ＣＴＬＡ−４遮断治療におけるＣＴＬＡ−４多型の評価
本発明はＣＴＬＡ−４遮断薬を用いた治療に対する被験体の反応性を予測する方法を提供する。本発明は被験体における少なくとも１つのＣＴＬＡ−４多型を分析する工程、及び、上記被験体におけるＣＴＬＡ−４多型対立遺伝子の有無に基づいてＣＴＬＡ−４遮断薬を用いた治療に対する上記被験体の反応性を予測する工程を包含する。この方法はさらに、上記被験体におけるＣＴＬＡ−４多型対立遺伝子の有無に基づいてＣＴＬＡ−４遮断薬を用いた治療計画を選択する工程を包含する。この方法はさらに、選択された治療計画に従って上記被験体に上記ＣＴＬＡ−４遮断薬を投与する工程を包含し得る。ＣＴＬＡ−４遮断薬及び１以上のＣＴＬＡ−４多型を分析するための手段を含む、所望によりワクチンを含むキットもまた提供される。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
（発明の背景）
ＣＴＬＡ−４は元々、マウス細胞傷害性Ｔ細胞ｃＤＮＡライブラリーの示差的スクリーニングにより同定されたＴ細胞表面分子である（非特許文献１）。ＣＴＬＡ−４は免疫グロブリン（Ｉｇ）スーパーファミリーの一員であり、単一の細胞外Ｉｇドメインを含む。マウスＣＴＬＡ−４ｃＤＮＡに対するヒトの相当物が同定されており（非特許文献２）、この遺伝子はＴ細胞表面分子ＣＤ２８と同じ染色体領域（２ｑ３３−３４）にマップされている（非特許文献３）。ＣＴＬＡ−４及びＣＤ２８は相同性を示し、両者ともＢ細胞表面分子のＢ７−１及びＢ７−２に結合することが示されている。ＣＤ２８Ｔは細胞の活性化に関し刺激性のある分子であることが立証されている一方、ＣＴＬＡ−４はＴ細胞活性化の抑制剤として逆の役割を有することが立証されている（非特許文献４；非特許文献５；非特許文献６）。
【０００２】
例えば、ＣＴＬＡ−４欠損マウスでは異常なまでのリンパ増殖が生じることが報告されている（非特許文献６）。ＣＴＬＡ−４遮断がインビトロ（非特許文献７）及びインビボ（非特許文献８）でＴ細胞反応性を増大させ、抗腫瘍免疫を激化させ（非特許文献９）、また自己免疫疾患を引き起こす（非特許文献１０）ことも報告されている。特許文献１、特許文献２及び特許文献３は、例えば腫瘍を有する被験体における抗腫瘍反応性を増大させるために、抗ＣＴＬＡ−４抗体等のＣＴＬＡ−４遮断薬を用いて抗原刺激に対する哺乳類Ｔ細胞の反応性を増大させる方法を記述する。
【０００３】
非ヒトＣＴＬＡ−４抗体は上述の各種研究において用いられている。さらに、ヒトＣＴＬＡ−４に対するヒト抗体が記述されている（例えば、特許文献４及び特許文献５）。ヒト抗ＣＴＬＡ−４抗体はヒトにおいて臨床的に使用されており、抗腫瘍反応性等のＴ細胞反応性を増大させることが示されている（例えば、特許文献６）。抗ＣＴＬＡ−４治療はまた、自己免疫反応を導くことも示されており（例えば、特許文献７）、ＣＴＬＡ−４遮断が自己抗原に対する寛容を打ち破ることができることを示唆する。
【０００４】
モノクローナル抗体治療は癌及びその他の疾患の治療において成功裏に用いられており、多数の（キメラ、ヒト化又は完全なヒト）モノクローナル抗体がヒトにおける使用に関しＦＤＡによって認可されている。このような治療の成功が実証されている一方、処置される全ての被験体が、必ずしも抗体治療に対し反応を示す又は望んだ程度の反応を示すとは限らない。したがって、抗体治療の効果を予測し向上させるための方法に非常に関心が持たれている。
【特許文献１】米国特許第５，８５５，８８７号明細書
【特許文献２】米国特許第５，８１１，０９７号明細書
【特許文献３】米国特許第６，０５１，２２７号明細書
【特許文献４】国際公開第０１／１４４２４号パンフレット
【特許文献５】国際公開第００／３７５０４号パンフレット
【特許文献６】米国特許出願公開第２００４０００５３１８号明細書
【特許文献７】国際公開第００／３２２１号パンフレット
【非特許文献１】Ｂｒｕｎｅｔら，Ｎａｔｕｒｅ，１９８７年，第３２８巻，ｐ．２６７−２７０
【非特許文献２】Ｄａｒｉａｖａｃｈら，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１９８８年，第１８巻，ｐ．１９０１−１９０５
【非特許文献３】Ｌａｆａｇｅ−Ｐｏｃｈｉｔａｌｏｆｆら，Ｉｍｍｕｎｏ−ｇｅｎｅｔｉｃｓ，１９９０年，第３１巻，ｐ．１９８−２０１
【非特許文献４】Ｋｒｕｍｍｅｌら，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，１９９５年，第１８２巻，ｐ．４５９−４６５
【非特許文献５】Ｋｒｕｍｍｅｌら，Ｉｎｔ’ｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１９９６年，第８巻，ｐ．５１９−５２３
【非特許文献６】Ｃｈａｍｂｅｒｓら，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ．，１９９７年，第７巻，ｐ．８８５−８９５
【非特許文献７】Ｗａｌｕｎａｓら，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ．，１９９４年，第１巻，ｐ．４０５−４１３
【非特許文献８】Ｋｅａｒｎｅｙら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１９９５年，第１５５巻，ｐ．１０３２−１０３６
【非特許文献９】Ｌｅａｃｈら，Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９９６年，第２７１巻，ｐ．１７３４−１７３６
【非特許文献１０】Ｌｕｈｄｅｒら，Ｊ Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，１９９８年，第１８７巻，ｐ．４２７−４３２
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【０００５】
（発明の概要）
本発明は、処置される被験体におけるＣＴＬＡ−４多型を調べることを含む、ＣＴＬＡ−４遮断薬を用いた治療効果を予測し向上させる方法を提供する。本発明は、少なくとも部分的には、被験体におけるある種のＣＴＬＡ−４多型対立遺伝子の存在が、ＣＴＬＡ−４遮断薬を用いた治療への反応性増大又は低減と関連するという観察に基づく。特に、自己免疫疾患に対する感受性増大と関連するＣＴＬＡ−４多型対立遺伝子は、被験体における自己免疫反応の増大及び腫瘍プログレッションの低減からも明らかなように、ＣＴＬＡ−４遮断薬治療に対する反応性増大と相関していることが見出されている。対照的に、自己免疫疾患に対する感受性低減と関連するＣＴＬＡ−４多型対立遺伝子（すなわち、自己免疫疾患に対する感受性を保護する多型対立遺伝子）は、被験体における自己免疫反応の低減及び腫瘍プログレッションの増大からも明らかなように、ＣＴＬＡ−４遮断薬治療に対する反応性低減と相関していることが見出されている。したがって、ＣＴＬＡ−４遮断薬治療を受けている被験体において、被験体における治療に対する反応性を予測するために、及び／又は適当な治療計画の選択を助けるために、ＣＴＬＡ−４多型を評価することができる。
【０００６】
一態様において、本発明は、
被験体における少なくとも１つのＣＴＬＡ−４多型を分析すること：及び、
その被験体におけるＣＴＬＡ−４多型対立遺伝子の有無に基づいてＣＴＬＡ−４遮断薬を用いた治療に対する被験体の反応性を予測すること、
を含む、ＣＴＬＡ−４遮断薬を用いた治療に対する被験体の反応性を予測する方法に関する。
【０００７】
この方法は、被験体におけるＣＴＬＡ−４多型対立遺伝子の有無に基づいてＣＴＬＡ−４遮断薬を用いた治療計画を選択することをさらに含む。したがって、別の態様において、本発明は、
被験体における少なくとも１つのＣＴＬＡ−４多型を分析すること：及び、
その被験体におけるＣＴＬＡ−４多型対立遺伝子の有無に基づいてＣＴＬＡ−４を用いた治療計画を選択すること、
を含む、ＣＴＬＡ−４遮断薬を用いた治療計画を選択する方法に関する。
【０００８】
この方法は、被験体に対し、例えばその被験体における抗原刺激への反応性を増大させるために（例えば、腫瘍を有している被験体における抗腫瘍免疫を増大させるために）ＣＴＬＡ−４遮断薬を投与することをさらに含み得る。したがって、別の態様において、本発明は、
被験体における少なくとも１つのＣＴＬＡ−４多型を分析すること：及び、
その被験体におけるＣＴＬＡ−４多型対立遺伝子の有無に基づいてＣＴＬＡ−４を用いた治療計画を選択すること：及び、
その被験体において抗原刺激に対する反応性が増大するような上記治療計画に従って、被験体に上記ＣＴＬＡ−４遮断薬を投与すること、
をさらに含む、被験体における抗原刺激に対する反応性を増大させるための方法に関する。
【０００９】
本発明の方法において、分析されるＣＴＬＡ−４多型は、例えば、自己免疫疾患に対する感受性に関連する一塩基多型（ＳＮＰ）である。分析される好ましいＳＮＰは、ＪＯ３０ Ｇ／Ａ多型である。分析されるその他の好ましいＳＮＰは、ＣＴ６０ Ｇ／Ａ多型、ＪＯ３１ Ｇ／Ｔ多型、ＪＯ２７＿１ Ｔ／Ｃ多型、ＣＴＡＦ３４３ Ｔ／Ｃ多型、ｒｓ１８６３８００ Ｃ／Ｔ多型及びＭＨ３０ Ｇ／Ｃ多型である。
【００１０】
他の実施形態において、分析されるＣＴＬＡ−４多型は、ＣＴＬＡ−４エクソン１の４９位のＡ／Ｇ多型、ＣＴＬＡ−４プロモーターの−３１８位のＣ／Ｔ多型、ＣＴＬＡ−４イントロン１の１８２２位のＣ／Ｔ多型、及びＣＴＬＡ−４エクソン３のジヌクレオチド（ＡＴ）ｎ反復多型からなる群から選択される、自己免疫疾患に対する感受性と関連する多型である。
【００１１】
ＣＴＬＡ−４遮断薬による治療に対する反応性を予測するための本発明の方法において、自己免疫疾患に対する感受性の増大に関連するＣＴＬＡ−４多型対立遺伝子が上記被験体中に存在する場合には、この被験体は、上記対立遺伝子を有さない被験体と比較して、ＣＴＬＡ−４遮断薬による治療に対する反応性が増大するものと予測される。ＣＴＬＡ−４遮断薬による治療に対する反応性増大は、抗原刺激に対するＴ細胞反応性の増大、抗腫瘍活性の増大、自己免疫出現事象（ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ ｂｒｅａｋｔｈｒｏｕｇｈ ｅｖｅｎｔ）の増大、臨床的有害事象の増大、及び血清学的有害事象の増大からなる群から選択される少なくとも１つの反応を含み得る。
【００１２】
ＣＴＬＡ−４遮断薬による治療に対する反応性を予測するための本発明の方法において、自己免疫疾患に対する感受性の低減に関連するＣＴＬＡ−４多型対立遺伝子が上記被験体中に存在する場合には、この被験体は、上記対立遺伝子を有さない被験体と比較して、ＣＴＬＡ−４遮断薬による治療に対する反応性が低減していることが予測される。ＣＴＬＡ−４遮断薬による治療に対する反応性低減は、抗原刺激に対するＴ細胞反応性の低減、抗腫瘍活性の低減、自己免疫出現事象の低減、臨床的有害事象の低減、及び血清学的有害事象の現象からなる群から選択される少なくとも１つの反応を含み得る。
【００１３】
ＣＴＬＡ−４遮断薬を用いた治療計画を選択するための好ましい方法においては、被験体はＪＯ３０ Ｇ／Ａ多型における２つのＧ対立遺伝子（Ｇ／Ｇ遺伝子型）を発現し、選択されるこの治療計画は標準的治療計画と比較して縮小された治療計画である。別の実施形態においては、被験体はＣＴ６０ Ｇ／Ａ多型における２つのＧ対立遺伝子（Ｇ／Ｇ遺伝子型）、ＪＯ３１ Ｇ／Ｔ多型における２つのＧ対立遺伝子（Ｇ／Ｇ遺伝子型）、ＪＯ２７＿１ Ｔ／Ｃ多型における２つのＴ対立遺伝子（Ｔ／Ｔ遺伝子型）、ＣＴＡＦ３４３ Ｔ／Ｃ多型における２つのＴ対立遺伝子（Ｔ／Ｔ遺伝子型）、ｒｓ１８６３８００ Ｃ／Ｔ多型における２つのＣ対立遺伝子（Ｃ／Ｃ遺伝子型）及びＭＨ３０ Ｇ／Ｃ多型における２つのＧ対立遺伝子（Ｇ／Ｇ遺伝子型）からなる群から選択される遺伝子型を発現し、選択される治療計画は標準的治療計画と比較して縮小された治療計画である。縮小された治療計画の例としては、標準的治療計画と比較して、より低投与量のＣＴＬＡ−４遮断薬の使用、より低頻度の上記ＣＴＬＡ−４遮断薬の投与、又はより短期間の上記ＣＴＬＡ−４遮断薬による治療期間を含む。
【００１４】
ＣＴＬＡ−４遮断薬を用いた治療計画を選択するためのその他の好ましい方法においては、被験体はＪＯ３０ Ｇ／Ａ多型における２つのＡ対立遺伝子（Ａ／Ａ遺伝子型）を発現し、選択されるこの治療計画は標準的治療計画と比較して拡大された治療計画である。別の実施形態においては、被験体はＪＯ３０ Ｇ／Ａ多型における２つのＡ対立遺伝子（Ａ／Ａ遺伝子型）、ＣＴ６０ Ｇ／Ａ多型における２つのＡ対立遺伝子（Ａ／Ａ遺伝子型）、ＪＯ３１ Ｇ／Ｔ多型における２つのＴ対立遺伝子（Ｔ／Ｔ遺伝子型）、ＪＯ２７＿１ Ｔ／Ｃ多型における２つのＣ対立遺伝子（Ｃ／Ｃ遺伝子型）、ＣＴＡＦ３４３ Ｔ／Ｃ多型における２つのＣ対立遺伝子（Ｃ／Ｃ遺伝子型）、ｒｓ１８６３８００ Ｃ／Ｔ多型における２つのＴ対立遺伝子（Ｔ／Ｔ遺伝子型）及びＭＨ３０ Ｇ／Ｃ多型における２つのＣ対立遺伝子（Ｃ／Ｃ遺伝子型）からなる群から選択される遺伝子型を発現し、選択される治療計画は標準的治療計画と比較して拡大された治療計画である。拡大された治療計画の例としては、標準的治療計画と比較して、より高投与量のＣＴＬＡ−４遮断薬の使用、より高頻度の上記ＣＴＬＡ−４遮断薬の投与、又はより長期間の上記ＣＴＬＡ−４遮断薬による治療期間を含む。
【００１５】
本発明の方法において、ＣＴＬＡ−４多型は、好適な公知の技法、例えば、ポリメラーゼ連鎖反応−制限断片長多型（ＰＣＲ−ＲＦＬＰ）分析により分析することができる。
【００１６】
好ましいＣＴＬＡ−４遮断薬は、キメラ、ヒト化又はヒト抗ＣＴＬＡ−４モノクローナル抗体等の抗ＣＴＬＡ−４モノクローナル抗体である。ＣＴＬＡ−４遮断薬のその他の例としては、ＣＴＬＡ−４に結合するアプタマー、ＣＴＬＡ−４の発現を低減させるアンチセンス物質、及びＣＴＬＡ−４に結合する可溶性ペプチド又はタンパク質リガンドが挙げられる。
【００１７】
本発明の方法に従い処置される好ましい被験体はヒト被験体である。
【００１８】
本発明のその他の態様は、
ＣＴＬＡ−４遮断薬；及び、
１以上のＣＴＬＡ−４多型を分析するための手段、
を含むキットに関する。
【００１９】
好ましい遮断薬は、キメラ、ヒト化又はヒト抗ＣＴＬＡ−４モノクローナル抗体等の抗ＣＴＬＡ−４モノクローナル抗体である。好ましくは、１以上のＣＴＬＡ−４多型を分析する手段は、その多型に特異的な１以上のポリヌクレオチドを含む。
【００２０】
一実施形態において、キットは、腫瘍抗原又はＧＭ−ＣＳＦを分泌するように形質導入された腫瘍細胞等のワクチンをさらに含む。腫瘍抗原の例としては、ｇｐ１００ペプチド、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）又は、１）ｇｐ１００ペプチド、２）ＭＡＲＴ−１ペプチド及び３）チロシナーゼペプチドを含む組成物が挙げられる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２１】
（発明の詳細な説明）
本発明は、治療被験体におけるＣＴＬＡ−４多型対立遺伝子の発現に基づく、ＣＴＬＡ−４遮断薬を用いた治療に対する被験体の反応性を予測する方法、及び、ＣＴＬＡ−４遮断薬を用いた治療計画を選択する方法を提供する。本発明は、少なくとも部分的には、被験体における特定のＣＴＬＡ−４多型対立遺伝子の存在がＣＴＬＡ−４遮断薬を用いた治療に対する反応性の増大又は低減と関連するという知見に基づいている（実施例１参照）。特に、被験体における自己免疫反応の増大及び疾患進行の低減からも明らかなように、自己免疫疾患に対する感受性の増大と関連するＣＴＬＡ−４多型対立遺伝子は、ＣＴＬＡ−４遮断薬治療に対する反応性の増大と相関することが見出されている。対照的に、被験体における自己免疫反応の低減及び疾患進行の増大からも明らかなように、自己免疫疾患に対する感受性の低減と関連するＣＴＬＡ−４多型対立遺伝子（すなわち、自己免疫疾患に対する感受性にとって保護的な多型対立遺伝子）は、ＣＴＬＡ−４遮断薬治療に対する反応性の低減と相関することが見出されている。したがって、治療に対する被験体の反応性を予測するために、且つ／又は適当な治療計画の選択に役立てるために、ＣＴＬＡ−４遮断薬治療を受けている被験体において、ＣＴＬＡ−４多型を評価することができる。
【００２２】
本発明をより容易に理解し得るために、特定の用語がまず初めに定義される。さらなる定義は、詳細な説明を通じて示される。
【００２３】
用語「Ｔリンパ球関連抗原−４」、「ＣＴＬＡ−４」、「ＣＴＬＡ４」、「ＣＴＬＡ−４抗原」及び「ＣＤ１５２」は同義的に使用され、同一のタンパク質を意味する。ヒトＣＴＬＡ−４タンパク質をコードする完全ｃＤＮＡ配列はＧｅｎｂａｎｋ寄託番号Ｌ１５００６を有する。マウスＣＴＬＡ−４タンパク質をコードする完全ｃＤＮＡ配列はＧｅｎｂａｎｋ寄託番号ＮＭ＿００９８４３を有する。
【００２４】
用語「免疫反応」は、侵入病原体、病原体に感染した細胞若しくは組織、癌性細胞、又は、自己免疫若しくは病原性炎症の場合には正常なヒト細胞若しくは組織に対し、選択的傷害、破壊、又は人体からの排除をもたらす、例えば、リンパ球、抗原提示細胞、食細胞、顆粒球、及び上記細胞又は肝臓によって産生される可溶性巨大分子（抗体、サイトカイン、及び補体等）の作用を意味する。
【００２５】
用語「ＣＴＬＡ−４遮断」は、免疫反応性がアップレギュレートされるようなＣＴＬＡ−４の免疫阻害効果の妨害又は阻害を意味することが意図される。用語「ＣＴＬＡ−４遮断薬」は、免疫反応性がアップレギュレートされるように、ＣＴＬＡ−４の免疫阻害効果の破壊又は阻害し得る物質を意味することが意図される。
【００２６】
本明細書中において言及される用語「抗体」は、全抗体及び任意の抗原結合断片（すなわち、「抗原結合部分」）又はその一本鎖を含む。「抗体」は、ジスルフィド結合により相互連結された少なくとも２つの重（Ｈ）鎖及び２つの軽（Ｌ）鎖を含む糖タンパク質又はその抗原結合部分を意味する。各重鎖は、重鎖可変領域（本明細書中においてはＶＨと略される）及び重鎖定常領域を含む。重鎖定常領域は、３つのドメイン、ＣＨ１、ＣＨ２及びＣＨ３を含む。各軽鎖は、軽鎖可変領域（本明細書中においてはＶＬと略される）及び軽鎖定常領域を含む。軽鎖定常領域は、１つのドメイン、ＣＬ１を含む。ＶＨ及びＶＬ領域は、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる、より保存的な領域が組み入れられている相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる超可変領域へと、さらに細かく分けられ得る。各ＶＨ及びＶＬは、アミノ末端からカルボキシ末端に向かって以下の順序：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４で並ぶ、３つのＣＤＲ及び４つのＦＲから構成されている。重鎖及び軽鎖の可変領域は、抗原と相互作用する結合ドメインを含む。抗体の定常領域が、各種免疫系細胞（例えば、エフェクター細胞）及び古典的な補体系第１成分（ＣＩｑ）等の宿主組織又は因子への免疫グロブリンの結合を介在し得る。
【００２７】
本明細書中で使用する時、抗体における「抗原結合部分」（又は単純に「抗体部分」）の用語は、抗原（例えば、ＥＰ−１０）と特異的に結合する能力を保持する抗体の１以上の断片を意味する。抗体の抗原結合機能は、全長抗体の断片によって機能され得ることが示されている。抗体の「抗原結合部分」の用語に包含される結合断片の例としては、（ｉ）ＶＬ、ＶＨ、ＣＬ及びＣＨ１ドメインからなる一価の断片であるＦａｂ断片；（ｉｉ）ヒンジ領域におけるジスルフィド結合によって連結されている２つのＦａｂ断片を含む二価の断片であるＦ（ａｂ’）２断片；（ｉｉｉ）ＶＨ及びＣＨ１ドメインからなるＦｄ断片；（ｉｖ）抗体の単腕のＶＬ及びＶＨドメインからなるＦｖ断片；（ｖ）ＶＨドメインからなるｄＡｂ断片（Ｗａｒｄら，（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ ３４１：５４４−５４６）；及び（ｖｉ）単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）が挙げられる。さらに、Ｆｖ断片の２つのドメイン、ＶＬ及びＶＨは、別々の遺伝子によってコードされているが、それらをＶＬ及びＶＨ領域の対が一価の分子を形成している単一タンパク質鎖（単一鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）として知られる；例えば、Ｂｉｒｄら（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４２：４２３−４２６；及びＨｕｓｔｏｎら（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８５：５８７９−５８８３参照）として産生し得る合成リンカーによる組み換え方法を用いて両者を結合することができる。このような単一鎖抗体も、抗体における「抗原結合部分」の用語内に包含されることが意図される。これらの抗体断片は当業者に知られている通常の技法を用いて得られ、それらの断片は完全抗体と同様に有用性についてスクリーニングされる。
【００２８】
本明細書中で使用する時、用語「モノクローナル抗体」又は「モノクローナル抗体組成物」は、単一分子組成物からなる抗体分子調製物を意味する。モノクローナル抗体組成物は、単一の結合特異性及び特定のエピトープに対する親和性を示す。
【００２９】
本明細書中で使用する時、用語「ヒト抗体」は、フレームワーク及びＣＤＲ領域がいずれもヒト生殖細胞系列免疫グロブリン配列に由来する可変領域を有する抗体を意味することが意図される。さらに、この抗体が定常領域を含む場合、この定常領域もまたヒト生殖細胞系列免疫グロブリン配列に由来する。本発明のヒト抗体は、ヒト生殖細胞系列免疫グロブリン配列によってコードされていないアミノ酸残基（例えば、インビトロにおけるランダム若しくは部位特異的突然変異誘発又はインビボにおける体細胞変異によって導入された突然変異体）を含んでもよい。
【００３０】
用語「ヒトモノクローナル抗体」は、フレームワーク及びＣＤＲ領域の両者がヒト生殖細胞系列免疫グロブリン配列に由来する可変領域を有する、単一の結合特異性を示す抗体を意味する。一実施形態において、ヒトモノクローナル抗体は、トランスジェニック非ヒト動物、例えば、不死化細胞と融合させたヒト重鎖トランスジーン及び軽鎖トランスジーンを含むゲノムを有するトランスジェニックマウス由来のＢ細胞を含むハイブリドーマによって産生される。本明細書中で使用する時、用語「ヒトモノクローナル抗体」は、手段によって調製、発現、作製又は単離される全てのヒト抗体、例えば、（ａ）ヒト免疫グロブリン遺伝子をトランスジェニック又はトランスクロモソームされた動物（例えば、マウス）又はそこから調製されたハイブリドーマから単離された抗体（以下にさらに記載）、（ｂ）ヒト抗体を発現するように形質転換された宿主細胞から、例えば、トランスフェクトーマから、単離された抗体、（ｃ）組み換えコンビナトリアルヒト抗体ライブラリーから単離された抗体、及び、（ｄ）ヒト免疫グロブリン遺伝子配列からその他のＤＮＡ配列へのスプライシングを伴ういずれかのその他の手段により調製、発現、作製又は単離された抗体を含む。このような組み換えヒト抗体は、フレームワーク及びＣＤＲ領域がヒト生殖細胞系列免疫グロブリン配列に由来する可変領域を有する。しかしながら、特定の実施形態においては、このような組み換えヒト抗体は、インビトロ突然変異誘発（又は、ヒトＩｇ配列に対するトランスジェニック動物を使用するときには、インビボ体細胞変異誘発）を受け得るので、組み換え抗体のＶＨ及びＶＬ領域のアミノ酸配列は、ヒト生殖細胞系列のＶＨ及びＶＬ配列に由来し、関連する一方で、インビボにおいてはヒト抗体生殖細胞系列レパートリー内に天然には存在しない場合もある。
