カリクレイン７を阻害するための環状デプシペプチドの使用
本願は、式（Ｉ）を有する環状デプシペプチドまたはその誘導体、および例えばカリクレイン７の阻害剤としてのその使用に関する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は環状デプシペプチドまたはその誘導体に関する。
【背景技術】
【０００２】
発明の背景
カリクレイン７は、キモトリプシン様活性を示すカリクレイン遺伝子ファミリーのＳ１セリンプロテアーゼである。ヒトカリクレイン７（ｈＫ７、ＫＬＫ７または角質層キモトリプシン酵素（ＳＣＣＥ）、Swissprot P49862）は皮膚生理学において重要な役割を果たす（１、２、３）。これは主として皮膚において発現し、皮膚生理に深く関与していることが報告されている。ｈＫ７は落屑プロセスにおける角化扁平上皮細胞の細胞間接着構造の分解に関与する。落屑プロセスは、皮膚障壁機能に深く関与する皮膚の最外層である角質層の一定の厚みを維持するために十分に制御され、角質細胞のデノボ生産と繊細に釣り合いを取っている。この観点から、ｈＫ７は角質接着斑タンパク質コルネオデスモシンおよびデスモコリン１を切断することができると報告されている（４、５、６）。両方のコルネオデスモソームの分解は、落屑に必要である。さらに、ごく最近、２種の脂質プロセッシング酵素β−グルコセレブロシダーゼおよび酸性スフィンゴミエリナーゼがｈＫ７によって分解され得ることが示されている（７）。両方の脂質プロセッシング酵素は、それらの基質であるグルコシルセラミドおよびスフィンゴミエリンと共に分泌され、これらの極性脂質前駆体をそれらのより非極性な生成物、例えばセラミドに処理し、これは次いで、細胞外層状膜に取り込まれる。該層状膜構造は機能的皮膚障壁に重要である。最後に、ｈＫ７はインビトロでインターロイキン−１β（ＩＬ−１β）前駆体をその活性形態に活性化することが示されている（８）。角化細胞はＩＬ−１βを発現するが、特異的ＩＬ−１β変換酵素（ＩＣＥまたはカスパーゼ１）の活性形態を発現しないため、ヒト上皮におけるＩＬ−１β活性化は別のプロテアーゼ（潜在的な候補はｈＫ７である）を介して生じることが提案されている。
【０００３】
最近の研究は、ｈＫ７の増加した活性を、アトピー性皮膚炎、乾癬またはネザートン症候群のような炎症性皮膚疾患と関連付けている。これは脱制御落屑を引き起こすコルネオデスモソームの脱制御分解、阻害された層状膜構造を引き起こす脂質プロセッシング酵素の向上した分解または前炎症性サイトカインＩＬ−１βの脱制御活性化を導き得る。その最終結果は、皮膚障壁機能不全および炎症である（WO-A-2004/108139も参照されたい）。
【０００４】
ｈＫ７活性が様々なレベルで制御されているため、炎症性皮膚疾患において、多様な因子が上昇したｈＫ７活性に関与している可能性がある。第一に、発現されるプロテアーゼの量は遺伝的因子によって影響され得る。かかる遺伝的リンク、ｈＫ７遺伝子の３’−ＵＴＲにおける多型は、近年記載された（９）。著者らはカリクレイン７遺伝子の３’−ＵＴＲにおける記載の４塩基対挿入がｈＫ７ｍＲＮＡを安定化して、ｈＫ７の過剰発現をもたらすと仮定している。第二に、ｈＫ７は層状体を介して角質層細胞外空間に酵素原として分泌され、自己活性化することができないため、別のプロテアーゼ、例えばｈＫ５によって活性化される必要がある（５）。かかる活性化酵素の制御されていない活性はｈＫ７の過剰活性化をもたらす可能性がある。第三に、活性化ｈＫ７はＬＥＫＴＩ、ＡＬＰまたはエラフィンのような天然阻害剤によって阻害することができる（１０、１１）。かかる阻害剤の発現低下または欠如は、ｈＫ７の活性上昇を引き起こす可能性がある。近年、ＬＥＫＴＩをコードするｓｐｉｎｋ５遺伝子における変異がネザートン症候群の原因であり（１２）、該遺伝子における点突然変異がアトピー性皮膚炎に関連している（１３、１４）ことが見出された。最後に、ｈＫ７の活性を制御する別のレベルはｐＨである。ｈＫ７は中性乃至わずかにアルカリ性のｐＨが至適であり（２）、皮膚の最内層から最外層にかけて中性から酸性のｐＨ勾配が存在する。石けんのような環境因子は、角質層の最外層においてｈＫ７の至適ｐＨにｐＨを上昇させて、ｈＫ７活性を上昇させる可能性がある。
【０００５】
上昇したｈＫ７活性が炎症性および過増殖性皮膚疾患を含む皮膚障壁機能不全による皮膚疾患に関与しているという仮説は、次の研究によって支持される：第一に、ネザートン症候群患者はセリンプロテアーゼ活性の表現型依存性上昇、コルネオデスモソームの減少、脂質プロセッシング酵素β−グルコセレブロシダーゼおよび酸性スフィンゴミエリナーゼの減少および障壁機能不全を示す（１５、１６）。第二に、ヒトカリクレイン７を過剰発現するトランスジェニックマウスはアトピー性皮膚炎を有する患者において見られるものと同様の皮膚表現型を示す（１７、１８、１９）。第三に、アトピー性皮膚炎および乾癬患者の皮膚において、上昇したｈＫ７濃度が記載された（１７、２０）。さらにまた、上昇したＫ７の活性およびそれによる上皮障壁機能不全はまた、炎症性腸疾患およびクローン病のような他の上皮疾患の病理に重要な役割を果たし得る。
【０００６】
したがって、ｈＫ７は、アトピー性皮膚炎、乾癬、ネザートン症候群または他の掻痒性皮膚疾患、例えば結節性痒疹、老人の不特定の掻痒ならびに上記障壁機能不全を伴う他の疾患、例えば炎症性腸疾患およびクローン病のような炎症性および／または過増殖性および掻痒性皮膚疾患の処置のための潜在的な標的と考えられ、その特異的調節剤（アゴニストまたは阻害剤）が必要とされている。
【０００７】
処置はそれぞれ、局所または全身投与、例えばクリーム、軟膏および座薬によって、または経口、皮下または静脈内投与であってよい。
【０００８】
コンドロマイセス（Chondromyces）はポリアンギウム科（Polyangiaceae）の１種であり、デルタプロテオバクテリアのミキソコッカス目（Myxocccales）に属する。粘液細菌目とも称されるミキソコッカス目の細菌は、他のほとんどの細菌とそれらを区別する２個の特徴を有する、グラム陰性桿菌である。それらは、飢餓状態になると能動的滑走メカニズムを用いて固体表面上に集合し、集合して子実体を形成する（Kaiser (2003)）。本発明者らは、カリクレイン７を特異的に調節することができるコンドロマイセスによって生産される環状デプシペプチドを同定した。
【発明の概要】
【０００９】
発明の要約
本発明は、カリクレイン７依存性疾患の処置用医薬として使用するための、式（Ｉ）：
【化１】
〔式中、Ａ７のカルボキシ基とＡ２のヒドロキシ基の間にエステル結合が見られ、ＸおよびＡ１はそれぞれ独立して任意的に存在しており、Ｘは何れかの化学残基であり、Ａ１は標準アミノ酸であり、Ａ２はスレオニン、セリンまたは５−メチルヒドロキシプロリンであり、Ａ３は非塩基性標準アミノ酸または非塩基性非標準アミノ酸、またはその非塩基性誘導体であり、Ａ４はＡｈｐ、デヒドロ−ＡＨＰ、プロリンまたはその誘導体であり、Ａ５はイソロイシン、ロイシン、フェニルアラニン、プロリン、スレオニンまたはバリンであり、Ａ６はアラニン、フェニルアラニン、トリプトファン、チロシンまたはその誘導体であり、Ａ７はロイシン、イソロイシンまたはバリンである〕
