アポトーシスを阻害するための化合物及び方法
本発明はアポトーシスを阻害するための、そしてそれに関連した状態の治療のための、化合物、組成物及び方法を提供する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願への相互参照
本特許出願は２００５年１２月１日に出願した米国特許仮出願番号６０／７４１，１２５及び２００５年１２月１６日に出願した米国特許仮出願番号６０／７５０，８８８の利益を請求し、これらは、参照により全体が組み込まれるものである。
【０００２】
連邦政府による資金提供を受けた研究開発の記載
本発明は、国立健康研究所によってうけた補助金番号ＧＭ０５９３４８−０５Ａｌの下で部分的に政府の資金提供によってなされた。政府は本発明における一定の権利を有し得る。
【背景技術】
【０００３】
発明の背景
アポトーシス（プログラム細胞死）は全ての多細胞生物の発生及び恒常性において中心的な役割を果たす。アポトーシス経路の改変は、発生上の障害、癌、自己免疫疾患と同様に神経変性障害を含む、多くのタイプのヒトの病状に関連している。アポトーシスは個々の細胞死の過程を統率する厳密に制御された経路であり、外因的にも内因的にも開始され得る。前者はミトコンドリアによって誘発される細胞内機構であり、一方後者は細胞膜での「細胞死受容体」と、それに対応するリガンドとの相互作用に関連している。
【０００４】
従って、プログラム細胞死経路は治療剤の開発のための魅力的な標的となった。特に、観念的には細胞を殺すほうが生かしていくよりも容易なので、従来の放射線及び化学療法等のアポトーシス促進剤を用いた抗癌療法に注目が集まっていた。これらの治療は一般的にミトコンドリア介在性のアポトーシス経路の活性化を誘発すると信じられている。しかしながら、これらの治療法は分子的特異性を欠いており、より特異的な分子標的が必要である。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
発明の概要
本発明はアポトーシスを阻害するか、さもなくば制御するためのペプチド、ペプチドミメティック及びそれらの使用方法を提供する。本発明により、本発明化合物を含む組成物も提供される。そのような組成物を利用したアポトーシスの阻害方法及びＴＮＦＲ関連状態及び疾患の治療方法も、本明細書中に同様に提供される。
【０００６】
これらの局面及び追加的な発明の特徴は、以下の詳細な説明を読む際及び添付の図面を見る際に明らかとなるであろう。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
詳細な記載
第一の局面において、本発明はペプチド及びペプチドミメティックを提供する。本発明の一つの実施形態においては、ペプチド又はペプチドミメティックは、一般式Ｉ
【０００８】
【化１】
【０００９】
（式中、Ｚ１及びＺ２はＣ＝Ｏ及びＣＨ２から独立して選択され；Ｒ１はＨ、（炭素原子数１〜１０個等の）低級アルキル、置換されていてもよい低級アルキル、カルボン酸、並びにＨ−Ｈ−Ｉ、Ｒ−Ｓ−Ｓ及びＥ−Ｐ−Ｉから選択される３残基長までの伸長ペプチドから選択され；Ｒ２はＨ、（炭素原子数１〜１０個等の）低級アルキル、置換されていてもよい低級アルキル、及びカルボン酸から選択され；Ｒ３及びＲ４はＨであり、そしてＸはＣＯＯＨ及びＣＯＮＨ２から選択される）
を含む。
【００１０】
別の実施形態においては、本発明は、式ＩＶを有するテトラペプチドのペプチドミメティックを含んでなる化合物を提供する。
【００１１】
別の実施形態においては、本発明は、配列Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−Ｘ４
（配列中、Ｘｌは、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｆ、Ｗ、Ｄ及びＥから選択されるアミノ酸；
Ｘ２は、Ｌ、Ａ、Ｖ、Ｉ、Ｇ、Ｆ及びＴから選択されるアミノ酸；
Ｘ３は、Ｇ、Ａ、Ｌ、Ｉ及びＡから選択されるアミノ酸；そして
Ｘ４は、Ａ、Ｇ、Ｌ、Ｉ及びＴから選択されるアミノ酸である）が提供される
のペプチドのペプチドミメティックを提供する。
【００１２】
別の実施形態においては、本発明は、式Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−Ｘ４
（式中、Ｘｌは、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｆ、Ｗ、Ｄ又はＥから選択されるアミノ酸、或いはＹ、Ｓ、Ｔ、Ｆ、Ｗ、Ｄ又はＥから選択されるアミノ酸のミメティック；
Ｘ２は、Ｌ、Ａ、Ｖ、Ｉ、Ｇ、Ｆ又はＴから選択されるアミノ酸、或いはＬ、Ａ、Ｖ、Ｉ、Ｇ、Ｆ又はＴから選択されるアミノ酸のミメティック；
Ｘ３は、Ｇ、Ａ、Ｌ、Ｉ又はＡから選択されるアミノ酸、或いはＧ、Ａ、Ｌ、Ｉ又はＡから選択されるアミノ酸のミメティック；そして
Ｘ４は、Ａ、Ｇ、Ｌ、Ｉ又はＴ、或いはＡ、Ｇ、Ｌ、Ｉ又はＴから選択されるアミノ酸のミメティックである）
を含む化合物を提供する。
【００１３】
別の実施形態においては、本発明は、テトラペプチドのペプチドミメティックであって、該テトラペプチドが、配列Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−Ｘ４
（配列中、Ｘｌは、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｆ、Ｗ、Ｄ及びＥから選択されるアミノ酸；
Ｘ２は、Ｌ、Ａ、Ｖ、Ｉ、Ｇ、Ｆ及びＴから選択されるアミノ酸；
Ｘ３は、Ｇ、Ａ、Ｌ、Ｉ及びＡから選択されるアミノ酸；そして
Ｘ４は、Ａ、Ｇ、Ｌ、Ｉ及びＴから選択されるアミノ酸である）
を含む、テトラペプチドのペプチドミメティックを提供する。
【００１４】
別の実施形態においては、本発明は、式Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７−Ｘ８
（式中、Ｘｌは、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｆ、Ｗ、Ｄ又はＥから選択されるアミノ酸、或いはＹ、Ｓ、Ｔ、Ｆ、Ｗ、Ｄ又はＥから選択されるアミノ酸のミメティック；
Ｘ２は、スペーサー；
Ｘ３は、Ｌ、Ａ、Ｖ、Ｉ、Ｇ、Ｆ又はＴから選択されるアミノ酸、或いはＬ、Ａ、Ｖ、Ｉ、Ｇ、Ｆ又はＴから選択されるアミノ酸のミメティック；
Ｘ４は、スペーサー；
Ｘ５は、Ｇ、Ａ、Ｌ、Ｉ又はＡから選択されるアミノ酸、或いはＧ、Ａ、Ｌ、Ｉ又はＡから選択されるアミノ酸のミメティック；
Ｘ６は、スペーサー；
Ｘ７は、Ａ、Ｇ、Ｌ、Ｉ又はＴから選択されるアミノ酸、或いはＡ、Ｇ、Ｌ、Ｉ又はＴから選択されるアミノ酸のミメティック；そして
Ｘ８は、スペーサーである）
を含む化合物を提供する。
【００１５】
任意で、該式はＸ０を、式Ｘ０−Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７−Ｘ８
（式中、Ｘｌ〜Ｘ８は前に定義した通りであり、Ｘ０は、一般式Ａｌ−Ａ２−Ａ４［式中、Ａ１は、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｅ及びＤから選択される荷電アミノ酸、或いはＨ、Ｋ、Ｒ、Ｅ及びＤのミメティック；Ａ２は、Ｓ、Ａ及びＴから選択されるアミノ酸、或いはＳ、Ａ及びＴのミメティック；そしてＡ２は、Ｓ、Ａ、Ｔ、Ｉ及びＶから選択されるアミノ酸、或いはＳ、Ａ、Ｔ、Ｉ及びＶのミメティックである］のペプチドである）
が含んでなるように、含んでいてもよい。
【００１６】
別の実施形態においては、本発明は、式Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７−Ｘ８
（ここで、Ｘ１は、スペーサー；
Ｘ２は、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｆ、Ｗ、Ｄ又はＥから選択されるアミノ酸、或いはＹ、Ｓ、Ｔ、Ｆ、Ｗ、Ｄ又はＥから選択されるアミノ酸のミメティック；
Ｘ３は、スペーサー；
Ｘ４は、Ｌ、Ａ、Ｖ、Ｉ、Ｇ、Ｆ又はＴから選択されるアミノ酸、或いはＬ、Ａ、Ｖ、Ｉ、Ｇ、Ｆ又はＴから選択されるアミノ酸のミメティック；
Ｘ５は、スペーサー；
Ｘ６は、Ｇ、Ａ、Ｌ、Ｉ又はＡから選択されるアミノ酸、或いはＧ、Ａ、Ｌ、Ｉ又はＡから選択されるアミノ酸のミメティック；
Ｘ７は、スペーサー；そして
Ｘ８は、Ａ、Ｇ、Ｌ、Ｉ又はＴから選択されるアミノ酸、或いはＡ、Ｇ、Ｌ、Ｉ又はＴから選択されるアミノ酸のミメティック
である）
を含む化合物を提供する。
【００１７】
別の実施形態においては、本発明は、式ＩＩ
【００１８】
【化２】
【００１９】
（式中、残基１はＹ、Ｓ、Ｔ、Ｄ及びＥから選択されるアミノ酸；
残基２はＡ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｍから選択されるアミノ酸及び（炭素原子数１〜５個等の）低級アルキル、置換されていてもよい低級アルキル；
Ｒ１及びＲ２はＨ、（の炭素原子数１〜１０個等の）低級アルキル、置換されていてもよい低級アルキル及びカルボン酸から独立して選択され；そして
ＸはＣＯＯＨ又はＣＯＮＨ２から選択される）
を含む、化合物を提供する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２０】
本発明化合物のいくつかの例としては、ＹＬＧＡ、ＹＬＧＧ、ＹＬＧＬ、ＹＬＧＩ、ＹＬＧＴ、ＹＬＡＡ、ＹＬＬＡ、ＹＬ１Ａ、Ｙ１ｄＡＡ、ＹＡＧＡ、ＹＶＧＡ、ＹＩＧＡ、ＳＬＧＡ、ＴＬＧＡ、ＦＬＧＡ、ＷＬＧＡ、ＤＬＧＡ ＥＬＧＡ、ＹＬＧＡＶＦ、ＳＹＬＧＡ、ＳＳＹＬＧＡ、ＲＳＳＹＬＧＡ、ＲＳＳＹＬＧＡＶＦ、ＹＬＧＧＶＲ、ＩＹＬＧＧ、ＰＩＹＬＧＧ、ＥＰＩＹＬＧＧ、ＥＰＩＹＬＧＧＶＦ、ＨＨＩＹＬＧＡＴＮＹＩＹ、ＨＩＹＬＧＡＴＮＹＩＹ、ＩＹＬＧＡＴＮＹＩＹ、ＹＬＧＡＴＮＹＩＹ、ＨＨＩＹＬＧＡＴＮＹＩ、ＨＨＩＹＬＧＡＴＮＹ、ＨＨＩＹＬＧＡＴＮ、ＨＨＩＹＬＧＡＴ、ＨＨＩＹＬＧＡ及びそれらのペプチドミメティックが挙げられる。
【００２１】
１つ以上の不斉中心が発明化合物のアミノ酸、人工アミノ酸又は原子に存在する場合、幾つかのエナンチオマー、Ｄ又はＬ、そしてより一般的にはＲ又はＳ立体配置、或いはジアステレオ異性体が任意で用いられてもよい。
【００２２】
本発明化合物は、例えば、液相合成又は固相ペプチド合成（ＳＰＰＳ）等のいくつかの好適なペプチド合成技術によって調製されてもよい。そのような技術は当技術分野において周知である。好ましいペプチド合成法はＳＰＳＳであり、それは天然及び非天然に産出するアミノ酸を含むペプチドの合成を可能にする。ＳＰＳＳにおいては、小ビーズが、ペプチド鎖が構築され得るリンカーで処理される。合成ビーズはトリフルオロ酢酸等の試薬によって切断されるまで、ペプチドとの強い結合を保持する。ビーズは創出されたペプチド鎖がフィルター材料を通り抜けることのない合成環境を創出するが、その一方で、それらを創出するために用いられた試薬は通り抜けるであろう。最も一般的なＳＰＳＳの２つの形態は（フルオレニル−メトキシ−カルボニル保護基を用いる）Ｆｍｏｃ及び（ｔｅｒｔ−ブチルオキシ−カルボニル保護基を用いる）Ｂｍｏｃである。両技術のために利用できる自動化合成装置があるか、又はその技術が手動で実行されてもよい。
【００２３】
述べたように、いくつかの実施形態においては、本発明化合物はペプチドミメティックである。ペプチドミメティックは選択されたペプチドの３次元構造に基づく３次元構造（即ち、「中核ペプチドモチーフ」）を持つ合成化合物である。ペプチドモチーフは、ミメティック化合物の結合活性が、実質的に低減されておらず且つしばしばミメティックがモデルとされた天然ペプチドの活性と同じか又はそれよりも大きい、望ましい生物学的活性（例、ＦａｓＲ及び／又はＴＮＦＲに結合する）を伴うミメティック化合物を提供する。ペプチドミメティック化合物は、増大した細胞透過性、より大きな親和性及び／又は親和力並びに長時間の生物学的半減期等の、それらの治療応用を促進する追加の特徴を有し得る。
【００２４】
用語「ミメティック」、「ペプチドミメティック」、「修飾ペプチド」及び「ペプチドミメティック」は本明細書中、相互に置換可能に用いられ、一般的に、選択された天然ペプチド又はタンパク質機能ドメインの３次結合構造又は活性を模倣する、ペプチド、部分ペプチド又は非ペプチド性分子のことをいう。この化合物の２量体は、被験分子の２つの分離した、異なる領域における３次構造又は活性を模倣する分子である。これらのペプチドミメティックは化学修飾されたアミノ酸又はペプチドと同様に低分子薬物ミメティック等の非ペプチド性薬剤を含み得る。
【００２５】
ミメティック、より具体的には、ペプチドミメティックの設計戦略は該当する技術分野において容易に利用できる（例えば、Ｒｉｐｋａ＆Ｒｉｃｈ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ． ２，４４１−４５２， １９９８；Ｈｒｕｂｙ ｅｔ ａｌ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ． １，１１４−１１９， １９９７；Ｈｒｕｂｙ＆Ｂａｌｓｅ，Ｃｕｒｒ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ， ９，９４５−９７０，２０００を参照）。一つのクラスのミメティックは部分的又は完全な非ペプチドである骨格を模倣するが、原子ごとにペプチド骨格を模倣し、且つ天然のアミノ酸残基の側基の官能基を同様に模倣した側基を含む。いくつかのタイプの化学結合、例えば、エステル、チオエステル、チオアミド、レトロアミド、還元カルボニル、ジメチレン及びケトメチレン結合は、プロテアーゼ耐性のペプチドミメティックの構築において一般的に役立つペプチド結合の代用物であることが当技術において既知である。別のクラスのペプチドミメティックは、別のペプチド又はタンパク質に結合するが、必ずしも天然ペプチドの構造的ミメティックではない低分子量非ペプチド性分子を含む。更に別のクラスのペプチドミメティックはコンビナトリアルケミストリー（組み合わせ化学）及び大量化学ライブラリーが製造されたことから生じた。これらは一般的に、構造的には天然ペプチドと関係ないが、元来のペプチドの「形態的」ミメティックとして役立つ、非ペプチド性の足場上に位置する必要な官能基を有する新規の鋳型を含む（Ｒｉｐｋａ＆Ｒｉｃｈ，１９９８，上記を参照）。
【００２６】
ペプチドミメティックを製造するために、本発明の発明化合物中のペプチドは修飾され得、２０個の遺伝的にコードされたアミノ酸の１つ以上の天然に産する側鎖又は他の側鎖を伴ったＤ型アミノ酸を、例えばアルキル、低級アルキル、環状４、５、６〜７員のアルキル、アミド、アミド低級アルキル、アミドジ（低級アルキル）、低級アルコキシ、ヒドロキシ、カルボキシ及びそれらの低級エステル誘導体等の基と置き換えることによって、並びに４、５、６〜７員の複素環式分子と置き換えることによってペプチドミメティックを製造する。そのような修飾はペプチド合成後又はペプチド合成前に発生し得る（即ち、修飾アミノ酸を用いるポリペプチド合成を含む）。例えば、プロリンアナログが作られ得るが、そこではプロリン残基の環サイズが５員から４、６又は７員に変換される。環状基は飽和又は不飽和であり得るが、不飽和の場合は、芳香族又は非芳香族であり得る。複素環基は１つ以上の窒素、酸素及び／又は硫黄へテロ原子を含み得る。そのような基の例としては、フラザニル、イミダゾリジニル、イミダゾリル、イミダゾリニル、イソチアゾリル、イソキサゾリル、モルホリニル（例、モルホリノ）、オキサゾリル、ピペラジニル（例、１−ピペラジニル）、ピペリジル（例、１−ピペリジル、ピペリジノ）、ピラニル、ピラジニル、ピラゾリジニル、ピラゾリニル、ピラゾリル、ピリダジニル、ピリジル、ピリミジニル、ピロリジニル（例、１−ピロリジニル）、ピロリニル、ピロリル、チアジアゾリル、チアゾリル、チエニル、チオモルホリニル（例、チオモルホリノ）及びトリアゾリルが挙げられる。これらの複素環基は、飽和又は不飽和であり得る。基が置換された所では、置換基はアルキル、アルコキシ、ハロゲン、酸素或いは置換又は無置換のフェニル基であり得る。ペプチドミメティックは、リン酸化、スルホン化、ビオチン化或いは他の部分の付加又は除去によって化学的に修飾されてきたアミノ酸残基を有していてもよい。
【００２７】
用語「ヘテロ原子」とは、窒素、酸素、硫黄、他の原子又は窒素、硫黄及び他の原子が任意で酸化されてもよく、そして窒素が任意で４級化されてもよい基のことをいう。満たされていない原子価を有するヘテロ原子はいずれも、原子価を満たすのに十分な水素原子を有すると推定される。いくつかの実施形態においては、例えば、ヘテロ原子が窒素であり、窒素原子の原子価を満たすために水素又は他の基を含んでおり、この場合別のヘテロ原子、例えば酸素による、類似構造における窒素の置換によって、以前に窒素に結合していた水素又は基は無くなるであろう。用語へテロ原子は、例えば、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｎ−、−Ｎ（Ｈ）−及び−Ｎ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）を含んでもよいが、これらに限定されない。
【００２８】
用語「アルキル」とは、約１個から約３０個の炭素原子（及びその中の炭素原子の範囲及び特定の数の組み合わせ及びそれらの一部の組み合わせの全て）を持つ飽和の直鎖状、分枝鎖状又は環状の炭化水素のことをいう。低級アルキル基は、１〜１０個の炭素原子、好適には１〜５個の炭素原子の基のことであって、その中の炭素原子数の範囲又は特定数の組み合わせ及びそれらの一部の組み合わせの全てを持つ、飽和の直鎖状、分枝鎖状又は環式炭化水素をいう。アルキル基には、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｔ−ブチル、ｎ−ペンチル、シクロプロピル、メチルシクロプロピル、シクロペンチル、イソペンチル、ネオペンチル、ｎ−ヘキシル、イソヘキシル、シクロヘキシル、シクロオクチル、アダマンチル、３−メチルペンチル、２，２−ジメチルブチル及び２，３−ジメチルブチルが挙げられるが、これらに限定されない。
【００２９】
