イムノコンジュゲート及びその作製方法
本発明は、フレームワーク領域１内に位置する少なくとも２つのシステイン残基を含む免疫グロブリン可変領域を含む単離されたタンパク質であって、システイン残基の少なくとも２つが別の化合物にコンジュゲートされない場合にシステイン残基間にジスルフィド結合が形成されるタンパク質を提供する。好ましくはタンパク質は免疫グロブリン重鎖可変領域と免疫グロブリン軽鎖可変領域とを含み、可変領域の少なくとも１つが２つのシステイン残基を含む。本発明はまた、ＴＡＧ７２に結合したタンパク質も提供する。本発明はまた、タンパク質と別の化合物とのコンジュゲートも提供する。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
フレームワーク領域（ＦＲ）１内に位置する少なくとも２つのシステイン残基を含む免疫グロブリン可変領域を含む単離されたタンパク質であって、前記システイン残基の少なくとも２つが化合物にコンジュゲートされない場合に、前記システイン残基間にジスルフィド結合が形成可能である、タンパク質。
【請求項２】
免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ）と免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ）とを含む単離されたタンパク質であって、前記可変領域の少なくとも１つがフレームワーク領域（ＦＲ）１内に位置する少なくとも２つのシステイン残基を含み、前記システイン残基の少なくとも２つが別の化合物にコンジュゲートされない場合に前記システイン残基間にジスルフィド結合が形成可能である、タンパク質。
【請求項３】
前記ジスルフィド結合が非還元条件下で存在する、請求項１又は２に記載のタンパク質。
【請求項４】
前記システイン残基が、Ｋａｂａｔ付番方式により付番して残基２と相補性決定領域（ＣＤＲ）１との間に位置する、請求項１〜３のいずれか一項に記載のタンパク質。
【請求項５】
前記システイン残基がＶＨ内にあり、且つＫａｂａｔ付番方式による残基２から３０の間に位置する、請求項２〜４のいずれか一項に記載のタンパク質。
【請求項６】
前記システイン残基が、Ｋａｂａｔ付番方式により付番して残基７から２０の間及び／又は残基２４から３０の間に位置する、請求項５に記載のタンパク質。
【請求項７】
前記システイン残基が、Ｋａｂａｔ付番方式により付番して残基７から２０の間に位置する、請求項６に記載のタンパク質。
【請求項８】
前記システイン残基がＶＬ内にあり、且つＫａｂａｔ付番方式により付番して残基２から２２の間に位置する、請求項２〜４のいずれか一項に記載のタンパク質。
【請求項９】
前記システイン残基が、Ｋａｂａｔ付番方式により付番して残基７から２０の間に位置する、請求項８に記載のタンパク質。
【請求項１０】
前記システイン残基が、前記可変領域の前記保存されたシステイン残基に対して追加的なものである、請求項１〜９のいずれか一項に記載のタンパク質。
【請求項１１】
前記保存されたシステイン残基が、Ｋａｂａｔ付番方式により付番して、前記ＶＬにおいて残基２３にあり及び／又は前記ＶＨにおいて残基２２にある、請求項１０に記載のタンパク質。
【請求項１２】
前記システイン残基が、前記保存されたシステイン残基に対してＮ末端側に位置する、請求項１０又は１１に記載のタンパク質。
【請求項１３】
前記システイン残基が、以下：
（ｉ）Ｋａｂａｔ付番方式により付番してκ ＶＬの残基８及び残基１１；
（ｉｉ）Ｋａｂａｔ付番方式により付番してκ ＶＬの残基１４及び残基１７；
（ｉｉｉ）Ｋａｂａｔ付番方式により付番してλ ＶＬの残基７及び残基１１；
（ｉｖ）Ｋａｂａｔ付番方式により付番してλ ＶＬの残基１４及び残基１７；
（ｖ）Ｋａｂａｔ付番方式により付番してλ ＶＬの残基８及び残基１２；
（ｖｉ）Ｋａｂａｔ付番方式により付番してＶＨの残基７及び残基１０；
（ｖｉｉ）Ｋａｂａｔ付番方式により付番してＶＨの残基１３及び残基１６
の１つ又は複数に位置する、請求項１〜１２のいずれか一項に記載のタンパク質。
【請求項１４】
前記システイン残基が、以下：
（ｉ）Ｋａｂａｔ付番方式により付番してκ ＶＬの残基１３及び残基１９；
（ｉｉ）Ｋａｂａｔ付番方式により付番してλ ＶＬの残基１３及び残基１９；
（ｖｉ）Ｋａｂａｔ付番方式により付番してＶＨの残基６及び残基９；及び／又は
（ｖｉｉ）Ｋａｂａｔ付番方式により付番してＶＨの残基１２及び残基１８
の１つ又は複数に位置する、請求項１〜１２のいずれか一項に記載のタンパク質。
【請求項１５】
少なくとも１つの請求項２〜１４のいずれか一項に記載のタンパク質を含むＦｖを含む単離されたタンパク質であって、少なくとも１つのＶＬが少なくとも１つのＶＨと結合して抗原結合部位を形成する、タンパク質。
【請求項１６】
前記抗原結合部位を形成する前記ＶＬと前記ＶＨとが単一のポリペプチド鎖にある、請求項１５に記載のタンパク質。
【請求項１７】
（ｉ）単鎖Ｆｖ断片（ｓｃＦｖ）；
（ｉｉ）二量体ｓｃＦｖ（ｄｉ−ｓｃＦｖ）；又は
（ｉｉｉ）Ｆｃ又は重鎖定常ドメイン（ＣＨ）２及び／又はＣＨ３に連結された（ｉ）及び／又は（ｉｉ）の少なくとも１つ
である、請求項１６に記載のタンパク質。
【請求項１８】
前記抗原結合部位を形成する前記ＶＬとＶＨとが異なるポリペプチド鎖にある、請求項１５に記載のタンパク質。
【請求項１９】
（ｉ）ダイアボディ；
（ｉｉ）トリアボディ；又は
（ｉｉｉ）テトラボディ
である、請求項１８に記載のタンパク質。
【請求項２０】
免疫グロブリンである、請求項１８に記載のタンパク質。
【請求項２１】
前記システイン残基がジスルフィド結合によって連結される、請求項１〜２０のいずれか一項に記載のタンパク質。
【請求項２２】
前記システイン残基の少なくとも１つにコンジュゲートした化合物を含む、請求項１〜２０のいずれか一項に記載のタンパク質であって、前記化合物のコンジュゲーションが前記タンパク質の抗原との結合を妨害しない、タンパク質。
【請求項２３】
前記化合物が、放射性同位体、検出可能標識、治療化合物、コロイド、毒素、核酸、ペプチド、タンパク質、対象における前記タンパク質の半減期を増加させる化合物及びそれらの混合物からなる群から選択される、請求項２２に記載のタンパク質。
【請求項２４】
少なくとも１つのＮ末端スレオニン残基又はセリン残基をさらに含む、請求項１〜２３のいずれか一項に記載のタンパク質。
【請求項２５】
前記スレオニン残基又はセリン残基にコンジュゲートした化合物を含む、請求項２４に記載のタンパク質。
【請求項２６】
前記化合物が、放射性同位体、検出可能標識、治療化合物、コロイド、毒素、核酸、ペプチド、タンパク質、対象における前記タンパク質の半減期を増加させる化合物及びそれらの混合物からなる群から選択される、請求項２５に記載のタンパク質。
