２−メチル−５−イミド−ベンゾ［ｄ］［１，３］オキサジニル［５−ｂ］ピラゾ化合物及びその調製方法並びに用途
本発明は２−メチル−５−イミド−ベンゾ［ｄ］［１，３］オキサジニル［５−ｂ］ピラゾ化合物及びその調製方法並びに用途を開示した。本発明の２−メチル−５−イミド−ベンゾ［ｄ］［１，３］オキサジニル［５−ｂ］ピラゾ化合物は下記式（ＩＩ）のような構造あり、該化合物またはその薬学的に受容可能な塩は、心脳血管病気の治療または予防用薬物の調製に応用できる。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は薬物化学分野に属し、具体的に２−メチル−５−イミド−ベンゾ［ｄ］［１，３］オキサジニル［５−ｂ］ピラゾ化合物及びその調製方法並びに用途に関する。
【背景技術】
【０００２】
血栓形成は、脳卒中などのような、弊害を生じ致死性の高い心脳血管病気の病理学的基礎で、血管、血液、血流のいろいろな要因に係る病変プロセスであり、血栓形成は凝血システム、内皮細胞機能及び細胞接着機能異常などに関する。抗血栓薬物は抗凝血薬、抗血小板薬及び内皮細胞を作用ターゲットとする薬物を含む。現在臨床的に常用されている抗血小板薬物としては、アスピリン、チクロピジン及びクロピドグレル、血小板ＧＰIIｂ／１１Iａ受容体拮抗剤である単クローン抗体アブシキシマブ（ａｂｃｉｘｉｍａｂ）、エプチフィバチド（ｅｐｔｉｆｉｂａｔｉｄｅ）のような合成ペプチド類受容体拮抗剤、チロフィバン（ｔｉｒｏｆｉｂａｎ）のような非ペプチド類容体拮抗剤、及び非ペプチド擬似体（Ｌａｎｉｆｉｂａｎ）が挙げられる。
【０００３】
脳卒中の発生後、閉塞血管が短期間内に再開通して脳機能が回復する可能性はあるが、一定時間以上の持続虚血であった場合は不可逆的な脳細胞損傷に至る恐れがある。不可逆的な損傷の虚血中心部の周囲は生存可能なイケスミック・ペナンプラであり、一定の時間後例え血行が再開されても一部分は遅発性神経細胞死を発生し、興奮性アミノ酸の放出、神経細胞のカルシウム流入、ラジカル発生などの各種の相関性因子を引き起こし、特にラジカルの発生は脳機能障害を引き起こす主要な要因の１つであると認められる。虚血状態時、アラキドン酸代謝系の亢進はラジカルの発生を増加させ、細胞膜リン脂質の不飽和脂肪酸が過酸化され細胞膜の損傷を招き、ともに脳細胞の機能障害を悪化させる。
【０００４】
脳神経保護は脳卒中を治療する重要な一環であり、日本の最新の脳卒中治療ガイドラインに初めてイー・ビー・エム（根拠に基づく医療ｅｖｉｄｅｎｃｅ−ｂａｓｅｄ ｍｅｄｉｃｉｎｅ、ＥＢＭ）の根拠に基づいて脳保護薬エダラボンの使用が推薦され、脳卒中の治療に新たな助かる望みを提供した。脳梗塞急性期の治療は、脳保護作用を有する薬物エダラボンの使用が推薦される。臨床研究は、エダラボンは脳梗塞急性期（発生後７２ｈ以内）患者の予後改善に対して有効であり、特に発病２４ｈ以内に治療効果がより顕著であることを示している。
【０００５】
【化１】
（エダラボン）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明の目的は薬用価値を有する化合物２−メチル−５−イミド−ベンゾ［ｄ］［１，３］オキサジニル［５−ｂ］ピラゾまたはその薬学的に受容可能な塩を提供することにある。
【０００７】
本発明のもう１つの目的は前記化合物の調製方法を提供することにある。
【０００８】
本発明の更なる目的は前記化合物またはその薬学的に受容可能な塩の用途を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明の目的は以下の手段によって達成できる。
【００１０】
式（ＩＩ）の構造を有する化合物２−メチル−５−イミド−ベンゾ［ｄ］［１，３］オキサジニル［５−ｂ］ピラゾまたはその薬学的に受容可能な塩である。
【００１１】
【化２】
【００１２】
前記薬学的に受容可能な塩は、前記化合物と一般薬学的に常用される酸またはアルカリとの反応によって生成される、その他の副作用を有せず、且つ化合物の物理化学的な性能（例えば水溶性など）を高めることができる一般意義上の塩をいう。そのうち、一般的に前記の酸またはアルカリは塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸、琥珀酸、マレイン酸、フマル酸、酢酸、クエン酸、酒石酸、安息香酸、ベンゼンスルホン酸、ナフタレンスルホン酸、水酸化ナトリウム、炭酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウムまたは水酸化カリウムなどから選択される。
【００１３】
式ＩＩ化合物の調製方法は、化合物Ｍをアルカリ性条件下でアセト酢酸エステルと反応させて化合物Ｎを調製したのち、化合物Ｎを塩化水素ガスの作用によって閉環されることによって式ＩＩ化合物を得る。その反応式は以下の通りである。
【００１４】
【化３】
【００１５】
ステップ１の反応において、反応溶媒はエタノールまたはメタノールなどのようなアルコールを選択してもよく、アルカリは通常ナトリウムメトキシド、ナトリウムエトキシドなどのようなナトリウムアルコキシドを選択し、反応温度は４０〜８０℃である。ステップ２の反応の溶媒はジクロロメタンまたはテトラヒドロフランで、反応温度は２０〜４０℃である。
【００１６】
本発明の化合物またはその薬学的に受容可能な塩は製薬分野、例えば心脳血管病気の治療または予防用薬物の分野に応用できる。動物薬効実験は、本発明の化合物２−メチル−５−イミド−ベンゾ［ｄ］［１，３］オキサジニル［５−ｂ］ピラゾ（以下ＴＲと略称する）は用量依存的に、脳虚血再潅流動物の神経欠陥症状を顕著に改善し、脳梗塞の面積を縮小し、脳損傷の程度を低減し、脳水腫を軽減し、損傷した脳組織の脂質過酸化を抑制することができ、最小有効量が３ｍｇ／ｋｇであることを示している。
