１つまたは複数の脱Ｎ−アセチル残基が富化され、エキソノイラミニダーゼによる分解に対して抵抗性のある非還元端を有する分離α（２→８）またはα（２→９）オリゴシアル酸誘導体を製造する方法、ならびにそれを含む組成物を提供する。代表的な製造方法は、（ｉ）還元端および非還元端を有するα（２→８）または（２→９）オリゴシアル酸前駆体を、非還元端を脱Ｎ−アセチル化するための条件下で水素化ホウ素ナトリウムで処理する段階、および（ｉｉ）１つまたは複数の脱Ｎ−アセチル化残基およびエキソノイラミニダーゼによる分解に対して抵抗性のある非還元端を有するα（２→８）または（２→９）オリゴシアル酸誘導体を分離する段階を含む。該誘導体に対して特異的な抗体、キット、ならびに大腸菌Ｋ１および髄膜炎菌感染の防御および検出を含む、またがんの診断および治療における使用の方法も提供する。

【特許請求の範囲】
【請求項１】
分離α（２→８）または（２→９）オリゴシアル酸誘導体を製造する方法であって、
還元端および非還元端を有するα（２→８）または（２→９）オリゴシアル酸前駆体を、前記非還元端を脱Ｎ−アセチル化するための条件下で水素化ホウ素ナトリウムで処理することにより、１つまたは複数の脱Ｎ−アセチル化残基を有するα（２→８）または（２→９）オリゴシアル酸誘導体を生成させる段階、ならびに
（ｉ）約２〜２０の重合度、および（ｉｉ）１つまたは複数の脱Ｎ−アセチル化残基およびエキソノイラミニダーゼによる分解に対して抵抗性のある非還元端を有するα（２→８）または（２→９）オリゴシアル酸誘導体を分離する段階を含み、
それにより前記分離α（２→８）または（２→９）オリゴシアル酸誘導体を製造する方法。
【請求項２】
前記オリゴシアル酸誘導体の前記非還元端が脱Ｎ−アセチル化残基である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記脱Ｎ−アセチル化残基がノイラミン酸である、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記オリゴシアル酸誘導体がＮ−アセチル以外の１つまたは複数のＮ−アシル基を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記Ｎ−アシル基がトリクロロアセチルである、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記オリゴシアル酸前駆体が、大腸菌Ｋ１、髄膜炎菌血清グループＢおよび髄膜炎菌血清グループＣからなる群から選択される細菌から取得可能なポリシアル酸ポリマーの酸加水分解から取得可能な、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記オリゴシアル酸誘導体が２〜１０の重合度を有する、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記オリゴシアル酸誘導体がα（２→８）または（２→９）オリゴシアル酸鎖の分離混合物として構成されている、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
α（２→８）または（２→９）オリゴシアル酸鎖の前記混合物が長さがより短い鎖および３：１のシアル酸と脱Ｎ−アセチル化シアル酸との比を有する、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
α（２→８）または（２→９）オリゴシアル酸鎖の前記混合物が長さがより長い鎖および１０：１のシアル酸と脱Ｎ−アセチル化シアル酸との比を有する、請求項８に記載の方法。
【請求項１１】
第２の分子を前記分離α（２→８）または（２→９）オリゴシアル酸誘導体に結合させる段階をさらに含み、前記第２の分子が保護基、アミノ酸、ペプチド、ポリペプチド、脂質、炭水化物、核酸および検出可能な標識からなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
前記第２の分子が免疫調節剤である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