の構造を有する環状デプシペプチドまたはその誘導体、または環状デプシペプチドまたはその誘導体の薬学的に許容される塩に関する。
【００１０】
好ましくは、カリクレイン７依存性疾患はネザートン症候群、掻痒性皮膚疾患、例えば結節性痒疹、膿疱性乾癬およびがん、特に卵巣がんから成る群から選択される。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】式（ＩＩ）の化合物の１Ｈ−ＮＭＲスペクトル（６００ＭＨｚ、ｄ６−ＤＭＳＯ）。
【図２】式（ＩＩ）の化合物の１３Ｃ−ＮＭＲスペクトル（１５０ＭＨｚ、ｄ６−ＤＭＳＯ）。
【図３】式（ＶＩＩＩ）の化合物の１Ｈ−ＮＭＲスペクトル（６００ＭＨｚ、ｄ６−ＤＭＳＯ）。
【図４】式（ＶＩＩＩ）の化合物の１３Ｃ−ＮＭＲスペクトル（１５０ＭＨｚ、ｄ６−ＤＭＳＯ）。
【図５】Ａｈｐが３−アミノ−２−ピペリドンに変換されている式（ＩＩ）の環状デプシペプチド誘導体の１Ｈ−ＮＭＲスペクトル（実施例４）。
【図６】実施例５の環状デプシペプチド誘導体の１Ｈ−ＮＭＲスペクトル。
【図７】実施例６の環状デプシペプチド誘導体の１Ｈ−ＮＭＲスペクトル。
【図８】実施例７の環状デプシペプチド誘導体の１Ｈ−ＮＭＲスペクトル。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
発明の詳細な説明
上記のとおり、本発明は、カリクレイン７依存性疾患の処置用医薬として使用するための、式（Ｉ）：
【化２】
〔式中、Ａ７のカルボキシ基とＡ２のヒドロキシ基の間にエステル結合が見られ、ＸおよびＡ１はそれぞれ独立して任意的に存在しており、Ｘは何れかの化学残基であり、Ａ１は標準アミノ酸であり、Ａ２はスレオニン、セリンまたは５−メチルヒドロキシプロリンであり、Ａ３は非塩基性標準アミノ酸または非塩基性非標準アミノ酸、またはその非塩基性誘導体であり、Ａ４はＡｈｐ、デヒドロ−ＡＨＰ、プロリンまたはその誘導体であり、Ａ５はイソロイシン、ロイシン、フェニルアラニン、プロリン、スレオニンまたはバリンであり、Ａ６はアラニン、フェニルアラニン、トリプトファン、チロシンまたはその誘導体であり、Ａ７はロイシン、イソロイシンまたはバリンである〕
の構造を有する環状デプシペプチドまたはその誘導体、または環状デプシペプチドまたはその誘導体の薬学的に許容される塩に関する。
【００１３】
好ましくは、カリクレイン７依存性疾患はネザートン症候群、掻痒性皮膚疾患、例えば結節性痒疹、膿疱性乾癬およびがん、特に卵巣がんから成る群から選択される。
【００１４】
本発明の環状デプシペプチドの具体的な態様は：
【化３】
である。
【００１５】
式（ＩＩ）〜（ＶＩＩ）の環状デプシペプチドは、本発明のコンドロマイセス・クロカツス（Chondromyces crocatus）株（DSM 19329）によって生産することができる。
【００１６】
本発明の環状デプシペプチドの他の態様は：
【化４】
である。
【００１７】
式（ＶＩＩＩ）〜（Ｘ）の環状デプシペプチドは、本発明のコンドロマイセス・ロブスツス（Chondromyces robustus）（DSM 19330）によって生産することができる。
【００１８】
本発明の環状デプシペプチドのさらなる具体的な態様は次のとおりである：
表１
【表１】
【表２】
【表３】
【表４】
【００１９】
略語表
【表５】
【００２０】
「化学残基」は何れかの有機または無機化学基であってよい。表現「化学残基」は、置換もしくは非置換脂肪族基、例えばＣ１−Ｃ３アルキル、Ｃ１−Ｃ６アルキルまたはＣ１−Ｃ１２アルキル、置換もしくは非置換アリール、置換もしくは非置換アリールアルキル、置換もしくは非置換ヘテロアリールまたはハロゲンを含むが、これらに限定されない。例えば、特許請求の範囲に定義の化学残基は下記の化学基のいずれかであってよい。
【００２１】
表現「化学残基」は、アミノ酸、ペプチド、ポリペプチド、タンパク質等を含むが、これらに限定されない。
無機化学基の例は、例えばＢｒまたはＣｌのようなハロゲンである。
【００２２】
「脂肪族基」は炭素原子、水素原子、ハロゲン原子、酸素、窒素または他の原子の何れかの組合せを含む非芳香族性基であり、所望により１個以上の不飽和単位、例えば二重および／または三重結合を含んでいてもよい。脂肪族基は直鎖、分枝鎖または環式であってよく、好ましくは約１〜約２４個の炭素原子、より典型的には約１〜約１２個の炭素原子を含む。脂肪族炭化水素基に加えて、脂肪族基は例えば、ポリアルコキシアルキル、例えばポリアルキレングリコール、ポリアミンおよびポリイミンを例えば含む。かかる脂肪族基はさらに置換されていてもよい。
【００２３】
用語「Ｃ１−Ｃ３アルキル」、「Ｃ１−Ｃ６アルキル」、「Ｃ１−Ｃ１２アルキル」は、本明細書において使用するとき、それぞれ１〜３個、１〜６個または１〜１２個の炭素原子を含む飽和直鎖または分枝鎖炭化水素基を意味する。Ｃ１−Ｃ３アルキル基の例はメチル、エチル、プロピルおよびイソプロピル基を含み；Ｃ１−Ｃ６アルキル基の例はメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｎ−ペンチル、ネオペンチルおよびｎ−ヘキシル基を含むがこれらに限定されず；Ｃ１−Ｃ１２アルキル基の例はエチル、プロピル、イソプロピル、ヘキシル、ヘプチル、オクチル、ノニル、デシル、ウンデシル、ドデシル基等を含む。
【００２４】
用語「置換アルキル」は、本明細書において使用するとき、１個、２個、３個またはそれ以上の脂肪族置換基で置換された、Ｃ１−Ｃ１２アルキルまたはＣ１−Ｃ６アルキル基のようなアルキルを意味する。