【図面の簡単な説明】
【００１７】
【図１】ＤＰＰＨの標準曲線図である。
【図２】抗ＤＰＰＨラジカル能力と反応時間との関係図である。
【図３】神経欠陥症状に対するＴＲの影響の柱状グラフである（図中、神経欠陥点数は、平均値Ｘ±ＳＤで表わす。＊Ｐ＜０．０５（偽手術群との比較） ＃Ｐ＜０．０５（モデル群との比較））。
【図４】脳梗塞面積に対するＴＲの影響である（図中、脳梗塞面積は、平均値Ｘ±ＳＤで表す。＊Ｐ＜０．０５（偽手術群との比較） ＃Ｐ＜０．０５（モデル群との比較） ＆Ｐ＜０．０５（低用量群との比較））。
【図５】脳梗塞面積に対するＴＲの影響の柱状グラフである（図中、脳梗塞面積は、平均値Ｘ±ＳＤで表す。＊Ｐ＜０．０５（偽手術群との比較） ＃Ｐ＜０．０５（モデル群との比較） ＆Ｐ＜０．０５（低用量群との比較）））。
【図６】神経欠陥症状に対するＴＲの影響の柱状グラフである（図中、神経欠陥（％）は、平均値Ｘ±ＳＤで表わす。＊Ｐ＜０．０５（偽手術群との比較）。＃Ｐ＜０．０５（モデル群との比較））。
【図７】脳含水量に対するＴＲの影響の柱状グラフである（図中、脳含水量変化値（％）は、平均値Ｘ±ＳＤで表す。＊Ｐ＜０．０５（偽手術群との比較） ＃Ｐ＜０．０５（モデル群との比較））。
【図８】脳組織ＳＯＤ（Ｕ／ｍｇｐｒｏｔ）活性に対するＴＲの影響の柱状グラフである（図中、ＳＯＤ値は、平均値Ｘ±ＳＤで表す。＊Ｐ＜０．０５（偽手術群との比較） ＃Ｐ＜０．０５（モデル群との比較）））。
【図９】脳組織ＭＤＡ（ｎｍｏｌ／ｍｇｐｒｏｔ）含量に対するＴＲの影響の柱状グラフである（図中、ＭＤＡ値は、平均値Ｘ±ＳＤで表す。＊Ｐ＜０．０５（偽手術群との比較）＃Ｐ＜０．０５（モデル群との比較）））。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
（実施例１）
２−メチル−５−イミド−ベンゾ［ｄ］［１，３］オキサジニル［５−ｂ］ピラゾ（化合物ＩＩ）の調製
【００１９】
２−ヒドラジノベンゾニトリル塩酸塩の調製
【００２０】
【化４】
【００２１】
２０００ｍｌの三角フラスコに濃塩酸６００ｍｌ、砕氷５００ｍｌ、２−アミノベンゾニトリル５９ｇ（０．５ｍｏｌ）を加え、十分に溶解するまで撹拌する。氷塩浴で−７〜−３℃にし、亜硝酸ナトリウム溶液３４．５ｇ（０．５ｍｏｌ）を滴下して水１５０ｍｌに溶解する。滴下完了後、１０ｍｉｎ撹拌してオレンジイエローの澄明な溶液を得、使用するまで保存する。
【００２２】
５０００ｍｌの三角フラスコに塩化第一スズ３５０ｇ、濃塩酸１０００ｍｌを加え、十分に溶かすまで撹拌し、氷塩浴で−５℃にし、前記ジアゾニウム塩溶液を滴下して白色の沈殿を生成する。滴下完了後、続けて２ｈ撹拌し、ろ過を行い、ケーキを大量のＮａＣｌ飽和溶液で洗浄を行い、さらに１５％冷塩酸で洗浄し、乾燥を行い、２−ヒドラジノベンゾニトリル塩酸塩３６ｇを得る。
【００２３】
１−（２−シアノフェニル）−３−メチルピラゾール−５−ケトンの調製
【００２４】
【化５】
【００２５】
２５０ｍｌの反応瓶に塩酸２−ヒドラジノベンゾニトリル８．５ｇ（０．０５ｍｏｌ）、アセト酢酸メチル６ｇ（０．０５ｍｏｌ）、メタノール１００ｍｌを加え、撹拌しながら５０％ナトリウムメトキシド５．５ｇ（０．０５１ｍｏｌ）を加えてメタノール５０ｍｌの溶液に溶解する。１０ｍｉｎ撹拌した後、６ｈ加熱還流反応し、熱いうちにろ過を行い、メタノール２０ｍｌで固体を洗浄し、メタノールを回収して体積約５０ｍｌを残し、撹拌しながら氷水２００ｍｌに注入し、固体を析出させ、ろ過水を洗浄して淡黄色固体７ｇを得る。
【００２６】
２−メチル−５−イミド−ベンゾ［ｄ］［１，３］オキサジニル［５−ｂ］ピラゾ（化合物ＩＩ）の調製
【００２７】
【化６】
【００２８】
１−（２−シアノフェニル）−３−メチルピラゾール−５−ケトン２０ｇ（０．１ｍｏｌ）、無水テトラヒドロフラン２０ｍｌに、撹拌下で飽和するまで乾燥塩化水素ガスを注入し、室温で撹拌を行って一夜反応させ、乾燥まで真空濃縮を行う。無水テトラヒドロフラン１００ｍｌ、無水酢酸ナトリウム１０ｇを加えて室温で１ｈ撹拌し、ろ過を行い、テトラヒドロフランを真空濃縮し、酢酸エチルを再結晶させ、類白色結晶１３ｇを得る。
【００２９】
Ｍ／Ｚ［Ｍ＋１］＋，２００；［Ｍ＋Ｎａ］＋，２２２．
１ＨＮＭＲ： δ１３．２６９３ｐｐｍ（ＮＨ）；８．０２１９ｐｐｍ（１Ｈ，ｄ）；７．６１１ｐｐｍ（１Ｈ，ｄ）；７．４５９ｐｐｍ（１Ｈ，ｓ）；７．０９４１ｐｐｍ（１Ｈ，ｓ）；５．９５５５ｐｐｍ（１Ｈ，ｓ）；２．４６７（３Ｈ，ｓ）．
１３ＣＮＭＲ： δ１５４．５１７２ｐｐｍ；１５４．２９７３ｐｐｍ；１４２．５８９ｐｐｍ；１４０．００８４ｐｐｍ；１３６．０４９４ｐｐｍ；１２４．４８７８ｐｐｍ；１２３．４３９４ｐｐｍ；１１３．０４３４ｐｐｍ；１０９．６６３７ｐｐｍ；１０２．６６２２ｐｐｍ；１９．７７３２ｐｐｍ．
【００３０】
（抗ＤＰＰＨラジカル試験）
ジフェニルピクリルヒドラジルラジカル（ＤＰＰＨ）分光光度法は抗酸化剤をスクリーニングする簡単な方法である。その原理は５１７ｎｍにおけるＤＰＰＨ溶液の特性吸収ピークを利用し、ラジカル除去剤が存在した場合に、ラジカル除去剤とＤＰＰＨとが単電子対形成することによって吸収を徐々に消去させる。その退色の程度はそれが受け取った電子数と定量関係を持っており、サンプルの抗酸化活性は除去されたＤＰＰＨの量によって評価されることができるため、分光法によって定量分析を行うことができる。
【００３１】
