本発明は、ＰＣＳＫ９遺伝子を標的とする、脂質で製剤化されたｓｉＲＮＡを使用する、組成物および方法に関する。

【特許請求の範囲】
【請求項１】
細胞におけるヒトＰＣＳＫ９遺伝子の発現を阻害するための、二重鎖リボ核酸（ｄｓＲＮＡ）を含む核酸脂質粒子を含む組成物であって、
前記核酸脂質粒子は、４５〜６５ｍｏｌ％のカチオン性脂質と、５ｍｏｌ％から約１０ｍｏｌ％の非カチオン性脂質と、２５〜４０ｍｏｌ％のステロールと、０．５〜５ｍｏｌ％のＰＥＧまたはＰＥＧで修飾された脂質とを含む、脂質製剤を含み、
前記ｄｓＲＮＡは、センス鎖と、アンチセンス鎖とから成り、前記センス鎖は、第１の配列を含み、前記アンチセンス鎖は、
配列番号１５２３（５’−ＵＵＣＵＡＧＡＣＣＵＧＵＵＵＵＧＣＵＵ−３’）
の少なくとも１５個の連続するヌクレオチドに相補的な第２の配列を含み、
前記第１の配列は、前記第２の配列に相補的であり、前記ｄｓＲＮＡは、１５〜３０塩基対長である、組成物。
【請求項２】
前記カチオン性脂質は、ＭＣ３（（（６Ｚ，９Ｚ，２８Ｚ，３１Ｚ）−ヘプタトリアコンタ−６，９，２８，３１−テトラエン−１９−イル４−（ジメチルアミノ）ブタノエート）を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記カチオン性脂質は、ＭＣ３を含み、前記脂質製剤は、以下から成る群より選択される、請求項２に記載の組成物。
【表１】

【請求項４】
前記カチオン性脂質は、式Ａを含み、式Ａは、
【化１】

、または
【化２】

または
【化３】

であり、
式中、Ｒ１およびＲ２は、独立して、アルキル、アルケニル、もしくはアルキニルであり、各々は、任意に置換されてもよく、Ｒ３およびＲ４は、独立して、低級アルキルであるか、またはＲ３およびＲ４は、一緒になって、任意に置換された複素環式環を形成することができる、請求項１に記載の組成物。
【請求項５】
前記カチオン性脂質は、ＸＴＣ（２，２−ジリノレイル−４−ジメチルアミノエチル−［１，３］−ジオキソラン）を含む、請求項４に記載の組成物。
【請求項６】
前記カチオン性脂質は、ＸＴＣを含み、前記非カチオン性脂質は、ＤＳＰＣを含み、前記ステロールは、コレステロールを含み、前記ＰＥＧ脂質は、ＰＥＧ−ＤＭＧを含む、請求項４に記載の組成物。
【請求項７】
前記カチオン性脂質は、ＸＴＣを含み、前記製剤は、以下から成る群より選択される、請求項４に記載の組成物。
【表２−１】

【表２−２】

【請求項８】
前記カチオン性脂質は、ＡＬＮＹ−１００（（３ａＲ，５ｓ，６ａＳ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−２，２−ジ（（９Ｚ，１２Ｚ）−オクタデカ−９，１２−ジエニル）テトラヒドロ−３ａＨ−シクロペンタ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−アミン））を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項９】
前記カチオン性脂質は、ＡＬＮＹ−１００を含み、前記製剤は、以下から成る、請求項８に記載の組成物。
【表３】

