【課題】サイトカイン様組成物に対する類似性を示すリガンドについての新たなレセプターおよび関連する化合物、ならびにそれらの使用のための方法を提供すること。
【解決手段】哺乳類（例えば、霊長類）のレセプター、精製されたレセプタータンパク質およびそのフラグメント、をコードする核酸が提供される。抗体（ポリクローナル抗体およびモノクローナル抗体の両方）もまた、提供される。診断用途および治療用途の両方のために組成物を使用する方法が、記載される。１つの実施形態において、本発明は、サイトカインレセプターに関連した新規レセプターおよびそれらの生物学的活性に関し、特に、本発明は、ＤＣＲＳ５（別名ＩＬ−２３Ｒ）と称される１つのサブユニットの説明を提供する。

【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、２００１年５月１０日に出願された出願番号０９／８５３，１８０（これは、２０００年５月１０日に出願された米国仮特許出願番号６０／２０３，４２６の利益を主張する）の分割出願である、２００３年９月１８日に出願された同一出願人による同時係属の出願番号１０／６６７，２９０の一部継続出願である。その各々は、本明細書中でその全体が参考として援用される。
【０００２】
（発明の分野）
本発明は、哺乳動物の生理機能（免疫系の機能を含む）に影響を与える、組成物および方法に関する。特に、本発明は、発生および／または免疫系を調節する方法を提供する。これらの物質の診断的使用および治療的使用もまた開示される。
【背景技術】
【０００３】
組換えＤＮＡ技術とは一般に、ドナー供給源由来の遺伝情報を（例えば、宿主への導入を通して）その後の処理のためにベクター中に組み込み、それにより、移入された遺伝情報が新たな環境においてコピーおよび／または発現される技術をいう。通常、遺伝情報は、所望のタンパク質産物をコードするメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）から誘導された相補的なＤＮＡ（ｃＤＮＡ）の形態で存在する。キャリアは頻繁に、後の複製のためのｃＤＮＡを宿主中に組み込み、そしていくつかの場合には実際にこのｃＤＮＡの発現を制御し、そしてそれによって宿主におけるコード産物の合成を誘導する能力を有する、プラスミドである。例えば、非特許文献１を参照のこと。
【０００４】
かなり長い間、哺乳動物の免疫応答が、「免疫ネットワーク」と呼ばれる、一連の複雑な細胞性相互作用に基づくことが知られている。近年の研究は、このネットワークの内部の活動に新たな洞察を提供した。免疫応答の多くは実際に、リンパ球、マクロファージ、顆粒球および他の細胞のネットワーク様相互作用の周囲を廻ることが明らかなままであるが、免疫学者は現在一般に、リンホカイン、サイトカインまたはモノカインとして公知の可溶性タンパク質が、これらの細胞相互作用を制御する際に重要な役割を果たすという見解を支持する。従って、細胞調節因子の単離、特徴付けおよび作用機構にかなりの興味が存在し、その理解は、多数の医学的異常（例えば、免疫系の障害）の診断および治療において著しい進歩を導く。
【０００５】
リンホカインは明らかに、細胞活性を種々の方法で媒介する。例えば、非特許文献２；および非特許文献３を参照のこと。これらは、多能性造血幹細胞の増殖（ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ）、成長（ｇｒｏｗｔｈ）および／または複雑な免疫系を構成する多様な細胞系統を含む莫大な数の子孫への分化を支持することが示された。健常な免疫応答のためには、細胞性成分間の適切かつバランスのとれた相互作用が必要である。リンホカインが他の薬剤と組み合わせて投与された場合、異なる細胞系統はしばしば、異なる様式で応答する。
【０００６】
免疫応答に特に重要である細胞系統としては、以下の２つのクラスのリンパ球が挙げられる：Ｂ細胞（これは、免疫グロブリン（異物を認識して結合し、その除去をもたらす能力を有するタンパク質）を産生および分泌し得る）、および種々のサブセットのＴ細胞（リンホカインを分泌し、そして免疫ネットワークを構成するＢ細胞および種々の他の細胞（他のＴ細胞を含む）を誘導または抑制する）。これらのリンパ球は、他の多くの細胞型と相互作用する。
【０００７】
種々の免疫障害をより良く理解し、そして処置するための研究は、免疫系の細胞をインビトロで維持することが通常できないことによって妨げられている。免疫学者は、これらの細胞の多くを培養することが、Ｔ細胞および他の細胞の上清（これは、多くのリンホカインを含めて、種々の増殖因子を含む）の使用を通して達成され得ることを見出した。
形態形成発生を調節する種々の増殖因子および調節因子が存在する。サイトカインについての多くのレセプターが公知である。しばしば、機能的レセプターには少なくとも２つの重要なサブユニットが存在する。例えば、非特許文献４；非特許文献５；非特許文献６；非特許文献７；非特許文献８；ならびに非特許文献９を参照のこと。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】Ｓａｍｂｒｏｏｋら，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、第２版、ＣＳＨ Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ、１９８９年、第１巻〜第３巻
【非特許文献２】Ｐａｕｌ編、Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、第３版、Ｒａｖｅｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、１９９６年
【非特許文献３】Ｔｈｏｍｓｏｎ編、Ｔｈｅ Ｃｙｔｏｋｉｎｅ Ｈａｎｄｂｏｏｋ、第２版、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ， Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、１９９４年
【非特許文献４】Ｈｅｉｎｒｉｃｈら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．１９９８年、第３３４巻、ｐ．２９７−３１４
【非特許文献５】ＧｏｎｄａおよびＤ’Ａｎｄｒｅａ、Ｂｌｏｏｄ １９９７年、第８９巻、ｐ．３５５−３６９
【非特許文献６】Ｐｒｅｓｋｙら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１９９６年、第９３巻、ｐ．１４００２−１４００７
【非特許文献７】ＤｒａｃｈｍａｎおよびＫａｕｓｈａｎｓｋｙ、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｈｅｍａｔｏｌ．１９９５年、第２巻、ｐ．２２−２８
【非特許文献８】Ｔｈｅｚｅ、Ｅｕｒ．Ｃｙｔｏｋｉｎｅ Ｎｅｔｗ．１９９４年、第５巻、ｐ．３５３−３６８
【非特許文献９】ＬｅｍｍｏｎおよびＳｃｈｌｅｓｓｉｎｇｅｒ、Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｃｉ．１９９４年、第１９巻、ｐ．４５９−４６３
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
前述のことから、新たな可溶性タンパク質およびそれらのレセプター（リンホカインに類似する可溶性タンパク質を含む）の発見および開発が、例えば、免疫系および／または造血細胞の発生、分化または機能を直接的または間接的に含む、広範な変性状態または異常状態のための新たな治療に寄与するはずであることが明らかである。特に、他のリンホカインの有益な活性を増強または強化するリンホカイン様分子に対する新規レセプターの発見および理解は、非常に有利である。本発明は、サイトカイン様組成物に対する類似性を示すリガンドについての新たなレセプターおよび関連する化合物、ならびにそれらの使用のための方法を提供する。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
（発明の要旨）
本発明は、サイトカインレセプターに関連した新規レセプター（例えば、ＤＮＡＸサイトカインレセプターサブユニット（ＤＣＲＳ）と称される、霊長類のサイトカインレセプター様分子構造体）およびそれらの生物学的活性に関する。特に、本発明は、ＤＣＲＳ５（別名ＩＬ−２３Ｒ）と称される１つのサブユニットの説明を提供する。本発明は、ポリペプチド自体をコードする核酸、ならびにそれらの産生および使用のための方法を包含する。本発明の核酸は、本明細書中に含まれるクローニングされた相補的なＤＮＡ（ｃＤＮＡ）配列へのそれらの相同性によって部分的に特徴付けられる。さらに、本発明は、レセプターサブユニットＤＣＲＳ５およびＩＬ−１２Ｒβ１とｐ４０／ｐ１９リガンドとの適合を提供し、この対形成は、アゴニストおよびアンタゴニストに対する試薬に基づいた、アゴニストおよびアンタゴニストの使用のための指標の洞察を提供する。
【００１１】
本発明は、配列番号２の細胞内部分の少なくとも１０個連続したアミノ酸を含む実質的に純粋なまたは組換えポリペプチドを提供する。特定の実施形態では、このポリペプチドは以下である：配列番号２の細胞内部分の少なくとも２５個連続したアミノ酸を含む；配列番号２の細胞内部分を含む組換え体である；配列番号２の非細胞内部分の少なくとも１０個連続したアミノ酸をさらに含む；配列番号２の細胞外部分の少なくとも２５個のアミノ酸を含む；成熟した配列番号２を含む；または実質的に純粋な天然ポリペプチドである。他では、この組換えポリペプチドは以下である：配列番号２の成熟配列からなる；非グリコシル化ポリペプチドである；ヒト由来である；配列番号２の少なくとも４０個連続したアミノ酸を含む；配列番号２の少なくとも１５個連続したアミノ酸の少なくとも３個の非重複セグメントを示す；配列番号２の天然の多型改変体である；少なくとも約３０アミノ酸の長さを有する；霊長類ＤＣＲＳ５に特異的である少なくとも２個の非重複エピトープを示す；天然グリコシル化状態で少なくとも３０ｋＤの分子量を有する；合成ポリペプチドである；無菌形態にある；水溶液もしくは緩衝化溶液中に存在する；固体基材に結合している；別の化学的部分に結合している；またはＩＬ−１２Ｒβ１ポリペプチドと物理的に会合している。
【００１２】
本発明の他の実施形態は、以下を提供する：配列番号２の細胞内部分の少なくとも１２個連続したアミノ酸を含む、実質的に純粋なもしくは組換えポリペプチド；または成熟した配列番号２を含む、実質的に純粋な天然配列ポリペプチド。特定の形態では、配列番号２の細胞内部分の少なくとも６個連続したアミノ酸の少なくとも２個の別個の非重複セグメントを含むポリペプチドは、ここで、別個の非重複セグメントは：第一の少なくとも１２個のアミノ酸を含む；第一の少なくとも７個のアミノ酸および第二の少なくとも９個のアミノ酸を含む；少なくとも６個のアミノ酸の第三の別個のセグメントを含む；またはＲ３５５−Ｌ３７３、Ｐ３７８−Ｌ４０５、Ｖ４０７−Ｄ４２６、Ｋ４２８−Ｄ４３９、Ｐ４４１−Ｖ４５２、Ｉ４５４−Ｇ４６０、Ｉ４６５−Ｔ５８７もしくはＮ５９２−６０６のうちの１つを含む：あるいはこのポリペプチドが、配列番号２の細胞外部分の少なくとも６個連続したアミノ酸の少なくとも２個の別個の非重複セグメントをさらに含む。あるいは、配列番号２の細胞内部分の少なくとも１２個連続したアミノ酸を含むポリペプチドは、以下のポリペプチドである：少なくとも１２個連続したアミノ酸セグメントが、Ｒ３５５−Ｌ３７３、Ｐ３７８−Ｌ４０５、Ｖ４０７−Ｄ４２６、Ｋ４２８−Ｄ４３９、Ｐ４４１−Ｖ４５２、Ｉ４５４−Ｇ４６０、Ｉ４６５−Ｔ５８７もしくはＮ５９２−６０６のうちの１つを含む；またはこのポリペプチドが、配列番号２の細胞外部分の少なくとも６個連続したアミノ酸の少なくとも２個の別個の非重複セグメントをさらに含む。または、成熟した配列番号２を含む、純粋な天然配列ポリペプチドは、精製エピトープまたは検出エピトープをさらに含み得る。このようなポリペプチドは以下であり得る：配列番号２の成熟配列からなる；非グリコシル化ポリペプチドである；ヒト由来である；配列番号２の少なくとも４０個連続したアミノ酸を含む；配列番号２の少なくとも１５個連続したアミノ酸の少なくとも３個の非重複セグメントを示す；配列番号２の天然の多型改変体である；少なくとも約３０アミノ酸の長さを有する；霊長類ＤＣＲＳ５に特異的である少なくとも２個の非重複エピトープを示す；天然のグリコシル化状態で少なくとも３０ｋＤの分子量を有する；合成ポリペプチドである；無菌形態にある；水溶液もしくは緩衝化溶液中に存在する；固体基材に結合している；別の化学的部分に結合している；またはＩＬ−１２Ｒβ１ポリペプチドと物理的に会合している。
【００１３】
例えば以下を含む、種々の他の組成物が提供される：ＩＬ−１２Ｒβ１タンパク質と合わされた実質的に純粋なポリペプチド；またはキャリア中のこのようなポリペプチド（ここで、このキャリアは、水、生理食塩水および／もしくは緩衝液を含む、水性化合物である；ならびに／または経口的、直腸的、鼻腔内、局所的または非経口的な投与のために処方される）。
【００１４】
このようなポリペプチドおよび以下を含むキットが提供される：このポリペプチドを含む区画；ＩＬ−１２Ｒβ１ポリペプチドを含む区画；ｐ４０、ｐ１９もしくはｐ４０／ｐ１９ポリペプチドを含む区画；またはこのキット中の試薬の使用もしくは廃棄についての使用説明書。
【００１５】
ＤＣＲＳ５の細胞内部分に特異的に結合する、例えば、抗体由来の抗原結合部位を含む、抗体および他の結合化合物が提供され、ここで：この結合化合物は、容器中に存在する；このポリペプチドは、ヒト由来である；この結合化合物は、Ｆｖ、ＦａｂもしくはＦａｂ２フラグメントである；この結合化合物は、別の化学的部分に結合している；またはこの抗体は：表１の成熟ポリペプチドのペプチド配列に対して惹起される；成熟ＤＣＲＳ５に対して惹起される；精製ヒトＤＣＲＳ５に対して惹起される；免疫選択される；ポリクローナル抗体である；変性したＤＣＲＳ５に結合する；少なくとも３０μＭの、抗原に対するＫｄを示す；ビーズもしくはプラスチックメンブレンを含む、固体基材に結合されている；無菌組成物である；または放射性標識もしくは蛍光標識を含め、検出可能に標識されている。結合化合物および以下を含むキットもまた提供される：この結合化合物を含む区画；区画であって、ｐ４０ポリペプチド；ｐ１９ポリペプチド；ＤＣＲＳ５ポリペプチド；および／もしくはＩＬ−１２Ｒβ１ポリペプチドを含む、区画；抗体を含む区画であって、この抗体が、ｐ４０ポリペプチド；ｐ１９ポリペプチド；ＤＣＲＳ５ポリペプチド；および／もしくはＩＬ−１２Ｒβ１ポリペプチドに選択的に結合する、区画；またはこのキット中の試薬の使用もしくは廃棄についての使用説明書。
【００１６】
例えば、抗原：抗体複合体を生成する方法であって、適切な条件下で、霊長類ＤＣＲＳ５ポリペプチドと抗体とを接触させ、それによって複合体を形成させる工程を包含する、方法もまた提供される。このような方法においては、以下であり得る：この複合体が、他のサイトカインレセプターから精製される；この複合体が、他の抗体から精製される；接触させる工程が、インターフェロンを含むサンプルとである；接触させる工程が、抗原の定量的検出を可能にする；接触させる工程が、抗体を含むサンプルとである；または接触させる工程が、前記抗体の定量的検出を可能にする。他の組成物（例えば、無菌の結合化合物、または結合化合物およびキャリアを含む組成物）が提供される：ここで、このキャリアは：水、生理食塩水および／もしくは緩衝液を含む、水性化合物である；ならびに／または経口的、直腸的、鼻腔内、局所的または非経口的な投与のために処方される。
【００１７】
本発明はまた、ＤＣＲＳ５ポリペプチドをコードする、単離されたまたは組換え核酸を提供し、ここで：ＤＣＲＳ５はヒト由来である；あるいはこの核酸は：配列番号２の抗原性ペプチド配列をコードする；配列番号２の複数の抗原性ペプチド配列をコードする；少なくとも１３ヌクレオチドにわたって、このセグメントをコードする天然のｃＤＮＡに対する同一性を示す；発現ベクターである；複製起点をさらに含む；天然の供給源由来である；検出可能な標識を含む；合成ヌクレオチド配列を含む；６ｋｂ未満、好ましくは３ｋｂ未満である；霊長類由来である；天然の全長コード配列を含む；ＤＣＲＳ５をコードする遺伝子についてのハイブリダイゼーションプローブである；またはＰＣＲプライマー、ＰＣＲ産物もしくは変異誘発プライマーである。細胞が以下であるものを含めて、この組換え核酸を含む細胞が提供される：原核生物細胞；真核生物細胞；細菌細胞；酵母細胞；昆虫細胞；哺乳動物細胞；マウス細胞；霊長類細胞；またはヒト細胞。
【００１８】
キットの実施形態としては、この核酸および以下を含むキットが挙げられる：この核酸を含む区画；核酸を含む区画であって、この核酸が、ｐ４０ポリペプチド；ｐ１９ポリペプチド；ＤＣＲＳ５ポリペプチド；および／もしくはＩＬ−１２Ｒβ１ポリペプチドをコードする、区画；ｐ４０ポリペプチド；ｐ１９ポリペプチド；ＤＣＲＳ５ポリペプチド；および／もしくはＩＬ−１２Ｒβ１ポリペプチドを含む、区画；抗体を含む区画であって、この抗体が、ｐ４０ポリペプチド；ｐ１９ポリペプチド；ＤＣＲＳ５ポリペプチド；および／もしくはＩＬ−１２Ｒβ１ポリペプチドに選択的に結合する、区画；またはこのキット中の試薬の使用もしくは廃棄についての使用説明書。
【００１９】
他の核酸実施形態としては、以下である実施形態が挙げられる：３０分間、３０℃で、そして２Ｍ未満の塩の洗浄条件下で、細胞内部分をコードする配列番号１の部分にハイブリダイズする；または少なくとも約３０ヌクレオチドのストレッチにわたって、霊長類ＤＣＲＳ５の細胞内部分に対する同一性を示す。好ましくは、このような核酸は、以下である核酸である：洗浄条件が、４５℃および／もしくは５００ｍＭ塩；または５５℃および／もしくは１５０ｍＭ塩；またはこのストレッチが少なくとも５５ヌクレオチドまたは７５ヌクレオチドである。
【００２０】
治療的使用としては、細胞の生理機能または発達を調節する方法であって、この細胞を、以下と接触させる工程を包含する方法が挙げられる：霊長類ＤＣＲＳ５の細胞外部分および／または霊長類ＩＬ−１２Ｒβ１の細胞外部分を含む複合体である、ｐ４０／ｐ１９のアンタゴニスト；霊長類ＤＣＲＳ５および／または霊長類ＩＬ−１２Ｒβ１を含む複合体を結合する抗体である、ｐ４０／ｐ１９のアンタゴニスト；ＤＣＲＳ５に結合する抗体である、ｐ４０／ｐ１９のアンタゴニスト；ＩＬ−１２Ｒβ１に対する抗体である、ｐ４０／ｐ１９のアンタゴニスト；ＤＣＲＳ５もしくはＩＬ−１２Ｒβ１に対するアンチセンス核酸である、ｐ４０／ｐ１９のアンタゴニスト；または霊長類ＤＣＲＳ５および／もしくは霊長類ＩＬ−１２Ｒβ１を含む複合体を結合する抗体である、ｐ４０／ｐ１９のアゴニスト。１つの型の方法では、この接触させる工程は、アンタゴニストとであり、そして、この接触させる工程は、ＩＬ−１２、ＩＬ−１８、ＴＮＦおよび／またはＩＦＮγに対するアンタゴニストとの組合せにおいてである；あるいはこの細胞は、慢性ＴＨ１媒介性疾患の徴候もしくは症状を示す；多発性硬化症、慢性関節リウマチ、変形性関節症、炎症性腸疾患、糖尿病、乾癬もしくは敗血症の症状もしくは徴候を示す；または同種異系移植を受けている宿主由来である。逆に、この方法は、アゴニストと接触させる工程であり得、そして：この接触させる工程は、ＩＬ−１２、ＩＬ−１８、ＴＮＦまたはＩＦＮγとの組合せにおいてである；あるいはこの細胞は、慢性ＴＨ２応答の徴候もしくは症状を示す；腫瘍、ウイルスもしくは真菌の増殖に罹っている；ワクチンを受けている；またはアレルギー応答に罹っている宿主由来である。
【００２１】
本発明は、生理学的障害を経験したヒト被験体を処置する方法を提供し、この方法は、ＤＣＲＳ５（配列番号１または配列番号２）またはｐ１９（配列番号５または配列番号６）の有効量のアゴニストまたはアンタゴニストを投与する工程を包含する。上記障害は、慢性関節リウマチ；ぜん息またはアレルギー；慢性閉塞性肺障害（ＣＯＰＤ）；間質性肺障害；炎症性腸障害（ＩＢＤ）；または炎症性皮膚障害が挙げられる。上記皮膚障害が乾癬またはアトピー性皮膚炎である；上記ＩＢＤがクローン病または潰瘍性大腸炎である；上記間質性肺障害が、特発性肺線維症；好酸球性肉芽腫；または過敏性肺炎である、方法もまた、提供される。
【００２２】
別の実施形態において、本発明は、上記アンタゴニストが、ＤＣＲＳ５（配列番号２）；もしくはｐ１９（配列番号６）に特異的に結合する抗体の抗原結合部位由来の結合組成物を含む、方法；または上記結合組成物が、ポリクローナル抗体；モノクローナル抗体；ヒト化抗体；またはＦａｂ、Ｆｖ、もしくはＦ（ａｂ’）_２フラグメントを含む、方法；または上記アゴニストが、ＤＣＲ５（配列番号２）もしくはｐ１９（配列番号６）を含む、方法；ならびに上記アゴニストまたはアンタゴニストが核酸を含む、方法；または上記アンタゴニストが、アンチセンス核酸またはＲＮＡ干渉核酸（ＲＮＡ ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ ｎｕｃｌｅｉｃ ａｃｉｄ）を含む、方法を提供する。
【００２３】
本発明のさらに別の実施形態は、生理学的障害を診断する方法であり、この方法は、ＤＣＲＳ５（配列番号１または配列番号２）にかまたはｐ１９（配列番号５または配列番号６）に特異的に結合する結合組成物を、慢性関節リウマチ；ぜん息もしくはアレルギー；慢性閉塞性肺障害（ＣＯＰＤ）；間質性肺障害；炎症性腸障害（ＩＢＤ）；または炎症性皮膚障害を経験した試験被験体由来のサンプルに、接触させる工程を包含する。また、上記結合組成物をコントロール被験体由来のサンプル、またはコントロールサンプルに接触させる工程；および試験被験体で見出された結合とコントロール被験体またはコントロールサンプルで見出された結合とを比較する工程をさらに包含する方法もまた、提供される。上記結合組成物が、ポリクローナル抗体；モノクローナル抗体；ヒト化抗体；Ｆａｂ、ＦｖもしくはＦ（ａｂ’）_２フラグメント；核酸；または検出可能な標識を含む、方法；ならびに、上記核酸が、プローブまたはプライマー；あるいは分子ビーコンを含む、方法が提供される。
【００２４】
別の実施形態において、本発明は、上記サンプルが、ヒト細胞、組織、または生物学的流体（ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｆｌｕｉｄ）由来であり；上記皮膚障害が乾癬またはアトピー性皮膚炎であり；上記ＩＢＤがクローン病または潰瘍性大腸炎であり；あるいは上記間質性肺障害が特発性肺線維症；好酸球性肉芽腫；または過敏性肺炎である、診断方法を提供する。
本発明は例えば、以下の項目を提供する。
（項目１）
有効量のＤＣＲＳ５（配列番号１または配列番号２）のアゴニストまたはアンタゴニスト、あるいはｐ１９（配列番号５または配列番号６）のアゴニストまたはアンタゴニストを投与する工程を包含する、生理学的障害を経験したヒト被験体を処置する方法であって、ここで、該障害は：
ａ）ぜん息またはアレルギー；
ｂ）慢性閉塞性肺障害（ＣＯＰＤ）；または
ｃ）間質性肺障害
を含む、方法。
（項目２）
項目１に記載の方法であって、前記間質性肺障害は：
ａ）特発性肺線維症；
ｂ）好酸球性肉芽腫；または
ｃ）過敏性肺炎
である、方法。
（項目３）
項目１に記載の方法であって、前記アンタゴニストは：
ａ）ＤＣＲＳ５（配列番号２）；または
ｂ）ｐ１９（配列番号６）
に特異的に結合する抗体の抗原結合部位由来の結合組成物を含む、方法。
（項目４）
項目３に記載の方法であって、前記結合組成物は：
ａ）ポリクローナル抗体；
ｂ）モノクローナル抗体；
ｃ）ヒト化抗体；または
ｄ）Ｆａｂ、ＦｖもしくはＦ（ａｂ’）_２フラグメント
を含む、方法。
（項目５）
項目１に記載の方法であって、前記アゴニストは：
ａ）ＤＣＲＳ５（配列番号２）；または
ｂ）ｐ１９（配列番号６）
を含む、方法。
（項目６）
項目１に記載の方法であって、前記アゴニストまたはアンタゴニストは、核酸を含む、方法。
（項目７）
項目６に記載の方法であって、前記アンタゴニストは、
ａ）アンチセンス核酸；または
ｂ）ＲＮＡ干渉核酸
を含む、方法。
（項目８）
ＤＣＲＳ５（配列番号１または配列番号２）またはｐ１９（配列番号５または配列番号６）に特異的に結合する結合組成物を、以下：
ａ）ぜん息またはアレルギー；
ｂ）慢性閉塞性肺障害（ＣＯＰＤ）；または
ｃ）間質性肺障害
を経験した試験被験体由来のサンプルに接触させる工程を包含する、生理学的障害を診断する方法。
（項目９）
項目８に記載の方法であって、以下：
ａ）前記結合組成物をコントロール被験体由来のサンプルまたはコントロールサンプルに接触させる工程；および
ｂ）前記試験被験体で見出された結合と該コントロール被験体またはコントロールサンプルで見出された結合とを比較する工程