ＤＰＰＨ検量線
ＤＰＰＨを精密に量り、１００ｍｌのフラスコに入れ、且つ９５％のエタノールで１００ｍｌまで定容し、５１７ｎｍにおける吸収値（Ａ）を測定する。
【００３２】
表１．異なる濃度のＤＰＰＨ溶液の吸収値
【００３３】
【表１】
【００３４】
ＤＰＰＨ検量線は図１に示す。その一次方程式は：ｙ＝０．２１９ｘ−０．０２８５；ｒ＝０．９９９４である。
【００３５】
ＤＰＰＨ溶液の調製
ＤＰＰＨを精密に量り、１００ｍｌのフラスコに入れ、且つ９５％のエタノールで１００ｍｌまで定容し、ＤＰＰＨ溶液を調製し得る。
【００３６】
試薬溶液の調製：試薬を精密に量り、１００ｍｌのフラスコに入れ、且つ９５％のエタノール２０ｍｌに溶解した後、ｐＨを約７．５に調節し、さらに９５％のエタノールで１００ｍｌまで定容する。
【００３７】
試薬−ＤＰＰＨ溶液の吸収値の測定
ＤＰＰＨ溶液５．０ｍｌ、試薬溶液２．０ｍｌを量り取って、１０ｍｌフラスコに入れ、十分に振り室温約２５℃において所定時間で反応させ、５１７ｎｍの吸収値（Ａ）を測定する。
【００３８】
試薬のＤＰＰＨラジカル除去能力Ｅ（ｍｇＤＰＰＨ／ｍｇ）の計算式：
Ｅ（ｍｇＤＰＰＨ／ｍｇ）＝［ＤＰＰＨ濃度（ｍｇ／１００ｍｌ）×５／７−（吸収値Ａ＋０．０２８５）／０．２１９（ｍｇ／１００ｍｌ）］／［試薬濃度Ｃ（ｍｇ／１００ｍｌ）×２／７］
試薬のＤＰＰＨラジカル除去能力Ｖ（ｍｍｏｌＤＰＰＨ／ｍｍｏｌ）の計算式：
Ｖ（ｍｍｏｌＤＰＰＨ／ｍｍｏｌ）＝［Ｅ（ｍｇＤＰＰＨ／ｍｇ）］／［３９４．３２／試薬分子量］
【００３９】
【表２】
【００４０】
【表３】
【００４１】
表２及び表３中、化合物１は２−メチル−ベンゾ［ｄ］［１，３］オキサジニル［５−ｂ］ピラゾ−５−ケトンで、化合物２は２−メチル−５−イミド−ベンゾ［ｄ］［１，３］オキサジニル［５−ｂ］ピラゾ（すなわちＴＲ）で、化合物３は１−（２−カルボキシフェニル）−３−メチルピラゾール−５−ケトンである。
【００４２】
抗ＤＰＰＨラジカル能力Ｖ（ｍｍｏｌＤＰＰＨ／ｍｍｏｌ）と反応時間（ｍｉｎ）との関係は図２に示される。抗ＤＰＰＨラジカル試験結果は、３０ｍｉｎ内の試薬のＤＰＰＨ除去能力は化合物３が最大で、１つの分子の化合物３は１．９４２個の分子のＤＰＰＨラジカルを除去でき、エダラボンのＤＰＰＨラジカル除去能力よりもやや強く、１つのエダラボンは１．６５７個の分子のＤＰＰＨラジカルを除去できることを示している。化合物１及び化合物２のＤＰＰＨラジカル除去能力は反応時間と関係を持っており、反応時間の延長に伴って、化合物１及び化合物２は徐々に化合物３に加水分解されるため、ＤＰＰＨラジカル除去能力は徐々に増強され、化合物１は３０ｍｉｎ時においてＤＰＰＨラジカル除去能力が化合物３の１／８であるが、反応１５０ｍｉｎ時においてはＤＰＰＨラジカル除去能力が化合物３とほぼ同等になっている。
【００４３】
（動物薬効実験）
内頸動脈栓線法でＳＤラット中大脳動脈閉塞（Ｍｉｄｄｌｅ ｃｅｒｅｂｒａｌ ａｒｔｅｒｙ、ＭＣＡＯ）モデルを作り、脳虚血再潅流損傷を引き起こさせる。虚血再潅流した後０．５ｈ後に一回投与し、その後２ｈ毎に一回投与して総計３回投与する。脳虚血後４８ｈに神経欠陥症状を観察し、動物を屠殺して脳を取って、脳梗塞面積及び脳損傷程度を測定する。本発明の化合物２−メチル−５−イミド−ベンゾ［ｄ］［１，３］オキサジニル［５−ｂ］ピラゾ（ＴＲと略称する）を対象にし、ニモジピンを対照とする。
【００４４】
神経欠陥症状に対するＴＲの影響
神経欠陥症状の重症度の評価点数が表４及び図３に示され、モデル群は偽手術群と比べると有意差（Ｆ５,４１＝２８．０５,Ｐ＜０．００１）があり、脳虚血再潅流は重症な神経欠陥症状を引き起こすことが示されている。また、ＴＲ高投与群（Ｆ５,４１＝２８．０５,Ｐ＜０．００１）、中投与群（Ｆ５,４１＝２８．０５,Ｐ＜０．００１）、低投与群（Ｆ５,４１＝２８．０５,Ｐ＝０．００１）及びニモジピン群（Ｆ５,４１＝２８．０５,Ｐ＜０．００１）は、モデル群との比較結果、神経欠陥症状が共に顕著に軽減された。
【００４５】
【表４】
Ｘ±ＳＤ；＊Ｐ＜０．０５（偽手術群との比較） ＃Ｐ＜０．０５（モデル群との比較）
【００４６】
脳梗塞面積に対するＴＲの影響
各群の脳梗塞面積が表５及び図４に示され、モデル群は偽手術群と比べると有意差（Ｆ５,４１＝２３．３４,Ｐ＜０．００１）があり、脳虚血再潅流は顕著な脳梗塞を引き起こすことが示された。また、ＴＲ高投与群（Ｆ５,４１＝２３．３４,Ｐ＜０．００１）、中投与群（Ｆ５,４１＝２３．３４,Ｐ＜０．００１）、低投与群（Ｆ５,４１＝２３．３４,Ｐ＝０．０４４）及びニモジピン群（Ｆ５,４１＝２３．３４,Ｐ＜０．００１）では、モデル群との比較結果、脳梗塞面積が共に顕著に減少し、ＴＲ高投与群とＴＲ低投与群とを比較すると、有意差が認められる（Ｆ５,４１＝２３．３４,Ｐ＝０．００９）。
【００４７】
【表５】
Ｘ±ＳＤ；＊Ｐ＜０．０５（偽手術群との比較） ＃Ｐ＜０．０５（モデル群との比較） ＆Ｐ＜０．０５（低投与群との比較）
【００４８】
脳損傷に対するＴＲの影響
各群の脳損傷が表６及び図５に示され、モデル群は偽手術群と比べると有意差（Ｆ５,４１＝２０．５２,Ｐ＜０．００１）があり、脳虚血再潅流は顕著な脳損傷を引き起こすことが示された。また、ＴＲ高投与群（Ｆ５,４１＝２０．５２,Ｐ＜０．００１）、中投与群（Ｆ５,４１＝２０．５２,Ｐ＜０．００１）及びニモジピン群（Ｆ５,４１＝２０．５２,Ｐ＜０．００１）では、モデル群との比較結果、脳損傷の程度が共に顕著に減少した。ＴＲ高投与群とＴＲ低投与群では、有意差が認められた（Ｆ５,４１＝２０．５２,Ｐ＝０．００４）。
【００４９】
【表６】