【００３１】
用語「ヒト化抗体」は、別の哺乳類種、例えば、マウスに由来するＣＤＲ配列がヒトフレームワーク配列に移植されている抗体を意味することが意図されている。さらなるフレームワーク領域修飾がヒトフレームワーク配列内に行われてもよい。
【００３２】
用語「キメラ抗体」は、可変領域配列が１つの種に由来し、定常領域配列が別の種に由来する抗体、例えば可変領域配列がマウス抗体に由来し、定常領域配列がヒト抗体に由来する抗体を意味することが意図される。
【００３３】
本明細書中で使用する時、用語「被験体」は、ヒト及びＣＴＬＡ−４遮断薬治療に適している非ヒト動物、例えば、好ましくは、非ヒト霊長類、ヒツジ、イヌ、ネコ、ウマ及びウシ等の哺乳類を含む。
【００３４】
本発明の各種の態様は、以下のサブセクションにおいてさらに詳細に記述される。
【００３５】
（ＣＴＬＡ−４多型）
グレーブス病、自己免疫性甲状腺機能低下症（ＡＩＨ）及び１型糖尿病（Ｔ１Ｄ）等の自己免疫疾患に対する感受性は、６．１ｋｂのＣＴＬＡ−４の非コード３’領域に位置されている（Ｕｅｄａ，Ｈ．ら（２００３；Ｎａｔｕｒｅ ４２３：５０６−５１１。補足情報Ａ及びＢを含むその全内容は、参照により本明細書中に具体的に組み入れるものとする）。７つの一塩基ヌクレオチド多型（ＳＮＰ）が自己免疫疾患に対する感受性と最も緊密に関連しているとして同定された。これらのマーカーは、ＣＴ６０、ＪＯ３０、ＪＯ３１、ＪＯ２７＿１、ＣＴＡＦ３４３、ｒｓ１８６３８００及びＭＨ３０多型であり、実施例２においてさらに詳細に記述されている。
【００３６】
ＣＴ６０ Ｇ／Ａ多型に対して、Ｇ対立遺伝子は自己免疫に対する感受性と相関しており、Ａ対立遺伝子は保護的である（すなわち、「保護的な」対立遺伝子は自己免疫のリスク増大と関連しない）。
【００３７】
ＪＯ３０ Ｇ／Ａ多型に対して、Ｇ対立遺伝子は自己免疫に対する感受性と相関しており、Ａ対立遺伝子は保護的である。
【００３８】
ＪＯ３１ Ｇ／Ｔ多型に対して、Ｇ対立遺伝子は自己免疫に対する感受性と相関しており、Ｔ対立遺伝子は保護的である。
【００３９】
ＪＯ２７＿１ Ｔ／Ｃ多型に対して、Ｔ対立遺伝子は自己免疫に対する感受性と相関しており、Ｃ対立遺伝子は保護的である。
【００４０】
ＣＴＡＦ３４３ Ｔ／Ｃ多型に対して、Ｔ対立遺伝子は自己免疫に対する感受性と相関しており、Ｃ対立遺伝子は保護的である。
【００４１】
ｒｓ１８６３８００ Ｃ／Ｔ多型に対して、Ｃ対立遺伝子は自己免疫に対する感受性と相関しており、Ｔ対立遺伝子は保護的である。
【００４２】
ＭＨ３０ Ｇ／Ｃ多型に対して、Ｇ対立遺伝子は自己免疫に対する感受性と相関しており、Ｃ対立遺伝子は保護的である。
【００４３】
本発明での使用のためのその他の好ましいＣＴＬＡ−４多型はＪ０３３ Ｇ／Ａ多型であり、この多型においては、Ｇ対立遺伝子が自己免疫に対する感受性と相関しており、Ｃ対立遺伝子は保護的である（実施例１参照）。
【００４４】
その他のＣＴＬＡ−４多型が、様々な自己免疫疾患に対する感受性と関連することが報告されている。これらの例としては：
１）ＣＴＬＡ−４エクソン１ ４９位 Ａ／Ｇ多型、この多型においては、Ｇ対立遺伝子が自己免疫に対する感受性と相関しており、Ａ対立遺伝子は「保護的」である（例えば、Ｄｏｒｍｅｒ，Ｈ．ら（１９９７）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．Ｍｅｔａｂ．８２：４１３０−４１３２；Ｋｏｕｋｉ，Ｔ．ら（２０００）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６５：６６０６−６６１１；Ｒａｕ，Ｈ．ら（２００１）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．Ｍｅｔａｂ．８６：６５３−６５５参照）；
２）ＣＴＬＡ−４プロモーター −３１８位 Ｃ／Ｔ多型、この多型においては、Ｃ対立遺伝子が自己免疫に対する感受性と相関しており、Ｔ対立遺伝子は「保護的」である（例えば、Ｐａｒｋ，ＹＪ．ら（２０００）Ｔｈｙｒｏｉｄ １０：４５３−４５９参照）；
３）ＣＴＬＡ−４イントロン１ １８２２位 Ｃ／Ｔ多型、この多型においては、Ｔ対立遺伝子が自己免疫に対する感受性と相関しており、Ｃ対立遺伝子は「保護的」である（例えば、Ｖａｉｄｙａ，Ｂ．ら（２００３）Ｃｌｉｎ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．５８：７３２−７３５）；及び
４）ＣＴＬＡ−４エクソン３ ジヌクレオチド（ＡＴ）ｎ反復多型、この多型においては、１０６塩基対の対立遺伝子が自己免疫に対する感受性と相関している（例えば、Ｋｏｔｓａ，Ｋ．ら（１９９７）Ｃｌｉｎ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．４６：５５１−５５４；Ｋｅｍｐ，Ｅ．Ｈ．ら（１９９８）Ｃｌｉｎ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．４９：６０９−６１３参照）が挙げられる。
【００４５】
上記のＵｅｄａらの研究は、これら４つの多型のいずれもが自己免疫感受性増大の原因となる変異ではなく、したがって、これらのマーカーとの何らかの相関は連鎖不均衡によるものであることを報告しているが、これらのマーカーが本発明の方法での使用に適し得るにも関わらず、ＪＯ３０、ＣＴ６０、ＪＯ３１、ＪＯ２７＿１、ＣＴＡＦ３４３、ｒｓ１８６３８００及びＭＨ３０多型は、自己免疫感受性とのそれらのより密接な相関により使用するのにより好ましい。分析するのに特に好ましい多型は、実施例１に記載されている、ＪＯ３０多型である。
【００４６】
機序により限定されることを意図するものではないけれども、Ｕｅｄａらは、疾患に保護的なハプロタイプからの可溶性スプライシング変異形態のＣＴＬＡ−４（ｓＣＴＬＡ−４）のｍＲＮＡレベルが、疾患に影響を受けやすいハプロタイプからのｓＣＴＬＡ−４のｍＲＮＡレベルよりも高いことを報告している（Ｕｅｄａら、前出）。したがって、本明細書中で記載されている多型の他に、本発明での使用に適し得るその他のＣＴＬＡ−４多型としては、その多型が自己免疫感受性と相関することが示されているか否かに関わらず、ｓＣＴＬＡ−４のｍＲＮＡレベルの低下と関連する多型が挙げられる。
【００４７】
（ＣＴＬＡ−４多型の分析）
ＣＴＬＡ−４多型は、遺伝的多型を評価するための当技術分野において知られるいずれかの適当な技法を用いて、本発明の方法において分析し得る。例えば、多型を評価するための標準的方法は、ポリメラーゼ連鎖反応−制限断片長多型（ＰＣＲ−ＲＦＬＰ）による。多数の一塩基ヌクレオチド多型（ＳＮＰ）を迅速、効率的且つ正確にタイピングするために、Ｉｎｖａｄｅｒ（登録商標）テクノロジーを使用し得る（Ｍｅｉｎ，Ｃ．ら（２０００）Ｇｅｎｏｍｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ １０：３３０−３４３中にさらに記載されており、文献の内容は参照により本明細書中に明確に組み入れるものとする）。あるいは、ＳＮＰは、Ｐｅｒｒｅｙ，Ｃ．ら（１９９９）Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ．７：１２７−１２８に記載されているような増幅不応変異システム−ポリメラーゼ連鎖反応（ＡＲＭＳ−ＰＣＲ）技法を用いて評価し得る。ジヌクレオチド反復多型、例えば、ＣＴＬＡ−４のエクソン３における（ＡＴ）ｎ反復は、例えば、Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓ，Ｍ．Ｈ．ら（１９９１）Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１９：４０１８に記載されている方法によって評価し得る。
【００４８】
（ＣＴＬＡ−４遮断療法に対する反応性の予測）
実施例１においてさらに論じられるように、ＣＴＬＡ−４多型対立遺伝子の存在と自己免疫に対する感受性の増大及びＣＴＬＡ−４遮断薬を用いた治療に対する反応性の増大との間の相関が示されている。したがって、本発明は、
被験体における少なくとも１つのＣＴＬＡ−４多型を分析すること；及び
被験体におけるＣＴＬＡ−４多型対立遺伝子の有無に基づいてＣＴＬＡ−４遮断薬を用いた治療に対する被験体の反応性を予測すること、を含む、ＣＴＬＡ−４遮断薬を用いた治療に対する被験体の反応性を予測する方法を提供する。
【００４９】
本発明の予測方法において、自己免疫疾患に対する感受性の増大に関連するＣＴＬＡ−４多型対立遺伝子が被験体中に存在する時、上記被験体は、この対立遺伝子を有さない被験体と比較して、ＣＴＬＡ−４遮断薬による治療に対する反応性が増大するものと予測される。ＣＴＬＡ−４遮断薬による治療に対する反応性の増大は、抗原刺激に対するＴ細胞反応性の増大、抗腫瘍活性の増大、自己免疫出現事象の増大、臨床的有害事象の増大、及び血清学的有害事象の増大からなる群から選択される、少なくとも１つの反応を含み得る。
【００５０】
本発明の予測方法において、自己免疫疾患に対する感受性の低減に関連するＣＴＬＡ−４多型対立遺伝子（例えば、「保護的」対立遺伝子）が被験体中に存在する時、上記被験体は、この対立遺伝子を有さない被験体と比較して、ＣＴＬＡ−４遮断薬による治療に対する反応性が低減していることが予測される。ＣＴＬＡ−４遮断薬による治療に対する反応性の低減は、抗原刺激に対するＴ細胞反応性の低減、抗腫瘍活性の低減、自己免疫出現事象の低減、臨床的有害事象の低減、及び血清学的有害事象の低減からなる群から選択される、少なくとも１つの反応性を含み得る。
【００５１】
（ＣＴＬＡ−４遮断薬治療計画の選択）
被験体における特定のＣＴＬＡ−４多型対立遺伝子の有無が、ＣＴＬＡ−４遮断薬を用いた治療に対する被験体の反応性に影響を与えるという知見が得られているので、特定のＣＴＬＡ−４多型対立遺伝子の有無に基づいて、被験体のための適当な治療計画を選択し得る。したがって、本発明は、被験体における少なくとも１つのＣＴＬＡ−４多型を分析すること、及び、被験体におけるＣＴＬＡ−４多型対立遺伝子の有無に基づいてＣＴＬＡ−４遮断薬を用いた治療計画を選択すること、を含む、ＣＴＬＡ−４遮断薬を用いた治療のための治療計画を選択する方法を提供する。
【００５２】
選択される治療計画は、例えば、標準的治療計画と比較して縮小された治療計画、又は、標準的治療計画と比較して拡大された治療計画である。「標準的治療計画」は、被験体が治療前にＣＴＬＡ−４多型についてスクリーニングされていなかった場合に被験体のために選択され得る処方計画であり、特定のＣＴＬＡ−４多型対立遺伝子を有する特定の患者群における使用に限定されない当技術分野で認められた（例えば、ＦＤＡに認可された）治療計画を含む。
【００５３】
自己免疫疾患に対する感受性と関連するＣＴＬＡ−４多型対立遺伝子の存在がＣＴＬＡ−４遮断薬治療に対する反応性の増大と相関することが示されていることから、自己免疫関連ＣＴＬＡ−４多型対立遺伝子を有する被験体のためには縮小された治療計画が選択され得る。この縮小された治療計画は、所望の免疫反応性（例えば、抗腫瘍免疫）の刺激への有効性を維持しながら、自己免疫が急進展する事象の程度、重篤度又は継続期間を低減させるために、被験体にとって好ましくあり得る。縮小された治療計画は、標準的治療計画と比較して、より低投与量のＣＴＬＡ−４遮断薬の使用、より低頻度のＣＴＬＡ−４遮断薬の投与、又はより短期間のＣＴＬＡ−４遮断薬による治療期間を含み得る。
【００５４】
例えば、標準的治療計画が３ｍｇ／ｋｇの物質の使用を含む場合、縮小された治療計画は３ｍｇ／ｋｇより少ない、例えば、２ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ又は０．１ｍｇ／ｋｇの物質の使用を含み得る。あるいは、標準的治療計画が５ｍｇ／ｋｇの物質の使用を含む場合、縮小された治療計画は５ｍｇ／ｋｇより少ない、例えば、４ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、２ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ又は０．１ｍｇ／ｋｇの物質の使用を含み得る。
【００５５】
あるいは、標準的治療計画が１ｍｇ／ｋｇの物質の使用を含む場合、縮小された治療計画は１ｍｇ／ｋｇより少ない、例えば、０．５ｍｇ／ｋｇ又は０．１ｍｇ／ｋｇの物質の使用を含み得る。さらに、例えば、標準的治療計画が４週間毎の物質の投与を含む場合、縮小された治療計画はより頻度の少ない、例えば、５週間毎、６週間毎、７週間毎、８週間毎、９週間毎、１０週間毎、１１週間毎又は１２週間毎の投与を含み得る。
【００５６】
あるいは、標準的治療計画が２週間毎の物質の投与を含む場合、縮小された治療計画はより頻度の少ない、例えば、３週間毎、４週間毎、５週間毎、６週間毎、７週間毎、８週間毎、９週間毎、１０週間毎、１１週間毎又は１２週間毎の投与を含み得る。また例えば、標準的治療計画が１２ヶ月の期間の物質による治療を含む場合、縮小された治療計画は、より短い期間、例えば、３ヶ月、６ヶ月又は９ヶ月間の治療を含み得る。あるいは、標準的治療計画が６ヶ月の期間の物質による治療を含む場合、縮小された治療計画は、より短い期間、例えば、１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月又は５ヶ月間の治療を含み得る。
【００５７】
ＣＴＬＡ−４遮断薬を用いる治療のための治療計画を選択する好ましい方法において、被験体はＪＯ３０ Ｇ／Ａ多型において２つのＧ対立遺伝子（Ｇ／Ｇ遺伝子型）を発現し、選択される治療計画は標準的治療計画と比較して縮小された治療計画である。別の実施形態において、被験体は、ＣＴ６０ Ｇ／Ａ多型における２つのＧ対立遺伝子（Ｇ／Ｇ遺伝子型）、ＪＯ３１ Ｇ／Ｔ多型における２つのＧ対立遺伝子（Ｇ／Ｇ遺伝子型）、ＪＯ２７＿１ Ｔ／Ｃ多型における２つのＴ対立遺伝子（Ｔ／Ｔ遺伝子型）、ＣＴＡＦ３４３ Ｔ／Ｃ多型における２つのＴ対立遺伝子（Ｔ／Ｔ遺伝子型）、ｒｓ１８６３８００ Ｃ／Ｔ多型における２つのＣ対立遺伝子（Ｃ／Ｃ遺伝子型）及びＭＨ３０ Ｇ／Ｃ多型における２つのＧ対立遺伝子（Ｇ／Ｇ遺伝子型）からなる群から選択される遺伝子型を発現し、選択される治療計画が標準的治療計画と比較して縮小された治療計画である。
【００５８】
別の実施形態においては、自己免疫に対するリスクの低減と関連するＣＴＬＡ−４多型対立遺伝子の存在がＣＴＬＡ−４遮断薬治療に対する反応性の低減と相関することが示されていることから、自己免疫に対して保護的なＣＴＬＡ−４多型対立遺伝子を有する被験体のために拡大された治療計画が選択され得る。この拡大された治療計画は、ＣＴＬＡ−４阻害治療の有効性を向上させるため及び免疫反応性（例えば、抗腫瘍免疫）の所望の活性化を達成するために、被験体にとって好ましく又は必要であり得、なぜならば、（これらの被験体における自己免疫が急進展する事象の低減からも明らかなように）これらの被験体は免疫寛容の進展に対してより抵抗性を示し得る場合があるからである。拡大された治療計画は、標準的治療計画と比較して、より高投与量のＣＴＬＡ−４遮断薬の使用、より高頻度の上記ＣＴＬＡ−４遮断薬の投与、又はより長期間の上記ＣＴＬＡ−４遮断薬による治療期間を含み得る。
【００５９】
例えば、標準的治療計画が３ｍｇ／ｋｇの物質の使用を含む場合、拡大された治療計画は３ｍｇ／ｋｇより多い、例えば、４ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、６ｍｇ／ｋｇ、７ｍｇ／ｋｇ、８ｍｇ／ｋｇ、９ｍｇ／ｋｇ又は１０ｍｇ／ｋｇの物質の使用を含み得る。あるいは、標準的治療計画が１ｍｇ／ｋｇの物質の使用を含む場合、拡大された治療計画は１ｍｇ／ｋｇより多い、例えば、２ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、４ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、６ｍｇ／ｋｇ、７ｍｇ／ｋｇ、８ｍｇ／ｋｇ、９ｍｇ／ｋｇ又は１０ｍｇ／ｋｇの物質の使用を含み得る。
【００６０】
また例えば、標準的治療計画が４週間毎の物質の投与を含む場合、拡大された治療計画はより頻繁な、例えば、３週間毎、２週間毎又は１週間毎の投与を含み得る。あるいは、標準的治療計画が３ヶ月毎の物質の投与を含む場合、拡大された治療計画はより頻繁な、例えば、２ヶ月毎、１ヶ月毎、４週間毎、３週間毎、２週間毎又は１週間毎の投与を含み得る。
【００６１】
また例えば、標準的治療計画が９ヶ月の期間の物質による治療を含む場合、拡大された治療計画は、より長い期間、例えば、１０ヶ月、１１ヶ月、１２ヶ月、１５ヶ月又は１８ヶ月間の治療を含み得る。あるいは、標準的治療計画が６ヶ月の期間の物質による治療を含む場合、拡大された治療計画は、より長い期間、例えば、７ヶ月、８ヶ月、９ヶ月、１０ヶ月１１ヶ月、１２ヶ月、１５ヶ月又は１８ヶ月間の治療を含み得る。
【００６２】
ＣＴＬＡ−４遮断薬を用いる治療のための治療計画を選択する別の好ましい方法において、被験体はＪＯ３０ Ｇ／Ａ多型において２つのＡ対立遺伝子（Ａ／Ａ遺伝子型）を発現し、選択される治療計画は標準的治療計画と比較して拡大された治療計画である。別の実施形態において、被験体は、ＣＴ６０ Ｇ／Ａ多型における２つのＡ対立遺伝子（Ａ／Ａ遺伝子型）、ＪＯ３１ Ｇ／Ｔ多型における２つのＧ対立遺伝子（Ｔ／Ｔ遺伝子型）、ＪＯ２７＿１ Ｔ／Ｃ多型における２つのＣ対立遺伝子（Ｃ／Ｃ遺伝子型）、ＣＴＡＦ３４３ Ｔ／Ｃ多型における２つのＴ対立遺伝子（Ｃ／Ｃ遺伝子型）、ｒｓ１８６３８００ Ｃ／Ｔ多型における２つのＴ対立遺伝子（Ｔ／Ｔ遺伝子型）及びＭＨ３０ Ｇ／Ｃ多型における２つのＣ対立遺伝子（Ｃ／Ｃ遺伝子型）からなる群から選択される遺伝子型を発現し、選択される治療計画が標準的治療計画と比較して拡大された治療計画である。
【００６３】
（ＣＴＬＡ−４遮断薬の投与）
一旦、適当な治療計画がＣＴＬＡ−４多型対立遺伝子の有無に基づいて被験体のために選択されたならば、被験体における抗原刺激に対する反応性を増大させるためにＣＴＬＡ−４遮断薬が投与され得る。したがって、別の態様において、本発明は、被験体における少なくとも１つのＣＴＬＡ−４多型を分析すること；被験体におけるＣＴＬＡ−４多型対立遺伝子の有無に基づいて、ＣＴＬＡ−４遮断薬による治療計画を選択すること；及び、被験体において抗原刺激に対する反応性が増大されるような治療計画にしたがって、被験体へＣＴＬＡ−４遮断薬を投与すること；を含む、被験体において抗原刺激に対する反応性を増大させるための方法に関する。
【００６４】
抗原刺激に対する反応性を増大させるための本発明の方法は、例えば、腫瘍を有する被験体において抗腫瘍免疫を増大させるため、細菌感染を示す被験体において抗細菌免疫を増大させるため、ウィルス感染を示す被験体において抗ウィルス活性を増大させるため、又は、病原体感染の予防的手段としてワクチン接種される被験体においてワクチン接種の効力を増大させるために、抗原反応性の増大が望ましい任意の臨床的適応又は状況において使用し得る。
【００６５】
免疫反応性に対するＣＴＬＡ−４のダウンレギュレート的効果を妨害又は阻害する任意のＣＴＬＡ−４遮断薬が当該方法において使用し得る。好ましいＣＴＬＡ−４遮断薬は、抗ＣＴＬＡ−４モノクローナル抗体、例えば、ヒト、ヒト化又はキメラモノクローナル抗体である。ヒト抗ＣＴＬＡ−４モノクローナル抗体は当技術分野において知られている。例えば、ＣＴＬＡ−４と結合する完全ヒト抗体の調製及び構造特性決定が、例えば、国際公開第０１／１４４２４号、国際公開第００／３７５０４号及び米国特許第６，６８２，７３６号に詳細に記述されている。好ましい抗ＣＴＬＡ−４ヒトモノクローナル抗体はＭＤＸ−０１０（１０Ｄ１としても知られている）であり、その構造は国際公開第０１／１４４２４号に記載されている。非ヒト抗ＣＴＬＡ−４抗体、例えば、マウス抗体、も当技術分野において知られている（例えば、Ｌｉｎｓｅｌｙ，Ｐ．Ｓ．（１９９２）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７６：１５９５−１６０４参照）。このような非ヒト抗ＣＴＬＡ−４抗体の可変領域、及びその中のＣＤＲ領域は、当技術分野において十分に確立されている技法を用いて、キメラ及びヒト化抗体を調製するために使用し得る。
【００６６】
別のタイプのＣＴＬＡ−４遮断薬はＲＮＡアダプタマーである。インビトロにおいてＣＴＬＡ−４の機能を阻害し、インビボにおいて腫瘍免疫を促進する、ＣＴＬＡ−４と高いアフィニティーで結合する多価アダプタマーは、記述されており（Ｓａｎｔｕｌｌｉ−Ｍａｒｏｔｔｏ，Ｓ．ら（２００３）Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．６３：７４８３−７４８９）、又、本発明の方法における治療に使用され得る。
【００６７】
その他のタイプのＣＴＬＡ−４遮断薬としては、ＣＴＬＡ−４の発現を低減させるアンチセンス物質、ＣＴＬＡ−４と結合してその活性を阻害するＣＴＬＡ−４リガンド由来ペプチド（例えば、Ｂ７−１又はＢ７−２ペプチド）、並びに、ＣＴＬＡ−４の活性を阻害するために選択される小分子阻害物質が挙げられる。
【００６８】
被験体への投与のために、ＣＴＬＡ−４遮断薬は通常、ＣＴＬＡ−４遮断薬及び薬学上許容し得る担体を含有する医薬組成物に製剤化される。治療組成物は通常、製造及び保存条件下で無菌及び安定でなければならない。本発明の医薬組成物は、組み合わせ治療として、すなわち、その他のＣＴＬＡ−４遮断薬、その他の治療薬（例えば、腫瘍の治療のための化学治療薬）及び免疫反応性の増大が望まれる抗原を含むワクチンと組み合わせて投与し得る。
【００６９】
本明細書中で使用する時、「薬学上許容し得る担体」は、生理学的に適合し得る任意の及び全ての溶媒、分散媒、コーティング、抗体及び抗菌剤、等張剤及び吸収遅延剤等を含む。好ましくは、担体は、（例えば、注射又は注入による）静脈内、筋肉内、皮下、非経口、脊髄内又は表皮への投与に適している。投与経路に応じて、活性化合物は、酸の作用及び活性化合物を不活性化し得るその他の自然の条件から活性化合物を保護する物質中で活性化合物をコーティングし得る。
【００７０】