をさらに包含する、方法。
（項目１０）
項目８に記載の方法であって、前記結合組成物は：
ａ）ポリクローナル抗体；
ｂ）モノクローナル抗体；
ｃ）ヒト化抗体；
ｄ）Ｆａｂ、ＦｖもしくはＦ（ａｂ’）_２フラグメント
ｅ）核酸；または
ｆ）検出可能な標識
を含む、方法。
（項目１１）
項目１０に記載の方法であって、前記核酸は：
ａ）プローブもしくはプライマー；または
ｂ）分子ビーコン
を含む、方法。
（項目１２）
項目８に記載の方法であって、前記サンプルは、ヒト細胞、組織、または生物学的流体由来である、方法。
（項目１３）
項目８に記載の方法であって、前記間質性肺障害は：
ａ）特発性肺線維症；
ｂ）好酸球性肉芽腫；または
ｃ）過敏性肺炎
である、方法。
【発明を実施するための形態】
【００２５】
（好ましい実施形態の詳細な説明）
添付された特許請求の範囲を含めて、本明細書中で使用される場合、「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」のような単数形の単語は、その内容が明確にそうではないと示さない限り、その対応する複数の対称を含む。本明細書中で引用される全ての参考文献は、各々個別の特許公開、特許出願または特許公報が詳細にかつ個別に参考として援用されることが指示されるかのように、同じ程度まで参考として援用される。
【００２６】
（Ｉ．一般）
本発明は、構造的特性および生物学的特性の両方の特定の規定された特性を有する哺乳動物（本明細書中では霊長類）のサイトカインレセプター様サブユニット分子のアミノ酸配列およびＤＮＡ配列を提供し、この分子は、ＤＮＡＸサイトカインレセプターサブユニット５（ＤＣＲＳ５）と称される。これらの分子をコードする種々のｃＤＮＡは、霊長類（例えば、ヒト）のｃＤＮＡ配列ライブラリーから入手された。他の霊長類または他の哺乳動物の対応物もまた所望される。
【００２７】
さらに、本発明は、ｐ４０／ｐ１９リガンドとレセプターサブユニットＤＣＲＳ５およびＩＬ−１２Ｒβ１との適合を提供し、この対形成は、アゴニストおよびアンタゴニストに対する試薬に基づいた、アゴニストおよびアンタゴニストの使用のための指標の洞察を提供する。
【００２８】
適用可能な標準的な方法のうちのいくつかが、記載または参照される。例えば、以下を参照のこと：Ｍａｎｉａｔｉｓら（１９８２），Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ；Ｓａｍｂｒｏｏｋら（１９８９）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，（第２版），第１３巻，ＣＳＨ Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ；Ａｕｓｕｂｅｌら（１９８７および定期発行の補遺）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｇｒｅｅｎｅ／Ｗｉｌｅｙ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ。
【００２９】
霊長類（例えば、ヒト）のＤＣＲＳ５コードセグメントのヌクレオチド（配列番号１）および対応するアミノ酸配列（配列番号２）が、提供される。予測されるシグナル配列が示されるが、細胞型に依存し得るか、またはいずれかの方向のいくつかの残基であり得る。潜在的Ｎグリコシル化部位は、アスパラギン残基６、２４、５８、１１８、１５７、２０９および２５０にある（配列番号２）。ジスルフィド結合は、２９位のシステイン残基と７８位のシステイン残基との間に見出されるようである；そして保存されたＣ ＣＸＷモチーフは、１１０位／１２１位／１２３位に見出される。２１９位のトリプトファン；および２８１〜２８５のＷｘｘＷＳモチーフが注目される。約１〜１０１のセグメントは、Ｉｇドメインであり；約１０２〜１９５のセグメントはサイトカイン結合ドメイン１であり；約１９６〜２９７のセグメントはサイトカイン結合ドメイン２であり；約２９８〜３３０のセグメントはリンカーであり；約３２９〜３５４のセグメントは膜貫通セグメントであり；そして約３５６〜６０６のセグメントは細胞内ドメインである。細胞内の特徴としては、Ｙ３７４−Ｉ３７７、Ｙ４６１−Ｑ４６４およびＹ５８８−Ｑ５９１の推定ＳＨ２結合部位；ならびに４０６、４２７、４４０および４５３の潜在的に重要なチロシン残基が挙げられる。
【００３０】
オープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）は、上で示すように、．．．ＣＨＧ／ＧＩＴ．．．で切断されると予測される推定シグナル配列を含む。３２８アミノ酸の予測細胞外ドメインには、推定膜貫通セグメントが続いており、そして最終的に約２５２アミノ酸の細胞質ドメインが続いている。リガンド結合機能は、細胞外ドメインに存在すると推定される。改変が同定された位置は、ヌクレオチド１２７およびヌクレオチド５６３（配列番号１）である。ヌクレオチド１２７を含むコドンは、ヒスチジンまたはグルタミンをコードし得、一方、ヌクレオチド５６３を含むコドンは、アルギニン、グリシンまたはトリプトファンをコードし得る。
【００３１】
【表１−１】

【００３２】
【表１−２】

「ＩＬ−３０Ｒ」の細胞外ドメインの最も近縁のものは、ＩＬ−６シグナル伝達因子（ｓｉｇｎａｌ ｔｒａｎｓｄｕｃｅｒ）ｇｐ１３０およびＩＬ−１２Ｒβ２である。いくらかより近縁でないものは、ＧＣＳＦレセプター、レプチンレセプター、白血病阻害因子レセプターおよびＣＮＴＦレセプターである。従って、「ＩＬ−３０Ｒ」は、サイトカインレセプタースーパーファミリーのクラスＩ部門（ｂｒａｎｃｈ）のメンバーであり、ＩＬ−６Ｒ／ＩＬ−１２Ｒファミリーに密接に関連している。
【００３３】
表１は、霊長類（例えば、ヒト）のＤＣＲＳ５（ＩＬ−３０Ｒ）との霊長類レセプターサブユニットの利用可能な配列の比較を示す。ＤＣＲＳ５は、ＩＬ−６レセプターサブユニットｇｐ１３０（例えば、ＩＬ−６Ｒサブユニット）およびＩＬ−１２Ｒβ２サブユニットに対する類似性を示す。ＤＣＲＳ５は、βサブユニットの構造的特徴を示すが、タンパク質の相互作用およびシグナル伝達の実際の順序は、解明されていないままである。
【００３４】
本明細書中で使用される場合、用語ＤＣＲＳ５は、配列番号２のアミノ酸配列を含むタンパク質を記載するように使用される。多くの場合、それらの実質的なフラグメントは、例えば、さらなる細胞外セグメントを含め、機能的または構造的に等価である。本発明はまた、配列が提供されるそれぞれのＤＣＲＳ５対立遺伝子のタンパク質のバリエーション（例えば、ムテインまたは他の構築物）を含む。代表的には、このような改変体は、標的領域との約１０％未満の配列の相違を示し、従ってしばしば、１重置換と１１重置換との間（例えば、２重置換、３重置換、５重置換、７重置換など）を有する。これはまた、記載されるタンパク質の対立遺伝子改変体および他の改変体（例えば、天然の多型）を包含する。代表的に、これは、その対応する生物学的リガンドに、おそらく、αレセプターサブユニットとの二量体化状態において、例えば、少なくとも約１００ｎＭ、通常約３０ｎＭより良好、好ましくは約１０ｎＭより良好、そしてより好ましくは約３ｎＭより良好な高い親和性で結合する。この用語はまた、この哺乳動物タンパク質の関連した天然に存在する形態（例えば、対立遺伝子、多型改変体および代謝改変体）をいうように本明細書中で使用される。好ましい形態のレセプター複合体は、リガンド−レセプター相互作用に適切な親和性および選択性で適切なリガンドを結合する。
【００３５】
本発明はまた、配列番号２および配列番号６のアミノ酸配列と実質的なアミノ酸配列同一性を有する、タンパク質またはペプチドの組合せを包含する。本発明は、比較的わずかな（例えば、好ましくは約３〜５より少ない）置換を有する配列改変体を包含する。
【００３６】
ヒトｐ１９に特異的な結合組成物は、ｐ１９の抗原セグメントまたはフラグメントを用いて免疫化することにより調製され得る。これらの結合組成物は、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、ヒト化抗体、抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ、ＦｖまたはＦ（ａｂ’）_２フラグメント、二重特異性抗体、一本鎖抗体、二機能性抗体（ｂｉｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｙ）、および抗体のペプチド模倣物を包含する。ヒトｐ１９の抗原性の増加した領域としては、例えば、配列番号６のアミノ酸１６−２１；５７−６９；７２−８１；１３６−１４０；１４３−１４６；１５１−１５４；および１３５−１６４が挙げられる（Ｐａｒｋｅｒら，（１９８６）Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２５：５４２５−５４３２、およびＷｅｌｌｉｎｇら，（１９８５）ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ．，１８８：２１５−２１８による分析、必要に応じてＶｅｃｔｏｒ ＮＴＩ（登録商標）Ｓｕｉｔｅ（Ｉｎｆｏｒｍａｘ，Ｉｎｃ．Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ）からのソフトウェアを使用した）。
【００３７】
実質的なポリペプチド「フラグメント」または「セグメント」は、少なくとも約８アミノ酸、一般的に少なくとも１０アミノ酸、より一般的に少なくとも１２アミノ酸、しばしば少なくとも１４アミノ酸、よりしばしば少なくとも１６アミノ酸、代表的に少なくとも１８アミノ酸、より代表的に少なくとも２０アミノ酸、通常は少なくとも２２アミノ酸、より通常は少なくとも２４アミノ酸、好ましくは少なくとも２６アミノ酸、より好ましくは少なくとも２８アミノ酸、そして特に好ましい実施形態では、少なくとも約３０以上のアミノ酸のアミノ酸残基のストレッチである。異なるタンパク質のセグメントの配列は、適切な長さのストレッチにわたって互いに比較され得る。多くの状況では、フラグメントは、インタクトなサブユニットの機能的特性を示し得る。例えば、膜貫通レセプターの細胞外ドメインは、リガンド結合特徴を保持し得、そしてこれを使用して可溶性レセプター様複合体を調製し得る。
【００３８】
アミノ酸配列相同性または配列同一性は、残基の一致を最適化することによって決定される。いくつかの比較では、必要に応じてギャップが導入され得る。例えば、Ｎｅｅｄｌｅｈａｍら（１９７０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４３−４５３；Ｓａｎｋｏｆｆら（１９８３）Ｔｉｍｅ Ｗａｒｐｓ，Ｓｔｒｉｎｇ Ｅｄｉｔｓ，ａｎｄ Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ：Ｔｈｅ Ｔｈｅｏｒｙ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎの第１章，Ａｄｄｉｓｏｎ−Ｗｅｓｌｅｙ，Ｒｅａｄｉｎｇ，ＭＡ；ならびにＩｎｔｅｌｌｉＧｅｎｅｔｉｃｓ，Ｍｏｕｎｔａｉｎ Ｖｉｅｗ，ＣＡ；およびＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ（ＧＣＧ），Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩからのソフトウェアパッケージを参照のこと。これは、保存的置換を一致として考慮する場合、変動する。保存的置換としては代表的に、以下のグループ内での置換が挙げられる：グリシン、アラニン；バリン、イソロイシン、ロイシン；アスパラギン酸、グルタミン酸；アスパラギン、グルタミン；セリン、トレオニン；リジン、アルギニン；およびフェニルアラニン、チロシン。相同なアミノ酸配列は、そのサイトカイン配列における天然の対立遺伝子バリエーションおよび種間バリエーションを含むことが意図される。代表的な相同タンパク質または相同ペプチドは、配列番号２のアミノ酸配列セグメントと、５０％〜１００％の相同性（ギャップが導入され得る場合）から６０％〜１００％相同性（保存的置換が含まれる場合）を有する。相同性の限度は、少なくとも約７０％、一般に少なくとも７６％、より一般的に少なくとも８１％、しばしば少なくとも８５％、よりしばしば少なくとも８８％、代表的には少なくとも９０％、より代表的には少なくとも９２％、通常は少なくとも９４％、より通常は少なくとも９５％、好ましくは少なくとも９６％、そしてより好ましくは少なくとも９７％、そして特に好ましい実施形態では、少なくとも９８％以上である。相同性の程度は、比較されるセグメントの長さに伴って変動する。相同タンパク質または相同ペプチド（例えば、対立遺伝子改変体）は、配列番号２（特に細胞内部分）と大部分の生物学的活性を共有する。
【００３９】
本明細書中で使用される場合、用語「生物学的活性」は、サイトカイン様リガンドによるシグナル伝達、炎症応答、先天免疫および／または形態形成的発生に対する効果を限定することなく記載するように使用される。例えば、これらのレセプターは、ホスファターゼ活性またはホスホリラーゼ活性を媒介すべきであり、これらの活性は、標準的な手順によって容易に測定される。例えば、Ｈａｒｄｉｅら編（１９９５）Ｔｈｅ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｋｉｎａｓｅ ＦａｃｔＢｏｏｋ、第Ｉ巻および第ＩＩ巻，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ；Ｈａｎｋｓら（１９９１）Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．２００：３８−６２；Ｈｕｎｔｅｒら（１９９２）Ｃｅｌｌ ７０：３７５−３８８；Ｌｅｗｉｎ（１９９０）Ｃｅｌｌ ６１：７４３−７５２；Ｐｉｎｅｓら（１９９１）Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｓｙｍｐ．Ｑｕａｎｔ．Ｂｉｏｌ．５６：４４９−４６３；およびＰａｒｋｅｒら（１９９３）Ｎａｔｕｒｅ ３６３：７３６−７３８を参照のこと。レセプターまたはその部分は、一般的基質または特異的基質を標識するためのリン酸標識酵素として有用であり得る。サブユニットはまた、認識抗体を惹起する機能的な免疫原または抗体を結合し得る抗原であり得る。
【００４０】
例えば、ＤＣＲＳ５の、用語リガンド、アゴニスト、アンタゴニストおよびアナログは、（例えば、レセプターが天然のレセプターまたは抗体である場合の）リガンド−レセプター相互作用の特徴をいう。細胞性応答は代表的には、レセプターチロシンキナーゼ経路によって媒介されるようである。
【００４１】
また、リガンドは、上記レセプターもしくはそのアナログが結合する天然のリガンドまたはその天然のリガンドの機能的アナログである分子のいずれかとして役立つ分子である。機能的アナログは、構造的改変を有するリガンドであり得るか、または適切なリガンド結合決定基と相互作用する分子形状を有する、完全に無関係の分子であり得る。このリガンドは、アゴニストまたはアンタゴニストとして機能し得る。例えば、Ｇｏｏｄｍａｎら編（１９９０）Ｇｏｏｄｍａｎ ＆ Ｇｉｌｍａｎ’ｓ：Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｅｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，Ｐｅｒｇａｍｏｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋを参照のこと。
【００４２】
合理的薬物設計はまた、レセプターまたは抗体および他のエフェクターもしくはリガンドの分子形状の構造研究に基づき得る。例えば、Ｈｅｒｚら（１９９７）Ｊ．Ｒｅｃｅｐｔ．Ｓｉｇｎａｌ Ｔｒａｎｓｄｕｃｔ．Ｒｅｓ．１７：６７１−７７６；およびＣｈａｉｋｅｎら（１９９６）Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１４：３６９−３７５を参照のこと。エフェクターは、リガンド結合に応じて他の機能を媒介する他のタンパク質またはこのレセプターと通常相互作用する他のタンパク質であり得る。どの部位が特定の他のタンパク質と相互作用するかを決定するための１つの手段は、物理的構造決定（例えば、Ｘ線結晶学または二次元ＮＭＲ技術）である。これらは、どのアミノ酸残基が分子接触領域を形成するかに関するガイダンスを提供する。タンパク質の構造決定の詳細な説明については、例えば、ＢｌｕｎｄｅｌｌおよびＪｏｈｎｓｏｎ（１９７６）Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒａｐｈｙ，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋを参照のこと。
【００４３】
（ＩＩ．活性）
サイトカインレセプター様タンパク質は、多数の異なる生物学的活性（例えば、（例えば、ＳＴＡＴ４を介した）細胞内シグナル伝達、細胞増殖の調節またはリン酸代謝において、特定の基質（代表的にタンパク質）に添加されるかもしくは特定の基質から除去される）を有する。このようなことは一般に、炎症機能、他の先天免疫応答、または形態学的効果の調節をもたらす。サブユニットはおそらく、リガンドに対する特異的低親和性結合を有する。
【００４４】
ＤＣＲＳ５は、ＪＡＫ経路を通したレセプターシグナル伝達の特有のモチーフを有する。例えば、Ｉｈｌｅら（１９９７）Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌｓ １５（補遺１）：１０５−１１１；Ｓｉｌｖｅｎｎｏｉｎｅｎら（１９９７）ＡＰＭＩＳ １０５：４９７−５０９；Ｌｅｖｙ（１９９７）Ｃｙｔｏｋｉｎｅ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ Ｒｅｖｉｅｗ ８：８１−９０；ＷｉｎｓｔｏｎおよびＨｕｎｔｅｒ（１９９６）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｂｉｏｌ．６：６６８−６７１；Ｂａｒｒｅｔｔ（１９９６）Ｂａｉｌｌｉｅｒｅｓ Ｃｌｉｎ．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．１０：１−１５；ならびにＢｒｉｓｃｏｅら（１９９６）Ｐｈｉｌｏｓ．Ｔｒａｎｓ．Ｒ．Ｓｏｃ．Ｌｏｎｄ．Ｂ．Ｂｉｏｌ．Ｓｃｉ．３５１：１６７−１７１を参照のこと。特に興味深いのは、上記のＳＨ２結合モチーフである。
【００４５】
サイトカインレセプターサブユニットの生物学的活性は、代表的には特定の様式において、しかし、時々は非特異的な様式での、基質へのリン酸部分の添加または除去に関連している。例えば、Ｈａｒｄｉｅら編（１９９５）Ｔｈｅ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｋｉｎａｓｅ ＦａｃｔＢｏｏｋ、第Ｉ巻および第ＩＩ巻，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ；Ｈａｎｋｓら（１９９１）Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．２００：３８−６２；Ｈｕｎｔｅｒら（１９９２）Ｃｅｌｌ ７０：３７５−３８８；Ｌｅｗｉｎ（１９９０）Ｃｅｌｌ ６１：７４３−７５２；Ｐｉｎｅｓら（１９９１）Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｓｙｍｐ．Ｑｕａｎｔ．Ｂｉｏｌ．５６：４４９−４６３；ならびにＰａｒｋｅｒら（１９９３）Ｎａｔｕｒｅ ３６３：７３６−７３８に記載されるような標準的な方法によって、基質が同定され得るか、または酵素的活性についての条件がアッセイされ得る。
【００４６】
レセプターサブユニットは組み合わされて、（例えば、リガンドを結合するため、または抗体を調製するために有用であり得る）機能的複合体を形成し得る。これらは、検出または定量を含め、実質的な診断的用途を有する。レセプターとｐ４０／ｐ１９リガンドとの機能的結合は、このレセプターが有用である臨床的指標に重要な洞察を提供する。従って、アンタゴニストおよびアゴニストは、予測された機能的効果を有する。
【００４７】
活性化した肥満細胞、Ｔ細胞およびＮＫ細胞は、ＩＬ−２３のｐ１９サブユニットの発現の増加を示し、一方で、活性化された樹状細胞は、ＩＬ−２３のｐ４０サブユニットの発現の増加を示す。これらの細胞は、種々の炎症性障害および状態の病理学に関連している。
【００４８】
肥満細胞は、ぜん息およびアレルギー、ＣＯＰＤ、慢性関節リウマチ、ＩＢＤ（例えば、クローン病または潰瘍性大腸炎）、および皮膚炎（例えば、乾癬およびアトピー性皮膚炎）の病因において役割を果たす。例えば、Ｅｄｗａｒｄｓ（２００３）Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ａｌｌｅｒｇｙ ３３：１１６４−１１６５；Ｇｒａｓｈｏｆｆら，（１９９７）Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．１５１：１７８５−１７９０；Ｗｏｏｌｌｅｙ（２００３）Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４８：１７０９−１７１１；Ｍａｌａｖｉｙａら，（１９９５）Ａｍ．Ｊ Ｔｈｅｒ．２：７８７−７９２；Ｊｉａｎｇら（２００１）Ｉｎｔ．Ｊ． Ｄｅｒｍａｔｏｌ．４０：６９９−７０３を参照のこと。
【００４９】
ＮＫ細胞は、ぜん息およびアレルギー、慢性関節リウマチ、および皮膚障害（例えば、乾癬およびアトピー性皮膚炎）の機構に関する。例えば、Ｋｏｒｓｇｒｅｎ（２００２）Ｃｕｒｒ．Ｐｈａｒｍ．Ｄｅｓ．８：１８７１−１８７６；Ｃａｍｅｒｏｎら，（２００３）Ｂｒ．Ｊ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．１４９：１６０−１６４を参照のこと。
【００５０】
ＤＣは、ぜん息およびアレルギー、慢性関節リウマチ、炎症性腸障害（ＩＢＤ）（例えば、クローン病または潰瘍性大腸炎）、および皮膚障害（例えば、乾癬およびアトピー性皮膚炎）に関連している。例えば、Ｕｐｈａｍ（２００３）Ｒｅｓｐｉｒｏｌｏｇｙ ８：１４０−１４８；Ｓａｎｔｉａｇｏ−Ｓｃｈｗａｒｚら，（２００１）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６７：１７５８−１７６８；Ｓｔａｇｇら，（２００３）Ｇｕｔ ５２：１５２２−１５２９；Ｍｒｏｗｉｅｔｚら，（２００１）Ｅｘｐ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．１０：２３８−２４５を参照のこと。
【００５１】
ＩＬ−２３のｐ１９サブユニットは、種々の肺障害（例えば、間質性肺障害）を伴って発現の増加を示す。本発明は、間質性肺障害の処置または診断のために、ＩＬ−２３のアゴニストまたはアンタゴニスト（例えば、ｐ１９のポリペプチドもしくは核酸またはＤＣＲＳ５のポリペプチドもしくは核酸に特異的な結合組成物）を提供する。間質性肺障害としては、特発性肺線維症、好酸球性肉芽腫、および過敏性肺炎が挙げられる。特発性肺線維症（つらい予後を有する）は、活性化した肺胞の上皮細胞、線維芽細胞の病巣、および細胞外マトリクスの沈着物に関する。炎症が発症するが、その主要な特徴は、線維芽細胞の病巣である（例えば、Ｋａｍｐ（２００３）Ｃｈｅｓｔ １２４：１１８７−１１８９；Ｗｈｉｔｅら，（２００３）Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．２０１：３４３−３５４を参照のこと）。好酸球性肉芽腫は、局在性非悪性腫瘍性の組織球増殖症である。好酸球性肉芽腫は、消散し得るか、または線維症段階に進行し得る。この障害は、喫煙に関連する（例えば、ＬｅｖｉｎｅおよびＮｉｃｋｅｌｌｅｉｔ（１９９４）Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３３０：３４７−３５３；ＲａｊａｇｏｐｏｌおよびＭａｒｋ（２００２）Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４７：１２６２−１２６８；Ｍｉａｄｏｎｎａら（２０００）Ｍｏｎａｌｄｉ Ａｒｃｈ Ｃｈｅｓｔ Ｄｉｓ．５５：３−５を参照のこと）。吸入性アレルゲンにより引き起こされる過敏性肺炎（別名外因性アレルギー性肺胞炎）は、末梢気道および周囲の間質組織の炎症に関する。単球は、蓄積して、肉芽腫へと発達する泡状マクロファージ（ｆｏａｍｙ ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ）へと成熟する。この障害はまた、細気管支炎、間質性リンパ球浸潤（ｉｎｔｅｒｓｔｉｔｉａｌ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ ｉｎｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ）に関連し得、そして「蜂巣状肺（ｈｏｎｅｙｃｏｍｂｅｄ ｌｕｎｇ）」線維症が挙げられ得る（例えば、Ｐａｔｅｌら，（２００１）Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１０８：６６１−６７０；Ｙｉ（２００２）Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｃｌｉｎ．Ｌａｂ．Ｓｃｉ．３９：５８１−６２９を参照のこと）。