用語「置換アルキル」とは、１から５個の置換基を有する約１から約３０個の炭素原子（及びその中の炭素原子の範囲及び特定の数の組み合わせ及びそれらの一部の組み合わせの全て）を持つ、飽和の直鎖状、分枝鎖状又は環状の炭化水素をいう。低級置換アルキル基とは、１から５個の置換基を持つ１〜１０個の炭素原子、好適には１〜５個の炭素原子（及びその中の炭素原子の範囲及び特定の数の組み合わせ及びそれらの一部の組み合わせの全て）の飽和の直鎖状、分枝鎖状又は環状の炭化水素をいう。置換アルキル基及び低級置換アルキル基は１から５個の置換基を有していてもよく、これらの置換基としては、アルコキシ、置換アルコキシ、アシルアミノ、チオカルボニルアミノ、アシロキシ、アミノ、アミジノ、アルキルアミジノ、アミダルキル（−ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２又は−ＣＨ２ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２等）、チオアミジノ、アシルアルキルアミノ、シアノ、ハロゲン化又は部分的にハロゲン化したアルキル基（−ＣＦ３、−ＣＦ２ＣＦ３、−ＣＨ２ＣＦ２Ｃｌ等を含むがこれらに限定されない）を与えるための、ハロゲン原子（Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ）、ヒドロキシ、ニトロ、カルボキシル、カルボキシルアルキル、カルボキシル複素環、カルボキシル置換複素環、シクロアルキル、グアニジノ、ヘテロアリール、アリール、複素環、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ又は任意で置換された種類の前記基のいずれかが挙げられるが、これらに限定されない。
【００３０】
本明細書中で使用するとき、用語「アルキレン基」としては、１から３０個の炭素原子を含有する、２官能基性の飽和の分枝鎖状又は非分枝鎖状の炭化水素基への参照が挙げられ、例としては、メチレン（−ＣＨ２−）、エチレン（−ＣＨ２ＣＨ２−）、プロピレン（−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−）、２−メチルプロピレン（−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２−）、へキシレン（−（ＣＨ２）６−）等が挙げられる。低級アルキレンとしては、１〜１０個の炭素原子、好適には１〜５個の炭素原子のアルキレン基が挙げられる。
【００３１】
置換アルキレン基としては、１〜３０個の炭素原子を持ち、１から５個の置換基を持つ２官能基性の飽和の分枝鎖状又は非分枝鎖状のアルキレン基への参照が挙げられる。低置換アルキレン基とは、１〜１０個の炭素原子、好適には１〜５個の炭素原子を持ち、更に１から５個の置換基を持つ、置換アルキレン基群のことをいう。置換基としてはアルキル基における置換基が挙げられるが、これらに限定されない。
【００３２】
本明細書中で使用するとき、用語「アルケニル基」とは、エテニル、ｎ−プロペニル、イソプロペニル、ｎ−ブテニル、イソブテニル、ｔ−ブテニル、オクテニル、デセニル、テトラデセニル、ヘキサデセニル、エイコセニル、テトラコセニル等の、少なくとも１つの炭素−炭素二重結合を含有する２〜３０個の炭素原子の分枝鎖状環状炭化水素又は非分枝鎖状炭化水素基をいう。用語低級アルケニルとしては、少なくとも１つの炭素−炭素二重結合を含有する２〜１０個の炭素原子、好適には２〜５個の炭素原子、のアルケニル基が挙げられる。１つ以上の炭素−炭素二重結合は、独立してシス又はトランス配置を持っていてもよい。置換アルケニル基は、１から５個の置換基を有するアルケニル基又は低級アルケニル基をいう。該置換基は、アルキル基の置換基を含み得るが、それらに限定されない
【００３３】
用語「アルケニレン基」は２から３０個の炭素原子及び少なくとも１つの炭素−炭素二重結合を含有する、２官能基性の分枝鎖状又は非分枝鎖状の炭化水素基をいう。「低級アルケニレン」としては少なくとも１つの炭素−炭素二重結合を含有する２〜１０個の炭素原子、好適には２〜５個の炭素原子、のアルケニレン基が挙げられる。置換アルケニレン基は、１から５個の置換基を有するアルケニレン基又は低級アルケニル基をいう。該置換基は、アルキル基の置換基を含み得るが、それらに限定されない。
【００３４】
用語「アルキニル基」とは、２〜１２個の炭素原子及び少なくとも１つの三重結合を持つ直鎖状又は分枝鎖状炭化水素基をいい、幾つかの実施形態としては１つの三重結合を有する２〜６個の炭素原子のアルキニル基が挙げられる。置換アルキニルは、置換アルキル基に関して定義されたような１、２又は３つの置換基を含むであろう。アルキニレンとしては、２から１２個の炭素原子及び少なくとも１つの炭素−炭素三重結合を含有する２官能基性の分枝鎖状又は非分枝鎖状の炭化水素鎖への参照が挙げられる；ある実施形態では１つの三重結合を伴う２〜６個の炭素原子のアルキニレン基が挙げられる。置換アルキニレンは、置換アルキル基に関して定義されたような１、２又は３つの置換基を含むであろう。
【００３５】
本明細書で使用するとき、ハロ又はハロゲンは、Ｉ、Ｂｒ、Ｃｌ又はＦ等のあらゆるハロゲンのことをいう。本明細書中で使用するとき、「シアノ」は−Ｃ＝Ｎ基のことをいう。
【００３６】
用語「アリール基」とは、置換されていてもよい、約５から約１４個の炭素原子（及びその中の炭素原子の範囲及び特定の数の組み合わせ及びそれらの一部の組み合わせの全て）を有する、単環式又は二環式芳香族基のことをいうが、これは、約６から１０個の炭素原子であることが好ましい。非制限例のアリール基としては、例えばフェニル及びナフチルが挙げられる。置換アリール基は、置換アルキル基に関して定義されたような１つ以上の置換基を含むであろう。
【００３７】
アラルキル基は、アリール置換基を有するアルキル基であって、約６から約２０個の炭素原子（及びその中の炭素原子の範囲及び特定の数の組み合わせ及びそれらの一部の組み合わせの全て）を有するアルキル基をいうが、これは約６から１２個の炭素原子であることが好ましい。アラルキル基は置換されていてもよい。非制限の例としては、例えば、ベンジル、ナフチルメチル、ジフェニルメチル、トリフェニルメチル、フェニルエチル及びジフェニルエチルが挙げられる。置換アリールアルキル基は、置換アルキル基に関して定義されたような１つ以上の置換基をアリール又はアルキル基上に含むであろう。
【００３８】
「シクロアルキルアリール基」は、アリール基に縮合したシクロアルキル基のことをいい、独立して置換されるアルキルシクロアルキルアリールの全ての組み合わせを含み、シクロアルキルとアリール基は２原子を共有している。化合物において用いられた、縮合シクロアルキルアリール基の例としては、例えば、１−インダニル、２−インダニル及び１−（１，２，３，４−テトラヒドロナフチル）等が挙げられ得る。テトラヒドロナフチルは、より詳しくは、独立に置換されたアルキルテトラヒドロナフチルの全ての組み合わせを含む、縮合した多環式炭化水素に由来した１価の基をいう。これらの基は構造（ＩＩＩ）中（Ｃ１）又は同等に（Ｃ４）に、或いは構造（ＩＩＩａ）中、標識された位置（Ｃ２）及び同等に（Ｃ３）に連結点を有してもよい。
テトラヒドロナフタレン及びそのアルキル置換誘導体中の不斉炭素原子Ｃ１−４は（Ｒ）又は（Ｓ）のいずれかの立体配置を有してもよい。
【００３９】
【化３】
【００４０】
「シクロアルキル基」としては、より詳しくは、それらの構造において１つ以上の環から成り、且つ約３から約１４個の炭素原子（及びその中の炭素原子の範囲及び特定の数の組み合わせ及びそれらの一部の組み合わせの全て）を持つ１価の飽和炭素環式のアルキル基への参照が挙げられるが、これは約３から約７個の炭素原子であることが好ましい。多環構造は架橋又は融合された環構造であってもよい。環は１つ以上のアルキル基の置換基で置換されていてもよい。シクロアルキル基の例としては、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロオクチル及びアダマンチルが挙げられるが、これらに限定されない。置換シクロアルキル基は、置換アルキル基に関して定義されたように１つ以上の置換基を含むであろう。
【００４１】
「シクロアルキルアルキル基」とは、より詳しくは、シクロアルキル置換基を有し、且つ約４から約２０個の炭素原子（及びその中の炭素原子の範囲及び特定の数の組み合わせ及びそれらの一部の組み合わせの全て）を有するアルキル基のことをいうが、約６から約１２個の炭素原子が好ましく、そしてメチル−シクロプロピル、メチルシクロヘキシル、イソプロピルシクロヘキシル及びブチル−シクロヘキシル基が挙げられ得るが、これらに限定されない。シクロアルキルアルキル基は、１つ以上のアルキル基の置換基で置換されていてもよく、このような基としては、ヒドロキシ、シアノ、アルキル、アルコキシ、チオアルキル、ハロ、ハロアルキル、ヒドロキシアルキル、ニトロ、アミノ、アルキルアミノ及びジアルキルアミノが挙げられるが、これらに限定されない。
【００４２】
用語「アシル」は、上記したような、１つ以上のカルボニル−Ｃ（＝Ｏ）−基が結合した、アルキル、置換アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、アリール、ヘテロアリール又はヘテロシクリル基であって、式−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ、（式中、Ｒは置換アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、アリール、ヘテロアリール又はヘテロシクリル基を示す）を与える基のことをいう。用語アシルが他の基とともに、アシルアミノのように用いられる場合、これは２番目の名前の基に連結したカルボニル基｛−Ｃ（＝Ｏ）｝のことをいう。従って、アシルアミノ又はカルバモイルは−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２のことをいい、アシルアルキルアミノは−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ’Ｒ”等の基をいうことができる（式中、Ｒ’及びＲ”はＨ又はアルキルであり得る）。アミドアルキルは−ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２、−ＣＨ２ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２）等の基、より一般的には−（ＣＨ２）ＰＣ（Ｏ）ＮＨ２等の基のことをいう。カルボキシは基−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨをいい、カルボキシアルキルとは−（ＣＨ２）ｐＣ（＝Ｏ）ＯＨ等の基のことをいい、アルキルカルボキシアルキルとは（−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−（アルキル））等の基のことをいい、そしてアルコキシカルボニル又はアシルアルコキシとは（−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−（アルキル））基のことをいう。ここで式中、アルキルは前の定義と同様である。本明細書中、アロイル（ａｒｙｏｙｌ）又はアシルアリールは（−Ｃ（＝Ｏ）（アリール））基のことをいう。式中、アリールは前の定義と同様である。アロイル基の例としては、ベンゾイル及びナフトイルが挙げられる。アセチルはＣＨ３Ｃ（＝Ｏ）−基をいう。ホルミルはＨＣ（＝Ｏ）−基をいう。上記の基においてｐは独立に整数０、１、２又は３であり得る。
【００４３】
「アリールオキシ基」とは、置換されていてもよい、単環又は二環式芳香族基のことをいい、約５から約１４個の炭素原子と（アリール−Ｏ−）基群（式中、アリールは前の定義と同様である）を持つ基をいう。そのようなアリールオキシ基としては、式（ＩＶ）の基によって示されたものが挙げられるが、これらに限定されない。アリールオキシ基中のアリール環上の任意の置換基としては、水素、アルキル、ハロゲン、ヒドロキシ、アルコキシ、アルコキシカルボニル又は他の置換基が挙げられるが、これらに限定されない。本発明のＩＡＰ結合化合物の実施形態としてはピロリジン環に連結したフェノキシ基のようなアリールオキシ基を挙げることができる。
【００４４】
用語「アルコキシ」及び「アルコキシル」は置換されていてもよい（アルキル−Ｏ−）基のことをいい、式中、アルキルは前の定義と同様である。アルコキシ基の例としては、メトキシ、エトキシ、ｎ−プロポキシ、ｉ−プロポキシ、ｎ−ブトキシ、シクロプロピル−メトキシ及びヘプトキシが挙げられる。アルコキシ基は、アルキルＯ−基中の、置換されていてもよいアルキルも含み得る。アルコキシは、以前に定義され、式（Ｖ）の非制限基によって示されたような、置換されていてもよいアリール基を含み得る。「低級アルコキシ」基は、１から５個の炭素原子を含有する置換されていてもよいアルコキシ基のことをいう。「ポリエーテル」はポリエチレングリコール又はポリプロピレングリコール等の複数のエーテル結合を保有する化合物又は部分のことをいうが、これらに限定されない。「ポリアルキルエーテル」は複数のエーテル結合で相互連結されたか、そうでなければ複数のエーテル結合を保有するアルキルのことをいう。「アリールアルキルオキシ」はアリールアルキル−Ｏ-基を意味し、アリールアルキル基は前記と同様である。アリールアルキルオキシ基の例としては、ベンジルオキシ（Ｃ６Ｈ５ＣＨ２Ｏ−）基（ＢｎＯ−）、或いは１−又は２−ナフタレンメトキシが挙げられる。ベンジルオキシ基中のアリール環上の任意の置換基としては、水素、アルキル、ハロゲン、ヒドロキシ、アルコキシ及びアルコキシカルボニル又はアルキル基に関して定義されたような他の置換基を含んでもよい。
【００４５】
【化４】
【００４６】
「アリールアミノ基」は約５から約１４個の炭素原子及び（−ＮＨ（アリール））基群を持つ、置換されていてもよい単環又は二環式芳香族基のことをいい、式中、アリールは、以前にアルキルに関して定義されたように、置換されていてもよい。アリールアミノ基中のアリール環上の任意の置換基としては、水素、アルキル、ハロゲン、ヒドロキシ、アルコキシ及びアルコキシカルボニルが挙げられるが、これらに限定されない。アリールアミノ基の例は、アニリノ基である。アミノとは−ＮＨ２基のことをいい、そしてアルキルアミノとは、基（−ＮＨＲ’）群のことをいう。ここで式中、Ｒ’はＨ、アルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アラルキル又は以前定義されたような、これらの基が任意で置換された種類をいう。アルキルアミノ基群の例としては、メチルアミノ、エチルアミノ、ｎ−プロピルアミノ、ｉ−プロピルアミノ、ｎ−ブチルアミノ及びヘプチルアミノが挙げられる。ベンジルアミノ基とはアリールアミノ基Ｃ６Ｈ５ＣＨ２ＮＨ−のことをいい、該アリール基は水素、アルキル、ハロゲン、ヒドロキシ、アルコキシ及びアルコキシカルボニル又は他の置換基を含むがこれらに限定されない、任意の置換基を有してもよい。
【００４７】
「ジアルキルアミノ」としては、基（−ＮＲ’Ｒ”）への参照が挙げられ、式中、Ｒ’及びＲ”はそれぞれ独立してＨ、アルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アラルキル又は以前の定義と同様のこれらの基が置換されていてもよい種類であり得る。ジアルキルアミノ基の例としては、ジメチルアミノ、メチルエチルアミノ、ジエチルアミノ及びジ（１−メチルエチル）アミノ等が挙げられるが、これらに限定されない。
【００４８】
「ヘテロアリール」としては、環内で１、２又は３個の（窒素、酸素又は硫黄から選ばれる）ヘテロ原子を組み込む１つ以上の環を持つ１価の芳香族基への参照が挙げられる。これらのヘテロアリールは、１つ以上の他の置換基で置換された水素原子を任意で有していてもよい。これらのヘテロアリール基の例としては、置換されていてもよいベンゾフラン類、ベンゾ［ｂ］チオフェン１−オキシド、インドール類、２−又は３−チエニル類又はチオフェニル類、チアゾイル類、ピラジン類、ピリジン類が挙げられる。
【００４９】
用語へテロアルキル、ヘテロアルキレン、ヘテロアルケニル、ヘテロアルケニレン、ヘテロアルキニル及びヘテロアルキニレン（ｈｅｔｅｒｏａｌｋｙｎｌｅｎｅ）としては、アルキル、アルキレン、アルケニル、アルケニレン、アルキニル及びアルキニレン基への参照のことをいい、ここで、１つ以上の炭素原子は、原子の要求価を満たすために単価又は多価結合した窒素、硫黄、酸素又は１つ以上の水素を持つこれらの原子等（これらに限定されない）と交換又は置換される。そのような置換は、官能基を有する分子を形成するために用いられ得、官能基としては、アミン類、エーテル類及びスルフィド類が挙げられるが、これらに限定されない。ヘテロアルキニル基の非制限の例は、基−ＣＨ（Ｍｅ）ＯＣＨ２Ｃ＝ＣＨで示される。
【００５０】
「ヘテロシクロアルキル基」としては、１、２又は３個の（窒素、酸素又は硫黄から選ばれる）ヘテロ原子を組み込んだ１つ以上の環からなる１価の飽和炭素環式基への参照が挙げられ、これは１つ以上の置換基で任意で置換され得る。
【００５１】
「ヘテロシクロアルケニル」としては、単価の不飽和炭素環基への参照が挙げられ、該基は１つ以上の炭素−炭素二重結合を含む１つ以上の環からなり、ここで炭素原子は１つ以上の環内で１、２又は３つのヘテロ原子で交換又は置換されている。ヘテロ原子は窒素、酸素、又は硫黄から選択され、ヘテロシクロアルケニルは１つ以上の置換基で置換されていてもよい。
【００５２】
本発明の分子中で用いられる様々な基は、化学的部分又は他の置換基で置換された１つ以上の水素原子を持つことができる。置換基は、ハロ又はハロゲン（例、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ）、−ＣＦ３、−ＣＦ２ＣＦ３、−ＣＨ２ＣＦ３等のハロアルキル、チオアルキル、ニトロ、置換されていてもよいアルキル、シクロアルキル、アラルキル、アリール、ベンゾフラン類、インドール類、チエニル類、チオフェニル類、チアゾイル類、ピラジン類、ピリジン類、アルコキシピリジン等のヘテロアリール類、ヒドロキシ（−ＯＨ）、アルコキシ（−ＯＲ）、アリールオキシ、アルコキシへテロアリール、シアノ（−ＣＮ）、カルボニル−Ｃ（＝Ｏ）−、カルボキシ（−ＣＯＯＨ）及びカルボン酸塩；−（ＣＨ２）ＰＣ（＝Ｏ）ＯＨ、基又は基（ＣＨ２）ｐＣ（＝Ｏ）Ｏ（アルキル）及び−（ＣＨ２）ＰＣ（＝Ｏ）ＮＨ２（式中、ｐは独立して０、１、２又は３の整数である）；トシル、ブロシル又はメシル等のスルホン酸類（これらに限定されない）；スルホン、イミン又はオキシム基、−（Ｃ＝Ｏ）Ｏアルキル等の基、アミノカルボニル又はカルバモイル−（Ｃ＝Ｏ）ＮＨ２）、−Ｎ−置換アミノカルバモイル−（Ｃ＝Ｏ）ＮＨＲ”、アミノ、アルキルアミノ（−ＮＨＲ’）及びジアルキルアミノ（−ＮＨＲ’Ｒ”）が挙げられるが、これらに限定されない。前記アミノ及び関連する基に関連して、各部分Ｒ’又はＲ”は、独立してＨ、アルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アラルキル又は置換されていてもよいアルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アラアルキルを含み得る。
【００５３】