好適な脂肪族置換基は、−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−Ｉ、−ＯＨ、保護ヒドロキシ、脂肪族エーテル、芳香族性エーテル、オキソ、−ＮＯ２、−ＣＮ、所望によりハロゲンで置換されていてもよい−Ｃ１−Ｃ１２−アルキル（例えばペルハロアルキル）、所望によりハロゲンで置換されていてもよいＣ２−Ｃ１２−アルケニル、所望によりハロゲンで置換されていてもよい−Ｃ２−Ｃ１２−アルキニル、−ＮＨ２、保護アミノ、−ＮＨ−Ｃ１−Ｃ１２−アルキル、−ＮＨ−Ｃ２−Ｃ１２−アルケニル、−ＮＨ−Ｃ２−Ｃ１２−アルケニル、−ＮＨ−Ｃ３−Ｃ１２−シクロアルキル、−ＮＨ−アリール、−ＮＨ−ヘテロアリール、−ＮＨ−ヘテロシクロアルキル、−ジアルキルアミノ、−ジアリールアミノ、−ジヘテロアリールアミノ、−Ｏ−Ｃ１−Ｃ１２−アルキル、−Ｏ−Ｃ２−Ｃ１２−アルケニル、−Ｏ−Ｃ２−Ｃ１２−アルキニル、−Ｏ−Ｃ３−Ｃ１２−シクロアルキル、−Ｏ−アリール、−Ｏ−ヘテロアリール、−Ｏ−ヘテロシクロアルキル、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ１−Ｃ１２−アルキル、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ２−Ｃ１２−アルケニル、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ２−Ｃ１２−アルキニル、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ３−Ｃ１２−シクロアルキル、−Ｃ（Ｏ）−アリール、−Ｃ（Ｏ）−ヘテロアリール、−Ｃ（Ｏ）−ヘテロシクロアルキル、−ＣＯＮＨ２、−ＣＯＮＨ−Ｃ１−Ｃ１２−アルキル、−ＣＯＮＨ−Ｃ２−Ｃ１２−アルケニル、−ＣＯＮＨ−Ｃ２−Ｃ１２−アルキニル、−ＣＯＮＨ−Ｃ３−Ｃ１２−シクロアルキル、−ＣＯＮＨ−アリール、−ＣＯＮＨ−ヘテロアリール、−ＣＯＮＨ−ヘテロシクロアルキル、−ＣＯ２−Ｃ１−Ｃ１２−アルキル、−ＣＯ２−Ｃ２−Ｃ１２−アルケニル、−ＣＯ２−Ｃ２−Ｃ１２−アルキニル、−ＣＯ２−Ｃ３−Ｃ１２−シクロアルキル、−ＣＯ２−アリール、−ＣＯ２−ヘテロアリール、−ＣＯ２−ヘテロシクロアルキル、−ＯＣＯ２−Ｃ１−Ｃ１２−アルキル、−ＯＣＯ２−Ｃ２−Ｃ１２−アルケニル、−ＯＣＯ２−Ｃ２−Ｃ１２−アルキニル、−ＯＣＯ２−Ｃ３−Ｃ１２−シクロアルキル、−ＯＣＯ２−アリール、−ＯＣＯ２−ヘテロアリール、−ＯＣＯ２−ヘテロシクロアルキル、−ＯＣＯＮＨ２、−ＯＣＯＮＨ−Ｃ１−Ｃ１２−アルキル、−ＯＣＯＮＨ−Ｃ２−Ｃ１２−アルケニル、−ＯＣＯＮＨ−Ｃ２−Ｃ１２−アルキニル、−ＯＣＯＮＨ−Ｃ３−Ｃ１２−シクロアルキル、−ＯＣＯＮＨ−アリール、−ＯＣＯＮＨ−ヘテロアリール、−ＯＣＯＮＨ−ヘテロシクロアルキル、−ＮＨＣ（Ｏ）−Ｃ１−Ｃ１２−アルキル、−ＮＨＣ（Ｏ）−Ｃ２−Ｃ１２−アルケニル、−ＮＨＣ（Ｏ）−Ｃ２−Ｃ１２−アルキニル、−ＮＨＣ（Ｏ）−Ｃ３−Ｃ１２−シクロアルキル、−ＮＨＣ（Ｏ）−アリール、−ＮＨＣ（Ｏ）−ヘテロアリール、−ＮＨＣ（Ｏ）−ヘテロシクロアルキル、−ＮＨＣＯ２−Ｃ１−Ｃ１２−アルキル、−ＮＨＣＯ２−Ｃ２−Ｃ１２−アルケニル、−ＮＨＣＯ２−Ｃ２−Ｃ１２−アルキニル、−ＮＨＣＯ２−Ｃ３−Ｃ１２−シクロアルキル、−ＮＨＣＯ２−アリール、−ＮＨＣＯ２−ヘテロアリール、−ＮＨＣＯ２−ヘテロシクロアルキル、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２、ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ−Ｃ１−Ｃ１２−アルキル、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ−Ｃ２−Ｃ１２−アルケニル、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ−Ｃ２−Ｃ１２−アルキニル、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ−Ｃ３−Ｃ１２−シクロアルキル、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ−アリール、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ−ヘテロアリール、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ−ヘテロシクロアルキル、ＮＨＣ（Ｓ）ＮＲ２、ＮＨＣ（Ｓ）ＮＨ−Ｃ１−Ｃ１２−アルキル、−ＮＨＣ（Ｓ）ＮＨ−Ｃ２−Ｃ１２−アルケニル、−ＮＨＣ（Ｓ）ＮＨ−Ｃ２−Ｃ１２−アルキニル、−ＮＨＣ（Ｓ）ＮＨ−Ｃ３−Ｃ１２−シクロアルキル、−ＮＨＣ（Ｓ）ＮＨ−アリール、−ＮＨＣ（Ｓ）ＮＲ−ヘテロアリール、−ＮＨＣ（Ｓ）ＮＨ−ヘテロシクロアルキル、−ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ２、ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ−Ｃ１−Ｃ１２−アルキル、−ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ−Ｃ２−Ｃ１２−アルケニル、−ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ−Ｃ２−Ｃ１２−アルキニル、−ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ−Ｃ３−Ｃ１２−シクロアルキル、−ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ−アリール、−ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ−ヘテロアリール、−ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ−ヘテロシクロアルキル、ＮＨＣ（ＮＨ）−Ｃ１−Ｃ１２−アルキル、−ＮＨＣ（ＮＨ）−Ｃ２−Ｃ１２−アルケニル、−ＮＨＣ（ＮＨ）−Ｃ２−Ｃ１２−アルキニル、−ＮＨＣ（ＮＨ）−Ｃ３−Ｃ１２−シクロアルキル、−ＮＨＣ（ＮＨ）−アリール、−ＮＨＣ（ＮＨ）−ヘテロアリール、−ＮＨＣ（ＮＨ）−ヘテロシクロアルキル、−Ｃ（ＮＲ）ＮＨ−Ｃ１−Ｃ１２−アルキル、−Ｃ（ＮＨ）ＮＨ−Ｃ２−Ｃ１２−アルケニル、−Ｃ（ＮＲ）ＮＨ−Ｃ２−Ｃ１２−アルキニル、−Ｃ（ＮＨ）ＮＨ−Ｃ３−Ｃ１２−シクロアルキル、−Ｃ（ＮＨ）ＮＨ−アリール、−Ｃ（ＮＨ）ＮＨ−ヘテロアリール、−Ｃ（ＮＨ）ＮＨ−ヘテロシクロアルキル、−Ｓ（Ｏ）−Ｃ１−Ｃ１２−アルキル、−Ｓ（Ｏ）−Ｃ２−Ｃ１２−アルケニル、−Ｓ（Ｏ）−Ｃ２−Ｃ１２−アルキニル、−Ｓ（Ｏ）−Ｃ３−Ｃ１２−シクロアルキル、−Ｓ（Ｏ）−アリール、−Ｓ（Ｏ）−ヘテロアリール、−Ｓ（Ｏ）−ヘテロシクロアルキル−ＳＯ２ＮＨ２、−ＳＯ２ＮＨ−Ｃ１−Ｃ１２−アルキル、−ＳＯ２ＮＨ−Ｃ２−Ｃ１２−アルケニル、−ＳＯ２ＮＨ−Ｃ２−Ｃ１２−アルキニル、−ＳＯ２ＮＨ−Ｃ３−Ｃ１２−シクロアルキル、−ＳＯ２ＮＨ−アリール、−ＳＯ２ＮＨ−ヘテロアリール、−ＳＯ２ＮＨ−ヘテロシクロアルキル、−ＮＨＳＯ２−Ｃ１−Ｃ１２−アルキル、−ＮＨＳＯ２−Ｃ２−Ｃ１２−アルケニル、−ＮＨＳＯ２−Ｃ２−Ｃ１２−アルキニル、−ＮＨＳＯ２−Ｃ３−Ｃ１２−シクロアルキル、−ＮＨＳＯ２−アリール、−ＮＨＳＯ２−ヘテロアリール、−ＮＨＳＯ２−ヘテロシクロアルキル、−ＣＨ２ＮＨ２、−ＣＨ２ＳＯ２ＣＨ３、−アリール、−アリールアルキル、−ヘテロアリール、−ヘテロアリールアルキル、−ヘテロシクロアルキル、−Ｃ３−Ｃ１２−シクロアルキル、ポリアルコキシアルキル、ポリアルコキシ、−メトキシメトキシ、−メトキシエトキシ、−ＳＨ、−Ｓ−Ｃ１−Ｃ１２−アルキル、−Ｓ−Ｃ２−Ｃ１２−アルケニル、−Ｓ−Ｃ２−Ｃ１２−アルキニル、−Ｓ−Ｃ３−Ｃ１２−シクロアルキル、−Ｓ−アリール、−Ｓ−ヘテロアリール、−Ｓ−ヘテロシクロアルキルまたはメチルチオメチルを含むがこれらに限定されない。アリール、ヘテロアリール、アルキル等はさらに置換されていてもよいと理解される。
