除草剤耐性植物及びそれを識別するための方法
本発明は製品がダイズゲノム中の特異的箇所において特異的形質転換イベントのスタックを保有することを特徴とする特異的トランスジェニックのダイズ植物、植物性物質又は種子を提供する。生物学的試料中のこれらのイベントの迅速かつ明確な識別を可能にするツールも提供される。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
生物学的試料中の優良イベントＥＥ−ＧＭ３及びＥＥ−ＧＭ１の同時存在を識別するための方法であって、方法がＥＥ−ＧＭ３の除草剤耐性遺伝子を含む外来性ＤＮＡの５’又は３’フランキング領域を特異的に認識する特異的プライマー又はプローブを用いたＥＥ−ＧＭ３特異的領域の検出、及び、ＥＥ−ＧＭ１の除草剤耐性遺伝子を含む外来性ＤＮＡの５’又は３’フランキング領域を特異的に認識する特異的プライマー又はプローブを用いたＥＥ−ＧＭ１特異的領域の検出を含む、上記方法。
【請求項２】
少なくとも２つのプライマーを用いた第１のポリメラーゼ連鎖反応、ただしここで、該プライマーの一方は、ＥＥ−ＧＭ３の除草剤耐性遺伝子を含む外来性ＤＮＡの５’フランキング領域、ここで該５’フランキング領域は配列番号２のヌクレオチド１からヌクレオチド１４５１までのヌクレオチド配列を含む、又は、ＥＥ−ＧＭ３の除草剤耐性遺伝子を含む外来性ＤＮＡの３’フランキング領域、ここで該３’フランキング領域は配列番号３のヌクレオチド２４１からヌクレオチド１４０８までの相補体のヌクレオチド配列を含む、を認識し、該プライマーの他方のプライマーは、配列番号２のヌクレオチド１４５２からヌクレオチド１８４３までの相補体のヌクレオチド配列又は配列番号３のヌクレオチド１からヌクレオチド２４０までのヌクレオチド配列を含むＥＥ−ＧＭ３の外来性ＤＮＡ内部の配列を認識するか、又は、該プライマーの他方のプライマーは、配列番号１のヌクレオチド配列又はその相補体を含むか又は配列番号２０のヌクレオチド位置１４５２からヌクレオチド位置１６６３８までのヌクレオチド配列又はその相補体を含むＥＥ−ＧＭ３の外来性ＤＮＡ内部の配列を認識する、を使用し、そして、少なくとも２つのプライマーを用いた第２のポリメラーゼ連鎖反応、ただしここで、該プライマーの一方は、ＥＥ−ＧＭ１の除草剤耐性遺伝子を含む外来性ＤＮＡの５’フランキング領域、ここで該５’フランキング領域は配列番号１２のヌクレオチド１からヌクレオチド２０９までのヌクレオチド配列を含む、又は、ＥＥ−ＧＭ１の除草剤耐性遺伝子を含む外来性ＤＮＡの３’フランキング領域、ここで該３’フランキング領域は配列番号１３のヌクレオチド５６９からヌクレオチド１０００までの相補体のヌクレオチド配列を含む、を認識し、該プライマーの他方のプライマーは、配列番号１２のヌクレオチド２１０からヌクレオチド７２０までの相補体のヌクレオチド配列又は配列番号１３のヌクレオチド１からヌクレオチド５６８までのヌクレオチド配列を含むＥＥ−ＧＭ１の外来性ＤＮＡ内部の配列を認識するか、又は、該プライマーの他方のプライマーは、配列番号１１のヌクレオチド配列又はその相補体を含むＥＥ−ＧＭ１の外来性ＤＮＡ内部の配列を認識する、を使用して該生物学的試料中に存在する核酸から５０〜１０００ｂｐの２つのＤＮＡフラグメントを増幅すること、ここで、該第１及び第２のポリメラーゼ反応は逐次的であっても又は同時であってもよい、を含む、請求項１記載の方法。
【請求項３】
ＥＥ−ＧＭ３の５’フランキング領域を認識する該プライマーが、配列番号２のヌクレオチド１からヌクレオチド１４５１までのヌクレオチド配列から選択される１７から２００個までの連続ヌクレオチドのヌクレオチド配列を含むか、又は、ＥＥ−ＧＭ３の３’フランキング領域を認識する該プライマーが、配列番号３のヌクレオチド２４１からヌクレオチド１４０８までの相補体のヌクレオチド配列から選択される１７から２００個までの連続ヌクレオチドのヌクレオチド配列を含み、そして、ＥＥ−ＧＭ３の外来性ＤＮＡ内部の配列を認識する該プライマーが、配列番号２のヌクレオチド１４５２からヌクレオチド１８４３までの相補体のヌクレオチド配列、又は配列番号３のヌクレオチド１からヌクレオチド２４０までのヌクレオチド配列、又は配列番号１のヌクレオチド配列又はその相補体、又は配列番号２０のヌクレオチド位置１４５２からヌクレオチド位置１６６３８までのヌクレオチド配列又はその相補体から選択される１７から２００個までの連続ヌクレオチドのヌクレオチド配列を含む、及び、ＥＥ−ＧＭ１の５’フランキング領域を認識する該プライマーが、配列番号１２のヌクレオチド１からヌクレオチド２０９までのヌクレオチド配列から選択される１７から２００個までの連続ヌクレオチドのヌクレオチド配列を含むか、又は、ＥＥ−ＧＭ３の３’フランキング領域を認識する該プライマーが、配列番号１３のヌクレオチド５６９からヌクレオチド１０００までの相補体のヌクレオチド配列から選択される１７から２００個までの連続ヌクレオチドのヌクレオチド配列を含み、そして、ＥＥ−ＧＭ１の外来性ＤＮＡ内部の配列を認識する該プライマーが、配列番号１２のヌクレオチド２１０からヌクレオチド７２０までの相補体のヌクレオチド配列、又は配列番号１３のヌクレオチド１からヌクレオチド５６８までのヌクレオチド配列、又は配列番号１１のヌクレオチド配列又はその相補体から選択される１７から２００個までの連続ヌクレオチドを含む、請求項２記載の方法。
【請求項４】
ＥＥ−ＧＭ３の５’フランキング領域を認識する該プライマーが、その３’最末端において、配列番号２のヌクレオチド１からヌクレオチド１４５１までのヌクレオチド配列から選択される少なくとも１７個の連続ヌクレオチドのヌクレオチド配列を含むか、又は、ＥＥ−ＧＭ３の３’フランキング領域を認識する該プライマーが、その３’最末端において、配列番号３のヌクレオチド２４１からヌクレオチド１４０８までの相補体のヌクレオチド配列から選択される少なくとも１７個の連続ヌクレオチドのヌクレオチド配列を含み、そして、ＥＥ−ＧＭ３の外来性ＤＮＡ内部の配列を認識する該プライマーが、その３’末端において、配列番号２のヌクレオチド１４５２からヌクレオチド１８４３までの相補体のヌクレオチド配列、又は配列番号３のヌクレオチド１からヌクレオチド２４０までのヌクレオチド配列、又は配列番号１のヌクレオチド配列又はその相補体、又は配列番号２０のヌクレオチド位置１４５２からヌクレオチド位置１６６３８までのヌクレオチド配列又はその相補体から選択される少なくとも１７個の連続ヌクレオチドを含む、及び、ＥＥ−ＧＭ１の５’フランキング領域を認識する該プライマーがその３’最末端において、配列番号１２のヌクレオチド１からヌクレオチド２０９までのヌクレオチド配列から選択される少なくとも１７個の連続ヌクレオチドのヌクレオチド配列を含むか、又は、ＥＥ−ＧＭ１の３’フランキング領域を認識する該プライマーがその３’最末端において、配列番号１３のヌクレオチド５６９からヌクレオチド１０００までの相補体のヌクレオチド配列から選択される少なくとも１７個の連続ヌクレオチドのヌクレオチド配列を含み、そして、ＥＥ−ＧＭ１の外来性ＤＮＡ内部の配列を認識する該プライマーが、その３’末端において、配列番号１２のヌクレオチド２１０からヌクレオチド７２０までの相補体のヌクレオチド配列、又は配列番号１３のヌクレオチド１からヌクレオチド５６８までのヌクレオチド配列、又は配列番号１１のヌクレオチド配列又はその相補体から選択される少なくとも１７個の連続ヌクレオチドを含む、請求項２記載の方法。
【請求項５】
前記ＥＥ−ＧＭ３特異的プライマーがそれぞれ配列番号５及び配列番号４の配列、又は、それぞれ配列番号５及び配列番号７の配列を含み、そして、前記ＥＥ−ＧＭ１特異的プライマーがそれぞれ配列番号１６及び配列番号１７の配列を含む、請求項４記載の方法。
【請求項６】
ＥＥ−ＧＭ３ＰＣＲ識別プロトコルを用いて約２６３又は約７０６ｂｐのＥＥ−ＧＭ３特異的フラグメント及び約１８３ｂｐのＥＥ−ＧＭ１特異フラグメントを増幅することを包含する、請求項５記載の方法。
【請求項７】
生物学的試料中の優良イベントＥＥ−ＧＭ３及び優良イベントＥＥ−ＧＭ１の同時存在を識別するためのキットであって、キットが、ＥＥ−ＧＭ３の除草剤耐性遺伝子を含む外来性ＤＮＡの５’フランキング領域を認識する１つのプライマー、ここで該５’フランキング領域は配列番号２のヌクレオチド１からヌクレオチド１４５１までのヌクレオチド配列を含む、又は、ＥＥ−ＧＭ３の除草剤耐性遺伝子を含む外来性ＤＮＡの３’フランキング領域を認識する１つのプライマー、ここで該３’フランキング領域は配列番号３のヌクレオチド２４１からヌクレオチド１４０８までの相補体のヌクレオチド配列を含む、及び、ＥＥ−ＧＭ３の除草剤耐性遺伝子を含む外来性ＤＮＡ内部の配列を認識する１つのプライマー、ここで該外来性ＤＮＡは配列番号２のヌクレオチド１４５２からヌクレオチド１８４３までの相補体のヌクレオチド配列、又は配列番号３のヌクレオチド１からヌクレオチド２４０までのヌクレオチド配列、又は配列番号１のヌクレオチド配列又はその相補体、又は配列番号２０のヌクレオチド位置１４５２からヌクレオチド位置１６６３８までのヌクレオチド配列又はその相補体を含む、を含み、そして、該キットが更に、ＥＥ−ＧＭ１の除草剤耐性遺伝子を含む外来性ＤＮＡの５’フランキング領域を認識する１つのプライマー、ここで該５’フランキング領域は配列番号１２のヌクレオチド１からヌクレオチド２０９までのヌクレオチド配列を含む、又は、ＥＥ−ＧＭ１の除草剤耐性遺伝子を含む外来性ＤＮＡの３’フランキング領域を認識する１つのプライマー、ここで該３’フランキング領域は配列番号１３のヌクレオチド５６９からヌクレオチド１０００までの相補体のヌクレオチド配列を含む、及び、ＥＥ−ＧＭ１の除草剤耐性遺伝子を含む外来性ＤＮＡ内部の配列を認識する１つのプライマー、ここで該外来性ＤＮＡは配列番号１２のヌクレオチド２１０からヌクレオチド７２０までの相補体のヌクレオチド配列、又は配列番号１３のヌクレオチド１からヌクレオチド５６８までのヌクレオチド配列、又は配列番号１１のヌクレオチド配列又はその相補体を含む、を含む、上記キット。
【請求項８】
ＥＥ−ＧＭ３の５’フランキング領域を認識する該プライマーが、配列番号２のヌクレオチド１からヌクレオチド１４５１までのヌクレオチド配列から選択される１７から２００個までの連続ヌクレオチドのヌクレオチド配列を含むか、又は、ＥＥ−ＧＭ３の３’フランキング領域を認識する該プライマーが、配列番号３のヌクレオチド２４１からヌクレオチド１４０８までの相補体のヌクレオチド配列から選択される１７から２００個までの連続ヌクレオチドのヌクレオチド配列を含み、そして、ＥＥ−ＧＭ３の外来性ＤＮＡ内部の配列を認識する該プライマーが、配列番号２のヌクレオチド１４５２からヌクレオチド１８４３までの相補体のヌクレオチド配列、又は配列番号３のヌクレオチド１からヌクレオチド２４０までのヌクレオチド配列、又は配列番号１のヌクレオチド配列又はその相補体、又は配列番号２０のヌクレオチド位置１４５２からヌクレオチド位置１６６３８までのヌクレオチド配列又はその相補体から選択される１７から２００個までの連続ヌクレオチドを含む、及び、ＥＥ−ＧＭ１の５’フランキング領域を認識する該プライマーが、配列番号１２のヌクレオチド１からヌクレオチド２０９までのヌクレオチド配列から選択される１７から２００個までの連続ヌクレオチドのヌクレオチド配列を含むか、又は、ＥＥ−ＧＭ１の３’フランキング領域を認識する該プライマーが、配列番号１３のヌクレオチド５６９からヌクレオチド１０００までの相補体のヌクレオチド配列から選択される１７から２００個までの連続ヌクレオチドのヌクレオチド配列を含み、そして、ＥＥ−ＧＭ１の外来性ＤＮＡ内部の配列を認識する該プライマーが、配列番号１２のヌクレオチド２１０からヌクレオチド７２０までの相補体のヌクレオチド配列、又は配列番号１３のヌクレオチド１からヌクレオチド５６８までのヌクレオチド配列、又は配列番号１１のヌクレオチド配列又はその相補体から選択される１７から２００個までの連続ヌクレオチドを含む、請求項７記載のキット。
【請求項９】
ＥＥ−ＧＭ３の５’フランキング領域を認識する該プライマーが、その３’最末端において、配列番号２のヌクレオチド１からヌクレオチド１４５１までのヌクレオチド配列から選択される少なくとも１７個の連続ヌクレオチドのヌクレオチド配列を含むか、又は、ＥＥ−ＧＭ３の３’フランキング領域を認識する該プライマーが、その３’最末端において、配列番号３のヌクレオチド２４１からヌクレオチド１４０８までの相補体のヌクレオチド配列から選択される少なくとも１７個の連続ヌクレオチドのヌクレオチド配列を含み、そして、ＥＥ−ＧＭ３の外来性ＤＮＡ内部の配列を認識する該プライマーが、その３’末端において、配列番号２のヌクレオチド１４５２からヌクレオチド１８４３までの相補体のヌクレオチド配列、又は配列番号３のヌクレオチド１からヌクレオチド２４０までのヌクレオチド配列、又は配列番号１のヌクレオチド配列又はその相補体、又は配列番号２０のヌクレオチド位置１４５２からヌクレオチド位置１６６３８までのヌクレオチド配列又はその相補体から選択される少なくとも１７個の連続ヌクレオチドを含む、及び、ＥＥ−ＧＭ１の５’フランキング領域を認識する該プライマーが、その３’最末端において、配列番号１２のヌクレオチド１からヌクレオチド２０９までのヌクレオチド配列から選択される少なくとも１７個の連続ヌクレオチドのヌクレオチド配列を含むか、又は、ＥＥ−ＧＭ１の３’フランキング領域を認識する該プライマーがその３’最末端において、配列番号１３のヌクレオチド５６９からヌクレオチド１０００までの相補体のヌクレオチド配列から選択される少なくとも１７個の連続ヌクレオチドのヌクレオチド配列を含み、そして、ＥＥ−ＧＭ１の外来性ＤＮＡ内部の配列を認識する該プライマーが、その３’末端において、配列番号１２のヌクレオチド２１０からヌクレオチド７２０までの相補体のヌクレオチド配列、又は配列番号１３のヌクレオチド１からヌクレオチド５６８までのヌクレオチド配列、又は配列番号１１のヌクレオチド配列又はその相補体から選択される少なくとも１７個の連続ヌクレオチドを含む、請求項７記載のキット。
【請求項１０】
配列番号４の配列を含むプライマー及び配列番号５の配列を含むプライマーを含むか、又は配列番号５の配列を含むプライマーおよび配列番号７の配列を含むプライマーを含み、そして更に、配列番号１６の配列を含むプライマー及び配列番号１７の配列を含むプライマーを含む、請求項７記載のキット。
【請求項１１】
プライマー対であって、該第１のプライマーは、最適な検出条件下においてＥＥ−ＧＭ３の除草剤耐性遺伝子を含む外来性ＤＮＡの５’又は３’フランキング領域内部の配列を特異的に認識する配列、ここで該５’フランキング領域は配列番号２のヌクレオチド１からヌクレオチド１４５１までのヌクレオチド配列を含みそして該３’フランキング領域は配列番号３のヌクレオチド２４１からヌクレオチド１４０８までの相補体のヌクレオチド配列を含む、を含み、そして、該第２のプライマーは、最適な検出条件下においてＥＥ−ＧＭ１の除草剤耐性遺伝子を含む外来性ＤＮＡの５’又は３’フランキング領域内部の配列を特異的に認識する配列、ここで該５’フランキング領域は配列番号１２のヌクレオチド１からヌクレオチド２０９までのヌクレオチド配列を含みそして該３’フランキング領域は配列番号１３のヌクレオチド５９６からヌクレオチド１０００までの相補体のヌクレオチド配列を含む、を含む上記プライマー対。
【請求項１２】
該第１のプライマーが、配列番号２のヌクレオチド１からヌクレオチド１４５１までのヌクレオチド配列から選択される１７から２００個までの連続ヌクレオチドのヌクレオチド配列又は配列番号３のヌクレオチド２４１からヌクレオチド１４０８までの相補体のヌクレオチド配列から選択される１７から２００個までの連続ヌクレオチドのヌクレオチド配列を含み、そして、該第２のプライマーが、配列番号１２のヌクレオチド１からヌクレオチド２０９までのヌクレオチド配列から選択される１７から２００個までの連続ヌクレオチドのヌクレオチド配列又は配列番号１３のヌクレオチド５６９からヌクレオチド１０００までの相補体のヌクレオチド配列から選択される１７から２００個までの連続ヌクレオチドのヌクレオチド配列を含む、請求項１１記載のプライマー対。
【請求項１３】
該第１のプライマーが、その３’最末端において、配列番号２のヌクレオチド１からヌクレオチド１４５１までのヌクレオチド配列から選択される少なくとも１７個の連続ヌクレオチドのヌクレオチド配列又は配列番号３のヌクレオチド２４１からヌクレオチド１４０８までの相補体のヌクレオチド配列から選択される少なくとも１７個の連続ヌクレオチドのヌクレオチド配列を含み、そして、該第２のプライマーが、その３’最末端において、配列番号１２のヌクレオチド１からヌクレオチド２０９までのヌクレオチド配列から選択される少なくとも１７個の連続ヌクレオチドのヌクレオチド配列又は配列番号１３のヌクレオチド５６９からヌクレオチド１０００までの相補体のヌクレオチド配列から選択される少なくとも１７個の連続ヌクレオチドのヌクレオチド配列を含む、請求項１１記載のプライマー対。
【請求項１４】
第１のプライマーが配列番号５の配列をその３’最末端に含み、そして第２のプライマーが配列番号１６の配列をその３’最末端に含む、プライマー対。
【請求項１５】
下記の４つのプライマー：
配列番号５の配列をその３’最末端に含む第１のプライマー；
配列番号４の配列をその３’最末端に含む第２のプライマー；
配列番号１６の配列をその３’最末端に含む第３のプライマー；及び、
配列番号１７の配列をその３’最末端に含む第４のプライマー；
