Ｎ−ベンゼンスルホニル−γ−アミノ酪酸及び／またはその塩を活性成分とするＳＣＣＡ−１産生抑制剤
【課題】ＳＣＣＡ−１(Squamous Cell Carcinoma Antigen 1)産生抑制作用に基づき細胞異常増殖に起因する疾患、並びにＳＣＣＡ−１産生亢進に起因する疾患を予防及び／または治療するための新規医薬の提供。
【解決手段】一般式（Ｉ）のＮ−ベンゼンスルホニル−γ−アミノ酪酸
及び／またはその塩を活性成分として含有する、ＳＣＣＡ−１産生抑制剤。
【解決手段】一般式（Ｉ）のＮ−ベンゼンスルホニル−γ−アミノ酪酸
及び／またはその塩を活性成分として含有する、ＳＣＣＡ−１産生抑制剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、Ｎ−ベンゼンスルホニル−γ−アミノ酪酸及び／またはその塩を活性成分として含む、扁平上皮細胞癌関連抗原−１(Squamous Cell Carcinoma Antigen 1、以下「ＳＣＣＡ−１と称す」)産生抑制剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
扁平上皮細胞癌関連抗原（ＳＣＣＡ）は扁平上皮癌細胞で発見された抗原であり、子宮頚部、肺、食道、皮膚の扁平上皮細胞癌で高い血中濃度を示し、扁平上皮細胞癌の診断によく利用されている（非特許文献１：H. Kato et al. Cancer 40:1621-1628 (1977)、非特許文献２：N．Mino et al. Cancer 62: 730-734 (1988)）。
【０００３】
ＳＣＣＡはまた、扁平上皮細胞癌のみならず、本発明者らの研究より、乾癬表皮の上層において発現の亢進が認められることでも知られる（非特許文献３：Takeda A. et al、 J. Invest. Dermatol. (2002) 118(1), 147-154）。乾癬は羅患率の高い皮膚疾患の一つであり、表皮細胞の増殖・分化異常と炎症細胞浸潤を特徴とする慢性、再発性の炎症性不全角化症である。乾癬は遺伝的素因に種々の環境因子が加わって発症すると考えられる（非特許文献４：Hopso-Havu et al. British Journal of Dermatology (1983) 109, 77-85）。
【０００４】
ＳＣＣＡは染色体18ｑ21.3上にタンデムに並んでいる二つの遺伝子ＳＣＣＡ−１及びＳＣＣＡ−２遺伝子によりコードされる。それらによりコードされるタンパク質、ＳＣＣＡ−１及びＳＣＣＡ−２は共に分子量約45,000のタンパク質であり、非常に相同性が高いが、反応部位のアミノ酸配列が異なり、異なる機能を有していると考えられている（非特許文献５：Schick et al. J. Biol. Chem. (1997) 27213, 1849-55）。
【０００５】
本発明者はＳＣＣＡ−１やＳＣＣＡ−２が関与する表皮の生理学的メカニズムの解明を目的とする研究を行ったところ、両ＳＣＣＡはともに細胞のアポトーシスを抑制する作用を有する抗アポトーシス因子であるという知見を得ている（特許文献１：特開２００５−２８１１４０）。
【０００６】
また本発明者は特にＳＣＣＡ−１の発現を指標とする肌の感受性評価を目的とする研究を行ったところ、コントロールと比較して、アトピー性乾燥皮膚では１６倍、露光部皮膚では９０倍、花粉症アレルギー性皮膚では２３２倍、乾癬皮膚では４６６倍もＳＣＣＡ−１の発現が亢進しているという知見も得ている（特願２００６−０７５０２４）。
【０００７】
更に本発明者は、細胞増殖とＳＣＣＡ、特にＳＣＣＡ−１との関係について種々の検討を行ったところ、
−ＳＣＣＡ高発現マウスにおいて細胞増殖が活性化されていること、
−ＳＣＣＡ高発現マウスにおいて表皮肥厚が見られること、
−ＳＣＣＡ−１高発現細胞株において、細胞増殖とＳＣＣＡ−１発現量に相関性があること、及び
−ＳＣＣＡノックダウン細胞株において細胞増殖活性が低下すること、を見出した。
【０００８】
以上より、ＳＣＣＡ、特にＳＣＣＡ−１の産生を有効に抑制する物質があれば細胞異常増殖に起因する疾患、並びにＳＣＣＡ−１産生亢進に起因する疾患の予防及び／または治療に有用であると考えられる。
【０００９】
【特許文献１】特開２００５−２８１１４０
【００１０】
【非特許文献１】Cancer 40:1621-1628 (1977)
【非特許文献２】Cancer 62: 730-734 (1988)
【非特許文献３】J. Invest. Dermatol. 118(1), 147-154(2002)
【非特許文献４】British Journal of Dermatology 109, 77-85(1983)
【非特許文献５】J. Biol. Chem. 27213, 1849-55(1997)
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
本発明者は、細胞増殖とＳＣＣＡ−１の関係に着目して、多種多様な薬物をスクリーニングした結果、Ｎ−ベンゼンスルホニル−γ−アミノ酪酸及び／またはその塩がＳＣＣＡ−１の産生を有意に抑制することを見出した。従って、本発明者は、当該Ｎ−ベンゼンスルホニル−γ−アミノ酪酸及び／またはその塩は、そのＳＣＣＡ−１産生抑制作用に基づき細胞異常増殖に起因する疾患、並びにＳＣＣＡ−１産生亢進に起因する疾患を予防及び／または治療するために極めて有用であると考え、本発明を完成するに至った。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本願は以下の発明を包含する：
［１］ 一般式（Ｉ）のＮ−ベンゼンスルホニル−γ−アミノ酪酸
【化１】
及び／またはその塩を活性成分として含有する、ＳＣＣＡ−１産生抑制剤。
［２］ ［１］に記載のＮ−ベンゼンスルホニル−γ−アミノ酪酸及び／またはその塩を有効成分として含有する、細胞増殖異常に起因する疾患を予防及び／または治療するための医薬組成物。
［３］ ［１］に記載のＮ−ベンゼンスルホニル−γ−アミノ酪酸及び／またはその塩を有効成分として含有する、表皮肥厚を予防及び／または治療するための医薬組成物。