本発明の医薬化合物は１以上の薬学的に許容し得る塩を含んでいてもよい。「薬学的に許容し得る塩」とは、親化合物の所望の生物学的活性を保持し、望ましくない任意の毒性効果を与えない塩を意味する（例えば、Ｂｅｒｇｅ，Ｓ．Ｍ．，ら（１９７７）Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｄ．６６：１−１９参照）。そのような塩の例としては、酸付加塩及び塩基付加塩が挙げられる。酸付加塩としては、非毒性の無機酸、例えば、塩酸、硝酸、リン酸、硫酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、亜リン酸等、に由来するもの、並びに、非毒性の有機酸、例えば、脂肪族モノ及びジカルボン酸、フェニル置換アルカン酸、ヒドロキシアルカン酸、芳香族酸、脂肪族及び芳香族スルホン酸等、に由来するものが挙げられる。塩基付加塩としては、アルカリ土類金属、例えば、ナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウム等、に由来するもの、並びに、非毒性の有機アミン類、例えば、Ｎ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン、Ｎ−メチルグルカミン、クロロプロカイン、コリン、ジエタノールアミン、エチレンジアミン、プロカイン等に由来するものが挙げられる。
【００７１】
本発明の医薬組成物はまた、薬学的に許容し得る抗酸化剤を含んでいてもよい。薬学的に許容し得る抗酸化剤の例としては、（１）水溶性抗酸化剤、例えば、アスコルビン酸、塩酸システイン、重硫酸ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、亜硫酸ナトリウム等；（２）油溶性抗酸化剤、例えば、パルミチン酸アスコルビル、ブチル化ヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、ブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、レシチン、没食子酸プロピル、アルファ・トコフェロール等；（３）クエン酸、エチレンジアミン４酢酸（ＥＤＴＡ）、ソルビトール、酒石酸、リン酸等の金属キレート剤が挙げられる。
【００７２】
本発明の医薬組成物中に使用し得る適当な水性及び非水性の担体の例としては、水、エタノール、ポリオール類（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール等）及びそれらの適当な混合物、オリーブ油等の植物油、並びに、オレイン酸エチル等の注射可能な有機エステル類が挙げられる。レシチン等のコーティング物質の使用により、分散状態において必要とされる粒径の維持により、及び、界面活性剤の使用により、適当な流動性が維持され得る。
【００７３】
これらの組成物は、保存剤、湿潤剤、乳化剤及び分散剤等のアジュバントを含んでいてもよい。微生物の存在の防止は、前出の滅菌手順、並びに各種抗体及び、例えば、パラベン、クロロブタノール、ソルビン酸フェノール等の抗菌剤を含有させることの両方により保証され得る。糖類、塩化ナトリウム等の等張物質を組成物中に含有させることが望ましい場合もある。さらに、注射可能な医薬形態の持続的吸収は、モノステアリン酸アルミニウム及びゼラチン等の吸収を遅くする物質を含有させることによりもたらせ得る。
【００７４】
薬学的に許容し得る担体としては、無菌の水性の溶液又は分散液、及び無菌注射溶液又は分散液の即時調製のための無菌粉末が挙げられる。薬学的に活性な物質に対するこのような媒体及び物質の使用は当技術分野において知られている。任意の通常の媒体又は物質は活性化合物と適合し得ない場合を除き、本発明の医薬組成物中でのその使用が意図される。補助的な活性化合物もまた組成物中に組み入れることができる。
【００７５】
本発明の物質は、当技術分野において知られている様々な方法の１以上を用いて、１以上の投与経路を介して投与することができる。当業者には明らかなように、投与経路及び／又は様式は所望の結果に応じて変化し得る。特に、抗体物質のための好ましい投与経路は、静脈注射又は注入である。その他の好ましい投与経路としては、筋肉内、皮内、腹腔内、皮下、脊髄、又は、例えば、注射若しくは注入によるその他の非経口的投与経路が挙げられる。本明細書中で使用する時、「非経口的投与」という表現は、通常は注射による、経腸及び局所以外の投与様式、を意味し、限定するものではないが、例として、静脈内、筋肉内、動脈内、髄腔内、嚢内、眼窩内、心腔内、皮内、腹腔内、経気管、皮下、表皮下、関節内、被膜下、くも膜下、脊髄内、硬膜外及び胸骨内注射及び注入が挙げられる。あるいは、本発明の物質は、非経口でない経路、例えば、鼻腔内、経口、経膣、経直腸、舌下若しくは局所等の局所的、表皮的又は粘膜的投与経路を介して投与され得る。
【００７６】
治療計画がＣＴＬＡ−４遮断薬以外の１以上のさらなる物質の使用を含む組み合わせ治療においても、ＣＴＬＡ−４遮断薬が使用され得る。組み合わせ治療のための好ましいさらなる物質は、免疫反応性の増大が望まれる抗原を含むワクチンである。例えば、腫瘍の治療のために、ＣＴＬＡ−４遮断薬を用いる治療は、腫瘍抗原を含有する腫瘍ワクチンを用いる治療と組み合わせることができる。腫瘍抗原の非限定的例としては、腫瘍細胞及びＧＭ−ＣＳＦを分泌するように形質導入された腫瘍細胞において優先的に発現されるタンパク質由来の精製ペプチドが挙げられる。非限定的な腫瘍抗原の具体例としては、ｇｐ１００ペプチド、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）、又は、１）ｇｐ１００ペプチド、２）ＭＡＲＴ−１ペプチド及び３）チロシナーゼペプチドを含む組成物が挙げられる。
【００７７】
その他の形態の組み合わせ治療としては、被験体の腫瘍の治療における１以上の化学治療薬とＣＴＬＡ−４遮断薬の投与又は被験体の細菌若しくはウィルス感染の治療における１以上の抗体若しくは抗ウィルス薬の投与が挙げられる。
【００７８】
（本発明のキット）
本発明はまた、本発明の方法を実施する際に使用し得るキットを提供する。キットは、ＣＴＬＡ−４遮断薬、及び、１以上のＣＴＬＡ−４多型を分析するための手段を含むことができる。
【００７９】
好ましい遮断薬は、抗ＣＴＬＡ−４モノクローナル抗体、例えば、キメラ、ヒト化又はヒト抗ＣＴＬＡ−４モノクローナル抗体である。その他の遮断薬としては、前述のセクションにおいて記載されたものが挙げられる。
【００８０】
好ましくは、１以上のＣＴＬＡ−４多型を分析するための手段は、その多型に特異的な１以上のポリヌクレオチドを含む。この多型を分析するための手段は、例えば、多型を評価するアッセイで使用するためのバッファー又はその他の試薬及び多型を評価するアッセイを実行するための印刷された説明書も含むことができる。
【００８１】
一実施形態において、キットはワクチンをさらに含むことができる。ワクチンはＣＴＬＡ−４阻害治療を用いて免疫反応性が刺激され得る抗原、例えば、腫瘍抗原、細菌抗原又はウィルス抗原を含むことができる。腫瘍抗原の非限定的例としては、腫瘍細胞及びＧＭ−ＣＳＦを分泌するように形質導入された腫瘍細胞において優先的に発現されるタンパク質からの精製ペプチドが挙げられる。非限定的な腫瘍抗原の具体例としては、ｇｐ１００ペプチド、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）、又は、１）ｇｐ１００ペプチド、２）ＭＡＲＴ−１ペプチド及び３）チロシナーゼペプチドを含む組成物が挙げられる。
【００８２】
本発明は、さらなる限定として解釈されるべきではない以下の実施例によってさらに説明される。本願の全体にわたって引用されている全ての参考文献、特許及び公開された特許出願は、参照により本明細書中に明確に組み入れられる。
【実施例】
【００８３】
（実施例１：ＣＴＬＡ−４遮断薬治療に対する反応性増大と自己免疫疾患に関連したＣＴＬＡ−４多型の存在との相関）
この実施例においては、進行した黒色腫を有するヒト患者をＣＴＬＡ−４遮断薬（抗ＣＴＬＡ−４ヒトモノクローナル抗体ＭＤＸ−０１０）及び３種の黒色腫抗原ペプチド（ｇｐ１００、チロシナーゼ、ＭＡＲＴ−１）を含有するペプチドワクチンにより処置する臨床試験を実施した。ワクチンを伴う抗体の毒性及び最大耐量（ＭＴＤ）をまず評価するために、３群のそれぞれに、ワクチンを伴う抗体の投与量を段階的に増やして投与した。ＭＤＸ−０１０の薬物動態及び免疫反応性は副次的評価項目とした。
【００８４】
抗ＣＴＬＡ−４治療に対する反応性を調べ、患者を自己免疫疾患に対する感受性に関連するＣＴＬＡ−４ＪＯ３０ Ｇ／Ａ多型についてスクリーニングした。その結果は、疾患に関連するＧ／Ｇ遺伝子型の存在と、臨床毒性の発生率増大及び疾患進行率低減との間の相関を立証する。対照的に、保護的Ａ対立遺伝子（Ａ／Ａ遺伝子型又はＡ／Ｇ遺伝子型）を有する患者は、臨床毒性の低減（Ａ／Ａ遺伝子型で最も低い毒性を呈する）及び疾患の進行率の増大（Ａ／Ａ遺伝子型遺伝子型で最大の進行を呈する）を呈した。この結果は、自己免疫疾患と関連するＧ／Ｇ多型の存在が、自己免疫の増大及び腫瘍進行の低減からも明らかなように、ＣＴＬＡ−４遮断薬治療に対する反応性の増大と相関することを示唆する。対照的に、自己免疫疾患に対し保護的なＡ／Ａ多型の存在は、自己免疫事象の低減（遮断薬が寛容の破綻においてはあまり効果がないことを示唆する）及び腫瘍進行の増大からも明らかなように、ＣＴＬＡ−４遮断薬治療に対する反応性の低減と相関することを示唆する。
【００８５】
本研究における材料及び方法及び得られた結果を、以下に詳述する。
【００８６】
（材料及び方法）
（患者）
患者は２００１年に改変された対癌米国合同委員会のステージ進行システムによるステージＩＩＩ又はＩＶの黒色腫を切除しており、外科的には疾患がない状態であった。彼らは治療４週間以内に行われた脳の核磁気共鳴映像撮影又はコンピュータ断層撮影スキャニング及び胸部、腹部及び骨盤のコンピュータ断層撮影スキャニングを受けており、疾患の徴候はなんら示されていなかった。適格性の基準には、年齢が１８歳以上、クレアチニンが２．０ｍｇ／ｄｌ以下、ビリルビンが２．０ｍｇ／ｄｌ以下、血小板数が１００，０００／ｍｃｌ以上、ヘモグロビンが９ｇ／ｄｌ以上、及び総ＷＢＣが３０００／ｍｃｌ以上であることを含めた。ヒト免疫不全ウィルス、Ｃ型肝炎抗体及びＢ型肝炎表面抗原滴定は陰性であることを必須とした。全ての患者はＤＮＡポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）分析によりＨＬＡ−Ａ＊０２０１陽性であった。除外の基準には、活性な自己免疫疾患、ステロイド依存性及びＭＤＸ−０１０抗体又はＭＡＲＴ−１、ｇｐ１００及びチロシナーゼペプチドによる事前処置を含めた。
【００８７】
（抗体材料）
ＭＤＸ−０１０（抗ＣＴＬＡ４モノクローナル抗体）は完全ヒト免疫グロブリン（ＩｇＧ１）抗ＣＴＬＡ４モノクローナル抗体である。これは５又は１０ｍｌ入りのバイアル中に５ｍｇ／ｍｌの濃度で供給され、２℃〜８℃の温度で保管された。０．２２μＭのフィルターを通過させてＭＤＸ−０１０を取り出し、生理食塩水中に２．５ｍｇ／ｍｌの濃度となるよう希釈して、９０分間にわたり投与した。
【００８８】
（ペプチドワクチン材料）
チロシナーゼ３６８−３７６（３７０Ｄ）ペプチド［ＮＳＣ＃６９９０４８］、ＭＡＲＴ−１２６−３５（２７Ｌ）ペプチド［ＮＳＣ＃７０９４０１］、及びｇｐ１００２０９−２１７（２１０Ｍ）ペプチド、［ＮＳＣ＃６８３４７２］ＨＬＡ−Ａ＊０２０１拘束性９又は１０アミノ酸エピトープペプチドをＧＭＰグレードで調製し、上述のように投与した（Ｐｕｌｌａｒｋａｔら（２００３）Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．４：１３０１−１３１２）。それらはＢｅｎ Ｖｅｎｕｅ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．（Ｂｅｄｆｏｒｄ，ＯＨ）より供給された。
【００８９】
Ｍｏｎｔａｎｉｄｅ ＩＳＡ−５１（不完全フロイントアジュバント又はＩＦＡとしても知られている）はＳｅｐｐｉｃ，Ｉｎｃ．，（Ｆｒａｎｋｌｉｎ Ｌａｋｅｓ，ＮＪ）により製造され、ＣＴＥＰ／ＮＣＩにより、保存剤を含まない滅菌アジュバント溶液３ｍｌが入ったガラス製アンプルで供給された。
【００９０】
（治療計画）
ＭＤＸ−０１０を、４週毎に６ヶ月間、次いで１２週毎に６ヶ月間、９０分間にわたり静脈内投与した。抗体の注入は、１回あたり不完全フロイントアジュバント（Ｍｏｎｔａｎｉｄｅ ＩＳＡ ５１）中にエマルジョン化した１ｍｇの各ペプチドを３回に分けて皮下注射するものとした。患者群はＭＤＸ−０１０を０．３、１．０又は３．０ｍｇ／ｋｇ注射され、次いでチロシナーゼ３６８−３７６（３７０Ｄ）、ｇｐ１００２０９−２１７（２１０Ｍ）及びＭＡＲＴ−１２６−３５（２７Ｌ）ペプチドの皮下注射を受けた。
【００９１】
免疫分析のための末梢血液単核細胞を得るため、最初のワクチン接種直前及び接種６ヶ月後に、５〜７リットルの交換による白血球分離採血法手順を実行した。患者を再発まで追跡した。
【００９２】
分離したサンプルを上述のように、ＰＢＭＣを精製するために処理し、−１６８℃で凍結した（Ｌｅｅら（２００Ｉ）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．１９：３８３６−３８４７）。
【００９３】
（試験評価項目）
試験の主たる評価項目は、ＭＤＸ−０１０処置における副作用及び耐性の判断及び、ワクチン投与計画と共に投与されたときのＭＤＸ−０１０最大耐量（ＭＴＤ）の決定である。２次的な評価項目は、ＭＤＸ−０１０の薬物動態及びＭＤＸ−０１０を伴うワクチンに対する免疫反応性を含む。
【００９４】
（ＥＬＩＳＰＯＴ及びテトラマー分析）
ＰＢＭＣを解凍し、一晩培養後、上述のように設定したＥＬＩＳＰＯＴ分析において試験した（Ｐｕｌｌａｒｋａｔら、前出）。メンブレンプレート（ＭＡＨＡ Ｓ４５−１０、ミリポア、Ｂｅｄｆｏｒｄ，ＭＡ）については、１次抗γ−インターフェロン抗体（ＭａｂＴｅｃｈ，Ｎａｃｋａ，スウェーデン）を添加し、冷蔵庫中に一晩置くことによって準備した。翌日、プレートを洗浄し、ブロッキング緩衝液（１０％のヒトＡＢ血清を含むＡＩＭ−Ｖ培地）と共に少なくとも１時間、３７℃でインキュベートした。ＰＢＭＣを、３連で、総容量１００μｌ中、ウェルあたり１６６，０００、８３，０００及び４１，５００細胞となるように添加した。陽性対照として１０μｇ／ｍｌのＰＨＡを６つのウェルに添加し、陰性対照としてＡＩＭ−Ｖ培地を添加した。ペプチドを次いで全てのその他のウェルに５μｇ／ｍｌで添加した。次いでプレートを５％のＣＯ２インキュベーター中で４時間、３７℃インキュベートし、次いで洗浄した。次に２次抗体（ＭａｂＴｅｃｈ）を１ｍｇ／ｍｌで添加した。このプレートを４℃で一晩インキュベートし、洗浄後に水滴を取り、１％のＢＳＡ（Ｓｉｇｍａ）と共にストレプトアビジン／アルカリホスファターゼ（ＭａｂＴｅｃｈ）を添加した。ＢＣＩＰ／ＮＢＴ（Ｋｉｒｋｅｇａａｒｄ ＆ Ｐｅｒｒｙ，Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ）を添加し、現像のためプレートを暗所でインキュベートした。次いで流水で洗浄することにより比色反応を停止した。処理後、ＫＳ Ｅｌｉｓｐｏｔ ｒｅａｄｅｒ（Ｃａｒｌ Ｚｅｉｓｓ，Ｔｈｏｒｎｗｏｏｄ，ＮＹ）上で、ＥＬＩＳＰＯＴプレートを読み取った。値をＣＤ８ Ｔ細胞１００，０００個あたりのスポット数に標準化した。陰性対照は、特徴として幾何平均値が１０５細胞あたり１０スポット未満であるＨＰＶ Ｅ７ ８６−９３ Ａ＊０２０１拘束性ペプチドを含むものとした。分析は置換ｇｐ１００２０９−２１７（２１０Ｍ）、ＭＡＲＴ−１２６−３５（２７Ｌ）及びチロシナーゼ３６８−３７６（３７０Ｄ）、ならびに野生型ｇｐ１００２０９−２１７及びＭＡＲＴ−１２７−３５ペプチドの両方を用いて実行した。
【００９５】
分析に用いるための、ｇｐ１００２０９−２１７（２１０Ｍ）、ＭＡＲＴ−１２６−３５（２７Ｌ）及びチロシナーゼ３６８−３７６（３７０Ｄ）ペプチドを含むテトラマーは、Ａｌｔａｉａｎの方法に従って製造した（Ａｌｔａｉａｎら（１９９８）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２７４：９４−９６）。テトラマー分析技法は既に公表されている（Ｗｅｂｅｒ，Ｊ．ら（２００３）Ｃａｎｃｅｒ ９７：１８６−２００；Ｐｕｌｌａｒｋａｔら、前出）。
【００９６】
各テトラマーは、被験体のペプチドに関連したＨＬＡ−Ａ２に特異的なＣＴＬ系列又はクローンに対する染色によって確認した。検出限界は上述のようにＣＤ８＋ Ｔ細胞の０．０１％とした（Ｐｕｌｌａｒｋａｔら、前出）。
【００９７】
ＥＬＩＳＰＯＴ及びテトラマー分析に関するｇｐ１００２０９−２１７（２１０Ｍ）、ＭＡＲＴ−１２６−３５（２７Ｌ）及びチロシナーゼ３６８−３７６（３７０Ｄ）ペプチドの値の、ワクチン接種前及び後の統計学的差異を調べた。陽性反応は、ワクチン接種前の値における平均の標準偏差の少なくとも３倍、ワクチン接種前の値よりも大きくなっているワクチン接種後の値として定義した。群の間の差異を比較するために、ノンパラメトリック検定（Ｗｉｌｃｏｘｏｎ Ｒａｎｋ Ｓｕｍ）を使用した。
【００９８】
（皮膚テスト）
前述のように皮膚テストを実施した（Ｌｅｅ，Ｐら（２００１）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．１９：３８３６−３８４７）。
【００９９】
全ての患者は治療前及びワクチン接種に訪れる度に、白斑についてスクリーニングするため皮膚の精密検査を受けた。眼への毒性は上述の通りに調べた（Ｐｕｌｌａｒｋａｔら、前出）。
【０１００】
（ＦＡＣＳ分析）
患者から得たＰＢＭＣはＦＩＴＣ標識抗ＣＤ８、抗ＣＣＲ９、抗ＣＬＡ、ＰＥ−コンジュゲートペプチド／ＨＬＡ−Ａ２．１テトラマーならびにＣＣＲ４抗体、及びＣｙ５標識抗ＣＤ４、１４及び１９抗体を用いて、４℃、３０分間染色した。細胞を洗浄し、ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒ（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ，Ｓａｎ Ｊｏｓｅ，ＣＡ）（Ｐｕｌｌａｒｋａｔら、前出）上で、上述のように分析した。
【０１０１】
（免疫組織化学）
ＨＭＢ−４５（ｇｐ１００）、ＭＡＲＴ−１及びチロシナーゼに関する、スライドグラス上のパラフィン包埋切片の免疫組織化学染色を、上述のように実行した（Ｐｕｌｌａｒｋａｔら、前出）。分析毎に適当な陰性及び陽性対照を含めた。
【０１０２】
保存用にホルマリン固定されパラフィン包埋された組織を５μｍ間隔で切片化し、荷電したスライド（ＰｒｏｂｅＯｎ＋ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｐｉｔｔｓｂｕｒｇｈ，ＰＡ）上に載せた。組織切片を脱パラフィンし、段階的なアルコールを通して再水和させた。組織を次いで抗原検索へと供した。その後、組織をブロッキング血清（通常５％ウマ血清）と共にインキュベートした。次いでブロッキング血清を吸引し、１次モノクローナル抗体を適当な希釈率で適用した。抗ＣＤ４及び抗ＣＤ８モノクローナル抗体（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ，Ｍｏｕｎｔａｉｎ Ｖｉｅｗ，カリフォルニア）を、スライドグラス上でのパラフィン包埋切片の免疫組織学的染色のために使用した。１次抗体とのインキュベーションは、（各抗体に応じて最適化される）系に依存して、室温又は４０℃で、通常１時間あるいは一晩行った。洗浄がこれに続き、またその後に、クロモゲンとして０．０３％のジアミノベンジジン（ＤＡＢ）、及び対比染色剤としてヘマトキシリンを用いたアビジン−ビオチン複合体免疫ペルオキシダーゼ系（Ｖｅｃｔｏｒ Ｌａｂｓ，Ｂｕｒｌｉｎｇａｍｅ，カリフォルニア）による可視化を行った。ＩＨＣ反応の質を評価するために、全ての場合において、好適な箇所で、外部対照及び内部対照の両方を使用した。
【０１０３】
（ＭＤＸ−０１０の血漿レベル）
血漿サンプルを分析まで−８０℃で保存した。ＭＤＸ−０１０の血漿レベルを調べるために定量的な機能的ＥＬＩＳＡを用いた。この分析において、血漿サンプルを、組み換えヒトＣＴＬＡ４融合タンパク質でコーティングしたプレート上でインキュベートした。結合したＭＤＸ−０１０は、抗ヒトＩｇＧ、Ｆ（ａｂ）’２アルカリホスファターゼプローブを用いて検出した。標準的曲線を作成し、この標準曲線の直線部分から血漿レベルを計算した。
【０１０４】
（抗ＭＤＸ−０１０の血漿レベル）
抗ＭＤＸ−０１０抗体分析のための血漿サンプルを分析まで−８０℃で保存した。血漿抗ＭＤＸ−０１０ ＩｇＧのレベルを決定するために半定量ＥＬＩＳＡを用いた。ＭＤＸ−０１０ Ｆ（ａｂ’）２を用いてプレートをコーティングし、抗ヒト ＩｇＧ、Ｆｃ特異的なコンジュゲートプローブを用いて抗体を検出した。バックグラウンド値である０．１００に最も近い補正されたＯＤ値を生じた血漿サンプルにおける、最も高い希釈の逆数として、データを表した。各サンプルについての結果を、前処理済みサンプルに対する相対的な増大倍率として表した。４倍を超える増大を伴うサンプルを陽性と判断した。抗ＭＤＸ−０１０抗体が循環中のＭＤＸ−０１０と結合すると考えられるため、循環レベルのＭＤＸ−０１０を有するサンプルは実際の力価よりも低い値となり得るであろう。
【０１０５】
（ＣＴＬＡ−４多型分析）
ゲノムＤＮＡを、ＱｉａＡｍｐ ｋｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ，Ｖａｌｅｎｃｉａ，ＣＡ）を用いて末梢血液単核細胞から単離した。ＣＴＬＡ−４ＪＯ３０ Ｇ／Ａ多型に関する遺伝子型を、上述のＰＣＲ−ＲＦＬＰ手法を用いて分析した（Ｐｅｒｒｅｙ，Ｃ．ら（１９９９）Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ７：１２７ −１２８）。
【０１０６】
（結果）
（人口統計）
１９名の患者をこのフェーズ１の試験で処置した。７名の患者はステージＩＶの疾患を切除されており、残る１２名はステージＩＩＩの疾患を切除されていた。８名の患者は細胞ワクチン又はα−インターフェロンを用いた事前の免疫治療を受けており、２名は生化学的治療を受けており、また全ての患者は外科手術を受けていた。最初の診断からの期間の中央値は２０ヶ月であった。７名の患者はＭＤＸ−０１０を投与あたり０．３ｍｇ／ｋｇで投与され（１群）、７名は１．０ｍｇ／ｋｇ（２群）、及び５名は３．０ｍｇ／ｋｇ（３群）で投与された。ＦＤＡの要求により、１番目の群における７名の患者は、計画された注入の１週間前における彼らの血清抗体レベルが≦２μｇ／ｍｌであった場合のみに、ＭＤＸ−０１０を４週間毎に投薬された。この必要性は、２番目の群における患者番号８の後に高まった。
【０１０７】
（自己免疫毒性）
