１，７−ビス（４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル）−１Ｅ−ヘプタン−３，５−ジオール、及び、その製造方法
【課題】微量でも無色を示す抗酸化活性を有する新規な１，７−ビス（４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル）−１Ｅ−ヘプタン−３，５−ジオールを提供する。
【解決手段】次の式（１）
【化１】
で示される１，７−ビス（４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル）−１Ｅ−ヘプタン−３，５−ジオールを提供する。前記１，７−ビス（４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル）−１Ｅ−ヘプタン−３，５−ジオールは、屋久島産ウコン根茎から分離されたジアポルテ属糸状真菌（１．微生物の識別の表示：ＣＬＯ−１３、２．受託番号：ＮＩＴＥ Ｐ−７８９、３．受領日：２００９年７月３１日）でクルクミンを微生物変換することにより、無色代謝産物として得ることができる。この化合物は、クルクミンと同様の抗酸化能を有している。
【解決手段】次の式（１）
【化１】
で示される１，７−ビス（４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル）−１Ｅ−ヘプタン−３，５−ジオールを提供する。前記１，７−ビス（４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル）−１Ｅ−ヘプタン−３，５−ジオールは、屋久島産ウコン根茎から分離されたジアポルテ属糸状真菌（１．微生物の識別の表示：ＣＬＯ−１３、２．受託番号：ＮＩＴＥ Ｐ−７８９、３．受領日：２００９年７月３１日）でクルクミンを微生物変換することにより、無色代謝産物として得ることができる。この化合物は、クルクミンと同様の抗酸化能を有している。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、飲食品、化粧品、医薬品等の分野において用いられる抗酸化活性を有する新規な１，７−ビス（４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル）−１Ｅ−ヘプタン−３，５−ジオール、及び、その製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、活性酸素が老化、疾病等の人体に様々な悪影響を及ぼすことが明らかになってきたので、抗酸化活性物質の飲食品、化粧品、医薬品等の分野への応用技術に注目が集まっている。
【０００３】
一方、ウコン（Ｃｕｒｃｕｍａ ｌｏｎｇａ Ｌ．、ショウガ科）根茎に含有されるクルクミンは、抗酸化活性等の様々な生理活性を有しているので、飲食品、化粧品、医薬品等の分野において注目されている。
【０００４】
一般的に、天然有機化合物の誘導反応には化学的手法が用いられているが、既に、化学的手法によって製造された数多くのクルクミン誘導体（特許文献１，２）が報告されている。しかしながら、化学的手法による天然有機化合物の製造においては、その天然有機化合物の製造に用いられる種々の有機溶剤、試薬等の物質が環境に悪影響を及ぼすところ、水、栄養素及び無機塩のみを用いる微生物変換反応おいては、有機溶剤、試薬等の物質が環境へ悪影響を及ぼすことはないので、微生物変換反応は、その特異な反応性と合わせて、近年注目を集めている。
【０００５】
ウコンの根茎に含有されるクルクミンは、微量でも黄色を示すので、皮膚化粧品等には用いることが難しく、そのために、その応用分野に制限がある、という問題があった。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】特開平５−２５５０６１号公報
【特許文献２】特開２００２−１５５００９号公報
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】Ｕｅｈａｒａ，Ｓ．，Ｙａｓｕｄａ，Ｉ．，Ａｋｉｙａｍａ，Ｋ．，Ｍｏｒｉｔａ，Ｈ．，Ｔａｋｅｙａ，Ｋ．，Ｉｔｏｋａｗａ，Ｋ．，Ｃｈｅｍｉｃａｌ ＆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｂｕｌｌｅｔｉｎ、３５巻８号、３２９８−３３０４頁、１９８７年
【非特許文献２】Ｋｉｋｕｚａｋｉ，Ｈ．，Ｕｓｕｇｕｃｈｉ，Ｊ．，Ｎａｋａｔａｎｉ，Ｎ．，Ｃｈｅｍｉｃａｌ ＆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｂｕｌｌｅｔｉｎ、３９巻１号、１２０−１２２頁、１９９１年
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明は、かかる問題を解決することを目的としている。
【０００９】
即ち、本発明は、無色を示す抗酸化活性を有する新規な１，７−ビス（４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル）−１Ｅ−ヘプタン−３，５−ジオール、及び、その製造方法を提供することを目的としている。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
請求項１に記載された発明は、上記目的を達成するために、次の式（１）
【化１】
で示される１，７−ビス（４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル）−１Ｅ−ヘプタン−３，５−ジオールである。
【００１１】
請求項２に記載された発明は、
（イ）ウコン根茎の小片を滅菌した後オートミール麦芽エキス寒天（ＣＭＭＡ）培地上において生育させた糸状菌コロニーを分離してジアポルテ（Ｄｉａｐｏｒｔｈｅ）属を得る工程、
（ロ）前記ジアポルテ属を液体培地中において培養する工程、
（ハ）前記ジアポルテ属を培養した液体培地にクルクミンのメタノール溶液を添加して、さらに、回転振とう培養する工程、
