ＥＧＦＲおよびＩＧＦ−ＩＲに対するナノボディおよびポリペプチド
本発明は、上皮細胞増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）および／またはインスリン増殖因子−I受容体（ＩＧＦ−IＲ）に対するポリペプチドおよびナノボディに関する。また、本発明は、該ナノボディおよびポリペプチドをコードする核酸；該ナノボディおよびポリペプチドを調製する方法；該ナノボディおよびポリペプチドを発現し、または発現することができる宿主細胞；該ナノボディ、ポリペプチド、核酸、および／または宿主細胞を含む組成物、特に医薬組成物；ならびに特に予防、治療、または診断目的での該ナノボディ、ポリペプチド、核酸、宿主細胞、および／または組成物の使用、にも関する。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
４つのフレームワーク領域（それぞれＦＲ１〜ＦＲ４）と、３つの相補性決定領域（それぞれＣＤＲ１〜ＣＤＲ３）とを含む、またはこれらからなる、ＥＧＦＲに対するナノボディであって：
ＣＤＲ１は、以下からなる群から選択されるアミノ酸配列であり：
ＴＹＴＭＡ ［配列番号４２］
ＳＹＧＭＧ ［配列番号４３］
ＧＦＡＭＧ ［配列番号４４］
ＳＮＮＭＧ ［配列番号４５］
ＧＤＶＭＧ ［配列番号４６］
ＳＹＶＶＧ ［配列番号４７］
ＤＹＮＭＡ ［配列番号４８］
ＴＹＴＭＡ ［配列番号４９］
ＮＮＡＭＡ ［配列番号５０］
ＳＹＶＭＧ ［配列番号５１］
ＳＹＡＭＧ ［配列番号５２］
Ａ ［配列番号５３］
または、上記アミノ酸配列の1つと、少なくとも８０%、好ましくは少なくとも９０%、より好ましくは少なくとも９５%、さらにより好ましくは少なくとも９９%の配列同一性（本明細書で定義）を有する、アミノ酸配列からなる群から選択されるアミノ酸配列であり、
（i）任意のアミノ酸の置換が、好ましくは保存アミノ酸の置換（本明細書で定義）であり；および／または
（ii）前記アミノ酸配列は、上記のアミノ酸配列と比較した場合、好ましくはアミノ酸の置換のみを含み、アミノ酸の欠失または挿入をを含まず；
および／または、上記アミノ酸配列の１つと、２個または１個のみの「アミノ酸の差違」（本明細書で定義）を有しているアミノ酸配列からなる群から選択されるアミノ酸配列であり：
（i）任意のアミノ酸置換が、好ましくは保存アミノ酸の置換（本明細書で定義）であり；および／または
（ii）前記アミノ酸配列が、上記のアミノ酸配列と比較した場合、好ましくはアミノ酸置換のみを含み、アミノ酸の欠失または挿入を含まず；
および／または：
ＣＤＲ２は、以下からなる群から選択されるアミノ酸配列であり：
ＧＩＳＲＳＤＧＧＴＹＤＡＤＳＶＫＧ ［配列番号５４］
ＧＩＳＷＲＧＤＳＴＧＹＡＤＳＶＫＧ ［配列番号５５］
ＡＩＳＷＳＧＧＳＬＬＹＶＤＳＶＫＧ ［配列番号５６］
ＡＩＧＷＧＧＬＥＴＨＹＳＤＳＶＫＧ ［配列番号５７］
ＧＦＳＲＳＴＳＴＴＨＹＡＤＳＶＫＧ ［配列番号５８］
ＧＩＡＷＧＤＧＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧ ［配列番号５９］
ＨＩＳＷＬＧＧＲＴＹＹＲＤＳＶＫＧ ［配列番号６０］
ＧＦＳＧＳＧＧＡＴＹＹＡＨＳＶＥＧ ［配列番号６１］
ＡＩＳＷＲＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧ ［配列番号６２］
ＡＩＮＷＳＳＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧ ［配列番号６３］
ＴＩＡＷＤＳＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧ ［配列番号６４］
ＧＬＳＷＳＡＤＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧ ［配列番号６５］
または、上記アミノ酸配列の1つと、少なくとも８０%、好ましくは少なくとも９０%、より好ましくは少なくとも９５%、さらにより好ましくは少なくとも９９%の配列同一性（本明細書で定義）を有する、アミノ酸配列からなる群から選択されるアミノ酸配列であり、
（i）任意のアミノ酸の置換が、好ましくは保存アミノ酸の置換（本明細書で定義）であり；および／または
（ii）前記アミノ酸配列は、上記のアミノ酸配列と比較した場合、好ましくはアミノ酸の置換のみを含み、アミノ酸の欠失または挿入をを含まず；
および／または、上記アミノ酸配列の１つと、３個、２個または１個のみの「アミノ酸の差違」（本明細書で定義）を有しているアミノ酸配列からなる群から選択されるアミノ酸配列であり：
（i）任意のアミノ酸置換が、好ましくは保存アミノ酸の置換（本明細書で定義）であり；および／または
（ii）前記アミノ酸配列が、上記のアミノ酸配列と比較した場合、好ましくはアミノ酸置換のみを含み、アミノ酸の欠失または挿入を含まず；
および／または：
ＣＤＲ３は、以下からなる群から選択されるアミノ酸配列であり：
ＡＳＶＫＬＶＹＶＮＰＮＲＹＳＹ ［配列番号６６］
ＡＡＧＳＡＷＹＧＴＬＹＥＹＤＹ ［配列番号６７］
ＡＡＧＳＴＷＹＧＴＬＹＥＹＤＹ ［配列番号６８］