［４］ ［１］に記載のＮ−ベンゼンスルホニル−γ−アミノ酪酸及び／またはその塩を有効成分として含有する、基底細胞癌（basal cell carcinoma : BCC）、有棘細胞癌（squamous cell carcinoma : SCC）、Bowen病（Bowen’s disease）、毛母腫（石灰化上皮腫、pilomatricoma）、脂漏性角化症（sebarrheic keratosis）、光線角化症（日光角化症、actinic keratosis, solar keratosis）など悪性腫瘍（carcinoma）および前癌状態、扁平苔癬様角化症（lichen planus-like keratosis）、良性苔癬様角化症（benign lichenoid keratosis）、軟線腺腫（acrochordon, cutaneous tag）、膿疱性乾癬（pustular psoriasis）、尋常性乾癬（psoriasis vulgaris）など乾癬（psoriasis）、色素性乾皮症（xeroderma pigmentatosum : XP）、アトピー性皮膚炎（atopic dermatitis）、全身性エリテマトーデス（systemic lupus erythematosus : SLE）、円形状全身性エリテマトーデス（discoid lupus erythematosus : DLE）などエリテマトーデス（erythematosus）、汗孔角化症（porokeratosis）、炎症性線上疣贄表皮母斑(inflammatory linear verrucous epidermal naevus : ILVEN)などの母斑や疣贄、肥厚（hyperplasia）を伴う良性角化症から成る群から選定される疾患を治療するための医薬組成物。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１３】
本発明に係るＮ−ベンゼンスルホニル−γ−アミノ酪酸及び／またはその塩は、ＳＣＣＡ−１の産生を抑制するのに極めて有用である。具体的には、Ｎ−ベンゼンスルホニル−γ−アミノ酪酸をヒトケラチノサイトの培養中に培地に添加すると、有意にＳＣＣＡ１産生量が抑制されることを見出した。表皮細胞の増殖異常をきたし、且つＳＣＣＡ１発現が顕著に亢進している３次元皮膚モデルをＮ−ベンゼンスルホニル−γ−アミノ酪酸含有培地で培養することで表皮肥厚を予防、改善できることも確認された。さらに、1−ピペリジンプロピオン酸をヒト皮膚に連用塗布することで、塗布部におけるＳＣＣＡ１量が有意に低下することも確認された。
【００１４】
更に本発明に係るＮ−ベンゼンスルホニル−γ−アミノ酪酸及び／またはその塩のヒト皮膚への効果を検討したところ、ヒト皮膚の表皮の肥厚亢進を抑制するのに有用であることが確認された。
【００１５】
従って、本発明に係るＮ−ベンゼンスルホニル−γ−アミノ酪酸及び／またはその塩は、ＳＣＣＡ−１の産生を抑制することによって細胞の異常増殖に起因する疾患、例えば、基底細胞癌、有棘細胞癌、Bowen病、毛母腫（石灰化上皮腫）、脂漏性角化症、光線角化症（日光角化症）などの悪性腫瘍および前癌状態、扁平苔癬様角化症、良性苔癬様角化症、軟線腺腫、膿疱性乾癬、尋常性乾癬などの乾癬、色素性乾皮症、アトピー性皮膚炎、全身性エリテマトーデス、円形状全身性エリテマトーデスなどのエリテマトーデス、汗孔角化症、炎症性線上疣贄表皮母斑などの母斑や疣贄、肥厚を伴う良性角化症などを予防及び／または治療するために有用である。
【００１６】
本発明に係るＮ−ベンゼンスルホニル−γ−アミノ酪酸は以下の一般式（Ｉ）の化合物である。
【化２】
【００１７】
本発明に係る一般式（Ｉ）で示されるＮ−ベンゼンスルホニル−γ−アミノ酪酸は公知の物質であり、公知の方法により容易に合成することができ、または市販品を容易に購入することができる。
【００１８】
また、本発明に係る一般式（Ｉ）で示されるＮ−ベンゼンスルホニル−γ−アミノ酪酸は公知の方法により無機塩又は有機塩とすることができる。本発明において用いられる塩としては、特に限定されないが、例えば、無機塩としては、塩酸塩、硫酸塩、リン酸塩、臭化水素酸塩、ナトリウム塩、カリウム塩、マグネシウム塩、カルシウム塩、アンモニウム塩等が挙げられる。有機塩としては、酢酸塩、乳酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、酒石酸塩、クエン酸塩、メタンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、トリエタノールアミン塩、ジエタノールアミン塩、アミノ酸塩等が挙げられる。
【００１９】
本発明のＳＣＣＡ−１産生抑制剤及び医薬組成物は、Ｎ−ベンゼンスルホニル−γ−アミノ酪酸及び／またはその塩、及び医薬的に許容され得る賦形剤及び/または担体を含んで成る。この医薬組成物には機能を発揮するのに有効な量のＮ−ベンゼンスルホニル−γ−アミノ酪酸及び／またはその塩が含有され、その含有量は、その医薬組成物の用途に応じて変わり得るであろうが、例えば医薬組成物全量中、０．００１〜２０．０質量％が好ましく、さらに好ましくは、０．０１〜１０．０質量％であり、特に好ましくは０．２〜１０．０質量％であろう。なおＮ−ベンゼンスルホニル−γ−アミノ酪酸及び／またはその塩が混合されて用いられる場合は、それらの総含有量の上限を２０．０質量％以下にすることが好ましく、さらに好ましくは１０．０質量％以下にすることであろう。
【００２０】
本発明のＳＣＣＡ−１産生抑制剤及び医薬組成物は、その用途に応じた様々な剤型をとってよく、例えば経口、例えば錠剤、コート錠、糖衣錠、ハードもしくはソフトゼラチンカプセル、溶液または懸濁物の形態で、または経腸、例えば坐剤の形態、または非経口、例えば注射液の形態、または外用、例えばパッチ剤、軟膏、クリームまたは乳液でも投与され得る。
【００２１】
本発明のＳＣＣＡ−１産生抑制剤及び医薬組成物は、活性成分と共に例えば、所望により、適宜無機または有機固体または液体の医薬的に許容され得る担体を含み得る。例えば、希釈剤（ラクトース、デキストロース、サッカロース、マンニトール、ソルビトール及びセルロース等）、滑沢剤（シリカ、タルク、ステアリン酸もしくはその塩、例えばステアリン酸マグネシウムもしくはステアリン酸カルシウム等）、及び／またはポリエチレングリコール等を含み得る。また錠剤は、結合剤（ケイ酸アルミニウムマグネシウム、スターチ、ゼラチン、トラガカント、メチルセルロース、ナトリウムカルボキシメチルセルロース及び／またはポリビニルピロリドン等）、及び所望により崩壊剤（スターチ、寒天、アルギン酸もしくはその塩、及び／または発泡性混合物等）、吸収剤、着色剤、香味料及び／または甘味料等を含み得る。
【００２２】
更に本発明のＳＣＣＡ−１産生抑制剤及び医薬組成物は、保存剤、可溶化剤、安定化剤、湿潤剤、乳化剤、甘味剤、着色剤、香味剤、浸透圧を変化させるための塩、緩衝剤、コーティング剤、または抗酸化剤も含み得る。また本発明のＳＣＣＡ−１産生抑制剤及び医薬組成物は、本発明に係るＮ−ベンゼンスルホニル−γ−アミノ酪酸及び／またはその塩以外の追加の活性成分等の治療的に価値のある物質も更に含み得る。
【００２３】