（ニ）前記回転振とう培養した菌体を含む全培養液を、ホモジネーターで粉砕した後、水−クロロホルム系の溶剤で分配操作してクロロホルム移行部を得る工程、
（ホ）前記クロロホルム移行部を減圧下においてその溶媒を留去する工程、及び、
（ヘ）前記クロロホルム移行部をシリカゲルカラムクロマトグラフィーを用いて分離精製することにより１，７−ビス（４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル）−１Ｅ−ヘプタン−３，５−ジオールを得る工程
を順次有することを特徴とする１，７−ビス（４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル）−１Ｅ−ヘプタン−３，５−ジオールの製造方法である。
【発明の効果】
【００１２】
請求項１に記載された発明によれば、微量でも無色を示す抗酸化活性を有する新規な１，７−ビス（４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル）−１Ｅ−ヘプタン−３，５−ジオールを提供することができる。
【００１３】
請求項２に記載された発明によれば、水、栄養素及び無機塩のみを用いる微生物変換反応によって、ネオヘキサヒドロクルクミンを製造するので、有機溶剤、試薬等の物質が環境へ悪影響を及ぼすこと無く、微量でも無色を示す抗酸化活性を有する新規な１，７−ビス（４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル）−１Ｅ−ヘプタン−３，５−ジオールの製造方法を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１】ウコン内生菌（ジアポルテ属糸状真菌）によるクルクミン培養液のクロロホルム移行部を高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）で解析して得たクロマトグラムを示す。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
本発明者らは、ウコン根茎から内生菌としてジアポルテ（Ｄｉａｐｏｒｔｈｅ）属糸状真菌（１．微生物の識別の表示：ＣＬＯ−１３、２．受託番号：ＮＩＴＥ Ｐ−７８９、３．受領日：２００９年７月３１日）を分離して、そのジアポルテ属糸状真菌によるクルクミンの変換反応を試みたところ、前記ジアポルテ属糸状真菌が、クルクミンを次の一般式（１）
【化２】
で表される無色を示す抗酸化活性を有する新規な１，７−ビス（４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル）−１Ｅ−ヘプタン−３，５−ジオールに変換することを突き止めて本発明を完成するに至った。
【００１６】
本発明者らは、屋久島産ウコン根茎の小片を、水道水で表面洗浄した後、７５％エタノール水溶液で１分間、５．３％次亜塩素酸ナトリウム水溶液で５分間、さらに、７５％エタノール水溶液で０．５分間表面滅菌した。次に、クリーンベンチ内で自然乾燥させ、滅菌したカッターで両端を切り落とした後、縦に２つに分割し、クロラムフェニコール（０．０５ｍｇ／ｍｌ）を含むオートミール麦芽エキス寒天（ＣＭＭＡ）培地上に置いた。ＣＭＭＡ培地上に生育してきた糸状菌コロニーの分離操作を繰り返し行い、今回用いた糸状菌を得た。本糸状菌を、ポテト−デキストロース−観点（ＰＤＡ）培地上で生育させたところ、白色の菌糸が前記培養地の表面に成長してきた後、それらの菌糸の一部が黄色に変色した。その際、培地部分（裏面）は、ところどころ黒色化したが、前記菌による胞子の形成は確認されなかった。そこで、本発明者らは、分類学上の位置づけを決定するために、国際塩基配列データベース（ＤＤＢＪ／ＧｅｎＢａｎｋ／ＥＭＢＬ）の相同性検索プログラムＦＡＳＴＡを使用して、同塩基配列を比較検索したところ、Ｄｉａｐｏｒｔｈｅ ｖｉｔｉｃｏｌａ（ＥＦ１５５４９０）と９８％のシミラリティを示すことが明らかになった。そして、さらに系統樹解析を行った結果、（Ｄｉａｐｏｒｔｈｅ）属糸状真菌（１．微生物の識別の表示：ＣＬＯ−１３、２．受託番号：ＮＩＴＥ Ｐ−７８９、３．受領日：２００９年７月３１日）であることが判明した。
【００１７】
ウコン（Ｃｕｒｃｕｍａ ｌｏｎｇａ Ｌ．、ショウガ科）根茎から抽出されたされたクルクミンは、抗酸化活性等の様々な生理活性を有しているので、飲食品、化粧品、医薬品等の分野において使用されているが、前記クルクミンは、微量でも黄色を示すので、その使用分野が制限され、そのために、その使用量は増加していない。
【００１８】
本発明の新規な１，７−ビス（４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル）−１Ｅ−ヘプタン−３，５−ジオールは、無色を示し、しかも、抗酸化活性を有しているので、化粧品、食品、医薬等の分野において用いることができ、そのために、１，７−ビス（４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル）−１Ｅ−ヘプタン−３，５−ジオールの使用量の拡大が期待される。
【００１９】
本発明の１，７−ビス（４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル）−１Ｅ−ヘプタン−３，５−ジオールは、
（イ）ウコン根茎の小片を滅菌した後オートミール麦芽エキス寒天（ＣＭＭＡ）培地上に置いて生育させた状菌コロニーを分離してジアポルテ（Ｄｉａｐｏｒｔｈｅ）属を得る工程、
（ロ）前記ジアポルテ属を液体培地中において培養する工程、
（ハ）前記ジアポルテ属を培養した液体培地にクルクミンのメタノール溶液を添加して、さらに、回転振とう培養する工程、
（ニ）前記回転振とう培養した菌体を含む全培養液を、ホモジネーターで粉砕した後、水−クロロホルム系の溶剤で分配操作してクロロホルム移行部を得る工程、
（ホ）前記クロロホルム移行部を減圧下においてその溶媒を留去する工程、及び、