ＭＶＧＰＰＰＲＳＬＤＹＧＬＧＮＨＹＥＹＤＹ ［配列番号６９］
ＳＳＴＲＴＶＩＹＴＬＰＲＭＹＮＹ ［配列番号７０］
ＮＳＲＳＳＷＶＩＦＴＩＫＧＱＹＤＲ ［配列番号７１］
ＲＰＧＭＩＩＴＴＩＱＡＴＹＧＦ ［配列番号７２］
ＧＳＰＹＧＴＥＬＰＹＴＲＩＥＱＹＡＹ ［配列番号７３］
ＡＮＥＹＷＶＹＶＮＰＮＲＹＴＹ ［配列番号７４］
ＲＲＫＳＧＥＶＶＦＴＩＰＡＲＹＤＹ ［配列番号７５］
ＶＹＲＶＧＡＩＳＥＹＳＧＴＤＹＹＴＤＥＹＤＹ ［配列番号７６］
ＧＹＱＩＮＳＧＮＹＮＦＫＤＹＥＹＤＹ ［配列番号７７］
ＳＹＮＶＹＹＮＮＹＹＹＰＩＳＲＤＥＹＤＹ ［配列番号７８］
ＨＲＲＰＦＡＳＶＦＴＴＴＲＭＹＤＹ ［配列番号７９］
または、上記アミノ酸配列の1つと、少なくとも８０%、好ましくは少なくとも９０%、より好ましくは少なくとも９５%、さらにより好ましくは少なくとも９９%の配列同一性（本明細書で定義）を有する、アミノ酸配列からなる群から選択されるアミノ酸配列であり、
（i）任意のアミノ酸の置換が、好ましくは保存アミノ酸の置換（本明細書で定義）であり；および／または
（ii）前記アミノ酸配列は、上記のアミノ酸配列と比較した場合、好ましくはアミノ酸の置換のみを含み、アミノ酸の欠失または挿入をを含まず；
および／または、上記アミノ酸配列の１つと、３個、２個または１個のみの「アミノ酸の差違」（本明細書で定義）を有しているアミノ酸配列からなる群から選択されるアミノ酸配列であり：
（i）任意のアミノ酸置換が、好ましくは保存アミノ酸の置換（本明細書で定義）であり；および／または
（ii）前記アミノ酸配列が、上記のアミノ酸配列と比較した場合、好ましくはアミノ酸置換のみを含み、アミノ酸の欠失または挿入を含まない、
ナノボディ。
【請求項２】
分子量１５kDa未満である、ＩＧＦ−IＲに指向性を有するポリペプチド。
【請求項３】
ＩＧＦ−IとＩＧＦ−IＲとの相互作用を阻害することが可能である、請求項２記載のポリペプチド。
【請求項４】
少なくとも１０７M-1の結合親和性でＩＧＦ−IＲに結合する、請求項２または３のいずれかに記載のポリペプチド。
【請求項５】
単一ドメイン抗体、ドメイン抗体、「ｄＡｂ」、ＶＨ、ＶＨＨ、またはナノボディより選択される、請求項２〜４のいずれかに記載のポリペプチド。
【請求項６】
ＩＧＦ−IＲに対するナノボディ。
【請求項７】
４つのフレームワーク領域（それぞれＦＲ１〜ＦＲ４）と、３つの相補性決定領域（それぞれＣＤＲ１〜ＣＤＲ３）とを含み、またはこれらからなる、請求項６記載のナノボディであって：
ＣＤＲ１は、以下からなる群から選択されるアミノ酸配列であり：
ＦＮＡＭＧ ［配列番号９４］
ＩＮＶＭＡ ［配列番号９５］
ＮＹＡＭＧ ［配列番号９６］
ＲＴＡＭＡ ［配列番号９７］
または、上記アミノ酸配列の1つと、少なくとも８０%、好ましくは少なくとも９０%、より好ましくは少なくとも９５%、さらにより好ましくは少なくとも９９%の配列同一性（本明細書で定義）を有する、アミノ酸配列からなる群から選択されるアミノ酸配列であり、
（i）任意のアミノ酸の置換が、好ましくは保存アミノ酸の置換（本明細書で定義）であり；および／または
（ii）前記アミノ酸配列は、上記のアミノ酸配列と比較した場合、好ましくはアミノ酸の置換のみを含み、アミノ酸の欠失または挿入を含まず；
および／または、上記アミノ酸配列の１つと、２個または１個のみの「アミノ酸の差違」（本明細書で定義）を有しているアミノ酸配列からなる群から選択されるアミノ酸配列であり：
（i）任意のアミノ酸置換が、好ましくは保存アミノ酸の置換（本明細書で定義）であり；および／または
（ii）前記アミノ酸配列が、上記のアミノ酸配列と比較した場合、好ましくはアミノ酸置換のみを含み、アミノ酸の欠失または挿入を含まず；
および／または：
ＣＤＲ２は、以下からなる群から選択されるアミノ酸配列であり：
ＶＩＩＳＧＧＳＴＨＹＶＤＳＶＫＧ ［配列番号９８］
ＥＩＴＲＳＧＲＴＮＹＶＤＳＶＫＧ ［配列番号９９］
ＡＩＮＷＮＳＲＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧ ［配列番号１００］
ＴＩＴＷＮＳＧＴＴＲＹＡＤＳＶＫＧ ［配列番号１０１］
または、上記アミノ酸配列の1つと、少なくとも８０%、好ましくは少なくとも９０%、より好ましくは少なくとも９５%、さらにより好ましくは少なくとも９９%の配列同一性（本明細書で定義）を有する、アミノ酸配列からなる群から選択されるアミノ酸配列であり、
（i）任意のアミノ酸の置換が、好ましくは保存アミノ酸の置換（本明細書で定義）であり；および／または
（ii）前記アミノ酸配列は、上記のアミノ酸配列と比較した場合、好ましくはアミノ酸の置換のみを含み、アミノ酸の欠失または挿入をを含まず；
および／または、上記アミノ酸配列の１つと、３個、２個または１個のみの「アミノ酸の差違」（本明細書で定義）を有しているアミノ酸配列からなる群から選択されるアミノ酸配列であり：
（i）任意のアミノ酸置換が、好ましくは保存アミノ酸の置換（本明細書で定義）であり；および／または
（ii）前記アミノ酸配列が、上記のアミノ酸配列と比較した場合、好ましくはアミノ酸置換のみを含み、アミノ酸の欠失または挿入を含まず；
および／または：