を含むセット。
【請求項１６】
ＥＥ−ＧＭ３に対する第１の特異的プローブに、そして、ＥＥ−ＧＭ１に対する第２の特異的プローブに、生物学的試料の核酸をハイブリダイズさせることを含む、請求項１記載の方法。
【請求項１７】
該第１の特異的プローブの配列が、ＥＥ−ＧＭ３の５’フランキング配列又は３’フランキング配列及びそれに隣接する外来性ＤＮＡの配列の部分を含む配列と少なくとも８０％配列同一性を有し、そして、該第２の特異的プローブの配列が、ＥＥ−ＧＭ１の５’フランキング配列又は３’フランキング配列及びそれに隣接する外来性ＤＮＡの配列の部分を含む配列と少なくとも８０％配列同一性を有する、請求項１６記載の方法。
【請求項１８】
該第１の特異的プローブの配列が配列番号２のヌクレオチド１４３１〜１４７２又は配列番号３のヌクレオチド２２０〜２６１、又は該配列の相補体と少なくとも８０％配列同一性を有し、そして、該第２の特異的プローブの配列が配列番号１２のヌクレオチド１９９〜２２０又は配列番号１３のヌクレオチド５５８〜５７９、又は該配列の相補体と少なくとも８０％配列同一性を有する、請求項１７記載の方法。
【請求項１９】
生物学的試料中の優良イベントＥＥ−ＧＭ３及び優良イベントＥＥ−ＧＭ１の同時存在を識別するためのキットであって、該キットがＥＥ−ＧＭ３の特異的領域に特異的にハイブリダイズすることができる第１の特異的プローブ、及び、ＥＥ−ＧＭ１の特異的領域に特異的にハイブリダイズすることができる第２の特異的プローブを含む、上記キット。
【請求項２０】
該第１の特異的プローブの配列がＥＥ−ＧＭ３の除草剤耐性遺伝子を含む外来性ＤＮＡの５’フランキング配列又は３’フランキング配列及びそれに隣接する外来性ＤＮＡの配列の部分を含む配列と少なくとも８０％配列同一性を有し、そして、該第２の特異的プローブの配列がＥＥ−ＧＭ１の除草剤耐性遺伝子を含む外来性ＤＮＡの５’フランキング配列又は３’フランキング配列及びそれに隣接する外来性ＤＮＡの配列の部分を含む配列と少なくとも８０％配列同一性を有する、請求項１９記載のキット。
【請求項２１】
該第１の特異的プローブの配列が配列番号２のヌクレオチド１４４１〜１４６２又は配列番号３のヌクレオチド２３０〜２５１、又は該配列の相補体と少なくとも８０％配列同一性を有するヌクレオチド配列を含み、そして、該第２の特異的プローブの配列が配列番号１２のヌクレオチド１９９〜２２０又は配列番号１３のヌクレオチド５５８〜５７９までの、又は該配列の相補体と少なくとも８０％配列同一性を有する、請求項２０記載のキット。
【請求項２２】
生物学的試料中の優良イベントＥＥ−ＧＭ３及び優良イベントＥＥ−ＧＭ１の同時存在の識別のための特異的プローブの対。
【請求項２３】
ＥＥ−ＧＭ３の除草剤耐性遺伝子を含む外来性ＤＮＡの５’フランキング配列又は３’フランキング配列及びそれに隣接する外来性ＤＮＡの配列の部分を含む配列又はその相補体と少なくとも８０％配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む第１のプローブ、及び、ＥＥ−ＧＭ１の除草剤耐性遺伝子を含む外来性ＤＮＡの５’フランキング配列又は３’フランキング配列及びそれに隣接する外来性ＤＮＡの配列の部分の配列又はその相補体と少なくとも８０％配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む第２のプローブを含む、請求項２２記載のプローブの対。
【請求項２４】
第１のプローブが配列番号２のヌクレオチド１４４１〜１４６２又は配列番号３のヌクレオチド２３０〜２５１、又は該配列の相補体と少なくとも８０％配列同一性を有し、そして、第２のプローブが配列番号１２のヌクレオチド１９９〜２２０又は配列番号１３のヌクレオチド５５８〜５７９、又は該配列の相補体と少なくとも８０％配列同一性を有する、請求項２３記載のプローブの対。
【請求項２５】
配列番号２のヌクレオチド１４４１〜１４６２又は配列番号３のヌクレオチド２３０〜２５１、又は該配列の相補体と本質的に類似のヌクレオチド配列を含む配列を有する第１のプローブ、及び、配列番号１２のヌクレオチド１９９〜２２０又は配列番号１３のヌクレオチド５５８〜５７９、又は該配列の相補体と本質的に類似のヌクレオチド配列を有する第２のプローブを含む、生物学的試料中の優良イベントＥＥ−ＧＭ３及びＥＥ−ＧＭ１の同時存在を識別するための特異的プローブのセット。
【請求項２６】
種子の純度を確認するための方法であって、方法が、種子試料中において、ＥＥ−ＧＭ３の除草剤耐性遺伝子を含む外来性ＤＮＡの５’又は３’フランキング領域を特異的に認識する特異的プライマー又はプローブによるＥＥ−ＧＭ３特異的領域の検出、及び、ＥＥ−ＧＭ１の除草剤耐性遺伝子を含む外来性ＤＮＡの５’又は３’フランキング領域を特異的に認識する特異的プライマー又はプローブによるＥＥ−ＧＭ１特異的領域の検出、を含む上記方法。
【請求項２７】
優良イベントＥＥ−ＧＭ３及びＥＥ−ＧＭ１の存在に関して種子をスクリーニングするための方法であって、方法が、種子ロットの試料中において、ＥＥ−ＧＭ３の除草剤耐性遺伝子を含む外来性ＤＮＡの５’又は３’フランキング領域を特異的に認識する特異的プライマー又はプローブによるＥＥ−ＧＭ３特異的領域の検出、及び、ＥＥ−ＧＭ１の除草剤耐性遺伝子を含む外来性ＤＮＡの５’又は３’フランキング領域を特異的に認識する特異的プライマー又はプローブによるＥＥ−ＧＭ１特異的領域の検出、を含む上記方法。
【請求項２８】
標的核酸配列の再利用を介してプローブ：標的核酸の比を増幅する実質的に相補な標識された核酸プローブとのハイブリダイゼーションを介して生物学的試料中の優良イベントＥＥ−ＧＭ３及びＥＥ−ＧＭ１の存在を検出するための方法であって、該方法が下記工程：
ａ）該標的核酸配列を、配列番号２のヌクレオチド１４５２からヌクレオチド１４６９までのヌクレオチド配列又はその相補体を含む第１の核酸オリゴヌクレオチド、又は、配列番号３のヌクレオチド２２３からヌクレオチド２４０までのヌクレオチド配列又はその相補体を含む該第１の核酸オリゴヌクレオチドにハイブリダイズさせること；
ｂ）該標的核酸配列を配列番号２のヌクレオチド１４３４からヌクレオチド１４５１までのヌクレオチド配列又はその相補体を含む第２の核酸オリゴヌクレオチド、又は配列番号３のヌクレオチド２４１からヌクレオチド２５８までのヌクレオチド配列又はその相補体を含む該標識された核酸プローブにハイブリダイズさせること、ここで、該第１及び第２のオリゴヌクレオチドはヌクレオチドの少なくとも１つで重複しており、そしてここで該第１又は該第２のオリゴヌクレオチドの何れかが標識されて該標識された核酸プローブとなるものである；
ｃ）選択的プローブ切断を起こすことによりデュプレックス解離をもたらす酵素によりプローブ:標的核酸配列デュプレックス内部の標識されたプローブのみを切断し、標的配列は未損傷のままとすること；
ｄ）工程（ａ）〜（ｃ）を反復することによる標的核酸配列を再利用すること；
ｅ)切断された標識されたプローブを検出することにより、該標的核酸配列の存在を決定すること；及び、
ｆ）該標的核酸配列を、配列番号１２のヌクレオチド２１０からヌクレオチド２２７までのヌクレオチド配列又はその相補体を含む第３の核酸オリゴヌクレオチド、又は、配列番号１３のヌクレオチド５６１からヌクレオチド５６８までのヌクレオチド配列又はその相補体を含む該第３の核酸オリゴヌクレオチドにハイブリダイズさせること；
ｇ）該標的核酸配列を配列番号１２のヌクレオチド１９２からヌクレオチド２０９までのヌクレオチド配列又はその相補体を含む第４の核酸オリゴヌクレオチド、又は配列番号１３のヌクレオチド５６９からヌクレオチド５８６までのヌクレオチド配列又はその相補体を含む該標識された核酸プローブにハイブリダイズさせること、ここで、該第３及び第４のオリゴヌクレオチドはヌクレオチドの少なくとも１つで重複しており、そしてここで該第３又は該第４のオリゴヌクレオチドの何れかが標識されて該標識された核酸プローブとなるものである；
ｈ）選択的プローブ切断を起こすことによりデュプレックス解離をもたらす酵素によりプローブ:標的核酸配列デュプレックス内部の標識されたプローブのみを切断し、標的配列は未損傷のままとすること；
ｉ）工程（ｆ）〜（ｈ）を反復することによる標的核酸配列を再利用すること；及び
ｊ)切断された標識されたプローブを検出することにより、該標的核酸配列の存在を決定すること；
を含む上記方法。
【請求項２９】
各々がそのゲノム内に優良イベントＥＥ−ＧＭ３及び優良イベントＥＥ−ＧＭ１を含むトランスジェニックダイズ植物、又はその細胞、部分、組織、種子又は子孫であって、該イベントＥＥ−ＧＭ３を含むレファレンス種子が寄託番号ＮＣＩＭＢ４１６５９の下にＮＣＩＭＢに寄託されており、そして、該イベントＥＥ−ＧＭ１を含むレファレンス種子が寄託番号ＮＣＩＭＢ４１６５８の下にＮＣＩＭＢに寄託されているか、又は、自身のゲノム内に優良イベントＥＥ−ＧＭ３及び優良イベントＥＥ−ＧＭ１を含むレファレンス種子が寄託番号ＰＴＡ−１１０４１の下にＡＴＣＣに寄託されている、上記トランスジェニックダイズ植物、又はその細胞、部分、組織、種子又は子孫。
【請求項３０】
ゲノムＤＮＡを、それぞれが配列番号４及び配列番号５のヌクレオチド配列を含む２つのプライマーでＥＥ−ＧＭ３に関する優良イベント識別プロトコルを用いて分析した場合に、約２６３ｂｐのＤＮＡフラグメントを与え、そして、ゲノムＤＮＡを、それぞれが配列番号１６及び配列番号１７のヌクレオチド配列を含む２つのプライマーでＥＥ−ＧＭ１に関する優良イベント識別プロトコルを用いて分析した場合に、約１８３ｂｐのＤＮＡフラグメントを与える、請求項２９記載のトランスジェニックダイズ植物、種子、細胞、組織、部分又は子孫。
【請求項３１】
自身のゲノム内に優良イベントＥＥ−ＧＭ３及び優良イベントＥＥ−ＧＭ１を各々含むダイズ植物、植物の部分、又はその種子、細胞又は組織であって、該ダイズ植物は、寄託番号ＮＣＩＭＢ４１６５９の下にＮＣＩＭＢに寄託された種子から生育させたダイズ植物の増殖及び／又は繁殖により得ることができる優良イベントＥＥ−ＧＭ３を含むダイズ植物を、寄託番号ＮＣＩＭＢ４１６５８の下にＮＣＩＭＢに寄託された種子から生育させたダイズ植物の増殖及び／又は繁殖により得ることができる優良イベントＥＥ−ＧＭ１をそのゲノム内に含むダイズ植物と交雑させることにより得られるか、又は、該ダイズ植物はアクセッション番号ＰＴＡ−１１０４１の下にＡＴＣＣに寄託された種子から生育させたダイズ植物の増殖及び／又は繁殖により得ることができる、上記ダイズ植物、植物の部分、又はその種子、細胞又は組織。
【請求項３２】
優良イベントＥＥ−ＧＭ３及びＥＥ−ＧＭ１を含むダイズ種子であって、イベントＥＥ−ＧＭ３を含むレファレンス種子が寄託番号ＮＣＩＭＢ４１６５９の下にＮＣＩＭＢに寄託されており、そしてイベントＥＥ−ＧＭ１を含むレファレンス種子が寄託番号ＮＣＩＭＢ４１６５８の下にＮＣＩＭＢに寄託されており、そしてイベントＥＥ−ＧＭ３及びＥＥ−ＧＭ１含むレファレンス種子がアクセッション番号ＰＴＡ−１１０４１の下にＡＴＣＣに寄託されている、上記ダイズ種子。
【請求項３３】
請求項３２記載の種子から得ることができる優良イベントＥＥ−ＧＭ３及びＥＥ−ＧＭ１を含むトランスジェニックダイズ植物、植物の部分、細胞又は組織。
【請求項３４】
請求項２９〜３３の何れか１項に記載の植物を別のダイズ植物と交雑させること、及び、該交雑から得られた種子を植栽することを含む、優良イベントＥＥ−ＧＭ３及びＥＥ−ＧＭ１を含むダイズ植物又は種子を生産するための方法。
【請求項３５】
優良イベントＥＥ−ＧＭ３及びＥＥ−ＧＭ１を含むダイズゲノムＤＮＡ。
【請求項３６】
第１の核酸分子が配列番号２のヌクレオチド１４４１〜ヌクレオチド１４５２又は配列番号３のヌクレオチド２３０〜ヌクレオチド２５１又は該配列の相補体に本質的に類似のヌクレオチド配列を含み、そして、第２の核酸分子が配列番号１２のヌクレオチド１９９〜ヌクレオチド２２０又は配列番号１３のヌクレオチド５５８〜ヌクレオチド５７９又は該配列の相補体に本質的に類似のヌクレオチド配列を含む、単離された核酸分子の対。
【請求項３７】
第１の核酸分子が配列番号２のヌクレオチド１４３１〜ヌクレオチド１４６２又は配列番号３のヌクレオチド２２０〜２６１又は該配列の相補体に本質的に類似のヌクレオチド配列を含み、そして、第２の核酸分子が配列番号１２のヌクレオチド１８９〜ヌクレオチド２３０又は配列番号１３のヌクレオチド５４８〜ヌクレオチド５８９又は該配列の相補体に本質的に類似のヌクレオチド配列を含む、請求項３６記載の単離された核酸分子の対。
【請求項３８】
下記のヌクレオチド配列：
ａ）配列番号２のヌクレオチド１から１４５１までのヌクレオチド配列；
ｂ）配列番号１のヌクレオチド６７６０からヌクレオチド６９５８までのヌクレオチド配列の相補体のヌクレオチド配列；
ｃ）配列番号１のヌクレオチド６８７４からヌクレオチド７２９８までのヌクレオチド配列：
ｄ）配列番号１のヌクレオチド７からヌクレオチド７２９１までのヌクレオチド配列；
ｅ）配列番号１のヌクレオチド１２からヌクレオチド７２６５までのヌクレオチド配列；
ｆ）配列番号３のヌクレオチド２１７からヌクレオチド２４０までのヌクレオチド配列；及び、
ｇ）配列番号３のヌクレオチド２４１からヌクレオチド１４０８までのヌクレオチド配列；
を順次自身のゲノム内に含み、そして、以下の配列：
ｈ）配列番号１２のヌクレオチド１〜２０９までのヌクレオチド配列；
ｉ）配列番号１１のヌクレオチド３４０からヌクレオチド３４６１までのヌクレオチド配列；
ｊ）配列番号１１のヌクレオチド１からヌクレオチド３３６までのヌクレオチド配列の相補体のヌクレオチド配列；
ｋ）配列番号１１のヌクレオチド３４６２からヌクレオチド４０７６までのヌクレオチド配列の相補体のヌクレオチド配列；
ｌ）配列番号１１のヌクレオチド３３７からヌクレオチド３０４３までのヌクレオチド配列；
ｍ）配列番号１３のヌクレオチド５５９からヌクレオチド５６８までのヌクレオチド配列；及び、
ｎ）配列番号１３のヌクレオチド５６９からヌクレオチド１０００までのヌクレオチド配列；
を順次さらに含むダイズ植物。
【請求項３９】
下記のヌクレオチド配列：
ａ）配列番号２のヌクレオチド１から１４５１までのヌクレオチド配列；
ｂ）配列番号１のヌクレオチド６７６０からヌクレオチド６９５８までのヌクレオチド配列の相補体のヌクレオチド配列；
ｃ）配列番号１のヌクレオチド６８７４からヌクレオチド７２９８までのヌクレオチド配列：
ｄ）配列番号１のヌクレオチド７からヌクレオチド７２９１までのヌクレオチド配列；
ｅ）配列番号１のヌクレオチド１２からヌクレオチド７２６５までのヌクレオチド配列；
ｆ）配列番号３のヌクレオチド２１７からヌクレオチド２４０までのヌクレオチド配列；及び、
ｇ）配列番号３のヌクレオチド２４１からヌクレオチド１４０８までのヌクレオチド配列；
を順次含み、そして、以下の配列：
ｈ）配列番号１２のヌクレオチド１から２０９までのヌクレオチド配列；
ｉ）配列番号１１のヌクレオチド３４０からヌクレオチド３４６１までのヌクレオチド配列；
ｊ）配列番号１１のヌクレオチド１からヌクレオチド３３６までのヌクレオチド配列の相補体のヌクレオチド配列；
ｋ）配列番号１１のヌクレオチド３４６２からヌクレオチド４０７６までのヌクレオチド配列の相補体のヌクレオチド配列；
ｌ）配列番号１１のヌクレオチド３３７からヌクレオチド３０４３までのヌクレオチド配列；
ｍ）配列番号１３のヌクレオチド５５９からヌクレオチド５６８までのヌクレオチド配列；及び、
ｎ）配列番号１３のヌクレオチド５６９からヌクレオチド１０００までのヌクレオチド配列；
を順次さらに含むＤＮＡ分子。
【請求項４０】
生物学的試料中の優良イベントＥＥ−ＧＭ３及びＥＥ−ＧＭ２の同時存在を識別するための方法であって、方法がＥＥ−ＧＭ３の除草剤耐性遺伝子を含む外来性ＤＮＡの５’又は３’フランキング領域を特異的に認識する特異的プライマー又はプローブを用いたＥＥ−ＧＭ３特異的領域の検出、及び、ＥＥ−ＧＭ２の除草剤耐性遺伝子を含む外来性ＤＮＡの５’又は３’フランキング領域を特異的に認識する特異的プライマー又はプローブを用いたＥＥ−ＧＭ２特異的領域の検出を含む、上記方法。
【請求項４１】
少なくとも２つのプライマーを用いた第１のポリメラーゼ連鎖反応、ただしここで、該プライマーの一方は、ＥＥ−ＧＭ３の除草剤耐性遺伝子を含む外来性ＤＮＡの５’フランキング領域、ここで該５’フランキング領域は配列番号２のヌクレオチド１からヌクレオチド１４５１までのヌクレオチド配列を含む、又は、ＥＥ−ＧＭ３の除草剤耐性遺伝子を含む外来性ＤＮＡの３’フランキング領域、ここで該３’フランキング領域は配列番号３のヌクレオチド２４１からヌクレオチド１４０８までの相補体のヌクレオチド配列を含む、を認識し、該プライマーの他方のプライマーは、配列番号２のヌクレオチド１４５２からヌクレオチド１８４３までの相補体のヌクレオチド配列又は配列番号３のヌクレオチド１からヌクレオチド２４０までのヌクレオチド配列を含むＥＥ−ＧＭ３の外来性ＤＮＡ内部の配列を認識するか、又は、該プライマーの他方のプライマーは、配列番号１のヌクレオチド配列又はその相補体を含むか又は配列番号２０のヌクレオチド位置１４５２からヌクレオチド位置１６６３８までのヌクレオチド配列又はその相補体を含むＥＥ−ＧＭ３の外来性ＤＮＡ内部の配列を認識する、を使用し、そして、少なくとも２つのプライマーを用いた第２のポリメラーゼ連鎖反応、ただしここで、該プライマーの一方は、ＥＥ−ＧＭ２の除草剤耐性遺伝子を含む外来性ＤＮＡの５’フランキング領域、ここで該５’フランキング領域は配列番号１４のヌクレオチド１からヌクレオチド３１１までのヌクレオチド配列を含む、又は、ＥＥ−ＧＭ２中に除草剤耐性遺伝子を含む外来性ＤＮＡの３’フランキング領域、ここで該３’フランキング領域は配列番号１５のヌクレオチド５０８からヌクレオチド１８８０までの相補体のヌクレオチド配列を含む、を認識し、該プライマーの他方のプライマーは、配列番号１４のヌクレオチド３１２からヌクレオチド８１０までの相補体のヌクレオチド配列又は配列番号１５のヌクレオチド１からヌクレオチド５０７までのヌクレオチド配列を含むＥＥ−ＧＭ２の外来性ＤＮＡ内部の配列を認識するか、又は、該プライマーの他方のプライマーは、配列番号１１のヌクレオチド配列又はその相補体を含むＥＥ−ＧＭ２の外来性ＤＮＡ内部の配列を認識する、を使用して該生物学的試料中に存在する核酸〜５０〜１０００ｂｐの２つのＤＮＡフラグメントを増幅すること、ここで、該第１及び第２のポリメラーゼ反応は逐次的であっても又は同時であってもよい、を含む、請求項４０記載の方法。