（ヘ）前記クロロホルム移行部をシリカゲルカラムクロマトグラフィーを用いて分離精製することによりネオヘキサヒドロクルクミンを得る工程
を順次経て製造される。
【００２０】
本発明の新規な１，７−ビス（４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル）−１Ｅ−ヘプタン−３，５−ジオールは、無色を示す抗酸化活性剤として有用である。それ故、本発明の新規な１，７−ビス（４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル）−１Ｅ−ヘプタン−３，５−ジオールは、これを皮膚化粧料、頭髪化粧料、又は、食品に０．０１〜１０重量％の割合で配合することができる。
【実施例】
【００２１】
（実施例１）
１．ウコン根茎から植物内生菌の分離
屋久島産ウコン根茎の小片を、水道水で表面洗浄した後、７５％エタノール水溶液で１分間、５．３％次亜塩素酸ナトリウム水溶液で５分間、さらに、７５％エタノール水溶液で０．５分間表面滅菌した。この滅菌したウコン根茎の小片をクリーンベンチ内で自然乾燥させ、滅菌したカッターで両端を切り落とした後、縦に２つに分割し、これらをクロラムフェニコール（０．０５ｍｇ／ｍｌ）を含むオートミール麦芽エキス寒天（ＣＭＭＡ）培地上に置いた。前記ＣＭＭＡ培地上に生育してきた白色の糸状真菌コロニーの分離操作を繰り返し行って糸状真菌を得た。このようにして得た糸状真菌は、リボソームＤＮＡ内のＩＴＳ領域の塩基配列解析により、ジアポルテ（Ｄｉａｐｏｒｔｈｅ）属糸状真菌（１．微生物の識別の表示：ＣＬＯ−１３、２．受託番号：ＮＩＴＥ Ｐ−７８９、３．受領日：２００９年７月３１日）であることが判明した。
【００２２】
２．クルクミンのジアポルテ属糸状真菌変換
前記ウコン根茎の小片から得たジアポルテ属糸状真菌を２％グルコース−酵母抽出物−ペプトン液体培地（２００ｍｌ）中において２８℃で７日間培養した後、前記液体培地にクルクミンのメタノール溶液１０ｍｌ（クルクミン含有量２０ｍｇ）を添加して、さらに、４８時間（２日間）回転振とう（９０ｒｐｍ）培養を行った。この回転振とう培養を行ったジアポルテ属糸状真菌体を含む培養液全量をホモジネーションした後、水−クロロホルム系で分配操作してクロロホルム層を形成し、このクロロホルム層を減圧下に保持して、クロロホルム移行部（３８ｍｇ）を得た。次に、前記クロロホルム移行部をシリカゲルカラムクロマトグラフィー［シリカゲル６０（２３０−４００メッシュ、メルク社製）、ヘキサン：クロロホルム：エタノール＝１：９：０５］、高速液体クロマトグラフィ−（ＨＰＬＣ）［分離条件；固定相Ｃａｐｃｅｌｌ Ｐａｋ Ｃ１８ ＵＧ１２０（４．６ｍｍ×２５０ｍｍ、資生堂社製）、移動層；アセトニトリル：水＝２２：７８、流速；１．０ｍｌ／ｍｉｎ、カラム温度；４０℃、及び、示差屈折率（ＲＩ）検知器］を用いた分離精製を行い、１，７−ビス（４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル）−１Ｅ−ヘプタン−３，５−ジオール（５．４ｍｇ，収率２７％）を得た。
【００２３】
図１は、ウコン内生菌（ジアポルテ属糸状真菌）によるクルクミン培養液のクロロホルム移行部を高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）で解析して得たクロマトグラムを示す。前記ＨＰＬＣの分析条件は、次に示すものとした。
【００２４】
高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）の分析条件
固定相；固定相Ｃａｐｃｅｌｌ Ｐａｋ Ｃ１８ ＵＧ１２０（４．６ｍｍ×２５０ｍｍ、資生堂社製
移動層；Ａ（水），Ｂ（アセトニトリル）
Ａ：Ｂ＝８０：２０→Ａ：Ｂ＝３０：７０（３０分、リニアグラジエント）
流速；１．０ｍｌ／ｍｉｎ
カラム温度：４０℃
検出波長；２６０ｎｍ
【００２５】
図１に示されているように、前記ウコン内生菌［ジアポルテ属糸状真菌（１．微生物の識別の表示：ＣＬＯ−１３、２．受託番号：ＮＩＴＥ Ｐ−７８９、３．受領日：２００９年７月３１日］によるクルクミン培養液のクロロホルム移行部からは、ネオヘキサクルクミン（下記に示す化学構造解析によって１，７−ビス（４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル）−１Ｅ−ヘプタン−３，５−ジオールであることが判明した。）が主として生成しているが、前記クロロホルム移行部には、次の式（２）で示されるテトラヒドクルクミン（特許文献１を参照。）、次の式（３）で示される（３Ｓ，５Ｓ）−１，７−ビス（４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル）ヘプタン−３，５−ジオール（非特許文献１を参照。）、及び、次の式（４）で示される（３Ｓ，５Ｒ）−１，７−ビス（４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル）ヘプタン−３，５−ジオール（非特許文献２を参照。）を副生していることがわかる。
【００２６】
【化３】
【００２７】
【化４】
【００２８】
【化５】
【００２９】
３．前記ネオヘキサクルクミンの化学構造解析
前記ネオヘキサヒドロクルクミンは、負の旋光性［α］D−４．３°（エタノール中）を示し、高分解能負高速原子衝突質量分析（ｎｅｇ．ＦＡＢ−ＭＳ）スペクトルから分子組成Ｃ21Ｈ26Ｏ6 が判明した。また、赤外線吸収（ＩＲ）スペクトルより、ヒドロキシル基（３３５０ｃｍ-1）及び芳香環（１５９９，１５１６ｃｍ-1）の存在、及び紫外線吸収（ＵＶ）スペクトルから芳香環［２６９ｎｍ（ε＝１５，０００），２８８ｎｍ（ｓｈ），３０２ｎｍ（ｓｈ），３１３ｎｍ（ｓｈ）］の存在が確認された。さらに、炭素−１３核磁気共鳴（13Ｃ−ＮＭＲ）スペクトルにおいて２１個の炭素シグナルが観測され、さらに、分極移動による無歪シグナル増感法（ＤＥＰＴ）スペクトルから、６個の４級炭素、１０個の３級炭素、３個の２級炭素及び２個のメトキシル炭素の存在が確認された。一方、プロトン核磁気共鳴（1Ｈ−ＨＭＲ）、1Ｈ−1Ｈ２次元相関（1Ｈ−1Ｈ ＣＯＳＹ）及び1Ｈ−13Ｈ２次元相関（ＨＭＱＣ）スペクトルの解析から、１位に二置換トランス二重結合、３位と５位にそれぞれヒドロキシル基を有する７個の炭素鎖の両端に、２個の三置換芳香環の存在が確認された。これらの事実は、1Ｈ−13Ｈロングレンジ２次元相関（ＨＭＢＣ）スペクトルの解析からもよく支持された。