Ｘ±ＳＤ；＊Ｐ＜０．０５（偽手術群との比較） ＃Ｐ＜０．０５（モデル群との比較）。＆Ｐ＜０．０５（低投与群との比較）。
【００５０】
神経欠陥症状の重症度の評価点数が表１及び図１に示され、モデル群は偽手術群と比べると共に有意差（Ｆ５,４１＝２８．０５,Ｐ＜０．００１）があり、脳虚血再潅流は重症な神経欠陥症状を引き起こすことが示された。また、ＴＲ高投与群（Ｆ５,４１＝２８．０５,Ｐ＜０．００１）、中投与群（Ｆ５,４１＝２８．０５,Ｐ＜０．００１）、低投与群（Ｆ５,４１＝２８．０５,Ｐ＝０．００１）及びニモジピン群（Ｆ５,４１＝２８．０５,Ｐ＜０．００１）では、モデル群との比較結果、神経欠陥症状が共に顕著に軽減された。結果は、ＴＲが脳虚血再潅流動物の神経欠陥症状を改善できることを示している。
【００５１】
【表７】
Ｘ±ＳＤ；＊Ｐ＜０．０５（偽手術群との比較） ＃Ｐ＜０．０５（モデル群との比較）
【００５２】
脳含水量に対するＴＲの影響
各群の脳含水量が表８及び図７に示され、モデル群は偽手術群と比べると有意差（Ｆ５,４２＝２０．０６,Ｐ＜０．００１）があり、脳虚血再潅流は重症な脳水腫を引き起こすことが示されている。また、ＴＲ高投与群（Ｆ５,４２＝２０．０６,Ｐ＜０．００１）、中投与群（Ｆ５,４２＝２０．０６,Ｐ＝０．０３９）及びニモジピン群（Ｆ５,４２＝２０．０６,Ｐ＝０．０３）では、モデル群と比較すると、脳含水量が顕著に減少されたが、低投与群（Ｆ５,４２＝２０．０６,Ｐ＝０．０３９）とモデル群とでは、有意差は認められなかった（Ｆ５,４２＝２０．０６,Ｐ＝０．０８６）。
【００５３】
【表８】
Ｘ±ＳＤ；＊Ｐ＜０．０５（偽手術群との比較） ＃Ｐ＜０．０５（モデル群との比較）
【００５４】
損傷した脳組織ＳＯＤ活性及びＭＤＡレベルに対するＴＲの影響
各群の脳組織ＳＯＤ活性及びＭＤＡレベルが表９及び図８、９に示され、モデル群は偽手術群と比べると有意差があり、ＭＤＡ含量が顕著に上昇し（Ｆ５,４２＝２６．９６,Ｐ＜０．００１）、ＳＯＤ活性が顕著に減少し（（Ｆ５,４２＝１７．１３,Ｐ＜０．００１）、脳虚血再潅流は損傷した脳組織脂質の過酸化を引き起こすことが示された。また、ＴＲ高投与群ではモデル群と比較すると、ＭＤＡ含量が顕著に減少し（Ｆ５,４２＝２６．９６,Ｐ＜０．００１）、ＴＲ中投与群（Ｆ５,４２＝２６．９６,Ｐ＝０．１４１）、低投与群（Ｆ５,４２＝２６．９６,Ｐ＝０．２１１）及びニモジピン群（Ｆ５,４２＝２６．９６,Ｐ＝０．９６１）では、モデル群との比較結果、有意差が認められなかった。ＴＲ高投与群はモデル群と比較すると、ＳＯＤ活性が顕著に増加した（Ｆ５,４２＝１７．１３,Ｐ＝０．００７）。ＴＲ中投与群（Ｆ５,４２＝１７．１３,Ｐ＝０．１５７）、低投与群（Ｆ５,４２＝１７．１３,Ｐ＝０．８２６）及びニモジピン群（Ｆ５,４２＝１７．１３,Ｐ＝０．４３５）とモデル群では、有意差が認められなかった。
【００５５】
【表９】
Ｘ±ＳＤ；＊Ｐ＜０．０５（偽手術群との比較） ＃Ｐ＜０．０５（モデル群との比較）
【００５６】
ＳＤラット大脳中動脈閉塞再潅流モデルの結果は、ＴＲが用量依存的に脳虚血再潅流動物の神経欠陥症状を顕著に改善し、脳梗塞の面積を縮小し、脳損傷の程度を低減し、脳水腫を軽減し、損傷した脳組織の脂質過酸化を抑制することができ、最小有効量が３ｍｇ／ｋｇであることを示している。
【技術分野】
【０００１】
本発明は薬物化学分野に属し、具体的に２−メチル−５−イミド−ベンゾ［ｄ］［１，３］オキサジニル［５−ｂ］ピラゾ化合物及びその調製方法並びに用途に関する。
【背景技術】
【０００２】
血栓形成は、脳卒中などのような、弊害を生じ致死性の高い心脳血管病気の病理学的基礎で、血管、血液、血流のいろいろな要因に係る病変プロセスであり、血栓形成は凝血システム、内皮細胞機能及び細胞接着機能異常などに関する。抗血栓薬物は抗凝血薬、抗血小板薬及び内皮細胞を作用ターゲットとする薬物を含む。現在臨床的に常用されている抗血小板薬物としては、アスピリン、チクロピジン及びクロピドグレル、血小板ＧＰIIｂ／１１Iａ受容体拮抗剤である単クローン抗体アブシキシマブ（ａｂｃｉｘｉｍａｂ）、エプチフィバチド（ｅｐｔｉｆｉｂａｔｉｄｅ）のような合成ペプチド類受容体拮抗剤、チロフィバン（ｔｉｒｏｆｉｂａｎ）のような非ペプチド類容体拮抗剤、及び非ペプチド擬似体（Ｌａｎｉｆｉｂａｎ）が挙げられる。
【０００３】
脳卒中の発生後、閉塞血管が短期間内に再開通して脳機能が回復する可能性はあるが、一定時間以上の持続虚血であった場合は不可逆的な脳細胞損傷に至る恐れがある。不可逆的な損傷の虚血中心部の周囲は生存可能なイケスミック・ペナンプラであり、一定の時間後例え血行が再開されても一部分は遅発性神経細胞死を発生し、興奮性アミノ酸の放出、神経細胞のカルシウム流入、ラジカル発生などの各種の相関性因子を引き起こし、特にラジカルの発生は脳機能障害を引き起こす主要な要因の１つであると認められる。虚血状態時、アラキドン酸代謝系の亢進はラジカルの発生を増加させ、細胞膜リン脂質の不飽和脂肪酸が過酸化され細胞膜の損傷を招き、ともに脳細胞の機能障害を悪化させる。
【０００４】
脳神経保護は脳卒中を治療する重要な一環であり、日本の最新の脳卒中治療ガイドラインに初めてイー・ビー・エム（根拠に基づく医療ｅｖｉｄｅｎｃｅ−ｂａｓｅｄ ｍｅｄｉｃｉｎｅ、ＥＢＭ）の根拠に基づいて脳保護薬エダラボンの使用が推薦され、脳卒中の治療に新たな助かる望みを提供した。脳梗塞急性期の治療は、脳保護作用を有する薬物エダラボンの使用が推薦される。臨床研究は、エダラボンは脳梗塞急性期（発生後７２ｈ以内）患者の予後改善に対して有効であり、特に発病２４ｈ以内に治療効果がより顕著であることを示している。