【請求項４２】
ＥＥ−ＧＭ３の５’フランキング領域を認識する該プライマーが、配列番号２のヌクレオチド１からヌクレオチド１４５１までのヌクレオチド配列から選択される１７から２００個までの連続ヌクレオチドのヌクレオチド配列を含むか、又は、ＥＥ−ＧＭ３の３’フランキング領域を認識する該プライマーが、ヌクレオチド２４１からヌクレオチド１４０８までの配列番号３の相補体のヌクレオチド配列から選択される１７から２００個までの連続ヌクレオチドのヌクレオチド配列を含み、そして、ＥＥ−ＧＭ３の外来性ＤＮＡ内部の配列を認識する該プライマーが、配列番号２のヌクレオチド１４５２からヌクレオチド１８４３までの相補体のヌクレオチド配列、又は配列番号３のヌクレオチド１からヌクレオチド２４０までのヌクレオチド配列、又は配列番号１のヌクレオチド配列又はその相補体、又は配列番号２０のヌクレオチド位置１４５２からヌクレオチド位置１６６３８までのヌクレオチド配列又はその相補体から選択される連続ヌクレオチド１７から２００個までを含む、及び、ＥＥ−ＧＭ２の５’フランキング領域を認識する該プライマーが、配列番号１４のヌクレオチド１からヌクレオチド３１１までのヌクレオチド配列から選択される１７から２００個までの連続ヌクレオチドのヌクレオチド配列を含むか、又は、ＥＥ−ＧＭ３の３’フランキング領域を認識する該プライマーが、配列番号１５のヌクレオチド５０８からヌクレオチド１８８０までの相補体のヌクレオチド配列から選択される１７から２００個までの連続ヌクレオチドのヌクレオチド配列を含み、そして、ＥＥ−ＧＭ２の外来性ＤＮＡ内部の配列を認識する該プライマーが、配列番号１４のヌクレオチド３１２からヌクレオチド８１０までの相補体のヌクレオチド配列、又は配列番号１５のヌクレオチド１からヌクレオチド５０７までのヌクレオチド配列、又は配列番号１１のヌクレオチド配列又はその相補体から選択される１７から２００個までの連続ヌクレオチドを含む、請求項４１記載の方法。
【請求項４３】
ＥＥ−ＧＭ３の５’フランキング領域を認識する該プライマーが、その３’最末端において、配列番号２のヌクレオチド１からヌクレオチド１４５１までのヌクレオチド配列から選択される少なくとも１７個の連続ヌクレオチドのヌクレオチド配列を含むか、又は、ＥＥ−ＧＭ３の３’フランキング領域を認識する該プライマーが、その３’最末端において、ヌクレオチド２４１からヌクレオチド１４０８までの配列番号３の相補体のヌクレオチド配列から選択される少なくとも１７個の連続ヌクレオチドのヌクレオチド配列を含み、そして、ＥＥ−ＧＭ３の外来性ＤＮＡ内部の配列を認識する該プライマーが、その３’最末端において、配列番号２のヌクレオチド１４５２からヌクレオチド１８４３までの相補体のヌクレオチド配列、又は配列番号３のヌクレオチド１からヌクレオチド２４０までのヌクレオチド配列、又は配列番号１のヌクレオチド配列又はその相補体、又は配列番号２０のヌクレオチド位置１４５２からヌクレオチド位置１６６３８までのヌクレオチド配列又はその相補体から選択される少なくとも１７個の連続ヌクレオチドのヌクレオチド配列を含む、及び、ＥＥ−ＧＭ２の５’フランキング領域を認識する該プライマーが、その３’最末端において、配列番号１４のヌクレオチド１からヌクレオチド３１１までのヌクレオチド配列から選択される少なくとも１７個の連続ヌクレオチドのヌクレオチド配列を含むか、又は、ＥＥ−ＧＭ２の３’フランキング領域を認識する該プライマーが、その３’最末端において、配列番号１５のヌクレオチド５０８からヌクレオチド１８８０までの相補体のヌクレオチド配列から選択される少なくとも１７個の連続ヌクレオチドのヌクレオチド配列を含み、そして、ＥＥ−ＧＭ２の外来性ＤＮＡ内部の配列を認識する該プライマーが、その３’末端において、配列番号１４のヌクレオチド３１２からヌクレオチド８１０までの相補体のヌクレオチド配列、又は配列番号１５のヌクレオチド１からヌクレオチド５０７までのヌクレオチド配列、又は配列番号１１のヌクレオチド配列又はその相補体から選択される少なくとも１７個の連続ヌクレオチドを含む、請求項４１記載の方法。
【請求項４４】
前記ＥＥ−ＧＭ３特異的プライマーがそれぞれ配列番号５及び配列番号４の配列、又は、それぞれ配列番号７及び配列番号５の配列を含み、そして、前記ＥＥ−ＧＭ２特異的プライマーがそれぞれ配列番号１８及び配列番号１９の配列を含む、請求項４３記載の方法。
【請求項４５】
ＥＥ−ＧＭ３ＰＣＲ識別プロトコルを用いて約２６３又は７０６ｂｐのＥＥ−ＧＭ３特異的フラグメント及び約１５１ｂｐのＥＥ−ＧＭ２特異フラグメントを増幅することを包含する、請求項４４記載の方法。
【請求項４６】
生物学的試料中の優良イベントＥＥ−ＧＭ３及び優良イベントＥＥ−ＧＭ２の同時存在を識別するためのキットであって、キットが、ＥＥ−ＧＭ３の除草剤耐性遺伝子を含む外来性ＤＮＡの５’フランキング領域を認識する１つのプライマー、ここで該５’フランキング領域はヌクレオチド１からヌクレオチド１４５１までの配列番号２のヌクレオチド配列を含む、又は、ＥＥ−ＧＭ３の除草剤耐性遺伝子を含む外来性ＤＮＡの３’フランキング領域を認識する１つのプライマー、ここで該３’フランキング領域は配列番号３のヌクレオチド２４１からヌクレオチド１４０８までの相補体のヌクレオチド配列を含む、及び、ＥＥ−ＧＭ３の除草剤耐性遺伝子を含む外来性ＤＮＡ内部の配列を認識する１つのプライマー、ここで該外来性ＤＮＡは配列番号２のヌクレオチド１４５２からヌクレオチド１８４３までの相補体のヌクレオチド配列、又は配列番号３のヌクレオチド１からヌクレオチド２４０までのヌクレオチド配列、又は配列番号１のヌクレオチド配列又はその相補体、又は配列番号２０のヌクレオチド位置１４５２からヌクレオチド位置１６６３８までのヌクレオチド配列又はその相補体を含む、を含み、そして、該キットが更に、ＥＥ−ＧＭ２の除草剤耐性遺伝子を含む外来性ＤＮＡの５’フランキング領域を認識する１つのプライマー、ここで該５’フランキング領域は配列番号１４のヌクレオチド１からヌクレオチド３１１までのヌクレオチド配列を含む、又は、ＥＥ−ＧＭ２の除草剤耐性遺伝子を含む外来性ＤＮＡの３’フランキング領域を認識する１つのプライマー、ここで該３’フランキング領域は配列番号１５のヌクレオチド５０８からヌクレオチド１８８０までの相補体のヌクレオチド配列を含む、及び、ＥＥ−ＧＭ２の除草剤耐性遺伝子を含む外来性ＤＮＡ内部の配列を認識する１つのプライマー、ここで該外来性ＤＮＡは配列番号１４のヌクレオチド３１２からヌクレオチド８１０までの相補体のヌクレオチド配列、又は配列番号１５のヌクレオチド１からヌクレオチド５０７までのヌクレオチド配列、又は配列番号１１のヌクレオチド配列又はその相補体を含む、を含む、上記キット。
【請求項４７】
ＥＥ−ＧＭ３の５’フランキング領域を認識する該プライマーが、配列番号２のヌクレオチド１からヌクレオチド１４５１までのヌクレオチド配列から選択される１７から２００個までの連続ヌクレオチドのヌクレオチド配列を含むか、又は、ＥＥ−ＧＭ３の３’フランキング領域を認識する該プライマーが、配列番号３のヌクレオチド２４１からヌクレオチド１４０８までの相補体のヌクレオチド配列から選択される１７から２００個までの連続ヌクレオチドのヌクレオチド配列を含み、そして、ＥＥ−ＧＭ３の外来性ＤＮＡ内部の配列を認識する該プライマーが、配列番号２のヌクレオチド１４５２からヌクレオチド１８４３までの相補体のヌクレオチド配列、又は配列番号３のヌクレオチド１からヌクレオチド２４０までのヌクレオチド配列、又は配列番号１のヌクレオチド配列又はその相補体、又は配列番号２０のヌクレオチド位置１４５２からヌクレオチド位置１６６３８までのヌクレオチド配列又はその相補体から選択される１７から２００個までの連続ヌクレオチドのヌクレオチド配列を含む、及び、ＥＥ−ＧＭ２の５’フランキング領域を認識する該プライマーが、配列番号１４のヌクレオチド１からヌクレオチド３１１までのヌクレオチド配列から選択される１７から２００個までの連続ヌクレオチドのヌクレオチド配列を含むか、又は、ＥＥ−ＧＭ２の３’フランキング領域を認識する該プライマーが、配列番号１５のヌクレオチド５０８からヌクレオチド１８８０までの相補体のヌクレオチド配列から選択される１７から２００個までの連続ヌクレオチドのヌクレオチド配列を含み、そして、ＥＥ−ＧＭ２の外来性ＤＮＡ内部の配列を認識する該プライマーが、配列番号１４のヌクレオチド３１２からヌクレオチド８１０までの相補体のヌクレオチド配列、又は配列番号１５のヌクレオチド１からヌクレオチド５０７までのヌクレオチド配列、又は配列番号１１のヌクレオチド配列又はその相補体から選択される１７から２００個までの連続ヌクレオチドを含む、請求項４６記載のキット。
【請求項４８】
ＥＥ−ＧＭ３の５’フランキング領域を認識する該プライマーが、その３’最末端において、配列番号２のヌクレオチド１からヌクレオチド１４５１までのヌクレオチド配列から選択される少なくとも１７個の連続ヌクレオチドのヌクレオチド配列を含むか、又は、ＥＥ−ＧＭ３の３’フランキング領域を認識する該プライマーが、その３’最末端において、配列番号３のヌクレオチド２４１からヌクレオチド１４０８までの相補体のヌクレオチド配列から選択される少なくとも１７個の連続ヌクレオチドのヌクレオチド配列を含み、そして、ＥＥ−ＧＭ３の外来性ＤＮＡ内部の配列を認識する該プライマーが、その３’末端において配列番号２のヌクレオチド１４５２からヌクレオチド１８４３までの相補体のヌクレオチド配列、又は配列番号３のヌクレオチド１からヌクレオチド２４０までのヌクレオチド配列、又は配列番号１のヌクレオチド配列又はその相補体、又は配列番号２０のヌクレオチド位置１４５２からヌクレオチド位置１６６３８までのヌクレオチド配列又はその相補体から選択される少なくとも１７個の連続ヌクレオチドを含む、及び、ＥＥ−ＧＭ２の５’フランキング領域を認識する該プライマーが、その３’最末端において、配列番号１４のヌクレオチド１からヌクレオチド３１１までのヌクレオチド配列から選択される少なくとも１７個の連続ヌクレオチドのヌクレオチド配列を含むか、又は、ＥＥ−ＧＭ２の３’フランキング領域を認識する該プライマーが、その３’最末端において配列番号１５のヌクレオチド５０８からヌクレオチド１８８０までの相補体のヌクレオチド配列から選択される少なくとも１７個の連続ヌクレオチドのヌクレオチド配列を含み、そして、ＥＥ−ＧＭ２の外来性ＤＮＡ内部の配列を認識する該プライマーが、その３’末端において、配列番号１４のヌクレオチド３１２からヌクレオチド８１０までの相補体のヌクレオチド配列、又は配列番号１５のヌクレオチド１からヌクレオチド５０７までのヌクレオチド配列、又は配列番号１１のヌクレオチド配列又はその相補体から選択される少なくとも１７個の連続ヌクレオチドを含む、請求項４６記載のキット。
【請求項４９】
配列番号４の配列を含むプライマー及び配列番号５の配列を含むプライマーを含むか、又は配列番号５の配列を含むプライマーおよび配列番号７の配列を含むプライマーを含み、そして更に、配列番号１８の配列を含むプライマー及び配列番号１９の配列を含むプライマーを含む、請求項４６記載のキット。
【請求項５０】
ＥＥ−ＧＭ３及びＥＥ−ＧＭ２特異的検出における使用に適するプライマー対であって、該第１のプライマーは、最適な検出条件下においてＥＥ−ＧＭ３の除草剤耐性遺伝子を含む外来性ＤＮＡの５’又は３’フランキング領域内部の配列を特異的に認識する配列、ここで該５’フランキング領域は配列番号２のヌクレオチド１からヌクレオチド１４５１までのヌクレオチド配列を含みそして該３’フランキング領域は配列番号３のヌクレオチド２４１からヌクレオチド１４０８までの相補体のヌクレオチド配列を含む、を含み、そして、該第２のプライマーは、最適な検出条件下においてＥＥ−ＧＭ２の除草剤耐性遺伝子を含む外来性ＤＮＡの５’又は３’フランキング領域内部の配列を特異的に認識する配列、ここで該５’フランキング領域は配列番号１４のヌクレオチド１からヌクレオチド３１１までのヌクレオチド配列を含みそして該３’フランキング領域は配列番号１５のヌクレオチド５０８からヌクレオチド１８８０までの相補体のヌクレオチド配列を含む、を含む上記プライマー対。
【請求項５１】
該第１のプライマーが、配列番号２のヌクレオチド１からヌクレオチド１４５１までのヌクレオチド配列から選択される１７〜２００個までの連続ヌクレオチドのヌクレオチド配列又は配列番号３のヌクレオチド２４１からヌクレオチド１４０８までの相補体のヌクレオチド配列から選択される１７〜２００個までの連続ヌクレオチドのヌクレオチド配列を含み、そして、該第２のプライマーが、配列番号１４のヌクレオチド１からヌクレオチド３１１までのヌクレオチド配列から選択される１７〜２００個までの連続ヌクレオチドのヌクレオチド配列又は配列番号１５のヌクレオチド５０８からヌクレオチド１８８０までの相補体のヌクレオチド配列から選択される１７〜２００個までの連続ヌクレオチドのヌクレオチド配列を含む、請求項５０記載のプライマー対。
【請求項５２】
該第１のプライマーが、その３’最末端において、配列番号２のヌクレオチド１からヌクレオチド１４５１までのヌクレオチド配列から選択される少なくとも１７個の連続ヌクレオチドのヌクレオチド配列又は配列番号３のヌクレオチド２４１からヌクレオチド１４０８までの相補体のヌクレオチド配列から選択される連続ヌクレオチドの少なくとも１７個のヌクレオチド配列を含み、そして、該第２のプライマーが、その３’最末端において、配列番号１４のヌクレオチド１からヌクレオチド３１１までのヌクレオチド配列から選択される少なくとも１７個の連続ヌクレオチドのヌクレオチド配列又は配列番号１５のヌクレオチド５０８からヌクレオチド１８８０までの相補体のヌクレオチド配列から選択される少なくとも１７個の連続ヌクレオチドのヌクレオチド配列を含む、請求項５０記載のプライマー対。
【請求項５３】
第１のプライマーが配列番号５の配列をその３’最末端に含み、そして第２のプライマーが配列番号１８の配列をその３’最末端に含む、プライマー対。
【請求項５４】
下記の４つのプライマー：
配列番号５の配列をその３’最末端に含む第１のプライマー；
配列番号４の配列をその３’最末端に含む第２のプライマー；
配列番号１８の配列をその３’最末端に含む第３のプライマー；及び、
配列番号１９の配列をその３’最末端に含む第４のプライマー；
を含むセット。
【請求項５５】
ＥＥ−ＧＭ３に対する第１の特異的プローブに、そして、ＥＥ−ＧＭ２に対する第２の特異的プローブに、生物学的試料の核酸をハイブリダイズさせることを含む、請求項４０記載の方法。
【請求項５６】
該第１の特異的プローブの配列が、ＥＥ−ＧＭ３の５’フランキング配列又は３’フランキング配列及びそれに隣接する外来性ＤＮＡの配列の部分を含む配列と少なくとも８０％配列同一性を有し、そして、該第２の特異的プローブの配列が、ＥＥ−ＧＭ２の５’フランキング配列又は３’フランキング配列及びそれに隣接する外来性ＤＮＡの配列の部分を含む配列と少なくとも８０％配列同一性を有する、請求項５５記載の方法。
【請求項５７】
該第１の特異的プローブの配列が配列番号２のヌクレオチド１４３１〜１４７２又は配列番号３のヌクレオチド２２０〜２６１、又は該配列の相補体と少なくとも８０％配列同一性を有し、そして、該第２の特異的プローブの配列が配列番号１４のヌクレオチド３０１〜３２２又は配列番号１５のヌクレオチド４９７〜５１８、又は該配列の相補体と少なくとも８０％配列同一性を有する、請求項５６記載の方法。
【請求項５８】
生物学的試料中の優良イベントＥＥ−ＧＭ３及び優良イベントＥＥ−ＧＭ２の同時存在を識別するためのキットであって、該キットがＥＥ−ＧＭ３の特異的領域に特異的にハイブリダイズすることができる第１の特異的プローブ、及び、ＥＥ−ＧＭ２の特異的領域に特異的にハイブリダイズすることができる第２の特異的プローブを含む、上記キット。
【請求項５９】
該第１の特異的プローブの配列がＥＥ−ＧＭ３の除草剤耐性遺伝子を含む外来性ＤＮＡの５’フランキング配列又は３’フランキング配列及びそれに隣接する外来性ＤＮＡの配列の部分を含む配列と少なくとも８０％配列同一性を有し、そして、該第２の特異的プローブの配列がＥＥ−ＧＭ２の除草剤耐性遺伝子を含む外来性ＤＮＡの５’フランキング配列又は３’フランキング配列の部分及びそれに隣接する外来性ＤＮＡの配列を含む配列と少なくとも８０％配列同一性を有する、請求項５８記載のキット。
【請求項６０】