本発明のＳＣＣＡ−１産生抑制剤及び医薬組成物の用法用量は広い範囲で変化させることができ、そしてそれは当業界において公知の方法で決定され得る。かかる用法用量は、投与経路、処置される症状、及び処置される患者を含むそれぞれに特定なケースで個々の要求に対して調整される。その投薬量は、その医薬品組成物の用途および剤形もしくは患者の体重および体表面積に応じて変わり得るであろうが、1日の投薬量0.1μg〜10000mgが好ましく、さらに好ましくは100μg〜1000 mgが好ましい。これらを単回もしくは分割して投薬を行い、投薬方法は経口や注入で投与してもよく、塗布での投与でもよい。
【実施例１】
【００２４】
ＳＣＣＡ高発現トランスジェニックマウスを用いた検討：
ＳＣＣＡ１は増殖異常ヒト皮膚において、表皮上層で高発現するが、正常皮膚における発現はほとんど観察されない。インボルクリンは表皮の最終分化過程で発現する分化マーカーでもあるため、インボルクリンプロモーターを用いてＳＣＣＡ１トランスジェニックマウスマウスを作成した。ＳＣＣＡ−１ ｃＤＮＡをインボルクリンプロモーター(L.B. Taichman, State University of New York, Stony Brook, NY; Carroll et al., 1993)に融合し、そしてＢＤＦ１マウスを使用してトランスジェニックマウスを作製した。無毛表現型を得るために、当該インボルクリン−ＳＣＣＡ−１トランスジェニックマウスを、ＨＲ−１マウスと交配させ、そして３継代を経てＳＣＣＡ−１＋／＋マウスを得た。トランスイルミネーターにより、２００ｍＪ/ｃｍ2／日で、２日間、ＵＶＢ照射をした。その後、皮膚サンプルを採取し、トランスジェニックマウスマウスで目的通りＳＣＣＡ１が表皮上層で高発現していることを確認するため、ＭｏＭａｐキット(Ventana Medical Systems, Inc.)を使用して、抗−ＳＣＣＡ−１モノクローナル抗体（Santa Cruz Biotechnology, CA, USA）で免疫染色したところ、当該トランスジェニックマウスの表皮上層でＳＣＣＡ−１の強度な発現が認められたが、同様に染色した野生型マウスではかかる発現は認められなかった（図１）。更に当該トランスジェニックマウスの皮膚を採取し、ＰＦＡ固定した後、ヘマトキシリン及びエオシンで染色したところ、顕著な表皮肥厚が認められたが、同様に染色した野生型マウスではかかる表皮肥厚は認められなかった（図２）。
【００２５】
上記の通り作製したトランスジェニクマウスにおける細胞増殖の活性を調べるために、抗Ｋｉ−６７抗体（ｓｃ−７８４６：Santa Cruz Biotechnology, CA, USA）および抗ケラチン１４抗体で免疫染色したところ、基底細胞層のマーカーであるケラチン１４及び増殖細胞マーカーであるＫｉ−６７の亢進が認められ、ＳＣＣＡ１トランスジェニクマウスの基底細胞層では著しくＫｉ−６７細胞が増殖することが認められたが、同様に染色した野生型マウスではかかる亢進は認められなかった（図３）。
【実施例２】
【００２６】
ＳＣＣＡ高発現細胞を用いた検討：
乾癬のｃＤＮＡライブラリーからクローニングしたＳＣＣＡ−１及びＳＣＣＡ−２ｃＤＮＡ（Takeda et al.,2002）をｐターゲットベクターにサブクローニングし、そしてLipofectamine Plus(Invitrogen)を使用して３Ｔ３／Ｊ２細胞にトランスフェクトした。５００μｇ／ｍｌのＧ４１８中で４週間培養した後、ＳＣＣＡ−１について２０のコロニーを単離し、そしてＳＣＣＡ発現細胞株として確立した（図４）。
【００２７】
上記の通り作製したＳＣＣＡ高発現細胞のＳＣＣＡ発現量をＴａｑｍａｎ ＰＣＲにより測定したところ、２０のコロニーの発現量は、１〜２７７２倍で変化した。当該ＳＣＣＡ高発現細胞では、ＳＣＣＡ−１発現量の増加に伴い、細胞増殖活性の上昇が認められた（図５）。なお、ＰＣＲ分析は下記のとおりに行った。ＲＮＡをＩｓｏｇｅｎ（ニッポンジーン）を用いて調製し、そして以下のプライマー／プローブを用いて、当量の相補性ＤＮＡをＡＢＩ ＰＲＩＳＭ ７９００ＨＴ配列検出装置（Taqman PE)(Applied Biosystems)による定量ＰＣＲ分析にかけた。
・ヒトＳＣＣＡ１
フォワードプライマー 5’-GTGCTATCTGGAGTCCT-3’（配列番号１）
リバースプライマー 5’-CTGTTGTTGCCAGCAA-3’ （配列番号２）
プローブ 5’-CATCACCTACTTCAACT-3’ （配列番号３）
・ヒトＳＣＣＡ２
フォワードプライマー 5’-CTCTGCTTCCTCTAGGAACACAG-3’ （配列番号４）
リバースプライマー 5’-TGTTGGCGATCTTCAGCTCA-3’ （配列番号５）
プローブ 5’-AGTTCCAGATCACATCGAGTT-3（配列番号６）
・ヒトＧＡＰＤＨ
フォワードプライマー 5’-GAAGGTGAAGGTCGGAGTC-3’ （配列番号７）
リバースプライマー 5’-GAAGATGGTGATGGGATTTC-3’ （配列番号８）
プローブ 5’-AGGCTGAGAACGGGAAGCTTGT-3’ （配列番号９）
ＧＡＰＤＨは内部コントロールとして用いた。また、半定量ＲＴ−ＰＣＲ分析を以下のプライマーを用いて行った。
・マウスＳＣＣＡ(Serpinb 3a)
フォワードプライマー 5’-CTATCCTTCCTGCCCACTTC-3’ （配列番号１０）
リバースプライマー 5’-CTTTGCTCCATAGATACTGTTGG-3’ （配列番号１１）
・マウスＧＡＰＤＨ
フォワードプライマー 5’-CCCATCACCATCTTCCAG−3’ （配列番号１２）
リバースプライマー 5’-CCTGCTTCACCACCTTCT-3 （配列番号１３）
【実施例３】
【００２８】
ＳＣＣＡノックダウン細胞を用いた検討：
２本鎖オリゴヌクレオチドを、発現したオリゴＲＮＡ中でヘアピン構造を形成させるヒトＳＣＣＡの共通配列（５'-AAGCCAACACCAAGTTCATGT-３'：配列番号１４）に対応するように設計し、pサイレンサーベクター(Ambion)中でクローン化し、そしてケラチノサイト細胞株ＨａＣａｔ細胞にトランスフェクトした。ＧＦＰ ｍＲＮＡ(Ambion)に対するｓｉＲＮＡをコントロールとして用いた。トランスフェクションは、Lipofectamine 2000(Invitrogen)により行い、そしてハイグロマイシンーＢを培地に添加して４−６週間培養を行って、恒常的にSCCA発現がノックダウンされている細胞株を確立した（図６）。
【００２９】
上記の通り作製したＳＣＣＡノックダウン細胞のＳＣＣＡ発現量を上記のとおりにＴａｑｍａｎ ＰＣＲにより測定したところ、ＳＣＣＡ−１及びＳＣＣＡ−２の発現量が共に９０％以上抑制された（図７）。当該ＳＣＣＡノックダウン細胞ではコントロールと比較してケラチノサイト増殖活性の有意な低下が認められた（図８）。
【実施例４】
【００３０】
細胞系におけるＮ−ベンゼンスルホニル−γ−アミノ酪酸によるＳＣＣＡ−１発現抑制効果：