【請求項１０】
前記センス鎖は、配列番号１２２７を含み、前記アンチセンス鎖は、配列番号１２２８を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項１１】
前記センス鎖は、配列番号１２２７から成り、前記アンチセンス鎖は、配列番号１２２８から成る、請求項１に記載の組成物。
【請求項１２】
各鎖は、小文字「ｃ」または「ｕ」によって示される２’−Ｏ−メチルリボヌクレオチド、および小文字「ｓ」によって示されるホスホロチオエートを含むように、以下のとおりに修飾され、
前記ｄｓＲＮＡは、
配列番号１２２９（５’−ｕｕｃｕＡＧＡｃｃｕＧｕｕｕｕＧｃｕｕＴｓＴ−３’）
から成るセンス鎖、および
配列番号１２３０（５’−ＡＡＧｃＡＡＡＡｃＡＧＧＵＣｕＡＧＡＡＴｓＴ−３’）
から成るアンチセンス鎖
から成る、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１３】
前記ｄｓＲＮＡは、少なくとも１つの修飾ヌクレオチドを含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項１４】
前記修飾ヌクレオチドは、２’−Ｏ−メチル修飾ヌクレオチド、５’−ホスホロチオエート基を含むヌクレオチド、およびコレステリル誘導体もしくはドデカン酸ビスデシルアミド基に連結される末端ヌクレオチドの群から選択される、請求項１３に記載の組成物。
【請求項１５】
前記修飾ヌクレオチドは、２’−デオキシ−２’−フルオロ修飾ヌクレオチド、２’−デオキシ−修飾ヌクレオチド、ロックされたヌクレオチド、脱塩基ヌクレオチド、２’−アミノ−修飾ヌクレオチド、２’−アルキル修飾ヌクレオチド、モルホリノヌクレオチド、ホスホロアミダート、および非天然塩基を含むヌクレオチドの群から選択される、請求項１３に記載の組成物。
【請求項１６】
前記ｄｓＲＮＡは、少なくとも１つの２’−Ｏ−メチル修飾リボヌクレオチドと、５’−ホスホロチオエート基を含む少なくとも１つのヌクレオチドとを含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項１７】
前記ｄｓＲＮＡの各鎖は、１９〜２３塩基長である、請求項１に記載の組成物。
【請求項１８】
前記ｄｓＲＮＡの各鎖は、２１〜２３塩基長である、請求項１に記載の組成物。
【請求項１９】
前記ｄｓＲＮＡの各鎖は、２１塩基長である、請求項１に記載の組成物。
【請求項２０】
リポタンパク質をさらに含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項２１】
アポリポタンパク質Ｅ（ＡｐｏＥ）をさらに含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項２２】
前記ｄｓＲＮＡは、脂質親和体（ｌｉｐｏｐｈｉｌｅ）にコンジュゲートされる、請求項２１に記載の組成物。
【請求項２３】
前記脂質親和体は、コレステロールである、請求項２２に記載の組成物。
【請求項２４】
前記ＡｐｏＥは、少なくとも１つの両親媒性物質で再構成される、請求項２１に記載の組成物。
【請求項２５】
前記両親媒性物質は、リン脂質である、請求項２４に記載の組成物。
【請求項２６】
前記両親媒性物質は、ジミリストイルホスファチジルコリン（ＤＭＰＣ）、ジオレオイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、パルミトイルオレオイルホスファチジルコリン（ＰＯＰＣ）、卵ホスファチジルコリン（ＥＰＣ）、ジステアロイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）、ジオレオイルホスファチジルコリン（ＤＯＰＣ）、ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）、ジオレオイルホスファチジルグリセロール（ＤＯＰＧ）、ジパルミトイルホスファチジルグリセロール（ＤＰＰＧ）、ホスファチジルエタノールアミン（ＰＯＰＥ）、ジオレオイル−ホスファチジルエタノールアミン４−（Ｎ−マレイミドメチル）−シクロヘキサン−１−カルボキシレート（ＤＯＰＥ−ｍａｌ）、およびこれらの組み合わせから成る群より選択される、リン脂質である、請求項２４に記載の組成物。
【請求項２７】
前記ＡｐｏＥは、高密度リポタンパク質（ｒＨＤＬ）で再構成される、請求項２５に記載の組成物。
【請求項２８】
ＰＣＳＫ９を発現する細胞への前記組成物の投与は、ＰＣＳＫ９の発現を、対照の投与と比較して、少なくとも４０％阻害する、請求項１に記載の組成物。
【請求項２９】
哺乳類への前記組成物の投与は、対照の投与と比較して、前記哺乳類におけるＰＣＳＫ９タンパク質レベルを低減する、請求項１に記載の組成物。
【請求項３０】
霊長類への前記組成物の投与は、対照の投与と比較して、前記哺乳類におけるＬＤＬｃレベルを低減する、請求項１に記載の組成物。
【請求項３１】
哺乳類への前記組成物の投与は、対照の投与と比較して、０．１ｍｇ／ｋｇ未満の投与量で、ＰＣＳＫ９肝ｍＲＮＡおよび総血清コレステロールの両方を低減する、請求項１に記載の組成物。
【請求項３２】
哺乳類への前記組成物の投与は、対照の投与と比較して、約０．２ｍｇ／ｋｇのＥＤ５０でＰＣＳＫ９肝ｍＲＮＡを低減し、約０．０８ｍｇ／ｋｇのＥＤ５０で総血清コレステロールを低減する、請求項１に記載の組成物。
【請求項３３】
哺乳類への前記組成物の投与は、対照の投与と比較して、血清ＬＤＬ粒子数を９０％超低減するか、または血清ＨＤＬ粒子数を７５％超低減する、請求項１に記載の組成物。
【請求項３４】
細胞において、ＰＣＳＫ９の発現を阻害するための方法であって、請求項１に記載の組成物を前記細胞に投与することを含む、方法。
【請求項３５】
処置を必要とする哺乳類において、ＬＤＬｃレベルを低減するための方法であって、請求項１に記載の組成物を前記哺乳類に投与することを含む、方法。
【請求項３６】
０．２５ｍｇ／ｋｇから４ｍｇ／ｋｇのｄｓＲＮＡを含有する用量が、前記哺乳類に投与される、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
前記ｄｓＲＮＡは、約０．０１、０．１、０．５、１．０、２．５、または５．０ｍｇ／ｋｇでヒトに投与される、請求項３５に記載の方法。
【請求項３８】
対象において、ＰＣＳＫ９遺伝子の発現を阻害するための方法であって、前記対象に請求項１に記載の組成物を約３ｍｇ／ｋｇの第１の用量で投与することと、その後、少なくとも１つのその後の用量を週に１回投与することとを含み、前記その後の用量は、前記第１の用量よりも低い、方法。
【請求項３９】
前記対象は、ラット、または非ヒト霊長類、またはヒトである、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
前記ＰＣＳＫ９を標的とするｄｓＲＮＡは、ＡＤ−９６８０を含む、請求項３８に記載の方法。
【請求項４１】
前記その後の用量は、約１．０ｍｇ／ｋｇまたは約０．３ｍｇ／ｋｇである、請求項３８に記載の方法。
【請求項４２】
前記その後の用量は、週に１回４週間投与される、請求項３８に記載の方法。
【請求項４３】
前記第１の用量の投与は、総コレステロールレベルを約１５〜６０％減少させる、請求項３８に記載の方法。