【０００５】
【化１】
（エダラボン）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明の目的は薬用価値を有する化合物２−メチル−５−イミド−ベンゾ［ｄ］［１，３］オキサジニル［５−ｂ］ピラゾまたはその薬学的に受容可能な塩を提供することにある。
【０００７】
本発明のもう１つの目的は前記化合物の調製方法を提供することにある。
【０００８】
本発明の更なる目的は前記化合物またはその薬学的に受容可能な塩の用途を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明の目的は以下の手段によって達成できる。
【００１０】
式（ＩＩ）の構造を有する化合物２−メチル−５−イミド−ベンゾ［ｄ］［１，３］オキサジニル［５−ｂ］ピラゾまたはその薬学的に受容可能な塩である。
【００１１】
【化２】
【００１２】
前記薬学的に受容可能な塩は、前記化合物と一般薬学的に常用される酸またはアルカリとの反応によって生成される、その他の副作用を有せず、且つ化合物の物理化学的な性能（例えば水溶性など）を高めることができる一般意義上の塩をいう。そのうち、一般的に前記の酸またはアルカリは塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸、琥珀酸、マレイン酸、フマル酸、酢酸、クエン酸、酒石酸、安息香酸、ベンゼンスルホン酸、ナフタレンスルホン酸、水酸化ナトリウム、炭酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウムまたは水酸化カリウムなどから選択される。
【００１３】
式ＩＩ化合物の調製方法は、化合物Ｍをアルカリ性条件下でアセト酢酸エステルと反応させて化合物Ｎを調製したのち、化合物Ｎを塩化水素ガスの作用によって閉環されることによって式ＩＩ化合物を得る。その反応式は以下の通りである。
【００１４】
【化３】
【００１５】
ステップ１の反応において、反応溶媒はエタノールまたはメタノールなどのようなアルコールを選択してもよく、アルカリは通常ナトリウムメトキシド、ナトリウムエトキシドなどのようなナトリウムアルコキシドを選択し、反応温度は４０〜８０℃である。ステップ２の反応の溶媒はジクロロメタンまたはテトラヒドロフランで、反応温度は２０〜４０℃である。
【００１６】
本発明の化合物またはその薬学的に受容可能な塩は製薬分野、例えば心脳血管病気の治療または予防用薬物の分野に応用できる。動物薬効実験は、本発明の化合物２−メチル−５−イミド−ベンゾ［ｄ］［１，３］オキサジニル［５−ｂ］ピラゾ（以下ＴＲと略称する）は用量依存的に、脳虚血再潅流動物の神経欠陥症状を顕著に改善し、脳梗塞の面積を縮小し、脳損傷の程度を低減し、脳水腫を軽減し、損傷した脳組織の脂質過酸化を抑制することができ、最小有効量が３ｍｇ／ｋｇであることを示している。
【図面の簡単な説明】
【００１７】
【図１】ＤＰＰＨの標準曲線図である。
【図２】抗ＤＰＰＨラジカル能力と反応時間との関係図である。
【図３】神経欠陥症状に対するＴＲの影響の柱状グラフである（図中、神経欠陥点数は、平均値Ｘ±ＳＤで表わす。＊Ｐ＜０．０５（偽手術群との比較） ＃Ｐ＜０．０５（モデル群との比較））。
【図４】脳梗塞面積に対するＴＲの影響である（図中、脳梗塞面積は、平均値Ｘ±ＳＤで表す。＊Ｐ＜０．０５（偽手術群との比較） ＃Ｐ＜０．０５（モデル群との比較） ＆Ｐ＜０．０５（低用量群との比較））。
【図５】脳梗塞面積に対するＴＲの影響の柱状グラフである（図中、脳梗塞面積は、平均値Ｘ±ＳＤで表す。＊Ｐ＜０．０５（偽手術群との比較） ＃Ｐ＜０．０５（モデル群との比較） ＆Ｐ＜０．０５（低用量群との比較）））。
【図６】神経欠陥症状に対するＴＲの影響の柱状グラフである（図中、神経欠陥（％）は、平均値Ｘ±ＳＤで表わす。＊Ｐ＜０．０５（偽手術群との比較）。＃Ｐ＜０．０５（モデル群との比較））。
【図７】脳含水量に対するＴＲの影響の柱状グラフである（図中、脳含水量変化値（％）は、平均値Ｘ±ＳＤで表す。＊Ｐ＜０．０５（偽手術群との比較） ＃Ｐ＜０．０５（モデル群との比較））。
【図８】脳組織ＳＯＤ（Ｕ／ｍｇｐｒｏｔ）活性に対するＴＲの影響の柱状グラフである（図中、ＳＯＤ値は、平均値Ｘ±ＳＤで表す。＊Ｐ＜０．０５（偽手術群との比較） ＃Ｐ＜０．０５（モデル群との比較）））。
【図９】脳組織ＭＤＡ（ｎｍｏｌ／ｍｇｐｒｏｔ）含量に対するＴＲの影響の柱状グラフである（図中、ＭＤＡ値は、平均値Ｘ±ＳＤで表す。＊Ｐ＜０．０５（偽手術群との比較）＃Ｐ＜０．０５（モデル群との比較）））。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
（実施例１）
２−メチル−５−イミド−ベンゾ［ｄ］［１，３］オキサジニル［５−ｂ］ピラゾ（化合物ＩＩ）の調製
【００１９】
２−ヒドラジノベンゾニトリル塩酸塩の調製
【００２０】
【化４】
【００２１】
２０００ｍｌの三角フラスコに濃塩酸６００ｍｌ、砕氷５００ｍｌ、２−アミノベンゾニトリル５９ｇ（０．５ｍｏｌ）を加え、十分に溶解するまで撹拌する。氷塩浴で−７〜−３℃にし、亜硝酸ナトリウム溶液３４．５ｇ（０．５ｍｏｌ）を滴下して水１５０ｍｌに溶解する。滴下完了後、１０ｍｉｎ撹拌してオレンジイエローの澄明な溶液を得、使用するまで保存する。
【００２２】
５０００ｍｌの三角フラスコに塩化第一スズ３５０ｇ、濃塩酸１０００ｍｌを加え、十分に溶かすまで撹拌し、氷塩浴で−５℃にし、前記ジアゾニウム塩溶液を滴下して白色の沈殿を生成する。滴下完了後、続けて２ｈ撹拌し、ろ過を行い、ケーキを大量のＮａＣｌ飽和溶液で洗浄を行い、さらに１５％冷塩酸で洗浄し、乾燥を行い、２−ヒドラジノベンゾニトリル塩酸塩３６ｇを得る。