【００３０】
以上のことから、前記ネオヘキサヒドロクルクミンは、次の式（５）
【化６】
で示される１，７−ビス（４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル）−１Ｅ−ヘプタン−３，５−ジオールであることが判明した。
【００３１】
４．前記１，７−ビス（４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル）−１Ｅ−ヘプタン− ３，５−ジオールの物理化学データ
（１）無色結晶粉末、融点１５７−１５８℃（再結晶溶媒：酢酸エチル）
（２）比旋光度：［α］D−４．３°（ＥｔＯＨ中、２４℃）
（３）赤外吸収スペクトル：ＩＲ（ＫＢｒ）ｃｍ-1：３３５０，１５９９，１５１６．
紫外吸収スペクトル：ＵＶλmax（ＥｔＯＨ）ｎｍ（ε）：２６９（１５，００ ０）、２８８（ｓｈ），３０２（ｓｈ），３１３（ｓｈ）
（４）1Ｈ −及び13Ｃ−核磁気共鳴スペクトル（ＮＭＲ）：次の表１に示される。
（５）Ｎｅｇ．ＦＡＢ−ＭＳｍ／ｚ：３７３［Ｍ−Ｈ］-．
（６）高分解能ｎｅｇ．ＦＡＢ−ＭＳｍ／ｚ：Ｃ21Ｈ25Ｏ6の計算質量数：３７３．１ ６５２．
（７）高分解能ｎｅｇ．ＦＡＢ−ＭＳｍ／ｚ：Ｃ21Ｈ25Ｏ6の観測質量数：３７３．１ ６６３．
【００３２】
【表１】
【００３３】
５．前記１，７−ビス（４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル）−１Ｅ−ヘプタン− ３，５−ジオールの抗酸化活性
前記１，７−ビス（４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル）−１Ｅ−ヘプタン−３，５−ジオールの抗酸化活性抗酸化活性の評価法は以下の通りである。
【００３４】
（１）中性ラジカル（ＤＰＰＨ；１，１−ｄｉｐｈｅｎｙｌ−２−ｐｉｃｒｙｌｈｙｄｒａｚｙｌ）の消去活性
適当量の被検物質をエタノール（６００μｌ）に溶解した後、２５０ｍＭ酢酸緩衝液（ｐＨ５．５，６００μｌ）を加え、３０℃で５分間保持した。保温後、２５０ｍＭ ＤＰＰＨエタノール溶液（３００μｌ）を加え、３０℃で被検物質によるラジカル除去反応を行った。３０分後、この反応液を５１７ｎｍで吸光度測定を行った（Ａ）。さらに過剰のＤＰＰＨを除去するために３ｍｇ／ｍｌのＢＨＴ（２，６−ジ−ｔ−ブチル−４−メチルフェノール）エタノール溶液を１５μｌ加え、３０℃で３０分間保持した後、再び５１７ｎｍで吸光度測定を行った（Ｂ）。ラジカル消去活性は、次の数式
【数１】
により求めた。なお、コントロールとは、被検物質無添加で行って得られた吸光度である。
【００３５】
（２）ラット肝細胞のミクロソーム及びミトコンドリアの脂質酸化阻害活性
ラット肝細胞のミクロソーム画分及びミトコンドリア画分の脂質酸化阻害活性試験は、Ｈａｒａｇｕｃｈｉら、［プランタ メディカ（Ｐｌａｎｔａ Ｍｅｄｉｃａ）、６２巻、２１７頁から２２１頁、１９９６年］の方法により行った。
【００３６】
１）ミクロソーム
調製したミクロソーム懸濁液（蛋白質含量２．０ｍｇ、９００μｌ）に適当量の被検物質を添加した後、１００μｌの１ｍＭ ＮＡＤＰＨを加え３７℃で１５分間放置した。そして、９０μｌの２％ＢＨＴを加えた後、２ｍｌの１５％ｗ／ｖＴＣＡ（トリクロロ酢酸）／０．３７５％ＴＢＡ（チオバルビツール酸）／０．２５ＮＨＣｌ溶液を加え、１００℃で１５分間反応させた。この反応液を遠心分離し、その上澄みについて５３５ｎｍで吸光度測定を行った。コントロール（被検物質無添加）に対するＴＢＡ比は、過酸化阻害率として示した。
【００３７】
２）ミトコンドリア
調製したミクロソーム懸濁液（蛋白質含量２．０ｍｇ、９００μｌ）に適当量の被検物質を添加した後、１００μｌの１ｍＭ ＮＡＤＨを加え３７℃で５分間放置した。そして、前記ミクロソーム懸濁液に９０μｌの２％ＢＨＴを加えた後、２ｍｌの１５％ｗ／ｖＴＣＡ（トリクロロ酢酸）、０．３７５％ＴＢＡ（チオバルビツール酸）、及び、０．２５ＮＨＣｌ溶液を加えて、これらを１００℃で１５分間反応させた。この反応液を遠心分離し、その上澄みについて５３５ｎｍで吸光度測定を行った。コントロール（被検物質無添加）に対するＴＢＡ比を過酸化阻害率として示した。
【００３８】
測定結果は、次の表２に示される。
【００３９】
【表２】
【００４０】
表２から、前記１，７−ビス（４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル）−１Ｅ−ヘプタン−３，５−ジオールネオヘキサヒドロクルクミンがクルクミンと同等の抗酸化活性を示すことが明らかになった。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、飲食品、化粧品、医薬品等の分野において用いられる抗酸化活性を有する新規な１，７−ビス（４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル）−１Ｅ−ヘプタン−３，５−ジオール、及び、その製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、活性酸素が老化、疾病等の人体に様々な悪影響を及ぼすことが明らかになってきたので、抗酸化活性物質の飲食品、化粧品、医薬品等の分野への応用技術に注目が集まっている。
【０００３】
一方、ウコン（Ｃｕｒｃｕｍａ ｌｏｎｇａ Ｌ．、ショウガ科）根茎に含有されるクルクミンは、抗酸化活性等の様々な生理活性を有しているので、飲食品、化粧品、医薬品等の分野において注目されている。
【０００４】