更なる局面においては、本発明は、本発明化合物及び組成物を細胞に投与することを含む、アポトーシスを阻害する方法を提供する。例えば、本発明の化合物はＦａｓＲ又はＴＮＦＲタンパク質に選択的に結合し、そしてＥＧ５０値がｎＭの範囲のＦａｓＬ存在下で細胞死を阻害できる。本方法はインビトロ又はインビボで細胞に用いることができる。しかしながら、インビボで用いられる場合は、医学的治療を受けているヒト被験者或いは獣医医療又は実験室での研究中である動物（例えば、イヌ、ネコ、ウマ、ウシ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、ニワトリ、サル、ウサギ、ラット、マウス等）において使用することができる。
【００５４】
医療的又は獣医療使用のために、本発明は治療有効量の本発明化合物をヒト又は被験動物（典型的には哺乳動物）に投与することを含む、Ｆａｓ又はＴＮＦＲ関連疾患を治療する方法を提供する。本発明の方法は、ＴＮＦＲタンパク質に関係した疾患及び状態を治療するために用いることができる。そのような疾患及び状態としては、敗血症、虚血、再灌流障害、急性及び慢性肝機能障害、癌、慢性炎症疾患及び自己免疫疾患を含むが、これらに限定されない、
【００５５】
本発明の方法によれば、ヒト又は被験動物に対し、本発明による化合物がＦａｓ又はＴＮＦＲ関連の疾患を治療するために効果的な量で、かつ効果的な場所に投与される。「投与すること」とは、治療薬と共に用いられるとき、それによって対象となる組織に治療薬が正の影響を与えるように、治療薬を対象組織中へ直接に又はその上に投与すること、或いは治療薬を患者に投与することを意味する。組成物を「投与すること」は経口、直腸、局所、経鼻、皮内、吸入、腹膜内又は非経口（即ち、皮下、静脈内、筋肉内又は注入）経路によって、他の公知の技法と組み合わせて達成されてもよい。
【００５６】
有効量とは、単独で又は更なる投与量とあわせて、望ましい応答を引き起こす製剤量である。これは、好ましくは疾患の進行を恒久的に停止させるか、或いは疾患の発生から生じる疾患又は状態の開始を遅らせるか、或いは疾患の発生から生じる疾患又は状態を予防することを含むが、単に疾患の進行を一時的に遅くすることに関与していてもよい。これは常法によりモニターできる。一般的に、活性化合物の投与量は１日当たり約０．０１ｍｇ／ｋｇから１０００ｍｇ／ｋｇである。５０から５００ｍｇ／ｋｇの範囲の投与量が、好ましくは静脈内、筋肉内、経口又は皮内への投与であって、１日当たり１又は数回の投与に好適であると期待される。
【００５７】
一般的に、臨床試験における日常の実験を、各治療薬及び各投与プロトコールに対する至適な治療効果のための特定範囲を最適化するのに役立てることができ、そして特定の被験者（体）への投与は、被験者（体）の状態及び初期投与への応答に依存して有効且つ安全な範囲内で調整されるであろう。しかしながら、最終的な投与プロトコールは、年齢、状態及び被験者（体）の大きさ、効能、治療の持続時間並びに治療される疾患の深刻度等の要因を考慮した担当臨床医の判断に従って調整されるであろう。例えば、本発明化合物の用量は、１ｍｇから２０００ｍｇ／日、好ましくは１〜１０００ｍｇ／日、より好ましくは５０〜６００ｍｇ／日、腫瘍の増殖を低下させるために２〜４回（好ましくは２回）に分けた量の経口投与であり得る。間欠治療法（例えば、３週間で１週間又は４週間で３週間）も用いられていてもよい。
【００５８】
投与された初期の量で対象における応答が不十分な場合においては、より多くの投与量（又は異なった、より局在化した送達経路によって効果のある、より多くの投与量）を、被験者（体）の耐容量が許す程度で用いてもよい。適切な全身の化合物レベルを実現するために、１日当たり複数の投薬が意図される。一般的には、最大投与量、即ち、適切な医療判定に従った安全な最大の投与量が用いられる。しかしながら、当業者は、被験者（体）が医療上の理由、心理学的な理由又は実際上他のいずれかの理由での少投与量又は耐容量を主張しうることを理解するだろう。
【００５９】
様々な投与経路が利用できる。選択された個々の様式は、当然に、選択された個々の化学療法薬、治療された状態の深刻度及び治療効果に必要な投与量に依存する。一般的に、本発明の方法は、医療上許容されるいかなる投与様式を用いて実施してもよく、これは、臨床的に許容不能な悪影響を引き起こすことなく、活性化合物の効果的なレベルを生み出すようなあらゆる様式を意味する。そのような投与様式は、経口、直腸、局所、経鼻、皮内、吸入、腹膜内又は非経口経路が挙げられるが、これらに限定されない。用語「非経口」としては、皮下、静脈内、筋肉内又は注入が挙げられる。静脈内又は筋肉内経路が本発明の目的に特に好適である。
【００６０】
本発明の化合物は医薬的に許容可能な担体を含んでもよい。本明細書で用いられるとき、用語「医薬的に許容可能な担体」は、１つ以上の相溶性のある固体又は液体の充填剤、希釈剤、他の賦形剤又はカプセル化物質を意味し、これらは、ヒト患者又は動物患者への投与に適している。用語「担体」は有機又は無機成分を意味し、これは天然又は合成のものであり、ここには、使用を促進するために活性成分が組み合わせられる。医薬組成物の構成成分はまた、望ましい医薬的効果に実質的に影響しないような方法で、本発明の分子と共に混合することもできるし、それぞれを混合することもできる。「医薬的に許容可能な」物質は、吐き気、めまい、発疹又は異常亢進等の望ましくない生理学的効果を生み出すことなく、被験者（体）に投与することができる。例えば、医薬的に許容可能な賦形剤を含んでなる治療用組成物にとっては、治療目的でヒト患者に投与した場合、免疫原性で無いことが望ましい。
【００６１】
医薬組成物は適切な緩衝剤を含有してもよく、そのような緩衝剤としては、塩の状態での酢酸；塩の状態でのクエン酸；塩の状態でのホウ酸；塩の状態でのリン酸が挙げられる。医薬組成物は、塩化ベンザルコニウム、クロロブタノール、パラベン及びチメロサール：等の好適な保存剤も含有していてもよい。
【００６２】
医薬組成物は、簡便には単位用量の形態で存在してもよく、製薬学の技術で周知のいずれかの方法によって調製されてもよい。全ての方法において、活性剤を１つ以上の副成分を構成する担体と合わせる工程が含まれる。一般的には、組成物は、活性化合物と、液体担体、細かく分けられた固体担体又はその両方とを一様且つ密接に混合することによって調製され、次いで、必要に応じて、生成物を成形する。
【００６３】
非経口投与に好適な組成物は、本発明化合物の無菌水溶液製剤を含むが、これは、受容者の血液と等張であることが好ましい。この水溶性製剤は、好適な分散又は湿潤剤及び懸濁剤を用いて既知の方法に従って製剤化されてもよい。無菌の注射用製剤は、非毒性の、非経口的に許容可能な希釈剤又は溶媒、例えば、１，３−ブタンジオール中の水溶液のような、無菌の注射可能な水溶液又は懸濁液であってもよい。水、リンゲル液及び等張塩化ナトリウム水溶液が、用いられてもよい許容可能なビヒクル及び溶媒である。加えて、無菌の固定油が、溶媒又は懸濁媒体として恒常的に利用される。この目的には、合成モノ−又はジ−グリセリドを含むいずれの無菌固定油が用いられてもよい。加えて、オレイン酸等の脂肪酸が注入物質の調製に用いられてもよい。経口、皮下、静脈内、筋肉内等の投与に好適な担体処方はＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ中に見出すことができ、本明細書中、参照によりその全体が組み込まれる。
【００６４】
本発明の送達システムは、本発明化合物の送達が治療されるべき部位の感作を引き起こす前に発生し、且つ十分な時間起こるような、持続放出型、遅延放出型又は徐放型の送達システムを含むように設計される。本発明化合物は、他の治療剤又は治療法とともに用いられてもよい。そのようなシステムによって本発明の化合物の繰り返し投与を避けることができるし、対象や内科医に対する利便性を増すことができる。そして本発明のある組成物に特に好適であってもよい。
【００６５】
多くのタイプの放出送達システムが利用可能であり、当業者に既知である。それらはポリ（ラクチド−グリコリド）、共ポリシュウ酸塩、ポリカプロラクトン類、ポリエステルアミド類、ポリオルトエステル類、ポリヒドロキシ酪酸及びポリ無水物類等のポリマーベースのシステムを含む。薬剤を含有する前記ポリマーのマイクロカプセルは、例えば、米国特許番号５，０７５，１０９に記載されている。送達システムはまた、例えばコレステロール、コレステロールエステル等のステロール類及びモノ−、ジ−及びトリグリセリド類等の脂肪酸又は中性脂肪類；ハイドロゲル放出システム；シラスティック（Ｓｉｌａｓｔｉｃ）システム；ペプチドベースのシステム；ワックスコーティング；従来の結合剤及び賦形剤を用いる圧縮錠；部分的に融合したインプラント；等の非ポリマー系が挙げられる。特定の例としては：（ａ）活性化合物がある形状で米国特許番号４，４５２，７７５、４，６６７，０１４、４，７４８，０３４及び５，２３９，６６０に記載されたようなマトリクス内に含有される浸食性システム、及び（ｂ）活性化合物が米国特許番号３，８３２，２５３及び３，８５４，４８０に記載されたようなポリマーから、制御された速度で透過する拡散性システムが挙げられるが、これらに限定されない。加えて、ポンプベースのハードウェア送達システムが用いられ得、それらのうちのいくつかはインプランテーションに適合させられる。
【００６６】
長期徐放型のインプラントの使用が望ましいかもしれない。本明細書で用いられるとき、長期放出とは、インプラントが少なくとも３０日、そして好ましくは６０日間治療レベルの活性成分を送達するために構成、配置されることを意味する。長期徐放型のインプラントは当業者に周知であり、上に記載された放出システムのうちいくつかを含む。
【実施例】
【００６７】
使用された方法及び材料を示す本発明及び実施形態は、以下の非限定の例を参照することにより、更に理解することができる。
【００６８】
実施例１
本実施例は発明化合物に関する様々な置換について測定された結合定数を示す。
【００６９】
材料及び方法
【００７０】
細胞株、化学物質、抗体及びタンパク質
組換えヒトＦａｓ／ＴＮＦＲＳＦ６／Ｆｃキメラ（ｃａｔ．ｎｏ．３２６−ＦＳ−０５０）、ヒトＦａｓ Ｌｉｇａｎｄ／ＴＮＦＳＦ６（ｃａｔ．Ｎｏ．１２６−ＦＬ）、抗ヒトＦａｓ ＴＮＦＲＳＦ６ポリクローナル抗体（ｃａｔ．ｎｏ．ＡＦ３２６）及び抗６×ヒスチジンクロスリンク抗体（ｃａｔ．ｎｏ．ＭＡＢ０５０）はＲ＆Ｄシステムズから購入した。抗ヒトＩｇＭ−ＨＲＰ（ｃａｔ．ｎｏ．ＡＰ３２０Ｐ）はケミコンインターナショナルから購入した。リン酸緩衝生理食塩水（ｃａｔ．ｎｏ．Ｐ３５６３）、アジ化ナトリウム（ｃａｔ．ｎｏ．７１２８９）及び３，３’，５，５’−テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）Ｌｉｑｕｉｄ Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ Ｓｙｓｔｅｍ ｆｏｒ ＥＬＩＳＡ（ｃａｔ．ｎｏ．Ｔ０４４０）は、シグマアルドリッチから購入した。Ｃｌｉｎｉｐｌａｔｅ ９６ウェルマイクロプレート ｗ／ｅｎｈａｎｃｅｄ ｂｉｎｄｉｎｇ（ｃａｔ．ｎｏ．２８２９８−６０４）はＶＷＲから購入した。Ｃｏｓｔａｒ、９６−ウェルの細胞培養アッセイプレート（ｃａｔ．ｎｏ．３６３２）は、Ｃｏｒｎｉｎｇ Ｉｎｃｏｒｐｏｒａｔｅｄに発注した。Ｊｕｒｋａｔ細胞（ＡＴＣＣ ｎｏ．ＣＲＬ−１９９０）及びＬ９２９（ＡＴＣＣ ｎｏ．ＣＲＬ−２１４８）はＡＴＣＣから購入し、１．５ｇ／Ｌ重炭酸ナトリウム、４．５ｇ／Ｌグルコース、１０ｍＭＨＥＰＥＳ及び１ｍＭピルビン酸ナトリウムを９０％；１０％仔牛血清を含有するよう調製された２ｍＭＬ−グルタミン入りＲＰＭＩ １６４０培地中で増殖させた。Ｃｅｌｌ Ｔｉｔｅｒ Ｂｌｕｅ Ｃｅｌｌ Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ Ａｓｓａｙ（ｃａｔ．ｎｏ．ＴＢ３１７）はプロメガから購入した。
【００７１】
ＥＬＩＳＡ
ペプチドをコーティング緩衝溶液（０．０５Ｍ炭酸ナトリウム、０．０２％アジ化ナトリウム、ｐＨ＝９．６）に、最終濃度が１０μＭになるよう適切な濃度で溶解した。所望の実験濃度に到達するまで適宜希釈した。ペプチド溶液のアリコート１００μｌを各ウェルに加え、２時間インキュベートした。全てのインキュベートはＴ＝３７℃で振盪しながら行った。溶液を各ウェルからピペットで吸い取り、２００μＬの洗浄水溶液（ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ；０．５％）を加え、１５分間振盪し、各ウェルを排出することによってウェルを洗浄した。２００μＬのブロッキング水溶液（１％ＢＳＡ、ＰＢＳ緩衝液中）を各ウェルに加える前に３回の洗浄サイクルを行い、その後２時間インキュベートした。次いでウェルを（上記手順の通り）３回洗浄した。次いで適切な濃度のタンパク質溶液（Ｖｓｏｉｕｔｉｏｎ ５０μＬ）を加え、２時間インキュベートした。（上記手順の通り）３回洗浄した後、Ｆａｓ特異的抗体溶液（〜１：２０，０００）を各ウェルに１００μＬ分量加え、１時間インキュベートした。（上記手順の通り）３回洗浄した後、ＩｇＭ−ＨＲＰ水溶液（〜１：２０，０００）を各ウェルに１００μＬ分量加え、１時間（振盪しながら）Ｔ＝３７℃でインキュベートした。すぐ使用できるよう準備したＴＭＤを添加する前にウェルを３回洗浄し、次いで３０分間インキュベートした。発色反応を止めるために２Ｍ Ｈ２ＳＯ４（３滴）を加え、４５０ｎｍの吸収をＰｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ，Ｖｉｃｔｏｒ３ Ｍｏｄｅｌ自動化プレートリーダーで見た。データはエクセルで標準回帰近似を用いて解析した。
【００７２】
ペプチド合成
ペプチドは従来のＦ−ｍｏｃ化学反応を用いてＡｄｖａｎｃｅｄ ＣｈｅｍＴｅｃｈ、マルチウェル、固相合成機で合成した。Ｃ末端をアミド官能基化したペプチドをＲｉｎｋ Ａｍｉｄｅ ＭＢＨＡ樹脂から生成し、Ｃ末端を酸官能基化したペプチドを予め充填しておいたＴＧＡ樹脂から生成した。全てのＮ−α−Ｆ−ｍｏｃで保護されたアミノ酸はＮｏｖａｂｉｏｃｈｅｍから購入した。ペプチドは、Ｂｅｃｋｍａｎ ＢｉｏＳｙｓの逆相Ｃ−１８カラム、モデル５１０を介してＨＰＬＣで精製した。特性解析はＡｇｉｌｅｎｔ １１０ Ｓｅｒｉｅｓ Ｔｒａｐ ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｅｒでＬＣ／ＭＳによって行った。
【００７３】
アポトーシスアッセイ
ＲＰＭＩ１６４０培地中のＪｕｒｋａｔ細胞を、１００μＬの細胞液でウェルあたり２×ｌ０４個の全体細胞数になるように希釈した。対照反応を無菌ＰＢＳ緩衝液で希釈して、ウェルあたり最終体積２００μＬにした。ペプチド溶液（ＰＢＳ緩衝液中、ｐＨ＝７．３）を、各ウェルの望ましい濃度に達するよう適切な量加え、ウェルごとの全体積を２００μｌにした。架橋ヒトＦａｓＬを０．５ｎｇ／ｍｌの濃度で加えることによりアポトーシスを誘導した。次いでプレートを無菌条件下でＫｅｎｄｒｏ，ｍｏｄｅｌ Ｈｅｒａ Ｃｅｌｌ １５０インキュベーター中でＴ＝３７℃、％ＣＯ２＝５で３時間振盪しながらインキュベートした。細胞中のアポトーシスの％を決定するためにＣｅｌｌ Ｔｉｔｅｒ Ｂｌｕｅ Ｃｅｌｌ Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ Ａｓｓａｙ ｋｉｔを（付随のプロトコールの通りに）用いた。４時間後、上記インキュベート条件下で蛍光（５６０／５９０ｎｍ）をＰｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ、Ｖｉｃｔｏｒ ３ Ｍｏｄｅｌ自動化プレートリーダーで読み取った。データはエクセルで標準回帰近似を用いて解析した。
【００７４】
結果
最初のα−Ｍｅｔの研究によりＮ末端の最初の１０６アミノ酸のみがＦａｓＲとの効果的な結合に不可欠であることがわかった。更に、ＦａｓＬとの直接のシークエンスアラインメントに際して、下に記載の通り、短い１０アミノ酸のストレッチのみが同様の相同性を示すことがわかり、且つそのうち、４量体部；即ち、ＹＬＧＡ配列のみが完全に保存されていた。
Ａ）α−Ｍｅｔ及びＦａｓＬの結合領域、Ｂ）ＴＮＦスーパーファミリー由来相同タンパク質についてのシークエンスアラインメントデータ。
【００７５】
【化５】
【００７６】
図１に記載されたように、この４アミノ酸配列と他のＴＮＦスーパーファミリーリガンドとの比較で類似したモチーフが明らかになった。このことは、このモチーフがこのファミリーのタンパク質のリガンド／受容体結合に必要な、重要な結合エネルギーを提供する可能性を示唆する。以前に行われた研究で、Ｋａ値においては、合成テトラペプチドは、より長い１２ｍｅｒ配列とそれほど違わないことがわかった。これらの知見により４量体中の各残基と改変アミノ酸との体系的置換による、主要な結合配列のまわりにある構造−機能関係を深く探求することが望ましいと示唆された。アミド結合のＮメチル化と同様に、Ｎ又はＣ末端の誘導体化の効果を検証することで、最適な結合配列や、下に示すとおり式ＶＩを有するペプチドミメティック化合物の開発についての可能性に関する情報が提供される。
【００７７】
【化６】
【００７８】
式中、ＡＡｎはアミノ酸、Ｒｎはアルキル基であり、そしてＸはＯＨ及びＮＨ２から選択される。
【００７９】
アミノ酸置換の結合親和性への効果
各テトラペプチドの結合親和性は１ｎＭ〜１μＭの濃度範囲で標準的なＥＬＩＳＡによって決定した。第１のシリーズのペプチドにおいては、チロシン残基だけを改変し、最後の３アミノ酸は親配列（ＬＧＡ）の相同性を保持した。これらの変換の結果を表１に列挙する。
【００８０】
【表１】
【００８１】
メトキシフェニルアラニン及びｐ−フルオロフェニルアラニンの研究で、ＹＬＧＡ及び置換ＦＬＧＡ配列間の結合親和性における２．５桁分の低下によって明らかなように、チロシン残基上のヒドロキシ部分の重要性が明らかになった。この第１位に芳香族残基がある場合、全体的な結合エネルギーへの寄与は、当部位内にＯＨ官能基がある場合よりも、相当に弱いようである。このことは、脂肪族側鎖（Ａ、Ｌ、Ｉ）とヒドロキシ基を含有する対応する部分（Ｓ、Ｔ）の結合活性を対照したとき、とくに顕著となる。第１位をアラニン（−ＣＨ３）に置換した結果、結合が（検出限界内で）完全に消失したが、その一方セリン基（−ＣＨ２ＯＨ）では（誤差限界の範囲で）元来のチロシンペプチドと同一の結合を示した。この観察が、もっぱら極性効果の結果であるとの可能性は、酸官能基を導入した際４倍の低下を示した、酸含有残基（Ｄ、Ｅ）の置換との比較によって反論される。
【００８２】
第２位の置換では、ロイシン残基を脂肪族側鎖基（Ｖ，Ｉ）の他の基と置換した場合、わずかな程度の柔軟性があることがわかった。特に、ＹＡＧＡ配列は親のＹＬＧＡ配列より２０％高いＫａ値を示した（表２参照）。このことにより、より短い、より立体障害のない配列が、最適な結合に好都合である可能性が示唆された。ＹＧＧＡペプチドの検証では、側鎖からのメチレン単位を除外することで測定したＫａが２０倍低下した結果になったことから、疎水性相互作用が結合親和性に影響することがわかった。このことは、極性残基のトレオニンで非極性のロイシンを置換した場合に結合が完全に消失したことによって更に裏付けられた。分枝脂肪族鎖（Ｖ、Ｉ）で結合親和性が低下し、芳香族のフェニルアラニン基で結合が完全に消失することによって実証されたように、立体構造上の要因も考慮されなければならない。