ＣＤＲ３は、以下からなる群から選択されるアミノ酸配列であり：
ＫＫＦＧＤＹ ［配列番号１０２］
ＩＤＧＳＷＲＥＹ ［配列番号１０３］
ＳＨＤＳＤＹＧＧＴＮＡＮＬＹＤＹ ［配列番号１０４］
ＴＡＡＡＶＩＴＰＴＲＧＹＹＮＹ ［配列番号１０５］
または、上記アミノ酸配列の1つと、少なくとも８０%、好ましくは少なくとも９０%、より好ましくは少なくとも９５%、さらにより好ましくは少なくとも９９%の配列同一性（本明細書で定義）を有する、アミノ酸配列からなる群から選択されるアミノ酸配列であり、
（i）任意のアミノ酸の置換が、好ましくは保存アミノ酸の置換（本明細書で定義）であり；および／または
（ii）前記アミノ酸配列は、上記のアミノ酸配列と比較した場合、好ましくはアミノ酸の置換のみを含み、アミノ酸の欠失または挿入をを含まず；
および／または、上記アミノ酸配列の１つと、３個、２個または１個のみの「アミノ酸の差違」（本明細書で定義）を有しているアミノ酸配列からなる群から選択されるアミノ酸配列であり：
（i）任意のアミノ酸置換が、好ましくは保存アミノ酸の置換（本明細書で定義）であり；および／または
（ii）前記アミノ酸配列が、上記のアミノ酸配列と比較した場合、好ましくはアミノ酸置換のみを含み、アミノ酸の欠失または挿入を含まない、
ナノボディ。
【請求項８】
下記の工程を含む、請求項６記載のナノボディを得る方法：
ａ）（i）ＩＧＦ−IＲまたはその部分もしくはその断片でラクダ科に属する哺乳類に免疫性を与え、ＩＧＦ−IＲに対する免疫反応および／または抗体（より具体的には重鎖抗体）を向上させる工程；（ii）このようにして免疫性を与えた哺乳類より、ＩＧＦ−IＲに指向性を有する重鎖抗体配列および／またはＶＨＨ配列を含む生体サンプルを得る工程；および（iii）前記生体サンプルより、ＩＧＦ−IＲに指向性を有する重鎖抗体配列および／またはＶＨＨ配列を得る（例えば、単離する）工程を、一般に含む方法によって、および／または（i）ＩＧＦ−IＲまたは少なくともその一部分もしくはその断片に指向性を有する重鎖抗体配列および／またはＶＨＨ配列からなるライブラリーをスクリーニングする工程と、（ii）前記ライブラリーより、ＩＧＦ−IＲに指向性を有する重鎖抗体配列および／またはＶＨＨ配列を得る（例えば、単離する）工程を、一般に含む方法によって、ＩＧＦ−IＲに指向性を有する少なくとも1つのＶＨＨドメインを提供する工程；
ｂ）ＩＧＦ−IＲに対する重鎖抗体配列および／またはＶＨＨ配列の親和性および／または特異性を増大させるために、このようにして得られたＩＧＦ−IＲに対する重鎖抗体配列および／またはＶＨＨ配列を、親和性成熟、突然変異誘発（例、ランダム突然変異誘発または部位特異的突然変異誘発等の）、および／または任意の他の手法に、場合によっては供する工程；
ｃ）このようにして得られた、ＩＧＦ−IＲに対する重鎖抗体配列および／またはＶＨＨ配列のＣＤＲの配列を決定する工程；および
ｄ）少なくとも1つ、好ましくは少なくとも２つ、より好ましくは３つのＣＤＲの全て（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、具体的には、少なくともＣＤＲ３）が、工程ｃ）で決定した配列を有する、ナノボディを提供する工程。
【請求項９】
請求項１または６〜７のいずれかに記載の少なくとも１種類のナノボディ、または請求項２〜５のいずれかに記載の少なくとも１種類のポリペプチド、またはこれらのＥＧＦＲまたはＩＧＦ−IＲ結合性部分もしくは断片を含むポリペプチド。
【請求項１０】
少なくとも２つの結合部位を含み、前記少なくとも２個の結合部位のそれぞれが腫瘍関連抗原またはエピトープに指向性を有するポリペプチド。
【請求項１１】
前記少なくとも２つの結合部位のそれぞれが異なる腫瘍関連抗原に指向性を有する、請求項１０記載のポリペプチド。
【請求項１２】
前記少なくとも２つの結合部位のそれぞれが同一の腫瘍関連抗原上の異なるエピトープに指向性を有する、請求項１０記載のポリペプチド。
【請求項１３】
前記結合部位のうち少なくとも1つが、ＶＨ、ＶＨＨ、ドメイン抗体、単一ドメイン抗体、「ｄＡｂ」またはナノボディから選択される、請求項１０〜１２のいずれかに記載のポリペプチド。
【請求項１４】
前記結合部位のそれぞれがナノボディである、請求項１０〜１３のいずれかに記載のポリペプチド。
【請求項１５】
ＥＧＦＲに対する少なくとも1個のナノボディと、ＨＥＲ２、ＨＥＲ３、およびＨＥＲ４からなる群から選択されるＥＧＦＲファミリーメンバーに対する少なくとも1個のナノボディとを含む、請求項１０記載のポリペプチド。
【請求項１６】
ＥＧＦＲに対する少なくとも1個のナノボディと、ＩＧＦ−IＲに対する少なくとも1個のナノボディとを含む、請求項１０記載のポリペプチド。
【請求項１７】
少なくとも２個のナノボディを含み、前記少なくとも２個のナノボディの1個の結合が、前記少なくとも２個のナノボディのうち第２のものにより該結合を調節するポリペプチド。
【請求項１８】
前記少なくとも２個のナノボディのうち第２のものによる結合が増大する、請求項１７記載のポリペプチド。
【請求項１９】
前記少なくとも２個のナノボディのうち第２のものによる結合が減少する、請求項１７記載のポリペプチド。