ヒトケラチノサイトを培養し、６０〜７０％コンフルエント状態で３％のＮ−ベンゼンスルホニル−γ−アミノ酪酸を添加した。２４時間後にＲＮＡを採取し、定量的ＰＣＲを用いてＳＣＣＡ遺伝子発現量を測定（内部標準にはＧ３ＰＤＨを使用）した。その結果を図９に示す。この図に示すとおり、ＳＣＣＡ−１遺伝子発現量の有意な減少が認められた。
【実施例５】
【００３１】
Ｎ−ベンゼンスルホニル−γ−アミノ酪酸のヒト皮膚への効果：
３％のＮ−ベンゼンスルホニル−γ−アミノ酪酸含有薬剤をハーフフェイス法を用いて連用塗布した。すなわち、半顔にＮ−ベンゼンスルホニル−γ−アミノ酪酸含有薬剤を、半顔にＮ−ベンゼンスルホニル−γ−アミノ酪酸除去コントロールを塗布した。左右どちらにＮ−ベンゼンスルホニル−γ−アミノ酪酸含有薬剤を塗布するかは、被験者および測定者ともにブラインドとした（ダブルブラインド試験）。連用前、１ヶ月後後の表皮ＳＣＣＡ１量を測定した。
【００３２】
両頬のＳＣＣＡ−１発現量を以下のＥＬＩＳＡ法にて測定した。
ＥＬＩＳＡ法：
皮膚角層試料は、透明粘着テープ（セロテープ（登録商標）(NICHIBAN)）を皮膚表面に貼付したのち剥離するテープストリッピングにより採取した。皮膚角層の付着したこのテープを裁断、抽出バッファー（０．１Ｍ Ｔｒｉｓ-ＨＣｌ(ｐＨ８．０), ０．１４Ｍ ＮａＣｌ, ０．１％ Ｔｗｅｅｎ-２０, １ｍｌ）に浸漬、超音波処理（２０ ｓｅｃ ×４）にかけ、試料抽出液を作製した。ＰＢＳに希釈したポリクローナル抗ＳＣＣＡ抗体（１:１０００に希釈）を１００μlずつ、９６穴ＥＬＩＳＡプレートの各ウェルに分注し、一晩室温におき、プレートの固相に結合させた。その後、プレートへの非特異的な結合を阻害するために、ブロッキング溶液（ブロックエースをＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ ２０で希釈した溶液、３００μl／ウェル）にて１時間インキュベートした。上記試料抽出液５０μlをＥＬＩＳＡプレートの各ウェルに添加し、３７℃で２時間反応させた。モノクローナル抗ＳＣＣＡ−１抗体（１:１０００に希釈）を添加して37℃で１時間反応させた。次に、二次抗体、西洋ワサビペルオキシダ−ゼ標識抗マウスを添加して３７℃で１時間反応させ、０．１％ Ｔｗｅｅｎ-20 ＰＢＳで洗浄後、基質3',3',5',5'−テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）を添加して、ＴＭＢ Peroxidase ＥＩＡ substrate kit (BIO-RAD社)を用いて発色させ、６３０ ｎｍで測定を行った。Ｎ−ベンゼンスルホニル−γ−アミノ酪酸を１ヶ月連用塗布することにより、コントロールである１５％エタノールと比較して、表皮のＳＣＣＡ−１量が有意に低下した（図１０Ａ）。また各被験者の０ヶ月データとの差（改善度）結果からも連用塗布によって、有意にＳＣＣＡ−１が低下したことが明らかになった（図１０Ｂ）。
【図面の簡単な説明】
【００３３】
【図１】ＳＣＣＡ−１トランスジェニックマウスの作製方法を示す。
【図２】ＳＣＣＡ高発現マウスにおける細胞増殖の活性化について、野生型マウスと比較したケラチン１４及びＫｉ−６７の亢進を示す。
【図３】ＳＣＣＡ高発現マウスにおける表皮肥厚について、老化した野生型マウスと比較した皮膚染色を示す。
【図４】ＳＣＣＡ−１高発現細胞の確立方法を示す。
【図５】ＳＣＣＡ−１発現量と細胞増殖活性の相関を示す。
【図６】ＲＮＡ干渉を用いたＳＣＣＡノックダウン細胞の確立方法を示す。
【図７】ＳＣＣＡノックダウン細胞株における、ＳＣＣＡ−１及びＳＣＣＡ−２の発現量を示す。
【図８】ＳＣＣＡノックダウン細胞株における細胞増殖活性の低下を示す。
【図９】細胞系における１−ピペリジンプロピオン酸によるＳＣＣＡ−１発現抑制効果を示す。
【図１０】ヒト頬へのＮ−ベンゼンスルホニル−γ−アミノ酪酸塗布後のＳＣＣＡ−１量の改善効果を示す。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、Ｎ−ベンゼンスルホニル−γ−アミノ酪酸及び／またはその塩を活性成分として含む、扁平上皮細胞癌関連抗原−１(Squamous Cell Carcinoma Antigen 1、以下「ＳＣＣＡ−１と称す」)産生抑制剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
扁平上皮細胞癌関連抗原（ＳＣＣＡ）は扁平上皮癌細胞で発見された抗原であり、子宮頚部、肺、食道、皮膚の扁平上皮細胞癌で高い血中濃度を示し、扁平上皮細胞癌の診断によく利用されている（非特許文献１：H. Kato et al. Cancer 40:1621-1628 (1977)、非特許文献２：N．Mino et al. Cancer 62: 730-734 (1988)）。
【０００３】
ＳＣＣＡはまた、扁平上皮細胞癌のみならず、本発明者らの研究より、乾癬表皮の上層において発現の亢進が認められることでも知られる（非特許文献３：Takeda A. et al、 J. Invest. Dermatol. (2002) 118(1), 147-154）。乾癬は羅患率の高い皮膚疾患の一つであり、表皮細胞の増殖・分化異常と炎症細胞浸潤を特徴とする慢性、再発性の炎症性不全角化症である。乾癬は遺伝的素因に種々の環境因子が加わって発症すると考えられる（非特許文献４：Hopso-Havu et al. British Journal of Dermatology (1983) 109, 77-85）。
【０００４】
ＳＣＣＡは染色体18ｑ21.3上にタンデムに並んでいる二つの遺伝子ＳＣＣＡ−１及びＳＣＣＡ−２遺伝子によりコードされる。それらによりコードされるタンパク質、ＳＣＣＡ−１及びＳＣＣＡ−２は共に分子量約45,000のタンパク質であり、非常に相同性が高いが、反応部位のアミノ酸配列が異なり、異なる機能を有していると考えられている（非特許文献５：Schick et al. J. Biol. Chem. (1997) 27213, 1849-55）。
【０００５】
本発明者はＳＣＣＡ−１やＳＣＣＡ−２が関与する表皮の生理学的メカニズムの解明を目的とする研究を行ったところ、両ＳＣＣＡはともに細胞のアポトーシスを抑制する作用を有する抗アポトーシス因子であるという知見を得ている（特許文献１：特開２００５−２８１１４０）。
【０００６】
また本発明者は特にＳＣＣＡ−１の発現を指標とする肌の感受性評価を目的とする研究を行ったところ、コントロールと比較して、アトピー性乾燥皮膚では１６倍、露光部皮膚では９０倍、花粉症アレルギー性皮膚では２３２倍、乾癬皮膚では４６６倍もＳＣＣＡ−１の発現が亢進しているという知見も得ている（特願２００６−０７５０２４）。