【００２５】
用語「Ｃ２−Ｃ１２アルケニル」または「Ｃ２−Ｃ６アルケニル」は、本明細書において使用するとき、２〜１２個または２〜６個の炭素原子を含み、炭素−炭素二重結合を少なくとも１個有する炭化水素基に由来する１個の水素原子の除去による１価基を意味する。アルケニル基は例えば、エテニル、プロペニル、ブテニル、１−メチル−２−ブテン−１−イル、アルカジエン等を含むが、これらに限定されない。
用語「置換アルケニル」は、本明細書において使用するとき、１個、２個、３個またはそれ以上の脂肪族置換基で置換された上記定義の「Ｃ２−Ｃ１２アルケニル」または「Ｃ２−Ｃ６アルケニル」基を意味する。
【００２６】
用語「Ｃ２−Ｃ１２アルキニル」または「Ｃ２−Ｃ６アルキニル」は、本明細書において使用するとき、２〜１２個または２〜６個の炭素原子を含み、炭素−炭素三重結合を少なくとも１個有する炭化水素基に由来する１個の水素原子の除去による１価基を意味する。代表的なアルキニル基は、例えばエチニル、１−プロピニル、１−ブチニル等を含むが、これらに限定されない。
【００２７】
用語「置換アルキニル」は、本明細書において使用するとき、１個、２個、３個またはそれ以上の脂肪族置換基で置換された上記定義の「Ｃ２−Ｃ１２アルキニル」または「Ｃ２−Ｃ６アルキニル」基を意味する。
用語「Ｃ１−Ｃ６アルコキシ」は、本明細書において使用するとき、酸素原子を介して親分子部分と結合している、上記定義のＣ１−Ｃ６アルキル基を意味する。Ｃ１−Ｃ６−アルコキシの例は、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、イソプロポキシ、ｎ−ブトキシ、ｓｅｃ−ブトキシ、ｔｅｒｔ−ブトキシ、ｎ−ペントキシ、ネオペントキシおよびｎ−ヘキソキシを含むが、これらに限定されない。
【００２８】
用語「ハロ」および「ハロゲン」は、本明細書において使用するとき、フッ素、塩素、臭素およびヨウ素から選択される原子を意味する。
【００２９】
用語「アリール」は、本明細書において使用するとき、１〜２個の芳香環を有する単環または二環式炭素環式環を意味し、フェニル、ナフチル、テトラヒドロナフチル、インダニル、インデニル等を含むが、これらに限定されない。
【００３０】
用語「置換アリール」は、本明細書において使用するとき、１個、２個、３個またはそれ以上の芳香族置換基によって置換された、上記定義のアリール基を意味する。
芳香族置換基は、−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−Ｉ、−ＯＨ、保護ヒドロキシ、脂肪族エーテル、芳香族性エーテル、オキソ、−ＮＯ２、−ＣＮ、所望によりハロゲンで置換されていてもよい−Ｃ１−Ｃ１２−アルキル（例えばペルハロアルキル）、所望によりハロゲンで置換されていてもよいＣ２−Ｃ１２−アルケニル、所望によりハロゲンで置換されていてもよい−Ｃ２−Ｃ１２−アルキニル、−ＮＨ２、保護アミノ、−ＮＨ−Ｃ１−Ｃ１２−アルキル、−ＮＨ−Ｃ２−Ｃ１２−アルケニル、−ＮＨ−Ｃ２−Ｃ１２−アルケニル、−ＮＨ−Ｃ３−Ｃ１２−シクロアルキル、−ＮＨ−アリール、−ＮＨ−ヘテロアリール、−ＮＨ−ヘテロシクロアルキル、−ジアルキルアミノ、−ジアリールアミノ、−ジヘテロアリールアミノ、−Ｏ−Ｃ１−Ｃ１２−アルキル、−Ｏ−Ｃ２−Ｃ１２−アルケニル、−Ｏ−Ｃ２−Ｃ１２−アルキニル、−Ｏ−Ｃ３−Ｃ１２−シクロアルキル、−Ｏ−アリール、−Ｏ−ヘテロアリール、−Ｏ−ヘテロシクロアルキル、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ１−Ｃ１２−アルキル、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ２−Ｃ１２−アルケニル、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ２−Ｃ１２−アルキニル、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ３−Ｃ１２−シクロアルキル、−Ｃ（Ｏ）−アリール、−Ｃ（Ｏ）−ヘテロアリール、−Ｃ（Ｏ）−ヘテロシクロアルキル、−ＣＯＮＨ２、−ＣＯＮＨ−Ｃ１−Ｃ１２−アルキル、−ＣＯＮＨ−Ｃ２−Ｃ１２−アルケニル、−ＣＯＮＨ−Ｃ２−Ｃ１２−アルキニル、−ＣＯＮＨ−Ｃ３−Ｃ１２−シクロアルキル、−ＣＯＮＨ−アリール、−ＣＯＮＨ−ヘテロアリール、−ＣＯＮＨ−ヘテロシクロアルキル、−ＣＯ２−Ｃ１−Ｃ１２−アルキル、−ＣＯ２−Ｃ２−Ｃ１２−アルケニル、−ＣＯ２−Ｃ２−Ｃ１２−アルキニル、−ＣＯ２−Ｃ３−Ｃ１２−シクロアルキル、−ＣＯ２−アリール、−ＣＯ２−ヘテロアリール、−ＣＯ２−ヘテロシクロアルキル、−ＯＣＯ２−Ｃ１−Ｃ１２−アルキル、−ＯＣＯ２−Ｃ２−Ｃ１２−アルケニル、−ＯＣＯ２−Ｃ２−Ｃ１２−アルキニル、−ＯＣＯ２−Ｃ３−Ｃ１２−シクロアルキル、−ＯＣＯ２−アリール、−ＯＣＯ２−ヘテロアリール、−ＯＣＯ２−ヘテロシクロアルキル、−ＯＣＯＮＨ２、−ＯＣＯＮＨ−Ｃ１−Ｃ１２−アルキル、−ＯＣＯＮＨ−Ｃ２−Ｃ１２−アルケニル、−ＯＣＯＮＨ−Ｃ２−Ｃ１２−アルキニル、−ＯＣＯＮＨ−Ｃ３−Ｃ１２−シクロアルキル、−ＯＣＯＮＨ−アリール、−ＯＣＯＮＨ−ヘテロアリール、−ＯＣＯＮＨ−ヘテロシクロアルキル、−ＮＨＣ（Ｏ）−Ｃ１−Ｃ１２−アルキル、−ＮＨＣ（Ｏ）−Ｃ２−Ｃ１２−アルケニル、−ＮＨＣ（Ｏ）−Ｃ２−Ｃ１２−アルキニル、−ＮＨＣ（Ｏ）−Ｃ３−Ｃ１２−シクロアルキル、−ＮＨＣ（Ｏ）−アリール、−ＮＨＣ（Ｏ）−ヘテロアリール、−ＮＨＣ（Ｏ）−ヘテロシクロアルキル、−ＮＨＣＯ２−Ｃ１−Ｃ１２−アルキル、−ＮＨＣＯ２−Ｃ２−Ｃ１２−アルケニル、−ＮＨＣＯ２−Ｃ２−Ｃ１２−アルキニル、−ＮＨＣＯ２−Ｃ３−Ｃ１２−シクロアルキル、−ＮＨＣＯ２−アリール、−ＮＨＣＯ２−ヘテロアリール、−ＮＨＣＯ２−ヘテロシクロアルキル、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２、ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ−Ｃ１−Ｃ１２−アルキル、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ−Ｃ２−Ｃ１２−アルケニル、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ−Ｃ２−Ｃ１２−アルキニル、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ−Ｃ３−Ｃ１２−シクロアルキル、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ−アリール、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ−ヘテロアリール、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ−ヘテロシクロアルキル、ＮＨＣ（Ｓ）ＮＨ２、ＮＨＣ（Ｓ）ＮＨ−Ｃ１−Ｃ１２−アルキル、−ＮＨＣ（Ｓ）ＮＨ−Ｃ２−Ｃ１２−アルケニル、−ＮＨＣ（Ｓ）ＮＨ−Ｃ２−Ｃ１２−アルキニル、−ＮＨＣ（Ｓ）ＮＨ−Ｃ３−Ｃ１２−シクロアルキル、−ＮＨＣ（Ｓ）ＮＨ−アリール、−ＮＨＣ（Ｓ）ＮＨ−ヘテロアリール、−ＮＨＣ（Ｓ）ＮＨ−ヘテロシクロアルキル、−ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ２、ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ−Ｃ１−Ｃ１２−アルキル、−ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ−Ｃ２−Ｃ１２−アルケニル、−ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ−Ｃ２−Ｃ１２−アルキニル、−ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ−Ｃ３−Ｃ１２−シクロアルキル、−ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ−アリール、−ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ−ヘテロアリール、−ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ−ヘテロシクロアルキル、ＮＨＣ（ＮＨ）−Ｃ１−Ｃ１２−アルキル、−ＮＨＣ（ＮＨ）−Ｃ２−Ｃ１２−アルケニル、−ＮＨＣ（ＮＨ）−Ｃ２−Ｃ１２−アルキニル、−ＮＨＣ（ＮＨ）−Ｃ３−Ｃ１２−シクロアルキル、−ＮＨＣ（ＮＨ）−アリール、−ＮＨＣ（ＮＨ）−ヘテロアリール、−ＮＨＣ（ＮＨ）−ヘテロシクロアルキル、−Ｃ（ＮＨ）ＮＨ−Ｃ１−Ｃ１２−アルキル、−Ｃ（ＮＨ）ＮＨ−Ｃ２−Ｃ１２−アルケニル、−Ｃ（ＮＨ）ＮＨ−Ｃ２−Ｃ１２−アルキニル、−Ｃ（ＮＨ）ＮＨ−Ｃ３−Ｃ１２−シクロアルキル、−Ｃ（ＮＨ）ＮＨ−アリール、−Ｃ（ＮＨ）ＮＨ−ヘテロアリール、−Ｃ（ＮＨ）ＮＨ−ヘテロシクロアルキル、−Ｓ（Ｏ）−Ｃ１−Ｃ１２−アルキル、−Ｓ（Ｏ）−Ｃ２−Ｃ１２−アルケニル、−Ｓ（Ｏ）−Ｃ２−Ｃ１２−アルキニル、−Ｓ（Ｏ）−Ｃ３−Ｃ１２−シクロアルキル、−Ｓ（Ｏ）−アリール、−Ｓ（Ｏ）−ヘテロアリール、−Ｓ（Ｏ）−ヘテロシクロアルキル−ＳＯ２ＮＨ２、−ＳＯ２ＮＨ−Ｃ１−Ｃ１２−アルキル、−ＳＯ２ＮＨ−Ｃ２−Ｃ１２−アルケニル、−ＳＯ２ＮＨ−Ｃ２−Ｃ１２−アルキニル、−ＳＯ２ＮＨ−Ｃ３−Ｃ１２−シクロアルキル、−ＳＯ２ＮＨ−アリール、−ＳＯ２ＮＨ−ヘテロアリール、−ＳＯ２ＮＨ−ヘテロシクロアルキル、−ＮＨＳＯ２−Ｃ１−Ｃ１２−アルキル、−ＮＨＳＯ２−Ｃ２−Ｃ１２−アルケニル、−ＮＨＳＯ２−Ｃ２−Ｃ１２−アルキニル、−ＮＨＳＯ２−Ｃ３−Ｃ１２−シクロアルキル、−ＮＨＳＯ２−アリール、−ＮＨＳＯ２−ヘテロアリール、−ＮＨＳＯ２−ヘテロシクロアルキル、−ＣＨ２ＮＨ２、−ＣＨ２ＳＯ２ＣＨ３、−アリール、−アリールアルキル、−ヘテロアリール、−ヘテロアリールアルキル、−ヘテロシクロアルキル、−Ｃ３−Ｃ１２−シクロアルキル、ポリアルコキシアルキル、ポリアルコキシ、−メトキシメトキシ、−メトキシエトキシ、−ＳＨ、−Ｓ−Ｃ１−Ｃ１２−アルキル、−Ｓ−Ｃ２−Ｃ１２−アルケニル、−Ｓ−Ｃ２−Ｃ１２−アルキニル、−Ｓ−Ｃ３−Ｃ１２−シクロアルキル、−Ｓ−アリール、−Ｓ−ヘテロアリール、−Ｓ−ヘテロシクロアルキルまたはメチルチオメチルを含むが、これらに限定されない。アリール、ヘテロアリール、アルキル等はさらに置換されていてもよいと理解される。
【００３１】
用語「アリールアルキル」は、本明細書において使用するとき、Ｃ１−Ｃ３アルキルまたはＣ１−Ｃ６アルキル基を介して親化合物と結合しているアリールを意味する。例にはベンジル、フェネチル等が含まれるが、これらに限定されない。
用語「置換アリールアルキル」は、本明細書において使用するとき、１個、２個、３個またはそれ以上の芳香族置換基で置換された上記定義のアリールアルキル基を意味する。
【００３２】
用語「ヘテロアリール」は、本明細書において使用するとき、単、二または三環式芳香族性基または少なくとも１個の環原子がＳ、ＯおよびＮから選択され；０、１または２個の環原子がＳ、ＯおよびＮから独立して選択されるさらなるヘテロ原子であり；残りの環原子が炭素である５〜１０個の環原子を有する環であって、ここで当該環に含まれるいずれかのＮまたはＳは所望により酸化されていてもよい環を意味する。ヘテロアリールはピリジニル、ピラジニル、ピリミジニル、ピロリル、ピラゾリル、イミダゾリル、チアゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、チアジアゾリル、オキサジアゾリル、チオフェニル、フラニル、キノリニル、イソキノリニル、ベンゾイミダゾリル、ベンゾオキサゾリル、キノキサリニル等を含むが、これらに限定されない。ヘテロ芳香環は炭素またはヘテロ原子を介して化学構造と結合することができる。
【００３３】
用語「置換ヘテロアリール」は、本明細書において使用するとき、１個、２個、３個またはそれ以上の芳香族置換基で置換された上記定義のヘテロアリール基を意味する。
用語「Ｃ３−Ｃ１２−シクロアルキル」は、本明細書において使用するとき、単環式または二環式飽和炭素環式環化合物に由来する１個の水素原子の除去による１価基を意味する。例は、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、ビシクロ［２．２．１］ヘプチルおよびビシクロ［２．２．２］オクチルを含むがこれらに限定されない。
【００３４】
用語「置換Ｃ３−Ｃ１２−シクロアルキル」は、本明細書において使用するとき、１個、２個、３個またはそれ以上の脂肪族置換基で置換された上記定義のＣ３−Ｃ１２−シクロアルキル基を意味する。
【００３５】