【００５２】
ＩＬ−２３のｐ１９サブユニットはまた、Ａｓｃａｒｉｓ処置による発現の増加を示す。Ａｓｃａｒｉｓ処置は、アレルギーおよびぜん息についてのモデルである。蠕虫処置（例えば、Ａｓｃａｒｉｓ）は、肺障害（例えば、気道過反応性；ぜん息、肺の好酸球増加およびアレルギー）の動物モデルにおいて使用される。Ａｓｃａｒｉｓ処置は、肺の好酸球増加（ぜん息の特徴である）を誘導する。Ａｓｃａｒｉｓはまた、肺の好中球増加（ＣＯＰＤの特徴である）を誘導する。Ａｓｃａｒｉｓへの曝露は、ヒトのぜん息に関連する（例えば、Ｂｉｌｌａｈら，（２００２）Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ ３０２：１２７−１３７；Ｍｏｃｈｉｚｕｋｉら，（２００１）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．４３０：１２３−１３３；Ｂｏｕｃｈｅｒら，（１９７９）Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．６４：１９７−２０１；Ｐａｄｒｉｄら，（１９９５）Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｃｒｉｔ．Ｃａｒｅ Ｍｅｄ．１５１：１８４−１９３；Ｓｅｎｇｏｋｕら，（２００１）Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．６３：８２−８９；Ａｂｒａｈａｍら，（１９９９）Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｃｒｉｔ．Ｃａｒｅ Ｍｅｄ．１５９：１２０５−１２１４；Ｊｏｎｅｓら，（１９９８）Ｃａｎ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．７６：２１０−２１７；Ｗｒｉｇｈｔら，（１９９９）Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ ２８９：１００７−１０１４；Ｄ’Ｂｒｏｔら，（１９８９）Ａｍ．Ｒｅｖ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｄｉｓ．１３９：９１５−９２０；Ｂａｒｎｅｓ（２０００）Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４３：２６９−２８０；Ｐａｌｍｅｒら，（２００２）Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｃｒｉｔ．Ｃａｒｅ Ｍｅｄ．１６５：１４８９−１４９３；Ｌｙｎｃｈら，（１９９７）Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｃｒｉｔ．Ｃａｒｅ Ｍｅｄ．１５６：５０−５４を参照のこと）。
【００５３】
ＩＬ−２３のｐ１９サブユニットおよびＩＬ−２３Ｒの１９サブユニットの発現の増加は、ＩＢＤ（例えば、クローン病）において起こる。さらに、蠕虫、原虫および寄生虫は、間質性の炎症（例えば、ＩＢＤ）の発生の増加に関連している（例えば、Ｓａｃｃｏら，（１９９８）Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．１５３：１７１７−１７２２；Ｔａｋｅｙａｍａら，（１９９７）Ｊ．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．Ｈｅｐａｔｏｌ．１２：２０４−２０６；Ｂｕｎｄｙ（１９８６）Ｔｒａｎｓ．Ｒ．Ｓｏｃ．Ｔｒｏｐ．Ｍｅｄ．Ｈｙｇ．８０：７０６−７１８；Ｔａｎａｋａら，（１９８３）Ｐａｒａｓｉｔｏｌｏｇｙ ８６：２９１−３００；Ｕｓｔｕｎら，（２００３）Ｗｏｒｌｄ Ｊ．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．９：１８３４−１８３５；Ｗａｔｅｒｓら，（１９９９）Ｊ．Ｐａｒａｓｉｔｏｌ．８５：１１００−１１０５；Ｆａｕｓｓｏｎｅ−Ｐｅｌｌｅｇｒｉｎｉら，（２００２）Ｎｅｕｒｏｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．Ｍｏｔｉｌ．１４：８３−９５を参照のこと）。
【００５４】
本発明のＩＬ−２３Ｒは、ＣＯＰＤを有する患者のクラーラ細胞上で発現が増加する。クラーラ細胞は、気道の綿毛を持たない気道上皮細胞であり、気道の病理学（例えば、ぜん息、喫煙およびＣＯＰＤ）を調節する。ＣＯＰＤは、クラーラ細胞の生理学における変化に相関する（例えば、Ｐｉｌｅｔｔｅら，（２００１）Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｃｒｉｔ．Ｃａｒｅ Ｍｅｄ．１６３：１８５−１９４；Ｋａｕｐら，（１９９０）Ｅｑｕｉｎｅ Ｖｅｔ Ｊ．２２：３４９−３５５；Ｚｈａｎｇら，（２００１）Ｚｈｏｎｇｈｕａ Ｊｉｅ Ｈｅ Ｈｅ Ｈｕ Ｘｉ Ｚａ Ｚｈｉ ２４：５２４−５２６を参照のこと）。クラーラ細胞は、免疫応答を調節する多くの分子（例えば、ウテログロブリン（ｕｔｅｒｏｇｌｏｂｕｌｉｎ）（別名クラーラ細胞分泌タンパク質））を産生する。ぜん息およびＣＯＰＤにおいて、クラーラ細胞は減少し、粘液細胞は増加する。続く粘液産生の増加は、気道閉塞に寄与する。クラーラ細胞は、粘液細胞に対する前駆体細胞であるようである（例えば、Ｊｅｆｆｒｅｙ（１９９８）Ｔｈｏｒａｘ ５５３：１２９−１３６；Ｒｏｇｅｒｓ（２００２）Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ａｌｌｅｒｇｙ ３２：１１２４−１１２７；Ｗａｔｓｏｎら，（２００１）Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｌｕｎｇ Ｃｅｌｌ Ｍｏｌ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．２８１：Ｌ１５２３−Ｌ１５３０；Ｒｅａｄｅｒら，（２００３）Ａｍ．Ｊ Ｐｈｙｓｉｏｌ．１６２：２０６９−２０７８；Ｓｔｒｉｐｐら，（２００２）Ａｍ．Ｊ Ｒｅｓｐｉｒ．Ｃｅｌｌ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２７：１７０−１７８を参照のこと）。線維症は、ぜん息および慢性閉塞性肺障害（ＣＯＰＤ）の病理学の特徴である（例えば、Ｂａｒｎｅｓ（２０００）Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４３：２６９−２８０；Ｂａｒｎｅｓ（２０００）Ｃｈｅｓｔ １１７：ｌ０ｓ−１４ｓ；Ｓａｅｔｔａら，（２００１）Ｅｕｒ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｊ Ｓｕｐｐｌ．３４：１８ｓ−２３ｓ；Ｒｅｄｉｎｇｔｏｎ（２０００）Ｍｏｎａｌｄｉ Ａｒｃｈ．Ｃｈｅｓｔ Ｄｉｓ．５５：３１７−３２３；Ｖｉｇｎｏｌａら，（２００１）Ｃｕｒｒ．Ａｌｌｅｒｇｙ Ａｓｔｈｍａ Ｒｅｐ．１：１０８−１１５を参照のこと）。
【００５５】
サイトカイン（例えば、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）、ＩＬ−４またはＩＬ−１３）は、ＩＬ−２３、ｐ１９、またはＤＣＲＳ５（別名ＩＬ−２３Ｒ）の発現を刺激し得る。逆に、ＩＬ−２３は、多くのサイトカイン（例えば、ＩＬ−６、ＩＬ−１９、ＣＸＣＬ−１およびＩＬ−１７）の発現を刺激し得る。ＴＮＦは、多くの炎症性障害（例えば、ぜん息、ＣＯＰＤ、慢性間接リウマチ、炎症性腸障害（ＩＢＤ）および乾癬）に寄与する（例えば、Ｄａｓら，（２００２）Ｐｕｌｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｈｅｒ．１５：４０９−４１６；Ｈａｌａｓｚら，（２００２）Ｒｅｓｐｉｒ．Ｍｅｄ．９６：２６２−２６７；Ｂａｒｎｅｓ（２０００）Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４３：２６９−２８０；Ｔｕｔｕｎｃｕら，（２００２）Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．２０（６号補遺２８）：ｓ１４６−１５１を参照のこと）。ＩＬ−４は、ぜん息、アレルギー、およびＣＯＰＤにおいて役割を果たし、その一方で、ＩＬ−１３は、ぜん息およびアレルギー、ＣＯＰＤ、慢性関節リウマチ、ＩＢＤ（例えば、クローン病および潰瘍性大腸炎）、および皮膚障害（例えば、乾癬またはアトピー性皮膚炎）の機構の一部である（例えば、Ｓｔｅｉｎｋｅら，（２００１）Ｒｅｓｐｉｒ．Ｒｅｓ．２：６６−７０；Ｊｅｆｆｅｒｙ（２００１）Ｎｏｖａｒｔｉｓ Ｆｏｕｎｄ．Ｓｙｍｐ．２３４：１４９−１６１；ｖａｎ ｄｅｒ Ｐｏｕｗ Ｋｒａａｎら，（２００２）Ｇｅｎｅｓ Ｉｍｍｕｎｏｌ．３：４３６−４３９；Ｓｐａｄｅｒｏら，（２００２）Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．２０：２１３−２１６；Ｂｏｕｍａら，（２００３）Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３：５２１−５３３；Ｖａｎ ｄｅｒ Ｐｌｏｅｇら，（１９９７）Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１０９：５２６−５３２を参照のこと）。
【００５６】
（ＩＩＩ．核酸）
本発明は、例えば、対応するポリペプチド（好ましくは、生物学的に活性であるポリペプチド）をコードするための、（例えば、これらのタンパク質もしくは密接に関連するタンパク質またはそれらのフラグメントをコードする）単離された核酸またはフラグメントの使用を企図する。さらに、本発明は、（例えば、ＤＣＲＳ５（配列番号２）単独の、もしくはヒトｐ１９（配列番号６）単独の、または他のもの（例えば、それぞれ、ＩＬ−１２Ｒβ１サブユニットまたはｐ４０サブユニット（Ｓｈｏｗｅら（１９９６）Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．７９５：４１３−４２５；Ｇａｔｅｌｙら（１９９８）Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６：４９５−５２１；ＧｅｎＢａｎｋ Ｕ０３１８７，ＮＭ＿００５５３５を参照のこと））と組み合わせた）特有の配列を有する、このようなタンパク質またはポリペプチドの組合せをコードする、単離されたＤＮＡまたは組換えＤＮＡを包含する。代表的に、この核酸は、適切な条件下で、配列番号１または配列番号５に示される核酸配列セグメントとハイブリダイズし得るが、好ましくは、表１に記載されるレセプター（すなわち、ｈＩＬ−６Ｒ ｇｐ１３０またはｈＩＬ−１Ｒβ２）の、対応するフラグメントとはハイブリダイズしない。この生物学的に活性なタンパク質またはポリペプチドは、全長タンパク質またはフラグメントであり得、そして配列番号２に示すものに対して代表的に非常に相同な（例えば、有意な同一性ストレッチを示す）アミノ酸配列のセグメントを有する。さらに、本発明は、ＤＣＲＳ５タンパク質に等価であるフラグメント（例えば、細胞内部分）を有するタンパク質をコードする、単離された核酸もしくは組換え核酸またはそれらのフラグメントの使用を包含する。単離された核酸は、それぞれの調節配列（例えば、プロモーター、エンハンサー、ポリＡ付加シグナルおよび天然の遺伝子由来の他のもの）を５’隣接部（ｆｌａｎｋ）および３’隣接部に有し得る。上記の通りの組合せ（例えば、リガンドアンタゴニストとして、ＤＣＲＳ５とＩＬ−１２Ｒβ１とを含むこと、またはそれらの細胞外リガンド結合部分を含むこと）もまた提供される。例えば、多型または他の改変体の診断上の有用性がまた、明らかに重要である。
【００５７】
「単離された」核酸は、実質的に純粋な（例えば、天然ではネイティブな配列に付随する他の成分（例えば、リボソーム、ポリメラーゼおよび起源種由来の隣接ゲノム配列）から分離された）核酸（例えば、ＲＮＡ、ＤＮＡまたは混合ポリマー）である。この用語は、その天然に存在する環境から取り出された核酸配列を包含し、そしてそれによって天然に存在する組成物とは区別され得る、組換えＤＮＡ単離物もしくはクローニングされたＤＮＡ単離物、および化学合成されたアナログもしくは異種の系によって生物学的に合成されたアナログを包含する。実質的に純粋な分子としては、完全に純粋または実質的に純粋のいずれかの、単離された形態の分子が挙げられる。
【００５８】
単離された核酸は一般に、分子の均質な組成物であるが、いくつかの実施形態においては、不均質性（好ましくは微量）を含む。この不均質性は代表的に、ポリマーの末端または所望の生物学的機能もしくは活性に重要でない部分に見出される。
【００５９】
「組換え」核酸は代表的に、その産生法またはその構造のいずれかによって規定される。その産生法に関して（例えば、プロセスによって作製される産物）、このプロセスは、（例えば、ヌクレオチド配列において人間による介入を含む）組換え核酸技術の使用である。代表的に、この介入は、インビトロでの操作を含むが、特定の環境下では、この介入は、より古典的な動物育種技術を含み得る。あるいは、これは、天然では互いに連続していない２つのフラグメントの融合物を含む配列を作製することによって作製される核酸であり得るが、これは、天然の産物（例えば、それらの天然の状態において見出されるような、天然に存在する変異体）を除外することを意味する。従って、例えば、細胞を、天然に存在しないベクターで形質転換することによって作製される産物は、任意の合成オリゴヌクレオチドプロセスを用いて誘導される配列を含む核酸と同様に包含される。このようなプロセスはしばしば、代表的には、制限酵素配列認識部位を導入もしくは除去しながら、または何らかの構造−機能解析のために、例えば、あるコドンを、同じまたは保存的アミノ酸をコードする冗長なコドンで置換することによって行われる。あるいは、このプロセスを行って、所望の機能の核酸セグメントを一緒に連結して、（例えば、融合タンパク質をコードする）通常利用可能な天然の形態で見出されない機能の所望の組合せを含む単一の遺伝的実体が作製される。制限酵素認識部位はしばしば、このような人工的操作の標的であるが、他の部位特異的標的（例えば、プロモーター、ＤＮＡ複製部位、調節配列、制御配列または他の有用な特徴）は設計により取り込まれ得る。同様の概念は、組換え（例えば、融合）ポリペプチドについて意図される。これは、ＤＣＲＳ５の二量体反復物またはＤＣＲＳ５のＩＬ−１２Ｒβ１サブユニットとの融合物を含む。特に含まれるのは、遺伝暗号の冗長性によって、ＤＣＲＳ５のフラグメントに対する等価なポリペプチドおよび種々の異なる関連分子（例えば、他のサイトカインファミリーのメンバー）由来の配列の融合物をコードする合成核酸である。
【００６０】
核酸の文脈における「フラグメント」は、少なくとも約１７ヌクレオチド、一般に少なくとも２１ヌクレオチド、より一般的に少なくとも２５ヌクレオチド、通常は少なくとも３０ヌクレオチド、より通常は少なくとも３５ヌクレオチド、しばしば少なくとも３９ヌクレオチド、よりしばしば少なくとも４５ヌクレオチド、代表的には少なくとも５０ヌクレオチド、より代表的には少なくとも５５ヌクレオチド、通常は少なくとも６０ヌクレオチド、より通常は少なくとも６６ヌクレオチド、好ましくは少なくとも７２ヌクレオチド、より好ましくは少なくとも７９ヌクレオチド、そして特に好ましい実施形態では、少なくとも８５以上のヌクレオチド（９０、１００、１２０、１４０、１６０、１８０、２００などを含む）の連続したセグメントである。代表的に、異なる遺伝的配列のフラグメントは、適切な長さのストレッチ（特に、規定されたセグメント（例えば、以下に記載のドメイン））にわたって互いに比較され得る。
【００６１】
ＤＣＲＳ５またはｐ１９をコードする核酸は、それ自体または近縁のタンパク質をコードする、遺伝子種、ｍＲＮＡ種およびｃＤＮＡ種、ならびに多型改変体、対立遺伝子改変体または他の遺伝的改変体をコードするＤＮＡを、例えば、異なる個体または関連の種から同定するために特に有用である。このようなスクリーニングのための好ましいプローブは、レセプターのうちの、異なる多型改変体間で保存されている領域、またはレセプターのうちの、特異性を欠くヌクレオチドを含む領域であり、そして好ましくは全長もしくはそれに近い。他の状況では、多型改変体特異的配列が、より有用である。ＤＣＲＳ５の多型改変体とＩＬ−１２Ｒβ１の改変体との組合せもまた調査分析され得る。
【００６２】
核酸配列比較の文脈における実質的な同一性とは、比較した場合、適切なヌクレオチドの挿入または欠失を伴って最適に整列したとき、セグメントまたはそれらの相補鎖のいずれかが、そのヌクレオチドの少なくとも約６０％、一般に少なくとも６６％、通常は少なくとも７１％、しばしば少なくとも７６％、よりしばしば少なくとも８０％、通常少なくとも８４％、より通常少なくとも８８％、代表的には少なくとも９１％、より代表的には少なくとも約９３％、好ましくは少なくとも約９５％、より好ましくは少なくとも約９６〜９８％以上、そして特定の実施形態では、このヌクレオチドの約９９％以上の高さ（例えば、構造ドメインをコードするセグメントまたは記載される他のセグメントを含む）において同一であることを意味する。あるいは、このセグメントが、選択的ハイブリダイゼーション条件下で、代表的には配列番号１または配列番号５から誘導される配列を用いて、鎖またはその相補体にハイブリダイズする場合、実質的同一性が存在する。代表的には、少なくとも約１４ヌクレオチド、より代表的には少なくとも約６５％、好ましくは少なくとも約７５％、そしてより好ましくは少なくとも約９０％のストレッチにわたって少なくとも約５５％の相同性が存在する場合、選択的ハイブリダイゼーションが生じる。例えば、Ｋａｎｅｈｉｓａ（１９８４）Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１２：２０３−２１３を参照のこと。記載されるように、相同性比較の長さは、より長いストレッチにわたり得、そして特定の実施形態では、少なくとも約１７ヌクレオチド、一般に少なくとも約２０ヌクレオチド、通常は少なくとも約２４ヌクレオチド、通常は少なくとも約２８ヌクレオチド、代表的には少なくとも約３２ヌクレオチド、より代表的には少なくとも約４０ヌクレオチド、好ましくは少なくとも約５０ヌクレオチド、そしてより好ましくは少なくとも約７５〜１００以上のヌクレオチドのストレッチにわたる。これとしては、例えば、１２５、１５０、１７５、２００、２２５、２５０、２７５、３００、３２５、３５０などおよび他の長さが挙げられる。
【００６３】
ハイブリダイゼーションの文脈において相同性をいう際、ストリンジェントな条件は、ハイブリダイゼーション条件反応において代表的に制御される、塩、温度、有機溶媒および他のパラメーターのストリンジェントな組み合わされた条件である。ストリンジェントな温度条件は、通常約３０℃を超える、より通常は約３７℃を超える、代表的には約４５℃を超える、より代表的には約５５℃を超える、好ましくは約６５℃を超える、そしてより好ましくは約７０℃を超える温度を含む。ストリンジェントな塩条件は、通常、約５００ｍＭ未満、通常約４００ｍＭ未満、より通常は約３００ｍＭ未満、代表的に約２００ｍＭ未満、好ましくは約１００ｍＭ未満、そしてより好ましくは約８０ｍＭ未満であり、さらには約５０ｍＭまたは２０ｍＭ未満まで下がりさえする。しかし、パラメーターの組合せは、任意の単一のパラメーターの限度よりもさらにずっと重要である。例えば、ＷｅｔｍｕｒおよびＤａｖｉｄｓｏｎ（１９６８）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３１：３４９−３７０を参照のこと。
【００６４】
単離されたＤＮＡは、ヌクレオチド置換、ヌクレオチド欠失、ヌクレオチド挿入およびヌクレオチドストレッチの逆位によって容易に改変され得る。これらの改変は、このタンパク質またはその誘導体をコードする新規なＤＮＡ配列をもたらす。これらの改変された配列を使用して、変異体タンパク質（ムテイン）を産生し得るかまたは改変体種の発現を増強し得る。増強された発現は、遺伝子の増幅、転写増大、翻訳増大および他の機構を含み得る。このような変異ＤＣＲＳ５は、欠失、置換または挿入のいずれによって天然に見出される他のサイトカインレセプター様タンパク質のアミノ酸配列とは異なるアミノ酸配列を有する。特に、「部位特異的変異ＤＣＲＳ５」は、配列番号２のタンパク質と実質的配列同一性を有し、そして代表的には本明細書中に開示される形態の生物学的活性または効果の大部分を共有するタンパク質を包含する。種々の天然の多型改変体配列もまた同定される。
【００６５】
部位特異的変異部位は予定されたものであるとはいえ、変異体は、部位特異的である必要はない。哺乳動物ＤＣＲＳ５変異誘発は、発現と結び付いたアミノ酸の挿入または欠失を遺伝子中に作製することによって達成され得る。置換、欠失、挿入または多くの組合せが作製されて、最終的な構築物に到達され得る。挿入物としては、アミノ末端融合物またはカルボキシ末端融合物が挙げられる。ランダム変異誘発は、標的コドンで行われ得、次いで発現された哺乳動物ＤＣＲＳ５変異体は、所望の活性についてスクリーニングされ得、構造と活性との関係のいくつかの局面を提供する。公知配列を有するＤＮＡ中の所定の部位で置換変異を作製するための方法（例えば、Ｍ１３プライマー変異誘発によるもの）は、当該分野で周知である。Ｓａｍｂｒｏｏｋら（１９８９）ならびにＡｕｓｕｂｅｌら（１９８７および定期発行の補遺）もまた参照のこと。特に有用な構築物は、ＩＬ−１２Ｒβ１セグメントに結合したＤＣＲＳ５の細胞外部分である。
【００６６】
ＤＮＡ中の変異は通常、コード配列をリーディングフレームから外すべきでなく、そして好ましくはハイブリダイズして二次ｍＲＮＡ構造（例えば、ループまたはヘアピン）を生じ得る相補的領域を作製しない。
【００６７】
ＢｅａｕｃａｇｅおよびＣａｒｒｕｔｈｅｒｓ（１９８１）Ｔｅｔｒａ．Ｌｅｔｔｓ．２２：１８５９−１８６２によって記載されるホスホルアミダイト法は、適切な合成ＤＮＡフラグメントを生成する。二本鎖フラグメントはしばしば、相補鎖を合成し、そして鎖を適切な条件下で一緒にアニーリングすること、または適切なプライマー配列とともにＤＮＡポリメラーゼを用いて相補鎖を付加することのいずれかによって入手される。
【００６８】
ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）技術はしばしば、変異誘発において適用され得る。あるいは、変異誘発プライマーは、規定された変異を所定の部位で作製するために通常使用される方法である。例えば、Ｉｎｎｉｓら編（１９９０）ＰＣＲ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ：Ａ Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ；ならびにＤｉｅｆｆｅｎｂａｃｈおよびＤｖｅｋｓｌｅｒ編（１９９５）ＰＣＲ Ｐｒｉｍｅｒ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ，ＣＳＨ，ＮＹを参照のこと。
【００６９】
本発明の特定の実施形態は、記載されるレセプター配列を含む組合せ組成物に関する。他の実施形態では、この配列の機能的部分は、融合タンパク質をコードするように連結され得る。他の形態では、記載された配列の改変体が置換され得る。
【００７０】
（ＩＶ．タンパク質、ペプチド）