【請求項２７】
前記システイン残基の少なくとも１つにコンジュゲートした第１の化合物と、前記スレオニン残基又はセリン残基にコンジュゲートした第２の化合物であって、前記第１の化合物と異なる第２の化合物とを含む、請求項２５又は２６に記載のタンパク質。
【請求項２８】
前記タンパク質が、配列番号５７に示される配列と少なくとも約８０％同一の配列を含む少なくとも１つのポリペプチドを含み、前記化合物が単分散ＰＥＧである、請求項２２に記載のタンパク質。
【請求項２９】
前記単分散ＰＥＧが４８個以下のエチレングリコール単位を有する、請求項２８に記載のタンパク質。
【請求項３０】
前記単分散ＰＥＧが約２４個のエチレングリコール単位を有する、請求項２８又は２９に記載のタンパク質。
【請求項３１】
ヒト上皮成長因子（Ｈｅｒ）２、腫瘍関連糖タンパク質ＴＡＧ７２、ＭＵＣ１又は前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）に特異的に結合する、請求項１〜３０のいずれか一項に記載のタンパク質。
【請求項３２】
フレームワーク領域（ＦＲ）１内に位置する２つ以上のシステイン残基を含むように修飾された、配列番号５５、５９、６１又は１０９のいずれか１つに示される配列と少なくとも約８０％同一の配列を含む、請求項３１に記載のタンパク質。
【請求項３３】
配列番号５７、６３、６５、７５、７７、７９、８１、８３、８５、８７、８９、９１、９３、９５、９７、９９、１０１、１０３又は１０５、１１９、１２１、１２３、１２５、１２７、１２９、１３１又は１３３のいずれか１つ又は複数に示される配列と少なくとも約８０％同一の配列を含む、請求項３２に記載のタンパク質。
【請求項３４】
免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ）と免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ）とを含む単離されたタンパク質であって、前記可変領域の少なくとも１つがＮ末端スレオニン残基又はセリン残基を含む、タンパク質。
【請求項３５】
少なくとも１つの請求項３１に記載のタンパク質を含むＦｖを含む単離されたタンパク質であって、少なくとも１つのＶＬが少なくとも１つのＶＨと結合して抗原結合部位を形成する、タンパク質。
【請求項３６】
前記抗原結合部位を形成する前記ＶＬと前記ＶＨとが単一のポリペプチド鎖にある、請求項３５に記載のタンパク質。
【請求項３７】
（ｉ）単鎖Ｆｖ断片（ｓｃＦｖ）；
（ｉｉ）二量体ｓｃＦｖ（ｄｉ−ｓｃＦｖ）；又は
（ｉｉｉ）Ｆｃ又は重鎖定常ドメイン（ＣＨ）２及び／又はＣＨ３に連結された（ｉ）及び／又は（ｉｉ）の少なくとも１つ
である、請求項３６に記載のタンパク質。
【請求項３８】
前記抗原結合部位を形成する前記ＶＬと前記ＶＨとが異なるポリペプチド鎖にある、請求項３５に記載のタンパク質。
【請求項３９】
（ｉ）ダイアボディ；
（ｉｉ）トリアボディ；又は
（ｉｉｉ）テトラボディ
である、請求項３８に記載のタンパク質。
【請求項４０】
免疫グロブリンである、請求項３８に記載のタンパク質。
【請求項４１】
前記スレオニン残基又はセリン残基にコンジュゲートした化合物をさらに含む、請求項３４〜４０のいずれか一項に記載のタンパク質。
【請求項４２】
前記化合物が、放射性同位体、検出可能標識、治療化合物、コロイド、毒素、核酸、ペプチド、タンパク質、対象における前記タンパク質の半減期を増加させる化合物及びそれらの混合物からなる群から選択される、請求項４１に記載のタンパク質。
【請求項４３】
前記Ｎ末端スレオニン残基又はセリン残基を含むように修飾された、配列番号５５、５９、６１又は１０９のいずれか１つに示される配列と少なくとも約８０％同一の配列を含む、請求項３４〜４３のいずれか一項に記載のタンパク質。
【請求項４４】
請求項１〜４３のいずれか一項に記載のタンパク質と薬学的に許容可能な担体とを含む組成物。
【請求項４５】
請求項１〜２１、２４、３１〜４０又は４３のいずれか一項に記載のタンパク質をコードする単離核酸。
【請求項４６】
プロモーターに作動可能に連結された請求項４５に記載の核酸を含む発現コンストラクト。
【請求項４７】
請求項４５に記載の外因性核酸及び／又は請求項４６に記載の発現コンストラクトを含む単離細胞であって、前記タンパク質を発現する細胞。
【請求項４８】
細菌細胞、酵母細胞、哺乳動物細胞又は昆虫細胞である、請求項４７に記載の細胞。
【請求項４９】
請求項１〜２１、２４、３１〜４０又は４３のいずれか一項に記載のタンパク質の作製方法であって、請求項４６に記載の発現コンストラクトを、前記コードされたタンパク質が作製されるのに十分な条件下に維持するステップを含む方法。
【請求項５０】
前記コードされたタンパク質が作製されるのに十分な（sufficient the encoded for the protein to be produced）条件下で請求項４７又は４８に記載の細胞を培養するステップを含む、請求項４９に記載の方法。
【請求項５１】
前記タンパク質を単離するステップを含む、請求項４９又は５０に記載の方法。
【請求項５２】
請求項２２〜３０のいずれか一項に記載のタンパク質の作製方法であって、
（ｉ）請求項１〜２１、２４又は３１〜３３のいずれか一項に記載のタンパク質を得るステップと、
（ｉｉ）前記タンパク質のＦＲ１における前記システイン残基の少なくとも１つに化合物をコンジュゲートするステップであって、それにより前記タンパク質を作製するステップと、
を含む方法。
【請求項５３】
（ｉ）で得られた前記タンパク質における前記システイン残基がジスルフィド結合によって連結され、及び前記方法が、前記化合物を１つ又は複数の前記システイン残基にコンジュゲートする前に、前記ジスルフィド結合を還元するか又はその他の分解するステップをさらに含む、請求項５２に記載の方法。
【請求項５４】
前記ジスルフィド結合を還元するか又はその他の分解するステップにより前記タンパク質に遊離チオール基が生成され、及び前記化合物が、前記化合物の前記タンパク質とのコンジュゲーションを可能にするチオール反応基を有する、請求項５３に記載の方法。
【請求項５５】
前記タンパク質が少なくとも１つのＮ末端セリン残基又はスレオニン残基を含み、及び前記方法が、化合物を前記セリン残基又はスレオニン残基にコンジュゲートするステップをさらに含む、請求項５２〜５４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５６】
請求項２６、２７又は４１〜４３のいずれか一項に記載のタンパク質の作製方法であって、