【請求項２０】
前記少なくとも２個のナノボディのうち第２のものによる結合が阻害される、請求項１７記載のポリペプチド。
【請求項２１】
請求項１または６〜７のいずれかに記載のナノボディ、もしくは請求項２〜５または９〜２０のいずれかに記載のポリペプチドをコードする核酸。
【請求項２２】
請求項１または６〜７のいずれかに記載のナノボディを発現させ、もしくは請求項２〜５または９〜２０のいずれかに記載のポリペプチドを発現させ、もしくは請求項２１記載の核酸を含む、宿主細胞。
【請求項２３】
請求項１または６〜７のいずれかに記載のナノボディ、もしくは請求項２〜５または９〜２０のいずれかに記載のポリペプチドを調製する方法であって、以下の工程からなる、方法：
適切な宿主細胞、または宿主生物において、もしくは別の適切な請求項２１記載の核酸の発現系における、発現させる工程と、次いで、場合によっては；
このようにして得られたナノボディまたはポリペプチドを単離および／または精製する工程。
【請求項２４】
請求項１または６〜７のいずれかに記載の少なくとも１個のナノボディ、請求項２〜５または９〜２０のいずれかに記載の少なくとも１個のポリペプチド、および／または請求項２１記載の少なくとも１個の核酸を含む組成物。
【請求項２５】
請求項１または６〜７のいずれかに記載の少なくとも１個のナノボディ、請求項２〜５または９〜２０のいずれかに記載の少なくとも１個のポリペプチド、および／または請求項２１記載の少なくとも１個の核酸、および場合によっては少なくとも１種類の医薬的に許容される担体を含む医薬組成物。
【請求項２６】
請求項１または６〜７のいずれかに記載の少なくとも１個のナノボディ、請求項２〜５または９〜２０のいずれかに記載の少なくとも１個のポリペプチド、および／または請求項２１記載の少なくとも１個の核酸、および場合によっては少なくとも１種類の造影剤を含む診断用組成物。
【請求項２７】
予防および／または治療において使用するための、請求項１もしくは６〜７のいずれかに記載のナノボディ、請求項２〜５または９〜２０のいずれかに記載のポリペプチド、請求項２１記載の核酸および／または請求項２５記載の医薬組成物。
【請求項２８】
治療上有効量の請求項１もしくは６〜７のいずれかに記載のナノボディ、請求項２〜５もしくは９〜２０のいずれかに記載のポリペプチド、および／または請求項２５記載の医薬組成物を投与する工程を含む、ＥＧＦＲおよび／またはＩＧＦ−IＲに関連する病気または疾患を予防および／または治療するための方法。
【請求項２９】
前記病気または疾患が、ＥＧＦＲおよび／またはＩＧＦ−IＲの過剰発現に関連するか、またはこれらを特徴とする、請求項２８記載の方法。
【請求項３０】
前記病気または疾患がガンまたは腫瘍である、請求項２９記載の方法。
【請求項３１】
前記病気または疾患が炎症過程に関連する、請求項２８記載の方法。
【請求項３２】
前記病気または疾患が、関節リウマチ、乾癬、または肺における粘液分泌過多である請求項３１記載の方法。
【請求項３３】
請求項１記載のナノボディ、または請求項９〜２０のいずれかに記載のポリペプチド、または請求項２５記載の医薬組成物を投与する工程を含む、ＥＧＦとＥＧＦＲの間の相互作用を阻害する方法。
【請求項３４】
請求項６〜７のいずれかに記載のナノボディ、請求項２〜５あるいは９〜２０のいずれかに記載のポリペプチド、または請求項２５記載の医薬組成物を投与する工程を含む、抗ＥＧＦＲ治療を強化する方法。
【請求項３５】
ＥＧＦＲおよび／またはＩＧＦ−IＲに関連する病気または疾患を診断する方法であって、以下の工程からなる、方法：
（ａ）サンプルを、請求項１または６〜７のいずれかに記載のナノボディ、もしくは請求項２〜５または９〜２０のいずれかに記載のポリペプチドと接触させる工程、
（ｂ）前記ナノボディまたはポリペプチドと、前記サンプルとの結合を検出する工程、および
（ｃ）前記サンプルと比べて結合の差が、ＥＧＦＲおよび／またはＩＧＦ−IＲのそれぞれと関連する病気または疾患の診断に役立つ標準と、工程（ｂ）において検出した結合とを比較する工程。
【請求項３６】
請求項１または６〜７のいずれかに記載のナノボディ、請求項２〜５または９〜２０のいずれかに記載のポリペプチド、または請求項２６記載の診断用組成物を投与する工程を含む、ＥＧＦＲまたはＩＧＦ−IＲ標的をイメージングする方法。
【請求項３７】
ガン、腫瘍、炎症過程に関連する疾患、関節リウマチ、乾癬、または肺における粘液分泌過多を治療するための薬剤を調製するための、請求項１または６〜７のいずれかに記載のナノボディ、請求項２〜５または９〜２０のいずれかに記載のポリペプチドの使用。
【請求項１】
４つのフレームワーク領域（それぞれＦＲ１〜ＦＲ４）と、３つの相補性決定領域（それぞれＣＤＲ１〜ＣＤＲ３）とを含む、またはこれらからなる、ＥＧＦＲに対するナノボディであって：
ＣＤＲ１は、以下からなる群から選択されるアミノ酸配列であり：
ＴＹＴＭＡ ［配列番号４２］
ＳＹＧＭＧ ［配列番号４３］
ＧＦＡＭＧ ［配列番号４４］
ＳＮＮＭＧ ［配列番号４５］
ＧＤＶＭＧ ［配列番号４６］
ＳＹＶＶＧ ［配列番号４７］
ＤＹＮＭＡ ［配列番号４８］
ＴＹＴＭＡ ［配列番号４９］