上記のように、本発明は、霊長類ＤＣＲＳ５およびｐ１９（例えば、その配列が配列番号１〜２または配列番号５〜６に開示され、そして上に記載される）を包含する。対立遺伝子改変体および他の改変体もまた企図され、これらとしては、例えば、このような配列の部分と他の部分（例えば、ＩＬ−１２Ｒβ１、ｐ４０、エピトープタグおよび機能的ドメインが挙げられる）とを組み合わせた融合タンパク質が挙げられる。
【００７１】
本発明はまた、組換えタンパク質（例えば、これらの霊長類またはげっ歯類のタンパク質由来のセグメントを用いた異種融合タンパク質）を提供する。異種融合タンパク質は、天然では通常同じ様式では融合されていない、タンパク質またはセグメントの融合物である。従って、ＤＣＲＳ５と別のサイトカインレセプターとの融合産物は、代表的には、単一翻訳産物として作製された、典型的なペプチド結合において融合された配列を有し、そして各供給源ペプチドに由来する特性（例えば、配列または抗原性）を示す、連続したタンパク質分子である。同様の概念が異種核酸配列に適用される。複合体への、種々の指定されたタンパク質の組合せもまた提供される。
【００７２】
さらに、新たな構築物は、種改変体を含め、他の関連したタンパク質（例えば、サイトカインレセプターまたはＴｏｌｌ様レセプター）由来の同様の機能的ドメインまたは構造的ドメインを組み合わせることから作製され得る。例えば、リガンド結合セグメントまたは他のセグメントは、異なる新たな融合ポリペプチドまたはフラグメントの間で「交換」され得る。例えば、Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍら（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４３：１３３０−１３３６；およびＯ’Ｄｏｗｄら（１９８８）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６３：１５９８５−１５９９２を参照のこと。従って、特異性の新たな組合せを示す新たなキメラポリペプチドは、レセプター結合特異性の機能的結合からもたらされる。例えば、他の関連したレセプター分子由来のリガンド結合ドメインは、このタンパク質または関連したタンパク質の他のドメインに付加され得るかまたはこのドメインと置換され得る。得られるタンパク質はしばしば、ハイブリッドの機能および特性を有する。例えば、融合タンパク質は、特定の細胞内（ｓｕｂｃｅｌｌｕｌａｒ）（細胞）小器官への融合タンパク質の隔離を提供するのに役立ち得る標的化ドメインを含み得る。
【００７３】
候補融合パートナーおよび候補融合配列は、種々の配列データベース（例えば、ＧｅｎＢａｎｋ，ｃ／ｏ ＩｎｔｅｌｌｉＧｅｎｅｔｉｃｓ，Ｍｏｕｎｔａｉｎ Ｖｉｅｗ，ＣＡ；およびＧＣＧ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏｍｐｕｔｉｎｇ Ｇｒｏｕｐ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）から選択され得る。特に、配列番号２〜４に提供されるポリペプチド配列の組合せが特に好ましい。改変体形態のタンパク質は、記載される組合せで置換され得る。
【００７４】
本発明は特に、サイトカイン様リガンドに結合する、および／またはシグナル伝達において影響を受ける、ムテインを提供する。ヒトＤＣＲＳ５とサイトカインレセプターファミリーの他のメンバーとの構造的アライメントは、保存された特徴／残基を示す（表１）。ヒトＤＣＲＳ５配列とサイトカインレセプターファミリーの他のメンバーとのアライメントは、種々の構造的および機能的に共有された特徴を示す。また、Ｂａｚａｎら（１９９６）Ｎａｔｕｒｅ ３７９：５９１；Ｌｏｄｉら（１９９４）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２６３：１７６２−１７６６；ＳａｙｌｅおよびＭｉｌｎｅｒ−Ｗｈｉｔｅ（１９９５）ＴＩＢＳ ２０：３７４−３７６；ならびにＧｒｏｎｅｎｂｅｒｇら（１９９１）Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ４：２６３−２６９を参照のこと。
【００７５】
マウス配列またはヒト配列のいずれかでの置換が特に好ましい。逆に、リガンド結合相互作用領域から離れた保存的置換はおそらく、大部分のシグナル伝達活性を保存する；そして細胞内ドメインから離れた保存的置換はおそらく、大部分のリガンド結合特性を保存する。
【００７６】
霊長類ＤＣＲＳ５の「誘導体」としては、アミノ酸配列変異体、グリコシル化改変体、代謝誘導体および他の化学的部分との共有結合性結合体または凝集性結合体が挙げられる。共有結合性誘導体は、ＤＣＲＳ５アミノ酸側鎖中に見出される基への、またはＮ末端での、例えば、当該分野で周知である手段による官能基の結合によって調製され得る。これらの誘導体としては、カルボキシル末端の、またはカルボキシル側鎖を含む残基の、脂肪族エステルまたはアミド、ヒドロキシル基含有残基のＯアシル誘導体、およびアミノ末端アミノ酸またはアミノ基含有残基（例えば、リジンもしくはアルギニン）のＮアシル誘導体が挙げられ得るがこれらに限定されない。アシル基は、アルキル部分（Ｃ３〜Ｃ１８のノルマルアルキルを含む）の群から選択され、それによってアルカノイルアロイル種を形成する。
【００７７】
特に、例えば、その合成およびプロセシングの間の、またはさらなるプロセシング工程における、ポリペプチドのグリコシル化パターンを改変することによって作製される、グリコシル化の変更物が含まれる。これを達成するための特に好ましい手段は、通常このようなプロセシングを提供する細胞由来のグリコシル化酵素（例えば、哺乳動物グリコシル化酵素）にポリペプチドを暴露することによる。脱グリコシル化（ｄｅｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ）酵素もまた企図される。他のマイナーな改変（リン酸化されたアミノ酸残基（例えば、ホスホチロシン、ホスホセリンまたはホスホトレオニン）を含む）を有する同じ一次アミノ酸配列のバージョンもまた包含される。
【００７８】
主な誘導体の群は、レセプターまたはそのフラグメントと他のポリペプチドのタンパク質との共有結合性結合体である。これらの誘導体は、組換え培養において（例えば、Ｎ末端融合物）、または反応性側鎖基を介してタンパク質を架橋させる際のそれらの有用性が当該分野で公知の薬剤の使用によって、合成され得る。架橋剤での好ましい誘導体化部位は、遊離アミノ基、糖質部分およびシステイン残基である。
【００７９】
レセプターと他の同種タンパク質または異種タンパク質との間の融合ポリペプチドもまた提供される。同種ポリペプチドは、異なるレセプターの間での融合物であり得、例えば、複数の異なるサイトカインリガンドについての結合特異性を示すハイブリッドタンパク質、または広まったかもしくは弱まった基質特異性効果を有し得るレセプターを生じる。同様に、誘導体タンパク質の特性または活性の組合せを示す異種融合物が構築され得る。代表例は、所望のリガンドの存在または位置が容易に決定され得るような、レポーターポリペプチド（例えば、ルシフェラーゼ）とレセプターのセグメントまたはドメイン（例えば、リガンド結合セグメント）との融合物である。例えば、Ｄｕｌｌらに対して発行された、米国特許第４，８５９，６０９号を参照のこと。他の遺伝子融合パートナーとしては、グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）、細菌性β−ガラクトシダーゼ、ｔｒｐＥ、プロテインＡ、β−ラクタマーゼ、αアミラーゼ、アルコールデヒドロゲナーゼおよび酵母α接合因子が挙げられる。例えば、Ｇｏｄｏｗｓｋｉら（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４１：８１２−８１６を参照のこと。標識タンパク質はしばしば、タンパク質の記載された組合せにおいて置換される。
【００８０】
ＢｅａｕｃａｇｅおよびＣａｒｒｕｔｈｅｒｓ（１９８１）Ｔｅｔｒａ．Ｌｅｔｔｓ．２２：１８５９−１８６２のホスホルアミダイト法は、適切な合成ＤＮＡフラグメントを生じる。二本鎖フラグメントはしばしば、相補鎖を合成し、そして鎖を適切な条件下で一緒にアニーリングすること、または適切なプライマー配列と共に、ＤＮＡポリメラーゼを用いて相補鎖を付加することのいずれかによって入手される。
【００８１】
このようなポリペプチドもまた、リン酸化、スルホン化、ビオチン化、または他の部分（特に、リン酸基と類似の分子形状を有する部分）の付加もしくは除去によって化学的に改変されたアミノ酸残基を有し得る。いくつかの実施形態では、改変は、有用な標識試薬であるか、または精製標的（例えば、親和性リガンド）として役立つ。
【００８２】
融合タンパク質は代表的に、組換え核酸法または合成ポリペプチド法のいずれかによって作製される。核酸の操作および発現のための技術は一般に、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら（１９８９）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（第２版），第１３巻，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，およびＡｕｓｕｂｅｌら編（１９８７および定期発行の補遺）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｇｒｅｅｎｅ／Ｗｉｌｅｙ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋに記載されている。ポリペプチドの合成のための技術は、例えば、Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ（１９６３）Ｊ．Ａｍｅｒ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．８５：２１４９−２１５６；Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ（１９８６）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３２：３４１−３４７；Ａｔｈｅｒｔｏｎら（１９８９）Ｓｏｌｉｄ Ｐｈａｓｅ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ，ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ，Ｏｘｆｏｒｄに記載されている。より大きなポリペプチドを作製するための方法についてＤａｗｓｏｎら（１９９４）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２６６：７７６−７７９もまた参照のこと。
【００８３】
本発明はまた、アミノ酸配列またはグリコシル化におけるバリエーション以外のＤＣＲＳ５の誘導体の使用を企図する。このような誘導体は、化学部分との共有結合的または凝集的な会合を含み得る。これらの誘導体は一般に、以下の３つのクラスに分類される：（１）塩、（２）側鎖および末端残基の共有結合改変、ならびに（３）例えば、細胞膜との吸着複合体。このような共有結合性または凝集性の誘導体は、免疫原として、免疫アッセイにおける試薬として、または（例えば、レセプターまたは他の結合分子（例えば、抗体）のアフィニティー精製のための）精製方法における試薬として有用である。例えば、サイトカインリガンドは、サイトカインレセプター、抗体または他の同様の分子のアッセイまたは精製における使用のために、当該分野で周知である方法によって固体支持体（例えば、臭化シアン活性化Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（登録商標））に共有結合することによって固定され得るか、またはグルタルアルデヒド架橋を用いてもしくはこれを用いずにポリオレフィン表面に吸着され得る。このリガンドはまた、診断アッセイにおける使用のために、検出可能な基で標識され得る（例えば、クロラミンＴ手順によって放射性ヨウ素標識される、希土キレートへと共有結合される、または別の蛍光部分へと結合体化される）。
【００８４】
本発明の組合せ（例えば、ＤＣＲＳ５を含む）は、記載される組合せについて特異的な（例えば、他のサイトカインレセプターファミリーのメンバー間を区別し得る）抗血清または抗体の産生のための免疫原として使用され得る。複合体を使用して、このタンパク質を含む種々の形態の不純な調製物での免疫によって調製されたモノクローナル抗体または抗原結合フラグメントをスクリーニングし得る。特に、用語「抗体」はまた、天然の抗体の抗原結合フラグメント（例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ２、Ｆｖなど）を包含する。精製されたＤＣＲＳ５はまた、内因性レセプターに対する抗体産生を導く、上昇したレベルの発現または免疫学的障害の存在に応じて生成された抗体を検出するための試薬として使用され得る。さらに、ＤＣＲＳ５フラグメントはまた、すぐ下に記載されるように、本発明の抗体を産生するための免疫原として役立ち得る。例えば、本発明は、配列番号２、そのフラグメントもしくは種々の相同ペプチドに対する結合親和性を有するか、またはそれらに対して惹起される、抗体を意図する。特に、本発明は、ネイティブなＤＣＲＳ５の外部タンパク質表面に露出していると予測されているかもしくは実際に露出している特異的フラグメントに対して結合親和性を有するか、またはそれらのフラグメントに対して惹起されている、抗体を意図する。タンパク質の組合せの複合体もまた有用であり、そしてそれらに対する抗体調製物が作製され得る。
【００８５】
特定の他の実施形態では、（例えば、ＩＬ−１２Ｒβ１とのＤＣＲＳ５の細胞外リガンド結合セグメントの）可溶性構築物は、このリガンドについての結合組成物であり得、そしてリガンド媒介性シグナル伝達をブロックするためのリガンドアンタゴニストまたは抗原のいずれかとして有用であり得る。これらは、診断的（例えば、リガンドについての組織学的標識のために）または治療的（例えば、リガンドアンタゴニストとして）のいずれかで有用であり得る。
【００８６】
レセプターリガンドに対する生理学的応答のブロッキングは、おそらく競合阻害を通した、レセプターに対するリガンドの結合の阻害からもたらされ得る。従って、本発明のインビトロアッセイはしばしば、抗体もしくはこれらの抗体の抗原結合セグメント、可溶性レセプター構築物、または固相基材に結合されたフラグメントを使用する。これらのアッセイはまた、リガンド結合領域の変異および改変、または（例えば、シグナル伝達機能もしくは酵素機能に影響を与える）他の変異および改変のいずれかの効果の診断決定を可能にする。
【００８７】
本発明はまた、競合的薬物スクリーニングアッセイの使用を意図し、例えば、ここで、レセプター複合体またはフラグメントに対する中和抗体は、リガンドまたは他の抗体に対する結合について試験化合物と競合する。この様式において、中和抗体またはフラグメントを使用して、レセプターに対する１以上の結合部位を共有するポリペプチドの存在を検出し得、そしてまたこれを使用して、レセプター上の、そうでなければリガンドを結合し得る結合部位を占有し得る。ＤＣＲＳ５の細胞外（すなわち、リガンド結合）ドメインとＩＬ−１２Ｒβ１とを組合せた可溶性レセプター構築物は、ｐ４０／ｐ１９リガンドの競合結合についての有用なアンタゴニストであり得る。
【００８８】
（Ｖ．核酸およびタンパク質の作製）
タンパク質またはそのフラグメントをコードするＤＮＡは、化学合成、ｃＤＮＡライブラリーのスクリーニング、または広範な種々の細胞株もしくは組織サンプルから調製されたゲノムライブラリーのスクリーニングによって入手され得る。天然の配列は、標準的方法および本明細書中に（例えば、配列番号２に）提供される配列を用いて単離され得る。他の種対応物は、配列データベース（例えば、ＧｅｎＢａｎｋ）の検索と組み合わせた、またはこの検索による、ハイブリダイゼーション技術によって、または種々のＰＣＲ技術によって、同定され得る。
【００８９】
このＤＮＡは、全長レセプターまたはフラグメントの合成のための広範な種々の宿主細胞において発現され得、このレセプターまたはフラグメントは次いで、例えば、ポリクローナル抗体もしくはモノクローナル抗体を作製するために；結合研究のために；改変されたリガンド結合もしくはキナーゼ／ホスファターゼドメインの構築および発現のために；ならびに構造／機能研究のために使用され得る。改変体またはフラグメントは、適切な発現ベクターで形質転換またはトランスフェクトされた宿主細胞において発現され得る。これらの分子は、組換え宿主に由来する夾雑物以外にはタンパク質夾雑物も細胞性夾雑物も実質的に含まなくてもよく、それゆえ、薬学的に受容可能なキャリアおよび／または希釈剤と組み合わされた場合、薬学的組成物中で特に有用である。このタンパク質またはその部分は、他のタンパク質との融合物として発現され得る。記載されたタンパク質またはそれらをコードする核酸の組合せは特に興味深い。
【００９０】
発現ベクターは代表的に、通常、適切な宿主細胞中で認識される適切な遺伝的制御エレメントに作動可能に連結された、所望のレセプター遺伝子、そのフラグメントまたは遺伝子の組合せを含む、自己複製するＤＮＡ構築物またはＲＮＡ構築物である。これらの制御エレメントは、適切な宿主内での発現をもたらし得る。複数の遺伝子は、協調して発現され得、そしてポリシストロン性メッセージに存在し得る。発現をもたらすために必要な特定の型の制御エレメントは、使用される最終的な宿主細胞に依存する。一般に、遺伝的制御エレメントは、原核生物プロモーター系または真核生物プロモーター発現制御系を含み得、そして代表的には転写プロモーター、転写の開始を制御するための必要に応じたオペレーター、ｍＲＮＡ発現のレベルを上昇させるための転写エンハンサー、適切なリボソーム結合部位をコードする配列ならびに転写および翻訳を終結させる配列を含み得る。発現ベクターはまた通常、宿主細胞に依存してベクターを複製させる複製起点を含む。
【００９１】
本発明のベクターとしては、上記のようなタンパク質または生物学的に活性な等価なポリペプチドの組合せをコードするＤＮＡを含むベクターが挙げられる。このＤＮＡは、ウイルス性プロモーターの制御下にあり得、そして選択マーカーをコードし得る。本発明はさらに、このようなタンパク質をコードする真核生物ｃＤＮＡを原核生物宿主または真核生物宿主において発現し得るような発現ベクターの使用を企図し、ここで、このベクターは、この宿主と適合可能であり、そしてここで真核生物ｃＤＮＡは、このベクターを含む宿主の増殖によって問題のｃＤＮＡを発現するようにこのベクター中に挿入されている。通常、発現ベクターは、それらの宿主細胞における安定な複製のために、または細胞あたりの所望の遺伝子の総コピー数を大いに増大させる増幅のために設計される。発現ベクターが宿主細胞において複製するのを要求することは常に必要なわけではなく、例えば、その宿主細胞によって認識される複製起点を含まないベクターを用いて、種々の宿主においてタンパク質またはそのフラグメントの一過性の発現をもたらすことは可能である。組換えによって宿主ＤＮＡへのタンパク質コード部分の組込みを引き起こすベクターを使用することもまた可能である。
【００９２】
本明細書中で使用される場合、ベクターとしては、プラスミド、ウイルス、バクテリオファージ、組込み可能なＤＮＡフラグメントおよび宿主のゲノムへのＤＮＡフラグメントの組込みを可能にする他のビヒクルが挙げられる。発現ベクターが、作動可能に連結された遺伝子の発現をもたらす遺伝的制御エレメントを含む、特化されたベクターである。プラスミドは、最も普通に使用される形態のベクターであるが、等価な機能を果たし、そして当該分野で公知であるかまたは公知となる、他の全ての形態のベクターは、本明細書中での使用のために適切である。例えば、Ｐｏｕｗｅｌｓら（１９８５および補遺）Ｃｌｏｎｉｎｇ Ｖｅｃｔｏｒｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，Ｎ．Ｙ．，およびＲｏｄｒｉｇｕｅｚら編（１９８８）Ｖｅｃｔｏｒｓ：Ａ Ｓｕｒｖｅｙ ｏｆ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ Ｖｅｃｔｏｒｓ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ Ｕｓｅｓ，Ｂｕｔｔｅｒｓｗｏｒｔｈ，Ｂｏｓｔｏｎを参照のこと。
【００９３】
形質転換された細胞は、組換えＤＮＡ技術を用いて構築されたベクターで形質転換またはトランスフェクトされた細胞（好ましくは哺乳動物）である。形質転換された宿主細胞は通常、所望のタンパク質を発現するが、そのＤＮＡをクローニング、増幅および操作する目的のためには、その対象タンパク質を発現する必要はない。本発明はさらに、形質転換された細胞を栄養培地中で培養し、こうしてタンパク質が蓄積するのを可能にすることを企図する。このタンパク質は、培養物から、または特定の例では培養培地からのいずれかから、回収され得る。
【００９４】
本発明の目的のためには、核酸配列（ｎｕｃｌｅｉｃ ｓｅｑｕｅｎｃｅ）が互いに機能的に関連している場合、核酸配列は作動可能に連結されている。例えば、プレ配列または分泌リーダーについてのＤＮＡは、プレタンパク質として発現されるか、このポリペプチドを細胞膜へと方向付けることもしくはこのポリペプチドの分泌に関与する場合、このポリペプチドに作動可能に連結されている。プロモーターは、ポリペプチドの転写を制御する場合、コード配列に作動可能に連結されている；リボソーム結合部位は、翻訳を可能にするように配置されている場合、コード配列に作動可能に連結されている。通常、作動可能に連結されたとは、連続し、そしてリーディングフレームが一致していることを意味するが、特定の遺伝的エレメント（例えば、リプレッサー遺伝子）は、連続して連結されていないが、オペレーター配列に依然として結合し、このことは次いで発現を制御する。
【００９５】
適切な宿主細胞としては、原核生物、下等真核生物および高等真核生物が挙げられる。原核生物としては、グラム陰性生物およびグラム陽性生物（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉおよびＢ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）の両方が挙げられる。下等真核生物としては、酵母（例えば、Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅおよびＰｉｃｈｉａ）、ならびにＤｉｃｔｙｏｓｔｅｌｉｕｍ属の種が挙げられる。高等真核生物としては、非哺乳動物起源（例えば、昆虫細胞および鳥類）および哺乳動物起源（例えば、ヒト、霊長類および齧歯類）の両方の、動物細胞由来の確立された組織培養細胞株が挙げられる。
【００９６】
原核生物宿主ベクター系としては、多くの異なる種のための広範な種類のベクターが挙げられる。本明細書中で使用される場合、Ｅ．ｃｏｌｉおよびそのベクターは、他の原核生物において使用される等価なベクターを含むように包括的に使用される。ＤＮＡを増幅するための代表的なベクターは、ｐＢＲ３２２またはその誘導体の多くである。レセプターまたはそのフラグメントを発現するために使用され得るベクターとしては、以下を含むようなベクターが挙げられるがこれらに限定されない：ｌａｃプロモーター（ｐＵＣシリーズ）；ｔｒｐプロモーター（ｐＢＲ３２２ ｔｒｐ）；Ｉｐｐプロモーター（ｐＩＮシリーズ）；λｐＰプロモーターもしくはλｐＲプロモーター（ｐＯＴＳ）；またはハイブリッドプロモーター（例えば、ｐｔａｃ（ｐＤＲ５４０））（例えば、Ｂｒｏｓｉｕｓら（１９８８）「Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｖｅｃｔｏｒｓ Ｅｍｐｌｏｙｉｎｇ Ｌａｍｂｄａ，ａｎｄ Ｉｐｐ ｄｅｒｉｖｅｄ Ｐｒｏｍｏｔｅｒｓ」，Ｖｅｃｔｏｒｓ：Ａ Ｓｕｒｖｅｙ ｏｆ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ Ｖｅｃｔｏｒｓ ａｎｄ Ｔｈｅｉｒ Ｕｓｅｓ，（ＲｏｄｒｉｇｕｅｚおよびＤｅｎｈａｒｄｔ編），Ｂｕｔｔｅｒｓｗｏｒｔｈ，Ｂｏｓｔｏｎ，第１０章，２０５−２３６を参照のこと）。
【００９７】