用語「ヘテロシクロアルキル」は、本明細書において使用するとき、非芳香族性５、６もしくは７員環または二もしくは三環式基縮合系を意味し、ここで（ｉ）各環は酸素、硫黄および窒素から独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を含み、（ｉｉ）各５員環は０〜１個の二重結合を有し、各６員環は０〜２個の二重結合を有し、（ｉｉｉ）窒素および硫黄ヘテロ原子は所望により酸化されていてもよく、（ｉｖ）窒素ヘテロ原子は所望により第四級化されていてもよく、（ｉｖ）何れかの上記環はベンゼン環と縮合していてもよく、そして（ｖ）残りの環原子は所望によりオキソ置換されていてもよい炭素原子である。代表的なヘテロシクロアルキル基は、［１，３］ジオキソラン、ピロリジニル、ピラゾリニル、ピラゾリジニル、イミダゾリニル、イミダゾリジニル、ピペリジニル、ピペラジニル、オキサゾリジニル、イソキサゾリジニル、モルホリニル、チアゾリジニル、イソチアゾリジニル、キノキサリニル、ピリダジノニルおよびテトラヒドロフリルを含むが、これらに限定されない。
【００３６】
用語「置換ヘテロシクロアルキル」は、本明細書において使用するとき、１個、２個、３個またはそれ以上の脂肪族置換基で置換された、上記定義のヘテロシクロアルキル基を意味する。
【００３７】
用語「ヘテロアリールアルキル」は、本明細書において使用するとき、Ｃ１−Ｃ３アルキルまたはＣ１−Ｃ６アルキル基を介して親化合物と結合しているヘテロアリール基を意味する。例にはピリジニルメチル、ピリミジニルエチル等を含むが、これらに限定されない。
【００３８】
用語「置換ヘテロアリールアルキル」は、本明細書において使用するとき、１個、２個、３個またはそれ以上の芳香族置換基で置換された、上記定義のヘテロアリールアルキル基を意味する。
【００３９】
用語「Ｃ１−Ｃ３−アルキルアミノ」は、本明細書において使用するとき、窒素原子を介して親化合物と結合している、上記定義の１または２個のＣ１−Ｃ３−アルキル基を意味する。Ｃ１−Ｃ３−アルキルアミノの例は、メチルアミノ、ジメチルアミノ、エチルアミノ、ジエチルアミノおよびプロピルアミノを含むが、これらに限定されない。
【００４０】
用語「アルキルアミノ」は、構造−ＮＨ（Ｃ１−Ｃ１２アルキル）（ここで、Ｃ１−Ｃ１２アルキルは上記定義のとおりである）を有する基を意味する。
【００４１】
用語「ジアルキルアミノ」は、構造−Ｎ（Ｃ１−Ｃ１２アルキル）（Ｃ１−Ｃ１２アルキル）（ここで、Ｃ１−Ｃ１２アルキルは上記定義のとおりである）を有する基を意味する。ジアルキルアミノの例は、ジメチルアミノ、ジエチルアミノ、メチルエチルアミノ、ピペリジノ等を含むが、これらに限定されない。
用語「アルコキシカルボニル」は、エステル基、すなわちカルボニル基を介して親分子部分と結合しているアルコキシ基、例えばメトキシカルボニル、エトキシカルボニル等を意味する。
【００４２】
用語「カルボキシアルデヒド」は、本明細書において使用するとき、式−ＣＨＯの基を意味する。
用語「カルボキシ」は、本明細書において使用するとき、式−ＣＯＯＨの基を意味する。
用語「カルボキサミド」は、本明細書において使用するとき、式−Ｃ（Ｏ）ＮＨ（Ｃ１−Ｃ１２アルキル）または−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｃ１−Ｃ１２アルキル）（Ｃ１−Ｃ１２アルキル）、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、ＮＨＣ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ１２アルキル）、Ｎ（Ｃ１−Ｃ１２アルキル）Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ１２アルキル）等の基を意味する。
【００４３】
用語「ヒドロキシ保護基」は、本明細書において使用するとき、合成法のあいだヒドロキシル基を望ましくない反応から保護することが当該技術分野において知られている不安定な化学基を意味する。当該合成法の後、本明細書に記載のヒドロキシ保護基は、選択的に除去することができる。当該技術分野において既知のヒドロキシ保護基は、T. H. Greene and P. G. M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 3rd edition, John Wiley & Sons, New York (1999)に一般に記載されいている。ヒドロキシル保護基の例は、ベンジルオキシカルボニル、４−ニトロベンジルオキシカルボニル、４−ブロモベンジルオキシカルボニル、４−メトキシベンジルオキシカルボニル、メトキシカルボニル、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル、イソプロポキシカルボニル、ジフェニルメトキシカルボニル、２，２，２−トリクロロエトキシカルボニル、２−（トリメチルシリル）エトキシカルボニル、２−フルフリルオキシカルボニル、アリルオキシカルボニル、アセチル、ホルミル、クロロアセチル、トリフルオロアセチル、メトキシアセチル、フェノキシアセチル、ベンゾイル、メチル、ｔ−ブチル、２，２，２−トリクロロエチル、２−トリメチルシリルエチル、１，１−ジメチル−２−プロペニル、３−メチル−３−ブテニル、アリル、ベンジル、パラ−メトキシベンジルジフェニルメチル、トリフェニルメチル（トリチル）、テトラヒドロフリル、メトキシメチル、メチルチオメチル、ベンジルオキシメチル、２，２，２−トリクロロエトキシメチル、２−（トリメチルシリル）エトキシメチル、メタンスルホニル、パラ−トルエンスルホニル、トリメチルシリル、トリエチルシリル、トリイソプロピルシリル等を含む。本発明のための好ましいヒドロキシル保護基は、アセチル（Ａｃまたは−Ｃ（Ｏ）ＣＨ３）、ベンゾイル（Ｂｎまたは−Ｃ（Ｏ）Ｃ６Ｈ５）およびトリメチルシリル（ＴＭＳまたは−Ｓｉ（ＣＨ３）３）である。
【００４４】
用語「保護ヒドロキシ」は、本明細書において使用するとき、例えばベンゾイル、アセチル、トリメチルシリル、トリエチルシリル、メトキシメチル基を含む上記定義のヒドロキシル保護基で保護されたヒドロキシ基を意味する。
【００４５】
用語「アミノ保護基」は、本明細書において使用するとき、本明細書において使用するとき、合成法のあいだアミノ基を望ましくない反応から保護することが当該技術分野において知られている不安定な化学基を意味する。当該合成法の後、本明細書に記載のアミノ保護基は、選択的に除去することができる。当該技術分野において既知のアミノ保護基は、T. H. Greene and P. G. M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 3rd edition, John Wiley & Sons, New York (1999)に一般に記載されている。アミノ保護基の例はｔ−ブトキシカルボニル、９−フルオレニルメトキシカルボニル、ベンジルオキシカルボニル等を含むが、これらに限定されない。
【００４６】
用語「保護アミノ」は、本明細書において使用するとき、上記定義のアミノ保護基で保護されたアミノ基を意味する。
【００４７】