免疫調節剤が毒素またはその誘導体である、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記毒素またはその誘導体が破傷風トキソイドである、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記分離オリゴシアル酸誘導体が、ドデシルアミンＮ−プロピオニルＮｍＢポリシアル酸またはＮ−プロピオニルＮｍＢポリシアル酸に対するＳＥＡＭ２、ＳＥＡＭ３またはＤＡ２の結合を約０．１μｇ／ｍｌ未満のＩＣ５０で阻害することができる、請求項１に記載の方法。
【請求項１６】
前記α（２→８）または（２→９）オリゴシアル酸誘導体をエキソノイラミニダーゼに曝露することにより、エキソノイラミニダーゼによる分解に対して抵抗性のある非還元端を有するα（２→８）オリゴシアル酸誘導体を富化する段階をさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１７】
請求項１に記載の方法により製造される分離α（２→８）または（２→９）オリゴシアル酸誘導体。
【請求項１８】
分離α（２→８）または（２→９）オリゴシアル酸誘導体が、それぞれ非還元端脱Ｎ−アセチル残基を有する可変鎖長のオリゴシアル酸誘導体の混合物としてなる、請求項１の方法により製造される分離α（２→８）または（２→９）オリゴシアル酸誘導体を含む組成物。
【請求項１９】
約２〜２０の重合度、ならびに還元端および非還元端を有するα（２→８）または（２→９）オリゴシアル酸誘導体を含み、前記非還元端がエキソノイラミニダーゼによる分解に対して抵抗性のある脱Ｎ−アセチル化残基を含む、組成物。
【請求項２０】
前記オリゴシアル酸誘導体の前記非還元端が脱Ｎ−アセチル化残基である、請求項１９に記載の組成物。
【請求項２１】
前記脱Ｎ−アセチル化残基がノイラミン酸である、請求項１９に記載の組成物。
【請求項２２】
前記オリゴシアル酸誘導体がＮ−アセチル以外の１つまたは複数のＮ−アシル基を含む、請求項１９に記載の組成物。
【請求項２３】
前記分離オリゴシアル酸誘導体の前記還元端が還元されている、請求項１９に記載の組成物。
【請求項２４】
前記オリゴシアル酸が、大腸菌Ｋ１、髄膜炎菌血清グループＢおよび髄膜炎菌血清グループＣからなる群から選択される細菌から取得可能なポリシアル酸ポリマーから取得可能な、請求項１９に記載の組成物。
【請求項２５】
前記オリゴシアル酸誘導体が約２〜１０の重合度を有する、請求項２４に記載の組成物。
【請求項２６】
前記オリゴシアル酸誘導体がオリゴシアル酸鎖の分離混合物として構成されている、請求項１９に記載の組成物。
【請求項２７】
オリゴシアル酸鎖の前記混合物が長さがより短い鎖および約３：１のシアル酸と脱Ｎ−アセチル化シアル酸との比を含む、請求項２６に記載の組成物。
【請求項２８】
オリゴシアル酸鎖の前記混合物が長さがより長い鎖および約１０：１のシアル酸と脱Ｎ−アセチル化シアル酸との比を含む、請求項２６に記載の組成物。
【請求項２９】
前記オリゴシアル酸誘導体が結合体を含む、請求項１９に記載の組成物。
【請求項３０】
前記結合体が、保護基、アミノ酸、ペプチド、ポリペプチド、脂質、炭水化物、核酸および検出可能な標識からなる群から選択される１つまたは複数の第２の分子に結合した前記オリゴシアル酸誘導体を第１の分子として含む、請求項２９に記載の組成物。
【請求項３１】
前記第２の分子が免疫調節剤である、請求項３０に記載の組成物。
【請求項３２】
前記免疫調節剤が毒素またはその誘導体である、請求項３１に記載の組成物。
【請求項３３】
前記毒素またはその誘導体が破傷風トキソイドである、請求項３２に記載の組成物。
【請求項３４】
前記オリゴシアル酸誘導体が１つまたは複数の免疫原性賦形剤を含む製剤として構成されている、請求項１９に記載の組成物。
【請求項３５】
前記オリゴシアル酸誘導体が、ドデシルアミンＮ−プロピオニルＮｍＢポリシアル酸またはＮ−プロピオニルＮｍＢポリシアル酸に対するＳＥＡＭ２、ＳＥＡＭ３またはＤＡ２の結合を約０．１μｇ／ｍｌ未満のＩＣ５０で阻害することができる、請求項１９に記載の組成物。
【請求項３６】
前記分離α（２→８）または（２→９）オリゴシアル酸誘導体が、脱Ｎ−アセチル残基で富化された非還元端を有する可変鎖長のオリゴシアル酸誘導体の混合物としてなる、請求項１９に記載の組成物。
【請求項３７】
１つまたは複数の脱Ｎ−アセチル化残基が富化され、エキソノイラミニダーゼによる分解に対して抵抗性のある非還元端を含むα（２→８）または（２→９）オリゴシアル酸誘導体に対して特異的な分離抗体。