【００２３】
１−（２−シアノフェニル）−３−メチルピラゾール−５−ケトンの調製
【００２４】
【化５】
【００２５】
２５０ｍｌの反応瓶に塩酸２−ヒドラジノベンゾニトリル８．５ｇ（０．０５ｍｏｌ）、アセト酢酸メチル６ｇ（０．０５ｍｏｌ）、メタノール１００ｍｌを加え、撹拌しながら５０％ナトリウムメトキシド５．５ｇ（０．０５１ｍｏｌ）を加えてメタノール５０ｍｌの溶液に溶解する。１０ｍｉｎ撹拌した後、６ｈ加熱還流反応し、熱いうちにろ過を行い、メタノール２０ｍｌで固体を洗浄し、メタノールを回収して体積約５０ｍｌを残し、撹拌しながら氷水２００ｍｌに注入し、固体を析出させ、ろ過水を洗浄して淡黄色固体７ｇを得る。
【００２６】
２−メチル−５−イミド−ベンゾ［ｄ］［１，３］オキサジニル［５−ｂ］ピラゾ（化合物ＩＩ）の調製
【００２７】
【化６】
【００２８】
１−（２−シアノフェニル）−３−メチルピラゾール−５−ケトン２０ｇ（０．１ｍｏｌ）、無水テトラヒドロフラン２０ｍｌに、撹拌下で飽和するまで乾燥塩化水素ガスを注入し、室温で撹拌を行って一夜反応させ、乾燥まで真空濃縮を行う。無水テトラヒドロフラン１００ｍｌ、無水酢酸ナトリウム１０ｇを加えて室温で１ｈ撹拌し、ろ過を行い、テトラヒドロフランを真空濃縮し、酢酸エチルを再結晶させ、類白色結晶１３ｇを得る。
【００２９】
Ｍ／Ｚ［Ｍ＋１］＋，２００；［Ｍ＋Ｎａ］＋，２２２．
１ＨＮＭＲ： δ１３．２６９３ｐｐｍ（ＮＨ）；８．０２１９ｐｐｍ（１Ｈ，ｄ）；７．６１１ｐｐｍ（１Ｈ，ｄ）；７．４５９ｐｐｍ（１Ｈ，ｓ）；７．０９４１ｐｐｍ（１Ｈ，ｓ）；５．９５５５ｐｐｍ（１Ｈ，ｓ）；２．４６７（３Ｈ，ｓ）．
１３ＣＮＭＲ： δ１５４．５１７２ｐｐｍ；１５４．２９７３ｐｐｍ；１４２．５８９ｐｐｍ；１４０．００８４ｐｐｍ；１３６．０４９４ｐｐｍ；１２４．４８７８ｐｐｍ；１２３．４３９４ｐｐｍ；１１３．０４３４ｐｐｍ；１０９．６６３７ｐｐｍ；１０２．６６２２ｐｐｍ；１９．７７３２ｐｐｍ．
【００３０】
（抗ＤＰＰＨラジカル試験）
ジフェニルピクリルヒドラジルラジカル（ＤＰＰＨ）分光光度法は抗酸化剤をスクリーニングする簡単な方法である。その原理は５１７ｎｍにおけるＤＰＰＨ溶液の特性吸収ピークを利用し、ラジカル除去剤が存在した場合に、ラジカル除去剤とＤＰＰＨとが単電子対形成することによって吸収を徐々に消去させる。その退色の程度はそれが受け取った電子数と定量関係を持っており、サンプルの抗酸化活性は除去されたＤＰＰＨの量によって評価されることができるため、分光法によって定量分析を行うことができる。
【００３１】
ＤＰＰＨ検量線
ＤＰＰＨを精密に量り、１００ｍｌのフラスコに入れ、且つ９５％のエタノールで１００ｍｌまで定容し、５１７ｎｍにおける吸収値（Ａ）を測定する。
【００３２】
表１．異なる濃度のＤＰＰＨ溶液の吸収値
【００３３】
【表１】
【００３４】
ＤＰＰＨ検量線は図１に示す。その一次方程式は：ｙ＝０．２１９ｘ−０．０２８５；ｒ＝０．９９９４である。
【００３５】
ＤＰＰＨ溶液の調製
ＤＰＰＨを精密に量り、１００ｍｌのフラスコに入れ、且つ９５％のエタノールで１００ｍｌまで定容し、ＤＰＰＨ溶液を調製し得る。
【００３６】
試薬溶液の調製：試薬を精密に量り、１００ｍｌのフラスコに入れ、且つ９５％のエタノール２０ｍｌに溶解した後、ｐＨを約７．５に調節し、さらに９５％のエタノールで１００ｍｌまで定容する。
【００３７】
試薬−ＤＰＰＨ溶液の吸収値の測定
ＤＰＰＨ溶液５．０ｍｌ、試薬溶液２．０ｍｌを量り取って、１０ｍｌフラスコに入れ、十分に振り室温約２５℃において所定時間で反応させ、５１７ｎｍの吸収値（Ａ）を測定する。
【００３８】
試薬のＤＰＰＨラジカル除去能力Ｅ（ｍｇＤＰＰＨ／ｍｇ）の計算式：
Ｅ（ｍｇＤＰＰＨ／ｍｇ）＝［ＤＰＰＨ濃度（ｍｇ／１００ｍｌ）×５／７−（吸収値Ａ＋０．０２８５）／０．２１９（ｍｇ／１００ｍｌ）］／［試薬濃度Ｃ（ｍｇ／１００ｍｌ）×２／７］
試薬のＤＰＰＨラジカル除去能力Ｖ（ｍｍｏｌＤＰＰＨ／ｍｍｏｌ）の計算式：
Ｖ（ｍｍｏｌＤＰＰＨ／ｍｍｏｌ）＝［Ｅ（ｍｇＤＰＰＨ／ｍｇ）］／［３９４．３２／試薬分子量］
【００３９】
【表２】
【００４０】
【表３】
【００４１】
表２及び表３中、化合物１は２−メチル−ベンゾ［ｄ］［１，３］オキサジニル［５−ｂ］ピラゾ−５−ケトンで、化合物２は２−メチル−５−イミド−ベンゾ［ｄ］［１，３］オキサジニル［５−ｂ］ピラゾ（すなわちＴＲ）で、化合物３は１−（２−カルボキシフェニル）−３−メチルピラゾール−５−ケトンである。
【００４２】
抗ＤＰＰＨラジカル能力Ｖ（ｍｍｏｌＤＰＰＨ／ｍｍｏｌ）と反応時間（ｍｉｎ）との関係は図２に示される。抗ＤＰＰＨラジカル試験結果は、３０ｍｉｎ内の試薬のＤＰＰＨ除去能力は化合物３が最大で、１つの分子の化合物３は１．９４２個の分子のＤＰＰＨラジカルを除去でき、エダラボンのＤＰＰＨラジカル除去能力よりもやや強く、１つのエダラボンは１．６５７個の分子のＤＰＰＨラジカルを除去できることを示している。化合物１及び化合物２のＤＰＰＨラジカル除去能力は反応時間と関係を持っており、反応時間の延長に伴って、化合物１及び化合物２は徐々に化合物３に加水分解されるため、ＤＰＰＨラジカル除去能力は徐々に増強され、化合物１は３０ｍｉｎ時においてＤＰＰＨラジカル除去能力が化合物３の１／８であるが、反応１５０ｍｉｎ時においてはＤＰＰＨラジカル除去能力が化合物３とほぼ同等になっている。
【００４３】
（動物薬効実験）