下等真核生物（例えば、酵母およびＤｉｃｔｙｏｓｔｅｌｉｕｍ）は、ＤＣＲＳ５配列含有ベクターで形質転換され得る。本発明の目的のためには、最も普通の下等真核生物宿主は、パン酵母Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅである。これは、下等真核生物を包括的に示すために使用されるが、多数の他の株および種もまた利用可能である。酵母ベクターは代表的に、複製起点（組込み型の場合を除く）、選択遺伝子、プロモーター、レセプターまたはそのフラグメントをコードするＤＮＡ、ならびに翻訳終結のための配列、ポリアデニル化のための配列および転写終結のための配列からなる。酵母についての適切な発現ベクターは、３ホスホグリセレートキナーゼプロモーターおよび種々の他の解糖酵素遺伝子のプロモーターのような構成的プロモーター、またはアルコールデヒドロゲナーゼ２プロモーターもしくはメタロチオネインプロモーターのような誘導性プロモーターを含む。適切なベクターとしては、以下の型の誘導体が挙げられる：自己複製する低コピー数型の誘導体（例えば、ＹＲｐシリーズ）、自己複製する高コピー数型の誘導体（例えば、ＹＥｐシリーズ）；組込み型の誘導体（例えば、ＹＩｐシリーズ）、またはミニ染色体型の誘導体（例えば、ＹＣｐシリーズ）。
【００９８】
高等真核生物の組織培養細胞は通常、機能的に活性なインターロイキンタンパク質またはレセプタータンパク質の発現のために好ましい宿主細胞である。原則として、無脊椎動物供給源由来であるか脊椎動物供給源由来であるかにかかわらず、多くの高等真核生物の組織培養細胞株（例えば、昆虫バキュロウイルス発現系）が、使用可能である。しかし、哺乳動物細胞が好ましい。このような細胞の形質転換またはトランスフェクションおよび増殖は、慣用的手順となっている。有用な細胞株の例としては、ＨｅＬａ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞株、ラット乳仔腎臓（ＢＲＫ）細胞株、昆虫細胞株、鳥類細胞株、およびサル（ＣＯＳ）細胞株が挙げられる。このような細胞株についての発現ベクターは通常、複製起点、プロモーター、翻訳開始部位、ＲＮＡスプライス部位（ゲノムＤＮＡが使用される場合）、ポリアデニル化部位および転写終結部位を含む。これらのベクターはまた通常、選択遺伝子または増幅遺伝子を含む。適切な発現ベクターは、例えば、アデノウイルス、ＳＶ４０、パルボウイルス、ワクシニアウイルスまたはサイトメガロウイルスのような供給源から誘導されたプロモーターを保有する、プラスミド、ウイルスまたはレトロウイルスであり得る。適切な発現ベクターの代表例としては、ｐＣＤＮＡ１；ｐＣＤ（Ｏｋａｙａｍａら（１９８５）Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．５：１１３６−１１４２を参照のこと）；ｐＭＣ１ｎｅｏ ＰｏｌｙＡ（Ｔｈｏｍａｓら（１９８７）Ｃｅｌｌ ５１：５０３−５１２を参照のこと）；およびバキュロウイルスベクター（例えば、ｐＡＣ ３７３またはｐＡＣ ６１０）が挙げられる。
【００９９】
分泌タンパク質およびいくつかの膜タンパク質について、オープンリーディングフレームは通常、そのＮ末端でシグナルペプチドに共有結合した、成熟産物または分泌産物からなるポリペプチドをコードする。このシグナルペプチドは、成熟ポリペプチドすなわち活性なポリペプチドの分泌の前に切断される。切断部位は、高い程度の精度で、経験的法則（例えば、ｖｏｎ−Ｈｅｉｊｎｅ（１９８６）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ １４：４６８３−４６９０およびＮｉｅｌｓｅｎら（１９９７）Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．１０：１−１２）から予測され得、そしてシグナルペプチドの正確なアミノ酸組成はしばしば、その機能に重要ではないようである（例えば、Ｒａｎｄａｌｌら（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４３：１１５６−１１５９；Ｋａｉｓｅｒら（１９８７）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３５：３１２−３１７）。本発明の成熟タンパク質は、標準的方法を用いて容易に決定され得る。
【０１００】
これらのポリペプチドを、特定または規定のグリコシル化パターンを提供する系において発現することが、しばしば望ましい。この場合、通常のパターンは、その発現系によって天然で提供されるパターンである。しかし、このパターンは、このポリペプチド（例えば、非グリコシル化形態）を、異種発現系に導入された適切なグリコシル化タンパク質に曝露することによって改変され得る。例えば、レセプター遺伝子は、哺乳動物のグリコシル化酵素または他のグリコシル化酵素をコードする１つ以上の遺伝子で同時形質転換される。このアプローチを用いて、特定の哺乳動物グリコシル化パターンが、原核生物細胞または他の細胞において達成され得る。原核生物細胞における発現は代表的に、非グリコシル化形態のタンパク質をもたらす。
【０１０１】
ＤＣＲＳ５の供給源は、例えば、上記に記載される、組換えＤＣＲＳ５を発現する、真核生物宿主または原核生物宿主であり得る。この供給源はまた、細胞株であり得るが、他の哺乳動物細胞株もまた本発明によって企図され、好ましい細胞株はヒト種由来である。
【０１０２】
霊長類ＤＣＲＳ５、それらのフラグメントまたは誘導体は、ペプチドを合成するための従来のプロセスによって調製され得る。これらとしては、以下に記載されるようなプロセスが挙げられる：ＳｔｅｗａｒｔおよびＹｏｕｎｇ（１９８４）Ｓｏｌｉｄ Ｐｈａｓｅ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ；ＢｏｄａｎｓｚｋｙおよびＢｏｄａｎｓｚｋｙ（１９８４）Ｔｈｅ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ；Ｂｏｄａｎｓｚｋｙ（１９８４）Ｔｈｅ Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｏｆ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ。例えば、アジドプロセス、酸塩化物プロセス、酸無水物プロセス、混合無水物プロセス、活性エステルプロセス（例えば、ｐ−ニトロフェニルエステル、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル、もしくはシアノメチルエステル）、カルボジイミダゾールプロセス、酸化還元プロセス、またはジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣＤ）添加プロセスが使用され得る。固相合成および液相合成は両方とも、上記のプロセスに適用可能である。同様の技術が、部分的ＤＣＲＳ５配列について使用され得る。
【０１０３】
ＤＣＲＳ５タンパク質、そのフラグメントまたは誘導体は、一般に、末端アミノ酸に対してアミノ酸を１つずつ順番に縮合させることを含むいわゆる段階的プロセスか、またはペプチドフラグメントを末端アミノ酸に対してカップリングすることかのいずれかによって、ペプチド合成において代表的に用いられるような上記のプロセスに従って適切に調製される。カップリング反応において使用されないアミノ基は代表的に、不適切な位置でのカップリングを防ぐために保護されなければならない。
【０１０４】
固相合成が採用される場合、Ｃ末端アミノ酸は、そのカルボキシル基を介して、不溶性のキャリアまたは支持体へと結合される。この不溶性キャリアは、反応性カルボキシル基に対する結合能力を有する限り、特に限定されない。このような不溶性キャリアの例としては、ハロメチル樹脂（例えば、クロロメチル樹脂またはブロモメチル樹脂）、ヒドロキシメチル樹脂、フェノール樹脂、ｔｅｒｔ−アルキルオキシカルボニルヒドラジド化樹脂などが挙げられる。
【０１０５】
アミノ基が保護されたアミノ酸は、その活性化されたカルボキシル基と、以前に形成されたペプチドまたは鎖の反応性アミノ基との縮合を介して順番に結合されて、ペプチドが少しずつ合成される。完全な配列を合成した後、このペプチドは、不溶性キャリアから切り離されて、このペプチドが産生される（例えば、Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄら（１９６３）Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．８５：２１４９−２１５６を参照のこと）。
【０１０６】
調製されたタンパク質およびそのフラグメントは、ペプチド分離手段（例えば、抽出、沈澱、電気泳動、種々の形態のクロマトグラフィー、免疫親和性など）によって反応混合物から単離および精製され得る。本発明のレセプターは、所望の用途に依存して種々の程度の純度で入手され得る。精製は、本明細書中に開示されるタンパク質精製技術の使用によって、または免疫吸着アフィニティークロマトグラフィーの方法において本明細書中に記載される抗体の使用によって、達成され得る。この免疫吸着アフィニティークロマトグラフィーは、この抗体を固体支持体に最初に連結し、次いで連結した抗体を、適切な細胞の可溶化溶解産物、このレセプターを発現する他の細胞の溶解産物、またはＤＮＡ技術の結果によってこのタンパク質を産生する細胞の溶解産物もしくは上清と接触させることによって、実施される。
【０１０７】
一般に、上記の精製したタンパク質は、少なくとも約４０％純粋、普通少なくとも約５０％純粋、通常少なくとも約６０％純粋、代表的には少なくとも約７０％純粋、より代表的には少なくとも約８０％純粋、好ましくは少なくとも約９０％純粋、そしてより好ましくは少なくとも約９５％純粋、そして特定の実施形態では、９７％〜９９％以上純粋である。純度は通常、重量基準であるが、モル基準であってもよい。種々のアッセイが、必要に応じて適用される。個々のタンパク質が精製され得、その後合わされ得る。
【０１０８】
（ＶＩ．抗体）
抗体は、天然に存在するネイティブの形態およびそれらの組換え形態の両方にて、種々の哺乳動物（例えば、霊長類）のＤＣＲＳ５タンパク質およびそのフラグメントに対して惹起され得、その差は、活性なレセプターに対する抗体は、ネイティブのコンフォメーションにしか存在しないエピトープを認識する可能性がより高いことである。ＤＣＲＳ５とＩＬ−１２Ｒβ１との組合せによって（例えば、機能的に）示されるエピトープを認識する抗体もまた、企図される。変性した抗原の検出はまた、例えば、ウェスタン分析において有用であり得る。抗イディオタイプ抗体もまた企図され、これは、天然のレセプターまたは抗体の、アゴニストもしくはアンタゴニストとして有用である。
【０１０９】
タンパク質の所定のフラグメントに対する抗体（結合フラグメントおよび単鎖バージョンを含む）が、このフラグメントと免疫原性タンパク質との結合体を用いた動物の免疫によって惹起され得る。モノクローナル抗体が、所望の抗体を分泌する細胞から調製される。これらの抗体は、正常タンパク質もしくは欠損タンパク質に対する結合についてスクリーニングされ得るか、またはアゴニスト活性もしくはアンタゴニスト活性についてスクリーニングされ得る。これらのモノクローナル抗体は通常、少なくとも約１ｍＭ、より通常は少なくとも約３００μＭ、代表的には少なくとも約１００μＭ、より代表的には少なくとも約３０μＭ、好ましくは少なくとも約１０μＭ、そしてより好ましくは少なくとも約３μＭまたはより良好なＫＤで結合する。
【０１１０】
本発明の抗体（抗原結合フラグメントを含む）は、有意な診断的価値または治療的価値を有し得る。これらは、レセプターに結合し、かつリガンドに対する結合を阻害するかまたはこのレセプターが生物学的応答を誘発する（例えば、その基質に作用する）能力を阻害する、強力なアンタゴニストであり得る。これらはまた、非中和抗体として有用であり得、そして毒素または放射性核種に対してカップリングされ、産生細胞（ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ ｃｅｌｌ）またはインターロイキンの供給源に局在した細胞に結合し得る。さらに、これらの抗体は、薬物または他の治療剤に対し、直接的またはリンカーによって間接的のいずれかで、結合され得る。
【０１１１】
本発明の抗体はまた、診断適用において有用であり得る。捕捉抗体または非中和抗体として、これらは、リガンド結合も基質の結合も阻害することなく、レセプターに結合し得る。中和抗体として、これらは、競合結合アッセイにおいて有用であり得る。これらはまた、リガンドを検出または定量する際に有用である。これらは、ウェスタンブロット分析のための、またはそれぞれのタンパク質の免疫沈降もしくは免疫精製のための、試薬として使用され得る。同様に、核酸およびタンパク質は、アフィニティー精製法またはアフィニティー検出法のために固体基材に固定され得る。この基材は、例えば、固体樹脂ビーズまたはプラスチックのシートであり得る。
【０１１２】
タンパク質フラグメントは、免疫原として使用されるべき融合ポリペプチドまたは共有結合ポリペプチドとして、他の物質（特に、ポリペプチド）と連結され得る。哺乳動物のサイトカインレセプターおよびフラグメントは、種々の免疫原（例えば、キーホールリンペットヘモシアニン、ウシ血清アルブミン、破傷風トキソイドなど）に融合または共有結合され得る。ポリクローナル抗血清の調製方法は、記載されている（例えば、Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ（１９６９）Ｈｏｅｂｅｒ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｄｉｖｉｓｉｏｎ，ＨａｒｐｅｒおよびＲｏｗ；Ｌａｎｄｓｔｅｉｎｅｒ（１９６２）Ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ ｏｆ Ｓｅｒｏｌｏｇｉｃａｌ Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ，Ｄｏｖｅｒ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ；Ｗｉｌｌｉａｍｓら（１９６７）Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，第１巻，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋを参照のこと）。代表的な方法は、抗原での動物の超免疫工程を包含する。次いで、この動物の血液は、反復免疫のすぐ後に収集され、そしてγグロブリンが単離される。
【０１１３】
いくつかの場合では、モノクローナル抗体を種々の哺乳動物宿主（例えば、マウス、齧歯類、霊長類、ヒトなど）から調製することが望ましい。このようなモノクローナル抗体を調製するための技術の説明は、以下に見出され得る：例えば、Ｓｔｉｔｅｓら編、Ｂａｓｉｃ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（第４版），Ｌａｎｇｅ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｌｏｓ Ａｌｔｏｓ，ＣＡおよびその中で引用される参考文献；ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ（１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ；Ｇｏｄｉｎｇ（１９８６）Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ（第２版）Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ；ならびに、特に、ＫｏｈｌｅｒおよびＭｉｌｓｔｅｉｎ（１９７５）Ｎａｔｕｒｅ ２５６：４９５−４９７（これは、モノクローナル抗体の生成の１つの方法を考察する）。この方法は、動物に免疫原を注射する工程を包含する。次いでこの動物は屠殺され、そしてその脾臓から細胞が採取され、次いでこれは骨髄腫細胞と融合される。この結果は、インビトロで繁殖し得る、ハイブリッド細胞または「ハイブリドーマ」である。次いで、ハイブリドーマの集団はスクリーニングされて個々のクローンが単離され、このクローンの各々は、上記免疫原に対する単一の抗体種を分泌する。このようにして、得られた個々の抗体種は、免疫原性物質上で認識される特異的部位に応じて生成された、免疫動物由来の不死化されそしてクローン化された単一Ｂ細胞の産物である。
【０１１４】
他の適切な技術は、抗原性ポリペプチドに対する、あるいはファージまたは類似のベクター中の抗体のライブラリーの選択に対する、リンパ球のインビトロ曝露の工程を包含する。Ｈｕｓｅら（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４６：１２７５−１２８１；およびＷａｒｄら（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ ３４１：５４４−５４６を参照のこと。本発明のポリペプチドおよび抗体（キメラ抗体またはヒト化抗体を含む）は、改変して、または改変せずに、使用され得る。頻繁に、このポリペプチドおよび抗体は、検出可能なシグナルを提供する物質を共有結合または非共有結合のいずれかで連結することによって標識される。適切な標識としては、放射性核種、酵素、基質、補因子、インヒビター、蛍光成分、化学発光成分、磁性粒子などが挙げられる。このような標識の使用を教示する特許としては、米国特許第３，８１７，８３７号；同第３，８５０，７５２号；同第３，９３９，３５０号；同第３，９９６，３４５号；同第４，２７７，４３７号；同第４，２７５，１４９号；および同第４，３６６，２４１号が挙げられる。また、組換えまたはキメラの免疫グロブリンが、生成され得る（Ｃａｂｉｌｌｙ，米国特許第４，８１６，５６７号を参照のこと）；またはトランスジェニックマウス中に作製され得る（Ｍｅｎｄｅｚら（１９９７）Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ １５：１４６−１５６を参照のこと）。
【０１１５】
本発明の抗体はまた、ＤＣＲＳ５のタンパク質またはペプチドを単離する際に、アフィニティークロマトグラフィーのために使用され得る。カラムが調製され得、ここで、この抗体は固体支持体（例えば、粒子（例えば、アガロース、Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）など））に結合されており、細胞溶解物をこのカラムに通過させ得、カラムを洗浄し得、続いて軽度変性剤（ｍｉｌｄ ｄｅｎａｔｕｒａｎｔ）の濃度を増大させ得、それによって、精製タンパク質が放出される。あるいは、このタンパク質を使用して、抗体を精製し得る。適切な交叉吸収（ｃｒｏｓｓ ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ）または除去が、適用され得る。
【０１１６】
この抗体をまた使用して、発現ライブラリーを特定の発現生成物についてスクリーニングし得る。通常、このような手順において使用される抗体は、抗体結合によって抗原の存在の容易な検出を可能にする部分を用いて標識される。
【０１１７】
サイトカインレセプターに対して惹起された抗体をまた用いて、抗イディオタイプ抗体を惹起する。これらは、このタンパク質の発現に関連した種々の免疫学的状態またはこのタンパク質を発現する細胞を、検出もしくは診断する際に有用である。これらはまた、天然に存在するリガンドについての競合的レセプターインヒビターまたは置換物であり得る、上記リガンドのアゴニストまたはアンタゴニストとして有用である。レセプターのサブユニットまたは組合せに対する特定の抗体は活性化抗体として役立ち得、この活性化抗体は、シグナル伝達をもたらし、それによって、例えば、リガンドアゴニストとして役立ち得る。
【０１１８】
規定された免疫原（例えば、配列番号２のアミノ酸配列からなる免疫原）に対して作製された抗体に特異的に結合するかまたは特異的に免疫反応性であるサイトカインレセプタータンパク質は代表的に、免疫アッセイにおいて決定される。この免疫アッセイは代表的に、例えば、配列番号２のタンパク質に対して惹起されたポリクローナル抗血清を使用する。この抗血清は、（好ましくは同じ種由来の）他のサイトカインレセプターファミリーのメンバー（例えば、ＩＬ−１２Ｒβ２レセプターサブユニットまたはＩＬ−６レセプターサブユニットｇｐ１３０に対して低い交叉反応性を有するように選択され、そしてあらゆるこのような交叉反応性は、この免疫アッセイにおける使用前に免疫吸収によって除去される。
【０１１９】
免疫アッセイにおいて使用するための抗血清を生成するために、このタンパク質（例えば、配列番号２のタンパク質）は、本明細書中に記載される通りに単離される。例えば、組換えタンパク質が、哺乳動物細胞株中で生成され得る。適切な宿主（例えば、マウスの近交系系統（例えば、Ｂａｌｂ／ｃ））は、代表的には標準的なアジュバント（例えば、フロイントアジュバント）および標準的なマウス免疫プロトコル（ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ，前出を参照のこと）を用いて選択されたタンパク質で免疫される。あるいは、本明細書中に開示された配列から誘導され、かつキャリアタンパク質に結合された合成ペプチドは、免疫原として使用され得る。ポリクローナル血清が収集され、そして免疫アッセイ（例えば、免疫原が固体支持体に固定された固相免疫アッセイ）において、この免疫原タンパク質に対して力価測定される。１０^４以上の力価を有するポリクローナル抗血清が選択され、そして他のサイトカインレセプターファミリーのメンバー（例えば、ｇｐ１３０またはＩＬ−１２Ｒβ１）に対するそれらの交叉反応性について、競合結合免疫アッセイ（例えば、ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ，前出，５７０−５７３頁に記載されるような競合結合免疫アッセイ）を用いて試験される。好ましくは、少なくとも２つのサイトカインレセプターファミリーのメンバーが、この決定において使用される。これらのサイトカインレセプターファミリーのメンバーは、本明細書中に記載されるような標準的な分子生物学およびタンパク質化学の技術を用いて、組換えタンパク質として生成され得、そして単離され得る。
【０１２０】
競合結合形式の免疫アッセイは、交叉反応性決定のために使用され得る。例えば、配列番号２のタンパク質は、固体支持体に固定され得る。このアッセイに添加されたタンパク質は、固定された抗原に対するこの抗血清の結合と競合する。上記タンパク質が、固定されたタンパク質に対するこの抗血清のタンパク質を競合する能力が、例えば、ｇｐ１３０またはＩＬ−１２Ｒβ２のタンパク質と比較される。上記タンパク質についての交叉反応性百分率が、算出される。上に列挙したタンパク質の各々と１０％未満の交叉反応性を有する抗血清が選択され、そしてプールされる。次いで、交叉反応性抗体は、上記のタンパク質を用いた免疫吸収によって、プールされた抗血清から除去される。
【０１２１】
次いで、免疫吸収された抗血清およびプールされた抗血清を、上述のように競合結合免疫アッセイにおいて使用し、第二のタンパク質を免疫原タンパク質（例えば、配列番号２のＤＣＲＳ５様タンパク質）に対して比較する。この比較を行うために、上記２つのタンパク質は、広い濃度範囲で各々アッセイされ、そして固定されたタンパク質に対するこの抗血清の結合の５０％を阻害するために必要とされる各タンパク質の量が決定される。必要とされる上記第二のタンパク質の量が、必要とされる選択されたタンパク質のタンパク量の２倍よりも少ないならば、上記第二のタンパク質は、この免疫原に対して生成された抗体に特異的に結合するといわれる。
【０１２２】
これらのサイトカインレセプタータンパク質は、多くの同定された遺伝子を含む相同タンパク質のファミリーのメンバーであることが理解される。特定の遺伝子生成物（例えば、ＤＣＲＳ５）に関して、この用語は、本明細書中に開示されたアミノ酸配列だけでなく、対立遺伝子改変体、非対立遺伝子改変体または種改変体である他のタンパク質をもいう。この用語が、従来の組換え技術（例えば、単一部位変異）を用いる意図的な変異によって、またはそれぞれのタンパク質をコードするＤＮＡの短いセクションを切り出すことによって、または新たなアミノ酸を置換することによって、または新たなアミノ酸を付加することによって、導入された非天然変異を含むこともまた理解される。このような重要でない変化は、代表的に、元の分子の免疫個性（ｉｍｍｕｎｏｉｄｅｎｔｉｔｙ）および／またはその生物学的活性を実質的に維持する。従って、これらの変化としては、指定された天然に存在するＤＣＲＳ５タンパク質と特異的に免疫反応性であるタンパク質が挙げられる。変化されたタンパク質の生物学的特性は、適切な細胞株中でこのタンパク質を発現し、そして適切な効果（例えば、トランスフェクトされたリンパ球に対する効果）を測定することによって決定され得る。重要でないとみなされる特定のタンパク質改変としては、全体として、サイトカインレセプターファミリーについて上述の通りの、類似の化学的特性を有するアミノ酸の保存的置換が挙げられる。タンパク質をサイトカインレセプターのタンパク質と最適に整列化することによって、また免疫的個性を決定するために本明細書中に記載される従来の免疫アッセイを使用することによって、本発明のタンパク質組成物を決定し得る。