ＮＮＡＭＡ ［配列番号５０］
ＳＹＶＭＧ ［配列番号５１］
ＳＹＡＭＧ ［配列番号５２］
Ａ ［配列番号５３］
または、上記アミノ酸配列の1つと、少なくとも８０%、好ましくは少なくとも９０%、より好ましくは少なくとも９５%、さらにより好ましくは少なくとも９９%の配列同一性（本明細書で定義）を有する、アミノ酸配列からなる群から選択されるアミノ酸配列であり、
（i）任意のアミノ酸の置換が、好ましくは保存アミノ酸の置換（本明細書で定義）であり；および／または
（ii）前記アミノ酸配列は、上記のアミノ酸配列と比較した場合、好ましくはアミノ酸の置換のみを含み、アミノ酸の欠失または挿入をを含まず；
および／または、上記アミノ酸配列の１つと、２個または１個のみの「アミノ酸の差違」（本明細書で定義）を有しているアミノ酸配列からなる群から選択されるアミノ酸配列であり：
（i）任意のアミノ酸置換が、好ましくは保存アミノ酸の置換（本明細書で定義）であり；および／または
（ii）前記アミノ酸配列が、上記のアミノ酸配列と比較した場合、好ましくはアミノ酸置換のみを含み、アミノ酸の欠失または挿入を含まず；
および／または：
ＣＤＲ２は、以下からなる群から選択されるアミノ酸配列であり：
ＧＩＳＲＳＤＧＧＴＹＤＡＤＳＶＫＧ ［配列番号５４］
ＧＩＳＷＲＧＤＳＴＧＹＡＤＳＶＫＧ ［配列番号５５］
ＡＩＳＷＳＧＧＳＬＬＹＶＤＳＶＫＧ ［配列番号５６］
ＡＩＧＷＧＧＬＥＴＨＹＳＤＳＶＫＧ ［配列番号５７］
ＧＦＳＲＳＴＳＴＴＨＹＡＤＳＶＫＧ ［配列番号５８］
ＧＩＡＷＧＤＧＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧ ［配列番号５９］
ＨＩＳＷＬＧＧＲＴＹＹＲＤＳＶＫＧ ［配列番号６０］
ＧＦＳＧＳＧＧＡＴＹＹＡＨＳＶＥＧ ［配列番号６１］
ＡＩＳＷＲＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧ ［配列番号６２］
ＡＩＮＷＳＳＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧ ［配列番号６３］
ＴＩＡＷＤＳＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧ ［配列番号６４］
ＧＬＳＷＳＡＤＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧ ［配列番号６５］
または、上記アミノ酸配列の1つと、少なくとも８０%、好ましくは少なくとも９０%、より好ましくは少なくとも９５%、さらにより好ましくは少なくとも９９%の配列同一性（本明細書で定義）を有する、アミノ酸配列からなる群から選択されるアミノ酸配列であり、
（i）任意のアミノ酸の置換が、好ましくは保存アミノ酸の置換（本明細書で定義）であり；および／または
（ii）前記アミノ酸配列は、上記のアミノ酸配列と比較した場合、好ましくはアミノ酸の置換のみを含み、アミノ酸の欠失または挿入をを含まず；
および／または、上記アミノ酸配列の１つと、３個、２個または１個のみの「アミノ酸の差違」（本明細書で定義）を有しているアミノ酸配列からなる群から選択されるアミノ酸配列であり：
（i）任意のアミノ酸置換が、好ましくは保存アミノ酸の置換（本明細書で定義）であり；および／または
（ii）前記アミノ酸配列が、上記のアミノ酸配列と比較した場合、好ましくはアミノ酸置換のみを含み、アミノ酸の欠失または挿入を含まず；
および／または：
ＣＤＲ３は、以下からなる群から選択されるアミノ酸配列であり：
ＡＳＶＫＬＶＹＶＮＰＮＲＹＳＹ ［配列番号６６］
ＡＡＧＳＡＷＹＧＴＬＹＥＹＤＹ ［配列番号６７］
ＡＡＧＳＴＷＹＧＴＬＹＥＹＤＹ ［配列番号６８］
ＭＶＧＰＰＰＲＳＬＤＹＧＬＧＮＨＹＥＹＤＹ ［配列番号６９］
ＳＳＴＲＴＶＩＹＴＬＰＲＭＹＮＹ ［配列番号７０］
ＮＳＲＳＳＷＶＩＦＴＩＫＧＱＹＤＲ ［配列番号７１］
ＲＰＧＭＩＩＴＴＩＱＡＴＹＧＦ ［配列番号７２］
ＧＳＰＹＧＴＥＬＰＹＴＲＩＥＱＹＡＹ ［配列番号７３］
ＡＮＥＹＷＶＹＶＮＰＮＲＹＴＹ ［配列番号７４］
ＲＲＫＳＧＥＶＶＦＴＩＰＡＲＹＤＹ ［配列番号７５］
ＶＹＲＶＧＡＩＳＥＹＳＧＴＤＹＹＴＤＥＹＤＹ ［配列番号７６］
ＧＹＱＩＮＳＧＮＹＮＦＫＤＹＥＹＤＹ ［配列番号７７］
ＳＹＮＶＹＹＮＮＹＹＹＰＩＳＲＤＥＹＤＹ ［配列番号７８］
ＨＲＲＰＦＡＳＶＦＴＴＴＲＭＹＤＹ ［配列番号７９］
または、上記アミノ酸配列の1つと、少なくとも８０%、好ましくは少なくとも９０%、より好ましくは少なくとも９５%、さらにより好ましくは少なくとも９９%の配列同一性（本明細書で定義）を有する、アミノ酸配列からなる群から選択されるアミノ酸配列であり、
（i）任意のアミノ酸の置換が、好ましくは保存アミノ酸の置換（本明細書で定義）であり；および／または
（ii）前記アミノ酸配列は、上記のアミノ酸配列と比較した場合、好ましくはアミノ酸の置換のみを含み、アミノ酸の欠失または挿入をを含まず；
および／または、上記アミノ酸配列の１つと、３個、２個または１個のみの「アミノ酸の差違」（本明細書で定義）を有しているアミノ酸配列からなる群から選択されるアミノ酸配列であり：