【請求項３８】
前記抗体が髄膜炎菌グループＢ（ＮｍＢ）およびグループＣ（ＮｍＣ）細菌の補体媒介溶菌およびオプソニン食作用の能力がある、請求項３７に記載の分離抗体。
【請求項３９】
前記抗体が非還元端脱Ｎ−アセチルシアル酸残基に対して特異的である、請求項３７に記載の分離抗体。
【請求項４０】
前記抗体が、図１９および２０に示すような軽および重鎖可変相補性決定領域ポリペプチド配列を有するモノクローナル抗体である、請求項３９に記載の分離抗体。
【請求項４１】
前記抗体が、図１９または２０に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）ポリペプチド配列から選択されるＣＤＲポリペプチド配列を有するモノクローナル抗体である、請求項３７に記載の分離抗体。
【請求項４２】
前記モノクローナル抗体がヒト化モノクローナル抗体である、請求項４１に記載の分離抗体。
【請求項４３】
がんを有することが疑われる対象から得られる生物学的サンプルを、請求項３７に記載の抗体と接触させる段階を含み、抗体の結合が対象におけるがん細胞の存在を示す、対象におけるがん細胞を検出する方法。
【請求項４４】
請求項３７に記載の抗体を含む有効な量の薬学的に許容される製剤を対象に投与する段階を含み、前記投与が前記抗体に曝露させたがん細胞の生存能の低下を促進する、
対象におけるがん細胞の成長を阻害する方法。
【請求項４５】
脱Ｎ−アセチル化シアル酸（ｄｅＮＡｃＳＡ）エピトープを含む細菌に特異的に結合する、対象における抗体を誘発する方法であって、
約２〜２０の重合度ならびに還元端および非還元端を有するα（２→８）または（２→９）オリゴシアル酸誘導体を含む免疫原性組成物を対象に投与する段階を含み、前記非還元端が１つまたは複数の脱Ｎ−アセチル化残基について富化され、エキソノイラミニダーゼによる分解に対して抵抗性があり、前記投与が細菌のｄｅＮＡｃＳＡエピトープに特異的に結合する抗体の産生を誘発するのに有効である、対象における抗体を誘発する方法。
【請求項４６】
細菌が髄膜炎菌グループＢ、Ｃまたは大腸菌Ｋ１である、請求項４５に記載の方法。
【請求項４７】
対象における脱Ｎ−アセチル化シアル酸（ｄｅＮＡｃＳＡ）エピトープを含むがん細胞に対する抗体を誘発する方法であって、
約２〜２０の重合度ならびに還元端および非還元端を有するα（２→８）または（２→９）オリゴシアル酸誘導体を含む免疫原性組成物を対象に投与する段階を含み、前記非還元端が１つまたは複数の脱Ｎ−アセチル化残基について富化され、エキソノイラミニダーゼによる分解に対して抵抗性があり、前記投与が前記がん細胞のｄｅＮＡｃＳＡエピトープに特異的に結合する抗体の産生を誘発するのに有効である、抗体を誘発する方法。
【請求項４８】
がんが黒色腫、リンパ腫または神経芽腫である、請求項４７に記載の方法。
【請求項４９】
免疫原性組成物のα（２→８）または（２→９）オリゴシアル酸誘導体を水素化ホウ素ナトリウム還元による非還元端残基の選択的脱アセチル化により調製する、請求項４７に記載の方法。
【請求項５０】
前記分離α（２→８）または（２→９）オリゴシアル酸誘導体がポリシアル酸誘導体の凝集体を含む、請求項１９に記載の組成物。
【請求項５１】
前記凝集体が顕微鏡的粒子を含む、請求項５０に記載の組成物。
【請求項５２】
１つまたは複数のα（２→８）または（２→９）オリゴシアル酸誘導体を、凝集体を形成するように凝集条件下で混合する段階を含む、
α（２→８）または（２→９）オリゴシアル酸誘導体を含む凝集体を製造する方法。
【請求項５３】
凝集条件が加熱または凝集賦形剤の添加である、請求項５２に記載の方法。
【請求項５４】
凝集賦形剤が水酸化アルミニウムである、請求項５２に記載の方法。
【請求項５５】
（ｉ）約２〜２０の重合度、（ｉｉ）ドデシルアミンＮ−プロピオニルＮｍＢポリシアル酸またはＮ−プロピオニルＮｍＢポリシアル酸に対するＳＥＡＭ２、ＳＥＡＭ３またはＤＡ２抗体の結合の阻害の約０．１μｇ／ｍｌ未満のＩＣ５０、（ｉｉｉ）エキソノイラミニダーゼによる分解に対して抵抗性のある非還元端脱Ｎ−アセチル残基を有する分離α（２→８）または（２→９）オリゴシアル酸誘導体を含むワクチン組成物。
【請求項５６】