該第１の特異的プローブの配列が配列番号２のヌクレオチド１４４１〜１４６２又は配列番号３のヌクレオチド２３０〜２５１、又は該配列の相補体と少なくとも８０％配列同一性を有するヌクレオチド配列を含み、そして、該第２の特異的プローブの配列が配列番号１４のヌクレオチド３０１〜３２２又は配列番号１５のヌクレオチド４９７〜５１８までの、又は該配列の相補体と少なくとも８０％配列同一性を有する、請求項５９記載のキット。
【請求項６１】
生物学的試料中の優良イベントＥＥ−ＧＭ３及び優良イベントＥＥ−ＧＭ２の同時存在の識別のための特異的プローブの対。
【請求項６２】
ＥＥ−ＧＭ３の除草剤耐性遺伝子を含む外来性ＤＮＡの５’フランキング配列又は３’フランキング配列及びそれに隣接する外来性ＤＮＡの配列の部分の配列又はその相補体と少なくとも８０％配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む第１のプローブ、及び、ＥＥ−ＧＭ２の除草剤耐性遺伝子を含む外来性ＤＮＡの５’フランキング配列又は３’フランキング配列及びそれに隣接する外来性ＤＮＡの配列の部分の配列又はその相補体と少なくとも８０％配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む第２のプローブを含む、請求項６１記載のプローブの対。
【請求項６３】
第１のプローブが配列番号２のヌクレオチド１４４１〜１４６２又は配列番号３のヌクレオチド２３０〜２５１、又は該配列の相補体と少なくとも８０％配列同一性を有し、そして、第２のプローブが配列番号１４のヌクレオチド３０１〜３２２又は配列番号１５のヌクレオチド４９７〜５１８、又は該配列の相補体と少なくとも８０％配列同一性を有する、請求項６２記載のプローブの対。
【請求項６４】
配列番号２のヌクレオチド１４４１〜１４６２又は配列番号３のヌクレオチド２３０〜２５１、又は該配列の相補体と本質的に類似のヌクレオチド配列を含む配列を有する第１のプローブ、及び、配列番号１４のヌクレオチド３０１〜３２２又は配列番号１５のヌクレオチド４９７〜５１８、又は該配列の相補体と本質的に類似のヌクレオチド配列を有する第２のプローブを含む、生物学的試料中の優良イベントＥＥ−ＧＭ３及びＥＥ−ＧＭ２の同時存在を識別するための特異的プローブのセット。
【請求項６５】
種子の純度を確認するための方法であって、方法が種子試料において、ＥＥ−ＧＭ３の除草剤耐性遺伝子を含む外来性ＤＮＡの５’又は３’フランキング領域を特異的に認識する特異的プライマー又はプローブによるＥＥ−ＧＭ３特異的領域の検出、及び、ＥＥ−ＧＭ２の除草剤耐性遺伝子を含む外来性ＤＮＡの５’又は３’フランキング領域を特異的に認識する特異的プライマー又はプローブによるＥＥ−ＧＭ２特異的領域の検出、を含む上記方法。
【請求項６６】
ＥＥ−ＧＭ３の存在に関して種子をスクリーニングするための方法であって、方法が、種子ロットの試料において、ＥＥ−ＧＭ３の除草剤耐性遺伝子を含む外来性ＤＮＡの５’又は３’フランキング領域を特異的に認識する特異的プライマー又はプローブによるＥＥ−ＧＭ３特異的領域の検出、及び、ＥＥ−ＧＭ２の除草剤耐性遺伝子を含む外来性ＤＮＡの５’又は３’フランキング領域を特異的に認識する特異的プライマー又はプローブによるＥＥ−ＧＭ２特異的領域の検出、を含む上記方法。
【請求項６７】
標的核酸配列の再利用を介してプローブ：標的核酸の比を増幅する実質的に相補な標識された核酸プローブとのハイブリダイゼーションを介して生物学的試料中の優良イベントＥＥ−ＧＭ３及びＥＥ−ＧＭ２の存在を検出するための方法であって、該方法が下記工程：
ａ）該標的核酸配列を、配列番号２のヌクレオチド１４５２からヌクレオチド１４６９までのヌクレオチド配列又はその相補体を含む第１の核酸オリゴヌクレオチド、又は、配列番号３のヌクレオチド２２３からヌクレオチド２４０までのヌクレオチド配列又はその相補体を含む第１の核酸オリゴヌクレオチドにハイブリダイズさせること；
ｂ）該標的核酸配列を配列番号２のヌクレオチド１４３４からヌクレオチド１４５１までのヌクレオチド配列又はその相補体を含む第２の核酸オリゴヌクレオチド、又は配列番号３のヌクレオチド２４１からヌクレオチド２５８までのヌクレオチド配列又はその相補体を含む該標識された核酸プローブにハイブリダイズさせること、ここで、該第１及び第２のオリゴヌクレオチドはヌクレオチド少なくとも１つで重複しており、そしてここで該第１又は該第２のオリゴヌクレオチドの何れかが標識されて該標識された核酸プローブとなるものである；
ｃ）選択的プローブ切断を起こすことによりデュプレックス解離をもたらす酵素によりプローブ:標的核酸配列デュプレックス内部の標識されたプローブのみを切断し、標的配列は未損傷のままとすること；
ｄ）工程（ａ）〜（ｃ）を反復することによる標的核酸配列を再利用すること；
ｅ)切断された標識されたプローブを検出することにより、該標的核酸配列の存在を決定すること；及び、
ｆ）該標的核酸配列を、配列番号１４のヌクレオチド３１２からヌクレオチド３２９までのヌクレオチド配列又はその相補体を含む第３の核酸オリゴヌクレオチド、又は、配列番号１５のヌクレオチド４９０からヌクレオチド５０７までのヌクレオチド配列又はその相補体を含む該第３の核酸オリゴヌクレオチドにハイブリダイズさせること；
ｇ）該標的核酸配列を配列番号１４のヌクレオチド２９４からヌクレオチド３１１までのヌクレオチド配列又はその相補体を含む第４の核酸オリゴヌクレオチド、又は配列番号１５のヌクレオチド５０８からヌクレオチド５２５までのヌクレオチド配列又はその相補体を含む該標識された核酸プローブにハイブリダイズさせること、ここで、該第３及び第４のオリゴヌクレオチドはヌクレオチドの少なくとも１つで重複しており、そしてここで該第３又は該第４のオリゴヌクレオチドの何れかが標識されて該標識された核酸プローブとなるものである；
ｈ）選択的プローブ切断を起こすことによりデュプレックス解離をもたらす酵素によりプローブ:標的核酸配列デュプレックス内部の標識されたプローブのみを切断し、標的配列は未損傷のままとすること；
ｉ）工程（ｆ）〜（ｈ）を反復することによる標的核酸配列を再利用すること；
ｊ)切断された標識されたプローブを検出することにより、該標的核酸配列の存在を決定すること；
を含む上記方法。
【請求項６８】
各々がそのゲノム内に優良イベントＥＥ−ＧＭ３及び優良イベントＥＥ−ＧＭ２を含むトランスジェニックダイズ植物、又はその細胞、部分、種子又は子孫であって、該イベントＥＥ−ＧＭ３を含むレファレンス種子が寄託番号ＮＣＩＭＢ４１６５９の下にＮＣＩＭＢに寄託されており、そして、該イベントＥＥ−ＧＭ２を含むレファレンス種子が寄託番号ＮＣＩＭＢ４１６６０の下にＮＣＩＭＢに寄託されているか、又は、自身のゲノム内に優良イベントＥＥ−ＧＭ３及び優良イベントＥＥ−ＧＭ２を含むレファレンス種子が寄託番号ＰＴＡ−１１０４２の下にＡＴＣＣに寄託されている、上記トランスジェニックダイズ植物、又はその細胞、部分、種子又は子孫。
【請求項６９】
ゲノムＤＮＡが、それぞれが配列番号４及び配列番号５のヌクレオチド配列を含む２つのプライマーでＥＥ−ＧＭ３に関する優良イベント識別プロトコルを用いて分析した場合に、約２６３ｂｐのＤＮＡフラグメントを与え、そして、ゲノムＤＮＡが、それぞれが配列番号１８及び配列番号１９のヌクレオチド配列を含む２つのプライマーでＥＥ−ＧＭ２に関する優良イベント識別プロトコルを用いて分析した場合に、約１５１ｂｐのＤＮＡフラグメントを与える、請求項６８記載のトランスジェニックダイズ植物、種子、細胞、部分又は子孫。
【請求項７０】
自身のゲノム内に優良イベントＥＥ−ＧＭ３及び優良イベントＥＥ−ＧＭ２を各々含むダイズ植物、又はその種子、細胞、又は組織であって、該ダイズ植物は、寄託番号ＮＣＩＭＢ４１６５９の下にＮＣＩＭＢに寄託された種子から生育させたダイズ植物の増殖及び／又は繁殖により得ることができる自身のゲノム中に優良イベントＥＥ−ＧＭ３を含むダイズ植物を、寄託番号ＮＣＩＭＢ４１６６０の下にＮＣＩＭＢに寄託された種子から生育させたダイズ植物の増殖及び／又は繁殖により得ることができる優良イベントＥＥ−ＧＭ２をそのゲノム内に含むダイズ植物と交雑させることにより得られるか、又は、該ダイズ植物はアクセッション番号ＰＴＡ−１１０４２の下にＡＴＣＣに寄託された種子から生育させたダイズ植物の増殖及び／又は繁殖により得ることができる、上記ダイズ植物、又はその種子、細胞又は組織。
【請求項７１】
優良イベントＥＥ−ＧＭ３及びＥＥ−ＧＭ２を含むダイズ種子であって、イベントＥＥ−ＧＭ３を含むレファレンス種子が寄託番号ＮＣＩＭＢ４１６５９の下にＮＣＩＭＢに寄託されており、そしてイベントＥＥ−ＧＭ２を含むレファレンス種子が寄託番号ＮＣＩＭＢ４１６６０の下にＮＣＩＭＢに寄託されており、そしてイベントＥＥ−ＧＭ３及びＥＥ−ＧＭ２含むレファレンス種子がアクセッション番号ＰＴＡ−１１０４２の下にＡＴＣＣに寄託されている、上記ダイズ種子。
【請求項７２】
請求項７１記載の種子から得ることができる優良イベントＥＥ−ＧＭ３及びＥＥ−ＧＭ２を含むトランスジェニックダイズ植物、細胞又は組織。
【請求項７３】
請求項６８〜７２の何れか１項に記載の植物を別のダイズ植物と交雑させること、及び、該交雑から得られた種子を植栽することを含む、優良イベントＥＥ−ＧＭ３及びＥＥ−ＧＭ２を含むダイズ植物又は種子を生産するための方法。
【請求項７４】
優良イベントＥＥ−ＧＭ３及びＥＥ−ＧＭ２を含むダイズゲノムＤＮＡ。
【請求項７５】
第１の核酸分子が配列番号２のヌクレオチド１４４１〜ヌクレオチド１４５２又は配列番号３のヌクレオチド２３０〜ヌクレオチド２５１又は該配列の相補体に本質的に類似のヌクレオチド配列を含み、そして、第２の核酸分子が配列番号１４のヌクレオチド３０１からヌクレオチド３２２の又は配列番号１５のヌクレオチド４９７〜ヌクレオチド５１８又は該配列の相補体に本質的に類似のヌクレオチド配列を含む、単離された核酸分子の対。
【請求項７６】
第１の核酸分子が配列番号２のヌクレオチド１４３１〜ヌクレオチド１４６２又は配列番号３のヌクレオチド２２０〜２６１又は該配列の相補体に本質的に類似のヌクレオチド配列を含み、そして、第２の核酸分子が配列番号１４のヌクレオチド３０１〜ヌクレオチド３２２又はヌクレオチド４８７〜ヌクレオチド５１８までの配列番号１５又は該配列の相補体に本質的に類似のヌクレオチド配列を含む、請求項７５記載の単離された核酸分子の対。
【請求項７７】
下記のヌクレオチド配列：
ａ）配列番号２のヌクレオチド１から１４５１までのヌクレオチド配列；
ｂ）配列番号１のヌクレオチド６７６０からヌクレオチド６９５８までのヌクレオチド配列の相補体のヌクレオチド配列；
ｃ）配列番号１のヌクレオチド６８７４からヌクレオチド７２９８までのヌクレオチド配列：
ｄ）配列番号１のヌクレオチド７からヌクレオチド７２９１までのヌクレオチド配列；
ｅ）の配列番号１ヌクレオチド１２からヌクレオチド７２６５までのヌクレオチド配列；
ｆ）配列番号３のヌクレオチド２１７からヌクレオチド２４０までのヌクレオチド配列；及び、
ｇ）配列番号３のヌクレオチド２４１からヌクレオチド１４０８までのヌクレオチド配列；
を順次自身のゲノム内に含み、そして、以下の配列：
ｈ）配列番号１４のヌクレオチド１から３１１までのヌクレオチド配列；
ｉ）配列番号１１のヌクレオチド３４５８からヌクレオチド３８４８までのヌクレオチド配列；
ｊ）配列番号１１のヌクレオチド４１３からヌクレオチド３４５７までのヌクレオチド配列；
ｋ）配列番号１５のヌクレオチド５０８からヌクレオチド１８８０までのヌクレオチド配列；
を順次さらに含むダイズ植物。
【請求項７８】
下記のヌクレオチド配列：
ａ）配列番号２のヌクレオチド１から１４５１までのヌクレオチド配列；
ｂ）配列番号１のヌクレオチド６７６０からヌクレオチド６９５８までのヌクレオチド配列の相補体のヌクレオチド配列；
ｃ）配列番号１のヌクレオチド６８７４からヌクレオチド７２９８までのヌクレオチド配列：
ｄ）配列番号１のヌクレオチド７からヌクレオチド７２９１までのヌクレオチド配列；
ｅ）配列番号１のヌクレオチド１２からヌクレオチド７２６５までのヌクレオチド配列；
ｆ）配列番号３のヌクレオチド２１７からヌクレオチド２４０までのヌクレオチド配列；及び、
ｇ）配列番号３のヌクレオチド２４１からヌクレオチド１４０８までのヌクレオチド配列；
を順次含み、そして、以下の配列：
ｈ）配列番号１４のヌクレオチド１から３１１までのヌクレオチド配列；
ｉ）配列番号１１のヌクレオチド３４５８からヌクレオチド３８４８までのヌクレオチド配列；
ｊ）配列番号１１のヌクレオチド４１３からヌクレオチド３４５７までのヌクレオチド配列；
ｋ）配列番号１５のヌクレオチド５０８からヌクレオチド１８８０までのヌクレオチド配列；
を順次さらに含むＤＮＡ分子。
【請求項７９】
配列番号２のヌクレオチド１４３１〜１４７２と少なくとも８０％、９０％、９５％又は１００％の配列同一性を有する核酸配列及び配列番号３のヌクレオチド２２０〜２６１のと少なくとも８０％、９０％、９５％又は１００％の配列同一性を有する核酸配列、又は該配列の相補体、及び、配列番号１２のヌクレオチド１９９〜２２０と少なくとも８０％、９０％、９５％又は１００％の配列同一性を有する核酸配列及び配列番号１３のヌクレオチド５５８〜５７９のと少なくとも８０％、９０％、９５％又は１００％の配列同一性を有する核酸配列、又は該配列の相補体、を自身の細胞のゲノム内に含む、ＥＥ−ＧＭ３及びＥＥ−ＧＭ１を含む、ダイズ植物、細胞、組織又は種子。
【請求項８０】
配列番号２のヌクレオチド１４３１〜１４７２と少なくとも８０％、９０％、９５％又は１００％の配列同一性を有する核酸配列及びヌクレオチド２２０〜２６１の配列番号３と少なくとも８０％、９０％、９５％又は１００％の配列同一性を有する核酸配列、又は該配列の相補体、及び、配列番号１４のヌクレオチド３０１〜３２２と少なくとも８０％、９０％、９５％又は１００％の配列同一性を有する核酸配列及び配列番号１５のヌクレオチド４９７〜５１８のと少なくとも８０％、９０％、９５％又は１００％の配列同一性を有する核酸配列、又は該配列の相補体、を自身の細胞のゲノム内に含む、ＥＥ−ＧＭ３及びＥＥ−ＧＭ２を含むダイズ植物、細胞、組織又は種子。
【請求項８１】
配列番号２０のヌクレオチド位置１４５２からヌクレオチド位置１６６３８ヌクレオチド配列と少なくとも９７、９８又は少なくとも９９％の配列同一性を有するヌクレオチド配列、又はその相補体、又は配列番号２０と少なくとも９７、９８又は少なくとも９９％の配列同一性を有するヌクレオチド配列、又はその相補体を含む核酸分子を自身のゲノム中に含み、そしてＥＥ−ＧＭ１又はＥＥ−ＧＭ２のヌクレオチド配列と少なくとも９７、９８又は少なくとも９９％の配列同一性を有するヌクレオチド配列、又はその相補体を含む核酸分子を自身のゲノム中に含む、ダイズ植物、植物細胞、組織又は種子であって、寄託番号ＮＣＩＭＢ４１６５８の下に寄託されているＥＥ−ＧＭ１を含むレファレンス種子、及び寄託番号ＮＣＩＭＢ４１６６０の下に寄託されているＥＥ−ＧＭ２を含むレファレンス種子、例えば、ＥＥ−ＧＭ１又はＥＥ−ＧＭ２のヌクレオチド配列が、それぞれ配列番号１２又は１３中の外来性ＤＮＡ配列又は配列番号１４又は１５中の外来性ＤＮＡ配列、又は、それぞれ配列番号１２の配列と配列番号１３の配列との間にある植物ゲノム中の外来性ＤＮＡ配列又は配列番号１４の配列と配列番号１５の配列との間にある植物ゲノム中の外来性ＤＮＡ配列を含むか、又はそれ自体である、ダイズ植物、植物細胞、組織又は種子。
【請求項８２】
配列番号１のヌクレオチド配列又はその相補体にハイブリダイズするか、配列番号２０のヌクレオチド位置１４５２からヌクレオチド位置１６６３８までのヌクレオチド配列又はその相補体にハイブリダイズするか、又は、配列番号２０のヌクレオチド配列又はその相補体にハイブリダイズする核酸分子を自身のゲノム内に含み、そしてＥＥ−ＧＭ１又はＥＥ−ＧＭ２のヌクレオチド配列又はその相補体にハイブリダイズする核酸分子を自身のゲノム内に含む、ダイズ植物、植物細胞、組織又は種子であって、寄託番号ＮＣＩＭＢ４１６５８の下に寄託されているＥＥ−ＧＭ１を含むレファレンス種子、及び寄託番号ＮＣＩＭＢ４１６６０の下に寄託されているＥＥ−ＧＭ２を含むレファレンス種子、例えば、ＥＥ−ＧＭ１又はＥＥ−ＧＭ２のヌクレオチド配列が、配列番号１２又は１３中の外来性ＤＮＡ配列又は配列番号１４又は１５中の外来性ＤＮＡ配列、又は、配列番号１２の配列と配列番号１３の配列との間にある植物ゲノム中の外来性ＤＮＡ配列又は配列番号１４の配列と配列番号１５の配列との間にある植物ゲノム中の外来性ＤＮＡ配列を含むか、又はそれ自体である、ダイズ植物、植物細胞、組織又は種子。
【請求項１】
生物学的試料中の優良イベントＥＥ−ＧＭ３及びＥＥ−ＧＭ１の同時存在を識別するための方法であって、方法がＥＥ−ＧＭ３の除草剤耐性遺伝子を含む外来性ＤＮＡの５’又は３’フランキング領域を特異的に認識する特異的プライマー又はプローブを用いたＥＥ−ＧＭ３特異的領域の検出、及び、ＥＥ−ＧＭ１の除草剤耐性遺伝子を含む外来性ＤＮＡの５’又は３’フランキング領域を特異的に認識する特異的プライマー又はプローブを用いたＥＥ−ＧＭ１特異的領域の検出を含む、上記方法。
【請求項２】