一般的に、天然有機化合物の誘導反応には化学的手法が用いられているが、既に、化学的手法によって製造された数多くのクルクミン誘導体（特許文献１，２）が報告されている。しかしながら、化学的手法による天然有機化合物の製造においては、その天然有機化合物の製造に用いられる種々の有機溶剤、試薬等の物質が環境に悪影響を及ぼすところ、水、栄養素及び無機塩のみを用いる微生物変換反応おいては、有機溶剤、試薬等の物質が環境へ悪影響を及ぼすことはないので、微生物変換反応は、その特異な反応性と合わせて、近年注目を集めている。
【０００５】
ウコンの根茎に含有されるクルクミンは、微量でも黄色を示すので、皮膚化粧品等には用いることが難しく、そのために、その応用分野に制限がある、という問題があった。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】特開平５−２５５０６１号公報
【特許文献２】特開２００２−１５５００９号公報
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】Ｕｅｈａｒａ，Ｓ．，Ｙａｓｕｄａ，Ｉ．，Ａｋｉｙａｍａ，Ｋ．，Ｍｏｒｉｔａ，Ｈ．，Ｔａｋｅｙａ，Ｋ．，Ｉｔｏｋａｗａ，Ｋ．，Ｃｈｅｍｉｃａｌ ＆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｂｕｌｌｅｔｉｎ、３５巻８号、３２９８−３３０４頁、１９８７年
【非特許文献２】Ｋｉｋｕｚａｋｉ，Ｈ．，Ｕｓｕｇｕｃｈｉ，Ｊ．，Ｎａｋａｔａｎｉ，Ｎ．，Ｃｈｅｍｉｃａｌ ＆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｂｕｌｌｅｔｉｎ、３９巻１号、１２０−１２２頁、１９９１年
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明は、かかる問題を解決することを目的としている。
【０００９】
即ち、本発明は、無色を示す抗酸化活性を有する新規な１，７−ビス（４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル）−１Ｅ−ヘプタン−３，５−ジオール、及び、その製造方法を提供することを目的としている。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
請求項１に記載された発明は、上記目的を達成するために、次の式（１）
【化１】
で示される１，７−ビス（４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル）−１Ｅ−ヘプタン−３，５−ジオールである。
【００１１】
請求項２に記載された発明は、
（イ）ウコン根茎の小片を滅菌した後オートミール麦芽エキス寒天（ＣＭＭＡ）培地上において生育させた糸状菌コロニーを分離してジアポルテ（Ｄｉａｐｏｒｔｈｅ）属を得る工程、
（ロ）前記ジアポルテ属を液体培地中において培養する工程、
（ハ）前記ジアポルテ属を培養した液体培地にクルクミンのメタノール溶液を添加して、さらに、回転振とう培養する工程、
（ニ）前記回転振とう培養した菌体を含む全培養液を、ホモジネーターで粉砕した後、水−クロロホルム系の溶剤で分配操作してクロロホルム移行部を得る工程、
（ホ）前記クロロホルム移行部を減圧下においてその溶媒を留去する工程、及び、
（ヘ）前記クロロホルム移行部をシリカゲルカラムクロマトグラフィーを用いて分離精製することにより１，７−ビス（４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル）−１Ｅ−ヘプタン−３，５−ジオールを得る工程
を順次有することを特徴とする１，７−ビス（４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル）−１Ｅ−ヘプタン−３，５−ジオールの製造方法である。
【発明の効果】
【００１２】
請求項１に記載された発明によれば、微量でも無色を示す抗酸化活性を有する新規な１，７−ビス（４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル）−１Ｅ−ヘプタン−３，５−ジオールを提供することができる。
【００１３】
請求項２に記載された発明によれば、水、栄養素及び無機塩のみを用いる微生物変換反応によって、ネオヘキサヒドロクルクミンを製造するので、有機溶剤、試薬等の物質が環境へ悪影響を及ぼすこと無く、微量でも無色を示す抗酸化活性を有する新規な１，７−ビス（４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル）−１Ｅ−ヘプタン−３，５−ジオールの製造方法を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１】ウコン内生菌（ジアポルテ属糸状真菌）によるクルクミン培養液のクロロホルム移行部を高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）で解析して得たクロマトグラムを示す。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
本発明者らは、ウコン根茎から内生菌としてジアポルテ（Ｄｉａｐｏｒｔｈｅ）属糸状真菌（１．微生物の識別の表示：ＣＬＯ−１３、２．受託番号：ＮＩＴＥ Ｐ−７８９、３．受領日：２００９年７月３１日）を分離して、そのジアポルテ属糸状真菌によるクルクミンの変換反応を試みたところ、前記ジアポルテ属糸状真菌が、クルクミンを次の一般式（１）
【化２】
で表される無色を示す抗酸化活性を有する新規な１，７−ビス（４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル）−１Ｅ−ヘプタン−３，５−ジオールに変換することを突き止めて本発明を完成するに至った。
【００１６】