（ｉ）請求項２４又は３４〜４０のいずれか一項に記載のタンパク質を得るステップと、
（ｉｉ）前記タンパク質の前記Ｎ末端にある少なくとも１つのセリン残基又はスレオニン残基に化合物をコンジュゲートするステップであって、それにより前記タンパク質を作製するステップと、
を含む方法。
【請求項５７】
医薬における請求項１〜４３のいずれか一項に記載のタンパク質又は請求項４４に記載の組成物の使用。
【請求項５８】
対象における病態の治療又は予防方法であって、請求項１〜４３のいずれか一項に記載のタンパク質又は請求項４４に記載の組成物を、それを必要とする対象に投与するステップを含む方法。
【請求項５９】
細胞への化合物の送達方法であって、請求項２２〜３０、４１又は４２のいずれか一項に記載のタンパク質又は請求項４４に記載の組成物に前記細胞を接触させるステップを含む方法。
【請求項６０】
対象に前記タンパク質又は組成物を投与することによって前記細胞を接触させる、請求項５９に記載の方法。
【請求項６１】
対象における抗原を位置特定又は検出する方法であって、
（ｉ）請求項２２〜３０、４１又は４２のいずれか一項に記載のタンパク質が抗原に結合するのに十分な時間にわたり、且つそのような条件下で、前記タンパク質又は請求項４４に記載の組成物を対象に投与するステップであって、前記タンパク質が検出可能標識にコンジュゲートされる、ステップと、
（ｉｉ）前記検出可能標識をインビボで検出又は位置特定するステップと、
を含む方法。
【請求項６２】
対象における病態の診断又は予後判定方法であって、請求項１〜４３のいずれか一項に記載のタンパク質が抗原に結合して複合体を形成するのに十分な時間にわたり、且つそのような条件下で、前記対象からの試料を前記タンパク質又は請求項４４に記載の組成物と接触させるステップと、前記複合体を検出するステップであって、前記複合体の検出が前記対象における前記病態の診断又は予後判定をもたらすステップとを含む方法。
【請求項６３】
前記複合体のレベルを測定するステップであって、前記複合体のレベルの亢進又は低下が、前記対象における前記病態の診断又は予後判定をもたらすステップを含む、請求項６２に記載の方法。
【請求項６４】
免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ）と免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ）との互いの会合を可能にするには不十分な数のアミノ酸を含む領域によって連結された前記ＶＨと前記ＶＬとを各々が含む複数のポリペプチドを含む単離されたタンパク質であって、
（ｉ）前記ポリペプチドの少なくとも１つが、配列番号１１１に示される配列又はそれと少なくとも約６０％同一の配列を含むＶＨを含み；及び
（ｉｉ）少なくとも別の前記ポリペプチドが、配列番号１１３に示される配列又はそれと少なくとも約６０％同一の配列を含むＶＬを含み、
（ｉ）における前記ポリペプチドの前記ＶＨと（ｉｉ）における前記ポリペプチドの前記ＶＬとが会合して、腫瘍抗原ＴＡＧ−７２との特異的な結合能を有するＦｖを形成する、タンパク質。
【請求項６５】
前記ＶＨと前記ＶＬとを連結する前記領域が６個以下のアミノ酸を含む、請求項６４に記載のタンパク質。
【請求項６６】
前記ＶＬが、Ｋａｂａｔ付番方式により付番して５位にスレオニン及び／又はＫａｂａｔ付番方式による５３位にスレオニン及び／又はＫａｂａｔ付番方式により付番して７９位にグルタミン酸を含む、請求項６４又は６５に記載のタンパク質。
【請求項６７】
前記ＶＨが、Ｋａｂａｔ付番方式により付番して８０位にロイシンを含む、請求項６４〜６６のいずれか一項に記載のタンパク質。
【請求項６８】
（ｉ）配列番号１１１に示される配列又はそれと少なくとも約６０％同一の配列を含むＶＨと、
（ｉｉ）配列番号１１３に示される配列又はそれと少なくとも約６０％同一の配列を含むＶＬと、
を各々が含む少なくとも２つのポリペプチドを含む、請求項６４〜６７のいずれか一項に記載のタンパク質であって、
一つのポリペプチドの前記ＶＨと別のポリペプチドの前記ＶＬとが会合して、ＴＡＧ７２との特異的な結合能を有するＦｖを形成する、タンパク質。
【請求項６９】
ダイアボディ、トリアボディ又はテトラボディである、請求項６４〜６８のいずれか一項に記載のタンパク質。
【請求項７０】
（ｉ）前記ポリペプチドの少なくとも１つが、配列番号１１１に示される配列を含むＶＨの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含むＶＨを含み；及び
（ｉｉ）少なくとも別の前記ポリペプチドが、配列番号１１３に示される配列を含むＶＬのＣＤＲを含むＶＬを含む、
請求項６４〜６９のいずれか一項に記載のタンパク質。
【請求項７１】
（ｉ）配列番号１１１に示される配列又はそのヒト化若しくは脱免疫化（deimmunized）形態を含むＶＨと、
（ｉｉ）配列番号１１３に示される配列又はそのヒト化若しくは脱免疫化形態を含むＶＬと、
を双方が含む少なくとも２つのポリペプチドを含む、請求項６４〜７０のいずれか一項に記載のタンパク質。
【請求項７２】
配列番号５５に示される配列と少なくとも８０％同一の配列を各々が含む少なくとも２つのポリペプチドを含む、請求項６４〜７１のいずれか一項に記載のタンパク質。
【請求項７３】
前記ポリペプチドの少なくとも１つが、フレームワーク領域（ＦＲ）１内に位置する少なくとも２つのシステイン残基を含み、前記システイン残基の少なくとも２つが化合物にコンジュゲートされない場合に、前記システイン残基間にジスルフィド結合が形成可能である、請求項６４〜７３のいずれか一項に記載のタンパク質。
【請求項７４】
前記ポリペプチドの少なくとも１つがＮ末端セリン残基及び／又はスレオニン残基を含む、請求項６４〜７３のいずれか一項に記載のタンパク質。
【請求項７５】
配列番号５７、６３、７５、７７、９９、１０１、１０３、１１９、１２１、１２３、１２５、１２７、１２９、１３１又は１３３のいずれか１つ又は複数に示される配列を含む、請求項７３又は７４に記載のタンパク質。
【請求項７６】
それにコンジュゲートした化合物を含む、請求項６４〜７５のいずれか一項に記載のタンパク質。
【請求項７７】
前記化合物が、前記ポリペプチドの少なくとも１つにおけるシステイン残基又はセリン残基又はリジン残基にコンジュゲートされる、請求項７６に記載のタンパク質。
【請求項７８】
前記ポリペプチドの少なくとも１つが、フレームワーク領域（ＦＲ）１内に位置する少なくとも２つのシステイン残基を、前記システイン残基の少なくとも２つが化合物にコンジュゲートされない場合に前記システイン残基間にジスルフィド結合が形成可能であるように位置して含み、及び／又は、前記ポリペプチドの少なくとも１つがＮ末端セリン残基及び／又はスレオニン残基を含み、及び前記化合物が前記システイン残基の少なくとも１つ及び／又は前記セリン残基にコンジュゲートされる、請求項７６又は７７に記載のタンパク質。