【０００７】
更に本発明者は、細胞増殖とＳＣＣＡ、特にＳＣＣＡ−１との関係について種々の検討を行ったところ、
−ＳＣＣＡ高発現マウスにおいて細胞増殖が活性化されていること、
−ＳＣＣＡ高発現マウスにおいて表皮肥厚が見られること、
−ＳＣＣＡ−１高発現細胞株において、細胞増殖とＳＣＣＡ−１発現量に相関性があること、及び
−ＳＣＣＡノックダウン細胞株において細胞増殖活性が低下すること、を見出した。
【０００８】
以上より、ＳＣＣＡ、特にＳＣＣＡ−１の産生を有効に抑制する物質があれば細胞異常増殖に起因する疾患、並びにＳＣＣＡ−１産生亢進に起因する疾患の予防及び／または治療に有用であると考えられる。
【０００９】
【特許文献１】特開２００５−２８１１４０
【００１０】
【非特許文献１】Cancer 40:1621-1628 (1977)
【非特許文献２】Cancer 62: 730-734 (1988)
【非特許文献３】J. Invest. Dermatol. 118(1), 147-154(2002)
【非特許文献４】British Journal of Dermatology 109, 77-85(1983)
【非特許文献５】J. Biol. Chem. 27213, 1849-55(1997)
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
本発明者は、細胞増殖とＳＣＣＡ−１の関係に着目して、多種多様な薬物をスクリーニングした結果、Ｎ−ベンゼンスルホニル−γ−アミノ酪酸及び／またはその塩がＳＣＣＡ−１の産生を有意に抑制することを見出した。従って、本発明者は、当該Ｎ−ベンゼンスルホニル−γ−アミノ酪酸及び／またはその塩は、そのＳＣＣＡ−１産生抑制作用に基づき細胞異常増殖に起因する疾患、並びにＳＣＣＡ−１産生亢進に起因する疾患を予防及び／または治療するために極めて有用であると考え、本発明を完成するに至った。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本願は以下の発明を包含する：
［１］ 一般式（Ｉ）のＮ−ベンゼンスルホニル−γ−アミノ酪酸
【化１】
及び／またはその塩を活性成分として含有する、ＳＣＣＡ−１産生抑制剤。
［２］ ［１］に記載のＮ−ベンゼンスルホニル−γ−アミノ酪酸及び／またはその塩を有効成分として含有する、細胞増殖異常に起因する疾患を予防及び／または治療するための医薬組成物。
［３］ ［１］に記載のＮ−ベンゼンスルホニル−γ−アミノ酪酸及び／またはその塩を有効成分として含有する、表皮肥厚を予防及び／または治療するための医薬組成物。
［４］ ［１］に記載のＮ−ベンゼンスルホニル−γ−アミノ酪酸及び／またはその塩を有効成分として含有する、基底細胞癌（basal cell carcinoma : BCC）、有棘細胞癌（squamous cell carcinoma : SCC）、Bowen病（Bowen’s disease）、毛母腫（石灰化上皮腫、pilomatricoma）、脂漏性角化症（sebarrheic keratosis）、光線角化症（日光角化症、actinic keratosis, solar keratosis）など悪性腫瘍（carcinoma）および前癌状態、扁平苔癬様角化症（lichen planus-like keratosis）、良性苔癬様角化症（benign lichenoid keratosis）、軟線腺腫（acrochordon, cutaneous tag）、膿疱性乾癬（pustular psoriasis）、尋常性乾癬（psoriasis vulgaris）など乾癬（psoriasis）、色素性乾皮症（xeroderma pigmentatosum : XP）、アトピー性皮膚炎（atopic dermatitis）、全身性エリテマトーデス（systemic lupus erythematosus : SLE）、円形状全身性エリテマトーデス（discoid lupus erythematosus : DLE）などエリテマトーデス（erythematosus）、汗孔角化症（porokeratosis）、炎症性線上疣贄表皮母斑(inflammatory linear verrucous epidermal naevus : ILVEN)などの母斑や疣贄、肥厚（hyperplasia）を伴う良性角化症から成る群から選定される疾患を治療するための医薬組成物。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１３】
本発明に係るＮ−ベンゼンスルホニル−γ−アミノ酪酸及び／またはその塩は、ＳＣＣＡ−１の産生を抑制するのに極めて有用である。具体的には、Ｎ−ベンゼンスルホニル−γ−アミノ酪酸をヒトケラチノサイトの培養中に培地に添加すると、有意にＳＣＣＡ１産生量が抑制されることを見出した。表皮細胞の増殖異常をきたし、且つＳＣＣＡ１発現が顕著に亢進している３次元皮膚モデルをＮ−ベンゼンスルホニル−γ−アミノ酪酸含有培地で培養することで表皮肥厚を予防、改善できることも確認された。さらに、1−ピペリジンプロピオン酸をヒト皮膚に連用塗布することで、塗布部におけるＳＣＣＡ１量が有意に低下することも確認された。
【００１４】
更に本発明に係るＮ−ベンゼンスルホニル−γ−アミノ酪酸及び／またはその塩のヒト皮膚への効果を検討したところ、ヒト皮膚の表皮の肥厚亢進を抑制するのに有用であることが確認された。
【００１５】
従って、本発明に係るＮ−ベンゼンスルホニル−γ−アミノ酪酸及び／またはその塩は、ＳＣＣＡ−１の産生を抑制することによって細胞の異常増殖に起因する疾患、例えば、基底細胞癌、有棘細胞癌、Bowen病、毛母腫（石灰化上皮腫）、脂漏性角化症、光線角化症（日光角化症）などの悪性腫瘍および前癌状態、扁平苔癬様角化症、良性苔癬様角化症、軟線腺腫、膿疱性乾癬、尋常性乾癬などの乾癬、色素性乾皮症、アトピー性皮膚炎、全身性エリテマトーデス、円形状全身性エリテマトーデスなどのエリテマトーデス、汗孔角化症、炎症性線上疣贄表皮母斑などの母斑や疣贄、肥厚を伴う良性角化症などを予防及び／または治療するために有用である。
【００１６】
本発明に係るＮ−ベンゼンスルホニル−γ−アミノ酪酸は以下の一般式（Ｉ）の化合物である。
【化２】
【００１７】
本発明に係る一般式（Ｉ）で示されるＮ−ベンゼンスルホニル−γ−アミノ酪酸は公知の物質であり、公知の方法により容易に合成することができ、または市販品を容易に購入することができる。
【００１８】