本発明者らは、屋久島産ウコン根茎の小片を、水道水で表面洗浄した後、７５％エタノール水溶液で１分間、５．３％次亜塩素酸ナトリウム水溶液で５分間、さらに、７５％エタノール水溶液で０．５分間表面滅菌した。次に、クリーンベンチ内で自然乾燥させ、滅菌したカッターで両端を切り落とした後、縦に２つに分割し、クロラムフェニコール（０．０５ｍｇ／ｍｌ）を含むオートミール麦芽エキス寒天（ＣＭＭＡ）培地上に置いた。ＣＭＭＡ培地上に生育してきた糸状菌コロニーの分離操作を繰り返し行い、今回用いた糸状菌を得た。本糸状菌を、ポテト−デキストロース−観点（ＰＤＡ）培地上で生育させたところ、白色の菌糸が前記培養地の表面に成長してきた後、それらの菌糸の一部が黄色に変色した。その際、培地部分（裏面）は、ところどころ黒色化したが、前記菌による胞子の形成は確認されなかった。そこで、本発明者らは、分類学上の位置づけを決定するために、国際塩基配列データベース（ＤＤＢＪ／ＧｅｎＢａｎｋ／ＥＭＢＬ）の相同性検索プログラムＦＡＳＴＡを使用して、同塩基配列を比較検索したところ、Ｄｉａｐｏｒｔｈｅ ｖｉｔｉｃｏｌａ（ＥＦ１５５４９０）と９８％のシミラリティを示すことが明らかになった。そして、さらに系統樹解析を行った結果、（Ｄｉａｐｏｒｔｈｅ）属糸状真菌（１．微生物の識別の表示：ＣＬＯ−１３、２．受託番号：ＮＩＴＥ Ｐ−７８９、３．受領日：２００９年７月３１日）であることが判明した。
【００１７】
ウコン（Ｃｕｒｃｕｍａ ｌｏｎｇａ Ｌ．、ショウガ科）根茎から抽出されたされたクルクミンは、抗酸化活性等の様々な生理活性を有しているので、飲食品、化粧品、医薬品等の分野において使用されているが、前記クルクミンは、微量でも黄色を示すので、その使用分野が制限され、そのために、その使用量は増加していない。
【００１８】
本発明の新規な１，７−ビス（４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル）−１Ｅ−ヘプタン−３，５−ジオールは、無色を示し、しかも、抗酸化活性を有しているので、化粧品、食品、医薬等の分野において用いることができ、そのために、１，７−ビス（４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル）−１Ｅ−ヘプタン−３，５−ジオールの使用量の拡大が期待される。
【００１９】
本発明の１，７−ビス（４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル）−１Ｅ−ヘプタン−３，５−ジオールは、
（イ）ウコン根茎の小片を滅菌した後オートミール麦芽エキス寒天（ＣＭＭＡ）培地上に置いて生育させた状菌コロニーを分離してジアポルテ（Ｄｉａｐｏｒｔｈｅ）属を得る工程、
（ロ）前記ジアポルテ属を液体培地中において培養する工程、
（ハ）前記ジアポルテ属を培養した液体培地にクルクミンのメタノール溶液を添加して、さらに、回転振とう培養する工程、
（ニ）前記回転振とう培養した菌体を含む全培養液を、ホモジネーターで粉砕した後、水−クロロホルム系の溶剤で分配操作してクロロホルム移行部を得る工程、
（ホ）前記クロロホルム移行部を減圧下においてその溶媒を留去する工程、及び、
（ヘ）前記クロロホルム移行部をシリカゲルカラムクロマトグラフィーを用いて分離精製することによりネオヘキサヒドロクルクミンを得る工程
を順次経て製造される。
【００２０】
本発明の新規な１，７−ビス（４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル）−１Ｅ−ヘプタン−３，５−ジオールは、無色を示す抗酸化活性剤として有用である。それ故、本発明の新規な１，７−ビス（４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル）−１Ｅ−ヘプタン−３，５−ジオールは、これを皮膚化粧料、頭髪化粧料、又は、食品に０．０１〜１０重量％の割合で配合することができる。
【実施例】
【００２１】
（実施例１）
１．ウコン根茎から植物内生菌の分離
屋久島産ウコン根茎の小片を、水道水で表面洗浄した後、７５％エタノール水溶液で１分間、５．３％次亜塩素酸ナトリウム水溶液で５分間、さらに、７５％エタノール水溶液で０．５分間表面滅菌した。この滅菌したウコン根茎の小片をクリーンベンチ内で自然乾燥させ、滅菌したカッターで両端を切り落とした後、縦に２つに分割し、これらをクロラムフェニコール（０．０５ｍｇ／ｍｌ）を含むオートミール麦芽エキス寒天（ＣＭＭＡ）培地上に置いた。前記ＣＭＭＡ培地上に生育してきた白色の糸状真菌コロニーの分離操作を繰り返し行って糸状真菌を得た。このようにして得た糸状真菌は、リボソームＤＮＡ内のＩＴＳ領域の塩基配列解析により、ジアポルテ（Ｄｉａｐｏｒｔｈｅ）属糸状真菌（１．微生物の識別の表示：ＣＬＯ−１３、２．受託番号：ＮＩＴＥ Ｐ−７８９、３．受領日：２００９年７月３１日）であることが判明した。
【００２２】
２．クルクミンのジアポルテ属糸状真菌変換
前記ウコン根茎の小片から得たジアポルテ属糸状真菌を２％グルコース−酵母抽出物−ペプトン液体培地（２００ｍｌ）中において２８℃で７日間培養した後、前記液体培地にクルクミンのメタノール溶液１０ｍｌ（クルクミン含有量２０ｍｇ）を添加して、さらに、４８時間（２日間）回転振とう（９０ｒｐｍ）培養を行った。この回転振とう培養を行ったジアポルテ属糸状真菌体を含む培養液全量をホモジネーションした後、水−クロロホルム系で分配操作してクロロホルム層を形成し、このクロロホルム層を減圧下に保持して、クロロホルム移行部（３８ｍｇ）を得た。次に、前記クロロホルム移行部をシリカゲルカラムクロマトグラフィー［シリカゲル６０（２３０−４００メッシュ、メルク社製）、ヘキサン：クロロホルム：エタノール＝１：９：０５］、高速液体クロマトグラフィ−（ＨＰＬＣ）［分離条件；固定相Ｃａｐｃｅｌｌ Ｐａｋ Ｃ１８ ＵＧ１２０（４．６ｍｍ×２５０ｍｍ、資生堂社製）、移動層；アセトニトリル：水＝２２：７８、流速；１．０ｍｌ／ｍｉｎ、カラム温度；４０℃、及び、示差屈折率（ＲＩ）検知器］を用いた分離精製を行い、１，７−ビス（４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル）−１Ｅ−ヘプタン−３，５−ジオール（５．４ｍｇ，収率２７％）を得た。