【請求項７９】
前記ポリペプチドが前記システイン残基及び前記Ｎ末端セリン残基及び／又はスレオニン残基を含み、及び前記化合物が前記システイン残基の少なくとも１つにコンジュゲートされ、場合により異なる化合物が前記セリン残基にコンジュゲートされる、請求項７８に記載のタンパク質。
【請求項８０】
前記化合物が、放射性同位体、検出可能標識、治療化合物、コロイド、毒素、核酸、ペプチド、タンパク質、対象における前記タンパク質の半減期を増加させる化合物及びそれらの混合物からなる群から選択される、請求項７６〜７９のいずれか一項に記載のタンパク質。
【請求項８１】
前記化合物が生理学的に許容可能なポリマーである、請求項７６〜８０のいずれか一項に記載のタンパク質。
【請求項８２】
前記化合物がポリエチレングリコール（ＰＥＧ）である、請求項７６〜８１のいずれか一項に記載のタンパク質。
【請求項８３】
前記ＰＥＧが単分散ＰＥＧである、請求項８２に記載のタンパク質。
【請求項８４】
前記ＰＥＧが４０００Ｄａ以下の分子量を有する、請求項８２又は８３に記載のタンパク質。
【請求項８５】
前記ＰＥＧが２０００Ｄａ以下の分子量を有する、請求項８２〜８４に記載のタンパク質。
【請求項８６】
前記ＰＥＧが１，５００Ｄａ以下の分子量を有する、請求項８２〜８５に記載のタンパク質。
【請求項８７】
請求項６４〜８６のいずれか一項に記載のタンパク質と薬学的に許容可能な担体とを含む組成物。
【請求項８８】
請求項６４〜７５のいずれか一項に記載のタンパク質における前記ポリペプチドの１つ又は複数をコードする単離核酸。
【請求項８９】
プロモーターに作動可能に連結された請求項８８に記載の核酸を含む発現コンストラクト。
【請求項９０】
請求項６４〜７５のいずれか一項に記載のタンパク質を発現する単離細胞。
【請求項９１】
請求項８８に記載の核酸及び／又は請求項８９に記載の発現コンストラクトを含む、請求項９０に記載の細胞。
【請求項９２】
請求項６４〜７５のいずれか一項に記載のタンパク質の作製方法であって、請求項８９に記載の発現コンストラクトを、前記コードされたポリペプチド及び前記タンパク質が作製されるように維持するステップを含む方法。
【請求項９３】
前記コードされたタンパク質が作製されるのに十分な（sufficient the encoded for the protein to be produced）条件下で請求項９０又は９１に記載の細胞を培養するステップを含む、請求項９２に記載の方法。
【請求項９４】
前記システイン残基の少なくとも１つにコンジュゲートした化合物を含む請求項７６〜８６のいずれか一項に記載のタンパク質の作製方法であって、
（ｉ）請求項７３又は７５のいずれか１項に記載のタンパク質を得るステップと、
（ｉｉ）１つ又は複数の前記ポリペプチドのＦＲ１における前記システイン残基の少なくとも１つに化合物をコンジュゲートするステップであって、それにより前記タンパク質を作製するステップと、
を含む方法。
【請求項９５】
Ｎ末端セリン残基又はスレオニン残基にコンジュゲートした化合物を含む請求項７８又は７９に記載のタンパク質の作製方法であって、
（ｉ）請求項７４又は７５に記載のタンパク質を得るステップと、
（ｉｉ）前記ポリペプチドのＮ末端にある少なくとも１つのセリン残基又はスレオニン残基に化合物をコンジュゲートするステップであって、それにより前記タンパク質を作製するステップと、
を含む方法。
【請求項９６】
前記化合物がポリエチレングリコール（ＰＥＧ）である、請求項９４又は９５に記載の方法。
【請求項９７】
対象における癌を位置特定及び／又は検出及び／又は診断及び／又は予後判定する方法であって、
（ｉ）請求項６４〜８６のいずれか一項に記載のタンパク質又は請求項８７に記載の組成物を、前記タンパク質が存在する場合には腫瘍抗原ＴＡＧ−７２に結合するように、対象に投与するステップと、
（ｉｉ）前記ＴＡＧ７２に結合した前記タンパク質をインビボで検出するステップであって、前記結合したタンパク質の検出により前記癌が位置特定及び／又は検出及び／又は診断及び／又は予後判定されるステップと、
を含む方法。
【請求項９８】
対象における癌の診断又は予後判定方法であって、
（ｉ）前記対象からの試料を請求項６４〜８６のいずれか一項に記載のタンパク質又は請求項８７に記載の組成物と、前記タンパク質が存在する場合には腫瘍抗原ＴＡＧ−７２に結合するように接触させるステップと、
（ｉｉ）前記ＴＡＧ７２に結合した前記タンパク質を検出するステップであって、前記結合したタンパク質の検出が前記癌の診断又は予後判定をもたらすステップと、
を含む方法。
【請求項９９】
前記タンパク質が検出可能標識にコンジュゲートされ、及び前記方法が、ＴＡＧ７２に結合した前記タンパク質を検出するために前記標識を検出するステップを含む、請求項９７又は９８に記載の方法。
【請求項１００】
癌の治療方法であって、請求項６４〜８６のいずれか一項に記載のタンパク質又は請求項８７に記載の組成物を、それが癌細胞上の腫瘍抗原ＴＡＧ−７２に結合して前記癌を治療するように投与するステップを含む方法。
【請求項１０１】
前記タンパク質又はそれにコンジュゲートした化合物が前記癌細胞の死滅を誘導する、請求項１００に記載の方法。
【請求項１０２】
前記タンパク質が、前記癌細胞の死滅を誘導する化合物にコンジュゲートされる、請求項１００又は１０１に記載の方法。
【請求項１】
フレームワーク領域（ＦＲ）１内に位置する少なくとも２つのシステイン残基を含む免疫グロブリン可変領域を含む単離されたタンパク質であって、前記システイン残基の少なくとも２つが化合物にコンジュゲートされない場合に、前記システイン残基間にジスルフィド結合が形成可能である、タンパク質。
【請求項２】
免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ）と免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ）とを含む単離されたタンパク質であって、前記可変領域の少なくとも１つがフレームワーク領域（ＦＲ）１内に位置する少なくとも２つのシステイン残基を含み、前記システイン残基の少なくとも２つが別の化合物にコンジュゲートされない場合に前記システイン残基間にジスルフィド結合が形成可能である、タンパク質。
【請求項３】
前記ジスルフィド結合が非還元条件下で存在する、請求項１又は２に記載のタンパク質。
【請求項４】
前記システイン残基が、Ｋａｂａｔ付番方式により付番して残基２と相補性決定領域（ＣＤＲ）１との間に位置する、請求項１〜３のいずれか一項に記載のタンパク質。