少なくとも２つのプライマーを用いた第１のポリメラーゼ連鎖反応、ただしここで、該プライマーの一方は、ＥＥ−ＧＭ３の除草剤耐性遺伝子を含む外来性ＤＮＡの５’フランキング領域、ここで該５’フランキング領域は配列番号２のヌクレオチド１からヌクレオチド１４５１までのヌクレオチド配列を含む、又は、ＥＥ−ＧＭ３の除草剤耐性遺伝子を含む外来性ＤＮＡの３’フランキング領域、ここで該３’フランキング領域は配列番号３のヌクレオチド２４１からヌクレオチド１４０８までの相補体のヌクレオチド配列を含む、を認識し、該プライマーの他方のプライマーは、配列番号２のヌクレオチド１４５２からヌクレオチド１８４３までの相補体のヌクレオチド配列又は配列番号３のヌクレオチド１からヌクレオチド２４０までのヌクレオチド配列を含むＥＥ−ＧＭ３の外来性ＤＮＡ内部の配列を認識するか、又は、該プライマーの他方のプライマーは、配列番号１のヌクレオチド配列又はその相補体を含むか又は配列番号２０のヌクレオチド位置１４５２からヌクレオチド位置１６６３８までのヌクレオチド配列又はその相補体を含むＥＥ−ＧＭ３の外来性ＤＮＡ内部の配列を認識する、を使用し、そして、少なくとも２つのプライマーを用いた第２のポリメラーゼ連鎖反応、ただしここで、該プライマーの一方は、ＥＥ−ＧＭ１の除草剤耐性遺伝子を含む外来性ＤＮＡの５’フランキング領域、ここで該５’フランキング領域は配列番号１２のヌクレオチド１からヌクレオチド２０９までのヌクレオチド配列を含む、又は、ＥＥ−ＧＭ１の除草剤耐性遺伝子を含む外来性ＤＮＡの３’フランキング領域、ここで該３’フランキング領域は配列番号１３のヌクレオチド５６９からヌクレオチド１０００までの相補体のヌクレオチド配列を含む、を認識し、該プライマーの他方のプライマーは、配列番号１２のヌクレオチド２１０からヌクレオチド７２０までの相補体のヌクレオチド配列又は配列番号１３のヌクレオチド１からヌクレオチド５６８までのヌクレオチド配列を含むＥＥ−ＧＭ１の外来性ＤＮＡ内部の配列を認識するか、又は、該プライマーの他方のプライマーは、配列番号１１のヌクレオチド配列又はその相補体を含むＥＥ−ＧＭ１の外来性ＤＮＡ内部の配列を認識する、を使用して該生物学的試料中に存在する核酸から５０〜１０００ｂｐの２つのＤＮＡフラグメントを増幅すること、ここで、該第１及び第２のポリメラーゼ反応は逐次的であっても又は同時であってもよい、を含む、請求項１記載の方法。
【請求項３】
ＥＥ−ＧＭ３の５’フランキング領域を認識する該プライマーが、配列番号２のヌクレオチド１からヌクレオチド１４５１までのヌクレオチド配列から選択される１７から２００個までの連続ヌクレオチドのヌクレオチド配列を含むか、又は、ＥＥ−ＧＭ３の３’フランキング領域を認識する該プライマーが、配列番号３のヌクレオチド２４１からヌクレオチド１４０８までの相補体のヌクレオチド配列から選択される１７から２００個までの連続ヌクレオチドのヌクレオチド配列を含み、そして、ＥＥ−ＧＭ３の外来性ＤＮＡ内部の配列を認識する該プライマーが、配列番号２のヌクレオチド１４５２からヌクレオチド１８４３までの相補体のヌクレオチド配列、又は配列番号３のヌクレオチド１からヌクレオチド２４０までのヌクレオチド配列、又は配列番号１のヌクレオチド配列又はその相補体、又は配列番号２０のヌクレオチド位置１４５２からヌクレオチド位置１６６３８までのヌクレオチド配列又はその相補体から選択される１７から２００個までの連続ヌクレオチドのヌクレオチド配列を含む、及び、ＥＥ−ＧＭ１の５’フランキング領域を認識する該プライマーが、配列番号１２のヌクレオチド１からヌクレオチド２０９までのヌクレオチド配列から選択される１７から２００個までの連続ヌクレオチドのヌクレオチド配列を含むか、又は、ＥＥ−ＧＭ３の３’フランキング領域を認識する該プライマーが、配列番号１３のヌクレオチド５６９からヌクレオチド１０００までの相補体のヌクレオチド配列から選択される１７から２００個までの連続ヌクレオチドのヌクレオチド配列を含み、そして、ＥＥ−ＧＭ１の外来性ＤＮＡ内部の配列を認識する該プライマーが、配列番号１２のヌクレオチド２１０からヌクレオチド７２０までの相補体のヌクレオチド配列、又は配列番号１３のヌクレオチド１からヌクレオチド５６８までのヌクレオチド配列、又は配列番号１１のヌクレオチド配列又はその相補体から選択される１７から２００個までの連続ヌクレオチドを含む、請求項２記載の方法。
【請求項４】
ＥＥ−ＧＭ３の５’フランキング領域を認識する該プライマーが、その３’最末端において、配列番号２のヌクレオチド１からヌクレオチド１４５１までのヌクレオチド配列から選択される少なくとも１７個の連続ヌクレオチドのヌクレオチド配列を含むか、又は、ＥＥ−ＧＭ３の３’フランキング領域を認識する該プライマーが、その３’最末端において、配列番号３のヌクレオチド２４１からヌクレオチド１４０８までの相補体のヌクレオチド配列から選択される少なくとも１７個の連続ヌクレオチドのヌクレオチド配列を含み、そして、ＥＥ−ＧＭ３の外来性ＤＮＡ内部の配列を認識する該プライマーが、その３’末端において、配列番号２のヌクレオチド１４５２からヌクレオチド１８４３までの相補体のヌクレオチド配列、又は配列番号３のヌクレオチド１からヌクレオチド２４０までのヌクレオチド配列、又は配列番号１のヌクレオチド配列又はその相補体、又は配列番号２０のヌクレオチド位置１４５２からヌクレオチド位置１６６３８までのヌクレオチド配列又はその相補体から選択される少なくとも１７個の連続ヌクレオチドを含む、及び、ＥＥ−ＧＭ１の５’フランキング領域を認識する該プライマーがその３’最末端において、配列番号１２のヌクレオチド１からヌクレオチド２０９までのヌクレオチド配列から選択される少なくとも１７個の連続ヌクレオチドのヌクレオチド配列を含むか、又は、ＥＥ−ＧＭ１の３’フランキング領域を認識する該プライマーがその３’最末端において、配列番号１３のヌクレオチド５６９からヌクレオチド１０００までの相補体のヌクレオチド配列から選択される少なくとも１７個の連続ヌクレオチドのヌクレオチド配列を含み、そして、ＥＥ−ＧＭ１の外来性ＤＮＡ内部の配列を認識する該プライマーが、その３’末端において、配列番号１２のヌクレオチド２１０からヌクレオチド７２０までの相補体のヌクレオチド配列、又は配列番号１３のヌクレオチド１からヌクレオチド５６８までのヌクレオチド配列、又は配列番号１１のヌクレオチド配列又はその相補体から選択される少なくとも１７個の連続ヌクレオチドを含む、請求項２記載の方法。
【請求項５】
前記ＥＥ−ＧＭ３特異的プライマーがそれぞれ配列番号５及び配列番号４の配列、又は、それぞれ配列番号５及び配列番号７の配列を含み、そして、前記ＥＥ−ＧＭ１特異的プライマーがそれぞれ配列番号１６及び配列番号１７の配列を含む、請求項４記載の方法。
【請求項６】
ＥＥ−ＧＭ３ＰＣＲ識別プロトコルを用いて約２６３又は約７０６ｂｐのＥＥ−ＧＭ３特異的フラグメント及び約１８３ｂｐのＥＥ−ＧＭ１特異フラグメントを増幅することを包含する、請求項５記載の方法。
【請求項７】
生物学的試料中の優良イベントＥＥ−ＧＭ３及び優良イベントＥＥ−ＧＭ１の同時存在を識別するためのキットであって、キットが、ＥＥ−ＧＭ３の除草剤耐性遺伝子を含む外来性ＤＮＡの５’フランキング領域を認識する１つのプライマー、ここで該５’フランキング領域は配列番号２のヌクレオチド１からヌクレオチド１４５１までのヌクレオチド配列を含む、又は、ＥＥ−ＧＭ３の除草剤耐性遺伝子を含む外来性ＤＮＡの３’フランキング領域を認識する１つのプライマー、ここで該３’フランキング領域は配列番号３のヌクレオチド２４１からヌクレオチド１４０８までの相補体のヌクレオチド配列を含む、及び、ＥＥ−ＧＭ３の除草剤耐性遺伝子を含む外来性ＤＮＡ内部の配列を認識する１つのプライマー、ここで該外来性ＤＮＡは配列番号２のヌクレオチド１４５２からヌクレオチド１８４３までの相補体のヌクレオチド配列、又は配列番号３のヌクレオチド１からヌクレオチド２４０までのヌクレオチド配列、又は配列番号１のヌクレオチド配列又はその相補体、又は配列番号２０のヌクレオチド位置１４５２からヌクレオチド位置１６６３８までのヌクレオチド配列又はその相補体を含む、を含み、そして、該キットが更に、ＥＥ−ＧＭ１の除草剤耐性遺伝子を含む外来性ＤＮＡの５’フランキング領域を認識する１つのプライマー、ここで該５’フランキング領域は配列番号１２のヌクレオチド１からヌクレオチド２０９までのヌクレオチド配列を含む、又は、ＥＥ−ＧＭ１の除草剤耐性遺伝子を含む外来性ＤＮＡの３’フランキング領域を認識する１つのプライマー、ここで該３’フランキング領域は配列番号１３のヌクレオチド５６９からヌクレオチド１０００までの相補体のヌクレオチド配列を含む、及び、ＥＥ−ＧＭ１の除草剤耐性遺伝子を含む外来性ＤＮＡ内部の配列を認識する１つのプライマー、ここで該外来性ＤＮＡは配列番号１２のヌクレオチド２１０からヌクレオチド７２０までの相補体のヌクレオチド配列、又は配列番号１３のヌクレオチド１からヌクレオチド５６８までのヌクレオチド配列、又は配列番号１１のヌクレオチド配列又はその相補体を含む、を含む、上記キット。
【請求項８】
ＥＥ−ＧＭ３の５’フランキング領域を認識する該プライマーが、配列番号２のヌクレオチド１からヌクレオチド１４５１までのヌクレオチド配列から選択される１７から２００個までの連続ヌクレオチドのヌクレオチド配列を含むか、又は、ＥＥ−ＧＭ３の３’フランキング領域を認識する該プライマーが、配列番号３のヌクレオチド２４１からヌクレオチド１４０８までの相補体のヌクレオチド配列から選択される１７から２００個までの連続ヌクレオチドのヌクレオチド配列を含み、そして、ＥＥ−ＧＭ３の外来性ＤＮＡ内部の配列を認識する該プライマーが、配列番号２のヌクレオチド１４５２からヌクレオチド１８４３までの相補体のヌクレオチド配列、又は配列番号３のヌクレオチド１からヌクレオチド２４０までのヌクレオチド配列、又は配列番号１のヌクレオチド配列又はその相補体、又は配列番号２０のヌクレオチド位置１４５２からヌクレオチド位置１６６３８までのヌクレオチド配列又はその相補体から選択される１７から２００個までの連続ヌクレオチドを含む、及び、ＥＥ−ＧＭ１の５’フランキング領域を認識する該プライマーが、配列番号１２のヌクレオチド１からヌクレオチド２０９までのヌクレオチド配列から選択される１７から２００個までの連続ヌクレオチドのヌクレオチド配列を含むか、又は、ＥＥ−ＧＭ１の３’フランキング領域を認識する該プライマーが、配列番号１３のヌクレオチド５６９からヌクレオチド１０００までの相補体のヌクレオチド配列から選択される１７から２００個までの連続ヌクレオチドのヌクレオチド配列を含み、そして、ＥＥ−ＧＭ１の外来性ＤＮＡ内部の配列を認識する該プライマーが、配列番号１２のヌクレオチド２１０からヌクレオチド７２０までの相補体のヌクレオチド配列、又は配列番号１３のヌクレオチド１からヌクレオチド５６８までのヌクレオチド配列、又は配列番号１１のヌクレオチド配列又はその相補体から選択される１７から２００個までの連続ヌクレオチドを含む、請求項７記載のキット。
【請求項９】
ＥＥ−ＧＭ３の５’フランキング領域を認識する該プライマーが、その３’最末端において、配列番号２のヌクレオチド１からヌクレオチド１４５１までのヌクレオチド配列から選択される少なくとも１７個の連続ヌクレオチドのヌクレオチド配列を含むか、又は、ＥＥ−ＧＭ３の３’フランキング領域を認識する該プライマーが、その３’最末端において、配列番号３のヌクレオチド２４１からヌクレオチド１４０８までの相補体のヌクレオチド配列から選択される少なくとも１７個の連続ヌクレオチドのヌクレオチド配列を含み、そして、ＥＥ−ＧＭ３の外来性ＤＮＡ内部の配列を認識する該プライマーが、その３’末端において、配列番号２のヌクレオチド１４５２からヌクレオチド１８４３までの相補体のヌクレオチド配列、又は配列番号３のヌクレオチド１からヌクレオチド２４０までのヌクレオチド配列、又は配列番号１のヌクレオチド配列又はその相補体、又は配列番号２０のヌクレオチド位置１４５２からヌクレオチド位置１６６３８までのヌクレオチド配列又はその相補体から選択される少なくとも１７個の連続ヌクレオチドを含む、及び、ＥＥ−ＧＭ１の５’フランキング領域を認識する該プライマーが、その３’最末端において、配列番号１２のヌクレオチド１からヌクレオチド２０９までのヌクレオチド配列から選択される少なくとも１７個の連続ヌクレオチドのヌクレオチド配列を含むか、又は、ＥＥ−ＧＭ１の３’フランキング領域を認識する該プライマーがその３’最末端において、配列番号１３のヌクレオチド５６９からヌクレオチド１０００までの相補体のヌクレオチド配列から選択される少なくとも１７個の連続ヌクレオチドのヌクレオチド配列を含み、そして、ＥＥ−ＧＭ１の外来性ＤＮＡ内部の配列を認識する該プライマーが、その３’末端において、配列番号１２のヌクレオチド２１０からヌクレオチド７２０までの相補体のヌクレオチド配列、又は配列番号１３のヌクレオチド１からヌクレオチド５６８までのヌクレオチド配列、又は配列番号１１のヌクレオチド配列又はその相補体から選択される少なくとも１７個の連続ヌクレオチドを含む、請求項７記載のキット。
【請求項１０】
配列番号４の配列を含むプライマー及び配列番号５の配列を含むプライマーを含むか、又は配列番号５の配列を含むプライマーおよび配列番号７の配列を含むプライマーを含み、そして更に、配列番号１６の配列を含むプライマー及び配列番号１７の配列を含むプライマーを含む、請求項７記載のキット。
【請求項１１】
プライマー対であって、該第１のプライマーは、最適な検出条件下においてＥＥ−ＧＭ３の除草剤耐性遺伝子を含む外来性ＤＮＡの５’又は３’フランキング領域内部の配列を特異的に認識する配列、ここで該５’フランキング領域は配列番号２のヌクレオチド１からヌクレオチド１４５１までのヌクレオチド配列を含みそして該３’フランキング領域は配列番号３のヌクレオチド２４１からヌクレオチド１４０８までの相補体のヌクレオチド配列を含む、を含み、そして、該第２のプライマーは、最適な検出条件下においてＥＥ−ＧＭ１の除草剤耐性遺伝子を含む外来性ＤＮＡの５’又は３’フランキング領域内部の配列を特異的に認識する配列、ここで該５’フランキング領域は配列番号１２のヌクレオチド１からヌクレオチド２０９までのヌクレオチド配列を含みそして該３’フランキング領域は配列番号１３のヌクレオチド５９６からヌクレオチド１０００までの相補体のヌクレオチド配列を含む、を含む上記プライマー対。
【請求項１２】
該第１のプライマーが、配列番号２のヌクレオチド１からヌクレオチド１４５１までのヌクレオチド配列から選択される１７から２００個までの連続ヌクレオチドのヌクレオチド配列又は配列番号３のヌクレオチド２４１からヌクレオチド１４０８までの相補体のヌクレオチド配列から選択される１７から２００個までの連続ヌクレオチドのヌクレオチド配列を含み、そして、該第２のプライマーが、配列番号１２のヌクレオチド１からヌクレオチド２０９までのヌクレオチド配列から選択される１７から２００個までの連続ヌクレオチドのヌクレオチド配列又は配列番号１３のヌクレオチド５６９からヌクレオチド１０００までの相補体のヌクレオチド配列から選択される１７から２００個までの連続ヌクレオチドのヌクレオチド配列を含む、請求項１１記載のプライマー対。
【請求項１３】
該第１のプライマーが、その３’最末端において、配列番号２のヌクレオチド１からヌクレオチド１４５１までのヌクレオチド配列から選択される少なくとも１７個の連続ヌクレオチドのヌクレオチド配列又は配列番号３のヌクレオチド２４１からヌクレオチド１４０８までの相補体のヌクレオチド配列から選択される少なくとも１７個の連続ヌクレオチドのヌクレオチド配列を含み、そして、該第２のプライマーが、その３’最末端において、配列番号１２のヌクレオチド１からヌクレオチド２０９までのヌクレオチド配列から選択される少なくとも１７個の連続ヌクレオチドのヌクレオチド配列又は配列番号１３のヌクレオチド５６９からヌクレオチド１０００までの相補体のヌクレオチド配列から選択される少なくとも１７個の連続ヌクレオチドのヌクレオチド配列を含む、請求項１１記載のプライマー対。
【請求項１４】
第１のプライマーが配列番号５の配列をその３’最末端に含み、そして第２のプライマーが配列番号１６の配列をその３’最末端に含む、プライマー対。
【請求項１５】
下記の４つのプライマー：
配列番号５の配列をその３’最末端に含む第１のプライマー；
配列番号４の配列をその３’最末端に含む第２のプライマー；
配列番号１６の配列をその３’最末端に含む第３のプライマー；及び、
配列番号１７の配列をその３’最末端に含む第４のプライマー；
を含むセット。
【請求項１６】
ＥＥ−ＧＭ３に対する第１の特異的プローブに、そして、ＥＥ−ＧＭ１に対する第２の特異的プローブに、生物学的試料の核酸をハイブリダイズさせることを含む、請求項１記載の方法。
【請求項１７】
該第１の特異的プローブの配列が、ＥＥ−ＧＭ３の５’フランキング配列又は３’フランキング配列及びそれに隣接する外来性ＤＮＡの配列の部分を含む配列と少なくとも８０％配列同一性を有し、そして、該第２の特異的プローブの配列が、ＥＥ−ＧＭ１の５’フランキング配列又は３’フランキング配列及びそれに隣接する外来性ＤＮＡの配列の部分を含む配列と少なくとも８０％配列同一性を有する、請求項１６記載の方法。
【請求項１８】
該第１の特異的プローブの配列が配列番号２のヌクレオチド１４３１〜１４７２又は配列番号３のヌクレオチド２２０〜２６１、又は該配列の相補体と少なくとも８０％配列同一性を有し、そして、該第２の特異的プローブの配列が配列番号１２のヌクレオチド１９９〜２２０又は配列番号１３のヌクレオチド５５８〜５７９、又は該配列の相補体と少なくとも８０％配列同一性を有する、請求項１７記載の方法。
【請求項１９】
生物学的試料中の優良イベントＥＥ−ＧＭ３及び優良イベントＥＥ−ＧＭ１の同時存在を識別するためのキットであって、該キットがＥＥ−ＧＭ３の特異的領域に特異的にハイブリダイズすることができる第１の特異的プローブ、及び、ＥＥ−ＧＭ１の特異的領域に特異的にハイブリダイズすることができる第２の特異的プローブを含む、上記キット。