【００２３】
図１は、ウコン内生菌（ジアポルテ属糸状真菌）によるクルクミン培養液のクロロホルム移行部を高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）で解析して得たクロマトグラムを示す。前記ＨＰＬＣの分析条件は、次に示すものとした。
【００２４】
高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）の分析条件
固定相；固定相Ｃａｐｃｅｌｌ Ｐａｋ Ｃ１８ ＵＧ１２０（４．６ｍｍ×２５０ｍｍ、資生堂社製
移動層；Ａ（水），Ｂ（アセトニトリル）
Ａ：Ｂ＝８０：２０→Ａ：Ｂ＝３０：７０（３０分、リニアグラジエント）
流速；１．０ｍｌ／ｍｉｎ
カラム温度：４０℃
検出波長；２６０ｎｍ
【００２５】
図１に示されているように、前記ウコン内生菌［ジアポルテ属糸状真菌（１．微生物の識別の表示：ＣＬＯ−１３、２．受託番号：ＮＩＴＥ Ｐ−７８９、３．受領日：２００９年７月３１日］によるクルクミン培養液のクロロホルム移行部からは、ネオヘキサクルクミン（下記に示す化学構造解析によって１，７−ビス（４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル）−１Ｅ−ヘプタン−３，５−ジオールであることが判明した。）が主として生成しているが、前記クロロホルム移行部には、次の式（２）で示されるテトラヒドクルクミン（特許文献１を参照。）、次の式（３）で示される（３Ｓ，５Ｓ）−１，７−ビス（４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル）ヘプタン−３，５−ジオール（非特許文献１を参照。）、及び、次の式（４）で示される（３Ｓ，５Ｒ）−１，７−ビス（４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル）ヘプタン−３，５−ジオール（非特許文献２を参照。）を副生していることがわかる。
【００２６】
【化３】
【００２７】
【化４】
【００２８】
【化５】
【００２９】
３．前記ネオヘキサクルクミンの化学構造解析
前記ネオヘキサヒドロクルクミンは、負の旋光性［α］D−４．３°（エタノール中）を示し、高分解能負高速原子衝突質量分析（ｎｅｇ．ＦＡＢ−ＭＳ）スペクトルから分子組成Ｃ21Ｈ26Ｏ6 が判明した。また、赤外線吸収（ＩＲ）スペクトルより、ヒドロキシル基（３３５０ｃｍ-1）及び芳香環（１５９９，１５１６ｃｍ-1）の存在、及び紫外線吸収（ＵＶ）スペクトルから芳香環［２６９ｎｍ（ε＝１５，０００），２８８ｎｍ（ｓｈ），３０２ｎｍ（ｓｈ），３１３ｎｍ（ｓｈ）］の存在が確認された。さらに、炭素−１３核磁気共鳴（13Ｃ−ＮＭＲ）スペクトルにおいて２１個の炭素シグナルが観測され、さらに、分極移動による無歪シグナル増感法（ＤＥＰＴ）スペクトルから、６個の４級炭素、１０個の３級炭素、３個の２級炭素及び２個のメトキシル炭素の存在が確認された。一方、プロトン核磁気共鳴（1Ｈ−ＨＭＲ）、1Ｈ−1Ｈ２次元相関（1Ｈ−1Ｈ ＣＯＳＹ）及び1Ｈ−13Ｈ２次元相関（ＨＭＱＣ）スペクトルの解析から、１位に二置換トランス二重結合、３位と５位にそれぞれヒドロキシル基を有する７個の炭素鎖の両端に、２個の三置換芳香環の存在が確認された。これらの事実は、1Ｈ−13Ｈロングレンジ２次元相関（ＨＭＢＣ）スペクトルの解析からもよく支持された。
【００３０】
以上のことから、前記ネオヘキサヒドロクルクミンは、次の式（５）
【化６】
で示される１，７−ビス（４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル）−１Ｅ−ヘプタン−３，５−ジオールであることが判明した。
【００３１】
４．前記１，７−ビス（４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル）−１Ｅ−ヘプタン− ３，５−ジオールの物理化学データ
（１）無色結晶粉末、融点１５７−１５８℃（再結晶溶媒：酢酸エチル）
（２）比旋光度：［α］D−４．３°（ＥｔＯＨ中、２４℃）
（３）赤外吸収スペクトル：ＩＲ（ＫＢｒ）ｃｍ-1：３３５０，１５９９，１５１６．
紫外吸収スペクトル：ＵＶλmax（ＥｔＯＨ）ｎｍ（ε）：２６９（１５，００ ０）、２８８（ｓｈ），３０２（ｓｈ），３１３（ｓｈ）
（４）1Ｈ −及び13Ｃ−核磁気共鳴スペクトル（ＮＭＲ）：次の表１に示される。
（５）Ｎｅｇ．ＦＡＢ−ＭＳｍ／ｚ：３７３［Ｍ−Ｈ］-．
（６）高分解能ｎｅｇ．ＦＡＢ−ＭＳｍ／ｚ：Ｃ21Ｈ25Ｏ6の計算質量数：３７３．１ ６５２．
（７）高分解能ｎｅｇ．ＦＡＢ−ＭＳｍ／ｚ：Ｃ21Ｈ25Ｏ6の観測質量数：３７３．１ ６６３．
【００３２】
【表１】
【００３３】
５．前記１，７−ビス（４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル）−１Ｅ−ヘプタン− ３，５−ジオールの抗酸化活性
前記１，７−ビス（４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル）−１Ｅ−ヘプタン−３，５−ジオールの抗酸化活性抗酸化活性の評価法は以下の通りである。
【００３４】
（１）中性ラジカル（ＤＰＰＨ；１，１−ｄｉｐｈｅｎｙｌ−２−ｐｉｃｒｙｌｈｙｄｒａｚｙｌ）の消去活性
適当量の被検物質をエタノール（６００μｌ）に溶解した後、２５０ｍＭ酢酸緩衝液（ｐＨ５．５，６００μｌ）を加え、３０℃で５分間保持した。保温後、２５０ｍＭ ＤＰＰＨエタノール溶液（３００μｌ）を加え、３０℃で被検物質によるラジカル除去反応を行った。３０分後、この反応液を５１７ｎｍで吸光度測定を行った（Ａ）。さらに過剰のＤＰＰＨを除去するために３ｍｇ／ｍｌのＢＨＴ（２，６−ジ−ｔ−ブチル−４−メチルフェノール）エタノール溶液を１５μｌ加え、３０℃で３０分間保持した後、再び５１７ｎｍで吸光度測定を行った（Ｂ）。ラジカル消去活性は、次の数式