（i）任意のアミノ酸置換が、好ましくは保存アミノ酸の置換（本明細書で定義）であり；および／または
（ii）前記アミノ酸配列が、上記のアミノ酸配列と比較した場合、好ましくはアミノ酸置換のみを含み、アミノ酸の欠失または挿入を含まない、
ナノボディ。
【請求項２】
分子量１５kDa未満である、ＩＧＦ−IＲに指向性を有するポリペプチド。
【請求項３】
ＩＧＦ−IとＩＧＦ−IＲとの相互作用を阻害することが可能である、請求項２記載のポリペプチド。
【請求項４】
少なくとも１０７M-1の結合親和性でＩＧＦ−IＲに結合する、請求項２または３のいずれかに記載のポリペプチド。
【請求項５】
単一ドメイン抗体、ドメイン抗体、「ｄＡｂ」、ＶＨ、ＶＨＨ、またはナノボディより選択される、請求項２〜４のいずれかに記載のポリペプチド。
【請求項６】
ＩＧＦ−IＲに対するナノボディ。
【請求項７】
４つのフレームワーク領域（それぞれＦＲ１〜ＦＲ４）と、３つの相補性決定領域（それぞれＣＤＲ１〜ＣＤＲ３）とを含み、またはこれらからなる、請求項６記載のナノボディであって：
ＣＤＲ１は、以下からなる群から選択されるアミノ酸配列であり：
ＦＮＡＭＧ ［配列番号９４］
ＩＮＶＭＡ ［配列番号９５］
ＮＹＡＭＧ ［配列番号９６］
ＲＴＡＭＡ ［配列番号９７］
または、上記アミノ酸配列の1つと、少なくとも８０%、好ましくは少なくとも９０%、より好ましくは少なくとも９５%、さらにより好ましくは少なくとも９９%の配列同一性（本明細書で定義）を有する、アミノ酸配列からなる群から選択されるアミノ酸配列であり、
（i）任意のアミノ酸の置換が、好ましくは保存アミノ酸の置換（本明細書で定義）であり；および／または
（ii）前記アミノ酸配列は、上記のアミノ酸配列と比較した場合、好ましくはアミノ酸の置換のみを含み、アミノ酸の欠失または挿入を含まず；
および／または、上記アミノ酸配列の１つと、２個または１個のみの「アミノ酸の差違」（本明細書で定義）を有しているアミノ酸配列からなる群から選択されるアミノ酸配列であり：
（i）任意のアミノ酸置換が、好ましくは保存アミノ酸の置換（本明細書で定義）であり；および／または
（ii）前記アミノ酸配列が、上記のアミノ酸配列と比較した場合、好ましくはアミノ酸置換のみを含み、アミノ酸の欠失または挿入を含まず；
および／または：
ＣＤＲ２は、以下からなる群から選択されるアミノ酸配列であり：
ＶＩＩＳＧＧＳＴＨＹＶＤＳＶＫＧ ［配列番号９８］
ＥＩＴＲＳＧＲＴＮＹＶＤＳＶＫＧ ［配列番号９９］
ＡＩＮＷＮＳＲＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧ ［配列番号１００］
ＴＩＴＷＮＳＧＴＴＲＹＡＤＳＶＫＧ ［配列番号１０１］
または、上記アミノ酸配列の1つと、少なくとも８０%、好ましくは少なくとも９０%、より好ましくは少なくとも９５%、さらにより好ましくは少なくとも９９%の配列同一性（本明細書で定義）を有する、アミノ酸配列からなる群から選択されるアミノ酸配列であり、
（i）任意のアミノ酸の置換が、好ましくは保存アミノ酸の置換（本明細書で定義）であり；および／または
（ii）前記アミノ酸配列は、上記のアミノ酸配列と比較した場合、好ましくはアミノ酸の置換のみを含み、アミノ酸の欠失または挿入をを含まず；
および／または、上記アミノ酸配列の１つと、３個、２個または１個のみの「アミノ酸の差違」（本明細書で定義）を有しているアミノ酸配列からなる群から選択されるアミノ酸配列であり：
（i）任意のアミノ酸置換が、好ましくは保存アミノ酸の置換（本明細書で定義）であり；および／または
（ii）前記アミノ酸配列が、上記のアミノ酸配列と比較した場合、好ましくはアミノ酸置換のみを含み、アミノ酸の欠失または挿入を含まず；
および／または：
ＣＤＲ３は、以下からなる群から選択されるアミノ酸配列であり：
ＫＫＦＧＤＹ ［配列番号１０２］
ＩＤＧＳＷＲＥＹ ［配列番号１０３］
ＳＨＤＳＤＹＧＧＴＮＡＮＬＹＤＹ ［配列番号１０４］
ＴＡＡＡＶＩＴＰＴＲＧＹＹＮＹ ［配列番号１０５］
または、上記アミノ酸配列の1つと、少なくとも８０%、好ましくは少なくとも９０%、より好ましくは少なくとも９５%、さらにより好ましくは少なくとも９９%の配列同一性（本明細書で定義）を有する、アミノ酸配列からなる群から選択されるアミノ酸配列であり、
（i）任意のアミノ酸の置換が、好ましくは保存アミノ酸の置換（本明細書で定義）であり；および／または
（ii）前記アミノ酸配列は、上記のアミノ酸配列と比較した場合、好ましくはアミノ酸の置換のみを含み、アミノ酸の欠失または挿入をを含まず；
および／または、上記アミノ酸配列の１つと、３個、２個または１個のみの「アミノ酸の差違」（本明細書で定義）を有しているアミノ酸配列からなる群から選択されるアミノ酸配列であり：
（i）任意のアミノ酸置換が、好ましくは保存アミノ酸の置換（本明細書で定義）であり；および／または
（ii）前記アミノ酸配列が、上記のアミノ酸配列と比較した場合、好ましくはアミノ酸置換のみを含み、アミノ酸の欠失または挿入を含まない、
ナノボディ。
【請求項８】
下記の工程を含む、請求項６記載のナノボディを得る方法：