この試験において、主にグレードＩ及びＩＩの患者の大半において、発熱及びインフルエンザに似た症状を伴う局所的な痛み、腫れ、肉芽腫形成を含む、ペプチドワクチン試験前に記述された毒性も観察された。観察された異常な毒性は、１名の患者におけるブドウ膜炎及び胃腸（ＧＩ）毒性、及び２群のその他２名の患者における発疹、及び３群の５名全ての患者におけるＧＩ毒性であった。３群における３名の患者はグレードＩＩの下痢に悩まされ、この群の残る２名はグレードＩＩＩの下痢を発症した。ブドウ膜炎及びグレードＩＩＩの出血性下痢を発症した２群の患者は入院を必要とした。３群の１名の患者は、静脈内鎮痛剤及び支援管理を必要とする重篤なグレードＩＩＩの腹痛及びグレードＩＩの下痢の認定を必要とした。８名の患者は、ＭＤＸ−０１０に関連すると考えられ、病因となる自己免疫であり得る毒性の徴候を有した。
【０１０８】
２群における患者８は、２回目のワクチンを伴うＭＤＸ−０１０注射後に左胸部にグレードＩＩの発疹を生じた。生検の結果、脈管炎を伴わない皮膚の肥厚及び血管周囲細胞浸潤（ｐｅｒｉ−ｖａｓｃｕｌａｒ ｃｕｆｆｉｎｇ）を伴うＣＤ４＋ Ｔ細胞の深い真皮内浸潤が明らかになった。ＣＤ８＋細胞による、より軽度な浸潤も見られた。患者のワクチン接種計画が中断されなかった発疹は、６ヶ月を超えてゆっくりと消失した。
【０１０９】
２群の患者１９は、１回目のＭＤＸ−０１０注入後に、自然治癒性のグレードＩＩの下痢を発症した。２回目の注入後１週間、この患者は出血性の下痢、視覚症状、羞明、発熱及び倦怠感を呈した。
【０１１０】
結腸鏡検査により、潰瘍形成を伴わない直腸における広汎な炎症が明らかになった。結腸鏡検査時に得られた直腸の生検から、腺には及ばない顕著なＣＤ４＋Ｔ細胞浸潤が明らかになった。ＣＤ８＋ Ｔ細胞による、直腸間質の、より軽度の浸潤もみられた。この者は、ブドウ膜炎及び結腸炎の治療のためのステロイドを必要とし、６０日以内の全症状の消失を伴う唯一の患者であった。
【０１１１】
（実験値）
総白血球数（ＷＢＣ）、ヘモグロビン及び血小板数を、最初の３回のＭＤＸ−０１０処置期間中、０、２８及び５６日目に測定した。経時的な又は群の間での血液学的パラメーターの顕著な変化は何らみられなかった。
【０１１２】
上述のように、１回目、２回目及び３回目のＭＤＸ−０１０注入時に、ＰＢＭＣ検体におけるフローサイトメトリー分析を実行した。ＣＤ３＋、ＣＤ４＋、ＣＤ８＋ Ｔ細胞、ＣＤ５６＋ ＮＫ細胞、及びａｎｄ ＣＤ １９＋ Ｂ細胞を列挙した。これらの小集合において一貫性のある経時的な変化はみられなかった。活性化マーカーＣＤ６９及びＨＬＡ−ＤＲ、ならびに調節マーカーＣＤ２５もまたＴ細胞において測定した。注目された唯一の変化は、１ｍｇ／ｋｇ及び３ｍｇ／ｋｇの投与量における、活性化されたヘルパーＴ細胞の数の増大を反映したＣＤ４＋／ＨＬＡ−ＤＲ＋ Ｔ細胞の経時的増大であった。
【０１１３】
（自己免疫パラメーター）
ＭＤＸ−０１０によるＣＴＬＡ−４シグナリングの阻害によってもたらされる自己免疫の副作用が、先の試験において記述されているため、自己免疫反応と関連する血清学的あるいは臓器機能的な変化をモニターした。赤血球沈降速度（ＥＳＲ）、抗核抗体（ＡＮＡ）、及び甲状腺刺激ホルモンを、全ての患者において２ヶ月毎に測定した。血清学的あるいはＴＳＨな結果における変化は見られなかった。特に、顕著な皮膚又はＧＩ自己免疫副作用の徴候を伴う患者においてさえも、ＥＳＲ又はＡＮＡにおける変化は見られなかった。患者は２ヶ月毎に細隙灯検査による眼科的な評価を受けた。ワクチン／ＭＤＸ−０１０の２回目の投与後にブドウ膜炎を発症した患者１９で、細隙灯検査においてはっきりとした前房における炎症細胞の徴候が見られ、それは局所的なプレドニソロンの１日２回の点眼及び徐々に低減させた静脈内のデカドロン投与、その後の４週間にわたるプレドニソンの経口投与後、６０日を超えてゆっくりと消失した。このことが唯一の、何らかの眼科的な評価における症状としての異常であった。
【０１１４】
（ｐＫ分析）
血清ＭＤＸ−０１０レベルの薬物動態学的分析が、最初の注入の時点において６時間以上行われた。底値のレベルは続くそれぞれの注入の前に出され、ピークサンプルを各注入の１時間後に得た。８０〜９０μｇ／ｍｌまでの投与量依存的なピーク値が、最初の注入から２４０分後に見られた。１０μｇ／ｍｌの底値は、最も高投与量のＭＤＸ−０１０を受けた患者において生じた。このレベルは、インビトロのＣＴＬＡ−４シグナリングを阻害するために使用される時、抗体の活性な範囲内に十分入るものである。
【０１１５】
（免疫反応性）
１９名の患者のうち１８名は、試験開始前及びペプチド／ＩＦＡ及びＭＤＸ−０１０を伴うワクチン接種後６ヶ月に、白血球分離を完了した。ＭＡＲＴ−１、ｇｐ１００及びチロシナーゼに対する免疫反応性の分析を、ＥＬＩＳＰＯＴ及びテトラマー分析を用いて実行した。
【０１１６】
ＥＬＩＳＰＯＴは、γ−インターフェロンを分泌するＣＤ８＋ Ｔ細胞の抗原特異的な活性化を測定する機能的分析である。１８名の患者が評価されるサンプルを有していた。７名（３９％）の患者は、ワクチン接種後に、ｇｐ１００２０９−２１７（２１０Ｍ）に対し統計学的に顕著な免疫反応性を有した。さらに４名の患者が予め示されたＭＡＲＴ−１免疫を有していたにも関わらず、３名（１７％）の患者のみが、ＭＡＲＴ−１２６−３５（２７Ｌ）に対する反応性における統計学的に顕著な増大を有した。ｇｐ１００に対する事前のワクチン反応性が一般的に低い一方、ＭＡＲＴ−１に対する高レベルの事前のワクチン反応性が見られた。患者数が限られていることが信頼性の高い相関形成を妨げてはいるが、ワクチン投与量に対する又は自己免疫毒性の進展に対するＥＬＩＳＰＯＴ反応性の明確な相関は見られなかった。同様の数の患者が野生型ｇｐ１００２０９−２１７（６／１８）及びＭＡＲＴ−１２７−３５ペプチド（３／１８）に対する免疫反応性を有していたが、その反応性は、より低いものであった。チロシナーゼに対する顕著なＥＬＩＳＰＯＴの反応性は観察されなかった。
【０１１７】
テトラマー分析は、ＭＨＣ−クラスＩペプチドの組み合わせに特異的な単細胞ＣＤ８＋Ｔ細胞を列挙する。６回のワクチン接種に続く６ヶ月目のワクチン前及びワクチン後のｇｐ１００２０９−２１７（２１０Ｍ）テトラマー分析の結果を判断した。ｇｐ１００に対する事前の反応性は観察されなかったが、ワクチン接種後に８／１６（５０％）の患者は、ｇｐ１００−２０９−２１７（２１０Ｍ）特異的なＴ細胞数の顕著な増大を示した。１６名中９名（５６％）の患者では、ワクチン接種後のＭＡＲＴ−１−２６−３５（２７Ｌ）特異的Ｔ細胞数の顕著な増大があった。予め存在するＭＡＲＴ−１に対する強い反応性が明確に示される。チロシナーゼに対するテトラマーの顕著な反応性は観察されなかった。類似の割合の患者においてｇｐ１００２０９−２１７（７／１６）及びＭＡＲＴ−１２７−３５（８／１６）野生型ペプチドに対する反応性の徴候があったが、反応性のレベルは、より低いものであった。
【０１１８】
（ＣＣＲ９発現に関するフローサイトメトリー）
自己免疫の副作用を有する患者において観察される皮膚反応及び消化器症状の発現を抑えるＭＤＸ−０１０／ワクチンで処置された患者において、皮膚（ＣＬＡ及びＣＣＲ４）及び胃腸粘膜（ＣＣＲ９）に関するＴ細胞ホーミング受容体が上方調節され得る。治療計画開始前及び開始後６ヶ月に得た全ＰＢＭＣ試料を用いたフローサイトメトリー分析を実行し、次いで、上記マーカーに関し抗体を用いた染色を行った。ＣＣＲ９発現に関する結果を調べ、特に２つの高投与量群において、ＭＤＸ−０１０に加えたワクチン接種後にＣＤ４＋ Ｔ細胞におけるＣＣＲ９の発現が増大する傾向があることを示す。１３名の患者のうち８名（６２％）でＣＣＲ９に関するＣＤ４＋ Ｔ細胞の染色における顕著な増大があった。より少ない投与量群においては５名中１名のみで増大があったのに対して、高投与量群において試験された４名の患者のうち３名で増大があった。ＣＤ４／ＣＬＡ又はＣＤ４／ＣＣＲ４染色に関する変化は見られなかった。
【０１１９】
（多型）
ＣＴＬＡ−４に関するいくつかの一塩基ヌクレオチド多型が同定されている。これらの一つであるＪＯ３０は、Ｔ細胞上でのＣＴＬＡ−４発現レベルと相関する３つの対立遺伝子をコードする。多型に関するＧＧ対立遺伝子は、「低い」ＣＴＬＡ−４レベルと相関し、また、若年型糖尿病及びその他の自己免疫疾患と関連することが示された（Ｕｅｄａら（２００３）Ｎａｔｕｒｅ ４２３：５０６−５１１）。我々は、「低い」ＣＴＬＡ−４対立遺伝子（ＧＧ）を有する患者がＣＴＬＡ−４遮断を伴う自己免疫進行におけるより高い機会を有するであろうこと、また「高い」ＣＴＬＡ−４対立遺伝子（ＡＡ又はＡＧ）がＭＤＸ−０１０遮断から受ける影響はより少なく、自己免疫進行の機会がより少ないであろうことを仮定した。実際に、「低い」ＣＴＬＡ−４対立遺伝子（ＧＧ）を有する患者４名のうち３名（７５％）で自己免疫症状が進行し、これら４名のうち１名（２５％）のみの患者が再発した。４名全ての患者は１ｍｇ／ｋｇ又は３ｍｇ／ｋｇのＭＤＸ−０１０投与を受けた。ＡＡ又はＡＧ対立遺伝子のいずれかを有する残り１５名の患者のうち、５名（３３％）のみで自己免疫症状が進行し、１０名（６７％）が再発した。結果を図１に示すグラフ中にまとめる。
【０１２０】
（臨床的結果）
続く２４ヶ月で、この試験で処置された１９名の患者のうち１１名は再発し、３名は死亡した。自己免疫の徴候を有さない１１名の患者のうち、９名（８２％）は再発し、２名は死亡した。再発までの平均期間は７ヶ月であった。１９名のうち８名（４２％）の患者は自己免疫症状を示した；２名は再発し、１名は死亡した。最も高投与量群（３ｍｇ／ｋｇ）における５名全て（１００％）の患者は自己免疫の徴候を有した；２名は（４０％）再発し、４名は生存し、１名は疾患を有していた。
【０１２１】
２つのより低投与量群における１４名の患者のうち、３名（２１％）のみが自己免疫効果に苦しみ、９名（６４％）の患者は再発し、２名は死亡した。これらの結果は、自己免疫の進行と再発防止との相関可能性を提起する。興味深いことに、血清学的な自己免疫であるという一貫した証拠は見出されず、抗ＭＤＸ−０１０抗体反応が進行した患者はみられなかった。
【０１２２】
（実施例２：ＣＴＬＡ−４多型の評価）
グレーブス病、自己免疫性甲状腺機能低下症（ＡＩＨ）及びタイプ１糖尿病（ＴｌＤ）等の自己免疫疾患に対する感受性は、ＣＴＬＡ−４の６．１ ｋｂの非コード３’領域にマッピングされている（Ｕｅｄａ，Ｈ．ら（２００３；Ｎａｔｕｒｅ ４２３：５０６−５１１，補足情報Ａ及びＢを含むその全文を、参照により本明細書中に具体的に組み入れるものとする）。この研究において、１０８の一塩基ヌクレオチド多型（ＳＮＰ）及びＣＴＬＡ−４（ＡＴ）ｎ −３’非翻訳領域（ＵＴＲ）マーカーが、３８４のグレーブス病のケース及び６５２の対照、２２８のＡＩＨのケース及び８４４の対照、及び３，６７１のＴｌＤファミリーにおいて遺伝子型タイピングされた。自己免疫疾患に対する感受性と最も密接に関連する７つのＳＮＰは、ＣＴ６０、ＪＯ３０、ＪＯ３１、ＪＯ２７＿１、ＣＴＡＦ３４３、ｒｓ１８６３８００及びＭＨ３０マーカーであった。これらのＳＮＰの配列は以下の通りであり、多型ヌクレオチドの位置を、疾患に関係する対立遺伝子を表す１番目のヌクレオチド及び、疾患に関係しない対立遺伝子を表す２番目のヌクレオチドを伴って括弧内に示す：
【０１２３】
【化１】
ＣＴＬＡ−４遮断薬治療を受けている被験体におけるＣＴＬＡ−４多型の発現を調べるために、標準的方法により、末梢血液リンパ球からゲノムＤＮＡを単離した。ＳＮＰを評価するための好ましい方法は、Ｍｅｉｎ，Ｃ．ら（２０００）によりＧｅｎｏｍｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ １０：３３０−３４３に記載されたＩｎｖａｄｅｒ（登録商標）技法である（その内容を参照により本明細書中に明示的に組み入れるものとする）。あるいは、ＳＮＰは、Ｐｅｒｒｅｙ，Ｃ．ら（１９９９）Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ．７：１２７−１２８中に記載されるようなａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｒｅｆｒａｃｔｏｒｙ ｍｕｔａｔｉｏｎ ｓｙｓｔｅｍ−ポリメラーゼ連鎖反応（ＡＲＭＳ−ＰＣＲ）技法を用いて評価する。分析される多型を特異的に検出するためのプローブのセットは公知の方法論に従って設計し、合成する。
【図面の簡単な説明】
【０１２４】
【図１】図１は、ＪＯ３０ Ａ／ Ａ多型、ＪＯ３０ Ａ／Ｇ多型又はＪＯ３０ Ｇ／Ｇ多型を有する被験体における、ＭＤＸ−０１０及びペプチドワクチンを用いた処置後に続く臨床毒性の発生率及び疾患進行をまとめた棒グラフである。
【背景技術】
【０００１】
（発明の背景）
ＣＴＬＡ−４は元々、マウス細胞傷害性Ｔ細胞ｃＤＮＡライブラリーの示差的スクリーニングにより同定されたＴ細胞表面分子である（非特許文献１）。ＣＴＬＡ−４は免疫グロブリン（Ｉｇ）スーパーファミリーの一員であり、単一の細胞外Ｉｇドメインを含む。マウスＣＴＬＡ−４ｃＤＮＡに対するヒトの相当物が同定されており（非特許文献２）、この遺伝子はＴ細胞表面分子ＣＤ２８と同じ染色体領域（２ｑ３３−３４）にマップされている（非特許文献３）。ＣＴＬＡ−４及びＣＤ２８は相同性を示し、両者ともＢ細胞表面分子のＢ７−１及びＢ７−２に結合することが示されている。ＣＤ２８Ｔは細胞の活性化に関し刺激性のある分子であることが立証されている一方、ＣＴＬＡ−４はＴ細胞活性化の抑制剤として逆の役割を有することが立証されている（非特許文献４；非特許文献５；非特許文献６）。
【０００２】
例えば、ＣＴＬＡ−４欠損マウスでは異常なまでのリンパ増殖が生じることが報告されている（非特許文献６）。ＣＴＬＡ−４遮断がインビトロ（非特許文献７）及びインビボ（非特許文献８）でＴ細胞反応性を増大させ、抗腫瘍免疫を激化させ（非特許文献９）、また自己免疫疾患を引き起こす（非特許文献１０）ことも報告されている。特許文献１、特許文献２及び特許文献３は、例えば腫瘍を有する被験体における抗腫瘍反応性を増大させるために、抗ＣＴＬＡ−４抗体等のＣＴＬＡ−４遮断薬を用いて抗原刺激に対する哺乳類Ｔ細胞の反応性を増大させる方法を記述する。
【０００３】
非ヒトＣＴＬＡ−４抗体は上述の各種研究において用いられている。さらに、ヒトＣＴＬＡ−４に対するヒト抗体が記述されている（例えば、特許文献４及び特許文献５）。ヒト抗ＣＴＬＡ−４抗体はヒトにおいて臨床的に使用されており、抗腫瘍反応性等のＴ細胞反応性を増大させることが示されている（例えば、特許文献６）。抗ＣＴＬＡ−４治療はまた、自己免疫反応を導くことも示されており（例えば、特許文献７）、ＣＴＬＡ−４遮断が自己抗原に対する寛容を打ち破ることができることを示唆する。
【０００４】
モノクローナル抗体治療は癌及びその他の疾患の治療において成功裏に用いられており、多数の（キメラ、ヒト化又は完全なヒト）モノクローナル抗体がヒトにおける使用に関しＦＤＡによって認可されている。このような治療の成功が実証されている一方、処置される全ての被験体が、必ずしも抗体治療に対し反応を示す又は望んだ程度の反応を示すとは限らない。したがって、抗体治療の効果を予測し向上させるための方法に非常に関心が持たれている。
【特許文献１】米国特許第５，８５５，８８７号明細書
【特許文献２】米国特許第５，８１１，０９７号明細書
【特許文献３】米国特許第６，０５１，２２７号明細書
【特許文献４】国際公開第０１／１４４２４号パンフレット
【特許文献５】国際公開第００／３７５０４号パンフレット
【特許文献６】米国特許出願公開第２００４０００５３１８号明細書
【特許文献７】国際公開第００／３２２１号パンフレット
【非特許文献１】Ｂｒｕｎｅｔら，Ｎａｔｕｒｅ，１９８７年，第３２８巻，ｐ．２６７−２７０
【非特許文献２】Ｄａｒｉａｖａｃｈら，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１９８８年，第１８巻，ｐ．１９０１−１９０５
【非特許文献３】Ｌａｆａｇｅ−Ｐｏｃｈｉｔａｌｏｆｆら，Ｉｍｍｕｎｏ−ｇｅｎｅｔｉｃｓ，１９９０年，第３１巻，ｐ．１９８−２０１
【非特許文献４】Ｋｒｕｍｍｅｌら，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，１９９５年，第１８２巻，ｐ．４５９−４６５
【非特許文献５】Ｋｒｕｍｍｅｌら，Ｉｎｔ’ｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１９９６年，第８巻，ｐ．５１９−５２３
【非特許文献６】Ｃｈａｍｂｅｒｓら，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ．，１９９７年，第７巻，ｐ．８８５−８９５
【非特許文献７】Ｗａｌｕｎａｓら，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ．，１９９４年，第１巻，ｐ．４０５−４１３
【非特許文献８】Ｋｅａｒｎｅｙら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１９９５年，第１５５巻，ｐ．１０３２−１０３６
【非特許文献９】Ｌｅａｃｈら，Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９９６年，第２７１巻，ｐ．１７３４−１７３６
【非特許文献１０】Ｌｕｈｄｅｒら，Ｊ Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，１９９８年，第１８７巻，ｐ．４２７−４３２
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【０００５】
（発明の概要）
本発明は、処置される被験体におけるＣＴＬＡ−４多型を調べることを含む、ＣＴＬＡ−４遮断薬を用いた治療効果を予測し向上させる方法を提供する。本発明は、少なくとも部分的には、被験体におけるある種のＣＴＬＡ−４多型対立遺伝子の存在が、ＣＴＬＡ−４遮断薬を用いた治療への反応性増大又は低減と関連するという観察に基づく。特に、自己免疫疾患に対する感受性増大と関連するＣＴＬＡ−４多型対立遺伝子は、被験体における自己免疫反応の増大及び腫瘍プログレッションの低減からも明らかなように、ＣＴＬＡ−４遮断薬治療に対する反応性増大と相関していることが見出されている。対照的に、自己免疫疾患に対する感受性低減と関連するＣＴＬＡ−４多型対立遺伝子（すなわち、自己免疫疾患に対する感受性を保護する多型対立遺伝子）は、被験体における自己免疫反応の低減及び腫瘍プログレッションの増大からも明らかなように、ＣＴＬＡ−４遮断薬治療に対する反応性低減と相関していることが見出されている。したがって、ＣＴＬＡ−４遮断薬治療を受けている被験体において、被験体における治療に対する反応性を予測するために、及び／又は適当な治療計画の選択を助けるために、ＣＴＬＡ−４多型を評価することができる。
【０００６】
一態様において、本発明は、
被験体における少なくとも１つのＣＴＬＡ−４多型を分析すること：及び、
その被験体におけるＣＴＬＡ−４多型対立遺伝子の有無に基づいてＣＴＬＡ−４遮断薬を用いた治療に対する被験体の反応性を予測すること、
を含む、ＣＴＬＡ−４遮断薬を用いた治療に対する被験体の反応性を予測する方法に関する。
【０００７】
この方法は、被験体におけるＣＴＬＡ−４多型対立遺伝子の有無に基づいてＣＴＬＡ−４遮断薬を用いた治療計画を選択することをさらに含む。したがって、別の態様において、本発明は、
被験体における少なくとも１つのＣＴＬＡ−４多型を分析すること：及び、
その被験体におけるＣＴＬＡ−４多型対立遺伝子の有無に基づいてＣＴＬＡ−４を用いた治療計画を選択すること、
を含む、ＣＴＬＡ−４遮断薬を用いた治療計画を選択する方法に関する。
【０００８】
この方法は、被験体に対し、例えばその被験体における抗原刺激への反応性を増大させるために（例えば、腫瘍を有している被験体における抗腫瘍免疫を増大させるために）ＣＴＬＡ−４遮断薬を投与することをさらに含み得る。したがって、別の態様において、本発明は、
被験体における少なくとも１つのＣＴＬＡ−４多型を分析すること：及び、
その被験体におけるＣＴＬＡ−４多型対立遺伝子の有無に基づいてＣＴＬＡ−４を用いた治療計画を選択すること：及び、
その被験体において抗原刺激に対する反応性が増大するような上記治療計画に従って、被験体に上記ＣＴＬＡ−４遮断薬を投与すること、
をさらに含む、被験体における抗原刺激に対する反応性を増大させるための方法に関する。
【０００９】
本発明の方法において、分析されるＣＴＬＡ−４多型は、例えば、自己免疫疾患に対する感受性に関連する一塩基多型（ＳＮＰ）である。分析される好ましいＳＮＰは、ＪＯ３０ Ｇ／Ａ多型である。分析されるその他の好ましいＳＮＰは、ＣＴ６０ Ｇ／Ａ多型、ＪＯ３１ Ｇ／Ｔ多型、ＪＯ２７＿１ Ｔ／Ｃ多型、ＣＴＡＦ３４３ Ｔ／Ｃ多型、ｒｓ１８６３８００ Ｃ／Ｔ多型及びＭＨ３０ Ｇ／Ｃ多型である。
【００１０】
他の実施形態において、分析されるＣＴＬＡ−４多型は、ＣＴＬＡ−４エクソン１の４９位のＡ／Ｇ多型、ＣＴＬＡ−４プロモーターの−３１８位のＣ／Ｔ多型、ＣＴＬＡ−４イントロン１の１８２２位のＣ／Ｔ多型、及びＣＴＬＡ−４エクソン３のジヌクレオチド（ＡＴ）ｎ反復多型からなる群から選択される、自己免疫疾患に対する感受性と関連する多型である。
【００１１】
ＣＴＬＡ−４遮断薬による治療に対する反応性を予測するための本発明の方法において、自己免疫疾患に対する感受性の増大に関連するＣＴＬＡ−４多型対立遺伝子が上記被験体中に存在する場合には、この被験体は、上記対立遺伝子を有さない被験体と比較して、ＣＴＬＡ−４遮断薬による治療に対する反応性が増大するものと予測される。ＣＴＬＡ−４遮断薬による治療に対する反応性増大は、抗原刺激に対するＴ細胞反応性の増大、抗腫瘍活性の増大、自己免疫出現事象（ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ ｂｒｅａｋｔｈｒｏｕｇｈ ｅｖｅｎｔ）の増大、臨床的有害事象の増大、及び血清学的有害事象の増大からなる群から選択される少なくとも１つの反応を含み得る。
【００１２】
ＣＴＬＡ−４遮断薬による治療に対する反応性を予測するための本発明の方法において、自己免疫疾患に対する感受性の低減に関連するＣＴＬＡ−４多型対立遺伝子が上記被験体中に存在する場合には、この被験体は、上記対立遺伝子を有さない被験体と比較して、ＣＴＬＡ−４遮断薬による治療に対する反応性が低減していることが予測される。ＣＴＬＡ−４遮断薬による治療に対する反応性低減は、抗原刺激に対するＴ細胞反応性の低減、抗腫瘍活性の低減、自己免疫出現事象の低減、臨床的有害事象の低減、及び血清学的有害事象の現象からなる群から選択される少なくとも１つの反応を含み得る。
【００１３】
ＣＴＬＡ−４遮断薬を用いた治療計画を選択するための好ましい方法においては、被験体はＪＯ３０ Ｇ／Ａ多型における２つのＧ対立遺伝子（Ｇ／Ｇ遺伝子型）を発現し、選択されるこの治療計画は標準的治療計画と比較して縮小された治療計画である。別の実施形態においては、被験体はＣＴ６０ Ｇ／Ａ多型における２つのＧ対立遺伝子（Ｇ／Ｇ遺伝子型）、ＪＯ３１ Ｇ／Ｔ多型における２つのＧ対立遺伝子（Ｇ／Ｇ遺伝子型）、ＪＯ２７＿１ Ｔ／Ｃ多型における２つのＴ対立遺伝子（Ｔ／Ｔ遺伝子型）、ＣＴＡＦ３４３ Ｔ／Ｃ多型における２つのＴ対立遺伝子（Ｔ／Ｔ遺伝子型）、ｒｓ１８６３８００ Ｃ／Ｔ多型における２つのＣ対立遺伝子（Ｃ／Ｃ遺伝子型）及びＭＨ３０ Ｇ／Ｃ多型における２つのＧ対立遺伝子（Ｇ／Ｇ遺伝子型）からなる群から選択される遺伝子型を発現し、選択される治療計画は標準的治療計画と比較して縮小された治療計画である。縮小された治療計画の例としては、標準的治療計画と比較して、より低投与量のＣＴＬＡ−４遮断薬の使用、より低頻度の上記ＣＴＬＡ−４遮断薬の投与、又はより短期間の上記ＣＴＬＡ−４遮断薬による治療期間を含む。