【請求項５】
前記システイン残基がＶＨ内にあり、且つＫａｂａｔ付番方式による残基２から３０の間に位置する、請求項２〜４のいずれか一項に記載のタンパク質。
【請求項６】
前記システイン残基が、Ｋａｂａｔ付番方式により付番して残基７から２０の間及び／又は残基２４から３０の間に位置する、請求項５に記載のタンパク質。
【請求項７】
前記システイン残基が、Ｋａｂａｔ付番方式により付番して残基７から２０の間に位置する、請求項６に記載のタンパク質。
【請求項８】
前記システイン残基がＶＬ内にあり、且つＫａｂａｔ付番方式により付番して残基２から２２の間に位置する、請求項２〜４のいずれか一項に記載のタンパク質。
【請求項９】
前記システイン残基が、Ｋａｂａｔ付番方式により付番して残基７から２０の間に位置する、請求項８に記載のタンパク質。
【請求項１０】
前記システイン残基が、前記可変領域の前記保存されたシステイン残基に対して追加的なものである、請求項１〜９のいずれか一項に記載のタンパク質。
【請求項１１】
前記保存されたシステイン残基が、Ｋａｂａｔ付番方式により付番して、前記ＶＬにおいて残基２３にあり及び／又は前記ＶＨにおいて残基２２にある、請求項１０に記載のタンパク質。
【請求項１２】
前記システイン残基が、前記保存されたシステイン残基に対してＮ末端側に位置する、請求項１０又は１１に記載のタンパク質。
【請求項１３】
前記システイン残基が、以下：
（ｉ）Ｋａｂａｔ付番方式により付番してκ ＶＬの残基８及び残基１１；
（ｉｉ）Ｋａｂａｔ付番方式により付番してκ ＶＬの残基１４及び残基１７；
（ｉｉｉ）Ｋａｂａｔ付番方式により付番してλ ＶＬの残基７及び残基１１；
（ｉｖ）Ｋａｂａｔ付番方式により付番してλ ＶＬの残基１４及び残基１７；
（ｖ）Ｋａｂａｔ付番方式により付番してλ ＶＬの残基８及び残基１２；
（ｖｉ）Ｋａｂａｔ付番方式により付番してＶＨの残基７及び残基１０；
（ｖｉｉ）Ｋａｂａｔ付番方式により付番してＶＨの残基１３及び残基１６
の１つ又は複数に位置する、請求項１〜１２のいずれか一項に記載のタンパク質。
【請求項１４】
前記システイン残基が、以下：
（ｉ）Ｋａｂａｔ付番方式により付番してκ ＶＬの残基１３及び残基１９；
（ｉｉ）Ｋａｂａｔ付番方式により付番してλ ＶＬの残基１３及び残基１９；
（ｖｉ）Ｋａｂａｔ付番方式により付番してＶＨの残基６及び残基９；及び／又は
（ｖｉｉ）Ｋａｂａｔ付番方式により付番してＶＨの残基１２及び残基１８
の１つ又は複数に位置する、請求項１〜１２のいずれか一項に記載のタンパク質。
【請求項１５】
少なくとも１つの請求項２〜１４のいずれか一項に記載のタンパク質を含むＦｖを含む単離されたタンパク質であって、少なくとも１つのＶＬが少なくとも１つのＶＨと結合して抗原結合部位を形成する、タンパク質。
【請求項１６】
前記抗原結合部位を形成する前記ＶＬと前記ＶＨとが単一のポリペプチド鎖にある、請求項１５に記載のタンパク質。
【請求項１７】
（ｉ）単鎖Ｆｖ断片（ｓｃＦｖ）；
（ｉｉ）二量体ｓｃＦｖ（ｄｉ−ｓｃＦｖ）；又は
（ｉｉｉ）Ｆｃ又は重鎖定常ドメイン（ＣＨ）２及び／又はＣＨ３に連結された（ｉ）及び／又は（ｉｉ）の少なくとも１つ
である、請求項１６に記載のタンパク質。
【請求項１８】
前記抗原結合部位を形成する前記ＶＬとＶＨとが異なるポリペプチド鎖にある、請求項１５に記載のタンパク質。
【請求項１９】
（ｉ）ダイアボディ；
（ｉｉ）トリアボディ；又は
（ｉｉｉ）テトラボディ
である、請求項１８に記載のタンパク質。
【請求項２０】
免疫グロブリンである、請求項１８に記載のタンパク質。
【請求項２１】
前記システイン残基がジスルフィド結合によって連結される、請求項１〜２０のいずれか一項に記載のタンパク質。
【請求項２２】
前記システイン残基の少なくとも１つにコンジュゲートした化合物を含む、請求項１〜２０のいずれか一項に記載のタンパク質であって、前記化合物のコンジュゲーションが前記タンパク質の抗原との結合を妨害しない、タンパク質。
【請求項２３】
前記化合物が、放射性同位体、検出可能標識、治療化合物、コロイド、毒素、核酸、ペプチド、タンパク質、対象における前記タンパク質の半減期を増加させる化合物及びそれらの混合物からなる群から選択される、請求項２２に記載のタンパク質。
【請求項２４】
少なくとも１つのＮ末端スレオニン残基又はセリン残基をさらに含む、請求項１〜２３のいずれか一項に記載のタンパク質。
【請求項２５】
前記スレオニン残基又はセリン残基にコンジュゲートした化合物を含む、請求項２４に記載のタンパク質。
【請求項２６】
前記化合物が、放射性同位体、検出可能標識、治療化合物、コロイド、毒素、核酸、ペプチド、タンパク質、対象における前記タンパク質の半減期を増加させる化合物及びそれらの混合物からなる群から選択される、請求項２５に記載のタンパク質。
【請求項２７】
前記システイン残基の少なくとも１つにコンジュゲートした第１の化合物と、前記スレオニン残基又はセリン残基にコンジュゲートした第２の化合物であって、前記第１の化合物と異なる第２の化合物とを含む、請求項２５又は２６に記載のタンパク質。
【請求項２８】
前記タンパク質が、配列番号５７に示される配列と少なくとも約８０％同一の配列を含む少なくとも１つのポリペプチドを含み、前記化合物が単分散ＰＥＧである、請求項２２に記載のタンパク質。
【請求項２９】
前記単分散ＰＥＧが４８個以下のエチレングリコール単位を有する、請求項２８に記載のタンパク質。
【請求項３０】
前記単分散ＰＥＧが約２４個のエチレングリコール単位を有する、請求項２８又は２９に記載のタンパク質。
【請求項３１】
ヒト上皮成長因子（Ｈｅｒ）２、腫瘍関連糖タンパク質ＴＡＧ７２、ＭＵＣ１又は前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）に特異的に結合する、請求項１〜３０のいずれか一項に記載のタンパク質。
【請求項３２】
フレームワーク領域（ＦＲ）１内に位置する２つ以上のシステイン残基を含むように修飾された、配列番号５５、５９、６１又は１０９のいずれか１つに示される配列と少なくとも約８０％同一の配列を含む、請求項３１に記載のタンパク質。
【請求項３３】
配列番号５７、６３、６５、７５、７７、７９、８１、８３、８５、８７、８９、９１、９３、９５、９７、９９、１０１、１０３又は１０５、１１９、１２１、１２３、１２５、１２７、１２９、１３１又は１３３のいずれか１つ又は複数に示される配列と少なくとも約８０％同一の配列を含む、請求項３２に記載のタンパク質。
【請求項３４】