【図１】

【図２】

【図３】

【図４】

【図５】

【図６Ａ】

【図６Ｂ】

【図７Ａ】

【図７Ｂ】

【図７Ｃ】

【図８】

【図９Ａ】

【図９Ｂ】

【図１０Ａ】

【図１０Ｂ】

【図１０Ｃ】

【図１１】

【図１２Ａ】

【図１２Ｂ】

【図１２Ｃ】

【図１２Ｄ】

【図１３Ａ】

【図１３Ｂ】

【図１４Ａ】

【図１４Ｂ】

【図１５Ａ】

【図１５Ｂ】

【図１６】

【図１７】

【図１８】

【図１９】

【図２０】

【図２１】

【図２２】

【図２３】

【図２４】

【図２５】

【図２６】

【図２７Ａ】

【図２７Ｂ】

【図２７Ｃ】

【図２８】

【図２９】

【図３０】

【公表番号】特表２０１２−５３０１４３（Ｐ２０１２−５３０１４３Ａ）
【公表日】平成２４年１１月２９日（２０１２．１１．２９）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１２−５１６２１１（Ｐ２０１２−５１６２１１）
【出願日】平成２２年６月１５日（２０１０．６．１５）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２０１０／０３８７０７
【国際公開番号】ＷＯ２０１０／１４８０１３
【国際公開日】平成２２年１２月２３日（２０１０．１２．２３）
【出願人】（５０５３６９１５８）アルナイラム　ファーマシューティカルズ，　インコーポレイテッド (51)
【氏名又は名称原語表記】ＡＬＮＹＬＡＭ　ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬＳ，　ＩＮＣ．
【Ｆターム（参考）】