ペプチドがターゲットとするアミノ酸配列を用いる、抗がん剤のスクリーニング方法。
【請求項４９】
標的結合ペプチドと細胞殺傷性の溶解性ペプチド成分とを含む標的化キメラペプチドであるペプチドトキシン。
【請求項５０】
前記標的結合ペプチドは、がん細胞高発現受容体特異的結合配列を有し、前記溶解性ペプチド成分は、がん細胞膜溶解型配列を有し、スペーサーを有する、請求項４９に記載のペプチドトキシン。
【請求項５１】
前記溶解性ペプチド成分は、プラスチャージを持つアミノ酸と疎水性アミノ酸から構成され、両親媒性ヘリックス構造をとる１０から３０アミノ酸からなる配列を有する、請求項５０に記載のペプチドトキシン。
【請求項５２】
前記プラスチャージを持つアミノ酸は、Ｋ、ＲまたはＨであり、前記疎水性アミノ酸を持つアミノ酸は、Ｉ、Ｌ、Ｖ、ＡまたはＦである、請求項５０に記載のペプチドトキシン。
【請求項５３】
前記スペーサーは、グリシンまたはプロリンまたはその混合０〜５個連なった配列である、請求項５０に記載のペプチドトキシン。
【請求項５４】
ＥＧＦＲ高発現がん細胞におけるＥＧＦＲおよび該ＥＧＦＲ高発現がん細胞のがん細胞膜の両方をターゲットとするアミノ酸配列を用いることを特徴とする、医薬のスクリーニング方法。
【請求項５５】
前記医薬は抗がん剤である、請求項５４に記載のスクリーニング方法。
【請求項５６】
前記アミノ酸配列は、ＹＨＷＹＧＹＴＰＱＮＶＩＧＧＧＫＬＬＬＫＬＬＫＫＬＬＫＬＬＫＫＫ（配列番号２）である、請求項５４に記載のスクリーニング方法。

【図３９Ａ】

【図１Ａ】

【図１Ｂ】

【図１Ｃ】

【図１Ｄ】

【図１Ｅ】

【図１Ｆ】

【図１Ｇ】

【図２Ａ】

【図２Ｂ】

【図３Ａ】

【図３Ｂ】

【図３Ｃ】

【図３Ｄ】

【図４Ａ】

【図４Ｂ】

【図４Ｃ】

【図４Ｄ】

【図５】

【図６】

【図７Ａ】

【図７Ｂ】

【図８Ａ】

【図８Ｂ】

【図８Ｃ】

【図９Ａ】

【図９Ｂ】

【図９Ｃ】

【図１０Ａ】

【図１０Ｂ】

【図１１Ａ】

【図１１Ｂ】

【図１２Ａ】

【図１２Ｂ】

【図１３】

【図１４】

【図１５Ａ】

【図１５Ｂ】

【図１５Ｃ】

【図１６Ａ】

【図１６Ｂ】

【図１６Ｃ】

【図１７Ａ】

【図１７Ｂ】

【図１８】

【図１９Ａ】

【図１９Ｂ】

【図２０Ａ】

【図２０Ｂ】

【図２１】

【図２２Ａ】

【図２２Ｂ】

【図２３】

【図２４Ａ】

【図２４Ｂ】

【図２５Ａ】

【図２５Ｂ】

【図２６Ａ】

【図２６Ｂ】

【図２６Ｃ】

【図２６Ｄ】

【図２７Ａ】

【図２７Ｂ】

【図２９】

【図３０】

【図３１】

【図３２】

【図３３Ａ】

【図３３Ｂ】

【図３４Ａ】

【図３４Ｂ】

【図３４Ｃ】

【図３５】

【図３６】

【図３７】

【図３８Ａ】

【図３８Ｂ】

【図３９Ｂ】

【図４０】

【図４１】

【公表番号】特表２０１２−５１０２８７（Ｐ２０１２−５１０２８７Ａ）
【公表日】平成２４年５月１０日（２０１２．５．１０）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１１−５３９１６０（Ｐ２０１１−５３９１６０）
【出願日】平成２１年１２月３日（２００９．１２．３）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＩＢ２００９／０５５４７６
【国際公開番号】ＷＯ２０１０／０６４２０７
【国際公開日】平成２２年６月１０日（２０１０．６．１０）
【出願人】（５０９１２８３７３）株式会社アップストリーム・インフィニティ (1)
【Ｆターム（参考）】