【請求項２０】
該第１の特異的プローブの配列がＥＥ−ＧＭ３の除草剤耐性遺伝子を含む外来性ＤＮＡの５’フランキング配列又は３’フランキング配列及びそれに隣接する外来性ＤＮＡの配列の部分を含む配列と少なくとも８０％配列同一性を有し、そして、該第２の特異的プローブの配列がＥＥ−ＧＭ１の除草剤耐性遺伝子を含む外来性ＤＮＡの５’フランキング配列又は３’フランキング配列及びそれに隣接する外来性ＤＮＡの配列の部分を含む配列と少なくとも８０％配列同一性を有する、請求項１９記載のキット。
【請求項２１】
該第１の特異的プローブの配列が配列番号２のヌクレオチド１４４１〜１４６２又は配列番号３のヌクレオチド２３０〜２５１、又は該配列の相補体と少なくとも８０％配列同一性を有するヌクレオチド配列を含み、そして、該第２の特異的プローブの配列が配列番号１２のヌクレオチド１９９〜２２０又は配列番号１３のヌクレオチド５５８〜５７９までの、又は該配列の相補体と少なくとも８０％配列同一性を有する、請求項２０記載のキット。
【請求項２２】
生物学的試料中の優良イベントＥＥ−ＧＭ３及び優良イベントＥＥ−ＧＭ１の同時存在の識別のための特異的プローブの対。
【請求項２３】
ＥＥ−ＧＭ３の除草剤耐性遺伝子を含む外来性ＤＮＡの５’フランキング配列又は３’フランキング配列及びそれに隣接する外来性ＤＮＡの配列の部分を含む配列又はその相補体と少なくとも８０％配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む第１のプローブ、及び、ＥＥ−ＧＭ１の除草剤耐性遺伝子を含む外来性ＤＮＡの５’フランキング配列又は３’フランキング配列及びそれに隣接する外来性ＤＮＡの配列の部分の配列又はその相補体と少なくとも８０％配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む第２のプローブを含む、請求項２２記載のプローブの対。
【請求項２４】
第１のプローブが配列番号２のヌクレオチド１４４１〜１４６２又は配列番号３のヌクレオチド２３０〜２５１、又は該配列の相補体と少なくとも８０％配列同一性を有し、そして、第２のプローブが配列番号１２のヌクレオチド１９９〜２２０又は配列番号１３のヌクレオチド５５８〜５７９、又は該配列の相補体と少なくとも８０％配列同一性を有する、請求項２３記載のプローブの対。
【請求項２５】
配列番号２のヌクレオチド１４４１〜１４６２又は配列番号３のヌクレオチド２３０〜２５１、又は該配列の相補体と本質的に類似のヌクレオチド配列を含む配列を有する第１のプローブ、及び、配列番号１２のヌクレオチド１９９〜２２０又は配列番号１３のヌクレオチド５５８〜５７９、又は該配列の相補体と本質的に類似のヌクレオチド配列を有する第２のプローブを含む、生物学的試料中の優良イベントＥＥ−ＧＭ３及びＥＥ−ＧＭ１の同時存在を識別するための特異的プローブのセット。
【請求項２６】
種子の純度を確認するための方法であって、方法が、種子試料中において、ＥＥ−ＧＭ３の除草剤耐性遺伝子を含む外来性ＤＮＡの５’又は３’フランキング領域を特異的に認識する特異的プライマー又はプローブによるＥＥ−ＧＭ３特異的領域の検出、及び、ＥＥ−ＧＭ１の除草剤耐性遺伝子を含む外来性ＤＮＡの５’又は３’フランキング領域を特異的に認識する特異的プライマー又はプローブによるＥＥ−ＧＭ１特異的領域の検出、を含む上記方法。
【請求項２７】
優良イベントＥＥ−ＧＭ３及びＥＥ−ＧＭ１の存在に関して種子をスクリーニングするための方法であって、方法が、種子ロットの試料中において、ＥＥ−ＧＭ３の除草剤耐性遺伝子を含む外来性ＤＮＡの５’又は３’フランキング領域を特異的に認識する特異的プライマー又はプローブによるＥＥ−ＧＭ３特異的領域の検出、及び、ＥＥ−ＧＭ１の除草剤耐性遺伝子を含む外来性ＤＮＡの５’又は３’フランキング領域を特異的に認識する特異的プライマー又はプローブによるＥＥ−ＧＭ１特異的領域の検出、を含む上記方法。
【請求項２８】
標的核酸配列の再利用を介してプローブ：標的核酸の比を増幅する実質的に相補な標識された核酸プローブとのハイブリダイゼーションを介して生物学的試料中の優良イベントＥＥ−ＧＭ３及びＥＥ−ＧＭ１の存在を検出するための方法であって、該方法が下記工程：
ａ）該標的核酸配列を、配列番号２のヌクレオチド１４５２からヌクレオチド１４６９までのヌクレオチド配列又はその相補体を含む第１の核酸オリゴヌクレオチド、又は、配列番号３のヌクレオチド２２３からヌクレオチド２４０までのヌクレオチド配列又はその相補体を含む該第１の核酸オリゴヌクレオチドにハイブリダイズさせること；
ｂ）該標的核酸配列を配列番号２のヌクレオチド１４３４からヌクレオチド１４５１までのヌクレオチド配列又はその相補体を含む第２の核酸オリゴヌクレオチド、又は配列番号３のヌクレオチド２４１からヌクレオチド２５８までのヌクレオチド配列又はその相補体を含む該標識された核酸プローブにハイブリダイズさせること、ここで、該第１及び第２のオリゴヌクレオチドはヌクレオチドの少なくとも１つで重複しており、そしてここで該第１又は該第２のオリゴヌクレオチドの何れかが標識されて該標識された核酸プローブとなるものである；
ｃ）選択的プローブ切断を起こすことによりデュプレックス解離をもたらす酵素によりプローブ:標的核酸配列デュプレックス内部の標識されたプローブのみを切断し、標的配列は未損傷のままとすること；
ｄ）工程（ａ）〜（ｃ）を反復することによる標的核酸配列を再利用すること；
ｅ)切断された標識されたプローブを検出することにより、該標的核酸配列の存在を決定すること；及び、
ｆ）該標的核酸配列を、配列番号１２のヌクレオチド２１０からヌクレオチド２２７までのヌクレオチド配列又はその相補体を含む第３の核酸オリゴヌクレオチド、又は、配列番号１３のヌクレオチド５６１からヌクレオチド５６８までのヌクレオチド配列又はその相補体を含む該第３の核酸オリゴヌクレオチドにハイブリダイズさせること；
ｇ）該標的核酸配列を配列番号１２のヌクレオチド１９２からヌクレオチド２０９までのヌクレオチド配列又はその相補体を含む第４の核酸オリゴヌクレオチド、又は配列番号１３のヌクレオチド５６９からヌクレオチド５８６までのヌクレオチド配列又はその相補体を含む該標識された核酸プローブにハイブリダイズさせること、ここで、該第３及び第４のオリゴヌクレオチドはヌクレオチドの少なくとも１つで重複しており、そしてここで該第３又は該第４のオリゴヌクレオチドの何れかが標識されて該標識された核酸プローブとなるものである；
ｈ）選択的プローブ切断を起こすことによりデュプレックス解離をもたらす酵素によりプローブ:標的核酸配列デュプレックス内部の標識されたプローブのみを切断し、標的配列は未損傷のままとすること；
ｉ）工程（ｆ）〜（ｈ）を反復することによる標的核酸配列を再利用すること；及び
ｊ)切断された標識されたプローブを検出することにより、該標的核酸配列の存在を決定すること；
を含む上記方法。
【請求項２９】
各々がそのゲノム内に優良イベントＥＥ−ＧＭ３及び優良イベントＥＥ−ＧＭ１を含むトランスジェニックダイズ植物、又はその細胞、部分、組織、種子又は子孫であって、該イベントＥＥ−ＧＭ３を含むレファレンス種子が寄託番号ＮＣＩＭＢ４１６５９の下にＮＣＩＭＢに寄託されており、そして、該イベントＥＥ−ＧＭ１を含むレファレンス種子が寄託番号ＮＣＩＭＢ４１６５８の下にＮＣＩＭＢに寄託されているか、又は、自身のゲノム内に優良イベントＥＥ−ＧＭ３及び優良イベントＥＥ−ＧＭ１を含むレファレンス種子が寄託番号ＰＴＡ−１１０４１の下にＡＴＣＣに寄託されている、上記トランスジェニックダイズ植物、又はその細胞、部分、組織、種子又は子孫。
【請求項３０】
ゲノムＤＮＡを、それぞれが配列番号４及び配列番号５のヌクレオチド配列を含む２つのプライマーでＥＥ−ＧＭ３に関する優良イベント識別プロトコルを用いて分析した場合に、約２６３ｂｐのＤＮＡフラグメントを与え、そして、ゲノムＤＮＡを、それぞれが配列番号１６及び配列番号１７のヌクレオチド配列を含む２つのプライマーでＥＥ−ＧＭ１に関する優良イベント識別プロトコルを用いて分析した場合に、約１８３ｂｐのＤＮＡフラグメントを与える、請求項２９記載のトランスジェニックダイズ植物、種子、細胞、組織、部分又は子孫。
【請求項３１】
自身のゲノム内に優良イベントＥＥ−ＧＭ３及び優良イベントＥＥ−ＧＭ１を各々含むダイズ植物、植物の部分、又はその種子、細胞又は組織であって、該ダイズ植物は、寄託番号ＮＣＩＭＢ４１６５９の下にＮＣＩＭＢに寄託された種子から生育させたダイズ植物の増殖及び／又は繁殖により得ることができる優良イベントＥＥ−ＧＭ３を含むダイズ植物を、寄託番号ＮＣＩＭＢ４１６５８の下にＮＣＩＭＢに寄託された種子から生育させたダイズ植物の増殖及び／又は繁殖により得ることができる優良イベントＥＥ−ＧＭ１をそのゲノム内に含むダイズ植物と交雑させることにより得られるか、又は、該ダイズ植物はアクセッション番号ＰＴＡ−１１０４１の下にＡＴＣＣに寄託された種子から生育させたダイズ植物の増殖及び／又は繁殖により得ることができる、上記ダイズ植物、植物の部分、又はその種子、細胞又は組織。
【請求項３２】
優良イベントＥＥ−ＧＭ３及びＥＥ−ＧＭ１を含むダイズ種子であって、イベントＥＥ−ＧＭ３を含むレファレンス種子が寄託番号ＮＣＩＭＢ４１６５９の下にＮＣＩＭＢに寄託されており、そしてイベントＥＥ−ＧＭ１を含むレファレンス種子が寄託番号ＮＣＩＭＢ４１６５８の下にＮＣＩＭＢに寄託されており、そしてイベントＥＥ−ＧＭ３及びＥＥ−ＧＭ１含むレファレンス種子がアクセッション番号ＰＴＡ−１１０４１の下にＡＴＣＣに寄託されている、上記ダイズ種子。
【請求項３３】
請求項３２記載の種子から得ることができる優良イベントＥＥ−ＧＭ３及びＥＥ−ＧＭ１を含むトランスジェニックダイズ植物、植物の部分、細胞又は組織。
【請求項３４】
請求項２９〜３３の何れか１項に記載の植物を別のダイズ植物と交雑させること、及び、該交雑から得られた種子を植栽することを含む、優良イベントＥＥ−ＧＭ３及びＥＥ−ＧＭ１を含むダイズ植物又は種子を生産するための方法。
【請求項３５】
優良イベントＥＥ−ＧＭ３及びＥＥ−ＧＭ１を含むダイズゲノムＤＮＡ。
【請求項３６】
第１の核酸分子が配列番号２のヌクレオチド１４４１〜ヌクレオチド１４５２又は配列番号３のヌクレオチド２３０〜ヌクレオチド２５１又は該配列の相補体に本質的に類似のヌクレオチド配列を含み、そして、第２の核酸分子が配列番号１２のヌクレオチド１９９〜ヌクレオチド２２０又は配列番号１３のヌクレオチド５５８〜ヌクレオチド５７９又は該配列の相補体に本質的に類似のヌクレオチド配列を含む、単離された核酸分子の対。
【請求項３７】
第１の核酸分子が配列番号２のヌクレオチド１４３１〜ヌクレオチド１４６２又は配列番号３のヌクレオチド２２０〜２６１又は該配列の相補体に本質的に類似のヌクレオチド配列を含み、そして、第２の核酸分子が配列番号１２のヌクレオチド１８９〜ヌクレオチド２３０又は配列番号１３のヌクレオチド５４８〜ヌクレオチド５８９又は該配列の相補体に本質的に類似のヌクレオチド配列を含む、請求項３６記載の単離された核酸分子の対。
【請求項３８】
下記のヌクレオチド配列：
ａ）配列番号２のヌクレオチド１から１４５１までのヌクレオチド配列；
ｂ）配列番号１のヌクレオチド６７６０からヌクレオチド６９５８までのヌクレオチド配列の相補体のヌクレオチド配列；
ｃ）配列番号１のヌクレオチド６８７４からヌクレオチド７２９８までのヌクレオチド配列：
ｄ）配列番号１のヌクレオチド７からヌクレオチド７２９１までのヌクレオチド配列；
ｅ）配列番号１のヌクレオチド１２からヌクレオチド７２６５までのヌクレオチド配列；
ｆ）配列番号３のヌクレオチド２１７からヌクレオチド２４０までのヌクレオチド配列；及び、
ｇ）配列番号３のヌクレオチド２４１からヌクレオチド１４０８までのヌクレオチド配列；
を順次自身のゲノム内に含み、そして、以下の配列：
ｈ）配列番号１２のヌクレオチド１〜２０９までのヌクレオチド配列；
ｉ）配列番号１１のヌクレオチド３４０からヌクレオチド３４６１までのヌクレオチド配列；
ｊ）配列番号１１のヌクレオチド１からヌクレオチド３３６までのヌクレオチド配列の相補体のヌクレオチド配列；
ｋ）配列番号１１のヌクレオチド３４６２からヌクレオチド４０７６までのヌクレオチド配列の相補体のヌクレオチド配列；
ｌ）配列番号１１のヌクレオチド３３７からヌクレオチド３０４３までのヌクレオチド配列；
ｍ）配列番号１３のヌクレオチド５５９からヌクレオチド５６８までのヌクレオチド配列；及び、
ｎ）配列番号１３のヌクレオチド５６９からヌクレオチド１０００までのヌクレオチド配列；
を順次さらに含むダイズ植物。
【請求項３９】
下記のヌクレオチド配列：
ａ）配列番号２のヌクレオチド１から１４５１までのヌクレオチド配列；
ｂ）配列番号１のヌクレオチド６７６０からヌクレオチド６９５８までのヌクレオチド配列の相補体のヌクレオチド配列；
ｃ）配列番号１のヌクレオチド６８７４からヌクレオチド７２９８までのヌクレオチド配列：
ｄ）配列番号１のヌクレオチド７からヌクレオチド７２９１までのヌクレオチド配列；
ｅ）配列番号１のヌクレオチド１２からヌクレオチド７２６５までのヌクレオチド配列；
ｆ）配列番号３のヌクレオチド２１７からヌクレオチド２４０までのヌクレオチド配列；及び、
ｇ）配列番号３のヌクレオチド２４１からヌクレオチド１４０８までのヌクレオチド配列；
を順次含み、そして、以下の配列：
ｈ）配列番号１２のヌクレオチド１から２０９までのヌクレオチド配列；
ｉ）配列番号１１のヌクレオチド３４０からヌクレオチド３４６１までのヌクレオチド配列；
ｊ）配列番号１１のヌクレオチド１からヌクレオチド３３６までのヌクレオチド配列の相補体のヌクレオチド配列；
ｋ）配列番号１１のヌクレオチド３４６２からヌクレオチド４０７６までのヌクレオチド配列の相補体のヌクレオチド配列；
ｌ）配列番号１１のヌクレオチド３３７からヌクレオチド３０４３までのヌクレオチド配列；
ｍ）配列番号１３のヌクレオチド５５９からヌクレオチド５６８までのヌクレオチド配列；及び、
ｎ）配列番号１３のヌクレオチド５６９からヌクレオチド１０００までのヌクレオチド配列；
を順次さらに含むＤＮＡ分子。
【請求項４０】
生物学的試料中の優良イベントＥＥ−ＧＭ３及びＥＥ−ＧＭ２の同時存在を識別するための方法であって、方法がＥＥ−ＧＭ３の除草剤耐性遺伝子を含む外来性ＤＮＡの５’又は３’フランキング領域を特異的に認識する特異的プライマー又はプローブを用いたＥＥ−ＧＭ３特異的領域の検出、及び、ＥＥ−ＧＭ２の除草剤耐性遺伝子を含む外来性ＤＮＡの５’又は３’フランキング領域を特異的に認識する特異的プライマー又はプローブを用いたＥＥ−ＧＭ２特異的領域の検出を含む、上記方法。
【請求項４１】
少なくとも２つのプライマーを用いた第１のポリメラーゼ連鎖反応、ただしここで、該プライマーの一方は、ＥＥ−ＧＭ３の除草剤耐性遺伝子を含む外来性ＤＮＡの５’フランキング領域、ここで該５’フランキング領域は配列番号２のヌクレオチド１からヌクレオチド１４５１までのヌクレオチド配列を含む、又は、ＥＥ−ＧＭ３の除草剤耐性遺伝子を含む外来性ＤＮＡの３’フランキング領域、ここで該３’フランキング領域は配列番号３のヌクレオチド２４１からヌクレオチド１４０８までの相補体のヌクレオチド配列を含む、を認識し、該プライマーの他方のプライマーは、配列番号２のヌクレオチド１４５２からヌクレオチド１８４３までの相補体のヌクレオチド配列又は配列番号３のヌクレオチド１からヌクレオチド２４０までのヌクレオチド配列を含むＥＥ−ＧＭ３の外来性ＤＮＡ内部の配列を認識するか、又は、該プライマーの他方のプライマーは、配列番号１のヌクレオチド配列又はその相補体を含むか又は配列番号２０のヌクレオチド位置１４５２からヌクレオチド位置１６６３８までのヌクレオチド配列又はその相補体を含むＥＥ−ＧＭ３の外来性ＤＮＡ内部の配列を認識する、を使用し、そして、少なくとも２つのプライマーを用いた第２のポリメラーゼ連鎖反応、ただしここで、該プライマーの一方は、ＥＥ−ＧＭ２の除草剤耐性遺伝子を含む外来性ＤＮＡの５’フランキング領域、ここで該５’フランキング領域は配列番号１４のヌクレオチド１からヌクレオチド３１１までのヌクレオチド配列を含む、又は、ＥＥ−ＧＭ２中に除草剤耐性遺伝子を含む外来性ＤＮＡの３’フランキング領域、ここで該３’フランキング領域は配列番号１５のヌクレオチド５０８からヌクレオチド１８８０までの相補体のヌクレオチド配列を含む、を認識し、該プライマーの他方のプライマーは、配列番号１４のヌクレオチド３１２からヌクレオチド８１０までの相補体のヌクレオチド配列又は配列番号１５のヌクレオチド１からヌクレオチド５０７までのヌクレオチド配列を含むＥＥ−ＧＭ２の外来性ＤＮＡ内部の配列を認識するか、又は、該プライマーの他方のプライマーは、配列番号１１のヌクレオチド配列又はその相補体を含むＥＥ−ＧＭ２の外来性ＤＮＡ内部の配列を認識する、を使用して該生物学的試料中に存在する核酸〜５０〜１０００ｂｐの２つのＤＮＡフラグメントを増幅すること、ここで、該第１及び第２のポリメラーゼ反応は逐次的であっても又は同時であってもよい、を含む、請求項４０記載の方法。
【請求項４２】