【０１２３】
さらに、レセプターサブユニットに対する抗体は、機能的レセプターに対するリガンド結合を立体的にブロックするのに役立ち得る。このような抗体は、サブユニット単独またはＤＣＲＳ５とＩＬ−１２Ｒβ１との組合せのいずれかに対して惹起され得る。抗体アンタゴニストが生じる。
【０１２４】
（ＶＩＩ．キット、診断剤および定量）
天然に存在する形態および組換え形態の両方の、本発明のサイトカインレセプター様分子は、キットおよびアッセイ方法において有用である。例えば、これらの方法はまた、結合活性（例えば、これらのタンパク質についてのリガンドの結合活性）についてスクリーニングするために適用され得る。アッセイを自動化する数通りの方法が近年開発されており、その結果、１年間あたり数万個の化合物のスクリーニングが可能である（例えば、ＢＩＯＭＥＫ自動化ワークステーション，Ｂｅｃｋｍａｎ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ，Ｆｏｄｏｒら（１９９１）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５１：７６７−７７３を参照のこと）。後者（Ｆｏｄｏｒら（１９９１））は、固体支持体上で合成された複数の規定されたポリマーによって結合を試験するための手段を記載する。リガンドまたはアゴニスト／アンタゴニスト相同タンパク質についてスクリーニングするための適切なアッセイの開発は、本発明によって提供されるような活性状態の、大量の精製された可溶性サイトカインレセプターの入手可能性によって大いに促進され得る。
【０１２５】
精製されたＤＣＲＳ５は、上記のリガンドスクリーニング技術における使用のためにプレート上に直接コーティングされ得る。しかしながら、これらのタンパク質に対する非中和抗体は、例えば、診断用途において有用な、それぞれのレセプターを固相に固定するための捕捉抗体として使用され得る。
【０１２６】
本発明はまた、タンパク質またはそのリガンドの存在を検出するための種々の診断キットおよび診断方法における、ＤＣＲＳ５および／またはｐ１９、それらのフラグメント、それらのペプチドならびにそれらの融合生成物の使用を企図する。あるいは、またはさらに、この分子に対する抗体は、上記キットおよび方法に組み込まれ得る。代表的には、このキットは、ＤＣＲＳ５ペプチドおよび／もしくはｐ１９ペプチドまたはＤＣＲＳ５遺伝子セグメントおよび／もしくはｐ１９遺伝子セグメントまたは一方もしくは他方を認識する試薬のいずれかを含む区画を有する。代表的に、認識試薬は、ペプチドの場合、レセプターもしくは抗体であり、または遺伝子セグメントの場合、通常、ハイブリダイゼーションプローブである。他のキット成分は、上記リガンド／レセプター対合のｐ４０ポリペプチド、ｐ１９（ＩＬ−Ｂ３０としても公知）ポリペプチド、またはＩＬ−１２Ｒβ１ポリペプチドに関連した他のタンパク質または試薬を含み得る。
【０１２７】
サンプル中のＤＣＲＳ５の濃度を決定するための好ましいキットは、代表的に、ＤＣＲＳ５に対して既知の結合親和性を有する標識化合物（例えば、リガンドまたは抗体）、ポジティブコントロールとしての天然に存在するＤＣＲＳ５かまたは組換えＤＣＲＳ５の供給源、および結合した標識化合物を遊離の標識化合物から分離するための手段（例えば、試験サンプル中のＤＣＲＳ５を固定するための固相）を含む。試薬を含む区画および使用説明書が、通常提供される。適切な核酸または適切なタンパク質を含有するキットもまた、提供される。
【０１２８】
哺乳動物のＤＣＲＳ５もしくはペプチドフラグメントまたはレセプターフラグメントに特異的な抗体（抗原結合フラグメントを含む）は、上昇したレベルのリガンドおよび／またはそのフラグメントの存在を検出するための診断適用において有用である。診断アッセイは、均質（遊離試薬と抗体−抗原複合体との間の分離工程を伴わない）または不均質（分離工程を伴う）であり得る。種々の商業的アッセイ（例えば、放射免疫アッセイ（ＲＩＡ）、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、酵素免疫アッセイ（ＥＩＡ）、酵素増幅免疫測定法（ＥＭＩＴ）、基質標識蛍光免疫アッセイ（ＳＬＦＩＡ）など）が存在する。例えば、非標識抗体が、標識されかつサイトカインレセプターまたはその特定のフラグメントに対する抗体を認識する第二の抗体を用いることによって用いられ得る（例えば、ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ（上記）、およびＣｏｌｉｇａｎ（編、１９９１および定期発行の補遺）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ Ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｇｒｅｅｎｅ／Ｗｉｌｅｙ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋを参照のこと）。
【０１２９】
抗イディオタイプ抗体は、サイトカインレセプターのアゴニストまたはアンタゴニストとしての役目を果たす、同様の用途を有し得る。これらは、適切な環境下では治療試薬として有用である。
【０１３０】
頻繁に、診断アッセイについての試薬は、このアッセイの感度を最適化するようにキット中にて供給される。本発明に関して、アッセイ、プロトコルおよび標識の性質に依存して、標識抗体もしくは非標識抗体、または標識リガンドのいずれかが提供される。これは通常、他の添加物（例えば、緩衝剤、安定剤、シグナル生成のために必要な物質（例えば、酵素についての基質）など）と組み合わせた状態である。好ましくは、上記キットはまた、内容物の適切な使用および使用後の内容物の廃棄に関する使用説明書を含む。代表的には、上記キットは、各々の有用な試薬についての区画を有し、かつ試薬の適切な使用および廃棄に関する使用説明書を含む。望ましくは、上記試薬は、乾燥した凍結乾燥粉末として提供され、ここで、この試薬は、アッセイを実施するために適切な濃度を有する水性媒質中にて再構成され得る。
【０１３１】
診断アッセイの上述の構成成分は、改変することなく使用され得るか、または種々の方法で改変され得る。例えば、標識は、検出可能なシグナルを直接的または間接的に提供する部分を共有結合的または非共有結合的に連結することによって達成され得る。これらのアッセイの多くでは、試験化合物、サイトカインレセプターまたはそれに対する抗体が、直接的または間接的のいずれかで標識され得る。直接的標識についての可能性は、標識基（放射性標識（例えば、^１２５Ｉ）、酵素（米国特許第３，６４５，０９０号）（例えば、ペルオキシダーゼおよびアルカリホスファターゼ）、ならびに蛍光強度、波長シフト、または蛍光偏光における変化をモニタリングが可能である蛍光標識（米国特許第３，９４０，４７５号））を含む。間接的標識の可能性は、一つの構成要素のビオチン化、続いて上記標識基のうちの１つにカップリングしたアビジンに対する結合を含む。
【０１３２】
結合したリガンドを遊離のリガンドから分離するか、あるいは結合した試験化合物を遊離の試験化合物から分離する、多数の方法がまた存在する。サイトカインレセプターは、種々のマトリックス上に固定され得、続いて洗浄され得る。適切なマトリックスとしては、ＥＬＩＳＡプレート、ＥＬＩＳＡフィルター、およびＥＬＩＳＡビーズのような、プラスチックが挙げられる。このレセプターをマトリックスに固定する方法としては、プラスチックへの直接接着、捕捉抗体の使用、化学的カップリング、およびビオチン・アビジンが挙げられるが、これらに限定されない。このアプローチにおける最後の工程は、例えば、有機溶媒（例えば、ポリエチレングリコール）または塩（例えば、硫酸アンモニウム）を利用する方法を含む数通りの方法のうちのいずれかによる、抗体／抗原複合体の沈澱を含む。他の適切な分離技術としては、Ｒａｔｔｌｅら（１９８４）Ｃｌｉｎ．Ｃｈｅｍ．３０（９）：１４５７−１４６１に記載されるフルオレセイン抗体磁化性粒子法および米国特許第４，６５９，６７８号に記載されるような二重抗体磁性粒子分離が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１３３】
タンパク質またはフラグメントを種々の標識に対して連結するための方法は、ペプチド結合を形成するためのカルボジイミドもしくは活性エステルの使用、メルカプト基と活性化ハロゲン（例えば、クロロアセチル）との反応によるチオエーテルの形成、または連結のための活性化されたオレフィン（例えば、マレイミド）などのいずれかを介した、活性化されたカルボキシル基の使用を含み得る。融合タンパク質はまた、これらの適用において用途を見出す。
【０１３４】
本発明の別の診断的局面は、サイトカインレセプターの配列から得られたオリゴヌクレオチド配列またはポリヌクレオチド配列の使用を含む。これらの配列は、免疫学的障害を有することが疑われる患者におけるそれぞれのサイトカインレセプターのレベルを検出するためのプローブとして使用され得る。ＲＮＡおよびＤＮＡの両方のヌクレオチド配列の調製、この配列の標識、およびこの配列の好ましい大きさは、当該分野において周知である。通常、オリゴヌクレオチドプローブは、少なくとも約１４ヌクレオチド、通常少なくとも約１８ヌクレオチドを有し、そしてポリヌクレオチドプローブは、数キロ塩基までであり得る。種々の標識が用いられ得、最も通常は放射性核種（特に^３２Ｐ）が用いられ得る。しかしながら、ポリヌクレオチド中への導入のためにビオチン改変されたヌクレオチドを用いるような、他の技術もまた用いられ得る。次いで、そのビオチンは、アビジンまたは抗体への結合のための部位として役立ち、アビジンまたは抗体は、広範な種類の標識（例えば、放射性核種、蛍光剤、酵素など）で標識され得る。あるいは、特定の二重鎖（ＤＮＡ二重鎖、ＲＮＡ二重鎖、ＤＮＡ−ＲＮＡハイブリッド二重鎖、またはＤＮＡ−タンパク質二重鎖を含む）を認識し得る抗体が用いられ得る。次いで、この抗体は標識され得、そしてアッセイが実施され得、ここで、この二重鎖は表面に結合されており、その結果、この表面上で二重鎖が形成されると、この二重鎖に結合した抗体の存在が検出され得る。新規のアンチセンスＲＮＡに対するプローブの使用は、核酸ハイブリダイゼーション、プラスおよびマイナスのスクリーニング、組換えプロービング（ｐｒｏｂｉｎｇ）、ハイブリッド放出翻訳（ｈｙｂｒｉｄ ｒｅｌｅａｓｅｄ ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ）（ＨＲＴ）およびハイブリッド阻害翻訳（ｈｙｂｒｉｄ ａｒｒｅｓｔｅｄ ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ）（ＨＡＲＴ）のような従来技術において実施され得る。これはまた、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）のような増幅技術を含む。
【０１３５】
他のマーカーの定性的存在または定量的存在についても試験する診断キットもまた、企図される。診断または予後は、マーカーとして使用される複数の指標の組合せに依存し得る。従って、キットは、マーカーの組合せについて試験し得る（例えば、Ｖｉａｌｌｅｔら（１９８９）Ｐｒｏｇｒｅｓｓ ｉｎ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ Ｒｅｓ．１：８９−９７を参照のこと）。機能的レセプターシグナル伝達の相違を反映し得る多型変異（ｖａｒｉａｔｉｏｎ）の検出は、治療ストラテジーを決定する際に有用であり得る。リガンドに対する、より大きいかまたはより小さい応答を反映する変異は、応答性／非応答性の患者プールの部分集合化（ｓｕｂｓｅｔｔｉｎｇ）を可能にし得る。
【０１３６】
本発明の診断方法は、ＤＣＲＳ５もしくはｐ１９の発現または活性の測定において使用するための、試験被験体（例えば、免疫障害に罹患ている患者）に由来する試料を提供する。非複合体化形態および（例えば、ＩＬ−１２β１と複合体化したＤＣＲＳ５のような）複合体化形態の両方のＤＣＲＳ５が、測定され得る。非複合体化形態および（例えば、ｐ４０と複合体化したｐ１９のような）複合体化形態の両方のｐ１９が、測定され得る。発現または活性は、対照被験体または対照試料に由来する発現または活性と比較され得る。対照試料は、例えば、免疫障害に罹患した患者における非罹患組織または非炎症組織の試料であり得る。対照被験体または対照試料に由来する発現または活性は、所定の値として提供され得る（例えば、対照被験体の統計学的に適切な集団から得られる）。
【０１３７】
（ＶＩＩＩ．治療有用性）
本発明は、有意な治療的価値を有する試薬を提供する（例えば、Ｌｅｖｉｔｚｋｉ（１９９６）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．８：２３９−２４４を参照のこと）。天然に存在するサイトカインレセプターかまたは組換えサイトカインレセプター、そのフラグメント、ムテインレセプターおよび抗体は、このレセプターまたは抗体に対する結合親和性を有すると同定された化合物とともに、このレセプターまたはそれらのリガンドの異常な発現を示す状態の処置において有用である。このような異常は、代表的に、免疫学的障害によって発現する（例えば、ＷＯ ０１／１８０５１を参照のこと）。さらに、本発明は、上記リガンドの異常な発現または上記リガンドに対する応答異常な誘発に関連する種々の疾患または障害において治療的価値を提供する。例えば、ｐ４０／ＩＬ Ｂ３０リガンドは、細胞媒介性免疫（例えば、抗腫瘍活性）の発生、体液性免疫および細胞性免疫の上昇、ならびに抗ウイルス効果に関与することが示唆されている。特に、上記リガンドは、ＮＫ細胞およびＴ細胞を活性化するようである。治療は、ＩＬ−１８、ＩＬ−１２、ＴＮＦ、ＩＦＮγ、放射線治療／化学療法、アジュバントまたは抗腫瘍化合物、抗ウイルス化合物もしくは抗真菌化合物と組み合わされ得る。
【０１３８】
逆に、ＴＮＦ、ＩＦＮγ、ＩＬ−１８もしくはＩＬ−１２のアンタゴニストと、またはＩＬ−１０もしくはステロイドと組み合わされ得るアンタゴニストは、慢性Ｔｈ１媒介性疾患、自己免疫、または移植片および／もしくは拒絶状態、多発性硬化症、乾癬、慢性炎症状態、慢性関節リウマチ、変形性関節症あるいは炎症性腸疾患において示され得る。アンタゴニストは、このレセプターサブユニットに対する抗体、可溶性レセプター構築物、またはこのレセプターサブユニットのうちの１つ以上に対する、アンチセンス核酸、ＲＮＡ干渉核酸の形態をとり得る。ｐ４０／ｐ１９リガンドとレセプターサブユニットＤＣＲＳ５およびＩＬ−１２Ｒとの適合は、このアゴニストおよびアンタゴニストの使用のための指標についての洞察を提供する。
【０１３９】
治療的には、記載されるｐ４０／ｐ１９活性に基づいて、このサイトカインのアンタゴニストは、例えば、可溶性ＩＬ−１２Ｒβ１を伴うかもしくは伴わない可溶性ＤＣＲＳ５、またはいずれかのレセプターサブユニットに対する抗体によってもたらされ得る。アンタゴニストは、望ましくない免疫応答もしくは炎症応答のインヒビターとして、記憶Ｔ細胞を標的とするために、あるいはＩＬ−１２／ＩＬ−１２Ｒアンタゴニスト、または他の抗炎症剤もしくは免疫抑制剤と組合せて、有用であり得る。臨床的指標は、慢性の炎症または移植状態であり得る。種々の多型は、レセプターの機能を増強または減少させ得、そして優性の場合、治療剤として有用であり得る。このような改変体の同定は、応答性または非応答性の患者のプールの部分集合化を可能にし得る。試薬は、検出試薬もしくは標識試薬または記憶Ｔ細胞および／もしくはＮＫ細胞についての除去試薬として有用であり得る。
【０１４０】
本発明は、ヒトｐ１９（配列番号５）またはヒトＤＣＲＳ５（配列番号１）に対するアンチセンス核酸またはＲＮＡ干渉核酸を使用する処置の方法を企図する（例えば、ＡｒｅｎｚおよびＳｃｈｅｐｅｒｓ（２００３）Ｎａｔｕｒｗｉｓｓｅｎｓｃｈａｆｔｅｎ ９０：３４５−３５９；ＳａｚａｎｉおよびＫｏｌｅ（２００３）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１１２：４８１−４８６；Ｐｉｒｏｌｌｏら（２００３）Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ ９９：５５−７７；Ｗａｎｇら（２００３）Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｖｅｌ．１３：１６９−１８９；Ｈａｒａｏｕｉら（２０００）Ｃｕｒｒ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１：２１７−２３３；Ａｌｖａｒｅｚら（２００１）Ｃｕｒｒ．Ｐｈａｒｍ．Ｄｅｓ．７：１０５９−１０８１；ＳａｎｄｂｏｒｎおよびＴａｒｇａｎ（２００２）Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．１２２：１５９２−１６０８を参照のこと）。
【０１４１】
遺伝子治療は、例えば、腫瘍免疫治療のためのアジュバントとして、所望の細胞集団をｐ４０／ｐ１９リガンドに対して応答性にして、腫瘍浸潤リンパ球、Ｔ細胞、またはＮＫ細胞の活性化を容易にし得る。アンチセンスストラテジーまたはＲＮＡ干渉ストラテジーを適用して、例えば、レセプター応答性を妨害し得る。
【０１４２】
種々の異常な状態は、ノーザンブロット分析によってＩＬ−１２ ｐ４０および／またはｐ１９の両方のｍＲＮＡを生成することが示されている細胞型において公知である。Ｂｅｒｋｏｗ編、Ｔｈｅ Ｍｅｒｃｋ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ａｎｄ Ｔｈｅｒａｐｙ，Ｍｅｒｃｋ ＆ Ｃｏ．，Ｒａｈｗａｙ，Ｎ．Ｊ．；Ｔｈｏｒｎら，Ｈａｒｒｉｓｏｎ’ｓ Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｏｆ Ｉｎｔｅｒｎａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ，Ｎ．Ｙ．；およびＷｅａｔｈｅｒａｌｌら編、Ｏｘｆｏｒｄ Ｔｅｘｔｂｏｏｋ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｏｘｆｏｒｄを参照のこと。多くの他の医学的状態および疾患は、本明細書中に提供されるアゴニストまたはアンタゴニストによる処置に対して応答性である。例えば、ＳｔｉｔｅｓおよびＴｅｒｒ編（１９９１）Ｂａｓｉｃ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ａｐｐｌｅｔｏｎ ａｎｄ Ｌａｎｇｅ，Ｎｏｒｗａｌｋ，Ｃｏｎｎｅｃｔｉｃｕｔ；ならびにＳａｍｔｅｒら編、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｄｉｓｅａｓｅｓ Ｌｉｔｔｌｅ，Ｂｒｏｗｎ ａｎｄ Ｃｏ．を参照のこと。処置についての他の可能な指標としては、骨再造形、性機能障害、神経変性疾患の予防、痴呆、ストレスなどが挙げられる。これらの問題は、本明細書中に提供される組成物を用いた予防または処置に対して感受性である。
【０１４３】
組換えサイトカインレセプター、ムテイン、それらに対するアゴニストもしくはアンタゴニスト抗体、または抗体は、精製され得、次いで患者に投与され得る。これらの試薬は、治療的使用のために、例えば、生理学的に無害の安定剤および賦形剤を伴う従来の薬学的に受容可能なキャリア中または希釈剤中で、さらなる活性成分と組み合わされ得る。これらの組合せは、無菌（例えば、濾過処理した）であり得、そして（例えば、投薬バイアル中での凍結乾燥または安定化された水性調製物中での貯蔵によって）投薬形態にされ得る。本発明はまた、補体結合性ではない、抗体またはその結合フラグメントの使用を企図する。
【０１４４】
サイトカインレセプターまたはそのフラグメントを用いたリガンドスクリーニングが、このレセプターに対する結合親和性を有する分子を同定するために実施され得る。次いで、固有の刺激活性をブロックし得る競合結合を推定のリガンドが提供し得るか否かを決定するために、その後の生物学的アッセイが利用され得る。レセプターフラグメントは、リガンドの活性をブロックするという点で、ブロッカーまたはアンタゴニストとして使用され得る。同様に、固有の刺激活性を有する化合物は、このレセプターを活性化し得、従って、この化合物は、リガンドの活性を刺激する（例えば、シグナル伝達を誘導する）という点で、アゴニストである。本発明はさらに、サイトカインレセプターに対する抗体の、アンタゴニストとしての治療的使用を企図する。
【０１４５】
効果的な治療のために必要な試薬の量は、多くの異なる要因（投与手段、標的部位、試薬の生理学的寿命、薬理学的寿命、患者の生理学的状態、および投与される他の医薬（ｍｅｄｉｃａｎｔ）を含む）に依存する。したがって、処置投薬量は、安全性および効力を最適化するために力価測定されるべきである。代表的に、インビトロで使用される投薬量は、これらの試薬のインサイチュでの投与のために有用な量における有用な指針を提供し得る。特定の障害の処置のための有効用量の動物試験は、ヒトでの投薬量のさらなる予測指標を提供する（例えば、Ｇｉｌｍａｎら編（１９９０）Ｇｏｏｄｍａｎ ａｎｄ Ｇｉｌｍａｎ’ｓ：Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｅｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，第８版，Ｐｅｒｇａｍｏｎ Ｐｒｅｓｓ；およびＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，第１７版（１９９０），Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐｅｎｎ．を参照のこと）。投与方法は、それらの中および以下で、例えば、経口投与、静脈内投与、腹腔内投与または筋肉内投与、経皮拡散などについて考察されている。薬学的に受容可能なキャリアとしては、水、食塩水、緩衝液、および、例えば、Ｍｅｒｃｋ Ｉｎｄｅｘ，Ｍｅｒｃｋ ＆ Ｃｏ．，Ｒａｈｗａｙ，Ｎｅｗ Ｊｅｒｓｅｙに記載される他の化合物が挙げられる。推定リガンドとそのレセプターとの間の親和性結合または代謝回転数が有望な高さであるので、低投薬量のこれらの試薬は、有効であると最初に期待される。そして上記シグナル伝達経路は、極めて少量のリガンドが効果を有し得ることを示唆する。したがって、投薬量の範囲は通常、適切なキャリアを伴って、１ｍＭ濃度未満、代表的には約１０μＭ濃度未満、通常約１００ｎＭ未満、好ましくは約１０ｐＭ（ピコモル）未満、そして最も好ましくは約１ｆＭ（フェムトモル）未満の量であると期待される。徐放処方物または徐放装置がしばしば、連続投与のために利用される。
【０１４６】
サイトカインレセプター、そのフラグメント、ならびに抗体またはそのフラグメント、アンタゴニスト、およびアゴニストは、処置されるべき宿主に直接投与され得るか、または、その化合物の大きさに依存して、それらの投与前に、それらをキャリアタンパク質（例えば、オボアルブミンまたは血清アルブミン）に結合させることが所望され得る。治療処方物は、多くの従来の投薬処方物において投与され得る。活性成分を単独で投与することは可能であるが、活性成分を薬学的処方物として提示することが好ましい。処方物は、上記に規定されるような、少なくとも１つの活性成分を、１種以上のその受容可能なキャリアと一緒に含む。各々のキャリアは、他の成分と適合性でありかつ患者に対して有害でないという意味で、薬学的および生理学的の両方で受容可能でなければならない。処方物としては、経口投与、直腸投与、鼻腔内投与または非経口投与（皮下投与、筋肉内投与、静脈内投与および皮内投与を含む）に適切な処方物が挙げられる。上記処方物は、単位投薬量形態で便利に提示され得、そして製薬分野で周知の方法によって調製され得る。例えば、Ｇｉｌｍａｎら編（１９９０）Ｇｏｏｄｍａｎ ａｎｄ Ｇｉｌｍａｎ’ｓ：Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｅｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，第８版，Ｐｅｒｇａｍｏｎ Ｐｒｅｓｓ；およびＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，第１７版（１９９０），Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐｅｎｎ．；Ａｖｉｓら編（１９９３）Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ：Ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ Ｍｅｄｉｃａｔｉｏｎｓ Ｄｅｋｋｅｒ，ＮＹ；Ｌｉｅｂｅｒｍａｎら編（１９９０）Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ：Ｔａｂｌｅｔｓ Ｄｅｋｋｅｒ，ＮＹ；およびＬｉｅｂｅｒｍａｎら編（１９９０）Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ：Ｄｉｓｐｅｒｓｅ Ｓｙｓｔｅｍｓ Ｄｅｋｋｅｒ，ＮＹを参照のこと。本発明の治療は、他の治療剤（特に、他のサイトカインレセプターファミリーのメンバーのアゴニストまたはアンタゴニスト）と組み合わされ得るかまたはそれとともに使用され得る。