ａ）（i）ＩＧＦ−IＲまたはその部分もしくはその断片でラクダ科に属する哺乳類に免疫性を与え、ＩＧＦ−IＲに対する免疫反応および／または抗体（より具体的には重鎖抗体）を向上させる工程；（ii）このようにして免疫性を与えた哺乳類より、ＩＧＦ−IＲに指向性を有する重鎖抗体配列および／またはＶＨＨ配列を含む生体サンプルを得る工程；および（iii）前記生体サンプルより、ＩＧＦ−IＲに指向性を有する重鎖抗体配列および／またはＶＨＨ配列を得る（例えば、単離する）工程を、一般に含む方法によって、および／または（i）ＩＧＦ−IＲまたは少なくともその一部分もしくはその断片に指向性を有する重鎖抗体配列および／またはＶＨＨ配列からなるライブラリーをスクリーニングする工程と、（ii）前記ライブラリーより、ＩＧＦ−IＲに指向性を有する重鎖抗体配列および／またはＶＨＨ配列を得る（例えば、単離する）工程を、一般に含む方法によって、ＩＧＦ−IＲに指向性を有する少なくとも1つのＶＨＨドメインを提供する工程；
ｂ）ＩＧＦ−IＲに対する重鎖抗体配列および／またはＶＨＨ配列の親和性および／または特異性を増大させるために、このようにして得られたＩＧＦ−IＲに対する重鎖抗体配列および／またはＶＨＨ配列を、親和性成熟、突然変異誘発（例、ランダム突然変異誘発または部位特異的突然変異誘発等の）、および／または任意の他の手法に、場合によっては供する工程；
ｃ）このようにして得られた、ＩＧＦ−IＲに対する重鎖抗体配列および／またはＶＨＨ配列のＣＤＲの配列を決定する工程；および
ｄ）少なくとも1つ、好ましくは少なくとも２つ、より好ましくは３つのＣＤＲの全て（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、具体的には、少なくともＣＤＲ３）が、工程ｃ）で決定した配列を有する、ナノボディを提供する工程。
【請求項９】
請求項１または６〜７のいずれかに記載の少なくとも１種類のナノボディ、または請求項２〜５のいずれかに記載の少なくとも１種類のポリペプチド、またはこれらのＥＧＦＲまたはＩＧＦ−IＲ結合性部分もしくは断片を含むポリペプチド。
【請求項１０】
少なくとも２つの結合部位を含み、前記少なくとも２個の結合部位のそれぞれが腫瘍関連抗原またはエピトープに指向性を有するポリペプチド。
【請求項１１】
前記少なくとも２つの結合部位のそれぞれが異なる腫瘍関連抗原に指向性を有する、請求項１０記載のポリペプチド。
【請求項１２】
前記少なくとも２つの結合部位のそれぞれが同一の腫瘍関連抗原上の異なるエピトープに指向性を有する、請求項１０記載のポリペプチド。
【請求項１３】
前記結合部位のうち少なくとも1つが、ＶＨ、ＶＨＨ、ドメイン抗体、単一ドメイン抗体、「ｄＡｂ」またはナノボディから選択される、請求項１０〜１２のいずれかに記載のポリペプチド。
【請求項１４】
前記結合部位のそれぞれがナノボディである、請求項１０〜１３のいずれかに記載のポリペプチド。
【請求項１５】
ＥＧＦＲに対する少なくとも1個のナノボディと、ＨＥＲ２、ＨＥＲ３、およびＨＥＲ４からなる群から選択されるＥＧＦＲファミリーメンバーに対する少なくとも1個のナノボディとを含む、請求項１０記載のポリペプチド。
【請求項１６】
ＥＧＦＲに対する少なくとも1個のナノボディと、ＩＧＦ−IＲに対する少なくとも1個のナノボディとを含む、請求項１０記載のポリペプチド。
【請求項１７】
少なくとも２個のナノボディを含み、前記少なくとも２個のナノボディの1個の結合が、前記少なくとも２個のナノボディのうち第２のものにより該結合を調節するポリペプチド。
【請求項１８】
前記少なくとも２個のナノボディのうち第２のものによる結合が増大する、請求項１７記載のポリペプチド。
【請求項１９】
前記少なくとも２個のナノボディのうち第２のものによる結合が減少する、請求項１７記載のポリペプチド。
【請求項２０】
前記少なくとも２個のナノボディのうち第２のものによる結合が阻害される、請求項１７記載のポリペプチド。
【請求項２１】
請求項１または６〜７のいずれかに記載のナノボディ、もしくは請求項２〜５または９〜２０のいずれかに記載のポリペプチドをコードする核酸。
【請求項２２】
請求項１または６〜７のいずれかに記載のナノボディを発現させ、もしくは請求項２〜５または９〜２０のいずれかに記載のポリペプチドを発現させ、もしくは請求項２１記載の核酸を含む、宿主細胞。
【請求項２３】
請求項１または６〜７のいずれかに記載のナノボディ、もしくは請求項２〜５または９〜２０のいずれかに記載のポリペプチドを調製する方法であって、以下の工程からなる、方法：
適切な宿主細胞、または宿主生物において、もしくは別の適切な請求項２１記載の核酸の発現系における、発現させる工程と、次いで、場合によっては；
このようにして得られたナノボディまたはポリペプチドを単離および／または精製する工程。
【請求項２４】
請求項１または６〜７のいずれかに記載の少なくとも１個のナノボディ、請求項２〜５または９〜２０のいずれかに記載の少なくとも１個のポリペプチド、および／または請求項２１記載の少なくとも１個の核酸を含む組成物。
【請求項２５】