また、本発明に係る一般式（Ｉ）で示されるＮ−ベンゼンスルホニル−γ−アミノ酪酸は公知の方法により無機塩又は有機塩とすることができる。本発明において用いられる塩としては、特に限定されないが、例えば、無機塩としては、塩酸塩、硫酸塩、リン酸塩、臭化水素酸塩、ナトリウム塩、カリウム塩、マグネシウム塩、カルシウム塩、アンモニウム塩等が挙げられる。有機塩としては、酢酸塩、乳酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、酒石酸塩、クエン酸塩、メタンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、トリエタノールアミン塩、ジエタノールアミン塩、アミノ酸塩等が挙げられる。
【００１９】
本発明のＳＣＣＡ−１産生抑制剤及び医薬組成物は、Ｎ−ベンゼンスルホニル−γ−アミノ酪酸及び／またはその塩、及び医薬的に許容され得る賦形剤及び/または担体を含んで成る。この医薬組成物には機能を発揮するのに有効な量のＮ−ベンゼンスルホニル−γ−アミノ酪酸及び／またはその塩が含有され、その含有量は、その医薬組成物の用途に応じて変わり得るであろうが、例えば医薬組成物全量中、０．００１〜２０．０質量％が好ましく、さらに好ましくは、０．０１〜１０．０質量％であり、特に好ましくは０．２〜１０．０質量％であろう。なおＮ−ベンゼンスルホニル−γ−アミノ酪酸及び／またはその塩が混合されて用いられる場合は、それらの総含有量の上限を２０．０質量％以下にすることが好ましく、さらに好ましくは１０．０質量％以下にすることであろう。
【００２０】
本発明のＳＣＣＡ−１産生抑制剤及び医薬組成物は、その用途に応じた様々な剤型をとってよく、例えば経口、例えば錠剤、コート錠、糖衣錠、ハードもしくはソフトゼラチンカプセル、溶液または懸濁物の形態で、または経腸、例えば坐剤の形態、または非経口、例えば注射液の形態、または外用、例えばパッチ剤、軟膏、クリームまたは乳液でも投与され得る。
【００２１】
本発明のＳＣＣＡ−１産生抑制剤及び医薬組成物は、活性成分と共に例えば、所望により、適宜無機または有機固体または液体の医薬的に許容され得る担体を含み得る。例えば、希釈剤（ラクトース、デキストロース、サッカロース、マンニトール、ソルビトール及びセルロース等）、滑沢剤（シリカ、タルク、ステアリン酸もしくはその塩、例えばステアリン酸マグネシウムもしくはステアリン酸カルシウム等）、及び／またはポリエチレングリコール等を含み得る。また錠剤は、結合剤（ケイ酸アルミニウムマグネシウム、スターチ、ゼラチン、トラガカント、メチルセルロース、ナトリウムカルボキシメチルセルロース及び／またはポリビニルピロリドン等）、及び所望により崩壊剤（スターチ、寒天、アルギン酸もしくはその塩、及び／または発泡性混合物等）、吸収剤、着色剤、香味料及び／または甘味料等を含み得る。
【００２２】
更に本発明のＳＣＣＡ−１産生抑制剤及び医薬組成物は、保存剤、可溶化剤、安定化剤、湿潤剤、乳化剤、甘味剤、着色剤、香味剤、浸透圧を変化させるための塩、緩衝剤、コーティング剤、または抗酸化剤も含み得る。また本発明のＳＣＣＡ−１産生抑制剤及び医薬組成物は、本発明に係るＮ−ベンゼンスルホニル−γ−アミノ酪酸及び／またはその塩以外の追加の活性成分等の治療的に価値のある物質も更に含み得る。
【００２３】
本発明のＳＣＣＡ−１産生抑制剤及び医薬組成物の用法用量は広い範囲で変化させることができ、そしてそれは当業界において公知の方法で決定され得る。かかる用法用量は、投与経路、処置される症状、及び処置される患者を含むそれぞれに特定なケースで個々の要求に対して調整される。その投薬量は、その医薬品組成物の用途および剤形もしくは患者の体重および体表面積に応じて変わり得るであろうが、1日の投薬量0.1μg〜10000mgが好ましく、さらに好ましくは100μg〜1000 mgが好ましい。これらを単回もしくは分割して投薬を行い、投薬方法は経口や注入で投与してもよく、塗布での投与でもよい。
【実施例１】
【００２４】
ＳＣＣＡ高発現トランスジェニックマウスを用いた検討：
ＳＣＣＡ１は増殖異常ヒト皮膚において、表皮上層で高発現するが、正常皮膚における発現はほとんど観察されない。インボルクリンは表皮の最終分化過程で発現する分化マーカーでもあるため、インボルクリンプロモーターを用いてＳＣＣＡ１トランスジェニックマウスマウスを作成した。ＳＣＣＡ−１ ｃＤＮＡをインボルクリンプロモーター(L.B. Taichman, State University of New York, Stony Brook, NY; Carroll et al., 1993)に融合し、そしてＢＤＦ１マウスを使用してトランスジェニックマウスを作製した。無毛表現型を得るために、当該インボルクリン−ＳＣＣＡ−１トランスジェニックマウスを、ＨＲ−１マウスと交配させ、そして３継代を経てＳＣＣＡ−１＋／＋マウスを得た。トランスイルミネーターにより、２００ｍＪ/ｃｍ2／日で、２日間、ＵＶＢ照射をした。その後、皮膚サンプルを採取し、トランスジェニックマウスマウスで目的通りＳＣＣＡ１が表皮上層で高発現していることを確認するため、ＭｏＭａｐキット(Ventana Medical Systems, Inc.)を使用して、抗−ＳＣＣＡ−１モノクローナル抗体（Santa Cruz Biotechnology, CA, USA）で免疫染色したところ、当該トランスジェニックマウスの表皮上層でＳＣＣＡ−１の強度な発現が認められたが、同様に染色した野生型マウスではかかる発現は認められなかった（図１）。更に当該トランスジェニックマウスの皮膚を採取し、ＰＦＡ固定した後、ヘマトキシリン及びエオシンで染色したところ、顕著な表皮肥厚が認められたが、同様に染色した野生型マウスではかかる表皮肥厚は認められなかった（図２）。
【００２５】
上記の通り作製したトランスジェニクマウスにおける細胞増殖の活性を調べるために、抗Ｋｉ−６７抗体（ｓｃ−７８４６：Santa Cruz Biotechnology, CA, USA）および抗ケラチン１４抗体で免疫染色したところ、基底細胞層のマーカーであるケラチン１４及び増殖細胞マーカーであるＫｉ−６７の亢進が認められ、ＳＣＣＡ１トランスジェニクマウスの基底細胞層では著しくＫｉ−６７細胞が増殖することが認められたが、同様に染色した野生型マウスではかかる亢進は認められなかった（図３）。
【実施例２】
【００２６】
ＳＣＣＡ高発現細胞を用いた検討：
乾癬のｃＤＮＡライブラリーからクローニングしたＳＣＣＡ−１及びＳＣＣＡ−２ｃＤＮＡ（Takeda et al.,2002）をｐターゲットベクターにサブクローニングし、そしてLipofectamine Plus(Invitrogen)を使用して３Ｔ３／Ｊ２細胞にトランスフェクトした。５００μｇ／ｍｌのＧ４１８中で４週間培養した後、ＳＣＣＡ−１について２０のコロニーを単離し、そしてＳＣＣＡ発現細胞株として確立した（図４）。
【００２７】