用語「アシル」はカルボン酸、カルバミン酸、炭酸、スルホン酸およびリン酸を含むがこれらに限定されない酸に由来する基を含む。例には脂肪族カルボニル、芳香族カルボニル、脂肪族スルホニル、芳香族スルフィニル、脂肪族スルフィニル、芳香族スルホニル、脂肪族スルファミル、芳香族スルファミル、芳香族ホスフェートおよび脂肪族ホスフェートが含まれる。
【００４８】
「アミノ酸」はアミンおよびカルボキシル官能基を両方含む、一般式ＮＨ２ＣＨＲＣＯＯＨを有する分子である。用語アミノ酸は、標準アミノ酸および非標準アミノ酸を含む。
【００４９】
「標準アミノ酸」は、アラニン、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、グルタミン酸、グルタミン、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リシン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、スレオニン、トリプトファン、チロシンおよびバリンを含む。
【００５０】
「アスパラギン酸以外の標準アミノ酸」は、アラニン、アルギニン、アスパラギン、システイン、グルタミン酸、グルタミン、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リシン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、スレオニン、トリプトファン、チロシンおよびバリンから成る群から選択される。
【００５１】
「非標準アミノ酸」は、標準アミノ酸のものではないアミノ酸（アミンおよびカルボキシル官能基の両方を含む分子）を意味する。その例は、セレノシステイン（ＵＧＡコドンでいくつかのタンパク質に挿入される）、ピロリジン（メタン生成細菌によってメタンを生産する酵素において使用され、コドンＵＡＧでコードされる）、ランチオニン、２−アミノイソ酪酸、デヒドロアラニン、３−アミノ−６−ヒドロキシ−２−ピペリドン、ガンマ−アミノ酪酸、オルニチン、シトルリン、ホモシステイン、ドーパミンまたはヒドロキシプロリンである。
【００５２】
「非塩基性標準アミノ酸」は、アラニン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、グルタミン酸、グルタミン、グリシン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、スレオニン、トリプトファン、チロシンおよびバリンである。
【００５３】
「Ａｈｐ」（３−アミノ−６−ヒドロキシ−２−ピペリドン）は、例えばシアノバクテリアにおいて見られる非標準アミノ酸である。「Ａｈｐ誘導体」は、３−アミノ−５，６−ジヒドロ−２−ピペリドン（デヒドロ−ＡＨＰ）、３−アミノ−２−ピペリドンおよび「ＡＨＰのエーテルおよびエステル誘導体」を含むが、これらに限定されない。好ましいＡｈｐ誘導体は３−アミノ−２−ピペリドンである。
【００５４】
非標準アミノ酸のこの群の別のメンバーは：
【化５】
である。
【００５５】
「アミノ酸誘導体」はＯ−アルキル、Ｏ−アリール、Ｏ−アシル、Ｓ−アルキル、Ｓ−アリール、Ｓ−Ｓ−アルキル、アルコキシカルボニル、Ｏ−カルボニル−アルコキシ、カルボネート、Ｏ−カルボニル−アリールオキシ、Ｏ−カルボニル−アルキルアミノ、Ｏ−カルボニル−アリールアミノ、Ｎ−アルキル、Ｎ−ジアルキル、Ｎ−トリアルキルアンモニウム、Ｎ−アシル、Ｎ−カルボニル−アルコキシ、Ｎ−カルボニル−アリールオキシ、Ｎ−カルボニル−アルキルアミノ、Ｎ−カルボニル−アリールアミノ、Ｎ−スルホニルアルキルまたはＮ−スルホニルアリールを含むが、これらに限定されない。
【００５６】
「非塩基性標準アミノ酸誘導体」は、Ｏ−アルキル、Ｏ−アリール、Ｏ−アシル、Ｓ−アルキル、Ｓ−アリール、Ｓ−Ｓ−アルキル、アルコキシカルボニル、Ｏ−カルボニル−アルコキシ、カルボネート、Ｏ−カルボニル−アリールオキシ、Ｏ−カルボニル−アルキルアミノ、Ｏ−カルボニル−アリールアミノ、Ｎ−アルキル、Ｎ−ジアルキル、Ｎ−ｔｒｉアルキルアンモニウム、Ｎ−アシル、Ｎ−カルボニル−アルコキシ、Ｎ−カルボニル−アリールオキシ、Ｎ−カルボニル−アルキルアミノ、Ｎ−カルボニル−アリールアミノ、Ｎ−スルホニルアルキルまたはＮ−スルホニルアリールを含むが、これらに限定されない。
【００５７】
「チロシン誘導体」は−Ｏ−アルキル、Ｏ−アリール、Ｏ−ヘテロアリール、Ｏ−アシル、Ｏ−ＰＯ３ＨおよびＯ−ＳＯ３Ｈならびにオルトまたはメタ位でのハロゲン化を含むが、これらに限定されない。
【００５８】
「デプシペプチド誘導体」は、本明細書に記載のとおり修飾したデプシペプチドおよび後記実施例に具体的に記載したものを含むが、これらに限定されない。該誘導体は当該技術分野において周知の方法を用いて製造することができる。
【００５９】
本発明はさらに、本発明の化合物の薬学的に許容される塩および誘導体、ならびにかかる化合物を得るための方法に関する。当該化合物を得る一つの方法は、コンドロマイセスまたはその突然変異体もしくは変異体を好適な条件下で、好ましくは本明細書に記載の発酵プロトコルを用いて培養することである。
【００６０】
少なくとも１個の塩形成基を有する本発明の化合物の「塩」は、自体公知の方法で製造することができる。例えば、酸性基を有する本発明の化合物の塩は、例えば当該化合物を金属化合物、例えば好適な有機カルボン酸のアルカリ金属塩、例えば２−エチルヘキサン酸のナトリウム塩で、有機アルカリ金属化合物またはアルカリ土類金属化合物、例えば対応するヒドロキシド、カルボネートまたはハイドロゲンカルボネート、例えばナトリウムまたはカリウムのヒドロキシド、カルボネートまたはハイドロゲンカルボネートで、対応するカルシウム化合物で、あるいはアンモニアもしくは好適な有機アミンで、好ましくは化学量論量またはわずかに過剰の塩形成剤を用いて処理して、形成することができる。本発明の化合物の酸付加塩は、常套の方法で、例えば該化合物を酸または好適なアニオン交換剤で処理して得られる。酸性および塩基性塩形性基、例えば遊離カルボキシ基と遊離アミノ基を含む本発明の化合物の分子内塩は、例えば弱塩基による等電点への、酸付加塩のような塩の中和またはイオン交換剤による処理によって形成させることができる。
【００６１】
塩は常套の方法で遊離化合物に変換することができ；金属塩およびアンモニウム塩は例えば好適な酸で処理して変換することができ、酸付加塩は例えば好適な塩基剤で処理して変換することができる。
【００６２】
本発明に従って得られた異性体の混合物は、自体公知の方法で個々の異性体に分離することができる；ジアステレオマーは例えば多相溶媒混合物での分配、再結晶および／または例えばシリカゲルでのクロマトグラフ分離または例えば逆相カラムでの中圧液体クロマトグラフィーによって分離することができ、ラセミ体は例えば光学的に純粋な塩形成剤との塩の形成と例えば分画結晶化による得られたジアステレオマー混合物の分離によって、または光学的に活性なカラム材でのクロマトグラフィーによって分割することができる。