【数１】
により求めた。なお、コントロールとは、被検物質無添加で行って得られた吸光度である。
【００３５】
（２）ラット肝細胞のミクロソーム及びミトコンドリアの脂質酸化阻害活性
ラット肝細胞のミクロソーム画分及びミトコンドリア画分の脂質酸化阻害活性試験は、Ｈａｒａｇｕｃｈｉら、［プランタ メディカ（Ｐｌａｎｔａ Ｍｅｄｉｃａ）、６２巻、２１７頁から２２１頁、１９９６年］の方法により行った。
【００３６】
１）ミクロソーム
調製したミクロソーム懸濁液（蛋白質含量２．０ｍｇ、９００μｌ）に適当量の被検物質を添加した後、１００μｌの１ｍＭ ＮＡＤＰＨを加え３７℃で１５分間放置した。そして、９０μｌの２％ＢＨＴを加えた後、２ｍｌの１５％ｗ／ｖＴＣＡ（トリクロロ酢酸）／０．３７５％ＴＢＡ（チオバルビツール酸）／０．２５ＮＨＣｌ溶液を加え、１００℃で１５分間反応させた。この反応液を遠心分離し、その上澄みについて５３５ｎｍで吸光度測定を行った。コントロール（被検物質無添加）に対するＴＢＡ比は、過酸化阻害率として示した。
【００３７】
２）ミトコンドリア
調製したミクロソーム懸濁液（蛋白質含量２．０ｍｇ、９００μｌ）に適当量の被検物質を添加した後、１００μｌの１ｍＭ ＮＡＤＨを加え３７℃で５分間放置した。そして、前記ミクロソーム懸濁液に９０μｌの２％ＢＨＴを加えた後、２ｍｌの１５％ｗ／ｖＴＣＡ（トリクロロ酢酸）、０．３７５％ＴＢＡ（チオバルビツール酸）、及び、０．２５ＮＨＣｌ溶液を加えて、これらを１００℃で１５分間反応させた。この反応液を遠心分離し、その上澄みについて５３５ｎｍで吸光度測定を行った。コントロール（被検物質無添加）に対するＴＢＡ比を過酸化阻害率として示した。
【００３８】
測定結果は、次の表２に示される。
【００３９】
【表２】
【００４０】
表２から、前記１，７−ビス（４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル）−１Ｅ−ヘプタン−３，５−ジオールネオヘキサヒドロクルクミンがクルクミンと同等の抗酸化活性を示すことが明らかになった。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
次の式（１）
【化１】
で示される１，７−ビス（４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル）−１Ｅ−ヘプタン−３，５−ジオール。
【請求項２】
（イ）ウコン根茎の小片を滅菌した後オートミール麦芽エキス寒天（ＣＭＭＡ）培地上に置いて生育させた状菌コロニーを分離してジアポルテ（Ｄｉａｐｏｒｔｈｅ）属を得る工程、
（ロ）前記ジアポルテ属を液体培地中において培養する工程、
（ハ）前記ジアポルテ属を培養した液体培地にクルクミンのメタノール溶液を添加して、さらに、回転振とう培養する工程、
（ニ）前記回転振とう培養した菌体を含む全培養液を、ホモジネーターで粉砕した後、水−クロロホルム系の溶剤で分配操作してクロロホルム移行部を得る工程、
（ホ）前記クロロホルム移行部を減圧下においてその溶媒を留去する工程、及び、
（ヘ）前記クロロホルム移行部をシリカゲルカラムクロマトグラフィーを用いて分離精製することによりネオヘキサヒドロクルクミンを得る工程
を順次有することを特徴とする１，７−ビス（４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル）−１Ｅ−ヘプタン−３，５−ジオールの製造方法。
【請求項１】
次の式（１）
【化１】
で示される１，７−ビス（４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル）−１Ｅ−ヘプタン−３，５−ジオール。
【請求項２】
（イ）ウコン根茎の小片を滅菌した後オートミール麦芽エキス寒天（ＣＭＭＡ）培地上に置いて生育させた状菌コロニーを分離してジアポルテ（Ｄｉａｐｏｒｔｈｅ）属を得る工程、
（ロ）前記ジアポルテ属を液体培地中において培養する工程、
（ハ）前記ジアポルテ属を培養した液体培地にクルクミンのメタノール溶液を添加して、さらに、回転振とう培養する工程、
（ニ）前記回転振とう培養した菌体を含む全培養液を、ホモジネーターで粉砕した後、水−クロロホルム系の溶剤で分配操作してクロロホルム移行部を得る工程、
（ホ）前記クロロホルム移行部を減圧下においてその溶媒を留去する工程、及び、
（ヘ）前記クロロホルム移行部をシリカゲルカラムクロマトグラフィーを用いて分離精製することによりネオヘキサヒドロクルクミンを得る工程
を順次有することを特徴とする１，７−ビス（４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル）−１Ｅ−ヘプタン−３，５−ジオールの製造方法。
【図１】
【公開番号】特開２０１１−５１９５３（Ｐ２０１１−５１９５３Ａ）
【公開日】平成２３年３月１７日（２０１１．３．１７）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００９−２０４２２６（Ｐ２００９−２０４２２６）
【出願日】平成２１年９月４日（２００９．９．４）
【新規性喪失の例外の表示】特許法第３０条第１項適用申請有り 平成２１年３月５日 社団法人日本薬学会第１２９年会組織委員会発行の「日本薬学会第１２９年会 要旨集２」に発表
【出願人】（５０１１０５３８１）株式会社老舗恵命堂 (1)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２３年３月１７日（２０１１．３．１７）
【国際特許分類】
【出願日】平成２１年９月４日（２００９．９．４）
【新規性喪失の例外の表示】特許法第３０条第１項適用申請有り 平成２１年３月５日 社団法人日本薬学会第１２９年会組織委員会発行の「日本薬学会第１２９年会 要旨集２」に発表
【出願人】（５０１１０５３８１）株式会社老舗恵命堂 (1)
【Ｆターム（参考）】
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