【０１４７】
本発明は、喘息またはアレルギーの処置および診断のための、試薬および方法を提供する。これらの障害は、ＩＬ−６、ＩＬ−１９、ＣＸＣＬ１（ＧＲＯαとしても公知）、ＩＬ−１７、およびＧＭ−ＣＳＦの増大した発現または活性に関連する（例えば、Ｃｅｍｂｒｚｙｎｓｋａ−Ｎｏｗａｋら（１９９８）Ａｒｃｈ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｈｅｒ．Ｅｘｐ．（Ｗａｒｓｚ）４６：３８１−３８６；Ｈｓｉｅｈら（１９９６）Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９８：５８０−５８７；Ｐｒａｕｓｅら（２００３）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．４６２：１９３−１９８．Ｍｏｌｅｔら（２００１）Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１０８：４３０−４３８．Ｌｉｎｄｅｎ（２００１）Ｉｎｔ．Ａｒｃｈ．Ａｌｌｅｒｇｙ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１２６：１７９−１８４；Ｃａｔｅｓら（２００３）Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１１：１０７６−１０８６；Ｙａｍａｓｈｉｔａら（２００２）Ｃｅｌｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２１９：９２−９７を参照のこと）。ＣＯＰＤ（ＩＬ−６、ＣＸＣＬ１、およびＧＭ−ＣＳＦの増大した発現または活性に関連した障害）のための試薬および方法もまた、提供される（例えば、Ｃｈｕｎｇら（２００１）Ｅｕｒ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｊ．Ｓｕｐｐｌ．３４：５０ｓ−５９ｓ；Ｔｒａｖｅｓら（２００２）Ｔｈｏｒａｘ ５７：５９０−５９５；Ｐｒｏｆｉｔａら（２００３）Ｔｈｏｒａｘ ５８：５７３−５７９を参照のこと）。
【０１４８】
本発明はまた、慢性関節リウマチ（ＩＬ−６、ＣＸＣＬ１、ＩＬ−１７、およびＧＭ−ＣＳＦの増大した発現または活性に関する障害）のための試薬および方法を提供する（例えば、ＧｅｎｔｉｌｅｔｔｉおよびＦａｖａ（２００３）Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｈｅｕｍ．４８：１４７１−１４７４；Ｎａｋａｈａｒａら（２００３）Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｈｅｕｍ．４８：１５２１−１５２９；Ｋｏｎｉｇら（２０００）Ｖｉｒｃｈｏｗｓ Ａｒｃｈ．４３６：４４９−４５８；Ｋｏｃｈら（１９９５）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５５：３６６０−３６６６；Ｂｏｒｚｉら（１９９９）ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ．４５５：２３８−２４２；Ｂｏｉａｒｄｉら（１９９９）Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．１７：４１９−４２５；Ｈｏｇａｎら（１９９４）Ｃｙｔｏｋｉｎｅ ６：６１−６９；Ｋｅｈｌｅｎら（２００２）Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１２７：５３９−５４６；Ｃｏｏｋら（２００１）Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｅｓ．３：２９３−２９８を参照のこと）。
【０１４９】
炎症性腸障害（ＩＢＤ）（ＩＬ−６、ＣＸＣＬ−１、ＩＬ−１７、およびＧＭ−ＣＳＦの増大した発現または活性によって特徴付けられる障害）の処置および診断のための試薬および方法もまた、提供される（例えば、Ｒａｈｂａｒら（２００３）Ｉｎｆｌａｍｍ．Ｂｏｗｅｌ Ｄｉｓ．９：１５４−１６１；Ｉｓａａｃｓら（１９９２）Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．１０３：１５８７−１５９５；Ｉｍａｄａら（２００１）Ｓｃａｎｄ．Ｊ．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．３６：８５４−８６４；Ｂｒａｎｄｔら（１９９８）Ｅｕｒ．Ｃｙｔｏｋｉｎｅ Ｎｅｔｗ．９：６４７−６５３；Ｆｕｊｉｎｏら（２００３）Ｇｕｔ ５２：６５−７０；Ｎｉｅｌｓｅｎら（２００３）Ｓｃａｎｄ．Ｊ．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．３８：１８０−１８５；Ｃａｒｌｓｏｎら（２００２）Ｇｕｔ ５０：５０１−５０６を参照のこと）。さらに、皮膚の炎症性障害（例えば、乾癬（ＩＬ−６、ＣＸＣＬ１、ＩＬ−１７、およびＧＭ−ＣＳＦの増大した発現または活性に関する障害のファミリー））の診断および処置のための試薬および方法が包含される（例えば、ＩｓｈｉｈａｒａおよびＨｉｒａｎｏ（２００２）Ｃｙｔｏｋｉｎｅ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ Ｒｅｖ．１３：３５７−３６８；Ｇｉｌｌｉｔｚｅｒら（１９９６）Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．１０７：７７８−７８２；Ｓｔｅｕｄｅら（２００２）Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．１１９：１２５４−１２６０；Ａｌｂａｎｅｓｉら（２０００）Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．１１５：８１−８７；Ｓｃｈｏｎら（２０００）Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．１１４：９７６−９８３を参照のこと）。
【０１５０】
（ＩＸ．スクリーニング）
ＤＣＲＳ５またはそのフラグメントを用いた薬物スクリーニングが、このレセプターサブユニットに対して結合親和性を有する化合物を同定するために実施され得る（関連成分の単離を含む）。次いで、この化合物が固有の刺激活性を有するか否かを、その結果、このリガンドの活性をブロックするという点でこの化合物がブロッカーまたはアンタゴニストであるか否かを決定するために、その後の生物学的アッセイが利用され得る。
【０１５１】
さらに、ｐ４０／ｐ１９リガンドと、ＩＬ−１２Ｒβ１を有するＤＣＲＳ３の機能的レセプターとの適合は、正のシグナル伝達制御を有するアンタゴニストおよびアゴニストについてのスクリーニングを可能にする。低分子スクリーニングまたは抗体スクリーニングが行われ得る。
【０１５２】
薬物スクリーニングの１つの方法は、別のサイトカインレセプターサブユニット（例えば、ＩＬ−１２Ｒβ１）との組み合わせでＤＣＲＳ５を発現する組換えＤＮＡ分子で安定に形質転換された、真核生物宿主細胞または原核生物宿主細胞を利用する。このシグナル伝達は、ＳＴＡＴ４を使用すると考えられる。他の機能的レセプターから孤立してレセプターを発現する細胞が単離され得る。生存形態または固定形態のいずれかのこのような細胞は、標準的な抗体／抗原結合アッセイまたはリガンド／レセプター結合アッセイのために使用され得る（例えば、細胞性応答を検出するための高感度の方法を記載する、Ｐａｒｃｅら（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４６：２４３−２４７、およびＯｗｉｃｋｉら（１９９０）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８７：４００７−４０１１を参照のこと）。競合アッセイは特に有用であり、ここで、上記細胞は、そのリガンドに対する既知の結合親和性を有する、標識されたレセプターまたは抗体（例えば、^１２５Ｉ抗体）およびその結合組成物に対する結合親和性が測定される試験サンプルと、接触およびインキュベートされる。次いで、リガンド結合の程度を評価するために、結合した標識結合組成物および遊離の標識結合組成物が分離される。結合した試験化合物の量は、既知の供給源に対する標識レセプター結合の量に反比例する。結合したリガンドを遊離のリガンドから分離してリガンド結合の程度を評価するために、多くの技術が使用され得る。この分離工程は、代表的に、フィルターへの付着とその後の洗浄、プラスチックへの接着とその後の洗浄、または細胞膜の遠心分離などの手順を含み得る。生存細胞はまた、サイトカイン媒介機能（例えば、ＳＴＡＴ４シグナル伝達など）に対する薬物の効果についてスクリーニングするために、使用され得る。いくつかの検出方法（例えば、近接高感度検出システム）は、分離工程の省略を可能にする。
【０１５３】
本発明の広範な範囲は、以下の実施例を参照して最良に理解される。これらの実施例は、本発明を特定の実施形態に限定することを意図しない。
【実施例】
【０１５４】
（Ｉ．一般的方法）
標準的方法のいくつかは、例えば、Ｍａｎｉａｔｉｓら（１９８２）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ；Ｓａｍｂｒｏｏｋら（１９８９）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（第２版），第１巻〜第３巻，ＣＳＨ Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ；またはＡｕｓｕｂｅｌら（１９８７および補遺）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｇｒｅｅｎｅ／Ｗｉｌｅｙ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋにおいて記載または参照される。タンパク質精製のための方法としては、硫酸アンモニウム沈澱、カラムクロマトグラフィー、電気泳動、遠心分離、結晶化などの方法が挙げられる。例えば、Ａｕｓｕｂｅｌら（１９８７および定期発行の補遺）；Ｃｏｌｉｇａｎら編（１９９６および定期発行の補遺）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ Ｉｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｇｒｅｅｎｅ／Ｗｉｌｅｙ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ；Ｄｅｕｔｓｃｈｅｒ（１９９０）「Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ」Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，第１８２巻，およびこのシリーズの他の巻；ならびにタンパク質精製製品の使用についての製造業者（例えば、Ｐｈａｒｍａｃｉａ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，Ｎ．Ｊ．，またはＢｉｏ−Ｒａｄ，Ｒｉｃｈｍｏｎｄ，ＣＡ）の文献を参照のこと。組換え技術との組合せは、適切なセグメント（例えば、ＦＬＡＧ配列、またはプロテアーゼによって除去可能な配列を介して融合され得る等価物）に対する融合を可能にする。例えば、Ｈｏｃｈｕｌｉ（１９９０）「Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｗｉｔｈ Ｍｅｔａｌ Ｃｈｅｌａｔｅ Ａｂｓｏｒｂｅｎｔ」Ｓｅｔｌｏｗ編、Ｇｅｎｅｔｉｃ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅ ａｎｄ Ｍｅｔｈｏｄｓ １２：８７−９８，Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ，Ｎ．Ｙ．；およびＣｒｏｗｅら（１９９２）ＱＩＡｅｘｐｒｅｓｓ：Ｔｈｅ Ｈｉｇｈ Ｌｅｖｅｌ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ＆ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ ＱＩＡＧＥＮ，Ｉｎｃ．，Ｃｈａｔｓｗｏｒｔｈ，ＣＡを参照のこと。
【０１５５】
コンピュータ配列分析を、例えば、ＧＣＧソース（Ｕ．Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ）およびＧｅｎＢａｎｋソース製のソフトウェアプログラムを含めて、入手可能なソフトウェアプログラムを用いて行う。例えば、ＧｅｎＢａｎｋなどからの公共の配列データベースもまた使用した。
【０１５６】
例えば、米国特許出願第０８／１１０，６８３号（ＩＬ−１０レセプター）に記載されるような、ＩＬ−１０レセプターに適用可能な多くの技術を、ＤＣＲＳ５に適用し得る。
【０１５７】
（ＩＩ．機能的クローニング）
抗ｈＩＬ−１２Ｒβ１抗体がｐ４０／ｐ１９に対するヒトＴ細胞の応答をブロックし、そして上記ｐ４０／ｐ１９がＩＬ−１２Ｒβ１に結合することを、観察した。このことは、ＩＬ−１２Ｒβ１がｐ４０／ｐ１９についてのレセプター複合体の１サブユニットであることを示唆した。
【０１５８】
ｐ４０／ｐ１９に応答するがＩＬ−１２には応答しないマウスＴ細胞集団、およびＩＬ−１２には応答するがｐ４０／ｐ１９には応答しない別の集団を、同定した。さらに、組換えｍＩＬ−１２Ｒβ１およびｍＩＬ−１２Ｒβ２を発現するＢａ／Ｆ３細胞が、ＩＬ−１２には応答するがｐ４０／ｐ１９には応答しないことを観察した。これらの結果は、集合的に、ｐ４０／ｐ１９についてのレセプター複合体が、上記ＩＬ−１２Ｒβ１と、ＩＬ−１２Ｒβ２ではない少なくとも１つの他のサブユニットとを含むことを示した。したがって、この第二のレセプター成分を単離するために、発現クローニングストラテジーを考案した。
【０１５９】
ｃＤＮＡライブラリーを、Ｋｉｔ２２５細胞（ＩＬ−１２およびｐ４０／ｐ１９の両方に応答するＩＬ−２依存性ヒトＴ細胞株）から単離したｍＲＮＡから調製した。上記ｃＤＮＡライブラリーを、レトロウイルス発現ベクターｐＭＸを用いて作製した。組換えｈＩＬ−１２Ｒβ１を発現するＢａ／Ｆ３細胞に、このｃＤＮＡライブラリーを感染させ、ＩＬ−３中で３日間〜４日間回復することを許容させ、次いで洗浄し、そして９６ウェルプレートにおいて、５０ｎｇ／ｍｌの過剰なｈｐ４０／ｈｐ１９（ｈｙｐｅｒ−ｈｐ４０／ｈｐ１９）を含有する培地中に約１５，０００細胞／ウェルでプレーティングした。ＷＯ ０１／１８０５１を参照のこと。培養物に、約５日毎にさらに過剰なｈｐ４０／ｈｐ１９を補充した。約２週間後、これらのうちの５％〜１０％のウェルは、細胞増殖を示した。細胞を各ウェルから回収し、過剰なｈｐ４０／ｈｐ１９中で、より大きな培養物において個々に増殖させ、そして過剰なｈｐ４０／ｈｐ１９に対する増殖依存性について試験した。
【０１６０】
増殖についてｐ４０／ｐ１９依存性である細胞を、ＰＣＲによってレトロウイルスｃＤＮＡ挿入物について分析した。分析した４０を超える単離物のうち、１つを除く全てが、新規のレセプターＤＣＲＳ５をコードするｃＤＮＡを含んでいた。この候補ヒトｃＤＮＡを発現ベクター中にクローニングし、そしてｈＩＬ−１２Ｒβ１を発現するＢａ／Ｆ３細胞中にトランスフェクトした。これらの細胞は、ｐ４０／ｐ１９に対して応答性となった；したがって、本発明者らは、この新規のｃＤＮＡが、機能的なｐ１９レセプターサブユニットである所望のＤＣＲＳ５をコードすると結論した。
【０１６１】
（ＩＩＩ．全長ＤＣＲＳ５の特徴；染色体位置）
ＤＣＲＳ５の細胞質ドメインは、他のサイトカインレセプター細胞質ドメインに対して全体としては近縁ではない（これは、このファミリーの分子における共通の観察結果である）。この細胞質ドメインは、７個のｔｙｒ残基を含み、これらのうちの少なくとも３個は、認識可能なＳＨ２結合モチーフＹＥＤＩ、ＹＫＰＱ、およびＹＦＰＱの一部である。上記ＹＥＤＩモチーフは、チロシンホスファターゼｓｈｐ２について同定された結合部位に類似する。後者の２つのモチーフは、それぞれＳｔａｔ１／Ｓｔａｔ３、またはＳｔａｔ３を結合することが公知の配列に非常に類似している。上記ＹＫＰＱモチーフはまた、近傍の隣接配列と一緒になって、Ｓｔａｔ１〜Ｓｔａｔ３を結合することが公知である、Ｓｔａｔ４およびＩＬ−１２Ｒβ２の中のモチーフに、ある程度まで類似する。これは、予備的なデータと一致し、このことは、ｐ４０／ｐ１９が、ＩＬ−１２と同様に、Ｓｔａｔ４を活性化することを示唆する。
【０１６２】
上記ＤＣＲＳ５配列に由来するＰＣＲプライマーを使用し、ヒトｃＤＮＡライブラリーをプローブする。配列（好ましくは、配列の末端に隣接する配列）は、例えば、配列番号１に由来し得る。霊長類、齧歯類、または他の種のＤＣＲＳ５についての全長ｃＤＮＡは、例えば、λｇｔ１０ファージのＤＮＡハイブリダイゼーションスクリーニングによってクローニングする。ＰＣＲ反応を、Ｔ．ａｑｕａｔｉｃｕｓ Ｔａｑｐｌｕｓ（登録商標）ＤＮＡポリメラーゼ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ，Ｌａ Ｊｏｌｌａ，ＣＡ）を適切な条件下で用いて行う。
【０１６３】
染色体スプレッドを調製する。インサイチュハイブリダイゼーションを、７２時間にわたって培養したフィトヘマグルチニン刺激ヒトリンパ球から入手した染色体調製物について行う。５−ブロモデオキシウリジンを、培養の最後の７時間にわたって添加し（６０μｇ／ｍｌ培地）、ハイブリダイゼーション後の良好な品質の染色体分染を確実にした。
【０１６４】
プライマーの助けを借りて増幅したＰＣＲフラグメントを、適切なベクター中にクローニングする。このベクターを、^３Ｈを用いるニックトランスレーションによって標識する。放射性標識プローブを、分裂中期スプレッドに対して、２００ｎｇ／ｍｌハイブリダイゼーション溶液の最終濃度でハイブリダイズする（Ｍａｔｔｅｉら（１９８５）Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅｔ．６９：３２７−３３１）。
【０１６５】
核追跡エマルジョン（ｎｕｃｌｅａｒ ｔｒａｃｋ ｅｍｕｌｓｉｏｎ）（ＫＯＤＡＫ ＮＴＢ２）でコーティングした後、スライドを露光する。分染手順の間の銀粒子のあらゆるすべりを回避するために、染色体展開物を、緩衝化ギムザ溶液で最初に染色し、そして分裂中期を写真撮影する。次いで、蛍光色素−光分解−ギムザ（ＦＰＧ）法によってＲ分染法（Ｒ−ｂａｎｄｉｎｇ）を行い、そして分裂中期を分析前に再度写真撮影する。
【０１６６】
同様の適切な方法を、他の種について使用する。
【０１６７】
（ＩＶ．ＤＣＲＳ５ ｍＲＮＡの位置決定）
ヒト複数組織ブロット（カタログ番号１、カタログ番号２）および癌細胞株ブロット（カタログ番号７７５７−１）（１レーンあたり約２μｇのｐｏｌｙＡ^＋ＲＮＡを含む）を、Ｃｌｏｎｔｅｃｈ（Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ，ＣＡ）から購入する。プローブを、例えば、Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｒｅｄｉｐｒｉｍｅ（登録商標）ランダムプライマー標識キット（ＲＰＮ １６３３）を用いて［α−^３２Ｐ］ｄＡＴＰで放射性標識する。プレハイブリダイゼーションおよびハイブリダイゼーションを、例えば、０．５Ｍ Ｎａ_２ＨＰＯ_４、７％ ＳＤＳ、０．５Ｍ ＥＤＴＡ（ｐＨ８．０）中で６５℃で行う。高ストリンジェンシーの洗浄を、例えば、６５℃で行い、最初の２回の洗浄は２×ＳＳＣ、０．１％ ＳＤＳ中で４０分間、続いて０．１×ＳＳＣ、０．１％ ＳＤＳ中で２０分間にわたり洗浄する。次いで、メンブレンを、増感スクリーンの存在下で−７０℃でＸ線フィルム（Ｋｏｄａｋ）に露光する。ｃＤＮＡライブラリーサザンによるより詳細な研究を、選択された適切なヒトＤＣＲＳ５クローンを用いて行い、造血細胞サブセットまたは他の細胞サブセット中でのそれらの発現と調べる。
【０１６８】
あるいは、２つの適切なプライマーを、配列番号１から選択する。ＲＴ−ＰＣＲは、メッセージの存在について選択した適切なｍＲＮＡサンプルに対して使用し、ｃＤＮＡ（例えば、遺伝子を発現するサンプル）を生成する。
【０１６９】
全長クローンは、ＰＣＲシグナルによって予め選択された適切な組織に由来するｃＤＮＡライブラリーのハイブリダイゼーションによって、単離し得る。ノーザンブロットを、実施され得る。
【０１７０】
ＤＣＲＳ５をコードする遺伝子についてのメッセージを、適切な技術（例えば、ＰＣＲ、免疫アッセイ、ハイブリダイゼーション、または他の技術）によってアッセイする。組織のｃＤＮＡ調製物および器官のｃＤＮＡ調製物は、例えば、Ｃｌｏｎｔｅｃｈ（Ｍｏｕｎｔａｉｎ Ｖｉｅｗ，ＣＡ）から入手し得る。天然に発現する供給源の同定は、記載される通り、有用である。そして、機能的レセプターサブユニット対合の同定は、どの細胞がサイトカインリガンドの各々に対する生理学的応答性をもたらすレセプターサブユニットの組合せを発現するかを予測することを可能にする。
【０１７１】
マウスでの分布について、例えば、サザン分析を実施し得る：一次増幅ｃＤＮＡライブラリーに由来するＤＮＡ（５μｇ）を適切な制限酵素で消化して挿入片を遊離させ、１％アガロースゲル上で泳動し、そしてナイロンメンブレン（ＳｃｈｌｅｉｃｈｅｒおよびＳｃｈｕｅｌｌ，Ｋｅｅｎｅ，ＮＹ）に移した。
【０１７２】