上記の通り作製したＳＣＣＡ高発現細胞のＳＣＣＡ発現量をＴａｑｍａｎ ＰＣＲにより測定したところ、２０のコロニーの発現量は、１〜２７７２倍で変化した。当該ＳＣＣＡ高発現細胞では、ＳＣＣＡ−１発現量の増加に伴い、細胞増殖活性の上昇が認められた（図５）。なお、ＰＣＲ分析は下記のとおりに行った。ＲＮＡをＩｓｏｇｅｎ（ニッポンジーン）を用いて調製し、そして以下のプライマー／プローブを用いて、当量の相補性ＤＮＡをＡＢＩ ＰＲＩＳＭ ７９００ＨＴ配列検出装置（Taqman PE)(Applied Biosystems)による定量ＰＣＲ分析にかけた。
・ヒトＳＣＣＡ１
フォワードプライマー 5’-GTGCTATCTGGAGTCCT-3’（配列番号１）
リバースプライマー 5’-CTGTTGTTGCCAGCAA-3’ （配列番号２）
プローブ 5’-CATCACCTACTTCAACT-3’ （配列番号３）
・ヒトＳＣＣＡ２
フォワードプライマー 5’-CTCTGCTTCCTCTAGGAACACAG-3’ （配列番号４）
リバースプライマー 5’-TGTTGGCGATCTTCAGCTCA-3’ （配列番号５）
プローブ 5’-AGTTCCAGATCACATCGAGTT-3（配列番号６）
・ヒトＧＡＰＤＨ
フォワードプライマー 5’-GAAGGTGAAGGTCGGAGTC-3’ （配列番号７）
リバースプライマー 5’-GAAGATGGTGATGGGATTTC-3’ （配列番号８）
プローブ 5’-AGGCTGAGAACGGGAAGCTTGT-3’ （配列番号９）
ＧＡＰＤＨは内部コントロールとして用いた。また、半定量ＲＴ−ＰＣＲ分析を以下のプライマーを用いて行った。
・マウスＳＣＣＡ(Serpinb 3a)
フォワードプライマー 5’-CTATCCTTCCTGCCCACTTC-3’ （配列番号１０）
リバースプライマー 5’-CTTTGCTCCATAGATACTGTTGG-3’ （配列番号１１）
・マウスＧＡＰＤＨ
フォワードプライマー 5’-CCCATCACCATCTTCCAG−3’ （配列番号１２）
リバースプライマー 5’-CCTGCTTCACCACCTTCT-3 （配列番号１３）
【実施例３】
【００２８】
ＳＣＣＡノックダウン細胞を用いた検討：
２本鎖オリゴヌクレオチドを、発現したオリゴＲＮＡ中でヘアピン構造を形成させるヒトＳＣＣＡの共通配列（５'-AAGCCAACACCAAGTTCATGT-３'：配列番号１４）に対応するように設計し、pサイレンサーベクター(Ambion)中でクローン化し、そしてケラチノサイト細胞株ＨａＣａｔ細胞にトランスフェクトした。ＧＦＰ ｍＲＮＡ(Ambion)に対するｓｉＲＮＡをコントロールとして用いた。トランスフェクションは、Lipofectamine 2000(Invitrogen)により行い、そしてハイグロマイシンーＢを培地に添加して４−６週間培養を行って、恒常的にSCCA発現がノックダウンされている細胞株を確立した（図６）。
【００２９】
上記の通り作製したＳＣＣＡノックダウン細胞のＳＣＣＡ発現量を上記のとおりにＴａｑｍａｎ ＰＣＲにより測定したところ、ＳＣＣＡ−１及びＳＣＣＡ−２の発現量が共に９０％以上抑制された（図７）。当該ＳＣＣＡノックダウン細胞ではコントロールと比較してケラチノサイト増殖活性の有意な低下が認められた（図８）。
【実施例４】
【００３０】
細胞系におけるＮ−ベンゼンスルホニル−γ−アミノ酪酸によるＳＣＣＡ−１発現抑制効果：
ヒトケラチノサイトを培養し、６０〜７０％コンフルエント状態で３％のＮ−ベンゼンスルホニル−γ−アミノ酪酸を添加した。２４時間後にＲＮＡを採取し、定量的ＰＣＲを用いてＳＣＣＡ遺伝子発現量を測定（内部標準にはＧ３ＰＤＨを使用）した。その結果を図９に示す。この図に示すとおり、ＳＣＣＡ−１遺伝子発現量の有意な減少が認められた。
【実施例５】
【００３１】
Ｎ−ベンゼンスルホニル−γ−アミノ酪酸のヒト皮膚への効果：
３％のＮ−ベンゼンスルホニル−γ−アミノ酪酸含有薬剤をハーフフェイス法を用いて連用塗布した。すなわち、半顔にＮ−ベンゼンスルホニル−γ−アミノ酪酸含有薬剤を、半顔にＮ−ベンゼンスルホニル−γ−アミノ酪酸除去コントロールを塗布した。左右どちらにＮ−ベンゼンスルホニル−γ−アミノ酪酸含有薬剤を塗布するかは、被験者および測定者ともにブラインドとした（ダブルブラインド試験）。連用前、１ヶ月後後の表皮ＳＣＣＡ１量を測定した。
【００３２】
両頬のＳＣＣＡ−１発現量を以下のＥＬＩＳＡ法にて測定した。
ＥＬＩＳＡ法：
皮膚角層試料は、透明粘着テープ（セロテープ（登録商標）(NICHIBAN)）を皮膚表面に貼付したのち剥離するテープストリッピングにより採取した。皮膚角層の付着したこのテープを裁断、抽出バッファー（０．１Ｍ Ｔｒｉｓ-ＨＣｌ(ｐＨ８．０), ０．１４Ｍ ＮａＣｌ, ０．１％ Ｔｗｅｅｎ-２０, １ｍｌ）に浸漬、超音波処理（２０ ｓｅｃ ×４）にかけ、試料抽出液を作製した。ＰＢＳに希釈したポリクローナル抗ＳＣＣＡ抗体（１:１０００に希釈）を１００μlずつ、９６穴ＥＬＩＳＡプレートの各ウェルに分注し、一晩室温におき、プレートの固相に結合させた。その後、プレートへの非特異的な結合を阻害するために、ブロッキング溶液（ブロックエースをＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ ２０で希釈した溶液、３００μl／ウェル）にて１時間インキュベートした。上記試料抽出液５０μlをＥＬＩＳＡプレートの各ウェルに添加し、３７℃で２時間反応させた。モノクローナル抗ＳＣＣＡ−１抗体（１:１０００に希釈）を添加して37℃で１時間反応させた。次に、二次抗体、西洋ワサビペルオキシダ−ゼ標識抗マウスを添加して３７℃で１時間反応させ、０．１％ Ｔｗｅｅｎ-20 ＰＢＳで洗浄後、基質3',3',5',5'−テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）を添加して、ＴＭＢ Peroxidase ＥＩＡ substrate kit (BIO-RAD社)を用いて発色させ、６３０ ｎｍで測定を行った。Ｎ−ベンゼンスルホニル−γ−アミノ酪酸を１ヶ月連用塗布することにより、コントロールである１５％エタノールと比較して、表皮のＳＣＣＡ−１量が有意に低下した（図１０Ａ）。また各被験者の０ヶ月データとの差（改善度）結果からも連用塗布によって、有意にＳＣＣＡ−１が低下したことが明らかになった（図１０Ｂ）。
【図面の簡単な説明】
【００３３】
【図１】ＳＣＣＡ−１トランスジェニックマウスの作製方法を示す。
【図２】ＳＣＣＡ高発現マウスにおける細胞増殖の活性化について、野生型マウスと比較したケラチン１４及びＫｉ−６７の亢進を示す。
【図３】ＳＣＣＡ高発現マウスにおける表皮肥厚について、老化した野生型マウスと比較した皮膚染色を示す。
【図４】ＳＣＣＡ−１高発現細胞の確立方法を示す。
【図５】ＳＣＣＡ−１発現量と細胞増殖活性の相関を示す。