前記α（２→８）または（２→９）オリゴシアル酸誘導体が１つまたは複数のＮ−トリクロロアセチルシアル酸残基を含む、請求項５５に記載のワクチン組成物。
【請求項５７】
前記α（２→８）または（２→９）オリゴシアル酸誘導体が１つまたは複数のＮ−プロピオニルシアル酸残基を含む、請求項５５に記載のワクチン組成物。
【請求項５８】
前記α（２→８）または（２→９）オリゴシアル酸誘導体が約２〜１０の重合度を有する、請求項５５に記載のワクチン組成物。
【請求項５９】
前記α（２→８）または（２→９）オリゴシアル酸誘導体が約２〜６の重合度を有する、請求項５５に記載のワクチン組成物。
【請求項６０】
前記α（２→８）または（２→９）オリゴシアル酸誘導体が二量体、三量体および四量体からなる群から選択される、請求項５５に記載のワクチン組成物。
【請求項６１】
前記α（２→８）または（２→９）オリゴシアル酸誘導体が結合体を含む、請求項５５に記載のワクチン組成物。
【請求項６２】
前記結合体が、免疫調節剤を含む第２の分子に結合した前記α（２→８）または（２→９）オリゴシアル酸誘導体を第１の分子として含む、請求項５５に記載のワクチン組成物。
【請求項６３】
前記免疫調節剤が毒素またはその誘導体である、請求項６２に記載のワクチン組成物。
【請求項６４】
前記毒素またはその誘導体が破傷風トキソイドである、請求項６３に記載のワクチン組成物。
【請求項６５】
前記オリゴシアル酸誘導体が、ＮＰｒＳｉａ−ＴＴ、ＯＳ−ＴＴおよびＴｃＡｃ−ＴＴからなる群から選択されるα（２→８）オリゴシアル酸誘導体である、請求項５５に記載のワクチン組成物。
【請求項６６】
（ｉ）約２〜２０の重合度、（ｉｉ）約５０％〜９８％の脱Ｎ−アセチルシアル酸含量、および（ｉｉｉ）エキソノイラミニダーゼによる分解に対して抵抗性のある非還元端脱Ｎ−アセチル残基を有する分離α（２→８）または（２→９）オリゴシアル酸誘導体を含むワクチン組成物。
【請求項６７】
前記α（２→８）または（２→９）オリゴシアル酸誘導体が約８８％〜９８％の脱Ｎ−アセチルシアル酸含量を有する、請求項６６に記載のワクチン組成物。
【請求項６８】
前記α（２→８）または（２→９）オリゴシアル酸誘導体が約２〜１０の重合度を有する、請求項６６に記載のワクチン組成物。
【請求項６９】
前記α（２→８）または（２→９）オリゴシアル酸誘導体が約２〜６の重合度を有する、請求項６６に記載のワクチン組成物。
【請求項７０】
前記α（２→８）または（２→９）オリゴシアル酸誘導体が二量体、三量体および四量体からなる群から選択される、請求項６６に記載のワクチン組成物。
【請求項７１】
前記α（２→８）または（２→９）オリゴシアル酸誘導体ワクチンが結合体を含む、請求項６６に記載のワクチン組成物。
【請求項７２】
前記結合体が、免疫調節剤を含む第２の分子に結合した前記α（２→８）または（２→９）オリゴシアル酸誘導体を第１の分子として含む、請求項６７に記載のワクチン組成物。
【請求項７３】
前記免疫調節剤が毒素またはその誘導体である、請求項７２に記載のワクチン組成物。
【請求項７４】
前記毒素またはその誘導体が破傷風トキソイドである、請求項７３に記載のワクチン組成物。
【請求項７５】
前記オリゴシアル酸誘導体がα（２→８）オリゴシアル酸誘導体ＤｅＮＡｃ−ＴＴである、請求項７４に記載のワクチン組成物。

【図１】

【図２】

【図３】

【図４】

【図５】

【図６】

【図７】

【図８】

【図９】

【図１０】

【図１１】

【図１２】

【図１３】

【図１４】

【図１５】

【図１６】

【図１７】

【図１８】

【図１９】

【図２０】

【図２１】

【公表番号】特表２０１０−５３４１９６（Ｐ２０１０−５３４１９６Ａ）
【公表日】平成２２年１１月４日（２０１０．１１．４）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１０−５１５２８０（Ｐ２０１０−５１５２８０）
【出願日】平成２０年７月３日（２００８．７．３）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００８／０６９２５１
【国際公開番号】ＷＯ２００９／００６６２０
【国際公開日】平成２１年１月８日（２００９．１．８）
【出願人】（５０５３０７５６３）チルドレンズ　ホスピタル　アンド　リサーチ　センター　アット　オークランド (12)
【Ｆターム（参考）】