【００８３】
【表２】
【００８４】
残りの２つの位置は、表３及び４に示すように、配列中のいずれの置換をも調整する能力を示さなかった。グリシン残基を、より高分子の脂肪族側鎖のアミノ酸であるアラニン又はロイシンと置換するとＫａが２０倍低下するが、一方でより立体構造的に妨害するイソロイシン又はｄ−アラニンでは結合が全く示されなかった。同様に、末端のアラニンをより低分子の側鎖グリシン（Ｇ）又はより高分子のもの（Ｌ、Ｉ）のいずれかに置換すると元来のＹＬＧＡ配列よりほぼ１０倍低いＦａｓＲへの親和性を示した。この全体的な限定的な柔軟性は生物学的に活性のあるペプチドミメティックの設計に直接密接に関係する。
【００８５】
【表３】
【００８６】
【表４】
【００８７】
Ｎ末端、Ｃ末端及びアミド結合改変の結合親和性への影響
アミド窒素をメチル化する能力は、薬理上より好ましい特性を伴うペプチドを設計する観点から興味深い。上の知見と整合するように、Ｇ又はＡ位置に優先して起こるアミド結合のメチル化では、結果的にペプチドと受容体（式ＶのＲ３、Ｒ４）の結合は観察できなかった。しかしながら、Ｒ１又はＲ２の位置のアルキル化では結合（ｂｉｄｉｎｇ）親和性に有意な低下を示さなかった。このことはこれらの位置が結合ドメインとあまり複雑に共役していないことを示唆する。Ｃ末端のアミド官能基を酸性基に置換する効果もまた、ペプチドの、ＦａｓＲタンパク質へ結合する全体的な結合能にほとんど影響しないことがわかった。
【００８８】
インビトロ結合アッセイと細胞活性の相関化
ＦａｓＬの活性化によるアポトーシスはリガンドが受容体に結合することによって起こることが知られており、それによってカスパーゼ産生と続いて起こる細胞死につながる一連のシグナル伝達事象が開始される。α−Ｍｅｔ及びＦａｓＬタンパク質の両方で単離されたＹＬＧＡモチーフが確かにＦａｓＲへの結合の主要な原因配列ならば、ある濃度で、十分なＫａ値を持つペプチドは好んで受容体に結合するはずである。そして、これによってＦａｓＬからの結合部位がブロックされ、そしてペプチド及びＦａｓＬの両方の存在下で細胞死を阻害する。この可能性を検証するために、（Ｆａｓ受容体発現を上昇させることが知られた）Ｊｕｒｋａｔ細胞を異なる濃度のペプチドで処理し、次いで組換えＦａｓＬに曝露した。２時間インキュベートした後の全体の細胞生存性は、代表的な数のペプチドに対して、表５に示した通り、ペプチドの解離定数と測定したＥＣ５０値との間の直接的な相関関係を示す。
【００８９】
【表５】
【００９０】
この相関関係によってペプチド−タンパク質相互作用機構が示唆されるが、それによって強固に結合したペプチドがＦａｓＬをその受容体との結合をブロックすることができ、ＦａｓＬが誘導するアポトーシスを阻害することができる。ＴＮＦリガンドスーパーファミリーの他のメンバーの対応する結合領域の配列アラインメントが図１に示した通り類似のモチーフであることが明らかになった。ＹＬＧＡモチーフが実質的に保存されているＴＮＦ等の場合、表６で示した通り予備的な結果によって、アミノ酸配列の単純な修飾により選択的にある経路をもう一方よりも阻害できることが示唆された。
【００９１】
【表６】
【００９２】
隣接残基の結合活性への効果
タンパク質Ｍｅｔは、ＦａｓＲ部位への結合を実現するために、αサブユニットの最初の１０６アミノ酸を必要とすることが最初に示された。この研究は元来のタンパク質配列に基づいたテトラペプチドが低ｎＭ濃度でＦａｓＬ／ＦａｓＲ細胞死経路を阻害できることを示した一方で、これを改善する能力をＹＬＧＡモチーフのＮ末端及びＣ末端側の両方の配列に拡張して検査することによって試験した。長さ１２アミノ酸までのペプチドがα−Ｍｅｔ配列に基づいて合成され、それらのＫａ値がＦａｓ受容体について測定された（表７）。全体的な結合能はＹＡＧＡ配列に対して４〜１４％亢進した一方で、合成することの複雑さや、可溶性要素が増すことによって、さもなければ予期し得る次の実験に対しては、ほとんど有用でないＫａの上昇を与える。
【００９３】
【表７】
【００９４】
下記の表８に示す通り、Ｆａｓ及びＴＮＦＲ１についての様々なペプチドの解離定数及び測定ＥＣ５０値が測定された。
【００９５】
【表８】
【００９６】
上記の構造−機能研究から出される一般的結論が下に模式的に要約される：
【００９７】
【化７】
【００９８】
一般的に、これらは天然のＹＬＧＡ配列内でほぼ最適化された、非常に選択的な結合ポケットを示す。いくつかの結果が、Ｆａｓ関連疾患における治療標的として用いるための将来のペプチドミメティック化合物を設計する点で重要な鍵となる。はじめに、第１の位置におけるヒドロキシル基が必要なことは、受容体上の対応する位置に荷電残基又は水素結合した残基が存在していることを示唆する。この結果は、チロシン残基との相互作用を介した強いＦａｓＬ／ＦａｓＲ相互作用において、Ｒ８７が重要な役割を果たすことを示唆するモデリング研究から提示された結合部位構造と整合する。この構造は更に、リガンドの近傍に位置する第２のアルギニンと同様に２つの鍵となるリシン基の存在を提示する；それらの全てがリガンド基のヒドロキシル部分に関する重要な結合相互作用を提供することにおいて役割を果たす。類似体であるＹなしの３量体ペプチド（表４）の結合がほぼ完全に消失することよって明白なように、ペプチドを結合部位に「固定する」のにＯＨ基が果たす鍵となる役割も注目に値する。このことはペプチドミメティック化合物の開発においてなされる、あらゆる合成的修飾が、同様のモチーフを組み込む必要があることを示唆する。
【００９９】
別に、２番目に位置するロイシンと、それよりも低分子の、脂肪族に相当するアラニンとの置換によって獲得された、亢進された結合能が観察されている。末端で分枝した３炭素から単一の炭素のアルキル鎖への側鎖の改変において、Ｋａ値は〜２０％だけ増大した。しかし、グリシンへの置換の結果、恐らくペプチドと受容体との間の疎水性相互作用が低下したために、結合が消失した。中程度の長さの非天然アミノ酸を導入することによってこの位置を更に最適化することが可能かもしれない。この柔軟性は、アミド窒素のメチル化の結果、結合親和性が誤差分しか消失しなかった残基のアミド結合へも拡張される。このことによって、その基が生物学的活性の公算を最大化するための、化学修飾の実行可能な標的になる。３番目及び４番目両方のアミノ酸の非柔軟性は生物学的に活性のあるペプチドミメティックの設計のために直接密接な関係を有する。特に、３番目の位置の低分子量の、相互作用しない部分は、ペプチド部分に代えて単純なアルキル結合を容易に導入することを可能にし、それによって化合物の全体的なタンパク質分解的切断の影響の受けやすさを低減できる。Ｃ末端及びＮ末端の誘導体化とともに、これらの要因は組み合わさることで、Ｆａｓ受容体に最適化された独特且つ特異的な標的化合物を構築することを可能にする。
【０１００】
ＦａｓＲに対するＫａにおける近傍配列の効果を検証することにおいて、モデルとして利用されたのはＦａｓＬよりもα−Ｍｅｔの構造であったことに注目すべきである。２つのタンパク質配列をより綿密に検証することで、図１に示す通り、近傍残基の極性、大きさ及び荷電の有意な相違が明らかになる。従って、ＦａｓＬ配列から構成要素を組み込むためにペプチド長を延長した結果、受容体についてのペプチドの結合活性が亢進する可能性があるかもしれない。これらの研究は現在進行している。
【０１０１】
ＦａｓＲとそのリガンド、ＦａｓＬとの相互作用は無数の種間で保存されているが、分子レベルでの相互作用についてはほとんど知られていない。いくつかのモデル研究及び無数の生化学的アプローチが、このタンパク質−タンパク質相互作用に関わる構造的構成要素をより理解しようと試みるのに用いられてきた。より最近、Ｆａｓ誘導性の細胞死の作用機構を更に明らかにするためにペプチドを用いて研究が行われてきた。これらの研究においては、細胞死を誘導するためＦａｓＬ相互作用を模倣することか、又はＦａｓＬとの結合は可能だが受容体の３量体化を阻害するような方法で受容体を標的にすることに重点が置かれた。両方の例はＦａｓ経路を破壊するという点に関して情報を提供することには役立つ一方で、ＦａｓＬのアゴニストが開発され得るような実際の結合相互作用の周辺の更なる構造的情報は何も提供しなかった。
【０１０２】
本実施例においては、ＹＬＧＡペプチド上で行われた様々な改変によって、ＦａｓＬ／ＦａｓＲ相互作用に関与する結合ポケットをより理解することができた。ペプチド構造は、細胞における拮抗作用に対する能力を示すとともに、あるペプチドの、ＦａｓＲに対する結合親和性の強い結合を、制御することを示した。これらの研究によって、ＦａｓＬ／ＦａｓＲ経路を含むＴＦＮＲ細胞死経路を破壊すること及びＦａｓ又はＴＮＦＲ関連障害に対する治療標的を開発することを目的とする新規の手段が導かれる。
【０１０３】
前述に基づいて、式ＶＩＩ
【０１０４】
【化８】
【０１０５】
（式中、残基１はＹ、Ｓ、Ｔ、Ｄ及びＥから選択され；残基２はＡ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｍ及びメチル、エチル、プロピル、ブチル及びペンチルから選択され；Ｒ１はメチル、エチル、プロピル、ブチル、イソブチル、ペンチル、ヘキシル、ヘプチル、オクチル、ノニル、デシル、カルボン酸及びＨ−Ｈ−Ｉ、Ｒ−Ｓ−Ｓ及びＥ−Ｐ−Ｉから選択される３残基長までの伸長ペプチドから選択され；Ｒ２はメチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシル、ヘプチル、オクチル、ノニル、デシル及びカルボン酸から選択され；そしてＸはＣＯＯＹ又はＣＯＮＨ２から選択される）の化合物は、ＦａｓＲタンパク質に対する有効な結合体であって、Ｆａｓ誘導性アポトーシスを阻害する際に有効なＦａｓＬアンタゴニストとして作用することがわかってきた。アミノ酸残基、Ｒ１及びＲ２及びＸを変換することで、特に、ペプチドミメティック誘導体の形状を薬理学的に最適化するための有力な手段を提示する。
【０１０６】
刊行物、特許出願及び特許を含む、本明細書中で引用された全ての参考文献は、参照により、各参考文献が個々に、及び明確に参照によって組み込まれることが示され、且つ本明細書中その全体が提示されているのと同程度に、本明細書に組み込まれる。
【０１０７】
本発明（特に、下記の特許請求の範囲の文脈中）の記載の文脈における「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」なる用語並びに同様の指示対象の使用は、本明細書中に特に示されない限り、又は文脈で明確に否定されない限り、単数形及び複数形の両方を含有するものと解釈されるべきである。「ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ」、「ｈａｖｉｎｇ」、「ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ」及び「ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ」なる用語は、他に示されない限り、オープンエンドな用語（即ち、「含むが、限定されない」ことを意味する）と解されるべきである。本明細書中に他に示されない限り、本明細書中の数値範囲の記載は、該範囲内に収まるそれぞれ独立した値を個々に説明する簡略な方法として役立つことを意図しているにすぎず、それぞれの別々の値は本明細書中に個別に記載されているのと同程度に本明細書中に組み込まれる。本明細書中に他に示されない限り、又は文脈で明確に否定されない限り、本明細書中に記載される全ての方法は、任意の適切な順に行うことができる。本明細書中に特に示されない限り、本明細書中に提供される任意の及び全ての例、又は例示用語（例、「ｓｕｃｈ ａｓ」）の使用は、単に本発明をより明確に説明することを意図するにすぎず、発明の範囲に限定を加えることはない。本明細書中のいずれの用語も、特許請求されていない要素が本発明の実施に必須であることを示すと解釈されるべきではない。
【０１０８】
本発明の好ましい実施形態は本明細書に記載されており、発明者が知り得る本発明を実施するための最良の形態を含む。それらの好ましい実施形態の変更形態は、前述の記載に接した当業者であれば明らかであるであろう。本発明者等は、当業者がそのような変更形態を必要に応じて採用することを予期し、本明細書中に明確に記載された以外の方法で、本発明が実施されることを意図する。従って、本発明は、適切な法律によって許容される、本明細書添付の特許請求の範囲に記載の全ての改変形態及び均等形態を含む。更に、本明細書中で特に示されない限り、又は文脈により明確に否定されない限り、全ての考え得る変更形態における上記のいかなる組み合わせをも、本発明に包含される。
【図面の簡単な説明】
【０１０９】
【図１】図面は、本明細書中で検討したタンパク質の配列アラインメントが記載される。
【技術分野】
【０００１】
関連出願への相互参照
本特許出願は２００５年１２月１日に出願した米国特許仮出願番号６０／７４１，１２５及び２００５年１２月１６日に出願した米国特許仮出願番号６０／７５０，８８８の利益を請求し、これらは、参照により全体が組み込まれるものである。
【０００２】
連邦政府による資金提供を受けた研究開発の記載
本発明は、国立健康研究所によってうけた補助金番号ＧＭ０５９３４８−０５Ａｌの下で部分的に政府の資金提供によってなされた。政府は本発明における一定の権利を有し得る。
【背景技術】
【０００３】
発明の背景
アポトーシス（プログラム細胞死）は全ての多細胞生物の発生及び恒常性において中心的な役割を果たす。アポトーシス経路の改変は、発生上の障害、癌、自己免疫疾患と同様に神経変性障害を含む、多くのタイプのヒトの病状に関連している。アポトーシスは個々の細胞死の過程を統率する厳密に制御された経路であり、外因的にも内因的にも開始され得る。前者はミトコンドリアによって誘発される細胞内機構であり、一方後者は細胞膜での「細胞死受容体」と、それに対応するリガンドとの相互作用に関連している。
【０００４】
従って、プログラム細胞死経路は治療剤の開発のための魅力的な標的となった。特に、観念的には細胞を殺すほうが生かしていくよりも容易なので、従来の放射線及び化学療法等のアポトーシス促進剤を用いた抗癌療法に注目が集まっていた。これらの治療は一般的にミトコンドリア介在性のアポトーシス経路の活性化を誘発すると信じられている。しかしながら、これらの治療法は分子的特異性を欠いており、より特異的な分子標的が必要である。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
発明の概要
本発明はアポトーシスを阻害するか、さもなくば制御するためのペプチド、ペプチドミメティック及びそれらの使用方法を提供する。本発明により、本発明化合物を含む組成物も提供される。そのような組成物を利用したアポトーシスの阻害方法及びＴＮＦＲ関連状態及び疾患の治療方法も、本明細書中に同様に提供される。
【０００６】
これらの局面及び追加的な発明の特徴は、以下の詳細な説明を読む際及び添付の図面を見る際に明らかとなるであろう。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
詳細な記載
第一の局面において、本発明はペプチド及びペプチドミメティックを提供する。本発明の一つの実施形態においては、ペプチド又はペプチドミメティックは、一般式Ｉ
【０００８】
【化１】
【０００９】
（式中、Ｚ１及びＺ２はＣ＝Ｏ及びＣＨ２から独立して選択され；Ｒ１はＨ、（炭素原子数１〜１０個等の）低級アルキル、置換されていてもよい低級アルキル、カルボン酸、並びにＨ−Ｈ−Ｉ、Ｒ−Ｓ−Ｓ及びＥ−Ｐ−Ｉから選択される３残基長までの伸長ペプチドから選択され；Ｒ２はＨ、（炭素原子数１〜１０個等の）低級アルキル、置換されていてもよい低級アルキル、及びカルボン酸から選択され；Ｒ３及びＲ４はＨであり、そしてＸはＣＯＯＨ及びＣＯＮＨ２から選択される）
を含む。
【００１０】
別の実施形態においては、本発明は、式ＩＶを有するテトラペプチドのペプチドミメティックを含んでなる化合物を提供する。
【００１１】
別の実施形態においては、本発明は、配列Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−Ｘ４
（配列中、Ｘｌは、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｆ、Ｗ、Ｄ及びＥから選択されるアミノ酸；
Ｘ２は、Ｌ、Ａ、Ｖ、Ｉ、Ｇ、Ｆ及びＴから選択されるアミノ酸；
Ｘ３は、Ｇ、Ａ、Ｌ、Ｉ及びＡから選択されるアミノ酸；そして
Ｘ４は、Ａ、Ｇ、Ｌ、Ｉ及びＴから選択されるアミノ酸である）が提供される
のペプチドのペプチドミメティックを提供する。
【００１２】
別の実施形態においては、本発明は、式Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−Ｘ４
（式中、Ｘｌは、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｆ、Ｗ、Ｄ又はＥから選択されるアミノ酸、或いはＹ、Ｓ、Ｔ、Ｆ、Ｗ、Ｄ又はＥから選択されるアミノ酸のミメティック；
Ｘ２は、Ｌ、Ａ、Ｖ、Ｉ、Ｇ、Ｆ又はＴから選択されるアミノ酸、或いはＬ、Ａ、Ｖ、Ｉ、Ｇ、Ｆ又はＴから選択されるアミノ酸のミメティック；
Ｘ３は、Ｇ、Ａ、Ｌ、Ｉ又はＡから選択されるアミノ酸、或いはＧ、Ａ、Ｌ、Ｉ又はＡから選択されるアミノ酸のミメティック；そして
Ｘ４は、Ａ、Ｇ、Ｌ、Ｉ又はＴ、或いはＡ、Ｇ、Ｌ、Ｉ又はＴから選択されるアミノ酸のミメティックである）
を含む化合物を提供する。
【００１３】
別の実施形態においては、本発明は、テトラペプチドのペプチドミメティックであって、該テトラペプチドが、配列Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−Ｘ４
（配列中、Ｘｌは、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｆ、Ｗ、Ｄ及びＥから選択されるアミノ酸；
Ｘ２は、Ｌ、Ａ、Ｖ、Ｉ、Ｇ、Ｆ及びＴから選択されるアミノ酸；
Ｘ３は、Ｇ、Ａ、Ｌ、Ｉ及びＡから選択されるアミノ酸；そして
Ｘ４は、Ａ、Ｇ、Ｌ、Ｉ及びＴから選択されるアミノ酸である）
を含む、テトラペプチドのペプチドミメティックを提供する。
【００１４】
別の実施形態においては、本発明は、式Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７−Ｘ８
（式中、Ｘｌは、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｆ、Ｗ、Ｄ又はＥから選択されるアミノ酸、或いはＹ、Ｓ、Ｔ、Ｆ、Ｗ、Ｄ又はＥから選択されるアミノ酸のミメティック；