請求項１または６〜７のいずれかに記載の少なくとも１個のナノボディ、請求項２〜５または９〜２０のいずれかに記載の少なくとも１個のポリペプチド、および／または請求項２１記載の少なくとも１個の核酸、および場合によっては少なくとも１種類の医薬的に許容される担体を含む医薬組成物。
【請求項２６】
請求項１または６〜７のいずれかに記載の少なくとも１個のナノボディ、請求項２〜５または９〜２０のいずれかに記載の少なくとも１個のポリペプチド、および／または請求項２１記載の少なくとも１個の核酸、および場合によっては少なくとも１種類の造影剤を含む診断用組成物。
【請求項２７】
予防および／または治療において使用するための、請求項１もしくは６〜７のいずれかに記載のナノボディ、請求項２〜５または９〜２０のいずれかに記載のポリペプチド、請求項２１記載の核酸および／または請求項２５記載の医薬組成物。
【請求項２８】
治療上有効量の請求項１もしくは６〜７のいずれかに記載のナノボディ、請求項２〜５もしくは９〜２０のいずれかに記載のポリペプチド、および／または請求項２５記載の医薬組成物を投与する工程を含む、ＥＧＦＲおよび／またはＩＧＦ−IＲに関連する病気または疾患を予防および／または治療するための方法。
【請求項２９】
前記病気または疾患が、ＥＧＦＲおよび／またはＩＧＦ−IＲの過剰発現に関連するか、またはこれらを特徴とする、請求項２８記載の方法。
【請求項３０】
前記病気または疾患がガンまたは腫瘍である、請求項２９記載の方法。
【請求項３１】
前記病気または疾患が炎症過程に関連する、請求項２８記載の方法。
【請求項３２】
前記病気または疾患が、関節リウマチ、乾癬、または肺における粘液分泌過多である請求項３１記載の方法。
【請求項３３】
請求項１記載のナノボディ、または請求項９〜２０のいずれかに記載のポリペプチド、または請求項２５記載の医薬組成物を投与する工程を含む、ＥＧＦとＥＧＦＲの間の相互作用を阻害する方法。
【請求項３４】
請求項６〜７のいずれかに記載のナノボディ、請求項２〜５あるいは９〜２０のいずれかに記載のポリペプチド、または請求項２５記載の医薬組成物を投与する工程を含む、抗ＥＧＦＲ治療を強化する方法。
【請求項３５】
ＥＧＦＲおよび／またはＩＧＦ−IＲに関連する病気または疾患を診断する方法であって、以下の工程からなる、方法：
（ａ）サンプルを、請求項１または６〜７のいずれかに記載のナノボディ、もしくは請求項２〜５または９〜２０のいずれかに記載のポリペプチドと接触させる工程、
（ｂ）前記ナノボディまたはポリペプチドと、前記サンプルとの結合を検出する工程、および
（ｃ）前記サンプルと比べて結合の差が、ＥＧＦＲおよび／またはＩＧＦ−IＲのそれぞれと関連する病気または疾患の診断に役立つ標準と、工程（ｂ）において検出した結合とを比較する工程。
【請求項３６】
請求項１または６〜７のいずれかに記載のナノボディ、請求項２〜５または９〜２０のいずれかに記載のポリペプチド、または請求項２６記載の診断用組成物を投与する工程を含む、ＥＧＦＲまたはＩＧＦ−IＲ標的をイメージングする方法。
【請求項３７】
ガン、腫瘍、炎症過程に関連する疾患、関節リウマチ、乾癬、または肺における粘液分泌過多を治療するための薬剤を調製するための、請求項１または６〜７のいずれかに記載のナノボディ、請求項２〜５または９〜２０のいずれかに記載のポリペプチドの使用。
【図４】
【図８Ａ】
【図８Ｂ】
【図８Ｃ】
【図８Ｄ】
【図８Ｅ】
【図１２】
【図１】
【図２】
【図３】
【図５】
【図６】
【図７】
【図９】
【図１０Ａ】
【図１０Ｂ】
【図１１Ａ】
【図１１Ｂ】
【図１３】
【図１４】
【図８Ａ】
【図８Ｂ】
【図８Ｃ】
【図８Ｄ】
【図８Ｅ】
【図１２】
【図１】
【図２】
【図３】
【図５】
【図６】
【図７】
【図９】
【図１０Ａ】
【図１０Ｂ】
【図１１Ａ】
【図１１Ｂ】
【図１３】
【図１４】
【公表番号】特表２００９−５１１０３２（Ｐ２００９−５１１０３２Ａ）
【公表日】平成２１年３月１９日（２００９．３．１９）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００８−５３４９３３（Ｐ２００８−５３４９３３）
【出願日】平成１８年１０月１１日（２００６．１０．１１）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２００６／００９８４０
【国際公開番号】ＷＯ２００７／０４２２８９
【国際公開日】平成１９年４月１９日（２００７．４．１９）
【出願人】（５０５１６６２２５）アブリンクス エン．ヴェー． (28)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２１年３月１９日（２００９．３．１９）
【国際特許分類】
【出願日】平成１８年１０月１１日（２００６．１０．１１）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２００６／００９８４０
【国際公開番号】ＷＯ２００７／０４２２８９
【国際公開日】平成１９年４月１９日（２００７．４．１９）
【出願人】（５０５１６６２２５）アブリンクス エン．ヴェー． (28)
【Ｆターム（参考）】
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