【００１４】
ＣＴＬＡ−４遮断薬を用いた治療計画を選択するためのその他の好ましい方法においては、被験体はＪＯ３０ Ｇ／Ａ多型における２つのＡ対立遺伝子（Ａ／Ａ遺伝子型）を発現し、選択されるこの治療計画は標準的治療計画と比較して拡大された治療計画である。別の実施形態においては、被験体はＪＯ３０ Ｇ／Ａ多型における２つのＡ対立遺伝子（Ａ／Ａ遺伝子型）、ＣＴ６０ Ｇ／Ａ多型における２つのＡ対立遺伝子（Ａ／Ａ遺伝子型）、ＪＯ３１ Ｇ／Ｔ多型における２つのＴ対立遺伝子（Ｔ／Ｔ遺伝子型）、ＪＯ２７＿１ Ｔ／Ｃ多型における２つのＣ対立遺伝子（Ｃ／Ｃ遺伝子型）、ＣＴＡＦ３４３ Ｔ／Ｃ多型における２つのＣ対立遺伝子（Ｃ／Ｃ遺伝子型）、ｒｓ１８６３８００ Ｃ／Ｔ多型における２つのＴ対立遺伝子（Ｔ／Ｔ遺伝子型）及びＭＨ３０ Ｇ／Ｃ多型における２つのＣ対立遺伝子（Ｃ／Ｃ遺伝子型）からなる群から選択される遺伝子型を発現し、選択される治療計画は標準的治療計画と比較して拡大された治療計画である。拡大された治療計画の例としては、標準的治療計画と比較して、より高投与量のＣＴＬＡ−４遮断薬の使用、より高頻度の上記ＣＴＬＡ−４遮断薬の投与、又はより長期間の上記ＣＴＬＡ−４遮断薬による治療期間を含む。
【００１５】
本発明の方法において、ＣＴＬＡ−４多型は、好適な公知の技法、例えば、ポリメラーゼ連鎖反応−制限断片長多型（ＰＣＲ−ＲＦＬＰ）分析により分析することができる。
【００１６】
好ましいＣＴＬＡ−４遮断薬は、キメラ、ヒト化又はヒト抗ＣＴＬＡ−４モノクローナル抗体等の抗ＣＴＬＡ−４モノクローナル抗体である。ＣＴＬＡ−４遮断薬のその他の例としては、ＣＴＬＡ−４に結合するアプタマー、ＣＴＬＡ−４の発現を低減させるアンチセンス物質、及びＣＴＬＡ−４に結合する可溶性ペプチド又はタンパク質リガンドが挙げられる。
【００１７】
本発明の方法に従い処置される好ましい被験体はヒト被験体である。
【００１８】
本発明のその他の態様は、
ＣＴＬＡ−４遮断薬；及び、
１以上のＣＴＬＡ−４多型を分析するための手段、
を含むキットに関する。
【００１９】
好ましい遮断薬は、キメラ、ヒト化又はヒト抗ＣＴＬＡ−４モノクローナル抗体等の抗ＣＴＬＡ−４モノクローナル抗体である。好ましくは、１以上のＣＴＬＡ−４多型を分析する手段は、その多型に特異的な１以上のポリヌクレオチドを含む。
【００２０】
一実施形態において、キットは、腫瘍抗原又はＧＭ−ＣＳＦを分泌するように形質導入された腫瘍細胞等のワクチンをさらに含む。腫瘍抗原の例としては、ｇｐ１００ペプチド、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）又は、１）ｇｐ１００ペプチド、２）ＭＡＲＴ−１ペプチド及び３）チロシナーゼペプチドを含む組成物が挙げられる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２１】
（発明の詳細な説明）
本発明は、治療被験体におけるＣＴＬＡ−４多型対立遺伝子の発現に基づく、ＣＴＬＡ−４遮断薬を用いた治療に対する被験体の反応性を予測する方法、及び、ＣＴＬＡ−４遮断薬を用いた治療計画を選択する方法を提供する。本発明は、少なくとも部分的には、被験体における特定のＣＴＬＡ−４多型対立遺伝子の存在がＣＴＬＡ−４遮断薬を用いた治療に対する反応性の増大又は低減と関連するという知見に基づいている（実施例１参照）。特に、被験体における自己免疫反応の増大及び疾患進行の低減からも明らかなように、自己免疫疾患に対する感受性の増大と関連するＣＴＬＡ−４多型対立遺伝子は、ＣＴＬＡ−４遮断薬治療に対する反応性の増大と相関することが見出されている。対照的に、被験体における自己免疫反応の低減及び疾患進行の増大からも明らかなように、自己免疫疾患に対する感受性の低減と関連するＣＴＬＡ−４多型対立遺伝子（すなわち、自己免疫疾患に対する感受性にとって保護的な多型対立遺伝子）は、ＣＴＬＡ−４遮断薬治療に対する反応性の低減と相関することが見出されている。したがって、治療に対する被験体の反応性を予測するために、且つ／又は適当な治療計画の選択に役立てるために、ＣＴＬＡ−４遮断薬治療を受けている被験体において、ＣＴＬＡ−４多型を評価することができる。
【００２２】
本発明をより容易に理解し得るために、特定の用語がまず初めに定義される。さらなる定義は、詳細な説明を通じて示される。
【００２３】
用語「Ｔリンパ球関連抗原−４」、「ＣＴＬＡ−４」、「ＣＴＬＡ４」、「ＣＴＬＡ−４抗原」及び「ＣＤ１５２」は同義的に使用され、同一のタンパク質を意味する。ヒトＣＴＬＡ−４タンパク質をコードする完全ｃＤＮＡ配列はＧｅｎｂａｎｋ寄託番号Ｌ１５００６を有する。マウスＣＴＬＡ−４タンパク質をコードする完全ｃＤＮＡ配列はＧｅｎｂａｎｋ寄託番号ＮＭ＿００９８４３を有する。
【００２４】
用語「免疫反応」は、侵入病原体、病原体に感染した細胞若しくは組織、癌性細胞、又は、自己免疫若しくは病原性炎症の場合には正常なヒト細胞若しくは組織に対し、選択的傷害、破壊、又は人体からの排除をもたらす、例えば、リンパ球、抗原提示細胞、食細胞、顆粒球、及び上記細胞又は肝臓によって産生される可溶性巨大分子（抗体、サイトカイン、及び補体等）の作用を意味する。
【００２５】
用語「ＣＴＬＡ−４遮断」は、免疫反応性がアップレギュレートされるようなＣＴＬＡ−４の免疫阻害効果の妨害又は阻害を意味することが意図される。用語「ＣＴＬＡ−４遮断薬」は、免疫反応性がアップレギュレートされるように、ＣＴＬＡ−４の免疫阻害効果の破壊又は阻害し得る物質を意味することが意図される。
【００２６】
本明細書中において言及される用語「抗体」は、全抗体及び任意の抗原結合断片（すなわち、「抗原結合部分」）又はその一本鎖を含む。「抗体」は、ジスルフィド結合により相互連結された少なくとも２つの重（Ｈ）鎖及び２つの軽（Ｌ）鎖を含む糖タンパク質又はその抗原結合部分を意味する。各重鎖は、重鎖可変領域（本明細書中においてはＶＨと略される）及び重鎖定常領域を含む。重鎖定常領域は、３つのドメイン、ＣＨ１、ＣＨ２及びＣＨ３を含む。各軽鎖は、軽鎖可変領域（本明細書中においてはＶＬと略される）及び軽鎖定常領域を含む。軽鎖定常領域は、１つのドメイン、ＣＬ１を含む。ＶＨ及びＶＬ領域は、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる、より保存的な領域が組み入れられている相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる超可変領域へと、さらに細かく分けられ得る。各ＶＨ及びＶＬは、アミノ末端からカルボキシ末端に向かって以下の順序：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４で並ぶ、３つのＣＤＲ及び４つのＦＲから構成されている。重鎖及び軽鎖の可変領域は、抗原と相互作用する結合ドメインを含む。抗体の定常領域が、各種免疫系細胞（例えば、エフェクター細胞）及び古典的な補体系第１成分（ＣＩｑ）等の宿主組織又は因子への免疫グロブリンの結合を介在し得る。
【００２７】
本明細書中で使用する時、抗体における「抗原結合部分」（又は単純に「抗体部分」）の用語は、抗原（例えば、ＥＰ−１０）と特異的に結合する能力を保持する抗体の１以上の断片を意味する。抗体の抗原結合機能は、全長抗体の断片によって機能され得ることが示されている。抗体の「抗原結合部分」の用語に包含される結合断片の例としては、（ｉ）ＶＬ、ＶＨ、ＣＬ及びＣＨ１ドメインからなる一価の断片であるＦａｂ断片；（ｉｉ）ヒンジ領域におけるジスルフィド結合によって連結されている２つのＦａｂ断片を含む二価の断片であるＦ（ａｂ’）２断片；（ｉｉｉ）ＶＨ及びＣＨ１ドメインからなるＦｄ断片；（ｉｖ）抗体の単腕のＶＬ及びＶＨドメインからなるＦｖ断片；（ｖ）ＶＨドメインからなるｄＡｂ断片（Ｗａｒｄら，（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ ３４１：５４４−５４６）；及び（ｖｉ）単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）が挙げられる。さらに、Ｆｖ断片の２つのドメイン、ＶＬ及びＶＨは、別々の遺伝子によってコードされているが、それらをＶＬ及びＶＨ領域の対が一価の分子を形成している単一タンパク質鎖（単一鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）として知られる；例えば、Ｂｉｒｄら（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４２：４２３−４２６；及びＨｕｓｔｏｎら（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８５：５８７９−５８８３参照）として産生し得る合成リンカーによる組み換え方法を用いて両者を結合することができる。このような単一鎖抗体も、抗体における「抗原結合部分」の用語内に包含されることが意図される。これらの抗体断片は当業者に知られている通常の技法を用いて得られ、それらの断片は完全抗体と同様に有用性についてスクリーニングされる。
【００２８】
本明細書中で使用する時、用語「モノクローナル抗体」又は「モノクローナル抗体組成物」は、単一分子組成物からなる抗体分子調製物を意味する。モノクローナル抗体組成物は、単一の結合特異性及び特定のエピトープに対する親和性を示す。
【００２９】
本明細書中で使用する時、用語「ヒト抗体」は、フレームワーク及びＣＤＲ領域がいずれもヒト生殖細胞系列免疫グロブリン配列に由来する可変領域を有する抗体を意味することが意図される。さらに、この抗体が定常領域を含む場合、この定常領域もまたヒト生殖細胞系列免疫グロブリン配列に由来する。本発明のヒト抗体は、ヒト生殖細胞系列免疫グロブリン配列によってコードされていないアミノ酸残基（例えば、インビトロにおけるランダム若しくは部位特異的突然変異誘発又はインビボにおける体細胞変異によって導入された突然変異体）を含んでもよい。
【００３０】
用語「ヒトモノクローナル抗体」は、フレームワーク及びＣＤＲ領域の両者がヒト生殖細胞系列免疫グロブリン配列に由来する可変領域を有する、単一の結合特異性を示す抗体を意味する。一実施形態において、ヒトモノクローナル抗体は、トランスジェニック非ヒト動物、例えば、不死化細胞と融合させたヒト重鎖トランスジーン及び軽鎖トランスジーンを含むゲノムを有するトランスジェニックマウス由来のＢ細胞を含むハイブリドーマによって産生される。本明細書中で使用する時、用語「ヒトモノクローナル抗体」は、手段によって調製、発現、作製又は単離される全てのヒト抗体、例えば、（ａ）ヒト免疫グロブリン遺伝子をトランスジェニック又はトランスクロモソームされた動物（例えば、マウス）又はそこから調製されたハイブリドーマから単離された抗体（以下にさらに記載）、（ｂ）ヒト抗体を発現するように形質転換された宿主細胞から、例えば、トランスフェクトーマから、単離された抗体、（ｃ）組み換えコンビナトリアルヒト抗体ライブラリーから単離された抗体、及び、（ｄ）ヒト免疫グロブリン遺伝子配列からその他のＤＮＡ配列へのスプライシングを伴ういずれかのその他の手段により調製、発現、作製又は単離された抗体を含む。このような組み換えヒト抗体は、フレームワーク及びＣＤＲ領域がヒト生殖細胞系列免疫グロブリン配列に由来する可変領域を有する。しかしながら、特定の実施形態においては、このような組み換えヒト抗体は、インビトロ突然変異誘発（又は、ヒトＩｇ配列に対するトランスジェニック動物を使用するときには、インビボ体細胞変異誘発）を受け得るので、組み換え抗体のＶＨ及びＶＬ領域のアミノ酸配列は、ヒト生殖細胞系列のＶＨ及びＶＬ配列に由来し、関連する一方で、インビボにおいてはヒト抗体生殖細胞系列レパートリー内に天然には存在しない場合もある。
【００３１】
用語「ヒト化抗体」は、別の哺乳類種、例えば、マウスに由来するＣＤＲ配列がヒトフレームワーク配列に移植されている抗体を意味することが意図されている。さらなるフレームワーク領域修飾がヒトフレームワーク配列内に行われてもよい。
【００３２】
用語「キメラ抗体」は、可変領域配列が１つの種に由来し、定常領域配列が別の種に由来する抗体、例えば可変領域配列がマウス抗体に由来し、定常領域配列がヒト抗体に由来する抗体を意味することが意図される。
【００３３】
本明細書中で使用する時、用語「被験体」は、ヒト及びＣＴＬＡ−４遮断薬治療に適している非ヒト動物、例えば、好ましくは、非ヒト霊長類、ヒツジ、イヌ、ネコ、ウマ及びウシ等の哺乳類を含む。
【００３４】
本発明の各種の態様は、以下のサブセクションにおいてさらに詳細に記述される。
【００３５】
（ＣＴＬＡ−４多型）
グレーブス病、自己免疫性甲状腺機能低下症（ＡＩＨ）及び１型糖尿病（Ｔ１Ｄ）等の自己免疫疾患に対する感受性は、６．１ｋｂのＣＴＬＡ−４の非コード３’領域に位置されている（Ｕｅｄａ，Ｈ．ら（２００３；Ｎａｔｕｒｅ ４２３：５０６−５１１。補足情報Ａ及びＢを含むその全内容は、参照により本明細書中に具体的に組み入れるものとする）。７つの一塩基ヌクレオチド多型（ＳＮＰ）が自己免疫疾患に対する感受性と最も緊密に関連しているとして同定された。これらのマーカーは、ＣＴ６０、ＪＯ３０、ＪＯ３１、ＪＯ２７＿１、ＣＴＡＦ３４３、ｒｓ１８６３８００及びＭＨ３０多型であり、実施例２においてさらに詳細に記述されている。
【００３６】
ＣＴ６０ Ｇ／Ａ多型に対して、Ｇ対立遺伝子は自己免疫に対する感受性と相関しており、Ａ対立遺伝子は保護的である（すなわち、「保護的な」対立遺伝子は自己免疫のリスク増大と関連しない）。
【００３７】
ＪＯ３０ Ｇ／Ａ多型に対して、Ｇ対立遺伝子は自己免疫に対する感受性と相関しており、Ａ対立遺伝子は保護的である。
【００３８】
ＪＯ３１ Ｇ／Ｔ多型に対して、Ｇ対立遺伝子は自己免疫に対する感受性と相関しており、Ｔ対立遺伝子は保護的である。
【００３９】
ＪＯ２７＿１ Ｔ／Ｃ多型に対して、Ｔ対立遺伝子は自己免疫に対する感受性と相関しており、Ｃ対立遺伝子は保護的である。
【００４０】
ＣＴＡＦ３４３ Ｔ／Ｃ多型に対して、Ｔ対立遺伝子は自己免疫に対する感受性と相関しており、Ｃ対立遺伝子は保護的である。
【００４１】
ｒｓ１８６３８００ Ｃ／Ｔ多型に対して、Ｃ対立遺伝子は自己免疫に対する感受性と相関しており、Ｔ対立遺伝子は保護的である。
【００４２】
ＭＨ３０ Ｇ／Ｃ多型に対して、Ｇ対立遺伝子は自己免疫に対する感受性と相関しており、Ｃ対立遺伝子は保護的である。
【００４３】
本発明での使用のためのその他の好ましいＣＴＬＡ−４多型はＪ０３３ Ｇ／Ａ多型であり、この多型においては、Ｇ対立遺伝子が自己免疫に対する感受性と相関しており、Ｃ対立遺伝子は保護的である（実施例１参照）。
【００４４】
その他のＣＴＬＡ−４多型が、様々な自己免疫疾患に対する感受性と関連することが報告されている。これらの例としては：
１）ＣＴＬＡ−４エクソン１ ４９位 Ａ／Ｇ多型、この多型においては、Ｇ対立遺伝子が自己免疫に対する感受性と相関しており、Ａ対立遺伝子は「保護的」である（例えば、Ｄｏｒｍｅｒ，Ｈ．ら（１９９７）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．Ｍｅｔａｂ．８２：４１３０−４１３２；Ｋｏｕｋｉ，Ｔ．ら（２０００）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６５：６６０６−６６１１；Ｒａｕ，Ｈ．ら（２００１）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．Ｍｅｔａｂ．８６：６５３−６５５参照）；
２）ＣＴＬＡ−４プロモーター −３１８位 Ｃ／Ｔ多型、この多型においては、Ｃ対立遺伝子が自己免疫に対する感受性と相関しており、Ｔ対立遺伝子は「保護的」である（例えば、Ｐａｒｋ，ＹＪ．ら（２０００）Ｔｈｙｒｏｉｄ １０：４５３−４５９参照）；
３）ＣＴＬＡ−４イントロン１ １８２２位 Ｃ／Ｔ多型、この多型においては、Ｔ対立遺伝子が自己免疫に対する感受性と相関しており、Ｃ対立遺伝子は「保護的」である（例えば、Ｖａｉｄｙａ，Ｂ．ら（２００３）Ｃｌｉｎ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．５８：７３２−７３５）；及び
４）ＣＴＬＡ−４エクソン３ ジヌクレオチド（ＡＴ）ｎ反復多型、この多型においては、１０６塩基対の対立遺伝子が自己免疫に対する感受性と相関している（例えば、Ｋｏｔｓａ，Ｋ．ら（１９９７）Ｃｌｉｎ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．４６：５５１−５５４；Ｋｅｍｐ，Ｅ．Ｈ．ら（１９９８）Ｃｌｉｎ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．４９：６０９−６１３参照）が挙げられる。
【００４５】
上記のＵｅｄａらの研究は、これら４つの多型のいずれもが自己免疫感受性増大の原因となる変異ではなく、したがって、これらのマーカーとの何らかの相関は連鎖不均衡によるものであることを報告しているが、これらのマーカーが本発明の方法での使用に適し得るにも関わらず、ＪＯ３０、ＣＴ６０、ＪＯ３１、ＪＯ２７＿１、ＣＴＡＦ３４３、ｒｓ１８６３８００及びＭＨ３０多型は、自己免疫感受性とのそれらのより密接な相関により使用するのにより好ましい。分析するのに特に好ましい多型は、実施例１に記載されている、ＪＯ３０多型である。
【００４６】
機序により限定されることを意図するものではないけれども、Ｕｅｄａらは、疾患に保護的なハプロタイプからの可溶性スプライシング変異形態のＣＴＬＡ−４（ｓＣＴＬＡ−４）のｍＲＮＡレベルが、疾患に影響を受けやすいハプロタイプからのｓＣＴＬＡ−４のｍＲＮＡレベルよりも高いことを報告している（Ｕｅｄａら、前出）。したがって、本明細書中で記載されている多型の他に、本発明での使用に適し得るその他のＣＴＬＡ−４多型としては、その多型が自己免疫感受性と相関することが示されているか否かに関わらず、ｓＣＴＬＡ−４のｍＲＮＡレベルの低下と関連する多型が挙げられる。
【００４７】
（ＣＴＬＡ−４多型の分析）
ＣＴＬＡ−４多型は、遺伝的多型を評価するための当技術分野において知られるいずれかの適当な技法を用いて、本発明の方法において分析し得る。例えば、多型を評価するための標準的方法は、ポリメラーゼ連鎖反応−制限断片長多型（ＰＣＲ−ＲＦＬＰ）による。多数の一塩基ヌクレオチド多型（ＳＮＰ）を迅速、効率的且つ正確にタイピングするために、Ｉｎｖａｄｅｒ（登録商標）テクノロジーを使用し得る（Ｍｅｉｎ，Ｃ．ら（２０００）Ｇｅｎｏｍｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ １０：３３０−３４３中にさらに記載されており、文献の内容は参照により本明細書中に明確に組み入れるものとする）。あるいは、ＳＮＰは、Ｐｅｒｒｅｙ，Ｃ．ら（１９９９）Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ．７：１２７−１２８に記載されているような増幅不応変異システム−ポリメラーゼ連鎖反応（ＡＲＭＳ−ＰＣＲ）技法を用いて評価し得る。ジヌクレオチド反復多型、例えば、ＣＴＬＡ−４のエクソン３における（ＡＴ）ｎ反復は、例えば、Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓ，Ｍ．Ｈ．ら（１９９１）Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１９：４０１８に記載されている方法によって評価し得る。
【００４８】
（ＣＴＬＡ−４遮断療法に対する反応性の予測）
実施例１においてさらに論じられるように、ＣＴＬＡ−４多型対立遺伝子の存在と自己免疫に対する感受性の増大及びＣＴＬＡ−４遮断薬を用いた治療に対する反応性の増大との間の相関が示されている。したがって、本発明は、
被験体における少なくとも１つのＣＴＬＡ−４多型を分析すること；及び
被験体におけるＣＴＬＡ−４多型対立遺伝子の有無に基づいてＣＴＬＡ−４遮断薬を用いた治療に対する被験体の反応性を予測すること、を含む、ＣＴＬＡ−４遮断薬を用いた治療に対する被験体の反応性を予測する方法を提供する。
【００４９】
本発明の予測方法において、自己免疫疾患に対する感受性の増大に関連するＣＴＬＡ−４多型対立遺伝子が被験体中に存在する時、上記被験体は、この対立遺伝子を有さない被験体と比較して、ＣＴＬＡ−４遮断薬による治療に対する反応性が増大するものと予測される。ＣＴＬＡ−４遮断薬による治療に対する反応性の増大は、抗原刺激に対するＴ細胞反応性の増大、抗腫瘍活性の増大、自己免疫出現事象の増大、臨床的有害事象の増大、及び血清学的有害事象の増大からなる群から選択される、少なくとも１つの反応を含み得る。
【００５０】
本発明の予測方法において、自己免疫疾患に対する感受性の低減に関連するＣＴＬＡ−４多型対立遺伝子（例えば、「保護的」対立遺伝子）が被験体中に存在する時、上記被験体は、この対立遺伝子を有さない被験体と比較して、ＣＴＬＡ−４遮断薬による治療に対する反応性が低減していることが予測される。ＣＴＬＡ−４遮断薬による治療に対する反応性の低減は、抗原刺激に対するＴ細胞反応性の低減、抗腫瘍活性の低減、自己免疫出現事象の低減、臨床的有害事象の低減、及び血清学的有害事象の低減からなる群から選択される、少なくとも１つの反応性を含み得る。
【００５１】
（ＣＴＬＡ−４遮断薬治療計画の選択）
被験体における特定のＣＴＬＡ−４多型対立遺伝子の有無が、ＣＴＬＡ−４遮断薬を用いた治療に対する被験体の反応性に影響を与えるという知見が得られているので、特定のＣＴＬＡ−４多型対立遺伝子の有無に基づいて、被験体のための適当な治療計画を選択し得る。したがって、本発明は、被験体における少なくとも１つのＣＴＬＡ−４多型を分析すること、及び、被験体におけるＣＴＬＡ−４多型対立遺伝子の有無に基づいてＣＴＬＡ−４遮断薬を用いた治療計画を選択すること、を含む、ＣＴＬＡ−４遮断薬を用いた治療のための治療計画を選択する方法を提供する。
【００５２】
選択される治療計画は、例えば、標準的治療計画と比較して縮小された治療計画、又は、標準的治療計画と比較して拡大された治療計画である。「標準的治療計画」は、被験体が治療前にＣＴＬＡ−４多型についてスクリーニングされていなかった場合に被験体のために選択され得る処方計画であり、特定のＣＴＬＡ−４多型対立遺伝子を有する特定の患者群における使用に限定されない当技術分野で認められた（例えば、ＦＤＡに認可された）治療計画を含む。
【００５３】
自己免疫疾患に対する感受性と関連するＣＴＬＡ−４多型対立遺伝子の存在がＣＴＬＡ−４遮断薬治療に対する反応性の増大と相関することが示されていることから、自己免疫関連ＣＴＬＡ−４多型対立遺伝子を有する被験体のためには縮小された治療計画が選択され得る。この縮小された治療計画は、所望の免疫反応性（例えば、抗腫瘍免疫）の刺激への有効性を維持しながら、自己免疫が急進展する事象の程度、重篤度又は継続期間を低減させるために、被験体にとって好ましくあり得る。縮小された治療計画は、標準的治療計画と比較して、より低投与量のＣＴＬＡ−４遮断薬の使用、より低頻度のＣＴＬＡ−４遮断薬の投与、又はより短期間のＣＴＬＡ−４遮断薬による治療期間を含み得る。