免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ）と免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ）とを含む単離されたタンパク質であって、前記可変領域の少なくとも１つがＮ末端スレオニン残基又はセリン残基を含む、タンパク質。
【請求項３５】
少なくとも１つの請求項３１に記載のタンパク質を含むＦｖを含む単離されたタンパク質であって、少なくとも１つのＶＬが少なくとも１つのＶＨと結合して抗原結合部位を形成する、タンパク質。
【請求項３６】
前記抗原結合部位を形成する前記ＶＬと前記ＶＨとが単一のポリペプチド鎖にある、請求項３５に記載のタンパク質。
【請求項３７】
（ｉ）単鎖Ｆｖ断片（ｓｃＦｖ）；
（ｉｉ）二量体ｓｃＦｖ（ｄｉ−ｓｃＦｖ）；又は
（ｉｉｉ）Ｆｃ又は重鎖定常ドメイン（ＣＨ）２及び／又はＣＨ３に連結された（ｉ）及び／又は（ｉｉ）の少なくとも１つ
である、請求項３６に記載のタンパク質。
【請求項３８】
前記抗原結合部位を形成する前記ＶＬと前記ＶＨとが異なるポリペプチド鎖にある、請求項３５に記載のタンパク質。
【請求項３９】
（ｉ）ダイアボディ；
（ｉｉ）トリアボディ；又は
（ｉｉｉ）テトラボディ
である、請求項３８に記載のタンパク質。
【請求項４０】
免疫グロブリンである、請求項３８に記載のタンパク質。
【請求項４１】
前記スレオニン残基又はセリン残基にコンジュゲートした化合物をさらに含む、請求項３４〜４０のいずれか一項に記載のタンパク質。
【請求項４２】
前記化合物が、放射性同位体、検出可能標識、治療化合物、コロイド、毒素、核酸、ペプチド、タンパク質、対象における前記タンパク質の半減期を増加させる化合物及びそれらの混合物からなる群から選択される、請求項４１に記載のタンパク質。
【請求項４３】
前記Ｎ末端スレオニン残基又はセリン残基を含むように修飾された、配列番号５５、５９、６１又は１０９のいずれか１つに示される配列と少なくとも約８０％同一の配列を含む、請求項３４〜４３のいずれか一項に記載のタンパク質。
【請求項４４】
請求項１〜４３のいずれか一項に記載のタンパク質と薬学的に許容可能な担体とを含む組成物。
【請求項４５】
請求項１〜２１、２４、３１〜４０又は４３のいずれか一項に記載のタンパク質をコードする単離核酸。
【請求項４６】
プロモーターに作動可能に連結された請求項４５に記載の核酸を含む発現コンストラクト。
【請求項４７】
請求項４５に記載の外因性核酸及び／又は請求項４６に記載の発現コンストラクトを含む単離細胞であって、前記タンパク質を発現する細胞。
【請求項４８】
細菌細胞、酵母細胞、哺乳動物細胞又は昆虫細胞である、請求項４７に記載の細胞。
【請求項４９】
請求項１〜２１、２４、３１〜４０又は４３のいずれか一項に記載のタンパク質の作製方法であって、請求項４６に記載の発現コンストラクトを、前記コードされたタンパク質が作製されるのに十分な条件下に維持するステップを含む方法。
【請求項５０】
前記コードされたタンパク質が作製されるのに十分な（sufficient the encoded for the protein to be produced）条件下で請求項４７又は４８に記載の細胞を培養するステップを含む、請求項４９に記載の方法。
【請求項５１】
前記タンパク質を単離するステップを含む、請求項４９又は５０に記載の方法。
【請求項５２】
請求項２２〜３０のいずれか一項に記載のタンパク質の作製方法であって、
（ｉ）請求項１〜２１、２４又は３１〜３３のいずれか一項に記載のタンパク質を得るステップと、
（ｉｉ）前記タンパク質のＦＲ１における前記システイン残基の少なくとも１つに化合物をコンジュゲートするステップであって、それにより前記タンパク質を作製するステップと、
を含む方法。
【請求項５３】
（ｉ）で得られた前記タンパク質における前記システイン残基がジスルフィド結合によって連結され、及び前記方法が、前記化合物を１つ又は複数の前記システイン残基にコンジュゲートする前に、前記ジスルフィド結合を還元するか又はその他の分解するステップをさらに含む、請求項５２に記載の方法。
【請求項５４】
前記ジスルフィド結合を還元するか又はその他の分解するステップにより前記タンパク質に遊離チオール基が生成され、及び前記化合物が、前記化合物の前記タンパク質とのコンジュゲーションを可能にするチオール反応基を有する、請求項５３に記載の方法。
【請求項５５】
前記タンパク質が少なくとも１つのＮ末端セリン残基又はスレオニン残基を含み、及び前記方法が、化合物を前記セリン残基又はスレオニン残基にコンジュゲートするステップをさらに含む、請求項５２〜５４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５６】
請求項２６、２７又は４１〜４３のいずれか一項に記載のタンパク質の作製方法であって、
（ｉ）請求項２４又は３４〜４０のいずれか一項に記載のタンパク質を得るステップと、
（ｉｉ）前記タンパク質の前記Ｎ末端にある少なくとも１つのセリン残基又はスレオニン残基に化合物をコンジュゲートするステップであって、それにより前記タンパク質を作製するステップと、
を含む方法。
【請求項５７】
医薬における請求項１〜４３のいずれか一項に記載のタンパク質又は請求項４４に記載の組成物の使用。
【請求項５８】
対象における病態の治療又は予防方法であって、請求項１〜４３のいずれか一項に記載のタンパク質又は請求項４４に記載の組成物を、それを必要とする対象に投与するステップを含む方法。
【請求項５９】
細胞への化合物の送達方法であって、請求項２２〜３０、４１又は４２のいずれか一項に記載のタンパク質又は請求項４４に記載の組成物に前記細胞を接触させるステップを含む方法。
【請求項６０】
対象に前記タンパク質又は組成物を投与することによって前記細胞を接触させる、請求項５９に記載の方法。
【請求項６１】
対象における抗原を位置特定又は検出する方法であって、
（ｉ）請求項２２〜３０、４１又は４２のいずれか一項に記載のタンパク質が抗原に結合するのに十分な時間にわたり、且つそのような条件下で、前記タンパク質又は請求項４４に記載の組成物を対象に投与するステップであって、前記タンパク質が検出可能標識にコンジュゲートされる、ステップと、
（ｉｉ）前記検出可能標識をインビボで検出又は位置特定するステップと、
を含む方法。
【請求項６２】
対象における病態の診断又は予後判定方法であって、請求項１〜４３のいずれか一項に記載のタンパク質が抗原に結合して複合体を形成するのに十分な時間にわたり、且つそのような条件下で、前記対象からの試料を前記タンパク質又は請求項４４に記載の組成物と接触させるステップと、前記複合体を検出するステップであって、前記複合体の検出が前記対象における前記病態の診断又は予後判定をもたらすステップとを含む方法。
【請求項６３】