Ｘ２は、スペーサー；
Ｘ３は、Ｌ、Ａ、Ｖ、Ｉ、Ｇ、Ｆ又はＴから選択されるアミノ酸、或いはＬ、Ａ、Ｖ、Ｉ、Ｇ、Ｆ又はＴから選択されるアミノ酸のミメティック；
Ｘ４は、スペーサー；
Ｘ５は、Ｇ、Ａ、Ｌ、Ｉ又はＡから選択されるアミノ酸、或いはＧ、Ａ、Ｌ、Ｉ又はＡから選択されるアミノ酸のミメティック；
Ｘ６は、スペーサー；
Ｘ７は、Ａ、Ｇ、Ｌ、Ｉ又はＴから選択されるアミノ酸、或いはＡ、Ｇ、Ｌ、Ｉ又はＴから選択されるアミノ酸のミメティック；そして
Ｘ８は、スペーサーである）
を含む化合物を提供する。
【００１５】
任意で、該式はＸ０を、式Ｘ０−Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７−Ｘ８
（式中、Ｘｌ〜Ｘ８は前に定義した通りであり、Ｘ０は、一般式Ａｌ−Ａ２−Ａ４［式中、Ａ１は、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｅ及びＤから選択される荷電アミノ酸、或いはＨ、Ｋ、Ｒ、Ｅ及びＤのミメティック；Ａ２は、Ｓ、Ａ及びＴから選択されるアミノ酸、或いはＳ、Ａ及びＴのミメティック；そしてＡ２は、Ｓ、Ａ、Ｔ、Ｉ及びＶから選択されるアミノ酸、或いはＳ、Ａ、Ｔ、Ｉ及びＶのミメティックである］のペプチドである）
が含んでなるように、含んでいてもよい。
【００１６】
別の実施形態においては、本発明は、式Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７−Ｘ８
（ここで、Ｘ１は、スペーサー；
Ｘ２は、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｆ、Ｗ、Ｄ又はＥから選択されるアミノ酸、或いはＹ、Ｓ、Ｔ、Ｆ、Ｗ、Ｄ又はＥから選択されるアミノ酸のミメティック；
Ｘ３は、スペーサー；
Ｘ４は、Ｌ、Ａ、Ｖ、Ｉ、Ｇ、Ｆ又はＴから選択されるアミノ酸、或いはＬ、Ａ、Ｖ、Ｉ、Ｇ、Ｆ又はＴから選択されるアミノ酸のミメティック；
Ｘ５は、スペーサー；
Ｘ６は、Ｇ、Ａ、Ｌ、Ｉ又はＡから選択されるアミノ酸、或いはＧ、Ａ、Ｌ、Ｉ又はＡから選択されるアミノ酸のミメティック；
Ｘ７は、スペーサー；そして
Ｘ８は、Ａ、Ｇ、Ｌ、Ｉ又はＴから選択されるアミノ酸、或いはＡ、Ｇ、Ｌ、Ｉ又はＴから選択されるアミノ酸のミメティック
である）
を含む化合物を提供する。
【００１７】
別の実施形態においては、本発明は、式ＩＩ
【００１８】
【化２】
【００１９】
（式中、残基１はＹ、Ｓ、Ｔ、Ｄ及びＥから選択されるアミノ酸；
残基２はＡ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｍから選択されるアミノ酸及び（炭素原子数１〜５個等の）低級アルキル、置換されていてもよい低級アルキル；
Ｒ１及びＲ２はＨ、（の炭素原子数１〜１０個等の）低級アルキル、置換されていてもよい低級アルキル及びカルボン酸から独立して選択され；そして
ＸはＣＯＯＨ又はＣＯＮＨ２から選択される）
を含む、化合物を提供する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２０】
本発明化合物のいくつかの例としては、ＹＬＧＡ、ＹＬＧＧ、ＹＬＧＬ、ＹＬＧＩ、ＹＬＧＴ、ＹＬＡＡ、ＹＬＬＡ、ＹＬ１Ａ、Ｙ１ｄＡＡ、ＹＡＧＡ、ＹＶＧＡ、ＹＩＧＡ、ＳＬＧＡ、ＴＬＧＡ、ＦＬＧＡ、ＷＬＧＡ、ＤＬＧＡ ＥＬＧＡ、ＹＬＧＡＶＦ、ＳＹＬＧＡ、ＳＳＹＬＧＡ、ＲＳＳＹＬＧＡ、ＲＳＳＹＬＧＡＶＦ、ＹＬＧＧＶＲ、ＩＹＬＧＧ、ＰＩＹＬＧＧ、ＥＰＩＹＬＧＧ、ＥＰＩＹＬＧＧＶＦ、ＨＨＩＹＬＧＡＴＮＹＩＹ、ＨＩＹＬＧＡＴＮＹＩＹ、ＩＹＬＧＡＴＮＹＩＹ、ＹＬＧＡＴＮＹＩＹ、ＨＨＩＹＬＧＡＴＮＹＩ、ＨＨＩＹＬＧＡＴＮＹ、ＨＨＩＹＬＧＡＴＮ、ＨＨＩＹＬＧＡＴ、ＨＨＩＹＬＧＡ及びそれらのペプチドミメティックが挙げられる。
【００２１】
１つ以上の不斉中心が発明化合物のアミノ酸、人工アミノ酸又は原子に存在する場合、幾つかのエナンチオマー、Ｄ又はＬ、そしてより一般的にはＲ又はＳ立体配置、或いはジアステレオ異性体が任意で用いられてもよい。
【００２２】
本発明化合物は、例えば、液相合成又は固相ペプチド合成（ＳＰＰＳ）等のいくつかの好適なペプチド合成技術によって調製されてもよい。そのような技術は当技術分野において周知である。好ましいペプチド合成法はＳＰＳＳであり、それは天然及び非天然に産出するアミノ酸を含むペプチドの合成を可能にする。ＳＰＳＳにおいては、小ビーズが、ペプチド鎖が構築され得るリンカーで処理される。合成ビーズはトリフルオロ酢酸等の試薬によって切断されるまで、ペプチドとの強い結合を保持する。ビーズは創出されたペプチド鎖がフィルター材料を通り抜けることのない合成環境を創出するが、その一方で、それらを創出するために用いられた試薬は通り抜けるであろう。最も一般的なＳＰＳＳの２つの形態は（フルオレニル−メトキシ−カルボニル保護基を用いる）Ｆｍｏｃ及び（ｔｅｒｔ−ブチルオキシ−カルボニル保護基を用いる）Ｂｍｏｃである。両技術のために利用できる自動化合成装置があるか、又はその技術が手動で実行されてもよい。
【００２３】
述べたように、いくつかの実施形態においては、本発明化合物はペプチドミメティックである。ペプチドミメティックは選択されたペプチドの３次元構造に基づく３次元構造（即ち、「中核ペプチドモチーフ」）を持つ合成化合物である。ペプチドモチーフは、ミメティック化合物の結合活性が、実質的に低減されておらず且つしばしばミメティックがモデルとされた天然ペプチドの活性と同じか又はそれよりも大きい、望ましい生物学的活性（例、ＦａｓＲ及び／又はＴＮＦＲに結合する）を伴うミメティック化合物を提供する。ペプチドミメティック化合物は、増大した細胞透過性、より大きな親和性及び／又は親和力並びに長時間の生物学的半減期等の、それらの治療応用を促進する追加の特徴を有し得る。
【００２４】
用語「ミメティック」、「ペプチドミメティック」、「修飾ペプチド」及び「ペプチドミメティック」は本明細書中、相互に置換可能に用いられ、一般的に、選択された天然ペプチド又はタンパク質機能ドメインの３次結合構造又は活性を模倣する、ペプチド、部分ペプチド又は非ペプチド性分子のことをいう。この化合物の２量体は、被験分子の２つの分離した、異なる領域における３次構造又は活性を模倣する分子である。これらのペプチドミメティックは化学修飾されたアミノ酸又はペプチドと同様に低分子薬物ミメティック等の非ペプチド性薬剤を含み得る。
【００２５】
ミメティック、より具体的には、ペプチドミメティックの設計戦略は該当する技術分野において容易に利用できる（例えば、Ｒｉｐｋａ＆Ｒｉｃｈ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ． ２，４４１−４５２， １９９８；Ｈｒｕｂｙ ｅｔ ａｌ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ． １，１１４−１１９， １９９７；Ｈｒｕｂｙ＆Ｂａｌｓｅ，Ｃｕｒｒ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ， ９，９４５−９７０，２０００を参照）。一つのクラスのミメティックは部分的又は完全な非ペプチドである骨格を模倣するが、原子ごとにペプチド骨格を模倣し、且つ天然のアミノ酸残基の側基の官能基を同様に模倣した側基を含む。いくつかのタイプの化学結合、例えば、エステル、チオエステル、チオアミド、レトロアミド、還元カルボニル、ジメチレン及びケトメチレン結合は、プロテアーゼ耐性のペプチドミメティックの構築において一般的に役立つペプチド結合の代用物であることが当技術において既知である。別のクラスのペプチドミメティックは、別のペプチド又はタンパク質に結合するが、必ずしも天然ペプチドの構造的ミメティックではない低分子量非ペプチド性分子を含む。更に別のクラスのペプチドミメティックはコンビナトリアルケミストリー（組み合わせ化学）及び大量化学ライブラリーが製造されたことから生じた。これらは一般的に、構造的には天然ペプチドと関係ないが、元来のペプチドの「形態的」ミメティックとして役立つ、非ペプチド性の足場上に位置する必要な官能基を有する新規の鋳型を含む（Ｒｉｐｋａ＆Ｒｉｃｈ，１９９８，上記を参照）。
【００２６】
ペプチドミメティックを製造するために、本発明の発明化合物中のペプチドは修飾され得、２０個の遺伝的にコードされたアミノ酸の１つ以上の天然に産する側鎖又は他の側鎖を伴ったＤ型アミノ酸を、例えばアルキル、低級アルキル、環状４、５、６〜７員のアルキル、アミド、アミド低級アルキル、アミドジ（低級アルキル）、低級アルコキシ、ヒドロキシ、カルボキシ及びそれらの低級エステル誘導体等の基と置き換えることによって、並びに４、５、６〜７員の複素環式分子と置き換えることによってペプチドミメティックを製造する。そのような修飾はペプチド合成後又はペプチド合成前に発生し得る（即ち、修飾アミノ酸を用いるポリペプチド合成を含む）。例えば、プロリンアナログが作られ得るが、そこではプロリン残基の環サイズが５員から４、６又は７員に変換される。環状基は飽和又は不飽和であり得るが、不飽和の場合は、芳香族又は非芳香族であり得る。複素環基は１つ以上の窒素、酸素及び／又は硫黄へテロ原子を含み得る。そのような基の例としては、フラザニル、イミダゾリジニル、イミダゾリル、イミダゾリニル、イソチアゾリル、イソキサゾリル、モルホリニル（例、モルホリノ）、オキサゾリル、ピペラジニル（例、１−ピペラジニル）、ピペリジル（例、１−ピペリジル、ピペリジノ）、ピラニル、ピラジニル、ピラゾリジニル、ピラゾリニル、ピラゾリル、ピリダジニル、ピリジル、ピリミジニル、ピロリジニル（例、１−ピロリジニル）、ピロリニル、ピロリル、チアジアゾリル、チアゾリル、チエニル、チオモルホリニル（例、チオモルホリノ）及びトリアゾリルが挙げられる。これらの複素環基は、飽和又は不飽和であり得る。基が置換された所では、置換基はアルキル、アルコキシ、ハロゲン、酸素或いは置換又は無置換のフェニル基であり得る。ペプチドミメティックは、リン酸化、スルホン化、ビオチン化或いは他の部分の付加又は除去によって化学的に修飾されてきたアミノ酸残基を有していてもよい。
【００２７】
用語「ヘテロ原子」とは、窒素、酸素、硫黄、他の原子又は窒素、硫黄及び他の原子が任意で酸化されてもよく、そして窒素が任意で４級化されてもよい基のことをいう。満たされていない原子価を有するヘテロ原子はいずれも、原子価を満たすのに十分な水素原子を有すると推定される。いくつかの実施形態においては、例えば、ヘテロ原子が窒素であり、窒素原子の原子価を満たすために水素又は他の基を含んでおり、この場合別のヘテロ原子、例えば酸素による、類似構造における窒素の置換によって、以前に窒素に結合していた水素又は基は無くなるであろう。用語へテロ原子は、例えば、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｎ−、−Ｎ（Ｈ）−及び−Ｎ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）を含んでもよいが、これらに限定されない。
【００２８】
用語「アルキル」とは、約１個から約３０個の炭素原子（及びその中の炭素原子の範囲及び特定の数の組み合わせ及びそれらの一部の組み合わせの全て）を持つ飽和の直鎖状、分枝鎖状又は環状の炭化水素のことをいう。低級アルキル基は、１〜１０個の炭素原子、好適には１〜５個の炭素原子の基のことであって、その中の炭素原子数の範囲又は特定数の組み合わせ及びそれらの一部の組み合わせの全てを持つ、飽和の直鎖状、分枝鎖状又は環式炭化水素をいう。アルキル基には、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｔ−ブチル、ｎ−ペンチル、シクロプロピル、メチルシクロプロピル、シクロペンチル、イソペンチル、ネオペンチル、ｎ−ヘキシル、イソヘキシル、シクロヘキシル、シクロオクチル、アダマンチル、３−メチルペンチル、２，２−ジメチルブチル及び２，３−ジメチルブチルが挙げられるが、これらに限定されない。
【００２９】
用語「置換アルキル」とは、１から５個の置換基を有する約１から約３０個の炭素原子（及びその中の炭素原子の範囲及び特定の数の組み合わせ及びそれらの一部の組み合わせの全て）を持つ、飽和の直鎖状、分枝鎖状又は環状の炭化水素をいう。低級置換アルキル基とは、１から５個の置換基を持つ１〜１０個の炭素原子、好適には１〜５個の炭素原子（及びその中の炭素原子の範囲及び特定の数の組み合わせ及びそれらの一部の組み合わせの全て）の飽和の直鎖状、分枝鎖状又は環状の炭化水素をいう。置換アルキル基及び低級置換アルキル基は１から５個の置換基を有していてもよく、これらの置換基としては、アルコキシ、置換アルコキシ、アシルアミノ、チオカルボニルアミノ、アシロキシ、アミノ、アミジノ、アルキルアミジノ、アミダルキル（−ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２又は−ＣＨ２ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２等）、チオアミジノ、アシルアルキルアミノ、シアノ、ハロゲン化又は部分的にハロゲン化したアルキル基（−ＣＦ３、−ＣＦ２ＣＦ３、−ＣＨ２ＣＦ２Ｃｌ等を含むがこれらに限定されない）を与えるための、ハロゲン原子（Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ）、ヒドロキシ、ニトロ、カルボキシル、カルボキシルアルキル、カルボキシル複素環、カルボキシル置換複素環、シクロアルキル、グアニジノ、ヘテロアリール、アリール、複素環、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ又は任意で置換された種類の前記基のいずれかが挙げられるが、これらに限定されない。
【００３０】
本明細書中で使用するとき、用語「アルキレン基」としては、１から３０個の炭素原子を含有する、２官能基性の飽和の分枝鎖状又は非分枝鎖状の炭化水素基への参照が挙げられ、例としては、メチレン（−ＣＨ２−）、エチレン（−ＣＨ２ＣＨ２−）、プロピレン（−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−）、２−メチルプロピレン（−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２−）、へキシレン（−（ＣＨ２）６−）等が挙げられる。低級アルキレンとしては、１〜１０個の炭素原子、好適には１〜５個の炭素原子のアルキレン基が挙げられる。
【００３１】
置換アルキレン基としては、１〜３０個の炭素原子を持ち、１から５個の置換基を持つ２官能基性の飽和の分枝鎖状又は非分枝鎖状のアルキレン基への参照が挙げられる。低置換アルキレン基とは、１〜１０個の炭素原子、好適には１〜５個の炭素原子を持ち、更に１から５個の置換基を持つ、置換アルキレン基群のことをいう。置換基としてはアルキル基における置換基が挙げられるが、これらに限定されない。
【００３２】
本明細書中で使用するとき、用語「アルケニル基」とは、エテニル、ｎ−プロペニル、イソプロペニル、ｎ−ブテニル、イソブテニル、ｔ−ブテニル、オクテニル、デセニル、テトラデセニル、ヘキサデセニル、エイコセニル、テトラコセニル等の、少なくとも１つの炭素−炭素二重結合を含有する２〜３０個の炭素原子の分枝鎖状環状炭化水素又は非分枝鎖状炭化水素基をいう。用語低級アルケニルとしては、少なくとも１つの炭素−炭素二重結合を含有する２〜１０個の炭素原子、好適には２〜５個の炭素原子、のアルケニル基が挙げられる。１つ以上の炭素−炭素二重結合は、独立してシス又はトランス配置を持っていてもよい。置換アルケニル基は、１から５個の置換基を有するアルケニル基又は低級アルケニル基をいう。該置換基は、アルキル基の置換基を含み得るが、それらに限定されない
【００３３】
用語「アルケニレン基」は２から３０個の炭素原子及び少なくとも１つの炭素−炭素二重結合を含有する、２官能基性の分枝鎖状又は非分枝鎖状の炭化水素基をいう。「低級アルケニレン」としては少なくとも１つの炭素−炭素二重結合を含有する２〜１０個の炭素原子、好適には２〜５個の炭素原子、のアルケニレン基が挙げられる。置換アルケニレン基は、１から５個の置換基を有するアルケニレン基又は低級アルケニル基をいう。該置換基は、アルキル基の置換基を含み得るが、それらに限定されない。
【００３４】
用語「アルキニル基」とは、２〜１２個の炭素原子及び少なくとも１つの三重結合を持つ直鎖状又は分枝鎖状炭化水素基をいい、幾つかの実施形態としては１つの三重結合を有する２〜６個の炭素原子のアルキニル基が挙げられる。置換アルキニルは、置換アルキル基に関して定義されたような１、２又は３つの置換基を含むであろう。アルキニレンとしては、２から１２個の炭素原子及び少なくとも１つの炭素−炭素三重結合を含有する２官能基性の分枝鎖状又は非分枝鎖状の炭化水素鎖への参照が挙げられる；ある実施形態では１つの三重結合を伴う２〜６個の炭素原子のアルキニレン基が挙げられる。置換アルキニレンは、置換アルキル基に関して定義されたような１、２又は３つの置換基を含むであろう。
【００３５】
本明細書で使用するとき、ハロ又はハロゲンは、Ｉ、Ｂｒ、Ｃｌ又はＦ等のあらゆるハロゲンのことをいう。本明細書中で使用するとき、「シアノ」は−Ｃ＝Ｎ基のことをいう。
【００３６】
用語「アリール基」とは、置換されていてもよい、約５から約１４個の炭素原子（及びその中の炭素原子の範囲及び特定の数の組み合わせ及びそれらの一部の組み合わせの全て）を有する、単環式又は二環式芳香族基のことをいうが、これは、約６から１０個の炭素原子であることが好ましい。非制限例のアリール基としては、例えばフェニル及びナフチルが挙げられる。置換アリール基は、置換アルキル基に関して定義されたような１つ以上の置換基を含むであろう。
【００３７】
アラルキル基は、アリール置換基を有するアルキル基であって、約６から約２０個の炭素原子（及びその中の炭素原子の範囲及び特定の数の組み合わせ及びそれらの一部の組み合わせの全て）を有するアルキル基をいうが、これは約６から１２個の炭素原子であることが好ましい。アラルキル基は置換されていてもよい。非制限の例としては、例えば、ベンジル、ナフチルメチル、ジフェニルメチル、トリフェニルメチル、フェニルエチル及びジフェニルエチルが挙げられる。置換アリールアルキル基は、置換アルキル基に関して定義されたような１つ以上の置換基をアリール又はアルキル基上に含むであろう。
【００３８】
「シクロアルキルアリール基」は、アリール基に縮合したシクロアルキル基のことをいい、独立して置換されるアルキルシクロアルキルアリールの全ての組み合わせを含み、シクロアルキルとアリール基は２原子を共有している。化合物において用いられた、縮合シクロアルキルアリール基の例としては、例えば、１−インダニル、２−インダニル及び１−（１，２，３，４−テトラヒドロナフチル）等が挙げられ得る。テトラヒドロナフチルは、より詳しくは、独立に置換されたアルキルテトラヒドロナフチルの全ての組み合わせを含む、縮合した多環式炭化水素に由来した１価の基をいう。これらの基は構造（ＩＩＩ）中（Ｃ１）又は同等に（Ｃ４）に、或いは構造（ＩＩＩａ）中、標識された位置（Ｃ２）及び同等に（Ｃ３）に連結点を有してもよい。