【００５４】
例えば、標準的治療計画が３ｍｇ／ｋｇの物質の使用を含む場合、縮小された治療計画は３ｍｇ／ｋｇより少ない、例えば、２ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ又は０．１ｍｇ／ｋｇの物質の使用を含み得る。あるいは、標準的治療計画が５ｍｇ／ｋｇの物質の使用を含む場合、縮小された治療計画は５ｍｇ／ｋｇより少ない、例えば、４ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、２ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ又は０．１ｍｇ／ｋｇの物質の使用を含み得る。
【００５５】
あるいは、標準的治療計画が１ｍｇ／ｋｇの物質の使用を含む場合、縮小された治療計画は１ｍｇ／ｋｇより少ない、例えば、０．５ｍｇ／ｋｇ又は０．１ｍｇ／ｋｇの物質の使用を含み得る。さらに、例えば、標準的治療計画が４週間毎の物質の投与を含む場合、縮小された治療計画はより頻度の少ない、例えば、５週間毎、６週間毎、７週間毎、８週間毎、９週間毎、１０週間毎、１１週間毎又は１２週間毎の投与を含み得る。
【００５６】
あるいは、標準的治療計画が２週間毎の物質の投与を含む場合、縮小された治療計画はより頻度の少ない、例えば、３週間毎、４週間毎、５週間毎、６週間毎、７週間毎、８週間毎、９週間毎、１０週間毎、１１週間毎又は１２週間毎の投与を含み得る。また例えば、標準的治療計画が１２ヶ月の期間の物質による治療を含む場合、縮小された治療計画は、より短い期間、例えば、３ヶ月、６ヶ月又は９ヶ月間の治療を含み得る。あるいは、標準的治療計画が６ヶ月の期間の物質による治療を含む場合、縮小された治療計画は、より短い期間、例えば、１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月又は５ヶ月間の治療を含み得る。
【００５７】
ＣＴＬＡ−４遮断薬を用いる治療のための治療計画を選択する好ましい方法において、被験体はＪＯ３０ Ｇ／Ａ多型において２つのＧ対立遺伝子（Ｇ／Ｇ遺伝子型）を発現し、選択される治療計画は標準的治療計画と比較して縮小された治療計画である。別の実施形態において、被験体は、ＣＴ６０ Ｇ／Ａ多型における２つのＧ対立遺伝子（Ｇ／Ｇ遺伝子型）、ＪＯ３１ Ｇ／Ｔ多型における２つのＧ対立遺伝子（Ｇ／Ｇ遺伝子型）、ＪＯ２７＿１ Ｔ／Ｃ多型における２つのＴ対立遺伝子（Ｔ／Ｔ遺伝子型）、ＣＴＡＦ３４３ Ｔ／Ｃ多型における２つのＴ対立遺伝子（Ｔ／Ｔ遺伝子型）、ｒｓ１８６３８００ Ｃ／Ｔ多型における２つのＣ対立遺伝子（Ｃ／Ｃ遺伝子型）及びＭＨ３０ Ｇ／Ｃ多型における２つのＧ対立遺伝子（Ｇ／Ｇ遺伝子型）からなる群から選択される遺伝子型を発現し、選択される治療計画が標準的治療計画と比較して縮小された治療計画である。
【００５８】
別の実施形態においては、自己免疫に対するリスクの低減と関連するＣＴＬＡ−４多型対立遺伝子の存在がＣＴＬＡ−４遮断薬治療に対する反応性の低減と相関することが示されていることから、自己免疫に対して保護的なＣＴＬＡ−４多型対立遺伝子を有する被験体のために拡大された治療計画が選択され得る。この拡大された治療計画は、ＣＴＬＡ−４阻害治療の有効性を向上させるため及び免疫反応性（例えば、抗腫瘍免疫）の所望の活性化を達成するために、被験体にとって好ましく又は必要であり得、なぜならば、（これらの被験体における自己免疫が急進展する事象の低減からも明らかなように）これらの被験体は免疫寛容の進展に対してより抵抗性を示し得る場合があるからである。拡大された治療計画は、標準的治療計画と比較して、より高投与量のＣＴＬＡ−４遮断薬の使用、より高頻度の上記ＣＴＬＡ−４遮断薬の投与、又はより長期間の上記ＣＴＬＡ−４遮断薬による治療期間を含み得る。
【００５９】
例えば、標準的治療計画が３ｍｇ／ｋｇの物質の使用を含む場合、拡大された治療計画は３ｍｇ／ｋｇより多い、例えば、４ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、６ｍｇ／ｋｇ、７ｍｇ／ｋｇ、８ｍｇ／ｋｇ、９ｍｇ／ｋｇ又は１０ｍｇ／ｋｇの物質の使用を含み得る。あるいは、標準的治療計画が１ｍｇ／ｋｇの物質の使用を含む場合、拡大された治療計画は１ｍｇ／ｋｇより多い、例えば、２ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、４ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、６ｍｇ／ｋｇ、７ｍｇ／ｋｇ、８ｍｇ／ｋｇ、９ｍｇ／ｋｇ又は１０ｍｇ／ｋｇの物質の使用を含み得る。
【００６０】
また例えば、標準的治療計画が４週間毎の物質の投与を含む場合、拡大された治療計画はより頻繁な、例えば、３週間毎、２週間毎又は１週間毎の投与を含み得る。あるいは、標準的治療計画が３ヶ月毎の物質の投与を含む場合、拡大された治療計画はより頻繁な、例えば、２ヶ月毎、１ヶ月毎、４週間毎、３週間毎、２週間毎又は１週間毎の投与を含み得る。
【００６１】
また例えば、標準的治療計画が９ヶ月の期間の物質による治療を含む場合、拡大された治療計画は、より長い期間、例えば、１０ヶ月、１１ヶ月、１２ヶ月、１５ヶ月又は１８ヶ月間の治療を含み得る。あるいは、標準的治療計画が６ヶ月の期間の物質による治療を含む場合、拡大された治療計画は、より長い期間、例えば、７ヶ月、８ヶ月、９ヶ月、１０ヶ月１１ヶ月、１２ヶ月、１５ヶ月又は１８ヶ月間の治療を含み得る。
【００６２】
ＣＴＬＡ−４遮断薬を用いる治療のための治療計画を選択する別の好ましい方法において、被験体はＪＯ３０ Ｇ／Ａ多型において２つのＡ対立遺伝子（Ａ／Ａ遺伝子型）を発現し、選択される治療計画は標準的治療計画と比較して拡大された治療計画である。別の実施形態において、被験体は、ＣＴ６０ Ｇ／Ａ多型における２つのＡ対立遺伝子（Ａ／Ａ遺伝子型）、ＪＯ３１ Ｇ／Ｔ多型における２つのＧ対立遺伝子（Ｔ／Ｔ遺伝子型）、ＪＯ２７＿１ Ｔ／Ｃ多型における２つのＣ対立遺伝子（Ｃ／Ｃ遺伝子型）、ＣＴＡＦ３４３ Ｔ／Ｃ多型における２つのＴ対立遺伝子（Ｃ／Ｃ遺伝子型）、ｒｓ１８６３８００ Ｃ／Ｔ多型における２つのＴ対立遺伝子（Ｔ／Ｔ遺伝子型）及びＭＨ３０ Ｇ／Ｃ多型における２つのＣ対立遺伝子（Ｃ／Ｃ遺伝子型）からなる群から選択される遺伝子型を発現し、選択される治療計画が標準的治療計画と比較して拡大された治療計画である。
【００６３】
（ＣＴＬＡ−４遮断薬の投与）
一旦、適当な治療計画がＣＴＬＡ−４多型対立遺伝子の有無に基づいて被験体のために選択されたならば、被験体における抗原刺激に対する反応性を増大させるためにＣＴＬＡ−４遮断薬が投与され得る。したがって、別の態様において、本発明は、被験体における少なくとも１つのＣＴＬＡ−４多型を分析すること；被験体におけるＣＴＬＡ−４多型対立遺伝子の有無に基づいて、ＣＴＬＡ−４遮断薬による治療計画を選択すること；及び、被験体において抗原刺激に対する反応性が増大されるような治療計画にしたがって、被験体へＣＴＬＡ−４遮断薬を投与すること；を含む、被験体において抗原刺激に対する反応性を増大させるための方法に関する。
【００６４】
抗原刺激に対する反応性を増大させるための本発明の方法は、例えば、腫瘍を有する被験体において抗腫瘍免疫を増大させるため、細菌感染を示す被験体において抗細菌免疫を増大させるため、ウィルス感染を示す被験体において抗ウィルス活性を増大させるため、又は、病原体感染の予防的手段としてワクチン接種される被験体においてワクチン接種の効力を増大させるために、抗原反応性の増大が望ましい任意の臨床的適応又は状況において使用し得る。
【００６５】
免疫反応性に対するＣＴＬＡ−４のダウンレギュレート的効果を妨害又は阻害する任意のＣＴＬＡ−４遮断薬が当該方法において使用し得る。好ましいＣＴＬＡ−４遮断薬は、抗ＣＴＬＡ−４モノクローナル抗体、例えば、ヒト、ヒト化又はキメラモノクローナル抗体である。ヒト抗ＣＴＬＡ−４モノクローナル抗体は当技術分野において知られている。例えば、ＣＴＬＡ−４と結合する完全ヒト抗体の調製及び構造特性決定が、例えば、国際公開第０１／１４４２４号、国際公開第００／３７５０４号及び米国特許第６，６８２，７３６号に詳細に記述されている。好ましい抗ＣＴＬＡ−４ヒトモノクローナル抗体はＭＤＸ−０１０（１０Ｄ１としても知られている）であり、その構造は国際公開第０１／１４４２４号に記載されている。非ヒト抗ＣＴＬＡ−４抗体、例えば、マウス抗体、も当技術分野において知られている（例えば、Ｌｉｎｓｅｌｙ，Ｐ．Ｓ．（１９９２）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７６：１５９５−１６０４参照）。このような非ヒト抗ＣＴＬＡ−４抗体の可変領域、及びその中のＣＤＲ領域は、当技術分野において十分に確立されている技法を用いて、キメラ及びヒト化抗体を調製するために使用し得る。
【００６６】
別のタイプのＣＴＬＡ−４遮断薬はＲＮＡアダプタマーである。インビトロにおいてＣＴＬＡ−４の機能を阻害し、インビボにおいて腫瘍免疫を促進する、ＣＴＬＡ−４と高いアフィニティーで結合する多価アダプタマーは、記述されており（Ｓａｎｔｕｌｌｉ−Ｍａｒｏｔｔｏ，Ｓ．ら（２００３）Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．６３：７４８３−７４８９）、又、本発明の方法における治療に使用され得る。
【００６７】
その他のタイプのＣＴＬＡ−４遮断薬としては、ＣＴＬＡ−４の発現を低減させるアンチセンス物質、ＣＴＬＡ−４と結合してその活性を阻害するＣＴＬＡ−４リガンド由来ペプチド（例えば、Ｂ７−１又はＢ７−２ペプチド）、並びに、ＣＴＬＡ−４の活性を阻害するために選択される小分子阻害物質が挙げられる。
【００６８】
被験体への投与のために、ＣＴＬＡ−４遮断薬は通常、ＣＴＬＡ−４遮断薬及び薬学上許容し得る担体を含有する医薬組成物に製剤化される。治療組成物は通常、製造及び保存条件下で無菌及び安定でなければならない。本発明の医薬組成物は、組み合わせ治療として、すなわち、その他のＣＴＬＡ−４遮断薬、その他の治療薬（例えば、腫瘍の治療のための化学治療薬）及び免疫反応性の増大が望まれる抗原を含むワクチンと組み合わせて投与し得る。
【００６９】
本明細書中で使用する時、「薬学上許容し得る担体」は、生理学的に適合し得る任意の及び全ての溶媒、分散媒、コーティング、抗体及び抗菌剤、等張剤及び吸収遅延剤等を含む。好ましくは、担体は、（例えば、注射又は注入による）静脈内、筋肉内、皮下、非経口、脊髄内又は表皮への投与に適している。投与経路に応じて、活性化合物は、酸の作用及び活性化合物を不活性化し得るその他の自然の条件から活性化合物を保護する物質中で活性化合物をコーティングし得る。
【００７０】
本発明の医薬化合物は１以上の薬学的に許容し得る塩を含んでいてもよい。「薬学的に許容し得る塩」とは、親化合物の所望の生物学的活性を保持し、望ましくない任意の毒性効果を与えない塩を意味する（例えば、Ｂｅｒｇｅ，Ｓ．Ｍ．，ら（１９７７）Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｄ．６６：１−１９参照）。そのような塩の例としては、酸付加塩及び塩基付加塩が挙げられる。酸付加塩としては、非毒性の無機酸、例えば、塩酸、硝酸、リン酸、硫酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、亜リン酸等、に由来するもの、並びに、非毒性の有機酸、例えば、脂肪族モノ及びジカルボン酸、フェニル置換アルカン酸、ヒドロキシアルカン酸、芳香族酸、脂肪族及び芳香族スルホン酸等、に由来するものが挙げられる。塩基付加塩としては、アルカリ土類金属、例えば、ナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウム等、に由来するもの、並びに、非毒性の有機アミン類、例えば、Ｎ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン、Ｎ−メチルグルカミン、クロロプロカイン、コリン、ジエタノールアミン、エチレンジアミン、プロカイン等に由来するものが挙げられる。
【００７１】
本発明の医薬組成物はまた、薬学的に許容し得る抗酸化剤を含んでいてもよい。薬学的に許容し得る抗酸化剤の例としては、（１）水溶性抗酸化剤、例えば、アスコルビン酸、塩酸システイン、重硫酸ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、亜硫酸ナトリウム等；（２）油溶性抗酸化剤、例えば、パルミチン酸アスコルビル、ブチル化ヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、ブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、レシチン、没食子酸プロピル、アルファ・トコフェロール等；（３）クエン酸、エチレンジアミン４酢酸（ＥＤＴＡ）、ソルビトール、酒石酸、リン酸等の金属キレート剤が挙げられる。
【００７２】
本発明の医薬組成物中に使用し得る適当な水性及び非水性の担体の例としては、水、エタノール、ポリオール類（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール等）及びそれらの適当な混合物、オリーブ油等の植物油、並びに、オレイン酸エチル等の注射可能な有機エステル類が挙げられる。レシチン等のコーティング物質の使用により、分散状態において必要とされる粒径の維持により、及び、界面活性剤の使用により、適当な流動性が維持され得る。
【００７３】
これらの組成物は、保存剤、湿潤剤、乳化剤及び分散剤等のアジュバントを含んでいてもよい。微生物の存在の防止は、前出の滅菌手順、並びに各種抗体及び、例えば、パラベン、クロロブタノール、ソルビン酸フェノール等の抗菌剤を含有させることの両方により保証され得る。糖類、塩化ナトリウム等の等張物質を組成物中に含有させることが望ましい場合もある。さらに、注射可能な医薬形態の持続的吸収は、モノステアリン酸アルミニウム及びゼラチン等の吸収を遅くする物質を含有させることによりもたらせ得る。
【００７４】
薬学的に許容し得る担体としては、無菌の水性の溶液又は分散液、及び無菌注射溶液又は分散液の即時調製のための無菌粉末が挙げられる。薬学的に活性な物質に対するこのような媒体及び物質の使用は当技術分野において知られている。任意の通常の媒体又は物質は活性化合物と適合し得ない場合を除き、本発明の医薬組成物中でのその使用が意図される。補助的な活性化合物もまた組成物中に組み入れることができる。
【００７５】
本発明の物質は、当技術分野において知られている様々な方法の１以上を用いて、１以上の投与経路を介して投与することができる。当業者には明らかなように、投与経路及び／又は様式は所望の結果に応じて変化し得る。特に、抗体物質のための好ましい投与経路は、静脈注射又は注入である。その他の好ましい投与経路としては、筋肉内、皮内、腹腔内、皮下、脊髄、又は、例えば、注射若しくは注入によるその他の非経口的投与経路が挙げられる。本明細書中で使用する時、「非経口的投与」という表現は、通常は注射による、経腸及び局所以外の投与様式、を意味し、限定するものではないが、例として、静脈内、筋肉内、動脈内、髄腔内、嚢内、眼窩内、心腔内、皮内、腹腔内、経気管、皮下、表皮下、関節内、被膜下、くも膜下、脊髄内、硬膜外及び胸骨内注射及び注入が挙げられる。あるいは、本発明の物質は、非経口でない経路、例えば、鼻腔内、経口、経膣、経直腸、舌下若しくは局所等の局所的、表皮的又は粘膜的投与経路を介して投与され得る。
【００７６】
治療計画がＣＴＬＡ−４遮断薬以外の１以上のさらなる物質の使用を含む組み合わせ治療においても、ＣＴＬＡ−４遮断薬が使用され得る。組み合わせ治療のための好ましいさらなる物質は、免疫反応性の増大が望まれる抗原を含むワクチンである。例えば、腫瘍の治療のために、ＣＴＬＡ−４遮断薬を用いる治療は、腫瘍抗原を含有する腫瘍ワクチンを用いる治療と組み合わせることができる。腫瘍抗原の非限定的例としては、腫瘍細胞及びＧＭ−ＣＳＦを分泌するように形質導入された腫瘍細胞において優先的に発現されるタンパク質由来の精製ペプチドが挙げられる。非限定的な腫瘍抗原の具体例としては、ｇｐ１００ペプチド、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）、又は、１）ｇｐ１００ペプチド、２）ＭＡＲＴ−１ペプチド及び３）チロシナーゼペプチドを含む組成物が挙げられる。
【００７７】
その他の形態の組み合わせ治療としては、被験体の腫瘍の治療における１以上の化学治療薬とＣＴＬＡ−４遮断薬の投与又は被験体の細菌若しくはウィルス感染の治療における１以上の抗体若しくは抗ウィルス薬の投与が挙げられる。
【００７８】
（本発明のキット）
本発明はまた、本発明の方法を実施する際に使用し得るキットを提供する。キットは、ＣＴＬＡ−４遮断薬、及び、１以上のＣＴＬＡ−４多型を分析するための手段を含むことができる。
【００７９】
好ましい遮断薬は、抗ＣＴＬＡ−４モノクローナル抗体、例えば、キメラ、ヒト化又はヒト抗ＣＴＬＡ−４モノクローナル抗体である。その他の遮断薬としては、前述のセクションにおいて記載されたものが挙げられる。
【００８０】
好ましくは、１以上のＣＴＬＡ−４多型を分析するための手段は、その多型に特異的な１以上のポリヌクレオチドを含む。この多型を分析するための手段は、例えば、多型を評価するアッセイで使用するためのバッファー又はその他の試薬及び多型を評価するアッセイを実行するための印刷された説明書も含むことができる。
【００８１】
一実施形態において、キットはワクチンをさらに含むことができる。ワクチンはＣＴＬＡ−４阻害治療を用いて免疫反応性が刺激され得る抗原、例えば、腫瘍抗原、細菌抗原又はウィルス抗原を含むことができる。腫瘍抗原の非限定的例としては、腫瘍細胞及びＧＭ−ＣＳＦを分泌するように形質導入された腫瘍細胞において優先的に発現されるタンパク質からの精製ペプチドが挙げられる。非限定的な腫瘍抗原の具体例としては、ｇｐ１００ペプチド、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）、又は、１）ｇｐ１００ペプチド、２）ＭＡＲＴ−１ペプチド及び３）チロシナーゼペプチドを含む組成物が挙げられる。
【００８２】
本発明は、さらなる限定として解釈されるべきではない以下の実施例によってさらに説明される。本願の全体にわたって引用されている全ての参考文献、特許及び公開された特許出願は、参照により本明細書中に明確に組み入れられる。
【実施例】
【００８３】
（実施例１：ＣＴＬＡ−４遮断薬治療に対する反応性増大と自己免疫疾患に関連したＣＴＬＡ−４多型の存在との相関）
この実施例においては、進行した黒色腫を有するヒト患者をＣＴＬＡ−４遮断薬（抗ＣＴＬＡ−４ヒトモノクローナル抗体ＭＤＸ−０１０）及び３種の黒色腫抗原ペプチド（ｇｐ１００、チロシナーゼ、ＭＡＲＴ−１）を含有するペプチドワクチンにより処置する臨床試験を実施した。ワクチンを伴う抗体の毒性及び最大耐量（ＭＴＤ）をまず評価するために、３群のそれぞれに、ワクチンを伴う抗体の投与量を段階的に増やして投与した。ＭＤＸ−０１０の薬物動態及び免疫反応性は副次的評価項目とした。
【００８４】
抗ＣＴＬＡ−４治療に対する反応性を調べ、患者を自己免疫疾患に対する感受性に関連するＣＴＬＡ−４ＪＯ３０ Ｇ／Ａ多型についてスクリーニングした。その結果は、疾患に関連するＧ／Ｇ遺伝子型の存在と、臨床毒性の発生率増大及び疾患進行率低減との間の相関を立証する。対照的に、保護的Ａ対立遺伝子（Ａ／Ａ遺伝子型又はＡ／Ｇ遺伝子型）を有する患者は、臨床毒性の低減（Ａ／Ａ遺伝子型で最も低い毒性を呈する）及び疾患の進行率の増大（Ａ／Ａ遺伝子型遺伝子型で最大の進行を呈する）を呈した。この結果は、自己免疫疾患と関連するＧ／Ｇ多型の存在が、自己免疫の増大及び腫瘍進行の低減からも明らかなように、ＣＴＬＡ−４遮断薬治療に対する反応性の増大と相関することを示唆する。対照的に、自己免疫疾患に対し保護的なＡ／Ａ多型の存在は、自己免疫事象の低減（遮断薬が寛容の破綻においてはあまり効果がないことを示唆する）及び腫瘍進行の増大からも明らかなように、ＣＴＬＡ−４遮断薬治療に対する反応性の低減と相関することを示唆する。
【００８５】
本研究における材料及び方法及び得られた結果を、以下に詳述する。
【００８６】
（材料及び方法）
（患者）
患者は２００１年に改変された対癌米国合同委員会のステージ進行システムによるステージＩＩＩ又はＩＶの黒色腫を切除しており、外科的には疾患がない状態であった。彼らは治療４週間以内に行われた脳の核磁気共鳴映像撮影又はコンピュータ断層撮影スキャニング及び胸部、腹部及び骨盤のコンピュータ断層撮影スキャニングを受けており、疾患の徴候はなんら示されていなかった。適格性の基準には、年齢が１８歳以上、クレアチニンが２．０ｍｇ／ｄｌ以下、ビリルビンが２．０ｍｇ／ｄｌ以下、血小板数が１００，０００／ｍｃｌ以上、ヘモグロビンが９ｇ／ｄｌ以上、及び総ＷＢＣが３０００／ｍｃｌ以上であることを含めた。ヒト免疫不全ウィルス、Ｃ型肝炎抗体及びＢ型肝炎表面抗原滴定は陰性であることを必須とした。全ての患者はＤＮＡポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）分析によりＨＬＡ−Ａ＊０２０１陽性であった。除外の基準には、活性な自己免疫疾患、ステロイド依存性及びＭＤＸ−０１０抗体又はＭＡＲＴ−１、ｇｐ１００及びチロシナーゼペプチドによる事前処置を含めた。
【００８７】
（抗体材料）
ＭＤＸ−０１０（抗ＣＴＬＡ４モノクローナル抗体）は完全ヒト免疫グロブリン（ＩｇＧ１）抗ＣＴＬＡ４モノクローナル抗体である。これは５又は１０ｍｌ入りのバイアル中に５ｍｇ／ｍｌの濃度で供給され、２℃〜８℃の温度で保管された。０．２２μＭのフィルターを通過させてＭＤＸ−０１０を取り出し、生理食塩水中に２．５ｍｇ／ｍｌの濃度となるよう希釈して、９０分間にわたり投与した。
【００８８】
（ペプチドワクチン材料）
チロシナーゼ３６８−３７６（３７０Ｄ）ペプチド［ＮＳＣ＃６９９０４８］、ＭＡＲＴ−１２６−３５（２７Ｌ）ペプチド［ＮＳＣ＃７０９４０１］、及びｇｐ１００２０９−２１７（２１０Ｍ）ペプチド、［ＮＳＣ＃６８３４７２］ＨＬＡ−Ａ＊０２０１拘束性９又は１０アミノ酸エピトープペプチドをＧＭＰグレードで調製し、上述のように投与した（Ｐｕｌｌａｒｋａｔら（２００３）Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．４：１３０１−１３１２）。それらはＢｅｎ Ｖｅｎｕｅ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．（Ｂｅｄｆｏｒｄ，ＯＨ）より供給された。
【００８９】