前記複合体のレベルを測定するステップであって、前記複合体のレベルの亢進又は低下が、前記対象における前記病態の診断又は予後判定をもたらすステップを含む、請求項６２に記載の方法。
【請求項６４】
免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ）と免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ）との互いの会合を可能にするには不十分な数のアミノ酸を含む領域によって連結された前記ＶＨと前記ＶＬとを各々が含む複数のポリペプチドを含む単離されたタンパク質であって、
（ｉ）前記ポリペプチドの少なくとも１つが、配列番号１１１に示される配列又はそれと少なくとも約６０％同一の配列を含むＶＨを含み；及び
（ｉｉ）少なくとも別の前記ポリペプチドが、配列番号１１３に示される配列又はそれと少なくとも約６０％同一の配列を含むＶＬを含み、
（ｉ）における前記ポリペプチドの前記ＶＨと（ｉｉ）における前記ポリペプチドの前記ＶＬとが会合して、腫瘍抗原ＴＡＧ−７２との特異的な結合能を有するＦｖを形成する、タンパク質。
【請求項６５】
前記ＶＨと前記ＶＬとを連結する前記領域が６個以下のアミノ酸を含む、請求項６４に記載のタンパク質。
【請求項６６】
前記ＶＬが、Ｋａｂａｔ付番方式により付番して５位にスレオニン及び／又はＫａｂａｔ付番方式による５３位にスレオニン及び／又はＫａｂａｔ付番方式により付番して７９位にグルタミン酸を含む、請求項６４又は６５に記載のタンパク質。
【請求項６７】
前記ＶＨが、Ｋａｂａｔ付番方式により付番して８０位にロイシンを含む、請求項６４〜６６のいずれか一項に記載のタンパク質。
【請求項６８】
（ｉ）配列番号１１１に示される配列又はそれと少なくとも約６０％同一の配列を含むＶＨと、
（ｉｉ）配列番号１１３に示される配列又はそれと少なくとも約６０％同一の配列を含むＶＬと、
を各々が含む少なくとも２つのポリペプチドを含む、請求項６４〜６７のいずれか一項に記載のタンパク質であって、
一つのポリペプチドの前記ＶＨと別のポリペプチドの前記ＶＬとが会合して、ＴＡＧ７２との特異的な結合能を有するＦｖを形成する、タンパク質。
【請求項６９】
ダイアボディ、トリアボディ又はテトラボディである、請求項６４〜６８のいずれか一項に記載のタンパク質。
【請求項７０】
（ｉ）前記ポリペプチドの少なくとも１つが、配列番号１１１に示される配列を含むＶＨの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含むＶＨを含み；及び
（ｉｉ）少なくとも別の前記ポリペプチドが、配列番号１１３に示される配列を含むＶＬのＣＤＲを含むＶＬを含む、
請求項６４〜６９のいずれか一項に記載のタンパク質。
【請求項７１】
（ｉ）配列番号１１１に示される配列又はそのヒト化若しくは脱免疫化（deimmunized）形態を含むＶＨと、
（ｉｉ）配列番号１１３に示される配列又はそのヒト化若しくは脱免疫化形態を含むＶＬと、
を双方が含む少なくとも２つのポリペプチドを含む、請求項６４〜７０のいずれか一項に記載のタンパク質。
【請求項７２】
配列番号５５に示される配列と少なくとも８０％同一の配列を各々が含む少なくとも２つのポリペプチドを含む、請求項６４〜７１のいずれか一項に記載のタンパク質。
【請求項７３】
前記ポリペプチドの少なくとも１つが、フレームワーク領域（ＦＲ）１内に位置する少なくとも２つのシステイン残基を含み、前記システイン残基の少なくとも２つが化合物にコンジュゲートされない場合に、前記システイン残基間にジスルフィド結合が形成可能である、請求項６４〜７３のいずれか一項に記載のタンパク質。
【請求項７４】
前記ポリペプチドの少なくとも１つがＮ末端セリン残基及び／又はスレオニン残基を含む、請求項６４〜７３のいずれか一項に記載のタンパク質。
【請求項７５】
配列番号５７、６３、７５、７７、９９、１０１、１０３、１１９、１２１、１２３、１２５、１２７、１２９、１３１又は１３３のいずれか１つ又は複数に示される配列を含む、請求項７３又は７４に記載のタンパク質。
【請求項７６】
それにコンジュゲートした化合物を含む、請求項６４〜７５のいずれか一項に記載のタンパク質。
【請求項７７】
前記化合物が、前記ポリペプチドの少なくとも１つにおけるシステイン残基又はセリン残基又はリジン残基にコンジュゲートされる、請求項７６に記載のタンパク質。
【請求項７８】
前記ポリペプチドの少なくとも１つが、フレームワーク領域（ＦＲ）１内に位置する少なくとも２つのシステイン残基を、前記システイン残基の少なくとも２つが化合物にコンジュゲートされない場合に前記システイン残基間にジスルフィド結合が形成可能であるように位置して含み、及び／又は、前記ポリペプチドの少なくとも１つがＮ末端セリン残基及び／又はスレオニン残基を含み、及び前記化合物が前記システイン残基の少なくとも１つ及び／又は前記セリン残基にコンジュゲートされる、請求項７６又は７７に記載のタンパク質。
【請求項７９】
前記ポリペプチドが前記システイン残基及び前記Ｎ末端セリン残基及び／又はスレオニン残基を含み、及び前記化合物が前記システイン残基の少なくとも１つにコンジュゲートされ、場合により異なる化合物が前記セリン残基にコンジュゲートされる、請求項７８に記載のタンパク質。
【請求項８０】
前記化合物が、放射性同位体、検出可能標識、治療化合物、コロイド、毒素、核酸、ペプチド、タンパク質、対象における前記タンパク質の半減期を増加させる化合物及びそれらの混合物からなる群から選択される、請求項７６〜７９のいずれか一項に記載のタンパク質。
【請求項８１】
前記化合物が生理学的に許容可能なポリマーである、請求項７６〜８０のいずれか一項に記載のタンパク質。
【請求項８２】
前記化合物がポリエチレングリコール（ＰＥＧ）である、請求項７６〜８１のいずれか一項に記載のタンパク質。
【請求項８３】
前記ＰＥＧが単分散ＰＥＧである、請求項８２に記載のタンパク質。
【請求項８４】
前記ＰＥＧが４０００Ｄａ以下の分子量を有する、請求項８２又は８３に記載のタンパク質。
【請求項８５】
前記ＰＥＧが２０００Ｄａ以下の分子量を有する、請求項８２〜８４に記載のタンパク質。
【請求項８６】
前記ＰＥＧが１，５００Ｄａ以下の分子量を有する、請求項８２〜８５に記載のタンパク質。
【請求項８７】
請求項６４〜８６のいずれか一項に記載のタンパク質と薬学的に許容可能な担体とを含む組成物。
【請求項８８】
請求項６４〜７５のいずれか一項に記載のタンパク質における前記ポリペプチドの１つ又は複数をコードする単離核酸。
【請求項８９】
プロモーターに作動可能に連結された請求項８８に記載の核酸を含む発現コンストラクト。
【請求項９０】
請求項６４〜７５のいずれか一項に記載のタンパク質を発現する単離細胞。