ＥＥ−ＧＭ３の５’フランキング領域を認識する該プライマーが、配列番号２のヌクレオチド１からヌクレオチド１４５１までのヌクレオチド配列から選択される１７から２００個までの連続ヌクレオチドのヌクレオチド配列を含むか、又は、ＥＥ−ＧＭ３の３’フランキング領域を認識する該プライマーが、ヌクレオチド２４１からヌクレオチド１４０８までの配列番号３の相補体のヌクレオチド配列から選択される１７から２００個までの連続ヌクレオチドのヌクレオチド配列を含み、そして、ＥＥ−ＧＭ３の外来性ＤＮＡ内部の配列を認識する該プライマーが、配列番号２のヌクレオチド１４５２からヌクレオチド１８４３までの相補体のヌクレオチド配列、又は配列番号３のヌクレオチド１からヌクレオチド２４０までのヌクレオチド配列、又は配列番号１のヌクレオチド配列又はその相補体、又は配列番号２０のヌクレオチド位置１４５２からヌクレオチド位置１６６３８までのヌクレオチド配列又はその相補体から選択される連続ヌクレオチド１７から２００個までを含む、及び、ＥＥ−ＧＭ２の５’フランキング領域を認識する該プライマーが、配列番号１４のヌクレオチド１からヌクレオチド３１１までのヌクレオチド配列から選択される１７から２００個までの連続ヌクレオチドのヌクレオチド配列を含むか、又は、ＥＥ−ＧＭ３の３’フランキング領域を認識する該プライマーが、配列番号１５のヌクレオチド５０８からヌクレオチド１８８０までの相補体のヌクレオチド配列から選択される１７から２００個までの連続ヌクレオチドのヌクレオチド配列を含み、そして、ＥＥ−ＧＭ２の外来性ＤＮＡ内部の配列を認識する該プライマーが、配列番号１４のヌクレオチド３１２からヌクレオチド８１０までの相補体のヌクレオチド配列、又は配列番号１５のヌクレオチド１からヌクレオチド５０７までのヌクレオチド配列、又は配列番号１１のヌクレオチド配列又はその相補体から選択される１７から２００個までの連続ヌクレオチドを含む、請求項４１記載の方法。
【請求項４３】
ＥＥ−ＧＭ３の５’フランキング領域を認識する該プライマーが、その３’最末端において、配列番号２のヌクレオチド１からヌクレオチド１４５１までのヌクレオチド配列から選択される少なくとも１７個の連続ヌクレオチドのヌクレオチド配列を含むか、又は、ＥＥ−ＧＭ３の３’フランキング領域を認識する該プライマーが、その３’最末端において、ヌクレオチド２４１からヌクレオチド１４０８までの配列番号３の相補体のヌクレオチド配列から選択される少なくとも１７個の連続ヌクレオチドのヌクレオチド配列を含み、そして、ＥＥ−ＧＭ３の外来性ＤＮＡ内部の配列を認識する該プライマーが、その３’最末端において、配列番号２のヌクレオチド１４５２からヌクレオチド１８４３までの相補体のヌクレオチド配列、又は配列番号３のヌクレオチド１からヌクレオチド２４０までのヌクレオチド配列、又は配列番号１のヌクレオチド配列又はその相補体、又は配列番号２０のヌクレオチド位置１４５２からヌクレオチド位置１６６３８までのヌクレオチド配列又はその相補体から選択される少なくとも１７個の連続ヌクレオチドのヌクレオチド配列を含む、及び、ＥＥ−ＧＭ２の５’フランキング領域を認識する該プライマーが、その３’最末端において、配列番号１４のヌクレオチド１からヌクレオチド３１１までのヌクレオチド配列から選択される少なくとも１７個の連続ヌクレオチドのヌクレオチド配列を含むか、又は、ＥＥ−ＧＭ２の３’フランキング領域を認識する該プライマーが、その３’最末端において、配列番号１５のヌクレオチド５０８からヌクレオチド１８８０までの相補体のヌクレオチド配列から選択される少なくとも１７個の連続ヌクレオチドのヌクレオチド配列を含み、そして、ＥＥ−ＧＭ２の外来性ＤＮＡ内部の配列を認識する該プライマーが、その３’末端において、配列番号１４のヌクレオチド３１２からヌクレオチド８１０までの相補体のヌクレオチド配列、又は配列番号１５のヌクレオチド１からヌクレオチド５０７までのヌクレオチド配列、又は配列番号１１のヌクレオチド配列又はその相補体から選択される少なくとも１７個の連続ヌクレオチドを含む、請求項４１記載の方法。
【請求項４４】
前記ＥＥ−ＧＭ３特異的プライマーがそれぞれ配列番号５及び配列番号４の配列、又は、それぞれ配列番号７及び配列番号５の配列を含み、そして、前記ＥＥ−ＧＭ２特異的プライマーがそれぞれ配列番号１８及び配列番号１９の配列を含む、請求項４３記載の方法。
【請求項４５】
ＥＥ−ＧＭ３ＰＣＲ識別プロトコルを用いて約２６３又は７０６ｂｐのＥＥ−ＧＭ３特異的フラグメント及び約１５１ｂｐのＥＥ−ＧＭ２特異フラグメントを増幅することを包含する、請求項４４記載の方法。
【請求項４６】
生物学的試料中の優良イベントＥＥ−ＧＭ３及び優良イベントＥＥ−ＧＭ２の同時存在を識別するためのキットであって、キットが、ＥＥ−ＧＭ３の除草剤耐性遺伝子を含む外来性ＤＮＡの５’フランキング領域を認識する１つのプライマー、ここで該５’フランキング領域はヌクレオチド１からヌクレオチド１４５１までの配列番号２のヌクレオチド配列を含む、又は、ＥＥ−ＧＭ３の除草剤耐性遺伝子を含む外来性ＤＮＡの３’フランキング領域を認識する１つのプライマー、ここで該３’フランキング領域は配列番号３のヌクレオチド２４１からヌクレオチド１４０８までの相補体のヌクレオチド配列を含む、及び、ＥＥ−ＧＭ３の除草剤耐性遺伝子を含む外来性ＤＮＡ内部の配列を認識する１つのプライマー、ここで該外来性ＤＮＡは配列番号２のヌクレオチド１４５２からヌクレオチド１８４３までの相補体のヌクレオチド配列、又は配列番号３のヌクレオチド１からヌクレオチド２４０までのヌクレオチド配列、又は配列番号１のヌクレオチド配列又はその相補体、又は配列番号２０のヌクレオチド位置１４５２からヌクレオチド位置１６６３８までのヌクレオチド配列又はその相補体を含む、を含み、そして、該キットが更に、ＥＥ−ＧＭ２の除草剤耐性遺伝子を含む外来性ＤＮＡの５’フランキング領域を認識する１つのプライマー、ここで該５’フランキング領域は配列番号１４のヌクレオチド１からヌクレオチド３１１までのヌクレオチド配列を含む、又は、ＥＥ−ＧＭ２の除草剤耐性遺伝子を含む外来性ＤＮＡの３’フランキング領域を認識する１つのプライマー、ここで該３’フランキング領域は配列番号１５のヌクレオチド５０８からヌクレオチド１８８０までの相補体のヌクレオチド配列を含む、及び、ＥＥ−ＧＭ２の除草剤耐性遺伝子を含む外来性ＤＮＡ内部の配列を認識する１つのプライマー、ここで該外来性ＤＮＡは配列番号１４のヌクレオチド３１２からヌクレオチド８１０までの相補体のヌクレオチド配列、又は配列番号１５のヌクレオチド１からヌクレオチド５０７までのヌクレオチド配列、又は配列番号１１のヌクレオチド配列又はその相補体を含む、を含む、上記キット。
【請求項４７】
ＥＥ−ＧＭ３の５’フランキング領域を認識する該プライマーが、配列番号２のヌクレオチド１からヌクレオチド１４５１までのヌクレオチド配列から選択される１７から２００個までの連続ヌクレオチドのヌクレオチド配列を含むか、又は、ＥＥ−ＧＭ３の３’フランキング領域を認識する該プライマーが、配列番号３のヌクレオチド２４１からヌクレオチド１４０８までの相補体のヌクレオチド配列から選択される１７から２００個までの連続ヌクレオチドのヌクレオチド配列を含み、そして、ＥＥ−ＧＭ３の外来性ＤＮＡ内部の配列を認識する該プライマーが、配列番号２のヌクレオチド１４５２からヌクレオチド１８４３までの相補体のヌクレオチド配列、又は配列番号３のヌクレオチド１からヌクレオチド２４０までのヌクレオチド配列、又は配列番号１のヌクレオチド配列又はその相補体、又は配列番号２０のヌクレオチド位置１４５２からヌクレオチド位置１６６３８までのヌクレオチド配列又はその相補体から選択される１７から２００個までの連続ヌクレオチドのヌクレオチド配列を含む、及び、ＥＥ−ＧＭ２の５’フランキング領域を認識する該プライマーが、配列番号１４のヌクレオチド１からヌクレオチド３１１までのヌクレオチド配列から選択される１７から２００個までの連続ヌクレオチドのヌクレオチド配列を含むか、又は、ＥＥ−ＧＭ２の３’フランキング領域を認識する該プライマーが、配列番号１５のヌクレオチド５０８からヌクレオチド１８８０までの相補体のヌクレオチド配列から選択される１７から２００個までの連続ヌクレオチドのヌクレオチド配列を含み、そして、ＥＥ−ＧＭ２の外来性ＤＮＡ内部の配列を認識する該プライマーが、配列番号１４のヌクレオチド３１２からヌクレオチド８１０までの相補体のヌクレオチド配列、又は配列番号１５のヌクレオチド１からヌクレオチド５０７までのヌクレオチド配列、又は配列番号１１のヌクレオチド配列又はその相補体から選択される１７から２００個までの連続ヌクレオチドを含む、請求項４６記載のキット。
【請求項４８】
ＥＥ−ＧＭ３の５’フランキング領域を認識する該プライマーが、その３’最末端において、配列番号２のヌクレオチド１からヌクレオチド１４５１までのヌクレオチド配列から選択される少なくとも１７個の連続ヌクレオチドのヌクレオチド配列を含むか、又は、ＥＥ−ＧＭ３の３’フランキング領域を認識する該プライマーが、その３’最末端において、配列番号３のヌクレオチド２４１からヌクレオチド１４０８までの相補体のヌクレオチド配列から選択される少なくとも１７個の連続ヌクレオチドのヌクレオチド配列を含み、そして、ＥＥ−ＧＭ３の外来性ＤＮＡ内部の配列を認識する該プライマーが、その３’末端において配列番号２のヌクレオチド１４５２からヌクレオチド１８４３までの相補体のヌクレオチド配列、又は配列番号３のヌクレオチド１からヌクレオチド２４０までのヌクレオチド配列、又は配列番号１のヌクレオチド配列又はその相補体、又は配列番号２０のヌクレオチド位置１４５２からヌクレオチド位置１６６３８までのヌクレオチド配列又はその相補体から選択される少なくとも１７個の連続ヌクレオチドを含む、及び、ＥＥ−ＧＭ２の５’フランキング領域を認識する該プライマーが、その３’最末端において、配列番号１４のヌクレオチド１からヌクレオチド３１１までのヌクレオチド配列から選択される少なくとも１７個の連続ヌクレオチドのヌクレオチド配列を含むか、又は、ＥＥ−ＧＭ２の３’フランキング領域を認識する該プライマーが、その３’最末端において配列番号１５のヌクレオチド５０８からヌクレオチド１８８０までの相補体のヌクレオチド配列から選択される少なくとも１７個の連続ヌクレオチドのヌクレオチド配列を含み、そして、ＥＥ−ＧＭ２の外来性ＤＮＡ内部の配列を認識する該プライマーが、その３’末端において、配列番号１４のヌクレオチド３１２からヌクレオチド８１０までの相補体のヌクレオチド配列、又は配列番号１５のヌクレオチド１からヌクレオチド５０７までのヌクレオチド配列、又は配列番号１１のヌクレオチド配列又はその相補体から選択される少なくとも１７個の連続ヌクレオチドを含む、請求項４６記載のキット。
【請求項４９】
配列番号４の配列を含むプライマー及び配列番号５の配列を含むプライマーを含むか、又は配列番号５の配列を含むプライマーおよび配列番号７の配列を含むプライマーを含み、そして更に、配列番号１８の配列を含むプライマー及び配列番号１９の配列を含むプライマーを含む、請求項４６記載のキット。
【請求項５０】
ＥＥ−ＧＭ３及びＥＥ−ＧＭ２特異的検出における使用に適するプライマー対であって、該第１のプライマーは、最適な検出条件下においてＥＥ−ＧＭ３の除草剤耐性遺伝子を含む外来性ＤＮＡの５’又は３’フランキング領域内部の配列を特異的に認識する配列、ここで該５’フランキング領域は配列番号２のヌクレオチド１からヌクレオチド１４５１までのヌクレオチド配列を含みそして該３’フランキング領域は配列番号３のヌクレオチド２４１からヌクレオチド１４０８までの相補体のヌクレオチド配列を含む、を含み、そして、該第２のプライマーは、最適な検出条件下においてＥＥ−ＧＭ２の除草剤耐性遺伝子を含む外来性ＤＮＡの５’又は３’フランキング領域内部の配列を特異的に認識する配列、ここで該５’フランキング領域は配列番号１４のヌクレオチド１からヌクレオチド３１１までのヌクレオチド配列を含みそして該３’フランキング領域は配列番号１５のヌクレオチド５０８からヌクレオチド１８８０までの相補体のヌクレオチド配列を含む、を含む上記プライマー対。
【請求項５１】
該第１のプライマーが、配列番号２のヌクレオチド１からヌクレオチド１４５１までのヌクレオチド配列から選択される１７〜２００個までの連続ヌクレオチドのヌクレオチド配列又は配列番号３のヌクレオチド２４１からヌクレオチド１４０８までの相補体のヌクレオチド配列から選択される１７〜２００個までの連続ヌクレオチドのヌクレオチド配列を含み、そして、該第２のプライマーが、配列番号１４のヌクレオチド１からヌクレオチド３１１までのヌクレオチド配列から選択される１７〜２００個までの連続ヌクレオチドのヌクレオチド配列又は配列番号１５のヌクレオチド５０８からヌクレオチド１８８０までの相補体のヌクレオチド配列から選択される１７〜２００個までの連続ヌクレオチドのヌクレオチド配列を含む、請求項５０記載のプライマー対。
【請求項５２】
該第１のプライマーが、その３’最末端において、配列番号２のヌクレオチド１からヌクレオチド１４５１までのヌクレオチド配列から選択される少なくとも１７個の連続ヌクレオチドのヌクレオチド配列又は配列番号３のヌクレオチド２４１からヌクレオチド１４０８までの相補体のヌクレオチド配列から選択される連続ヌクレオチドの少なくとも１７個のヌクレオチド配列を含み、そして、該第２のプライマーが、その３’最末端において、配列番号１４のヌクレオチド１からヌクレオチド３１１までのヌクレオチド配列から選択される少なくとも１７個の連続ヌクレオチドのヌクレオチド配列又は配列番号１５のヌクレオチド５０８からヌクレオチド１８８０までの相補体のヌクレオチド配列から選択される少なくとも１７個の連続ヌクレオチドのヌクレオチド配列を含む、請求項５０記載のプライマー対。
【請求項５３】
第１のプライマーが配列番号５の配列をその３’最末端に含み、そして第２のプライマーが配列番号１８の配列をその３’最末端に含む、プライマー対。
【請求項５４】
下記の４つのプライマー：
配列番号５の配列をその３’最末端に含む第１のプライマー；
配列番号４の配列をその３’最末端に含む第２のプライマー；
配列番号１８の配列をその３’最末端に含む第３のプライマー；及び、
配列番号１９の配列をその３’最末端に含む第４のプライマー；
を含むセット。
【請求項５５】
ＥＥ−ＧＭ３に対する第１の特異的プローブに、そして、ＥＥ−ＧＭ２に対する第２の特異的プローブに、生物学的試料の核酸をハイブリダイズさせることを含む、請求項４０記載の方法。
【請求項５６】
該第１の特異的プローブの配列が、ＥＥ−ＧＭ３の５’フランキング配列又は３’フランキング配列及びそれに隣接する外来性ＤＮＡの配列の部分を含む配列と少なくとも８０％配列同一性を有し、そして、該第２の特異的プローブの配列が、ＥＥ−ＧＭ２の５’フランキング配列又は３’フランキング配列及びそれに隣接する外来性ＤＮＡの配列の部分を含む配列と少なくとも８０％配列同一性を有する、請求項５５記載の方法。
【請求項５７】
該第１の特異的プローブの配列が配列番号２のヌクレオチド１４３１〜１４７２又は配列番号３のヌクレオチド２２０〜２６１、又は該配列の相補体と少なくとも８０％配列同一性を有し、そして、該第２の特異的プローブの配列が配列番号１４のヌクレオチド３０１〜３２２又は配列番号１５のヌクレオチド４９７〜５１８、又は該配列の相補体と少なくとも８０％配列同一性を有する、請求項５６記載の方法。
【請求項５８】
生物学的試料中の優良イベントＥＥ−ＧＭ３及び優良イベントＥＥ−ＧＭ２の同時存在を識別するためのキットであって、該キットがＥＥ−ＧＭ３の特異的領域に特異的にハイブリダイズすることができる第１の特異的プローブ、及び、ＥＥ−ＧＭ２の特異的領域に特異的にハイブリダイズすることができる第２の特異的プローブを含む、上記キット。
【請求項５９】
該第１の特異的プローブの配列がＥＥ−ＧＭ３の除草剤耐性遺伝子を含む外来性ＤＮＡの５’フランキング配列又は３’フランキング配列及びそれに隣接する外来性ＤＮＡの配列の部分を含む配列と少なくとも８０％配列同一性を有し、そして、該第２の特異的プローブの配列がＥＥ−ＧＭ２の除草剤耐性遺伝子を含む外来性ＤＮＡの５’フランキング配列又は３’フランキング配列の部分及びそれに隣接する外来性ＤＮＡの配列を含む配列と少なくとも８０％配列同一性を有する、請求項５８記載のキット。
【請求項６０】
該第１の特異的プローブの配列が配列番号２のヌクレオチド１４４１〜１４６２又は配列番号３のヌクレオチド２３０〜２５１、又は該配列の相補体と少なくとも８０％配列同一性を有するヌクレオチド配列を含み、そして、該第２の特異的プローブの配列が配列番号１４のヌクレオチド３０１〜３２２又は配列番号１５のヌクレオチド４９７〜５１８までの、又は該配列の相補体と少なくとも８０％配列同一性を有する、請求項５９記載のキット。
【請求項６１】
生物学的試料中の優良イベントＥＥ−ＧＭ３及び優良イベントＥＥ−ＧＭ２の同時存在の識別のための特異的プローブの対。
【請求項６２】
ＥＥ−ＧＭ３の除草剤耐性遺伝子を含む外来性ＤＮＡの５’フランキング配列又は３’フランキング配列及びそれに隣接する外来性ＤＮＡの配列の部分の配列又はその相補体と少なくとも８０％配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む第１のプローブ、及び、ＥＥ−ＧＭ２の除草剤耐性遺伝子を含む外来性ＤＮＡの５’フランキング配列又は３’フランキング配列及びそれに隣接する外来性ＤＮＡの配列の部分の配列又はその相補体と少なくとも８０％配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む第２のプローブを含む、請求項６１記載のプローブの対。
【請求項６３】