内頸動脈栓線法でＳＤラット中大脳動脈閉塞（Ｍｉｄｄｌｅ ｃｅｒｅｂｒａｌ ａｒｔｅｒｙ、ＭＣＡＯ）モデルを作り、脳虚血再潅流損傷を引き起こさせる。虚血再潅流した後０．５ｈ後に一回投与し、その後２ｈ毎に一回投与して総計３回投与する。脳虚血後４８ｈに神経欠陥症状を観察し、動物を屠殺して脳を取って、脳梗塞面積及び脳損傷程度を測定する。本発明の化合物２−メチル−５−イミド−ベンゾ［ｄ］［１，３］オキサジニル［５−ｂ］ピラゾ（ＴＲと略称する）を対象にし、ニモジピンを対照とする。
【００４４】
神経欠陥症状に対するＴＲの影響
神経欠陥症状の重症度の評価点数が表４及び図３に示され、モデル群は偽手術群と比べると有意差（Ｆ５,４１＝２８．０５,Ｐ＜０．００１）があり、脳虚血再潅流は重症な神経欠陥症状を引き起こすことが示されている。また、ＴＲ高投与群（Ｆ５,４１＝２８．０５,Ｐ＜０．００１）、中投与群（Ｆ５,４１＝２８．０５,Ｐ＜０．００１）、低投与群（Ｆ５,４１＝２８．０５,Ｐ＝０．００１）及びニモジピン群（Ｆ５,４１＝２８．０５,Ｐ＜０．００１）は、モデル群との比較結果、神経欠陥症状が共に顕著に軽減された。
【００４５】
【表４】
Ｘ±ＳＤ；＊Ｐ＜０．０５（偽手術群との比較） ＃Ｐ＜０．０５（モデル群との比較）
【００４６】
脳梗塞面積に対するＴＲの影響
各群の脳梗塞面積が表５及び図４に示され、モデル群は偽手術群と比べると有意差（Ｆ５,４１＝２３．３４,Ｐ＜０．００１）があり、脳虚血再潅流は顕著な脳梗塞を引き起こすことが示された。また、ＴＲ高投与群（Ｆ５,４１＝２３．３４,Ｐ＜０．００１）、中投与群（Ｆ５,４１＝２３．３４,Ｐ＜０．００１）、低投与群（Ｆ５,４１＝２３．３４,Ｐ＝０．０４４）及びニモジピン群（Ｆ５,４１＝２３．３４,Ｐ＜０．００１）では、モデル群との比較結果、脳梗塞面積が共に顕著に減少し、ＴＲ高投与群とＴＲ低投与群とを比較すると、有意差が認められる（Ｆ５,４１＝２３．３４,Ｐ＝０．００９）。
【００４７】
【表５】
Ｘ±ＳＤ；＊Ｐ＜０．０５（偽手術群との比較） ＃Ｐ＜０．０５（モデル群との比較） ＆Ｐ＜０．０５（低投与群との比較）
【００４８】
脳損傷に対するＴＲの影響
各群の脳損傷が表６及び図５に示され、モデル群は偽手術群と比べると有意差（Ｆ５,４１＝２０．５２,Ｐ＜０．００１）があり、脳虚血再潅流は顕著な脳損傷を引き起こすことが示された。また、ＴＲ高投与群（Ｆ５,４１＝２０．５２,Ｐ＜０．００１）、中投与群（Ｆ５,４１＝２０．５２,Ｐ＜０．００１）及びニモジピン群（Ｆ５,４１＝２０．５２,Ｐ＜０．００１）では、モデル群との比較結果、脳損傷の程度が共に顕著に減少した。ＴＲ高投与群とＴＲ低投与群では、有意差が認められた（Ｆ５,４１＝２０．５２,Ｐ＝０．００４）。
【００４９】
【表６】
Ｘ±ＳＤ；＊Ｐ＜０．０５（偽手術群との比較） ＃Ｐ＜０．０５（モデル群との比較）。＆Ｐ＜０．０５（低投与群との比較）。
【００５０】
神経欠陥症状の重症度の評価点数が表１及び図１に示され、モデル群は偽手術群と比べると共に有意差（Ｆ５,４１＝２８．０５,Ｐ＜０．００１）があり、脳虚血再潅流は重症な神経欠陥症状を引き起こすことが示された。また、ＴＲ高投与群（Ｆ５,４１＝２８．０５,Ｐ＜０．００１）、中投与群（Ｆ５,４１＝２８．０５,Ｐ＜０．００１）、低投与群（Ｆ５,４１＝２８．０５,Ｐ＝０．００１）及びニモジピン群（Ｆ５,４１＝２８．０５,Ｐ＜０．００１）では、モデル群との比較結果、神経欠陥症状が共に顕著に軽減された。結果は、ＴＲが脳虚血再潅流動物の神経欠陥症状を改善できることを示している。
【００５１】
【表７】
Ｘ±ＳＤ；＊Ｐ＜０．０５（偽手術群との比較） ＃Ｐ＜０．０５（モデル群との比較）
【００５２】
脳含水量に対するＴＲの影響
各群の脳含水量が表８及び図７に示され、モデル群は偽手術群と比べると有意差（Ｆ５,４２＝２０．０６,Ｐ＜０．００１）があり、脳虚血再潅流は重症な脳水腫を引き起こすことが示されている。また、ＴＲ高投与群（Ｆ５,４２＝２０．０６,Ｐ＜０．００１）、中投与群（Ｆ５,４２＝２０．０６,Ｐ＝０．０３９）及びニモジピン群（Ｆ５,４２＝２０．０６,Ｐ＝０．０３）では、モデル群と比較すると、脳含水量が顕著に減少されたが、低投与群（Ｆ５,４２＝２０．０６,Ｐ＝０．０３９）とモデル群とでは、有意差は認められなかった（Ｆ５,４２＝２０．０６,Ｐ＝０．０８６）。
【００５３】
【表８】
Ｘ±ＳＤ；＊Ｐ＜０．０５（偽手術群との比較） ＃Ｐ＜０．０５（モデル群との比較）
【００５４】
損傷した脳組織ＳＯＤ活性及びＭＤＡレベルに対するＴＲの影響
各群の脳組織ＳＯＤ活性及びＭＤＡレベルが表９及び図８、９に示され、モデル群は偽手術群と比べると有意差があり、ＭＤＡ含量が顕著に上昇し（Ｆ５,４２＝２６．９６,Ｐ＜０．００１）、ＳＯＤ活性が顕著に減少し（（Ｆ５,４２＝１７．１３,Ｐ＜０．００１）、脳虚血再潅流は損傷した脳組織脂質の過酸化を引き起こすことが示された。また、ＴＲ高投与群ではモデル群と比較すると、ＭＤＡ含量が顕著に減少し（Ｆ５,４２＝２６．９６,Ｐ＜０．００１）、ＴＲ中投与群（Ｆ５,４２＝２６．９６,Ｐ＝０．１４１）、低投与群（Ｆ５,４２＝２６．９６,Ｐ＝０．２１１）及びニモジピン群（Ｆ５,４２＝２６．９６,Ｐ＝０．９６１）では、モデル群との比較結果、有意差が認められなかった。ＴＲ高投与群はモデル群と比較すると、ＳＯＤ活性が顕著に増加した（Ｆ５,４２＝１７．１３,Ｐ＝０．００７）。ＴＲ中投与群（Ｆ５,４２＝１７．１３,Ｐ＝０．１５７）、低投与群（Ｆ５,４２＝１７．１３,Ｐ＝０．８２６）及びニモジピン群（Ｆ５,４２＝１７．１３,Ｐ＝０．４３５）とモデル群では、有意差が認められなかった。
【００５５】
【表９】