テトラヒドロナフタレン及びそのアルキル置換誘導体中の不斉炭素原子Ｃ１−４は（Ｒ）又は（Ｓ）のいずれかの立体配置を有してもよい。
【００３９】
【化３】
【００４０】
「シクロアルキル基」としては、より詳しくは、それらの構造において１つ以上の環から成り、且つ約３から約１４個の炭素原子（及びその中の炭素原子の範囲及び特定の数の組み合わせ及びそれらの一部の組み合わせの全て）を持つ１価の飽和炭素環式のアルキル基への参照が挙げられるが、これは約３から約７個の炭素原子であることが好ましい。多環構造は架橋又は融合された環構造であってもよい。環は１つ以上のアルキル基の置換基で置換されていてもよい。シクロアルキル基の例としては、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロオクチル及びアダマンチルが挙げられるが、これらに限定されない。置換シクロアルキル基は、置換アルキル基に関して定義されたように１つ以上の置換基を含むであろう。
【００４１】
「シクロアルキルアルキル基」とは、より詳しくは、シクロアルキル置換基を有し、且つ約４から約２０個の炭素原子（及びその中の炭素原子の範囲及び特定の数の組み合わせ及びそれらの一部の組み合わせの全て）を有するアルキル基のことをいうが、約６から約１２個の炭素原子が好ましく、そしてメチル−シクロプロピル、メチルシクロヘキシル、イソプロピルシクロヘキシル及びブチル−シクロヘキシル基が挙げられ得るが、これらに限定されない。シクロアルキルアルキル基は、１つ以上のアルキル基の置換基で置換されていてもよく、このような基としては、ヒドロキシ、シアノ、アルキル、アルコキシ、チオアルキル、ハロ、ハロアルキル、ヒドロキシアルキル、ニトロ、アミノ、アルキルアミノ及びジアルキルアミノが挙げられるが、これらに限定されない。
【００４２】
用語「アシル」は、上記したような、１つ以上のカルボニル−Ｃ（＝Ｏ）−基が結合した、アルキル、置換アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、アリール、ヘテロアリール又はヘテロシクリル基であって、式−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ、（式中、Ｒは置換アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、アリール、ヘテロアリール又はヘテロシクリル基を示す）を与える基のことをいう。用語アシルが他の基とともに、アシルアミノのように用いられる場合、これは２番目の名前の基に連結したカルボニル基｛−Ｃ（＝Ｏ）｝のことをいう。従って、アシルアミノ又はカルバモイルは−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２のことをいい、アシルアルキルアミノは−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ’Ｒ”等の基をいうことができる（式中、Ｒ’及びＲ”はＨ又はアルキルであり得る）。アミドアルキルは−ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２、−ＣＨ２ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２）等の基、より一般的には−（ＣＨ２）ＰＣ（Ｏ）ＮＨ２等の基のことをいう。カルボキシは基−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨをいい、カルボキシアルキルとは−（ＣＨ２）ｐＣ（＝Ｏ）ＯＨ等の基のことをいい、アルキルカルボキシアルキルとは（−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−（アルキル））等の基のことをいい、そしてアルコキシカルボニル又はアシルアルコキシとは（−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−（アルキル））基のことをいう。ここで式中、アルキルは前の定義と同様である。本明細書中、アロイル（ａｒｙｏｙｌ）又はアシルアリールは（−Ｃ（＝Ｏ）（アリール））基のことをいう。式中、アリールは前の定義と同様である。アロイル基の例としては、ベンゾイル及びナフトイルが挙げられる。アセチルはＣＨ３Ｃ（＝Ｏ）−基をいう。ホルミルはＨＣ（＝Ｏ）−基をいう。上記の基においてｐは独立に整数０、１、２又は３であり得る。
【００４３】
「アリールオキシ基」とは、置換されていてもよい、単環又は二環式芳香族基のことをいい、約５から約１４個の炭素原子と（アリール−Ｏ−）基群（式中、アリールは前の定義と同様である）を持つ基をいう。そのようなアリールオキシ基としては、式（ＩＶ）の基によって示されたものが挙げられるが、これらに限定されない。アリールオキシ基中のアリール環上の任意の置換基としては、水素、アルキル、ハロゲン、ヒドロキシ、アルコキシ、アルコキシカルボニル又は他の置換基が挙げられるが、これらに限定されない。本発明のＩＡＰ結合化合物の実施形態としてはピロリジン環に連結したフェノキシ基のようなアリールオキシ基を挙げることができる。
【００４４】
用語「アルコキシ」及び「アルコキシル」は置換されていてもよい（アルキル−Ｏ−）基のことをいい、式中、アルキルは前の定義と同様である。アルコキシ基の例としては、メトキシ、エトキシ、ｎ−プロポキシ、ｉ−プロポキシ、ｎ−ブトキシ、シクロプロピル−メトキシ及びヘプトキシが挙げられる。アルコキシ基は、アルキルＯ−基中の、置換されていてもよいアルキルも含み得る。アルコキシは、以前に定義され、式（Ｖ）の非制限基によって示されたような、置換されていてもよいアリール基を含み得る。「低級アルコキシ」基は、１から５個の炭素原子を含有する置換されていてもよいアルコキシ基のことをいう。「ポリエーテル」はポリエチレングリコール又はポリプロピレングリコール等の複数のエーテル結合を保有する化合物又は部分のことをいうが、これらに限定されない。「ポリアルキルエーテル」は複数のエーテル結合で相互連結されたか、そうでなければ複数のエーテル結合を保有するアルキルのことをいう。「アリールアルキルオキシ」はアリールアルキル−Ｏ-基を意味し、アリールアルキル基は前記と同様である。アリールアルキルオキシ基の例としては、ベンジルオキシ（Ｃ６Ｈ５ＣＨ２Ｏ−）基（ＢｎＯ−）、或いは１−又は２−ナフタレンメトキシが挙げられる。ベンジルオキシ基中のアリール環上の任意の置換基としては、水素、アルキル、ハロゲン、ヒドロキシ、アルコキシ及びアルコキシカルボニル又はアルキル基に関して定義されたような他の置換基を含んでもよい。
【００４５】
【化４】
【００４６】
「アリールアミノ基」は約５から約１４個の炭素原子及び（−ＮＨ（アリール））基群を持つ、置換されていてもよい単環又は二環式芳香族基のことをいい、式中、アリールは、以前にアルキルに関して定義されたように、置換されていてもよい。アリールアミノ基中のアリール環上の任意の置換基としては、水素、アルキル、ハロゲン、ヒドロキシ、アルコキシ及びアルコキシカルボニルが挙げられるが、これらに限定されない。アリールアミノ基の例は、アニリノ基である。アミノとは−ＮＨ２基のことをいい、そしてアルキルアミノとは、基（−ＮＨＲ’）群のことをいう。ここで式中、Ｒ’はＨ、アルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アラルキル又は以前定義されたような、これらの基が任意で置換された種類をいう。アルキルアミノ基群の例としては、メチルアミノ、エチルアミノ、ｎ−プロピルアミノ、ｉ−プロピルアミノ、ｎ−ブチルアミノ及びヘプチルアミノが挙げられる。ベンジルアミノ基とはアリールアミノ基Ｃ６Ｈ５ＣＨ２ＮＨ−のことをいい、該アリール基は水素、アルキル、ハロゲン、ヒドロキシ、アルコキシ及びアルコキシカルボニル又は他の置換基を含むがこれらに限定されない、任意の置換基を有してもよい。
【００４７】
「ジアルキルアミノ」としては、基（−ＮＲ’Ｒ”）への参照が挙げられ、式中、Ｒ’及びＲ”はそれぞれ独立してＨ、アルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アラルキル又は以前の定義と同様のこれらの基が置換されていてもよい種類であり得る。ジアルキルアミノ基の例としては、ジメチルアミノ、メチルエチルアミノ、ジエチルアミノ及びジ（１−メチルエチル）アミノ等が挙げられるが、これらに限定されない。
【００４８】
「ヘテロアリール」としては、環内で１、２又は３個の（窒素、酸素又は硫黄から選ばれる）ヘテロ原子を組み込む１つ以上の環を持つ１価の芳香族基への参照が挙げられる。これらのヘテロアリールは、１つ以上の他の置換基で置換された水素原子を任意で有していてもよい。これらのヘテロアリール基の例としては、置換されていてもよいベンゾフラン類、ベンゾ［ｂ］チオフェン１−オキシド、インドール類、２−又は３−チエニル類又はチオフェニル類、チアゾイル類、ピラジン類、ピリジン類が挙げられる。
【００４９】
用語へテロアルキル、ヘテロアルキレン、ヘテロアルケニル、ヘテロアルケニレン、ヘテロアルキニル及びヘテロアルキニレン（ｈｅｔｅｒｏａｌｋｙｎｌｅｎｅ）としては、アルキル、アルキレン、アルケニル、アルケニレン、アルキニル及びアルキニレン基への参照のことをいい、ここで、１つ以上の炭素原子は、原子の要求価を満たすために単価又は多価結合した窒素、硫黄、酸素又は１つ以上の水素を持つこれらの原子等（これらに限定されない）と交換又は置換される。そのような置換は、官能基を有する分子を形成するために用いられ得、官能基としては、アミン類、エーテル類及びスルフィド類が挙げられるが、これらに限定されない。ヘテロアルキニル基の非制限の例は、基−ＣＨ（Ｍｅ）ＯＣＨ２Ｃ＝ＣＨで示される。
【００５０】
「ヘテロシクロアルキル基」としては、１、２又は３個の（窒素、酸素又は硫黄から選ばれる）ヘテロ原子を組み込んだ１つ以上の環からなる１価の飽和炭素環式基への参照が挙げられ、これは１つ以上の置換基で任意で置換され得る。
【００５１】
「ヘテロシクロアルケニル」としては、単価の不飽和炭素環基への参照が挙げられ、該基は１つ以上の炭素−炭素二重結合を含む１つ以上の環からなり、ここで炭素原子は１つ以上の環内で１、２又は３つのヘテロ原子で交換又は置換されている。ヘテロ原子は窒素、酸素、又は硫黄から選択され、ヘテロシクロアルケニルは１つ以上の置換基で置換されていてもよい。
【００５２】
本発明の分子中で用いられる様々な基は、化学的部分又は他の置換基で置換された１つ以上の水素原子を持つことができる。置換基は、ハロ又はハロゲン（例、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ）、−ＣＦ３、−ＣＦ２ＣＦ３、−ＣＨ２ＣＦ３等のハロアルキル、チオアルキル、ニトロ、置換されていてもよいアルキル、シクロアルキル、アラルキル、アリール、ベンゾフラン類、インドール類、チエニル類、チオフェニル類、チアゾイル類、ピラジン類、ピリジン類、アルコキシピリジン等のヘテロアリール類、ヒドロキシ（−ＯＨ）、アルコキシ（−ＯＲ）、アリールオキシ、アルコキシへテロアリール、シアノ（−ＣＮ）、カルボニル−Ｃ（＝Ｏ）−、カルボキシ（−ＣＯＯＨ）及びカルボン酸塩；−（ＣＨ２）ＰＣ（＝Ｏ）ＯＨ、基又は基（ＣＨ２）ｐＣ（＝Ｏ）Ｏ（アルキル）及び−（ＣＨ２）ＰＣ（＝Ｏ）ＮＨ２（式中、ｐは独立して０、１、２又は３の整数である）；トシル、ブロシル又はメシル等のスルホン酸類（これらに限定されない）；スルホン、イミン又はオキシム基、−（Ｃ＝Ｏ）Ｏアルキル等の基、アミノカルボニル又はカルバモイル−（Ｃ＝Ｏ）ＮＨ２）、−Ｎ−置換アミノカルバモイル−（Ｃ＝Ｏ）ＮＨＲ”、アミノ、アルキルアミノ（−ＮＨＲ’）及びジアルキルアミノ（−ＮＨＲ’Ｒ”）が挙げられるが、これらに限定されない。前記アミノ及び関連する基に関連して、各部分Ｒ’又はＲ”は、独立してＨ、アルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アラルキル又は置換されていてもよいアルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アラアルキルを含み得る。
【００５３】
更なる局面においては、本発明は、本発明化合物及び組成物を細胞に投与することを含む、アポトーシスを阻害する方法を提供する。例えば、本発明の化合物はＦａｓＲ又はＴＮＦＲタンパク質に選択的に結合し、そしてＥＧ５０値がｎＭの範囲のＦａｓＬ存在下で細胞死を阻害できる。本方法はインビトロ又はインビボで細胞に用いることができる。しかしながら、インビボで用いられる場合は、医学的治療を受けているヒト被験者或いは獣医医療又は実験室での研究中である動物（例えば、イヌ、ネコ、ウマ、ウシ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、ニワトリ、サル、ウサギ、ラット、マウス等）において使用することができる。
【００５４】
医療的又は獣医療使用のために、本発明は治療有効量の本発明化合物をヒト又は被験動物（典型的には哺乳動物）に投与することを含む、Ｆａｓ又はＴＮＦＲ関連疾患を治療する方法を提供する。本発明の方法は、ＴＮＦＲタンパク質に関係した疾患及び状態を治療するために用いることができる。そのような疾患及び状態としては、敗血症、虚血、再灌流障害、急性及び慢性肝機能障害、癌、慢性炎症疾患及び自己免疫疾患を含むが、これらに限定されない、
【００５５】
本発明の方法によれば、ヒト又は被験動物に対し、本発明による化合物がＦａｓ又はＴＮＦＲ関連の疾患を治療するために効果的な量で、かつ効果的な場所に投与される。「投与すること」とは、治療薬と共に用いられるとき、それによって対象となる組織に治療薬が正の影響を与えるように、治療薬を対象組織中へ直接に又はその上に投与すること、或いは治療薬を患者に投与することを意味する。組成物を「投与すること」は経口、直腸、局所、経鼻、皮内、吸入、腹膜内又は非経口（即ち、皮下、静脈内、筋肉内又は注入）経路によって、他の公知の技法と組み合わせて達成されてもよい。
【００５６】
有効量とは、単独で又は更なる投与量とあわせて、望ましい応答を引き起こす製剤量である。これは、好ましくは疾患の進行を恒久的に停止させるか、或いは疾患の発生から生じる疾患又は状態の開始を遅らせるか、或いは疾患の発生から生じる疾患又は状態を予防することを含むが、単に疾患の進行を一時的に遅くすることに関与していてもよい。これは常法によりモニターできる。一般的に、活性化合物の投与量は１日当たり約０．０１ｍｇ／ｋｇから１０００ｍｇ／ｋｇである。５０から５００ｍｇ／ｋｇの範囲の投与量が、好ましくは静脈内、筋肉内、経口又は皮内への投与であって、１日当たり１又は数回の投与に好適であると期待される。
【００５７】
一般的に、臨床試験における日常の実験を、各治療薬及び各投与プロトコールに対する至適な治療効果のための特定範囲を最適化するのに役立てることができ、そして特定の被験者（体）への投与は、被験者（体）の状態及び初期投与への応答に依存して有効且つ安全な範囲内で調整されるであろう。しかしながら、最終的な投与プロトコールは、年齢、状態及び被験者（体）の大きさ、効能、治療の持続時間並びに治療される疾患の深刻度等の要因を考慮した担当臨床医の判断に従って調整されるであろう。例えば、本発明化合物の用量は、１ｍｇから２０００ｍｇ／日、好ましくは１〜１０００ｍｇ／日、より好ましくは５０〜６００ｍｇ／日、腫瘍の増殖を低下させるために２〜４回（好ましくは２回）に分けた量の経口投与であり得る。間欠治療法（例えば、３週間で１週間又は４週間で３週間）も用いられていてもよい。
【００５８】
投与された初期の量で対象における応答が不十分な場合においては、より多くの投与量（又は異なった、より局在化した送達経路によって効果のある、より多くの投与量）を、被験者（体）の耐容量が許す程度で用いてもよい。適切な全身の化合物レベルを実現するために、１日当たり複数の投薬が意図される。一般的には、最大投与量、即ち、適切な医療判定に従った安全な最大の投与量が用いられる。しかしながら、当業者は、被験者（体）が医療上の理由、心理学的な理由又は実際上他のいずれかの理由での少投与量又は耐容量を主張しうることを理解するだろう。
【００５９】
様々な投与経路が利用できる。選択された個々の様式は、当然に、選択された個々の化学療法薬、治療された状態の深刻度及び治療効果に必要な投与量に依存する。一般的に、本発明の方法は、医療上許容されるいかなる投与様式を用いて実施してもよく、これは、臨床的に許容不能な悪影響を引き起こすことなく、活性化合物の効果的なレベルを生み出すようなあらゆる様式を意味する。そのような投与様式は、経口、直腸、局所、経鼻、皮内、吸入、腹膜内又は非経口経路が挙げられるが、これらに限定されない。用語「非経口」としては、皮下、静脈内、筋肉内又は注入が挙げられる。静脈内又は筋肉内経路が本発明の目的に特に好適である。
【００６０】
本発明の化合物は医薬的に許容可能な担体を含んでもよい。本明細書で用いられるとき、用語「医薬的に許容可能な担体」は、１つ以上の相溶性のある固体又は液体の充填剤、希釈剤、他の賦形剤又はカプセル化物質を意味し、これらは、ヒト患者又は動物患者への投与に適している。用語「担体」は有機又は無機成分を意味し、これは天然又は合成のものであり、ここには、使用を促進するために活性成分が組み合わせられる。医薬組成物の構成成分はまた、望ましい医薬的効果に実質的に影響しないような方法で、本発明の分子と共に混合することもできるし、それぞれを混合することもできる。「医薬的に許容可能な」物質は、吐き気、めまい、発疹又は異常亢進等の望ましくない生理学的効果を生み出すことなく、被験者（体）に投与することができる。例えば、医薬的に許容可能な賦形剤を含んでなる治療用組成物にとっては、治療目的でヒト患者に投与した場合、免疫原性で無いことが望ましい。
【００６１】
医薬組成物は適切な緩衝剤を含有してもよく、そのような緩衝剤としては、塩の状態での酢酸；塩の状態でのクエン酸；塩の状態でのホウ酸；塩の状態でのリン酸が挙げられる。医薬組成物は、塩化ベンザルコニウム、クロロブタノール、パラベン及びチメロサール：等の好適な保存剤も含有していてもよい。
【００６２】
医薬組成物は、簡便には単位用量の形態で存在してもよく、製薬学の技術で周知のいずれかの方法によって調製されてもよい。全ての方法において、活性剤を１つ以上の副成分を構成する担体と合わせる工程が含まれる。一般的には、組成物は、活性化合物と、液体担体、細かく分けられた固体担体又はその両方とを一様且つ密接に混合することによって調製され、次いで、必要に応じて、生成物を成形する。
【００６３】