第１のプローブが配列番号２のヌクレオチド１４４１〜１４６２又は配列番号３のヌクレオチド２３０〜２５１、又は該配列の相補体と少なくとも８０％配列同一性を有し、そして、第２のプローブが配列番号１４のヌクレオチド３０１〜３２２又は配列番号１５のヌクレオチド４９７〜５１８、又は該配列の相補体と少なくとも８０％配列同一性を有する、請求項６２記載のプローブの対。
【請求項６４】
配列番号２のヌクレオチド１４４１〜１４６２又は配列番号３のヌクレオチド２３０〜２５１、又は該配列の相補体と本質的に類似のヌクレオチド配列を含む配列を有する第１のプローブ、及び、配列番号１４のヌクレオチド３０１〜３２２又は配列番号１５のヌクレオチド４９７〜５１８、又は該配列の相補体と本質的に類似のヌクレオチド配列を有する第２のプローブを含む、生物学的試料中の優良イベントＥＥ−ＧＭ３及びＥＥ−ＧＭ２の同時存在を識別するための特異的プローブのセット。
【請求項６５】
種子の純度を確認するための方法であって、方法が種子試料において、ＥＥ−ＧＭ３の除草剤耐性遺伝子を含む外来性ＤＮＡの５’又は３’フランキング領域を特異的に認識する特異的プライマー又はプローブによるＥＥ−ＧＭ３特異的領域の検出、及び、ＥＥ−ＧＭ２の除草剤耐性遺伝子を含む外来性ＤＮＡの５’又は３’フランキング領域を特異的に認識する特異的プライマー又はプローブによるＥＥ−ＧＭ２特異的領域の検出、を含む上記方法。
【請求項６６】
ＥＥ−ＧＭ３の存在に関して種子をスクリーニングするための方法であって、方法が、種子ロットの試料において、ＥＥ−ＧＭ３の除草剤耐性遺伝子を含む外来性ＤＮＡの５’又は３’フランキング領域を特異的に認識する特異的プライマー又はプローブによるＥＥ−ＧＭ３特異的領域の検出、及び、ＥＥ−ＧＭ２の除草剤耐性遺伝子を含む外来性ＤＮＡの５’又は３’フランキング領域を特異的に認識する特異的プライマー又はプローブによるＥＥ−ＧＭ２特異的領域の検出、を含む上記方法。
【請求項６７】
標的核酸配列の再利用を介してプローブ：標的核酸の比を増幅する実質的に相補な標識された核酸プローブとのハイブリダイゼーションを介して生物学的試料中の優良イベントＥＥ−ＧＭ３及びＥＥ−ＧＭ２の存在を検出するための方法であって、該方法が下記工程：
ａ）該標的核酸配列を、配列番号２のヌクレオチド１４５２からヌクレオチド１４６９までのヌクレオチド配列又はその相補体を含む第１の核酸オリゴヌクレオチド、又は、配列番号３のヌクレオチド２２３からヌクレオチド２４０までのヌクレオチド配列又はその相補体を含む第１の核酸オリゴヌクレオチドにハイブリダイズさせること；
ｂ）該標的核酸配列を配列番号２のヌクレオチド１４３４からヌクレオチド１４５１までのヌクレオチド配列又はその相補体を含む第２の核酸オリゴヌクレオチド、又は配列番号３のヌクレオチド２４１からヌクレオチド２５８までのヌクレオチド配列又はその相補体を含む該標識された核酸プローブにハイブリダイズさせること、ここで、該第１及び第２のオリゴヌクレオチドはヌクレオチド少なくとも１つで重複しており、そしてここで該第１又は該第２のオリゴヌクレオチドの何れかが標識されて該標識された核酸プローブとなるものである；
ｃ）選択的プローブ切断を起こすことによりデュプレックス解離をもたらす酵素によりプローブ:標的核酸配列デュプレックス内部の標識されたプローブのみを切断し、標的配列は未損傷のままとすること；
ｄ）工程（ａ）〜（ｃ）を反復することによる標的核酸配列を再利用すること；
ｅ)切断された標識されたプローブを検出することにより、該標的核酸配列の存在を決定すること；及び、
ｆ）該標的核酸配列を、配列番号１４のヌクレオチド３１２からヌクレオチド３２９までのヌクレオチド配列又はその相補体を含む第３の核酸オリゴヌクレオチド、又は、配列番号１５のヌクレオチド４９０からヌクレオチド５０７までのヌクレオチド配列又はその相補体を含む該第３の核酸オリゴヌクレオチドにハイブリダイズさせること；
ｇ）該標的核酸配列を配列番号１４のヌクレオチド２９４からヌクレオチド３１１までのヌクレオチド配列又はその相補体を含む第４の核酸オリゴヌクレオチド、又は配列番号１５のヌクレオチド５０８からヌクレオチド５２５までのヌクレオチド配列又はその相補体を含む該標識された核酸プローブにハイブリダイズさせること、ここで、該第３及び第４のオリゴヌクレオチドはヌクレオチドの少なくとも１つで重複しており、そしてここで該第３又は該第４のオリゴヌクレオチドの何れかが標識されて該標識された核酸プローブとなるものである；
ｈ）選択的プローブ切断を起こすことによりデュプレックス解離をもたらす酵素によりプローブ:標的核酸配列デュプレックス内部の標識されたプローブのみを切断し、標的配列は未損傷のままとすること；
ｉ）工程（ｆ）〜（ｈ）を反復することによる標的核酸配列を再利用すること；
ｊ)切断された標識されたプローブを検出することにより、該標的核酸配列の存在を決定すること；
を含む上記方法。
【請求項６８】
各々がそのゲノム内に優良イベントＥＥ−ＧＭ３及び優良イベントＥＥ−ＧＭ２を含むトランスジェニックダイズ植物、又はその細胞、部分、種子又は子孫であって、該イベントＥＥ−ＧＭ３を含むレファレンス種子が寄託番号ＮＣＩＭＢ４１６５９の下にＮＣＩＭＢに寄託されており、そして、該イベントＥＥ−ＧＭ２を含むレファレンス種子が寄託番号ＮＣＩＭＢ４１６６０の下にＮＣＩＭＢに寄託されているか、又は、自身のゲノム内に優良イベントＥＥ−ＧＭ３及び優良イベントＥＥ−ＧＭ２を含むレファレンス種子が寄託番号ＰＴＡ−１１０４２の下にＡＴＣＣに寄託されている、上記トランスジェニックダイズ植物、又はその細胞、部分、種子又は子孫。
【請求項６９】
ゲノムＤＮＡが、それぞれが配列番号４及び配列番号５のヌクレオチド配列を含む２つのプライマーでＥＥ−ＧＭ３に関する優良イベント識別プロトコルを用いて分析した場合に、約２６３ｂｐのＤＮＡフラグメントを与え、そして、ゲノムＤＮＡが、それぞれが配列番号１８及び配列番号１９のヌクレオチド配列を含む２つのプライマーでＥＥ−ＧＭ２に関する優良イベント識別プロトコルを用いて分析した場合に、約１５１ｂｐのＤＮＡフラグメントを与える、請求項６８記載のトランスジェニックダイズ植物、種子、細胞、部分又は子孫。
【請求項７０】
自身のゲノム内に優良イベントＥＥ−ＧＭ３及び優良イベントＥＥ−ＧＭ２を各々含むダイズ植物、又はその種子、細胞、又は組織であって、該ダイズ植物は、寄託番号ＮＣＩＭＢ４１６５９の下にＮＣＩＭＢに寄託された種子から生育させたダイズ植物の増殖及び／又は繁殖により得ることができる自身のゲノム中に優良イベントＥＥ−ＧＭ３を含むダイズ植物を、寄託番号ＮＣＩＭＢ４１６６０の下にＮＣＩＭＢに寄託された種子から生育させたダイズ植物の増殖及び／又は繁殖により得ることができる優良イベントＥＥ−ＧＭ２をそのゲノム内に含むダイズ植物と交雑させることにより得られるか、又は、該ダイズ植物はアクセッション番号ＰＴＡ−１１０４２の下にＡＴＣＣに寄託された種子から生育させたダイズ植物の増殖及び／又は繁殖により得ることができる、上記ダイズ植物、又はその種子、細胞又は組織。
【請求項７１】
優良イベントＥＥ−ＧＭ３及びＥＥ−ＧＭ２を含むダイズ種子であって、イベントＥＥ−ＧＭ３を含むレファレンス種子が寄託番号ＮＣＩＭＢ４１６５９の下にＮＣＩＭＢに寄託されており、そしてイベントＥＥ−ＧＭ２を含むレファレンス種子が寄託番号ＮＣＩＭＢ４１６６０の下にＮＣＩＭＢに寄託されており、そしてイベントＥＥ−ＧＭ３及びＥＥ−ＧＭ２含むレファレンス種子がアクセッション番号ＰＴＡ−１１０４２の下にＡＴＣＣに寄託されている、上記ダイズ種子。
【請求項７２】
請求項７１記載の種子から得ることができる優良イベントＥＥ−ＧＭ３及びＥＥ−ＧＭ２を含むトランスジェニックダイズ植物、細胞又は組織。
【請求項７３】
請求項６８〜７２の何れか１項に記載の植物を別のダイズ植物と交雑させること、及び、該交雑から得られた種子を植栽することを含む、優良イベントＥＥ−ＧＭ３及びＥＥ−ＧＭ２を含むダイズ植物又は種子を生産するための方法。
【請求項７４】
優良イベントＥＥ−ＧＭ３及びＥＥ−ＧＭ２を含むダイズゲノムＤＮＡ。
【請求項７５】
第１の核酸分子が配列番号２のヌクレオチド１４４１〜ヌクレオチド１４５２又は配列番号３のヌクレオチド２３０〜ヌクレオチド２５１又は該配列の相補体に本質的に類似のヌクレオチド配列を含み、そして、第２の核酸分子が配列番号１４のヌクレオチド３０１からヌクレオチド３２２の又は配列番号１５のヌクレオチド４９７〜ヌクレオチド５１８又は該配列の相補体に本質的に類似のヌクレオチド配列を含む、単離された核酸分子の対。
【請求項７６】
第１の核酸分子が配列番号２のヌクレオチド１４３１〜ヌクレオチド１４６２又は配列番号３のヌクレオチド２２０〜２６１又は該配列の相補体に本質的に類似のヌクレオチド配列を含み、そして、第２の核酸分子が配列番号１４のヌクレオチド３０１〜ヌクレオチド３２２又はヌクレオチド４８７〜ヌクレオチド５１８までの配列番号１５又は該配列の相補体に本質的に類似のヌクレオチド配列を含む、請求項７５記載の単離された核酸分子の対。
【請求項７７】
下記のヌクレオチド配列：
ａ）配列番号２のヌクレオチド１から１４５１までのヌクレオチド配列；
ｂ）配列番号１のヌクレオチド６７６０からヌクレオチド６９５８までのヌクレオチド配列の相補体のヌクレオチド配列；
ｃ）配列番号１のヌクレオチド６８７４からヌクレオチド７２９８までのヌクレオチド配列：
ｄ）配列番号１のヌクレオチド７からヌクレオチド７２９１までのヌクレオチド配列；
ｅ）の配列番号１ヌクレオチド１２からヌクレオチド７２６５までのヌクレオチド配列；
ｆ）配列番号３のヌクレオチド２１７からヌクレオチド２４０までのヌクレオチド配列；及び、
ｇ）配列番号３のヌクレオチド２４１からヌクレオチド１４０８までのヌクレオチド配列；
を順次自身のゲノム内に含み、そして、以下の配列：
ｈ）配列番号１４のヌクレオチド１から３１１までのヌクレオチド配列；
ｉ）配列番号１１のヌクレオチド３４５８からヌクレオチド３８４８までのヌクレオチド配列；
ｊ）配列番号１１のヌクレオチド４１３からヌクレオチド３４５７までのヌクレオチド配列；
ｋ）配列番号１５のヌクレオチド５０８からヌクレオチド１８８０までのヌクレオチド配列；
を順次さらに含むダイズ植物。
【請求項７８】
下記のヌクレオチド配列：
ａ）配列番号２のヌクレオチド１から１４５１までのヌクレオチド配列；
ｂ）配列番号１のヌクレオチド６７６０からヌクレオチド６９５８までのヌクレオチド配列の相補体のヌクレオチド配列；
ｃ）配列番号１のヌクレオチド６８７４からヌクレオチド７２９８までのヌクレオチド配列：
ｄ）配列番号１のヌクレオチド７からヌクレオチド７２９１までのヌクレオチド配列；
ｅ）配列番号１のヌクレオチド１２からヌクレオチド７２６５までのヌクレオチド配列；
ｆ）配列番号３のヌクレオチド２１７からヌクレオチド２４０までのヌクレオチド配列；及び、
ｇ）配列番号３のヌクレオチド２４１からヌクレオチド１４０８までのヌクレオチド配列；
を順次含み、そして、以下の配列：
ｈ）配列番号１４のヌクレオチド１から３１１までのヌクレオチド配列；
ｉ）配列番号１１のヌクレオチド３４５８からヌクレオチド３８４８までのヌクレオチド配列；
ｊ）配列番号１１のヌクレオチド４１３からヌクレオチド３４５７までのヌクレオチド配列；
ｋ）配列番号１５のヌクレオチド５０８からヌクレオチド１８８０までのヌクレオチド配列；
を順次さらに含むＤＮＡ分子。
【請求項７９】
配列番号２のヌクレオチド１４３１〜１４７２と少なくとも８０％、９０％、９５％又は１００％の配列同一性を有する核酸配列及び配列番号３のヌクレオチド２２０〜２６１のと少なくとも８０％、９０％、９５％又は１００％の配列同一性を有する核酸配列、又は該配列の相補体、及び、配列番号１２のヌクレオチド１９９〜２２０と少なくとも８０％、９０％、９５％又は１００％の配列同一性を有する核酸配列及び配列番号１３のヌクレオチド５５８〜５７９のと少なくとも８０％、９０％、９５％又は１００％の配列同一性を有する核酸配列、又は該配列の相補体、を自身の細胞のゲノム内に含む、ＥＥ−ＧＭ３及びＥＥ−ＧＭ１を含む、ダイズ植物、細胞、組織又は種子。
【請求項８０】
配列番号２のヌクレオチド１４３１〜１４７２と少なくとも８０％、９０％、９５％又は１００％の配列同一性を有する核酸配列及びヌクレオチド２２０〜２６１の配列番号３と少なくとも８０％、９０％、９５％又は１００％の配列同一性を有する核酸配列、又は該配列の相補体、及び、配列番号１４のヌクレオチド３０１〜３２２と少なくとも８０％、９０％、９５％又は１００％の配列同一性を有する核酸配列及び配列番号１５のヌクレオチド４９７〜５１８のと少なくとも８０％、９０％、９５％又は１００％の配列同一性を有する核酸配列、又は該配列の相補体、を自身の細胞のゲノム内に含む、ＥＥ−ＧＭ３及びＥＥ−ＧＭ２を含むダイズ植物、細胞、組織又は種子。
【請求項８１】
配列番号２０のヌクレオチド位置１４５２からヌクレオチド位置１６６３８ヌクレオチド配列と少なくとも９７、９８又は少なくとも９９％の配列同一性を有するヌクレオチド配列、又はその相補体、又は配列番号２０と少なくとも９７、９８又は少なくとも９９％の配列同一性を有するヌクレオチド配列、又はその相補体を含む核酸分子を自身のゲノム中に含み、そしてＥＥ−ＧＭ１又はＥＥ−ＧＭ２のヌクレオチド配列と少なくとも９７、９８又は少なくとも９９％の配列同一性を有するヌクレオチド配列、又はその相補体を含む核酸分子を自身のゲノム中に含む、ダイズ植物、植物細胞、組織又は種子であって、寄託番号ＮＣＩＭＢ４１６５８の下に寄託されているＥＥ−ＧＭ１を含むレファレンス種子、及び寄託番号ＮＣＩＭＢ４１６６０の下に寄託されているＥＥ−ＧＭ２を含むレファレンス種子、例えば、ＥＥ−ＧＭ１又はＥＥ−ＧＭ２のヌクレオチド配列が、それぞれ配列番号１２又は１３中の外来性ＤＮＡ配列又は配列番号１４又は１５中の外来性ＤＮＡ配列、又は、それぞれ配列番号１２の配列と配列番号１３の配列との間にある植物ゲノム中の外来性ＤＮＡ配列又は配列番号１４の配列と配列番号１５の配列との間にある植物ゲノム中の外来性ＤＮＡ配列を含むか、又はそれ自体である、ダイズ植物、植物細胞、組織又は種子。
【請求項８２】
配列番号１のヌクレオチド配列又はその相補体にハイブリダイズするか、配列番号２０のヌクレオチド位置１４５２からヌクレオチド位置１６６３８までのヌクレオチド配列又はその相補体にハイブリダイズするか、又は、配列番号２０のヌクレオチド配列又はその相補体にハイブリダイズする核酸分子を自身のゲノム内に含み、そしてＥＥ−ＧＭ１又はＥＥ−ＧＭ２のヌクレオチド配列又はその相補体にハイブリダイズする核酸分子を自身のゲノム内に含む、ダイズ植物、植物細胞、組織又は種子であって、寄託番号ＮＣＩＭＢ４１６５８の下に寄託されているＥＥ−ＧＭ１を含むレファレンス種子、及び寄託番号ＮＣＩＭＢ４１６６０の下に寄託されているＥＥ−ＧＭ２を含むレファレンス種子、例えば、ＥＥ−ＧＭ１又はＥＥ−ＧＭ２のヌクレオチド配列が、配列番号１２又は１３中の外来性ＤＮＡ配列又は配列番号１４又は１５中の外来性ＤＮＡ配列、又は、配列番号１２の配列と配列番号１３の配列との間にある植物ゲノム中の外来性ＤＮＡ配列又は配列番号１４の配列と配列番号１５の配列との間にある植物ゲノム中の外来性ＤＮＡ配列を含むか、又はそれ自体である、ダイズ植物、植物細胞、組織又は種子。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【公表番号】特表２０１３−５１１２９４（Ｐ２０１３−５１１２９４Ａ）
【公表日】平成２５年４月４日（２０１３．４．４）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１２−５４１１７３（Ｐ２０１２−５４１１７３）
【出願日】平成２２年１１月２３日（２０１０．１１．２３）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２０１０／０５７８８６
【国際公開番号】ＷＯ２０１１／０６３４１３
【国際公開日】平成２３年５月２６日（２０１１．５．２６）
【出願人】（５１２１３５１２６）バイエル・クロップサイエンス・エヌ・ヴェー (5)
【氏名又は名称原語表記】ＢＡＹＥＲ ＣＲＯＰＳＣＩＥＮＣＥ Ｎ．Ｖ．
【出願人】（５１２１３５１３７）エムエス・テクノロジーズ・エルエルシー (2)
【氏名又は名称原語表記】ＭＳ ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＩＥＳ ＬＬＣ
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２５年４月４日（２０１３．４．４）
【国際特許分類】
【出願日】平成２２年１１月２３日（２０１０．１１．２３）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２０１０／０５７８８６
【国際公開番号】ＷＯ２０１１／０６３４１３
【国際公開日】平成２３年５月２６日（２０１１．５．２６）
【出願人】（５１２１３５１２６）バイエル・クロップサイエンス・エヌ・ヴェー (5)
【氏名又は名称原語表記】ＢＡＹＥＲ ＣＲＯＰＳＣＩＥＮＣＥ Ｎ．Ｖ．
【出願人】（５１２１３５１３７）エムエス・テクノロジーズ・エルエルシー (2)
【氏名又は名称原語表記】ＭＳ ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＩＥＳ ＬＬＣ
【Ｆターム（参考）】
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