マウスｍＲＮＡ単離のためのサンプルとしては、以下が挙げられ得る：休止マウス線維芽細胞性Ｌ細胞株（Ｃ２００）；Ｂｒａｆ：ＥＲ（エストロゲンレセプターに対するＢｒａｆ融合物）トランスフェクト細胞（コントロール）（Ｃ２０１）；Ｔ細胞（ＴＨ１に偏向）（脾臓由来のＭｅｌｌ４明ＣＤ４^＋細胞（ＩＦＮ−γおよび抗ＩＬ−４を用いて７日間偏向させた）；Ｔ２００）；Ｔ細胞（ＴＨ２に偏向）（脾臓由来のＭｅｌｌ４明ＣＤ４^＋細胞（ＩＬ−４および抗ＩＦＮ−γを用いて７日間偏向させた）；Ｔ２０１）；Ｔ細胞（高度にＴｈ１に偏向）（Ｏｐｅｎｓｈａｗら（１９９５）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８２：１３５７−１３６７を参照のこと；２時間、６時間、１６時間にわたって抗ＣＤ３を用いて活性化し、プールした；Ｔ２０２）；Ｔ細胞（高度にＴＨ２に偏向）（Ｏｐｅｎｓｈａｗら（上記）を参照のこと；２時間、６時間、１６時間にわたって抗ＣＤ３を用いて活性化し、プールした；Ｔ２０３）；ＣＤ４４⁻ＣＤ２５^＋プレＴ細胞（胸腺から選別された）（Ｔ２０４）；ＴＨ１ Ｔ細胞クローンＤ１．１（抗原を用いた最後の刺激後、３週間にわたって休止）（Ｔ２０５）；ＴＨ１ Ｔ細胞クローンＤ１．１（１０μｇ／ｍｌ ＣｏｎＡで１５時間刺激した）（Ｔ２０６）；ＴＨ２ Ｔ細胞クローンＣＤＣ３５（抗原を用いた最後の刺激後、３週間にわたって休止）（Ｔ２０７）；ＴＨ２ Ｔ細胞クローンＣＤＣ３５（１０μｇ／ｍｌ ＣｏｎＡで１５時間にわたって刺激した）（Ｔ２０８）；脾臓由来のＭｅｌｌ４^＋未刺激（ｎａｉｖｅ）Ｔ細胞（休止）（Ｔ２０９）；Ｍｅｌｌ４^＋ Ｔ細胞（ＩＦＮ−γ／ＩＬ−１２／抗ＩＬ−４を６時間、１２時間、２４時間にわたって用いてＴｈ１に対して偏向させ、プールした）（Ｔ２１０）；Ｍｅｌｌ４^＋ Ｔ細胞（ＩＬ−４／抗ＩＦＮ−γを６時間、１３時間、２４時間にわたって用いてＴｈ２に対して偏向させ、プールした）（Ｔ２１１）；未刺激の成熟Ｂ細胞の白血病細胞株Ａ２０（Ｂ２００）；未刺激のＢ細胞株ＣＨ１２（Ｂ２０１）；脾臓由来の未刺激の大きなＢ細胞（Ｂ２０２）；全脾臓由来のＢ細胞（ＬＰＳ活性化）（Ｂ２０３）；脾臓由来のメトリザマイド富化樹状細胞（休止）（Ｄ２００）；骨髄由来の樹状細胞（休止）（Ｄ２０１）；単球細胞株ＲＡＷ ２６４．７（ＬＰＳを４時間用いて活性化）（Ｍ２００）；ＧＭおよびＭ−ＣＳＦを用いて誘導した骨髄マクロファージ（Ｍ２０１）；マクロファージ細胞株Ｊ７７４（休止）（Ｍ２０２）；マクロファージ細胞株Ｊ７７４＋ＬＰＳ＋抗ＩＬ−１０（０．５時間、１時間、３時間、６時間、１２時間でプール）（Ｍ２０３）；マクロファージ細胞株Ｊ７７４＋ＬＰＳ＋ＩＬ−１０（０．５時間、１時間、３時間、５時間、１２時間でプール）（Ｍ２０４）；エーロゾル曝露マウスの肺組織（Ｔｈ２プライマー、エーロゾルＯＶＡ曝露、７時間、１４時間、２３時間でプール）（Ｇａｒｌｉｓｉら（１９９５）Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ ７５：７５−８３を参照のこと；Ｘ２０６）；Ｎｉｐｐｏｓｔｒｏｎｇｕｌｕｓ感染肺組織（Ｃｏｆｆｍａｎら（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４５：３０８−３１０を参照のこと；Ｘ２００）；全成人肺（正常）（Ｏ２００）；全肺（ｒａｇ−１）（Ｓｃｈｗａｒｚら（１９９３）Ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ ４：２４９−２５２；Ｏ２０５を参照のこと）；ＩＬ−１０ Ｋ．Ｏ．脾臓（Ｋｕｈｎら（１９９１）Ｃｅｌｌ ７５：２６３−２７４を参照のこと；Ｘ２０１）；全成人脾臓（正常）（Ｏ２０１）；全脾臓（ｒａｇ−１）（Ｏ２０７）；ＩＬ−１０ Ｋ．Ｏ．パイアー斑（Ｏ２０２）；全パイアー斑（正常）（Ｏ２１０）；ＩＬ−１０ Ｋ．Ｏ．腸間膜リンパ節（Ｘ２０３）；全腸間膜リンパ節（正常）（Ｏ２１１）；ＩＬ−１０ Ｋ．Ｏ．結腸（Ｘ２０３）；全結腸（正常）（Ｏ２１２）；ＮＯＤマウス膵臓（Ｍａｋｉｎｏら（１９８０）Ｊｉｋｋｅｎ Ｄｏｂｕｔｓｕ ２９：１−１３を参照のこと；Ｘ２０５）；全胸腺（ｒａｇ−１）（Ｏ２０８）；全腎臓（ｒａｇ−１）（Ｏ２０９）；全心臓（ｒａｇ−１）（Ｏ２０２）；全脳（ｒａｇ−１）（Ｏ２０３）；全精巣（ｒａｇ−１）（Ｏ２０４）；全肝臓（ｒａｇ−１）（Ｏ２０６）；ラット正常関節組織（Ｏ３００）；およびラット関節炎関節組織（Ｘ３００）。
【０１７３】
ヒトｍＲＮＡ単離についてのサンプルとしては、以下が挙げられ得る：末梢血単核細胞（単球、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、顆粒球、Ｂ細胞）（休止）（Ｔ１００）；末梢血単核細胞（抗ＣＤ３を用いて２時間、６時間、１２時間にわたって活性化させ、プールした）（Ｔ１０１）；Ｔ細胞（ＴＨ０クローンＭｏｔ ７２）（休止）（Ｔ１０２）；Ｔ細胞（ＴＨ０クローンＭｏｔ ７２）（抗ＣＤ２８および抗ＣＤ３を用いて３時間、６時間、１２時間にわたって活性化させ、プールした）（Ｔ１０３）；Ｔ細胞（ＴＨ０クローンＭｏｔ ７２）（特異的ペプチドを用いて２時間、７時間、１２時間にわたってアネルギー処理し、プールした）（Ｔ１０４）；Ｔ細胞（ＴＨ１クローンＨＹ０６）（休止）（Ｔ１０７）；Ｔ細胞（ＴＨ１クローンＨＹ０６）（抗ＣＤ２８および抗ＣＤ３を用いて３時間、６時間、１２時間にわたって活性化させ、プールした）（Ｔ１０８）；Ｔ細胞（ＴＨ１クローンＨＹ０６）（特異的ペプチドを用いて２時間、６時間、１２時間にわたってアネルギー処理し、プールした）（Ｔ１０９）；Ｔ細胞（ＴＨ２クローンＨＹ９３５）（休止）（Ｔ１１０）；Ｔ細胞（ＴＨ２クローンＨＹ９３５）（抗ＣＤ２８および抗ＣＤ３を用いて２時間、７時間、１２時間にわたって活性化させ、プールした）（Ｔ１１１）；Ｔ細胞ＣＤ４^＋ＣＤ４５ＲＯ⁻（抗ＣＤ２８、ＩＬ−４および抗ＩＦＮ−γ中で２７日間にわたって偏向し（ｐｏｌａｒｉｚｅ）、ＴＨ２偏向し、抗ＣＤ３および抗ＣＤ２８を用いて４時間活性化させたＴ細胞）（Ｔ１１６）；Ｔ細胞腫瘍株ＪｕｒｋａｔおよびＨｕｔ７８（休止）（Ｔ１１７）；プールしたＴ細胞クローンＡＤ１３０．２、Ｔｃ７８３．１２、Ｔｃ７８３．１３、Ｔｃ７８３．５８、Ｔｃ７８２．６９（休止）（Ｔ１１８）；Ｔ細胞ランダムγδ Ｔ細胞クローン（休止）（Ｔ１１９）；脾細胞（休止）（Ｂ１００）；脾細胞（抗ＣＤ４０およびＩＬ−４を用いて活性化）（Ｂ１０１）；プールしたＢ細胞ＥＢＶ株ＷＴ４９、ＲＳＢ、ＪＹ、ＣＶＩＲ、７２１．２２１、ＲＭ３、ＨＳＹ（休止）（Ｂ１０２）；Ｂ細胞株ＪＹ（ＰＭＡおよびイオノマイシンを用いて１時間、６時間活性化させ、プールした）（Ｂ１０３）；プールしたＮＫ ２０クローン（休止）（Ｋ１００）；プールしたＮＫ ２０クローン（ＰＭＡおよびイオノマイシンを用いて６時間にわたって活性化）（Ｋ１０１）；ＮＫＬクローン（ＬＧＬ白血病患者の末梢血に由来する）（ＩＬ−２処理）（Ｋ１０６）；ＮＫ細胞傷害性クローン６４０−Ａ３０−１（休止）（Ｋ１０７）；造血前駆体株ＴＦ１（ＰＭＡおよびイオノマイシンを用いて１時間、６時間にわたって活性化させ、プールした）（Ｃ１００）；Ｕ９３７前単球株（休止）（Ｍ１００）；Ｕ９３７前単球株（ＰＭＡおよびイオノマイシンを用いて１時間、６時間にわたって活性化させ、プールした）（Ｍ１０１）；溶出した単球（ＬＰＳ、ＩＦＮγ、抗ＩＬ−１０を用いて１時間、２時間、６時間、１２時間、２４時間にわたって活性化させ、プールした）（Ｍ１０２）；溶出した単球（ＬＰＳ、ＩＦＮγ、ＩＬ−１０を用いて１時間、２時間、６時間、１２時間、２４時間にわたって活性化させ、プールした）（Ｍ１０３）；溶出した単球（ＬＰＳ、ＩＦＮγ、抗ＩＬ−１０を用いて４時間、１６時間にわたって活性化させ、プールした）（Ｍ１０６）；溶出した単球（ＬＰＳ、ＩＦＮγ、ＩＬ−１０を用いて４時間、１６時間にわたって活性化させ、プールした）（Ｍ１０７）；溶出した単球（ＬＰＳで１時間にわたって活性化した）（Ｍ１０８）；溶出した単球（ＬＰＳで６時間にわたって活性化させた）（Ｍ１０９）；ＤＣ ７０％ ＣＤ１ａ^＋（ＣＤ３４^＋ ＧＭ−ＣＳＦに由来、ＴＮＦαで１２日間）（休止）（Ｄ１０１）；ＤＣ ７０％ ＣＤ１ａ^＋（ＣＤ３４^＋ ＧＭ−ＣＳＦに由来、ＴＮＦαで１２日間）（ＰＭＡおよびイオノマイシンを用いて１時間にわたって活性化）（Ｄ１０２）；ＤＣ ７０％ ＣＤ１ａ^＋（ＣＤ３４^＋ ＧＭ−ＣＳＦに由来、ＴＮＦαで１２日間）（ＰＭＡおよびイオノマイシンを用いて６時間にわたって活性化）（Ｄ１０３）；ＤＣ ９５％ ＣＤ１ａ^＋（ＣＤ３４^＋ ＧＭ−ＣＳＦに由来、ＴＮＦαで１２日間、ＦＡＣＳ選別、ＰＭＡおよびイオノマイシンで１時間、６時間にわたって活性化させ、プールした）（Ｄ１０４）；ＤＣ ９５％ ＣＤ１４^＋（ＣＤ３４^＋ ＧＭ−ＣＳＦに由来、ＴＮＦαで１２日間、ＦＡＣＳ選別、ＰＭＡおよびイオノマイシンで１時間、６時間にわたって活性化し、プールした）（Ｄ１０５）；ＤＣ ＣＤ１ａ^＋ ＣＤ８６^＋（ＣＤ３４^＋ ＧＭ−ＣＳＦに由来、ＴＮＦαで１２日間選別、ＰＭＡおよびイオノマイシンを用いて１時間、６時間にわたって活性化させ、プールした）（Ｋ１０６）；ＤＣ（単球ＧＭ−ＣＳＦに由来、ＩＬ−４で５日間）（休止）（Ｄ１０７）；ＤＣ（単球ＧＭ−ＣＳＦに由来、ＩＬ−４で５日間）（休止）（Ｄ１０８）；ＤＣ（単球ＧＭ−ＣＳＦ由来、ＩＬ−４で５日間）（ＬＰＳで４時間、１６時間活性化させ、プールした）（Ｄ１０９）；ＤＣ（単球ＧＭ−ＣＳＦに由来、ＩＬ−４で５日間）（ＴＮＦα、単球（ｍｏｎｏｃｙｔｅ ｓｕｐｅ）で４時間、１６時間にわたって活性化し、プールした）（Ｄ１１０）；平滑筋腫Ｌ１１良性腫瘍（Ｘ１０１）；正常子宮筋層Ｍ５（Ｏ１１５）；悪性平滑筋肉腫ＧＳ１（Ｘ１０３）；肺線維芽細胞肉腫株ＭＲＣ５（ＰＭＡおよびイオノマイシンで１時間、６時間にわたって活性化させ、プールした）（Ｃ１０１）；腎臓上皮癌細胞株ＣＨＡ（ＰＭＡおよびイオノマイシンで１時間、６時間にわたって活性化させ、プールした）（Ｃ１０２）；胎児腎臓２８週雄（Ｏ１００）；胎児肺２８週雄（Ｏ１０１）；胎児肝臓２８週雄（Ｏ１０２）；胎児心臓２８週雄（Ｏ１０３）；胎児脳２８週雄（Ｏ１０４）；胎児胆嚢２８週雄（Ｏ１０６）；胎児小腸２８週雄（Ｏ１０７）；胎児脂肪組織２８週雄（Ｏ１０８）；胎児卵巣２５週雌（Ｏ１０９）；胎児子宮２５週雌（Ｏ１１０）；胎児精巣２８週雄（Ｏ１１１）；胎児脾臓２８週雄（Ｏ１１２）；成体胎盤２８週（Ｏ１１３）；および１２歳のときから炎症にかかった扁桃（Ｘ１００）。
【０１７４】
同様のサンプルを、評価のために他の種において単離し得る。
【０１７５】
（Ｖ．ＤＣＲＳ５の種対応物のクローニング）
種々のストラテジーを使用して、（好ましくは他の霊長類または齧歯類から）ＤＣＲＳ５の種対応物を入手し得る。１つの方法は、近縁種のＤＮＡプローブを用いた交叉ハイブリダイゼーションによる。進化的に類似の種を中間工程として入れることは、有用であり得る。別の方法は、遺伝子間の類似性ブロックまたは相違ブロック（例えば、高度に保存されているかまたは保存されていない、ポリペプチド配列またはヌクレオチド配列の領域）の同定に基づいた特異的ＰＣＲプライマーを用いることによる。
【０１７６】
データベース検索は、類似の配列を同定し得、そして適切なプローブの産生を可能にし得る。
【０１７７】
（ＶＩ．哺乳動物ＤＣＲＳ５タンパク質の産生）
適切な（例えば、グルタチオンＳ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ））融合構築物を、例えば、Ｅ．ｃｏｌｉにおける発現のために操作する。例えば、マウスＩＧＩＦ ｐＧＥＸ（登録商標）プラスミドを構築し、そしてＥ．ｃｏｌｉ中に形質転換する。新たに形質転換された細胞を、例えば、５０μｇ／ｍｌアンピシリンを含むＬＢ培地中で増殖させ、そしてＩＰＴＧ（Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）を用いて誘導する。一晩の誘導後、細菌を収集し、そしてＤＣＲＳ５タンパク質を含むペレットを単離する。このペレットを、例えば、２リットルのＴＥ緩衝液（５０ｍＭ Ｔｒｉｓ−塩基（ｐＨ８．０）、１０ｍＭ ＥＤＴＡおよび２ｍＭ Ｐｅｆａｂｌｏｃ（登録商標））中で均質化する。この物質を、マイクロフルイダイザー（Ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｃｓ，Ｎｅｗｔｏｎ，ＭＡ）に３回通過させる。流動化した上清を、Ｓｏｒｖａｌｌ ＧＳ−３ローターにおいて１３，０００ｒｐｍにて１時間にわたってスピンダウンする。サイトカインレセプタータンパク質を含む得られる上清を濾過し、５０ｍＭ Ｔｒｉｓ塩基（ｐＨ８．０）中で平衡化したグルタチオン−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（登録商標）カラムに通す。ＤＣＲＳ５−ＧＳＴ融合タンパク質を含む画分をプールし、そして例えば、トロンビン（Ｅｎｚｙｍｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｓｏｕｔｈ Ｂｅｎｄ，ＩＮ）で切断する。次いで、切断したプールを、５０ｍＭ Ｔｒｉｓ塩基中で平衡化したＱ−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（登録商標）カラムに通した。ＤＣＲＳ５を含む画分をプールし、そして冷蒸留水中で希釈して伝導率を下げ、そして新鮮なＱ−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（登録商標）カラムに単独で、または免疫親和性抗体カラムと連続して通す。ＤＣＲＳ５タンパク質を含む画分をプールし、アリコートに分け、そして−７０℃のフリーザー中で保存する。
【０１７８】
サイトカインレセプタータンパク質との円偏光二色性スペクトルの比較は、このタンパク質が正確に折り畳まれていることを示唆し得る（例えば、Ｈａｚｕｄａら（１９６９）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６４：１６８９−１６９３を参照のこと）。
【０１７９】
（ＶＩＩ．ＤＣＲＳ５に対して特異的な抗体の調製）
近交系Ｂａｌｂ／ｃマウスを、組換え形態の上記タンパク質（例えば、精製したＤＣＲＳ５）または安定なトランスフェクトＮＩＨ−３Ｔ３細胞で腹腔内免疫した。動物を、タンパク質を用いてさらなるアジュバントと一緒にかまたはアジュバントを伴わずに適切な時点で追加免疫し、抗体生成をさらに刺激する。血清を収集するか、または収集した脾臓を用いてハイブリドーマを生成する。
【０１８０】
あるいは、Ｂａｌｂ／ｃマウスを、遺伝子もしくはそのフラグメントで形質転換した細胞（内因性細胞または外因性細胞のいずれかである）で免疫するか、またはこの抗原の発現について富化された単離された膜で免疫する。血清を適切な時点で、代表的には、多数回のさらなる投与後に収集する。種々の遺伝子治療技術は、例えば、免疫応答を生じるためにタンパク質をインサイチュで産生する際に有用であり得る。血清または抗体の調製物を、交叉吸収または免疫選択して、規定の特異性および高親和性の実質的に純粋な抗体を調製し得る。
【０１８１】
モノクローナル抗体を、作製し得る。例えば、脾細胞を、適切な融合パートナーと融合し、そしてハイブリドーマを、標準的な手順によって増殖培地中で選択する。ハイブリドーマ上清を、ＤＣＲＳ５に結合する抗体の存在について、例えば、ＥＬＩＳＡまたは他のアッセイによってスクリーニングする。特定のＤＣＲＳ５実施形態を特異的に認識する抗体もまた、選択または調製し得る。
【０１８２】
別の方法では、合成ペプチドまたは精製タンパク質を、免疫系に対して提示し、モノクローナル抗体またはポリクローナル抗体を作製する。例えば、Ｃｏｌｉｇａｎ編（１９９１）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｗｉｌｅｙ／Ｇｒｅｅｎｅ；ならびにＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ（上記）を参照のこと。適切な状況では、結合試薬を、（例えば、蛍光もしくは他のもので）上記の通りに標識するかまたはパニング方法のために基材に固定するかのいずれかである。核酸もまた、動物内の細胞中に導入して抗原を生成し得る。この抗原は、免疫応答を惹起するのに役立つ。例えば、Ｗａｎｇら（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：４１５６−４１６０；Ｂａｒｒｙら（１９９４）ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ １６：６１６−６１９；およびＸｉａｎｇら（１９９５）Ｉｍｍｕｎｉｔｙ ２：１２９−１３５を参照のこと。
【０１８３】
（ＶＩＩＩ．ＤＣＲＳ５を含む融合タンパク質の生成）
種々の融合構築物（ＤＣＲＳ５をＩＬ−１２Ｒβ１配列を合わせる実施形態を含む）を、ＤＣＲＳ５を用いて作製する。適切な遺伝子の一部分を、エピトープタグ（例えば、ＦＬＡＧタグ）またはツーハイブリッドシステム構築物に融合する（例えば、ＦｉｅｌｄｓおよびＳｏｎｇ（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ ３４０：２４５−２４６を参照のこと）。エピトープタグを、発現クローニング手順において使用し、抗ＦＬＡＧ抗体を用いて検出し、結合パートナー（例えば、それぞれのサイトカインレセプターについてのリガンド）を検出し得る。上記ツーハイブリッドシステムはまた使用して、ＤＣＲＳ５に特異的に結合するタンパク質を単離し得る。
【０１８４】
（ＩＸ．構造活性相関）
特定の残基の重要性についての情報を、標準的な手順および分析を用いて決定する。標準的な変異誘発分析を、例えば、多くの異なる改変体を所定の位置（例えば、上記で同定した位置）で作製し、そしてその改変体の生物学的活性を評価することによって、行う。これは、活性を改変する位置を決定する程度まで、または特定の位置に焦点を当てて、置換されると生物学的活性を保持、ブロックもしくは調節のいずれかをし得る残基を決定するために行い得る。
【０１８５】
あるいは、天然の改変体の分析は、どの位置が天然の変異を許容するかを示し得る。これは、個体間の、または系統間もしくは種間のバリエーションの集団分析から生じ得る。選択された個体由来のサンプルを、例えば、ＰＣＲ分析および配列決定によって分析する。これは、集団多型の評価を可能にする。
【０１８６】
（Ｘ．ＤＣＲＳ５とＩＬ−１２Ｒβ１との同時発現）
それぞれの遺伝子をコードするベクター（または複数のベクター）を、細胞中にトランスフェクトし得る。好ましくは、このようなベクターは、どの細胞が首尾よく形質転換されたかを同定するための選択マーカーを有する。この２つの遺伝子の同時発現は、遺伝子産物が適切に会合して活性なレセプター複合体を形成するのを可能にする。あるいは、機能的ダイマーの会合を引き起こす方法の使用が利用可能である（例えば、Ｏ’Ｓｈｅａら（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４５：６４６−６４８；Ｋｏｓｔｅｌｎｙら（１９９２）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８：１５４７−１５５３；Ｐａｔｅｌら（１９９６）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７１：３０３８６−３０３９１を参照のこと）。細胞外ドメインの発現および、例えば、Ｆｏｓ／Ｊｕｎロイシンジッパー親和性によって駆動される物理的会合は、診断的使用または治療的使用のために結合化合物として作用するリガンド結合構築物をもたらす。
【０１８７】
（ＸＩ．ｐ１９（ＩＬ−Ｂ３０としても公知）、ｐ４０、およびＤＣＲＳ５（ＩＬ−２３Ｒとしても公知）の分布）
ｐ１９、ｐ４０、およびＤＣＲＳ５は、Ｔａｑｍａｎ（登録商標）リアルタイムＰＣＲアッセイ（ＰＥ Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｆｏｓｔｅｒ Ｃｉｔｙ，ＣＡ）によって測定した場合、種々の細胞および組織によって発現される。その結果をユビキチン発現と比較する（表２）。ユビキチン発現を、１に設定。炎症性の皮膚状態（例えば、乾癬およびアトピー性皮膚炎）において、および回虫抗原投与（Ａｓｃａｒｉｓ ｃｈａｌｌｅｎｇｅ）に応答して、ｐ１９およびｐ４０の両方の発現が上昇することを見出した（表２）。ｐ１９の発現が、過敏性肺炎、特発性肺線維症、および炎症性腸障害（ＩＢＤ）（例えば、クローン病）において上昇した（表２）。ＩＬ−２３Ｒ（ＤＣＲＳ５としても公知）の発現が、例えば、乾癬および慢性関節リウマチにおいて、増大することを見出した（表２）。
【０１８８】
（表２．Ｔａｑｍａｎ（登録商標）分析による、細胞および組織によるｐ１９、ｐ４０、およびＩＬ−２３Ｒの発現）
【０１８９】
【表２−１】

【０１９０】
【表２−２】

（ＸＩＩ．ＩＬ−２３レセプター（ＩＬ−２３Ｒ）の組織学）
ヒト組織を、抗ＩＬ−２３Ｒ抗体（２４Ｆ９）およびアイソタイプ対照抗体（３１Ｆ１１）を使用して、組織学的分析に供した（表３）。リンパ球、マクロファージ、および稀プラスマ細胞（ｒａｒｅ ｐｌａｓｍａ ｃｅｌｌ）の部分集合は、上記抗ＩＬ−２３Ｒ抗体によって陽性の染色を示した。この陽性染色リンパ球は、リンパ節の胚中心ではなく、濾胞間領域に位置していた。
【０１９１】
慢性関節リウマチ（ＲＡ）に由来する滑液の試料は、正常な対照に由来する試料に比べて、炎症細胞がより強くかつより広範に及ぶ、炎症細胞（特に、プラスマ細胞）の染色を立証した。正常な滑液の試料は、炎症細胞の浸潤物を含まない。
【０１９２】
炎症性腸障害（ＩＢＤ）（すなわち、クローン病および潰瘍性結腸炎）をともなう結腸および小腸に由来する試料は、正常な対照と比べて、陽性試験リンパ球および陽性試験プラスマ細胞が大きく優勢であること（ｇｒｅａｔｅｒ ｐｒｅｖａｌｅｎｃｅ）を明らかにした。普及度における増加は、この組織中の全体的な上記炎症性細胞の数における増加に対して比例して増加する。慢性閉塞性肺障害（ＣＯＰＤ）に由来する肺試料は、陽性試験クラーラ細胞を示した一方、正常患者試料に由来するクラーラ細胞は、陰性であった。正常な６２歳の男性に由来する皮膚試料試験は、リンパ球染色値０を示し、一方、５４歳由来の乾鱗試料は、リンパ球値２（稀）を示した。
【０１９３】
（表３．ヒト組織の組織学。アイソタイプ対照抗体と対照的な抗ＩＬ−２３Ｒ抗体（２４Ｆ９）での染色。数値は染色の強さを示し、（−−）は未検を意味する）
【０１９４】
【表３】

（ＸＩＩＩ．マウスへのＩＬ−２３ハイパーカイン（ｈｙｐｅｒｋｉｎｅ）の投与および遺伝子発現）
Ｃ５７ＢＩ６／ＮＴマウスを、マウスのＩＬ−２３ハイパーカインまたは生理食塩水で処理し、続いてＴａｑｍｑｎ（登録商標）リアルタイムＰＣＲ分析において１５７種の遺伝子の発現を決定した。各々のマウスに、生理食塩水または１０μｇ ＩＬ−２３ハイパーカインのいずれかを（マウスの背部において）皮内注射した。注射後第１日目、第３日目、または第７日目に組織試料を採取し、そして抽出した。この３つの日付に由来する試料をプールし、そして次いで、Ｔａｑｍａｎ（登録商標）分析のために使用した。ＩＬ−２３ハイパーカイン処理を伴う遺伝子発現と、ＩＬ−２３ハイパーカイン処理無しでの遺伝子発現との比を示す（表４）。試験した上記１５７種の遺伝子のうち１５種の遺伝子に関して、ＩＬ−２３ハイパーカインは２倍以上の発現増加を引き起こした（表４）。ＩＬ−２３処理で増加したＩＬ−６、ＣＸＣＬ−１、ＩＬ−１７、およびＧＭ−ＣＳＦは、喘息またはアレルギー、ＣＯＰＤ、慢性関節リウマチ、ＩＢＤ、および乾癬における増加した発現または活性を示すサイトカインである（表４）。
【０１９５】
（表４．［ＩＬ−１３での遺伝子発現］／［生理食塩水での遺伝子発現］の比）
【０１９６】
【表４】

（ＸＩＶ．ＩＬ−２３はコラーゲン誘導性関節炎（ＣＩＡ）を調節する）
ｐ１９ノックアウト（ｐ１９ＫＯ）マウスを、調製した（Ｃｕａら（２００３）Ｎａｔｕｒｅ ４２１：７４４−７４８）。このｐ１９ＫＯマウスは、（ｐ１９サブユニットおよびｐ４０サブユニットを含む）ヘテロダイマーのサイトカインであるＩＬ−２３を欠き、そして慢性リウマチのモデルマウスであるコラーゲン誘導性関節炎（ＣＩＡ）に抵抗することが見出された。（表５）（例えば、Ｈｏｌｍｄａｈｌら（２００２）Ａｇｅｉｎｇ Ｒｅｓ．Ｒｅｖ．１：１３５−１４７；ＬｕｒｏｓｓおよびＷｉｌｌｉａｍｓ（２００１）Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １０３：４０７−４１６；Ｄｕｒｉｅら（１９９４）Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌ．７３：１１−１８を参照のこと）。対照的に、（ｐ３５サブユニットおよびｐ４０サブユニットを含む）ヘテロダイマーのサイトカインであるＩＬ−１２を欠くｐ３５ノックアウトマウスは、野生型対照と比較して、悪化したＣＩＡを示した（表５）。ｐ３５ノックアウトマウス、ｐ４０ノックアウトマウス、ｐ１９ノックアウトマウスを、Ｃ５７ＢＬ／６マウス系統から調製した。
【０１９７】
（表５．野生型マウス、ｐ１９ノックアウトマウス、ｐ３５ノックアウトマウス、およびｐ４０ノックアウトマウスにおける、コラーゲン誘導型関節炎（ＣＩＡ）。ＮＡは、非適用を意味する）
【０１９８】
【表５】

本発明の多くの改変およびバリエーションは、当業者に明らかであるように、本発明の趣旨および範囲から逸脱することなく行われ得る。本明細書中に記載される特定の実施形態は、例としてのみ提供され、そして本発明は、このような請求の範囲に権利が与えられる全範囲の等価物とともに添付の特許請求の範囲によって限定されるべきである；そして本発明は、例として本明細書中に提示された特定の実施形態によって限定されるべきではない。
【０１９９】
【表６】

【特許請求の範囲】
【請求項１】
明細書中に記載の発明。

【公開番号】特開２０１１−９３９３５（Ｐ２０１１−９３９３５Ａ）
【公開日】平成２３年５月１２日（２０１１．５．１２）
【国際特許分類】
【外国語出願】
【出願番号】特願２０１１−２３３７５（Ｐ２０１１−２３３７５）
【出願日】平成２３年２月４日（２０１１．２．４）
【分割の表示】特願２００６−５４１４２３（Ｐ２００６−５４１４２３）の分割
【原出願日】平成１６年１１月１８日（２００４．１１．１８）
【出願人】（５９６１２９２１５）シェーリング　コーポレイション (785)
【氏名又は名称原語表記】Ｓｃｈｅｒｉｎｇ　Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ
【Ｆターム（参考）】