非経口投与に好適な組成物は、本発明化合物の無菌水溶液製剤を含むが、これは、受容者の血液と等張であることが好ましい。この水溶性製剤は、好適な分散又は湿潤剤及び懸濁剤を用いて既知の方法に従って製剤化されてもよい。無菌の注射用製剤は、非毒性の、非経口的に許容可能な希釈剤又は溶媒、例えば、１，３−ブタンジオール中の水溶液のような、無菌の注射可能な水溶液又は懸濁液であってもよい。水、リンゲル液及び等張塩化ナトリウム水溶液が、用いられてもよい許容可能なビヒクル及び溶媒である。加えて、無菌の固定油が、溶媒又は懸濁媒体として恒常的に利用される。この目的には、合成モノ−又はジ−グリセリドを含むいずれの無菌固定油が用いられてもよい。加えて、オレイン酸等の脂肪酸が注入物質の調製に用いられてもよい。経口、皮下、静脈内、筋肉内等の投与に好適な担体処方はＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ中に見出すことができ、本明細書中、参照によりその全体が組み込まれる。
【００６４】
本発明の送達システムは、本発明化合物の送達が治療されるべき部位の感作を引き起こす前に発生し、且つ十分な時間起こるような、持続放出型、遅延放出型又は徐放型の送達システムを含むように設計される。本発明化合物は、他の治療剤又は治療法とともに用いられてもよい。そのようなシステムによって本発明の化合物の繰り返し投与を避けることができるし、対象や内科医に対する利便性を増すことができる。そして本発明のある組成物に特に好適であってもよい。
【００６５】
多くのタイプの放出送達システムが利用可能であり、当業者に既知である。それらはポリ（ラクチド−グリコリド）、共ポリシュウ酸塩、ポリカプロラクトン類、ポリエステルアミド類、ポリオルトエステル類、ポリヒドロキシ酪酸及びポリ無水物類等のポリマーベースのシステムを含む。薬剤を含有する前記ポリマーのマイクロカプセルは、例えば、米国特許番号５，０７５，１０９に記載されている。送達システムはまた、例えばコレステロール、コレステロールエステル等のステロール類及びモノ−、ジ−及びトリグリセリド類等の脂肪酸又は中性脂肪類；ハイドロゲル放出システム；シラスティック（Ｓｉｌａｓｔｉｃ）システム；ペプチドベースのシステム；ワックスコーティング；従来の結合剤及び賦形剤を用いる圧縮錠；部分的に融合したインプラント；等の非ポリマー系が挙げられる。特定の例としては：（ａ）活性化合物がある形状で米国特許番号４，４５２，７７５、４，６６７，０１４、４，７４８，０３４及び５，２３９，６６０に記載されたようなマトリクス内に含有される浸食性システム、及び（ｂ）活性化合物が米国特許番号３，８３２，２５３及び３，８５４，４８０に記載されたようなポリマーから、制御された速度で透過する拡散性システムが挙げられるが、これらに限定されない。加えて、ポンプベースのハードウェア送達システムが用いられ得、それらのうちのいくつかはインプランテーションに適合させられる。
【００６６】
長期徐放型のインプラントの使用が望ましいかもしれない。本明細書で用いられるとき、長期放出とは、インプラントが少なくとも３０日、そして好ましくは６０日間治療レベルの活性成分を送達するために構成、配置されることを意味する。長期徐放型のインプラントは当業者に周知であり、上に記載された放出システムのうちいくつかを含む。
【実施例】
【００６７】
使用された方法及び材料を示す本発明及び実施形態は、以下の非限定の例を参照することにより、更に理解することができる。
【００６８】
実施例１
本実施例は発明化合物に関する様々な置換について測定された結合定数を示す。
【００６９】
材料及び方法
【００７０】
細胞株、化学物質、抗体及びタンパク質
組換えヒトＦａｓ／ＴＮＦＲＳＦ６／Ｆｃキメラ（ｃａｔ．ｎｏ．３２６−ＦＳ−０５０）、ヒトＦａｓ Ｌｉｇａｎｄ／ＴＮＦＳＦ６（ｃａｔ．Ｎｏ．１２６−ＦＬ）、抗ヒトＦａｓ ＴＮＦＲＳＦ６ポリクローナル抗体（ｃａｔ．ｎｏ．ＡＦ３２６）及び抗６×ヒスチジンクロスリンク抗体（ｃａｔ．ｎｏ．ＭＡＢ０５０）はＲ＆Ｄシステムズから購入した。抗ヒトＩｇＭ−ＨＲＰ（ｃａｔ．ｎｏ．ＡＰ３２０Ｐ）はケミコンインターナショナルから購入した。リン酸緩衝生理食塩水（ｃａｔ．ｎｏ．Ｐ３５６３）、アジ化ナトリウム（ｃａｔ．ｎｏ．７１２８９）及び３，３’，５，５’−テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）Ｌｉｑｕｉｄ Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ Ｓｙｓｔｅｍ ｆｏｒ ＥＬＩＳＡ（ｃａｔ．ｎｏ．Ｔ０４４０）は、シグマアルドリッチから購入した。Ｃｌｉｎｉｐｌａｔｅ ９６ウェルマイクロプレート ｗ／ｅｎｈａｎｃｅｄ ｂｉｎｄｉｎｇ（ｃａｔ．ｎｏ．２８２９８−６０４）はＶＷＲから購入した。Ｃｏｓｔａｒ、９６−ウェルの細胞培養アッセイプレート（ｃａｔ．ｎｏ．３６３２）は、Ｃｏｒｎｉｎｇ Ｉｎｃｏｒｐｏｒａｔｅｄに発注した。Ｊｕｒｋａｔ細胞（ＡＴＣＣ ｎｏ．ＣＲＬ−１９９０）及びＬ９２９（ＡＴＣＣ ｎｏ．ＣＲＬ−２１４８）はＡＴＣＣから購入し、１．５ｇ／Ｌ重炭酸ナトリウム、４．５ｇ／Ｌグルコース、１０ｍＭＨＥＰＥＳ及び１ｍＭピルビン酸ナトリウムを９０％；１０％仔牛血清を含有するよう調製された２ｍＭＬ−グルタミン入りＲＰＭＩ １６４０培地中で増殖させた。Ｃｅｌｌ Ｔｉｔｅｒ Ｂｌｕｅ Ｃｅｌｌ Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ Ａｓｓａｙ（ｃａｔ．ｎｏ．ＴＢ３１７）はプロメガから購入した。
【００７１】
ＥＬＩＳＡ
ペプチドをコーティング緩衝溶液（０．０５Ｍ炭酸ナトリウム、０．０２％アジ化ナトリウム、ｐＨ＝９．６）に、最終濃度が１０μＭになるよう適切な濃度で溶解した。所望の実験濃度に到達するまで適宜希釈した。ペプチド溶液のアリコート１００μｌを各ウェルに加え、２時間インキュベートした。全てのインキュベートはＴ＝３７℃で振盪しながら行った。溶液を各ウェルからピペットで吸い取り、２００μＬの洗浄水溶液（ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ；０．５％）を加え、１５分間振盪し、各ウェルを排出することによってウェルを洗浄した。２００μＬのブロッキング水溶液（１％ＢＳＡ、ＰＢＳ緩衝液中）を各ウェルに加える前に３回の洗浄サイクルを行い、その後２時間インキュベートした。次いでウェルを（上記手順の通り）３回洗浄した。次いで適切な濃度のタンパク質溶液（Ｖｓｏｉｕｔｉｏｎ ５０μＬ）を加え、２時間インキュベートした。（上記手順の通り）３回洗浄した後、Ｆａｓ特異的抗体溶液（〜１：２０，０００）を各ウェルに１００μＬ分量加え、１時間インキュベートした。（上記手順の通り）３回洗浄した後、ＩｇＭ−ＨＲＰ水溶液（〜１：２０，０００）を各ウェルに１００μＬ分量加え、１時間（振盪しながら）Ｔ＝３７℃でインキュベートした。すぐ使用できるよう準備したＴＭＤを添加する前にウェルを３回洗浄し、次いで３０分間インキュベートした。発色反応を止めるために２Ｍ Ｈ２ＳＯ４（３滴）を加え、４５０ｎｍの吸収をＰｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ，Ｖｉｃｔｏｒ３ Ｍｏｄｅｌ自動化プレートリーダーで見た。データはエクセルで標準回帰近似を用いて解析した。
【００７２】
ペプチド合成
ペプチドは従来のＦ−ｍｏｃ化学反応を用いてＡｄｖａｎｃｅｄ ＣｈｅｍＴｅｃｈ、マルチウェル、固相合成機で合成した。Ｃ末端をアミド官能基化したペプチドをＲｉｎｋ Ａｍｉｄｅ ＭＢＨＡ樹脂から生成し、Ｃ末端を酸官能基化したペプチドを予め充填しておいたＴＧＡ樹脂から生成した。全てのＮ−α−Ｆ−ｍｏｃで保護されたアミノ酸はＮｏｖａｂｉｏｃｈｅｍから購入した。ペプチドは、Ｂｅｃｋｍａｎ ＢｉｏＳｙｓの逆相Ｃ−１８カラム、モデル５１０を介してＨＰＬＣで精製した。特性解析はＡｇｉｌｅｎｔ １１０ Ｓｅｒｉｅｓ Ｔｒａｐ ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｅｒでＬＣ／ＭＳによって行った。
【００７３】
アポトーシスアッセイ
ＲＰＭＩ１６４０培地中のＪｕｒｋａｔ細胞を、１００μＬの細胞液でウェルあたり２×ｌ０４個の全体細胞数になるように希釈した。対照反応を無菌ＰＢＳ緩衝液で希釈して、ウェルあたり最終体積２００μＬにした。ペプチド溶液（ＰＢＳ緩衝液中、ｐＨ＝７．３）を、各ウェルの望ましい濃度に達するよう適切な量加え、ウェルごとの全体積を２００μｌにした。架橋ヒトＦａｓＬを０．５ｎｇ／ｍｌの濃度で加えることによりアポトーシスを誘導した。次いでプレートを無菌条件下でＫｅｎｄｒｏ，ｍｏｄｅｌ Ｈｅｒａ Ｃｅｌｌ １５０インキュベーター中でＴ＝３７℃、％ＣＯ２＝５で３時間振盪しながらインキュベートした。細胞中のアポトーシスの％を決定するためにＣｅｌｌ Ｔｉｔｅｒ Ｂｌｕｅ Ｃｅｌｌ Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ Ａｓｓａｙ ｋｉｔを（付随のプロトコールの通りに）用いた。４時間後、上記インキュベート条件下で蛍光（５６０／５９０ｎｍ）をＰｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ、Ｖｉｃｔｏｒ ３ Ｍｏｄｅｌ自動化プレートリーダーで読み取った。データはエクセルで標準回帰近似を用いて解析した。
【００７４】
結果
最初のα−Ｍｅｔの研究によりＮ末端の最初の１０６アミノ酸のみがＦａｓＲとの効果的な結合に不可欠であることがわかった。更に、ＦａｓＬとの直接のシークエンスアラインメントに際して、下に記載の通り、短い１０アミノ酸のストレッチのみが同様の相同性を示すことがわかり、且つそのうち、４量体部；即ち、ＹＬＧＡ配列のみが完全に保存されていた。
Ａ）α−Ｍｅｔ及びＦａｓＬの結合領域、Ｂ）ＴＮＦスーパーファミリー由来相同タンパク質についてのシークエンスアラインメントデータ。
【００７５】
【化５】
【００７６】
図１に記載されたように、この４アミノ酸配列と他のＴＮＦスーパーファミリーリガンドとの比較で類似したモチーフが明らかになった。このことは、このモチーフがこのファミリーのタンパク質のリガンド／受容体結合に必要な、重要な結合エネルギーを提供する可能性を示唆する。以前に行われた研究で、Ｋａ値においては、合成テトラペプチドは、より長い１２ｍｅｒ配列とそれほど違わないことがわかった。これらの知見により４量体中の各残基と改変アミノ酸との体系的置換による、主要な結合配列のまわりにある構造−機能関係を深く探求することが望ましいと示唆された。アミド結合のＮメチル化と同様に、Ｎ又はＣ末端の誘導体化の効果を検証することで、最適な結合配列や、下に示すとおり式ＶＩを有するペプチドミメティック化合物の開発についての可能性に関する情報が提供される。
【００７７】
【化６】
【００７８】
式中、ＡＡｎはアミノ酸、Ｒｎはアルキル基であり、そしてＸはＯＨ及びＮＨ２から選択される。
【００７９】
アミノ酸置換の結合親和性への効果
各テトラペプチドの結合親和性は１ｎＭ〜１μＭの濃度範囲で標準的なＥＬＩＳＡによって決定した。第１のシリーズのペプチドにおいては、チロシン残基だけを改変し、最後の３アミノ酸は親配列（ＬＧＡ）の相同性を保持した。これらの変換の結果を表１に列挙する。
【００８０】
【表１】
【００８１】
メトキシフェニルアラニン及びｐ−フルオロフェニルアラニンの研究で、ＹＬＧＡ及び置換ＦＬＧＡ配列間の結合親和性における２．５桁分の低下によって明らかなように、チロシン残基上のヒドロキシ部分の重要性が明らかになった。この第１位に芳香族残基がある場合、全体的な結合エネルギーへの寄与は、当部位内にＯＨ官能基がある場合よりも、相当に弱いようである。このことは、脂肪族側鎖（Ａ、Ｌ、Ｉ）とヒドロキシ基を含有する対応する部分（Ｓ、Ｔ）の結合活性を対照したとき、とくに顕著となる。第１位をアラニン（−ＣＨ３）に置換した結果、結合が（検出限界内で）完全に消失したが、その一方セリン基（−ＣＨ２ＯＨ）では（誤差限界の範囲で）元来のチロシンペプチドと同一の結合を示した。この観察が、もっぱら極性効果の結果であるとの可能性は、酸官能基を導入した際４倍の低下を示した、酸含有残基（Ｄ、Ｅ）の置換との比較によって反論される。
【００８２】
第２位の置換では、ロイシン残基を脂肪族側鎖基（Ｖ，Ｉ）の他の基と置換した場合、わずかな程度の柔軟性があることがわかった。特に、ＹＡＧＡ配列は親のＹＬＧＡ配列より２０％高いＫａ値を示した（表２参照）。このことにより、より短い、より立体障害のない配列が、最適な結合に好都合である可能性が示唆された。ＹＧＧＡペプチドの検証では、側鎖からのメチレン単位を除外することで測定したＫａが２０倍低下した結果になったことから、疎水性相互作用が結合親和性に影響することがわかった。このことは、極性残基のトレオニンで非極性のロイシンを置換した場合に結合が完全に消失したことによって更に裏付けられた。分枝脂肪族鎖（Ｖ、Ｉ）で結合親和性が低下し、芳香族のフェニルアラニン基で結合が完全に消失することによって実証されたように、立体構造上の要因も考慮されなければならない。
【００８３】
【表２】
【００８４】
残りの２つの位置は、表３及び４に示すように、配列中のいずれの置換をも調整する能力を示さなかった。グリシン残基を、より高分子の脂肪族側鎖のアミノ酸であるアラニン又はロイシンと置換するとＫａが２０倍低下するが、一方でより立体構造的に妨害するイソロイシン又はｄ−アラニンでは結合が全く示されなかった。同様に、末端のアラニンをより低分子の側鎖グリシン（Ｇ）又はより高分子のもの（Ｌ、Ｉ）のいずれかに置換すると元来のＹＬＧＡ配列よりほぼ１０倍低いＦａｓＲへの親和性を示した。この全体的な限定的な柔軟性は生物学的に活性のあるペプチドミメティックの設計に直接密接に関係する。
【００８５】
【表３】
【００８６】
【表４】
【００８７】
Ｎ末端、Ｃ末端及びアミド結合改変の結合親和性への影響
アミド窒素をメチル化する能力は、薬理上より好ましい特性を伴うペプチドを設計する観点から興味深い。上の知見と整合するように、Ｇ又はＡ位置に優先して起こるアミド結合のメチル化では、結果的にペプチドと受容体（式ＶのＲ３、Ｒ４）の結合は観察できなかった。しかしながら、Ｒ１又はＲ２の位置のアルキル化では結合（ｂｉｄｉｎｇ）親和性に有意な低下を示さなかった。このことはこれらの位置が結合ドメインとあまり複雑に共役していないことを示唆する。Ｃ末端のアミド官能基を酸性基に置換する効果もまた、ペプチドの、ＦａｓＲタンパク質へ結合する全体的な結合能にほとんど影響しないことがわかった。
【００８８】
インビトロ結合アッセイと細胞活性の相関化
ＦａｓＬの活性化によるアポトーシスはリガンドが受容体に結合することによって起こることが知られており、それによってカスパーゼ産生と続いて起こる細胞死につながる一連のシグナル伝達事象が開始される。α−Ｍｅｔ及びＦａｓＬタンパク質の両方で単離されたＹＬＧＡモチーフが確かにＦａｓＲへの結合の主要な原因配列ならば、ある濃度で、十分なＫａ値を持つペプチドは好んで受容体に結合するはずである。そして、これによってＦａｓＬからの結合部位がブロックされ、そしてペプチド及びＦａｓＬの両方の存在下で細胞死を阻害する。この可能性を検証するために、（Ｆａｓ受容体発現を上昇させることが知られた）Ｊｕｒｋａｔ細胞を異なる濃度のペプチドで処理し、次いで組換えＦａｓＬに曝露した。２時間インキュベートした後の全体の細胞生存性は、代表的な数のペプチドに対して、表５に示した通り、ペプチドの解離定数と測定したＥＣ５０値との間の直接的な相関関係を示す。
【００８９】
【表５】
【００９０】
この相関関係によってペプチド−タンパク質相互作用機構が示唆されるが、それによって強固に結合したペプチドがＦａｓＬをその受容体との結合をブロックすることができ、ＦａｓＬが誘導するアポトーシスを阻害することができる。ＴＮＦリガンドスーパーファミリーの他のメンバーの対応する結合領域の配列アラインメントが図１に示した通り類似のモチーフであることが明らかになった。ＹＬＧＡモチーフが実質的に保存されているＴＮＦ等の場合、表６で示した通り予備的な結果によって、アミノ酸配列の単純な修飾により選択的にある経路をもう一方よりも阻害できることが示唆された。
【００９１】
【表６】
【００９２】
隣接残基の結合活性への効果
タンパク質Ｍｅｔは、ＦａｓＲ部位への結合を実現するために、αサブユニットの最初の１０６アミノ酸を必要とすることが最初に示された。この研究は元来のタンパク質配列に基づいたテトラペプチドが低ｎＭ濃度でＦａｓＬ／ＦａｓＲ細胞死経路を阻害できることを示した一方で、これを改善する能力をＹＬＧＡモチーフのＮ末端及びＣ末端側の両方の配列に拡張して検査することによって試験した。長さ１２アミノ酸までのペプチドがα−Ｍｅｔ配列に基づいて合成され、それらのＫａ値がＦａｓ受容体について測定された（表７）。全体的な結合能はＹＡＧＡ配列に対して４〜１４％亢進した一方で、合成することの複雑さや、可溶性要素が増すことによって、さもなければ予期し得る次の実験に対しては、ほとんど有用でないＫａの上昇を与える。
【００９３】
【表７】
【００９４】
下記の表８に示す通り、Ｆａｓ及びＴＮＦＲ１についての様々なペプチドの解離定数及び測定ＥＣ５０値が測定された。
【００９５】
【表８】
【００９６】
上記の構造−機能研究から出される一般的結論が下に模式的に要約される：
【００９７】
【化７】
【００９８】
一般的に、これらは天然のＹＬＧＡ配列内でほぼ最適化された、非常に選択的な結合ポケットを示す。いくつかの結果が、Ｆａｓ関連疾患における治療標的として用いるための将来のペプチドミメティック化合物を設計する点で重要な鍵となる。はじめに、第１の位置におけるヒドロキシル基が必要なことは、受容体上の対応する位置に荷電残基又は水素結合した残基が存在していることを示唆する。この結果は、チロシン残基との相互作用を介した強いＦａｓＬ／ＦａｓＲ相互作用において、Ｒ８７が重要な役割を果たすことを示唆するモデリング研究から提示された結合部位構造と整合する。この構造は更に、リガンドの近傍に位置する第２のアルギニンと同様に２つの鍵となるリシン基の存在を提示する；それらの全てがリガンド基のヒドロキシル部分に関する重要な結合相互作用を提供することにおいて役割を果たす。類似体であるＹなしの３量体ペプチド（表４）の結合がほぼ完全に消失することよって明白なように、ペプチドを結合部位に「固定する」のにＯＨ基が果たす鍵となる役割も注目に値する。このことはペプチドミメティック化合物の開発においてなされる、あらゆる合成的修飾が、同様のモチーフを組み込む必要があることを示唆する。
【００９９】