Ｘ±ＳＤ；＊Ｐ＜０．０５（偽手術群との比較） ＃Ｐ＜０．０５（モデル群との比較）
【００５６】
ＳＤラット大脳中動脈閉塞再潅流モデルの結果は、ＴＲが用量依存的に脳虚血再潅流動物の神経欠陥症状を顕著に改善し、脳梗塞の面積を縮小し、脳損傷の程度を低減し、脳水腫を軽減し、損傷した脳組織の脂質過酸化を抑制することができ、最小有効量が３ｍｇ／ｋｇであることを示している。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（ＩＩ）の構造を有する化合物２−メチル−５−イミド−ベンゾ［ｄ］［１，３］オキサジニル［５−ｂ］ピラゾまたはその薬学的に受容可能な塩。
【化１】
【請求項２】
下記反応式に示すように、化合物Ｍをアルカリ性条件下でアセト酢酸エステルと反応させて化合物Ｎを調製するステップ１と、ステップ１後に、化合物Ｎを塩化水素ガスの作用によって閉環させるステップ２を含むことを特徴とする、請求項１に記載の式ＩＩ化合物の調製方法。
【化２】
【請求項３】
前記ステップ１の反応において、反応溶媒はエタノールまたはメタノールであり、アルカリはナトリウムメトキシドまたはナトリウムエトキシドであり、反応温度は４０〜８０℃であることを特徴とする、請求項２に記載の調製方法。
【請求項４】
前記ステップ２の反応において、反応溶媒はジクロロメタンまたはテトラヒドロフランであり、反応温度は２０〜４０℃であることを特徴とする、請求項２に記載の調製方法。
【請求項５】
心脳血管病気の治療または予防用薬物の調製における請求項１に記載の化合物またはその薬学的に受容可能な塩の用途。
【請求項１】
式（ＩＩ）の構造を有する化合物２−メチル−５−イミド−ベンゾ［ｄ］［１，３］オキサジニル［５−ｂ］ピラゾまたはその薬学的に受容可能な塩。
【化１】
【請求項２】
下記反応式に示すように、化合物Ｍをアルカリ性条件下でアセト酢酸エステルと反応させて化合物Ｎを調製するステップ１と、ステップ１後に、化合物Ｎを塩化水素ガスの作用によって閉環させるステップ２を含むことを特徴とする、請求項１に記載の式ＩＩ化合物の調製方法。
【化２】
【請求項３】
前記ステップ１の反応において、反応溶媒はエタノールまたはメタノールであり、アルカリはナトリウムメトキシドまたはナトリウムエトキシドであり、反応温度は４０〜８０℃であることを特徴とする、請求項２に記載の調製方法。
【請求項４】
前記ステップ２の反応において、反応溶媒はジクロロメタンまたはテトラヒドロフランであり、反応温度は２０〜４０℃であることを特徴とする、請求項２に記載の調製方法。
【請求項５】
心脳血管病気の治療または予防用薬物の調製における請求項１に記載の化合物またはその薬学的に受容可能な塩の用途。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【公表番号】特表２０１１−５２８３２３（Ｐ２０１１−５２８３２３Ａ）
【公表日】平成２３年１１月１７日（２０１１．１１．１７）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１１−５１７７３８（Ｐ２０１１−５１７７３８）
【出願日】平成２１年３月２０日（２００９．３．２０）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＣＮ２００９／０７０９０５
【国際公開番号】ＷＯ２０１０／００６５２１
【国際公開日】平成２２年１月２１日（２０１０．１．２１）
【出願人】（５１１０１６２３５）
【氏名又は名称原語表記】ＱＩＮＧＤＡＯ ＨＵＡＮＧＨＡＩ ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ ＣＯ．，ＬＴＤ．
【住所又は居所原語表記】Ｎｏ．１７， Ｊｉｎｇｓｉ Ｒｏａｄ，Ｋｅｙｕａｎ，Ｌａｏｓｈａｎ，Ｑｉｎｇｄａｏ，Ｓｈａｎｄｏｎｇ，２６６１０１ Ｃｈｉｎａ
【出願人】（５１１０１６２４６）南京中瑞▲薬▼▲業▼有限公司 (1)
【氏名又は名称原語表記】ＮＡＮＪＩＮＧ ＺＨＯＮＧＲＵＩ ＭＥＤＩＣＩＮＥ ＣＯ．， ＬＴＤ．
【住所又は居所原語表記】Ｎｏ．４２０，Ｚｈｏｎｇｈｕａ Ｒｏａｄ，Ｎａｎｊｉｎｇ，Ｊｉａｎｇｓｕ，２１０００１ Ｃｈｉｎａ
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２３年１１月１７日（２０１１．１１．１７）
【国際特許分類】
【出願日】平成２１年３月２０日（２００９．３．２０）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＣＮ２００９／０７０９０５
【国際公開番号】ＷＯ２０１０／００６５２１
【国際公開日】平成２２年１月２１日（２０１０．１．２１）
【出願人】（５１１０１６２３５）
【氏名又は名称原語表記】ＱＩＮＧＤＡＯ ＨＵＡＮＧＨＡＩ ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ ＣＯ．，ＬＴＤ．
【住所又は居所原語表記】Ｎｏ．１７， Ｊｉｎｇｓｉ Ｒｏａｄ，Ｋｅｙｕａｎ，Ｌａｏｓｈａｎ，Ｑｉｎｇｄａｏ，Ｓｈａｎｄｏｎｇ，２６６１０１ Ｃｈｉｎａ
【出願人】（５１１０１６２４６）南京中瑞▲薬▼▲業▼有限公司 (1)
【氏名又は名称原語表記】ＮＡＮＪＩＮＧ ＺＨＯＮＧＲＵＩ ＭＥＤＩＣＩＮＥ ＣＯ．， ＬＴＤ．
【住所又は居所原語表記】Ｎｏ．４２０，Ｚｈｏｎｇｈｕａ Ｒｏａｄ，Ｎａｎｊｉｎｇ，Ｊｉａｎｇｓｕ，２１０００１ Ｃｈｉｎａ
【Ｆターム（参考）】
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