【請求項９１】
請求項８８に記載の核酸及び／又は請求項８９に記載の発現コンストラクトを含む、請求項９０に記載の細胞。
【請求項９２】
請求項６４〜７５のいずれか一項に記載のタンパク質の作製方法であって、請求項８９に記載の発現コンストラクトを、前記コードされたポリペプチド及び前記タンパク質が作製されるように維持するステップを含む方法。
【請求項９３】
前記コードされたタンパク質が作製されるのに十分な（sufficient the encoded for the protein to be produced）条件下で請求項９０又は９１に記載の細胞を培養するステップを含む、請求項９２に記載の方法。
【請求項９４】
前記システイン残基の少なくとも１つにコンジュゲートした化合物を含む請求項７６〜８６のいずれか一項に記載のタンパク質の作製方法であって、
（ｉ）請求項７３又は７５のいずれか１項に記載のタンパク質を得るステップと、
（ｉｉ）１つ又は複数の前記ポリペプチドのＦＲ１における前記システイン残基の少なくとも１つに化合物をコンジュゲートするステップであって、それにより前記タンパク質を作製するステップと、
を含む方法。
【請求項９５】
Ｎ末端セリン残基又はスレオニン残基にコンジュゲートした化合物を含む請求項７８又は７９に記載のタンパク質の作製方法であって、
（ｉ）請求項７４又は７５に記載のタンパク質を得るステップと、
（ｉｉ）前記ポリペプチドのＮ末端にある少なくとも１つのセリン残基又はスレオニン残基に化合物をコンジュゲートするステップであって、それにより前記タンパク質を作製するステップと、
を含む方法。
【請求項９６】
前記化合物がポリエチレングリコール（ＰＥＧ）である、請求項９４又は９５に記載の方法。
【請求項９７】
対象における癌を位置特定及び／又は検出及び／又は診断及び／又は予後判定する方法であって、
（ｉ）請求項６４〜８６のいずれか一項に記載のタンパク質又は請求項８７に記載の組成物を、前記タンパク質が存在する場合には腫瘍抗原ＴＡＧ−７２に結合するように、対象に投与するステップと、
（ｉｉ）前記ＴＡＧ７２に結合した前記タンパク質をインビボで検出するステップであって、前記結合したタンパク質の検出により前記癌が位置特定及び／又は検出及び／又は診断及び／又は予後判定されるステップと、
を含む方法。
【請求項９８】
対象における癌の診断又は予後判定方法であって、
（ｉ）前記対象からの試料を請求項６４〜８６のいずれか一項に記載のタンパク質又は請求項８７に記載の組成物と、前記タンパク質が存在する場合には腫瘍抗原ＴＡＧ−７２に結合するように接触させるステップと、
（ｉｉ）前記ＴＡＧ７２に結合した前記タンパク質を検出するステップであって、前記結合したタンパク質の検出が前記癌の診断又は予後判定をもたらすステップと、
を含む方法。
【請求項９９】
前記タンパク質が検出可能標識にコンジュゲートされ、及び前記方法が、ＴＡＧ７２に結合した前記タンパク質を検出するために前記標識を検出するステップを含む、請求項９７又は９８に記載の方法。
【請求項１００】
癌の治療方法であって、請求項６４〜８６のいずれか一項に記載のタンパク質又は請求項８７に記載の組成物を、それが癌細胞上の腫瘍抗原ＴＡＧ−７２に結合して前記癌を治療するように投与するステップを含む方法。
【請求項１０１】
前記タンパク質又はそれにコンジュゲートした化合物が前記癌細胞の死滅を誘導する、請求項１００に記載の方法。
【請求項１０２】
前記タンパク質が、前記癌細胞の死滅を誘導する化合物にコンジュゲートされる、請求項１００又は１０１に記載の方法。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４Ａ】
【図４Ｂ】
【図５】
【図６Ａ】
【図６Ｂ】
【図７Ａ】
【図７Ｂ】
【図８】
【図９】
【図１０Ａ】
【図１０Ｂ】
【図１０Ｃ】
【図１０Ｄ】
【図１０Ｅ】
【図１１Ａ】
【図１１Ｂ】
【図１１Ｃ】
【図１２Ａ】
【図１２Ｂ】
【図１２Ｃ】
【図１３Ａ】
【図１３Ｂ】
【図１３Ｃ】
【図１４Ａ】
【図１４Ｂ】
【図１４Ｃ】
【図１４Ｄ】
【図１５Ａ】
【図１５Ｂ】
【図１５Ｃ】
【図１６】
【図１７】
【図１８Ａ】
【図１８Ｂ】
【図１９】
【図２０】
【図２１Ａ】
【図２１Ｂ】
【図２２Ａ】
【図２２Ｂ】
【図２２Ｃ】
【図２３Ａ】
【図２３Ｂ】
【図２４】
【図２５】
【図２６Ａ】
【図２６Ｂ】
【図２６Ｃ】
【図２６Ｄ】
【図２７Ａ】
【図２７Ｂ】
【図２７Ｃ】
【図２】
【図３】
【図４Ａ】
【図４Ｂ】
【図５】
【図６Ａ】
【図６Ｂ】
【図７Ａ】
【図７Ｂ】
【図８】
【図９】
【図１０Ａ】
【図１０Ｂ】
【図１０Ｃ】
【図１０Ｄ】
【図１０Ｅ】
【図１１Ａ】
【図１１Ｂ】
【図１１Ｃ】
【図１２Ａ】
【図１２Ｂ】
【図１２Ｃ】
【図１３Ａ】
【図１３Ｂ】
【図１３Ｃ】
【図１４Ａ】
【図１４Ｂ】
【図１４Ｃ】
【図１４Ｄ】
【図１５Ａ】
【図１５Ｂ】
【図１５Ｃ】
【図１６】
【図１７】
【図１８Ａ】
【図１８Ｂ】
【図１９】
【図２０】
【図２１Ａ】
【図２１Ｂ】
【図２２Ａ】
【図２２Ｂ】
【図２２Ｃ】
【図２３Ａ】
【図２３Ｂ】
【図２４】
【図２５】
【図２６Ａ】
【図２６Ｂ】
【図２６Ｃ】
【図２６Ｄ】
【図２７Ａ】
【図２７Ｂ】
【図２７Ｃ】
【公表番号】特表２０１２−５３１２１２（Ｐ２０１２−５３１２１２Ａ）
【公表日】平成２４年１２月１０日（２０１２．１２．１０）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１２−５１７９８３（Ｐ２０１２−５１７９８３）
【出願日】平成２２年７月２日（２０１０．７．２）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＡＵ２０１０／０００８４７
【国際公開番号】ＷＯ２０１１／００００５４
【国際公開日】平成２３年１月６日（２０１１．１．６）
【出願人】（５１２００１８５４）アビペップ ピーティーワイ リミテッド (2)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２４年１２月１０日（２０１２．１２．１０）
【国際特許分類】
【出願日】平成２２年７月２日（２０１０．７．２）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＡＵ２０１０／０００８４７
【国際公開番号】ＷＯ２０１１／００００５４
【国際公開日】平成２３年１月６日（２０１１．１．６）
【出願人】（５１２００１８５４）アビペップ ピーティーワイ リミテッド (2)
【Ｆターム（参考）】
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