Ｍｏｎｔａｎｉｄｅ ＩＳＡ−５１（不完全フロイントアジュバント又はＩＦＡとしても知られている）はＳｅｐｐｉｃ，Ｉｎｃ．，（Ｆｒａｎｋｌｉｎ Ｌａｋｅｓ，ＮＪ）により製造され、ＣＴＥＰ／ＮＣＩにより、保存剤を含まない滅菌アジュバント溶液３ｍｌが入ったガラス製アンプルで供給された。
【００９０】
（治療計画）
ＭＤＸ−０１０を、４週毎に６ヶ月間、次いで１２週毎に６ヶ月間、９０分間にわたり静脈内投与した。抗体の注入は、１回あたり不完全フロイントアジュバント（Ｍｏｎｔａｎｉｄｅ ＩＳＡ ５１）中にエマルジョン化した１ｍｇの各ペプチドを３回に分けて皮下注射するものとした。患者群はＭＤＸ−０１０を０．３、１．０又は３．０ｍｇ／ｋｇ注射され、次いでチロシナーゼ３６８−３７６（３７０Ｄ）、ｇｐ１００２０９−２１７（２１０Ｍ）及びＭＡＲＴ−１２６−３５（２７Ｌ）ペプチドの皮下注射を受けた。
【００９１】
免疫分析のための末梢血液単核細胞を得るため、最初のワクチン接種直前及び接種６ヶ月後に、５〜７リットルの交換による白血球分離採血法手順を実行した。患者を再発まで追跡した。
【００９２】
分離したサンプルを上述のように、ＰＢＭＣを精製するために処理し、−１６８℃で凍結した（Ｌｅｅら（２００Ｉ）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．１９：３８３６−３８４７）。
【００９３】
（試験評価項目）
試験の主たる評価項目は、ＭＤＸ−０１０処置における副作用及び耐性の判断及び、ワクチン投与計画と共に投与されたときのＭＤＸ−０１０最大耐量（ＭＴＤ）の決定である。２次的な評価項目は、ＭＤＸ−０１０の薬物動態及びＭＤＸ−０１０を伴うワクチンに対する免疫反応性を含む。
【００９４】
（ＥＬＩＳＰＯＴ及びテトラマー分析）
ＰＢＭＣを解凍し、一晩培養後、上述のように設定したＥＬＩＳＰＯＴ分析において試験した（Ｐｕｌｌａｒｋａｔら、前出）。メンブレンプレート（ＭＡＨＡ Ｓ４５−１０、ミリポア、Ｂｅｄｆｏｒｄ，ＭＡ）については、１次抗γ−インターフェロン抗体（ＭａｂＴｅｃｈ，Ｎａｃｋａ，スウェーデン）を添加し、冷蔵庫中に一晩置くことによって準備した。翌日、プレートを洗浄し、ブロッキング緩衝液（１０％のヒトＡＢ血清を含むＡＩＭ−Ｖ培地）と共に少なくとも１時間、３７℃でインキュベートした。ＰＢＭＣを、３連で、総容量１００μｌ中、ウェルあたり１６６，０００、８３，０００及び４１，５００細胞となるように添加した。陽性対照として１０μｇ／ｍｌのＰＨＡを６つのウェルに添加し、陰性対照としてＡＩＭ−Ｖ培地を添加した。ペプチドを次いで全てのその他のウェルに５μｇ／ｍｌで添加した。次いでプレートを５％のＣＯ２インキュベーター中で４時間、３７℃インキュベートし、次いで洗浄した。次に２次抗体（ＭａｂＴｅｃｈ）を１ｍｇ／ｍｌで添加した。このプレートを４℃で一晩インキュベートし、洗浄後に水滴を取り、１％のＢＳＡ（Ｓｉｇｍａ）と共にストレプトアビジン／アルカリホスファターゼ（ＭａｂＴｅｃｈ）を添加した。ＢＣＩＰ／ＮＢＴ（Ｋｉｒｋｅｇａａｒｄ ＆ Ｐｅｒｒｙ，Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ）を添加し、現像のためプレートを暗所でインキュベートした。次いで流水で洗浄することにより比色反応を停止した。処理後、ＫＳ Ｅｌｉｓｐｏｔ ｒｅａｄｅｒ（Ｃａｒｌ Ｚｅｉｓｓ，Ｔｈｏｒｎｗｏｏｄ，ＮＹ）上で、ＥＬＩＳＰＯＴプレートを読み取った。値をＣＤ８ Ｔ細胞１００，０００個あたりのスポット数に標準化した。陰性対照は、特徴として幾何平均値が１０５細胞あたり１０スポット未満であるＨＰＶ Ｅ７ ８６−９３ Ａ＊０２０１拘束性ペプチドを含むものとした。分析は置換ｇｐ１００２０９−２１７（２１０Ｍ）、ＭＡＲＴ−１２６−３５（２７Ｌ）及びチロシナーゼ３６８−３７６（３７０Ｄ）、ならびに野生型ｇｐ１００２０９−２１７及びＭＡＲＴ−１２７−３５ペプチドの両方を用いて実行した。
【００９５】
分析に用いるための、ｇｐ１００２０９−２１７（２１０Ｍ）、ＭＡＲＴ−１２６−３５（２７Ｌ）及びチロシナーゼ３６８−３７６（３７０Ｄ）ペプチドを含むテトラマーは、Ａｌｔａｉａｎの方法に従って製造した（Ａｌｔａｉａｎら（１９９８）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２７４：９４−９６）。テトラマー分析技法は既に公表されている（Ｗｅｂｅｒ，Ｊ．ら（２００３）Ｃａｎｃｅｒ ９７：１８６−２００；Ｐｕｌｌａｒｋａｔら、前出）。
【００９６】
各テトラマーは、被験体のペプチドに関連したＨＬＡ−Ａ２に特異的なＣＴＬ系列又はクローンに対する染色によって確認した。検出限界は上述のようにＣＤ８＋ Ｔ細胞の０．０１％とした（Ｐｕｌｌａｒｋａｔら、前出）。
【００９７】
ＥＬＩＳＰＯＴ及びテトラマー分析に関するｇｐ１００２０９−２１７（２１０Ｍ）、ＭＡＲＴ−１２６−３５（２７Ｌ）及びチロシナーゼ３６８−３７６（３７０Ｄ）ペプチドの値の、ワクチン接種前及び後の統計学的差異を調べた。陽性反応は、ワクチン接種前の値における平均の標準偏差の少なくとも３倍、ワクチン接種前の値よりも大きくなっているワクチン接種後の値として定義した。群の間の差異を比較するために、ノンパラメトリック検定（Ｗｉｌｃｏｘｏｎ Ｒａｎｋ Ｓｕｍ）を使用した。
【００９８】
（皮膚テスト）
前述のように皮膚テストを実施した（Ｌｅｅ，Ｐら（２００１）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．１９：３８３６−３８４７）。
【００９９】
全ての患者は治療前及びワクチン接種に訪れる度に、白斑についてスクリーニングするため皮膚の精密検査を受けた。眼への毒性は上述の通りに調べた（Ｐｕｌｌａｒｋａｔら、前出）。
【０１００】
（ＦＡＣＳ分析）
患者から得たＰＢＭＣはＦＩＴＣ標識抗ＣＤ８、抗ＣＣＲ９、抗ＣＬＡ、ＰＥ−コンジュゲートペプチド／ＨＬＡ−Ａ２．１テトラマーならびにＣＣＲ４抗体、及びＣｙ５標識抗ＣＤ４、１４及び１９抗体を用いて、４℃、３０分間染色した。細胞を洗浄し、ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒ（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ，Ｓａｎ Ｊｏｓｅ，ＣＡ）（Ｐｕｌｌａｒｋａｔら、前出）上で、上述のように分析した。
【０１０１】
（免疫組織化学）
ＨＭＢ−４５（ｇｐ１００）、ＭＡＲＴ−１及びチロシナーゼに関する、スライドグラス上のパラフィン包埋切片の免疫組織化学染色を、上述のように実行した（Ｐｕｌｌａｒｋａｔら、前出）。分析毎に適当な陰性及び陽性対照を含めた。
【０１０２】
保存用にホルマリン固定されパラフィン包埋された組織を５μｍ間隔で切片化し、荷電したスライド（ＰｒｏｂｅＯｎ＋ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｐｉｔｔｓｂｕｒｇｈ，ＰＡ）上に載せた。組織切片を脱パラフィンし、段階的なアルコールを通して再水和させた。組織を次いで抗原検索へと供した。その後、組織をブロッキング血清（通常５％ウマ血清）と共にインキュベートした。次いでブロッキング血清を吸引し、１次モノクローナル抗体を適当な希釈率で適用した。抗ＣＤ４及び抗ＣＤ８モノクローナル抗体（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ，Ｍｏｕｎｔａｉｎ Ｖｉｅｗ，カリフォルニア）を、スライドグラス上でのパラフィン包埋切片の免疫組織学的染色のために使用した。１次抗体とのインキュベーションは、（各抗体に応じて最適化される）系に依存して、室温又は４０℃で、通常１時間あるいは一晩行った。洗浄がこれに続き、またその後に、クロモゲンとして０．０３％のジアミノベンジジン（ＤＡＢ）、及び対比染色剤としてヘマトキシリンを用いたアビジン−ビオチン複合体免疫ペルオキシダーゼ系（Ｖｅｃｔｏｒ Ｌａｂｓ，Ｂｕｒｌｉｎｇａｍｅ，カリフォルニア）による可視化を行った。ＩＨＣ反応の質を評価するために、全ての場合において、好適な箇所で、外部対照及び内部対照の両方を使用した。
【０１０３】
（ＭＤＸ−０１０の血漿レベル）
血漿サンプルを分析まで−８０℃で保存した。ＭＤＸ−０１０の血漿レベルを調べるために定量的な機能的ＥＬＩＳＡを用いた。この分析において、血漿サンプルを、組み換えヒトＣＴＬＡ４融合タンパク質でコーティングしたプレート上でインキュベートした。結合したＭＤＸ−０１０は、抗ヒトＩｇＧ、Ｆ（ａｂ）’２アルカリホスファターゼプローブを用いて検出した。標準的曲線を作成し、この標準曲線の直線部分から血漿レベルを計算した。
【０１０４】
（抗ＭＤＸ−０１０の血漿レベル）
抗ＭＤＸ−０１０抗体分析のための血漿サンプルを分析まで−８０℃で保存した。血漿抗ＭＤＸ−０１０ ＩｇＧのレベルを決定するために半定量ＥＬＩＳＡを用いた。ＭＤＸ−０１０ Ｆ（ａｂ’）２を用いてプレートをコーティングし、抗ヒト ＩｇＧ、Ｆｃ特異的なコンジュゲートプローブを用いて抗体を検出した。バックグラウンド値である０．１００に最も近い補正されたＯＤ値を生じた血漿サンプルにおける、最も高い希釈の逆数として、データを表した。各サンプルについての結果を、前処理済みサンプルに対する相対的な増大倍率として表した。４倍を超える増大を伴うサンプルを陽性と判断した。抗ＭＤＸ−０１０抗体が循環中のＭＤＸ−０１０と結合すると考えられるため、循環レベルのＭＤＸ−０１０を有するサンプルは実際の力価よりも低い値となり得るであろう。
【０１０５】
（ＣＴＬＡ−４多型分析）
ゲノムＤＮＡを、ＱｉａＡｍｐ ｋｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ，Ｖａｌｅｎｃｉａ，ＣＡ）を用いて末梢血液単核細胞から単離した。ＣＴＬＡ−４ＪＯ３０ Ｇ／Ａ多型に関する遺伝子型を、上述のＰＣＲ−ＲＦＬＰ手法を用いて分析した（Ｐｅｒｒｅｙ，Ｃ．ら（１９９９）Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ７：１２７ −１２８）。
【０１０６】
（結果）
（人口統計）
１９名の患者をこのフェーズ１の試験で処置した。７名の患者はステージＩＶの疾患を切除されており、残る１２名はステージＩＩＩの疾患を切除されていた。８名の患者は細胞ワクチン又はα−インターフェロンを用いた事前の免疫治療を受けており、２名は生化学的治療を受けており、また全ての患者は外科手術を受けていた。最初の診断からの期間の中央値は２０ヶ月であった。７名の患者はＭＤＸ−０１０を投与あたり０．３ｍｇ／ｋｇで投与され（１群）、７名は１．０ｍｇ／ｋｇ（２群）、及び５名は３．０ｍｇ／ｋｇ（３群）で投与された。ＦＤＡの要求により、１番目の群における７名の患者は、計画された注入の１週間前における彼らの血清抗体レベルが≦２μｇ／ｍｌであった場合のみに、ＭＤＸ−０１０を４週間毎に投薬された。この必要性は、２番目の群における患者番号８の後に高まった。
【０１０７】
（自己免疫毒性）
この試験において、主にグレードＩ及びＩＩの患者の大半において、発熱及びインフルエンザに似た症状を伴う局所的な痛み、腫れ、肉芽腫形成を含む、ペプチドワクチン試験前に記述された毒性も観察された。観察された異常な毒性は、１名の患者におけるブドウ膜炎及び胃腸（ＧＩ）毒性、及び２群のその他２名の患者における発疹、及び３群の５名全ての患者におけるＧＩ毒性であった。３群における３名の患者はグレードＩＩの下痢に悩まされ、この群の残る２名はグレードＩＩＩの下痢を発症した。ブドウ膜炎及びグレードＩＩＩの出血性下痢を発症した２群の患者は入院を必要とした。３群の１名の患者は、静脈内鎮痛剤及び支援管理を必要とする重篤なグレードＩＩＩの腹痛及びグレードＩＩの下痢の認定を必要とした。８名の患者は、ＭＤＸ−０１０に関連すると考えられ、病因となる自己免疫であり得る毒性の徴候を有した。
【０１０８】
２群における患者８は、２回目のワクチンを伴うＭＤＸ−０１０注射後に左胸部にグレードＩＩの発疹を生じた。生検の結果、脈管炎を伴わない皮膚の肥厚及び血管周囲細胞浸潤（ｐｅｒｉ−ｖａｓｃｕｌａｒ ｃｕｆｆｉｎｇ）を伴うＣＤ４＋ Ｔ細胞の深い真皮内浸潤が明らかになった。ＣＤ８＋細胞による、より軽度な浸潤も見られた。患者のワクチン接種計画が中断されなかった発疹は、６ヶ月を超えてゆっくりと消失した。
【０１０９】
２群の患者１９は、１回目のＭＤＸ−０１０注入後に、自然治癒性のグレードＩＩの下痢を発症した。２回目の注入後１週間、この患者は出血性の下痢、視覚症状、羞明、発熱及び倦怠感を呈した。
【０１１０】
結腸鏡検査により、潰瘍形成を伴わない直腸における広汎な炎症が明らかになった。結腸鏡検査時に得られた直腸の生検から、腺には及ばない顕著なＣＤ４＋Ｔ細胞浸潤が明らかになった。ＣＤ８＋ Ｔ細胞による、直腸間質の、より軽度の浸潤もみられた。この者は、ブドウ膜炎及び結腸炎の治療のためのステロイドを必要とし、６０日以内の全症状の消失を伴う唯一の患者であった。
【０１１１】
（実験値）
総白血球数（ＷＢＣ）、ヘモグロビン及び血小板数を、最初の３回のＭＤＸ−０１０処置期間中、０、２８及び５６日目に測定した。経時的な又は群の間での血液学的パラメーターの顕著な変化は何らみられなかった。
【０１１２】
上述のように、１回目、２回目及び３回目のＭＤＸ−０１０注入時に、ＰＢＭＣ検体におけるフローサイトメトリー分析を実行した。ＣＤ３＋、ＣＤ４＋、ＣＤ８＋ Ｔ細胞、ＣＤ５６＋ ＮＫ細胞、及びａｎｄ ＣＤ １９＋ Ｂ細胞を列挙した。これらの小集合において一貫性のある経時的な変化はみられなかった。活性化マーカーＣＤ６９及びＨＬＡ−ＤＲ、ならびに調節マーカーＣＤ２５もまたＴ細胞において測定した。注目された唯一の変化は、１ｍｇ／ｋｇ及び３ｍｇ／ｋｇの投与量における、活性化されたヘルパーＴ細胞の数の増大を反映したＣＤ４＋／ＨＬＡ−ＤＲ＋ Ｔ細胞の経時的増大であった。
【０１１３】
（自己免疫パラメーター）
ＭＤＸ−０１０によるＣＴＬＡ−４シグナリングの阻害によってもたらされる自己免疫の副作用が、先の試験において記述されているため、自己免疫反応と関連する血清学的あるいは臓器機能的な変化をモニターした。赤血球沈降速度（ＥＳＲ）、抗核抗体（ＡＮＡ）、及び甲状腺刺激ホルモンを、全ての患者において２ヶ月毎に測定した。血清学的あるいはＴＳＨな結果における変化は見られなかった。特に、顕著な皮膚又はＧＩ自己免疫副作用の徴候を伴う患者においてさえも、ＥＳＲ又はＡＮＡにおける変化は見られなかった。患者は２ヶ月毎に細隙灯検査による眼科的な評価を受けた。ワクチン／ＭＤＸ−０１０の２回目の投与後にブドウ膜炎を発症した患者１９で、細隙灯検査においてはっきりとした前房における炎症細胞の徴候が見られ、それは局所的なプレドニソロンの１日２回の点眼及び徐々に低減させた静脈内のデカドロン投与、その後の４週間にわたるプレドニソンの経口投与後、６０日を超えてゆっくりと消失した。このことが唯一の、何らかの眼科的な評価における症状としての異常であった。
【０１１４】
（ｐＫ分析）
血清ＭＤＸ−０１０レベルの薬物動態学的分析が、最初の注入の時点において６時間以上行われた。底値のレベルは続くそれぞれの注入の前に出され、ピークサンプルを各注入の１時間後に得た。８０〜９０μｇ／ｍｌまでの投与量依存的なピーク値が、最初の注入から２４０分後に見られた。１０μｇ／ｍｌの底値は、最も高投与量のＭＤＸ−０１０を受けた患者において生じた。このレベルは、インビトロのＣＴＬＡ−４シグナリングを阻害するために使用される時、抗体の活性な範囲内に十分入るものである。
【０１１５】
（免疫反応性）
１９名の患者のうち１８名は、試験開始前及びペプチド／ＩＦＡ及びＭＤＸ−０１０を伴うワクチン接種後６ヶ月に、白血球分離を完了した。ＭＡＲＴ−１、ｇｐ１００及びチロシナーゼに対する免疫反応性の分析を、ＥＬＩＳＰＯＴ及びテトラマー分析を用いて実行した。
【０１１６】
ＥＬＩＳＰＯＴは、γ−インターフェロンを分泌するＣＤ８＋ Ｔ細胞の抗原特異的な活性化を測定する機能的分析である。１８名の患者が評価されるサンプルを有していた。７名（３９％）の患者は、ワクチン接種後に、ｇｐ１００２０９−２１７（２１０Ｍ）に対し統計学的に顕著な免疫反応性を有した。さらに４名の患者が予め示されたＭＡＲＴ−１免疫を有していたにも関わらず、３名（１７％）の患者のみが、ＭＡＲＴ−１２６−３５（２７Ｌ）に対する反応性における統計学的に顕著な増大を有した。ｇｐ１００に対する事前のワクチン反応性が一般的に低い一方、ＭＡＲＴ−１に対する高レベルの事前のワクチン反応性が見られた。患者数が限られていることが信頼性の高い相関形成を妨げてはいるが、ワクチン投与量に対する又は自己免疫毒性の進展に対するＥＬＩＳＰＯＴ反応性の明確な相関は見られなかった。同様の数の患者が野生型ｇｐ１００２０９−２１７（６／１８）及びＭＡＲＴ−１２７−３５ペプチド（３／１８）に対する免疫反応性を有していたが、その反応性は、より低いものであった。チロシナーゼに対する顕著なＥＬＩＳＰＯＴの反応性は観察されなかった。
【０１１７】
テトラマー分析は、ＭＨＣ−クラスＩペプチドの組み合わせに特異的な単細胞ＣＤ８＋Ｔ細胞を列挙する。６回のワクチン接種に続く６ヶ月目のワクチン前及びワクチン後のｇｐ１００２０９−２１７（２１０Ｍ）テトラマー分析の結果を判断した。ｇｐ１００に対する事前の反応性は観察されなかったが、ワクチン接種後に８／１６（５０％）の患者は、ｇｐ１００−２０９−２１７（２１０Ｍ）特異的なＴ細胞数の顕著な増大を示した。１６名中９名（５６％）の患者では、ワクチン接種後のＭＡＲＴ−１−２６−３５（２７Ｌ）特異的Ｔ細胞数の顕著な増大があった。予め存在するＭＡＲＴ−１に対する強い反応性が明確に示される。チロシナーゼに対するテトラマーの顕著な反応性は観察されなかった。類似の割合の患者においてｇｐ１００２０９−２１７（７／１６）及びＭＡＲＴ−１２７−３５（８／１６）野生型ペプチドに対する反応性の徴候があったが、反応性のレベルは、より低いものであった。
【０１１８】
（ＣＣＲ９発現に関するフローサイトメトリー）
自己免疫の副作用を有する患者において観察される皮膚反応及び消化器症状の発現を抑えるＭＤＸ−０１０／ワクチンで処置された患者において、皮膚（ＣＬＡ及びＣＣＲ４）及び胃腸粘膜（ＣＣＲ９）に関するＴ細胞ホーミング受容体が上方調節され得る。治療計画開始前及び開始後６ヶ月に得た全ＰＢＭＣ試料を用いたフローサイトメトリー分析を実行し、次いで、上記マーカーに関し抗体を用いた染色を行った。ＣＣＲ９発現に関する結果を調べ、特に２つの高投与量群において、ＭＤＸ−０１０に加えたワクチン接種後にＣＤ４＋ Ｔ細胞におけるＣＣＲ９の発現が増大する傾向があることを示す。１３名の患者のうち８名（６２％）でＣＣＲ９に関するＣＤ４＋ Ｔ細胞の染色における顕著な増大があった。より少ない投与量群においては５名中１名のみで増大があったのに対して、高投与量群において試験された４名の患者のうち３名で増大があった。ＣＤ４／ＣＬＡ又はＣＤ４／ＣＣＲ４染色に関する変化は見られなかった。
【０１１９】
（多型）
ＣＴＬＡ−４に関するいくつかの一塩基ヌクレオチド多型が同定されている。これらの一つであるＪＯ３０は、Ｔ細胞上でのＣＴＬＡ−４発現レベルと相関する３つの対立遺伝子をコードする。多型に関するＧＧ対立遺伝子は、「低い」ＣＴＬＡ−４レベルと相関し、また、若年型糖尿病及びその他の自己免疫疾患と関連することが示された（Ｕｅｄａら（２００３）Ｎａｔｕｒｅ ４２３：５０６−５１１）。我々は、「低い」ＣＴＬＡ−４対立遺伝子（ＧＧ）を有する患者がＣＴＬＡ−４遮断を伴う自己免疫進行におけるより高い機会を有するであろうこと、また「高い」ＣＴＬＡ−４対立遺伝子（ＡＡ又はＡＧ）がＭＤＸ−０１０遮断から受ける影響はより少なく、自己免疫進行の機会がより少ないであろうことを仮定した。実際に、「低い」ＣＴＬＡ−４対立遺伝子（ＧＧ）を有する患者４名のうち３名（７５％）で自己免疫症状が進行し、これら４名のうち１名（２５％）のみの患者が再発した。４名全ての患者は１ｍｇ／ｋｇ又は３ｍｇ／ｋｇのＭＤＸ−０１０投与を受けた。ＡＡ又はＡＧ対立遺伝子のいずれかを有する残り１５名の患者のうち、５名（３３％）のみで自己免疫症状が進行し、１０名（６７％）が再発した。結果を図１に示すグラフ中にまとめる。
【０１２０】
（臨床的結果）
続く２４ヶ月で、この試験で処置された１９名の患者のうち１１名は再発し、３名は死亡した。自己免疫の徴候を有さない１１名の患者のうち、９名（８２％）は再発し、２名は死亡した。再発までの平均期間は７ヶ月であった。１９名のうち８名（４２％）の患者は自己免疫症状を示した；２名は再発し、１名は死亡した。最も高投与量群（３ｍｇ／ｋｇ）における５名全て（１００％）の患者は自己免疫の徴候を有した；２名は（４０％）再発し、４名は生存し、１名は疾患を有していた。
【０１２１】
２つのより低投与量群における１４名の患者のうち、３名（２１％）のみが自己免疫効果に苦しみ、９名（６４％）の患者は再発し、２名は死亡した。これらの結果は、自己免疫の進行と再発防止との相関可能性を提起する。興味深いことに、血清学的な自己免疫であるという一貫した証拠は見出されず、抗ＭＤＸ−０１０抗体反応が進行した患者はみられなかった。
【０１２２】
（実施例２：ＣＴＬＡ−４多型の評価）
グレーブス病、自己免疫性甲状腺機能低下症（ＡＩＨ）及びタイプ１糖尿病（ＴｌＤ）等の自己免疫疾患に対する感受性は、ＣＴＬＡ−４の６．１ ｋｂの非コード３’領域にマッピングされている（Ｕｅｄａ，Ｈ．ら（２００３；Ｎａｔｕｒｅ ４２３：５０６−５１１，補足情報Ａ及びＢを含むその全文を、参照により本明細書中に具体的に組み入れるものとする）。この研究において、１０８の一塩基ヌクレオチド多型（ＳＮＰ）及びＣＴＬＡ−４（ＡＴ）ｎ −３’非翻訳領域（ＵＴＲ）マーカーが、３８４のグレーブス病のケース及び６５２の対照、２２８のＡＩＨのケース及び８４４の対照、及び３，６７１のＴｌＤファミリーにおいて遺伝子型タイピングされた。自己免疫疾患に対する感受性と最も密接に関連する７つのＳＮＰは、ＣＴ６０、ＪＯ３０、ＪＯ３１、ＪＯ２７＿１、ＣＴＡＦ３４３、ｒｓ１８６３８００及びＭＨ３０マーカーであった。これらのＳＮＰの配列は以下の通りであり、多型ヌクレオチドの位置を、疾患に関係する対立遺伝子を表す１番目のヌクレオチド及び、疾患に関係しない対立遺伝子を表す２番目のヌクレオチドを伴って括弧内に示す：
【０１２３】
【化１】
ＣＴＬＡ−４遮断薬治療を受けている被験体におけるＣＴＬＡ−４多型の発現を調べるために、標準的方法により、末梢血液リンパ球からゲノムＤＮＡを単離した。ＳＮＰを評価するための好ましい方法は、Ｍｅｉｎ，Ｃ．ら（２０００）によりＧｅｎｏｍｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ １０：３３０−３４３に記載されたＩｎｖａｄｅｒ（登録商標）技法である（その内容を参照により本明細書中に明示的に組み入れるものとする）。あるいは、ＳＮＰは、Ｐｅｒｒｅｙ，Ｃ．ら（１９９９）Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ．７：１２７−１２８中に記載されるようなａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｒｅｆｒａｃｔｏｒｙ ｍｕｔａｔｉｏｎ ｓｙｓｔｅｍ−ポリメラーゼ連鎖反応（ＡＲＭＳ−ＰＣＲ）技法を用いて評価する。分析される多型を特異的に検出するためのプローブのセットは公知の方法論に従って設計し、合成する。