別に、２番目に位置するロイシンと、それよりも低分子の、脂肪族に相当するアラニンとの置換によって獲得された、亢進された結合能が観察されている。末端で分枝した３炭素から単一の炭素のアルキル鎖への側鎖の改変において、Ｋａ値は〜２０％だけ増大した。しかし、グリシンへの置換の結果、恐らくペプチドと受容体との間の疎水性相互作用が低下したために、結合が消失した。中程度の長さの非天然アミノ酸を導入することによってこの位置を更に最適化することが可能かもしれない。この柔軟性は、アミド窒素のメチル化の結果、結合親和性が誤差分しか消失しなかった残基のアミド結合へも拡張される。このことによって、その基が生物学的活性の公算を最大化するための、化学修飾の実行可能な標的になる。３番目及び４番目両方のアミノ酸の非柔軟性は生物学的に活性のあるペプチドミメティックの設計のために直接密接な関係を有する。特に、３番目の位置の低分子量の、相互作用しない部分は、ペプチド部分に代えて単純なアルキル結合を容易に導入することを可能にし、それによって化合物の全体的なタンパク質分解的切断の影響の受けやすさを低減できる。Ｃ末端及びＮ末端の誘導体化とともに、これらの要因は組み合わさることで、Ｆａｓ受容体に最適化された独特且つ特異的な標的化合物を構築することを可能にする。
【０１００】
ＦａｓＲに対するＫａにおける近傍配列の効果を検証することにおいて、モデルとして利用されたのはＦａｓＬよりもα−Ｍｅｔの構造であったことに注目すべきである。２つのタンパク質配列をより綿密に検証することで、図１に示す通り、近傍残基の極性、大きさ及び荷電の有意な相違が明らかになる。従って、ＦａｓＬ配列から構成要素を組み込むためにペプチド長を延長した結果、受容体についてのペプチドの結合活性が亢進する可能性があるかもしれない。これらの研究は現在進行している。
【０１０１】
ＦａｓＲとそのリガンド、ＦａｓＬとの相互作用は無数の種間で保存されているが、分子レベルでの相互作用についてはほとんど知られていない。いくつかのモデル研究及び無数の生化学的アプローチが、このタンパク質−タンパク質相互作用に関わる構造的構成要素をより理解しようと試みるのに用いられてきた。より最近、Ｆａｓ誘導性の細胞死の作用機構を更に明らかにするためにペプチドを用いて研究が行われてきた。これらの研究においては、細胞死を誘導するためＦａｓＬ相互作用を模倣することか、又はＦａｓＬとの結合は可能だが受容体の３量体化を阻害するような方法で受容体を標的にすることに重点が置かれた。両方の例はＦａｓ経路を破壊するという点に関して情報を提供することには役立つ一方で、ＦａｓＬのアゴニストが開発され得るような実際の結合相互作用の周辺の更なる構造的情報は何も提供しなかった。
【０１０２】
本実施例においては、ＹＬＧＡペプチド上で行われた様々な改変によって、ＦａｓＬ／ＦａｓＲ相互作用に関与する結合ポケットをより理解することができた。ペプチド構造は、細胞における拮抗作用に対する能力を示すとともに、あるペプチドの、ＦａｓＲに対する結合親和性の強い結合を、制御することを示した。これらの研究によって、ＦａｓＬ／ＦａｓＲ経路を含むＴＦＮＲ細胞死経路を破壊すること及びＦａｓ又はＴＮＦＲ関連障害に対する治療標的を開発することを目的とする新規の手段が導かれる。
【０１０３】
前述に基づいて、式ＶＩＩ
【０１０４】
【化８】
【０１０５】
（式中、残基１はＹ、Ｓ、Ｔ、Ｄ及びＥから選択され；残基２はＡ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｍ及びメチル、エチル、プロピル、ブチル及びペンチルから選択され；Ｒ１はメチル、エチル、プロピル、ブチル、イソブチル、ペンチル、ヘキシル、ヘプチル、オクチル、ノニル、デシル、カルボン酸及びＨ−Ｈ−Ｉ、Ｒ−Ｓ−Ｓ及びＥ−Ｐ−Ｉから選択される３残基長までの伸長ペプチドから選択され；Ｒ２はメチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシル、ヘプチル、オクチル、ノニル、デシル及びカルボン酸から選択され；そしてＸはＣＯＯＹ又はＣＯＮＨ２から選択される）の化合物は、ＦａｓＲタンパク質に対する有効な結合体であって、Ｆａｓ誘導性アポトーシスを阻害する際に有効なＦａｓＬアンタゴニストとして作用することがわかってきた。アミノ酸残基、Ｒ１及びＲ２及びＸを変換することで、特に、ペプチドミメティック誘導体の形状を薬理学的に最適化するための有力な手段を提示する。
【０１０６】
刊行物、特許出願及び特許を含む、本明細書中で引用された全ての参考文献は、参照により、各参考文献が個々に、及び明確に参照によって組み込まれることが示され、且つ本明細書中その全体が提示されているのと同程度に、本明細書に組み込まれる。
【０１０７】
本発明（特に、下記の特許請求の範囲の文脈中）の記載の文脈における「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」なる用語並びに同様の指示対象の使用は、本明細書中に特に示されない限り、又は文脈で明確に否定されない限り、単数形及び複数形の両方を含有するものと解釈されるべきである。「ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ」、「ｈａｖｉｎｇ」、「ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ」及び「ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ」なる用語は、他に示されない限り、オープンエンドな用語（即ち、「含むが、限定されない」ことを意味する）と解されるべきである。本明細書中に他に示されない限り、本明細書中の数値範囲の記載は、該範囲内に収まるそれぞれ独立した値を個々に説明する簡略な方法として役立つことを意図しているにすぎず、それぞれの別々の値は本明細書中に個別に記載されているのと同程度に本明細書中に組み込まれる。本明細書中に他に示されない限り、又は文脈で明確に否定されない限り、本明細書中に記載される全ての方法は、任意の適切な順に行うことができる。本明細書中に特に示されない限り、本明細書中に提供される任意の及び全ての例、又は例示用語（例、「ｓｕｃｈ ａｓ」）の使用は、単に本発明をより明確に説明することを意図するにすぎず、発明の範囲に限定を加えることはない。本明細書中のいずれの用語も、特許請求されていない要素が本発明の実施に必須であることを示すと解釈されるべきではない。
【０１０８】
本発明の好ましい実施形態は本明細書に記載されており、発明者が知り得る本発明を実施するための最良の形態を含む。それらの好ましい実施形態の変更形態は、前述の記載に接した当業者であれば明らかであるであろう。本発明者等は、当業者がそのような変更形態を必要に応じて採用することを予期し、本明細書中に明確に記載された以外の方法で、本発明が実施されることを意図する。従って、本発明は、適切な法律によって許容される、本明細書添付の特許請求の範囲に記載の全ての改変形態及び均等形態を含む。更に、本明細書中で特に示されない限り、又は文脈により明確に否定されない限り、全ての考え得る変更形態における上記のいかなる組み合わせをも、本発明に包含される。
【図面の簡単な説明】
【０１０９】
【図１】図面は、本明細書中で検討したタンパク質の配列アラインメントが記載される。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−Ｘ４
（式中、
Ｘｌは、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｆ、Ｗ、Ｄ又はＥ或いはＹ、Ｓ、Ｔ、Ｆ、Ｗ、Ｄ又はＥのミメティック；
Ｘ２は、Ｌ、Ａ、Ｖ、Ｉ、Ｇ、Ｆ又はＴ或いはＬ、Ａ、Ｖ、Ｉ、Ｇ、Ｆ又はＴのミメティック；
Ｘ３は、Ｇ、Ａ、Ｌ、Ｉ又はＡ或いはＧ、Ａ、Ｌ、Ｉ又はＡのミメティック；そして
Ｘ４は、Ａ、Ｇ、Ｌ、Ｉ又はＴ或いはＡ、Ｇ、Ｌ、Ｉ又はＴのミメティック
である）
を含む、化合物。
【請求項２】
Ｘｌが、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｆ、Ｗ、Ｄ又はＥ、
Ｘ２が、Ｌ、Ａ、Ｖ、Ｉ、Ｇ、Ｆ又はＴ、
Ｘ３が、Ｇ、Ａ、Ｌ、Ｉ又はＡそして
Ｘ４が、Ａ、Ｇ、Ｌ、Ｉ又はＴ
である、
請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
請求項１又は２に記載の化合物及び医薬的に許容できる担体を含む、組成物。
【請求項４】
式Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７−Ｘ８
（式中、
Ｘｌは、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｆ、Ｗ、Ｄ又はＥ或いはＹ、Ｓ、Ｔ、Ｆ、Ｗ、Ｄ又はＥのミメティック；
Ｘ２は、スペーサー；
Ｘ３は、Ｌ、Ａ、Ｖ、Ｉ、Ｇ、Ｆ又はＴ或いはＬ、Ａ、Ｖ、Ｉ、Ｇ、Ｆ又はＴのミメティック；
Ｘ４は、スペーサー；
Ｘ５は、Ｇ、Ａ、Ｌ、Ｉ又はＡ或いはＧ、Ａ、Ｌ、Ｉ又はＡのミメティック；
Ｘ６は、スペーサー；
Ｘ７は、Ａ、Ｇ、Ｌ、Ｉ又はＴ或いはＡ、Ｇ、Ｌ、Ｉ又はＴのミメティック；そして
Ｘ８は、スペーサー
である）
を含む、化合物。
【請求項５】
更にＸ０
（Ｘ０は、Ａｌ−Ａ２−Ａ４［式中、Ａ１は、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｅ又はＤ或いはＨ、Ｋ、Ｒ、Ｅ又はＤのミメティック；Ａ２は、Ｓ、Ａ又はＴ或いはＳ、Ａ又はＴのミメティック；そしてＡ３は、Ｓ、Ａ、Ｔ、Ｉ又はＶ或いはＳ、Ａ、Ｔ、Ｉ又はＶのミメティックである］である）
を含む、請求項４に記載の化合物。
【請求項６】
請求項４に記載の化合物及び医薬的に許容できる担体を含む、組成物。
【請求項７】
請求項５に記載の化合物及び医薬的に許容できる担体を含む、組成物。
【請求項８】
式Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７−Ｘ８
（式中、
Ｘ１は、スペーサー；
Ｘ２は、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｆ、Ｗ、Ｄ又はＥ或いはＹ、Ｓ、Ｔ、Ｆ、Ｗ、Ｄ又はＥのミメティック；
Ｘ３は、スペーサー；
Ｘ４は、Ｌ、Ａ、Ｖ、Ｉ、Ｇ、Ｆ又はＴ或いはＬ、Ａ、Ｖ、Ｉ、Ｇ、Ｆ又はＴのミメティック；
Ｘ５は、スペーサー；
Ｘ６は、Ｇ、Ａ、Ｌ、Ｉ又はＡ或いはＧ、Ａ、Ｌ、Ｉ又はＡのミメティック；
Ｘ７は、スペーサー；そして
Ｘ８は、Ａ、Ｇ、Ｌ、Ｉ又はＴ或いはＡ、Ｇ、Ｌ、Ｉ又はＴのミメティック
である）
を含む、化合物。
【請求項９】
請求項８に記載の化合物及び医薬的に許容できる担体を含む、組成物。
【請求項１０】
式
【化１】
（式中、
残基１は、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｄ及びＥから選択され；
残基２は、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｍ及び炭素原子数１〜５個のアルキル基から選択され；
Ｒ１及びＲ２は、炭素原子数１〜１０個のアルキル基及びＣＯＯＨから独立して選択され；そして
Ｘは、ＣＯＯＹ又はＣＯＮＨ２から選択される）
を含む、化合物。
【請求項１１】
請求項１０に記載の化合物及び医薬的に許容できる担体を含む、組成物。
【請求項１２】
請求項３、６、７、９又は１１のいずれか一項に記載の組成物の有効量を投与することを含む、アポトーシスの阻害方法。
【請求項１３】
被験者のＴＮＦＲ関連状態を治療する方法であって、該被験者に請求項３、６、７、９又は１１のいずれか一項に記載の組成物の治療有効量を投与することを含む、方法。
【請求項１４】
前記ＴＮＦＲ関連状態が、敗血症、虚血、再灌流障害、急性又は慢性肝機能障害、癌、慢性炎症疾患及び自己免疫疾患からなる群より選択される、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
アポトーシスを阻害するための医薬の製造における、請求項１、２、４、８又は１０のいずれか一項に記載の化合物の使用。
【請求項１６】
ＴＮＦＲ関連状態を治療するための医薬の製造における、請求項１、２、４、８又は１０のいずれか一項に記載の化合物の使用。
【請求項１７】
ＴＮＦＲ関連状態が、敗血症、虚血、再灌流障害、急性又は慢性肝機能障害、癌、慢性炎症疾患及び自己免疫疾患からなる群より選択される、請求項１６に記載の使用。
【請求項１】
式Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−Ｘ４
（式中、
Ｘｌは、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｆ、Ｗ、Ｄ又はＥ或いはＹ、Ｓ、Ｔ、Ｆ、Ｗ、Ｄ又はＥのミメティック；
Ｘ２は、Ｌ、Ａ、Ｖ、Ｉ、Ｇ、Ｆ又はＴ或いはＬ、Ａ、Ｖ、Ｉ、Ｇ、Ｆ又はＴのミメティック；
Ｘ３は、Ｇ、Ａ、Ｌ、Ｉ又はＡ或いはＧ、Ａ、Ｌ、Ｉ又はＡのミメティック；そして
Ｘ４は、Ａ、Ｇ、Ｌ、Ｉ又はＴ或いはＡ、Ｇ、Ｌ、Ｉ又はＴのミメティック
である）
を含む、化合物。
【請求項２】
Ｘｌが、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｆ、Ｗ、Ｄ又はＥ、
Ｘ２が、Ｌ、Ａ、Ｖ、Ｉ、Ｇ、Ｆ又はＴ、
Ｘ３が、Ｇ、Ａ、Ｌ、Ｉ又はＡそして
Ｘ４が、Ａ、Ｇ、Ｌ、Ｉ又はＴ
である、
請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
請求項１又は２に記載の化合物及び医薬的に許容できる担体を含む、組成物。
【請求項４】
式Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７−Ｘ８
（式中、
Ｘｌは、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｆ、Ｗ、Ｄ又はＥ或いはＹ、Ｓ、Ｔ、Ｆ、Ｗ、Ｄ又はＥのミメティック；
Ｘ２は、スペーサー；
Ｘ３は、Ｌ、Ａ、Ｖ、Ｉ、Ｇ、Ｆ又はＴ或いはＬ、Ａ、Ｖ、Ｉ、Ｇ、Ｆ又はＴのミメティック；
Ｘ４は、スペーサー；
Ｘ５は、Ｇ、Ａ、Ｌ、Ｉ又はＡ或いはＧ、Ａ、Ｌ、Ｉ又はＡのミメティック；
Ｘ６は、スペーサー；
Ｘ７は、Ａ、Ｇ、Ｌ、Ｉ又はＴ或いはＡ、Ｇ、Ｌ、Ｉ又はＴのミメティック；そして
Ｘ８は、スペーサー
である）
を含む、化合物。
【請求項５】
更にＸ０
（Ｘ０は、Ａｌ−Ａ２−Ａ４［式中、Ａ１は、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｅ又はＤ或いはＨ、Ｋ、Ｒ、Ｅ又はＤのミメティック；Ａ２は、Ｓ、Ａ又はＴ或いはＳ、Ａ又はＴのミメティック；そしてＡ３は、Ｓ、Ａ、Ｔ、Ｉ又はＶ或いはＳ、Ａ、Ｔ、Ｉ又はＶのミメティックである］である）
を含む、請求項４に記載の化合物。
【請求項６】
請求項４に記載の化合物及び医薬的に許容できる担体を含む、組成物。
【請求項７】
請求項５に記載の化合物及び医薬的に許容できる担体を含む、組成物。
【請求項８】
式Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７−Ｘ８
（式中、
Ｘ１は、スペーサー；
Ｘ２は、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｆ、Ｗ、Ｄ又はＥ或いはＹ、Ｓ、Ｔ、Ｆ、Ｗ、Ｄ又はＥのミメティック；
Ｘ３は、スペーサー；
Ｘ４は、Ｌ、Ａ、Ｖ、Ｉ、Ｇ、Ｆ又はＴ或いはＬ、Ａ、Ｖ、Ｉ、Ｇ、Ｆ又はＴのミメティック；
Ｘ５は、スペーサー；
Ｘ６は、Ｇ、Ａ、Ｌ、Ｉ又はＡ或いはＧ、Ａ、Ｌ、Ｉ又はＡのミメティック；
Ｘ７は、スペーサー；そして
Ｘ８は、Ａ、Ｇ、Ｌ、Ｉ又はＴ或いはＡ、Ｇ、Ｌ、Ｉ又はＴのミメティック
である）
を含む、化合物。
【請求項９】
請求項８に記載の化合物及び医薬的に許容できる担体を含む、組成物。
【請求項１０】
式
【化１】
（式中、
残基１は、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｄ及びＥから選択され；
残基２は、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｍ及び炭素原子数１〜５個のアルキル基から選択され；
Ｒ１及びＲ２は、炭素原子数１〜１０個のアルキル基及びＣＯＯＨから独立して選択され；そして
Ｘは、ＣＯＯＹ又はＣＯＮＨ２から選択される）
を含む、化合物。
【請求項１１】
請求項１０に記載の化合物及び医薬的に許容できる担体を含む、組成物。
【請求項１２】
請求項３、６、７、９又は１１のいずれか一項に記載の組成物の有効量を投与することを含む、アポトーシスの阻害方法。
【請求項１３】
被験者のＴＮＦＲ関連状態を治療する方法であって、該被験者に請求項３、６、７、９又は１１のいずれか一項に記載の組成物の治療有効量を投与することを含む、方法。
【請求項１４】
前記ＴＮＦＲ関連状態が、敗血症、虚血、再灌流障害、急性又は慢性肝機能障害、癌、慢性炎症疾患及び自己免疫疾患からなる群より選択される、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
アポトーシスを阻害するための医薬の製造における、請求項１、２、４、８又は１０のいずれか一項に記載の化合物の使用。
【請求項１６】
ＴＮＦＲ関連状態を治療するための医薬の製造における、請求項１、２、４、８又は１０のいずれか一項に記載の化合物の使用。
【請求項１７】
ＴＮＦＲ関連状態が、敗血症、虚血、再灌流障害、急性又は慢性肝機能障害、癌、慢性炎症疾患及び自己免疫疾患からなる群より選択される、請求項１６に記載の使用。
【図１】
【公表番号】特表２００９−５１８３０８（Ｐ２００９−５１８３０８Ａ）
【公表日】平成２１年５月７日（２００９．５．７）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００８−５４３５３３（Ｐ２００８−５４３５３３）
【出願日】平成１８年１２月１日（２００６．１２．１）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００６／０４６２４１
【国際公開番号】ＷＯ２００７／０６４９９７
【国際公開日】平成１９年６月７日（２００７．６．７）
【出願人】（５０００９１３１３）ユニヴァーシティ オヴ ピッツバーグ オヴ ザ コモンウェルス システム オヴ ハイアー エデュケーション (10)
【出願人】（５０７４２１７６２）デューク・ユニヴァーシティ (3)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２１年５月７日（２００９．５．７）
【国際特許分類】
【出願日】平成１８年１２月１日（２００６．１２．１）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００６／０４６２４１
【国際公開番号】ＷＯ２００７／０６４９９７
【国際公開日】平成１９年６月７日（２００７．６．７）
【出願人】（５０００９１３１３）ユニヴァーシティ オヴ ピッツバーグ オヴ ザ コモンウェルス システム オヴ ハイアー エデュケーション (10)
【出願人】（５０７４２１７６２）デューク・ユニヴァーシティ (3)
【Ｆターム（参考）】
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