【図６】ＲＮＡ干渉を用いたＳＣＣＡノックダウン細胞の確立方法を示す。
【図７】ＳＣＣＡノックダウン細胞株における、ＳＣＣＡ−１及びＳＣＣＡ−２の発現量を示す。
【図８】ＳＣＣＡノックダウン細胞株における細胞増殖活性の低下を示す。
【図９】細胞系における１−ピペリジンプロピオン酸によるＳＣＣＡ−１発現抑制効果を示す。
【図１０】ヒト頬へのＮ−ベンゼンスルホニル−γ−アミノ酪酸塗布後のＳＣＣＡ−１量の改善効果を示す。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式（Ｉ）のＮ−ベンゼンスルホニル−γ−アミノ酪酸
【化１】
及び／またはその塩を活性成分として含有する、ＳＣＣＡ−１(Squamous Cell Carcinoma Antigen 1)産生抑制剤。
【請求項２】
請求項１に記載のＮ−ベンゼンスルホニル−γ−アミノ酪酸及び／またはその塩を有効成分として含有する、細胞増殖異常に起因する疾患を予防及び／または治療するための医薬組成物。
【請求項３】
請求項１に記載のＮ−ベンゼンスルホニル−γ−アミノ酪酸及び／またはその塩を有効成分として含有する、表皮肥厚を予防及び／または治療するための医薬組成物。
【請求項４】
請求項１に記載のＮ−ベンゼンスルホニル−γ−アミノ酪酸及び／またはその塩を有効成分として含有する、基底細胞癌（basal cell carcinoma : BCC）、有棘細胞癌（squamous cell carcinoma : SCC）、Bowen病（Bowen’s disease）、毛母腫（石灰化上皮腫、pilomatricoma）、脂漏性角化症（sebarrheic keratosis）、光線角化症（日光角化症、actinic keratosis, solar keratosis）など悪性腫瘍（carcinoma）および前癌状態、扁平苔癬様角化症（lichen planus-like keratosis）、良性苔癬様角化症（benign lichenoid keratosis）、軟線腺腫（acrochordon, cutaneous tag）、膿疱性乾癬（pustular psoriasis）、尋常性乾癬（psoriasis vulgaris）など乾癬（psoriasis）、色素性乾皮症（xeroderma pigmentatosum : XP）、アトピー性皮膚炎（atopic dermatitis）、全身性エリテマトーデス（systemic lupus erythematosus : SLE）、円形状全身性エリテマトーデス（discoid lupus erythematosus : DLE）などエリテマトーデス（erythematosus）、汗孔角化症（porokeratosis）、炎症性線上疣贄表皮母斑(inflammatory linear verrucous epidermal naevus : ILVEN)などの母斑や疣贄、肥厚（hyperplasia）を伴う良性角化症から成る群から選定される疾患を治療するための医薬組成物。
【請求項１】
一般式（Ｉ）のＮ−ベンゼンスルホニル−γ−アミノ酪酸
【化１】
及び／またはその塩を活性成分として含有する、ＳＣＣＡ−１(Squamous Cell Carcinoma Antigen 1)産生抑制剤。
【請求項２】
請求項１に記載のＮ−ベンゼンスルホニル−γ−アミノ酪酸及び／またはその塩を有効成分として含有する、細胞増殖異常に起因する疾患を予防及び／または治療するための医薬組成物。
【請求項３】
請求項１に記載のＮ−ベンゼンスルホニル−γ−アミノ酪酸及び／またはその塩を有効成分として含有する、表皮肥厚を予防及び／または治療するための医薬組成物。
【請求項４】
請求項１に記載のＮ−ベンゼンスルホニル−γ−アミノ酪酸及び／またはその塩を有効成分として含有する、基底細胞癌（basal cell carcinoma : BCC）、有棘細胞癌（squamous cell carcinoma : SCC）、Bowen病（Bowen’s disease）、毛母腫（石灰化上皮腫、pilomatricoma）、脂漏性角化症（sebarrheic keratosis）、光線角化症（日光角化症、actinic keratosis, solar keratosis）など悪性腫瘍（carcinoma）および前癌状態、扁平苔癬様角化症（lichen planus-like keratosis）、良性苔癬様角化症（benign lichenoid keratosis）、軟線腺腫（acrochordon, cutaneous tag）、膿疱性乾癬（pustular psoriasis）、尋常性乾癬（psoriasis vulgaris）など乾癬（psoriasis）、色素性乾皮症（xeroderma pigmentatosum : XP）、アトピー性皮膚炎（atopic dermatitis）、全身性エリテマトーデス（systemic lupus erythematosus : SLE）、円形状全身性エリテマトーデス（discoid lupus erythematosus : DLE）などエリテマトーデス（erythematosus）、汗孔角化症（porokeratosis）、炎症性線上疣贄表皮母斑(inflammatory linear verrucous epidermal naevus : ILVEN)などの母斑や疣贄、肥厚（hyperplasia）を伴う良性角化症から成る群から選定される疾患を治療するための医薬組成物。
【図５】
【図７】
【図８】
【図１０】
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図６】
【図９】
【図７】
【図８】
【図１０】
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図６】
【図９】
【公開番号】特開２００９−２４２３４１（Ｐ２００９−２４２３４１Ａ）
【公開日】平成２１年１０月２２日（２００９．１０．２２）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００８−９３４３０（Ｐ２００８−９３４３０）
【出願日】平成２０年３月３１日（２００８．３．３１）
【出願人】（０００００１９５９）株式会社資生堂 (1,748)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２１年１０月２２日（２００９．１０．２２）
【国際特許分類】
【出願日】平成２０年３月３１日（２００８．３．３１）
【出願人】（０００００１９５９）株式会社資生堂 (1,748)
【Ｆターム（参考）】
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