【図面の簡単な説明】
【０１２４】
【図１】図１は、ＪＯ３０ Ａ／ Ａ多型、ＪＯ３０ Ａ／Ｇ多型又はＪＯ３０ Ｇ／Ｇ多型を有する被験体における、ＭＤＸ−０１０及びペプチドワクチンを用いた処置後に続く臨床毒性の発生率及び疾患進行をまとめた棒グラフである。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＣＴＬＡ−４遮断薬を用いた治療に対する被験体の反応性を予測する方法であって、
該被験体における少なくとも１つのＣＴＬＡ−４多型を分析する工程、及び、
該被験体におけるＣＴＬＡ−４多型対立遺伝子の有無に基づいてＣＴＬＡ−４遮断薬を用いた治療に対する該被験体の反応性を予測する工程、
を包含する、方法。
【請求項２】
前記被験体におけるＣＴＬＡ−４多型対立遺伝子の有無に基づいてＣＴＬＡ−４遮断薬を用いた治療計画を選択する工程をさらに包含する、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記被験体において抗原刺激に対する反応性が増大するような治療計画に従って該被験体に前記ＣＴＬＡ−４遮断薬を投与する工程をさらに包含する、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記ＣＬＴＡ−４多型が、自己免疫疾患に対する感受性に関連する一塩基多型（ＳＮＰ）である、請求項１、２又は３に記載の方法。
【請求項５】
前記ＳＮＰがＪＯ３０ Ｇ／Ａ多型である、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記ＳＮＰが、ＪＯ３０ Ｇ／Ａ多型、ＣＴ６０ Ｇ／Ａ多型、ＪＯ３１ Ｇ／Ｔ多型、ＪＯ２７＿１ Ｔ／Ｃ多型、ＣＴＡＦ３４３ Ｔ／Ｃ多型、ｒｓ１８６３８００ Ｃ／Ｔ多型及びＭＨ３０ Ｇ／Ｃ多型からなる群から選択される、請求項４に記載の方法。
【請求項７】
前記ＣＴＬＡ−４多型が、ＣＴＬＡ−４エクソン１の４９位のＡ／Ｇ多型、ＣＴＬＡ−４プロモーターの−３１８位のＣ／Ｔ多型、ＣＴＬＡ−４イントロン１の１８２２位のＣ／Ｔ多型、及びＣＴＬＡ−４エクソン３のジヌクレオチド（ＡＴ）ｎ反復多型からなる群から選択される、自己免疫疾患に対する感受性と関連する多型である、請求項１、２又は３に記載の方法。
【請求項８】
自己免疫疾患に対する感受性の増大に関連するＣＴＬＡ−４多型対立遺伝子が前記被験体中に存在し、該被験体は、該対立遺伝子を有さない被験体と比較して、ＣＴＬＡ−４遮断薬による治療に対する増大した反応性を有すると予測される、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
ＣＴＬＡ−４遮断薬による治療に対する増大した反応性が、抗原刺激に対するＴ細胞反応性の増大、抗腫瘍活性の増大、自己免疫出現事象の増大、臨床的有害事象の増大、及び血清学的有害事象の増大からなる群から選択される少なくとも１つの反応を含む、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
自己免疫疾患に対する感受性の低減に関連するＣＴＬＡ−４多型対立遺伝子が前記被験体中に存在し、該被験体は、該対立遺伝子を有さない被験体と比較して、ＣＴＬＡ−４遮断薬による治療に対する低減した反応性を有すると予測される、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
ＣＴＬＡ−４遮断薬による治療に対する低減した反応性が、抗原刺激に対するＴ細胞反応性の低減、抗腫瘍活性の低減、自己免疫出現事象の低減、臨床的有害事象の低減、及び血清学的有害事象の低減からなる群から選択される少なくとも１つの反応を含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記被験体がＪＯ３０ Ｇ／Ａ多型における２つのＧ対立遺伝子（Ｇ／Ｇ遺伝子型）を発現し、選択される前記治療計画が標準的治療計画と比較して縮小された治療計画である、請求項２に記載の方法。
【請求項１３】
前記被験体がＪＯ３０ Ｇ／Ａ多型における２つのＧ対立遺伝子（Ｇ／Ｇ遺伝子型）、ＣＴ６０ Ｇ／Ａ多型における２つのＧ対立遺伝子（Ｇ／Ｇ遺伝子型）、ＪＯ３１ Ｇ／Ｔ多型における２つのＧ対立遺伝子（Ｇ／Ｇ遺伝子型）、ＪＯ２７＿１ Ｔ／Ｃ多型における２つのＴ対立遺伝子（Ｔ／Ｔ遺伝子型）、ＣＴＡＦ３４３ Ｔ／Ｃ多型における２つのＴ対立遺伝子（Ｔ／Ｔ遺伝子型）、ｒｓ１８６３８００ Ｃ／Ｔ多型における２つのＣ対立遺伝子（Ｃ／Ｃ遺伝子型）及びＭＨ３０ Ｇ／Ｃ多型における２つのＧ対立遺伝子（Ｇ／Ｇ遺伝子型）からなる群から選択される遺伝子型を発現し、選択される前記治療計画が標準的治療計画と比較して縮小された治療計画である、請求項２に記載の方法。
【請求項１４】
前記縮小された治療計画が、標準的治療計画と比較して、より低投与量のＣＴＬＡ−４遮断薬の使用、より低頻度の該ＣＴＬＡ−４遮断薬の投与、又はより短期間の該ＣＴＬＡ−４遮断薬による治療期間を包含する、請求項１２又は１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記被験体がＪＯ３０ Ｇ／Ａ多型における２つのＡ対立遺伝子（Ａ／Ａ遺伝子型）を発現し、選択される前記治療計画が標準的治療計画と比較して拡大された治療計画である、請求項２に記載の方法。
【請求項１６】
前記被験体がＪＯ３０ Ｇ／Ａ多型における２つのＡ対立遺伝子（Ａ／Ａ遺伝子型）、ＣＴ６０ Ｇ／Ａ多型における２つのＡ対立遺伝子（Ａ／Ａ遺伝子型）、ＪＯ３１ Ｇ／Ｔ多型における２つのＴ対立遺伝子（Ｔ／Ｔ遺伝子型）、ＪＯ２７＿１ Ｔ／Ｃ多型における２つのＣ対立遺伝子（Ｃ／Ｃ遺伝子型）、ＣＴＡＦ３４３ Ｔ／Ｃ多型における２つのＣ対立遺伝子（Ｃ／Ｃ遺伝子型）、ｒｓ１８６３８００ Ｃ／Ｔ多型における２つのＴ対立遺伝子（Ｔ／Ｔ遺伝子型）及びＭＨ３０ Ｇ／Ｃ多型における２つのＣ対立遺伝子（Ｃ／Ｃ遺伝子型）からなる群から選択される遺伝子型を発現し、選択される前記治療計画が標準的治療計画と比較して拡大された治療計画である、請求項２に記載の方法。
【請求項１７】
前記拡大された治療計画が、標準的治療計画と比較して、より高投与量のＣＴＬＡ−４遮断薬の使用、より高頻度の該ＣＴＬＡ−４遮断薬の投与、又はより長期間の該ＣＴＬＡ−４遮断薬による治療期間を包含する、請求項１５又は１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記ＣＴＬＡ−４多型がポリメラーゼ連鎖反応−制限断片長多型（ＰＣＲ−ＲＦＬＰ）分析により分析される、請求項１、２又は３に記載の方法。
【請求項１９】
前記ＣＴＬＡ−４遮断薬が抗ＣＴＬＡ−４モノクローナル抗体である、請求項１、２又は３に記載の方法。
【請求項２０】
前記抗ＣＴＬＡ−４モノクローナル抗体がヒトモノクローナル抗体である、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記被験体がヒトである、請求項１、２又は３に記載の方法。
【請求項２２】
ＣＴＬＡ−４遮断薬、及び
１以上のＣＴＬＡ−４多型を分析するための手段、
を含むキット。
【請求項２３】
ワクチンをさらに含む、請求項２２に記載のキット。
【請求項２４】
前記ＣＴＬＡ−４遮断薬が抗ＣＴＬＡ−４モノクローナル抗体である、請求項２２又は２３に記載のキット。
【請求項２５】
前記抗ＣＴＬＡ−４モノクローナル抗体がヒトモノクローナル抗体である、請求項２４に記載のキット。
【請求項２６】
前記１以上のＣＴＬＡ−４多型を分析する手段が、該多型に対して特異的な１以上のポリヌクレオチドを含む、請求項２２又は２３に記載のキット。
【請求項２７】
前記ワクチンが腫瘍抗原を含む、請求項２３に記載のキット。
【請求項２８】
前記ワクチンがＧＭ−ＣＳＦを分泌するように形質導入された腫瘍細胞を含む、請求項２３に記載のキット。
【請求項２９】
前記腫瘍抗原がｇｐ１００ペプチドを含む、請求項２７に記載のキット。
【請求項３０】
前記腫瘍抗原が、ｇｐ１００ペプチド、ＭＡＲＴ−１ペプチド及びチロシナーゼペプチドを含む、請求項２７に記載のキット。
【請求項３１】
前記腫瘍抗原が前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）を含む、請求項２７に記載のキット。
【請求項３２】
ＣＴＬＡ−４遮断薬による治療を受けている被験体の自己免疫障害に対する感受性の増大を予測する方法であって、該方法は、以下：
（ａ） ＣＴＬＡ−４遮断薬による治療を受けている該被験体における、少なくとも１つのＣＴＬＡ−４多型について分析する工程、及び
（ｂ） 該被験体におけるＣＴＬＡ−４多型対立遺伝子の存在に基づいて、該被験体の自己免疫障害に対する感受性の増大を予測する工程、
を包含する、方法。
【請求項３３】
前記ＣＴＬＡ−４多型対立遺伝子が、ＣＴ６０ Ｇ／Ａ多型、ＪＯ３０ Ｇ／Ａ多型、ＪＯ３１ Ｇ／Ｔ多型、ＪＯ２７＿１ Ｔ／Ｃ多型、ＣＴＡＦ３４３ Ｔ／Ｃ多型、ｒｓ１８６３８００ Ｃ／Ｔ多型及びＭＨ３０ Ｇ／Ｃ多型からなる群から選択されるＣＴＬＡ−４多型の２つのＧ対立遺伝子（Ｇ／Ｇ遺伝子型）である、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
自己免疫障害に対する増大した感受性を有すると予測される被験体において、標準的な治療計画と比較してＣＴＬＡ−４遮断薬の治療計画を縮小することを包含する、請求項３２に記載の方法。
【請求項３５】
ＣＴＬＡ−４遮断薬による治療を受けている被験体の自己免疫障害に対する感受性の低減を予測する方法であって、該方法は、以下：
（ａ） ＣＴＬＡ−４遮断薬による治療を受けている該被験体における、少なくとも１つのＣＴＬＡ−４多型について分析する工程、及び
（ｂ） 該被験体におけるＣＴＬＡ−４多型対立遺伝子の存在に基づいて、該被験体の自己免疫障害に対する感受性の低減を予測する工程、
を包含する、方法。
【請求項３６】
前記ＣＴＬＡ−４多型対立遺伝子が、ＣＴ６０ Ｇ／Ａ多型における２つのＡ対立遺伝子（Ａ／Ａ遺伝子型）、ＪＯ３１ Ｇ／Ｔ多型における２つのＴ対立遺伝子（Ｔ／Ｔ遺伝子型）、ＪＯ２７＿１ Ｔ／Ｃ多型における２つのＣ対立遺伝子（Ｃ／Ｃ遺伝子型）、ＣＴＡＦ３４３ Ｔ／Ｃ多型における２つのＣ対立遺伝子（Ｃ／Ｃ遺伝子型）、ｒｓ１８６３８００ Ｃ／Ｔ多型における２つのＴ対立遺伝子（Ｔ／Ｔ遺伝子型）及びＭＨ３０ Ｇ／Ｃ多型における２つのＣ対立遺伝子（Ｃ／Ｃ遺伝子型）からなる群から選択される遺伝子型である、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
自己免疫障害に対する低減した感受性を有すると予測される被験体において、標準的な治療計画と比較してＣＴＬＡ−４遮断薬治療計画を拡大することを包含する、請求項３５に記載の方法。
【請求項３８】
前記ＣＴＬＡ−４遮断薬が抗ＣＴＬＡ−４抗体である、請求項３２又は３５に記載の方法。
【請求項３９】
前記抗ＣＴＬＡ−４抗体がＭＤＸ−０１０である、請求項３８に記載の方法。
【請求項１】
ＣＴＬＡ−４遮断薬を用いた治療に対する被験体の反応性を予測する方法であって、
該被験体における少なくとも１つのＣＴＬＡ−４多型を分析する工程、及び、
該被験体におけるＣＴＬＡ−４多型対立遺伝子の有無に基づいてＣＴＬＡ−４遮断薬を用いた治療に対する該被験体の反応性を予測する工程、
を包含する、方法。
【請求項２】
前記被験体におけるＣＴＬＡ−４多型対立遺伝子の有無に基づいてＣＴＬＡ−４遮断薬を用いた治療計画を選択する工程をさらに包含する、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記被験体において抗原刺激に対する反応性が増大するような治療計画に従って該被験体に前記ＣＴＬＡ−４遮断薬を投与する工程をさらに包含する、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記ＣＬＴＡ−４多型が、自己免疫疾患に対する感受性に関連する一塩基多型（ＳＮＰ）である、請求項１、２又は３に記載の方法。
【請求項５】
前記ＳＮＰがＪＯ３０ Ｇ／Ａ多型である、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記ＳＮＰが、ＪＯ３０ Ｇ／Ａ多型、ＣＴ６０ Ｇ／Ａ多型、ＪＯ３１ Ｇ／Ｔ多型、ＪＯ２７＿１ Ｔ／Ｃ多型、ＣＴＡＦ３４３ Ｔ／Ｃ多型、ｒｓ１８６３８００ Ｃ／Ｔ多型及びＭＨ３０ Ｇ／Ｃ多型からなる群から選択される、請求項４に記載の方法。
【請求項７】
前記ＣＴＬＡ−４多型が、ＣＴＬＡ−４エクソン１の４９位のＡ／Ｇ多型、ＣＴＬＡ−４プロモーターの−３１８位のＣ／Ｔ多型、ＣＴＬＡ−４イントロン１の１８２２位のＣ／Ｔ多型、及びＣＴＬＡ−４エクソン３のジヌクレオチド（ＡＴ）ｎ反復多型からなる群から選択される、自己免疫疾患に対する感受性と関連する多型である、請求項１、２又は３に記載の方法。
【請求項８】
自己免疫疾患に対する感受性の増大に関連するＣＴＬＡ−４多型対立遺伝子が前記被験体中に存在し、該被験体は、該対立遺伝子を有さない被験体と比較して、ＣＴＬＡ−４遮断薬による治療に対する増大した反応性を有すると予測される、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
ＣＴＬＡ−４遮断薬による治療に対する増大した反応性が、抗原刺激に対するＴ細胞反応性の増大、抗腫瘍活性の増大、自己免疫出現事象の増大、臨床的有害事象の増大、及び血清学的有害事象の増大からなる群から選択される少なくとも１つの反応を含む、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
自己免疫疾患に対する感受性の低減に関連するＣＴＬＡ−４多型対立遺伝子が前記被験体中に存在し、該被験体は、該対立遺伝子を有さない被験体と比較して、ＣＴＬＡ−４遮断薬による治療に対する低減した反応性を有すると予測される、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
ＣＴＬＡ−４遮断薬による治療に対する低減した反応性が、抗原刺激に対するＴ細胞反応性の低減、抗腫瘍活性の低減、自己免疫出現事象の低減、臨床的有害事象の低減、及び血清学的有害事象の低減からなる群から選択される少なくとも１つの反応を含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記被験体がＪＯ３０ Ｇ／Ａ多型における２つのＧ対立遺伝子（Ｇ／Ｇ遺伝子型）を発現し、選択される前記治療計画が標準的治療計画と比較して縮小された治療計画である、請求項２に記載の方法。
【請求項１３】
前記被験体がＪＯ３０ Ｇ／Ａ多型における２つのＧ対立遺伝子（Ｇ／Ｇ遺伝子型）、ＣＴ６０ Ｇ／Ａ多型における２つのＧ対立遺伝子（Ｇ／Ｇ遺伝子型）、ＪＯ３１ Ｇ／Ｔ多型における２つのＧ対立遺伝子（Ｇ／Ｇ遺伝子型）、ＪＯ２７＿１ Ｔ／Ｃ多型における２つのＴ対立遺伝子（Ｔ／Ｔ遺伝子型）、ＣＴＡＦ３４３ Ｔ／Ｃ多型における２つのＴ対立遺伝子（Ｔ／Ｔ遺伝子型）、ｒｓ１８６３８００ Ｃ／Ｔ多型における２つのＣ対立遺伝子（Ｃ／Ｃ遺伝子型）及びＭＨ３０ Ｇ／Ｃ多型における２つのＧ対立遺伝子（Ｇ／Ｇ遺伝子型）からなる群から選択される遺伝子型を発現し、選択される前記治療計画が標準的治療計画と比較して縮小された治療計画である、請求項２に記載の方法。
【請求項１４】
前記縮小された治療計画が、標準的治療計画と比較して、より低投与量のＣＴＬＡ−４遮断薬の使用、より低頻度の該ＣＴＬＡ−４遮断薬の投与、又はより短期間の該ＣＴＬＡ−４遮断薬による治療期間を包含する、請求項１２又は１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記被験体がＪＯ３０ Ｇ／Ａ多型における２つのＡ対立遺伝子（Ａ／Ａ遺伝子型）を発現し、選択される前記治療計画が標準的治療計画と比較して拡大された治療計画である、請求項２に記載の方法。
【請求項１６】
前記被験体がＪＯ３０ Ｇ／Ａ多型における２つのＡ対立遺伝子（Ａ／Ａ遺伝子型）、ＣＴ６０ Ｇ／Ａ多型における２つのＡ対立遺伝子（Ａ／Ａ遺伝子型）、ＪＯ３１ Ｇ／Ｔ多型における２つのＴ対立遺伝子（Ｔ／Ｔ遺伝子型）、ＪＯ２７＿１ Ｔ／Ｃ多型における２つのＣ対立遺伝子（Ｃ／Ｃ遺伝子型）、ＣＴＡＦ３４３ Ｔ／Ｃ多型における２つのＣ対立遺伝子（Ｃ／Ｃ遺伝子型）、ｒｓ１８６３８００ Ｃ／Ｔ多型における２つのＴ対立遺伝子（Ｔ／Ｔ遺伝子型）及びＭＨ３０ Ｇ／Ｃ多型における２つのＣ対立遺伝子（Ｃ／Ｃ遺伝子型）からなる群から選択される遺伝子型を発現し、選択される前記治療計画が標準的治療計画と比較して拡大された治療計画である、請求項２に記載の方法。
【請求項１７】
前記拡大された治療計画が、標準的治療計画と比較して、より高投与量のＣＴＬＡ−４遮断薬の使用、より高頻度の該ＣＴＬＡ−４遮断薬の投与、又はより長期間の該ＣＴＬＡ−４遮断薬による治療期間を包含する、請求項１５又は１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記ＣＴＬＡ−４多型がポリメラーゼ連鎖反応−制限断片長多型（ＰＣＲ−ＲＦＬＰ）分析により分析される、請求項１、２又は３に記載の方法。
【請求項１９】
前記ＣＴＬＡ−４遮断薬が抗ＣＴＬＡ−４モノクローナル抗体である、請求項１、２又は３に記載の方法。
【請求項２０】
前記抗ＣＴＬＡ−４モノクローナル抗体がヒトモノクローナル抗体である、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記被験体がヒトである、請求項１、２又は３に記載の方法。
【請求項２２】
ＣＴＬＡ−４遮断薬、及び
１以上のＣＴＬＡ−４多型を分析するための手段、
を含むキット。
【請求項２３】
ワクチンをさらに含む、請求項２２に記載のキット。
【請求項２４】
前記ＣＴＬＡ−４遮断薬が抗ＣＴＬＡ−４モノクローナル抗体である、請求項２２又は２３に記載のキット。
【請求項２５】
前記抗ＣＴＬＡ−４モノクローナル抗体がヒトモノクローナル抗体である、請求項２４に記載のキット。
【請求項２６】
前記１以上のＣＴＬＡ−４多型を分析する手段が、該多型に対して特異的な１以上のポリヌクレオチドを含む、請求項２２又は２３に記載のキット。
【請求項２７】
前記ワクチンが腫瘍抗原を含む、請求項２３に記載のキット。
【請求項２８】
前記ワクチンがＧＭ−ＣＳＦを分泌するように形質導入された腫瘍細胞を含む、請求項２３に記載のキット。
【請求項２９】
前記腫瘍抗原がｇｐ１００ペプチドを含む、請求項２７に記載のキット。
【請求項３０】
前記腫瘍抗原が、ｇｐ１００ペプチド、ＭＡＲＴ−１ペプチド及びチロシナーゼペプチドを含む、請求項２７に記載のキット。
【請求項３１】
前記腫瘍抗原が前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）を含む、請求項２７に記載のキット。
【請求項３２】
ＣＴＬＡ−４遮断薬による治療を受けている被験体の自己免疫障害に対する感受性の増大を予測する方法であって、該方法は、以下：
（ａ） ＣＴＬＡ−４遮断薬による治療を受けている該被験体における、少なくとも１つのＣＴＬＡ−４多型について分析する工程、及び
（ｂ） 該被験体におけるＣＴＬＡ−４多型対立遺伝子の存在に基づいて、該被験体の自己免疫障害に対する感受性の増大を予測する工程、
を包含する、方法。
【請求項３３】
前記ＣＴＬＡ−４多型対立遺伝子が、ＣＴ６０ Ｇ／Ａ多型、ＪＯ３０ Ｇ／Ａ多型、ＪＯ３１ Ｇ／Ｔ多型、ＪＯ２７＿１ Ｔ／Ｃ多型、ＣＴＡＦ３４３ Ｔ／Ｃ多型、ｒｓ１８６３８００ Ｃ／Ｔ多型及びＭＨ３０ Ｇ／Ｃ多型からなる群から選択されるＣＴＬＡ−４多型の２つのＧ対立遺伝子（Ｇ／Ｇ遺伝子型）である、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
自己免疫障害に対する増大した感受性を有すると予測される被験体において、標準的な治療計画と比較してＣＴＬＡ−４遮断薬の治療計画を縮小することを包含する、請求項３２に記載の方法。
【請求項３５】
ＣＴＬＡ−４遮断薬による治療を受けている被験体の自己免疫障害に対する感受性の低減を予測する方法であって、該方法は、以下：
（ａ） ＣＴＬＡ−４遮断薬による治療を受けている該被験体における、少なくとも１つのＣＴＬＡ−４多型について分析する工程、及び
（ｂ） 該被験体におけるＣＴＬＡ−４多型対立遺伝子の存在に基づいて、該被験体の自己免疫障害に対する感受性の低減を予測する工程、
を包含する、方法。
【請求項３６】
前記ＣＴＬＡ−４多型対立遺伝子が、ＣＴ６０ Ｇ／Ａ多型における２つのＡ対立遺伝子（Ａ／Ａ遺伝子型）、ＪＯ３１ Ｇ／Ｔ多型における２つのＴ対立遺伝子（Ｔ／Ｔ遺伝子型）、ＪＯ２７＿１ Ｔ／Ｃ多型における２つのＣ対立遺伝子（Ｃ／Ｃ遺伝子型）、ＣＴＡＦ３４３ Ｔ／Ｃ多型における２つのＣ対立遺伝子（Ｃ／Ｃ遺伝子型）、ｒｓ１８６３８００ Ｃ／Ｔ多型における２つのＴ対立遺伝子（Ｔ／Ｔ遺伝子型）及びＭＨ３０ Ｇ／Ｃ多型における２つのＣ対立遺伝子（Ｃ／Ｃ遺伝子型）からなる群から選択される遺伝子型である、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
自己免疫障害に対する低減した感受性を有すると予測される被験体において、標準的な治療計画と比較してＣＴＬＡ−４遮断薬治療計画を拡大することを包含する、請求項３５に記載の方法。
【請求項３８】
前記ＣＴＬＡ−４遮断薬が抗ＣＴＬＡ−４抗体である、請求項３２又は３５に記載の方法。
【請求項３９】
前記抗ＣＴＬＡ−４抗体がＭＤＸ−０１０である、請求項３８に記載の方法。
【図１】
【公表番号】特表２００８−５１２０９２（Ｐ２００８−５１２０９２Ａ）
【公表日】平成２０年４月２４日（２００８．４．２４）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００７−５３０４１１（Ｐ２００７−５３０４１１）
【出願日】平成１７年９月１日（２００５．９．１）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００５／０３１３７９
【国際公開番号】ＷＯ２００６／０２８９９９
【国際公開日】平成１８年３月１６日（２００６．３．１６）
【出願人】（５０４３７８２３８）メダレックス インコーポレイテッド (20)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２０年４月２４日（２００８．４．２４）
【国際特許分類】
【出願日】平成１７年９月１日（２００５．９．１）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００５／０３１３７９
【国際公開番号】ＷＯ２００６／０２８９９９
【国際公開日】平成１８年３月１６日（２００６．３．１６）
【出願人】（５０４３７８２３８）メダレックス インコーポレイテッド (20)
【Ｆターム（参考）】
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