【００６３】
中間体および最終生成物は標準的な方法、例えばクロマトグラフ法、分配法、（再）結晶化等を用いて後処理および／または精製することができる。
【００６４】
本発明の環状デプシペプチドはカリクレイン７を阻害する。「阻害剤」は、１００μＭ未満、５０μＭ、３０μＭ、２０μＭまたは１０μＭ未満の測定ＩＣ５０で酵素反応を阻害する環状デプシペプチドである。特に好ましいものは、ヒトカリクレイン７について３０μＭ未満のＩＣ５０を有する環状デプシペプチド、例えば１０μＭ、１μＭ、１００ｎＭ、５０ｎＭ、４０ｎＭ、３０ｎＭ、２０ｎＭ、１０ｎＭまたはそれ未満のＩＣ５０を有する環状デプシペプチドである。ヒトカリクレインのＩＣ５０はBiosyntan（Berlin, Germany）から購入可能な蛍光消光基質Ａｃ−Ｇｌｕ−Ａｓｐ（ＥＤＡＮＳ）−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ｉｌｅ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ＾Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ（ＤＡＢＣＹＬ）−Ｇｌｕ−ＮＨ２（ここで、＾はＭＳ分析で同定した解離しやすい結合を示す）を用いて測定することができる。酵素反応は１５０ｍＭのＮａＣｌおよび０．０５％（ｗ／ｖ）のＣＨＡＰＳを含む５０ｍＭのクエン酸ナトリウムバッファー中ｐＨ５．６で実施する。ＩＣ５０値の検出のために、該アッセイは室温、３８４ウェルプレートで実施する。総最終アッセイ体積は３０μｌである。試験化合物を９０％（ｖ／ｖ）ＤＭＳＯ／水に溶解し、水（０．０５％（ｗ／ｖ）のＣＨＡＰＳを含む）で所望のアッセイ濃度の３倍に希釈する。１１種類の最終化合物濃度は：０．３ｎＭ、１ｎＭ、３ｎＭ、１０ｎＭ、３０ｎＭ、１００ｎＭ、３００ｎＭ、１μＭ、３μＭ、１０μＭおよび３０μＭである。それぞれのアッセイについて、１０μｌの水／ＣＨＡＰＳ（±試験化合物）、次いで１０μｌのプロテアーゼ溶液（１．５ｘアッセイバッファーで希釈）をウェル毎に加える。最終アッセイ溶液のプロテアーゼ濃度は０．２ｎＭ（Bradford法によって測定した酵素濃度による）である。室温で１時間インキュベートした後、１０μｌの基質溶液（１．５ｘアッセイバッファーに溶解させた基質、最終濃度は２μＭである）を加えて反応を開始させる。酵素活性に対する化合物の効果は、線形プログレス曲線から得られ、基質の添加直後に得た最初のもの（ｔ＝０分）と１時間後の第二のもの（ｔ＝６０分）の２つの読み取りから決定する。ＩＣ５０値は非線形回帰分析ソフトウェア（XLfit, Vers. 4.0; ID Business Solution Ltd., Guildford, Surrey, UK）を用いて阻害率対阻害剤濃度のプロットから計算する。
【００６５】
ヒトカリクレイン７（ｈＫ７）はヒト皮膚に存在するセリンプロテアーゼ活性を有する酵素である。これは当初は角質層キモトリプシン酵素（ＳＣＣＥ）と記載され、角質層のタンパク質（例えばコルネオデスモシンおよびプラコグロビン）を切断することによって角質層の落屑に関与し得る。角質層は、上皮の障壁形成最外層であり、高度に組織化された脂質に囲まれた角化上皮細胞から成る。これは上皮分化によって継続的に形成され、正常上皮において角質層の一定の厚みは角化細胞の増殖と落屑のバランスによって維持される。炎症性皮膚疾患におけるＳＣＣＥの上昇した発現は、病因的意義が存在し得る（Hansson, et al. (2002)）。上皮角化細胞においてヒトカリクレイン７を発現するトランスジェニックマウスは、増加した上皮厚による病的皮膚変化、角質増殖症、皮膚炎症および重度の掻痒症（掻痒）を発症することが見出された。角質層キモトリプシン酵素遺伝子の３’ＵＴＲにおける４ｂｐ（ＡＡＣＣ）挿入とアトピー性皮膚炎の遺伝的関連性が報告されており（Vasilopoulos, et al. (2004)）、これは該酵素がアトピー性皮膚炎の発症に重要な役割を有する可能性を示唆している。アトピー性皮膚炎は１５〜２０％の小児が罹患している皮膚障壁不全による疾患である。
【００６６】
カリクレイン７は、キモトリプシン様活性を示すカリクレイン遺伝子ファミリーのＳ１セリンプロテアーゼである。ヒトカリクレイン７（ｈＫ７、ＫＬＫ７または角質層キモトリプシン酵素（ＳＣＣＥ）、Swissprot P49862）は皮膚生理学において重要な役割を果たす（１、２、３）。これは主として皮膚において発現し、皮膚生理に深く関与していることが報告されている。ｈＫ７は落屑プロセスにおける角化扁平上皮細胞の細胞間接着構造の分解に関与する。落屑プロセスは、皮膚障壁機能に深く関与する皮膚の最外層である角質層の一定の厚みを維持するために十分に制御され、角質細胞のデノボ生産と繊細に釣り合いを取っている。この観点から、ｈＫ７は角質接着斑タンパク質コルネオデスモシンおよびデスモコリン１を切断することができると報告されている（４、５、６）。両方のコルネオデスモソームの分解は、落屑に必要である。さらに、ごく最近、２種の脂質プロセッシング酵素β−グルコセレブロシダーゼおよび酸性スフィンゴミエリナーゼがｈＫ７によって分解され得ることが示されている（７）。両方の脂質プロセッシング酵素は、それらの基質であるグルコシルセラミドおよびスフィンゴミエリンと共に分泌され、これらの極性脂質前駆体をそれらのより非極性な生成物、例えばセラミドに処理し、これは次いで、細胞外層状膜に取り込まれる。該層状膜構造は機能的皮膚障壁に重要である。最後に、ｈＫ７はインビトロでインターロイキン−１β（ＩＬ−１β）前駆体をその活性形態に活性化することが示されている（８）。角化細胞はＩＬ−１βを発現するが、特異的ＩＬ−１β変換酵素（ＩＣＥまたはカスパーゼ１）の活性形態を発現しないため、ヒト上皮におけるＩＬ−１β活性化は別のプロテアーゼ（潜在的な候補はｈＫ７である）を介して生じることが提案されている。
【００６７】
最近の研究は、ｈＫ７の増加した活性と、アトピー性皮膚炎、乾癬またはネザートン症候群のような炎症性皮膚疾患に関連付けている。これは脱制御落屑を引き起こすコルネオデスモソームの脱制御分解、阻害された層状膜構造を引き起こす脂質プロセッシング酵素の向上した分解または前炎症性サイトカインＩＬ−１βの脱制御活性化を導き得る。その最終結果は、皮膚障壁機能不全および炎症である（WO-A-2004/108139も参照されたい）。
【００６８】
ｈＫ７活性が様々なレベルで制御されているため、炎症性皮膚疾患において、多様な因子が上昇したｈＫ７活性に関与している可能性がある。第一に、発現されるプロテアーゼの量は遺伝的因子によって影響され得る。かかる遺伝的リンク、ｈＫ７遺伝子の３’−ＵＴＲにおける多型は、近年記載された（９）。著者らはカリクレイン７遺伝子の３’−ＵＴＲにおける記載の４塩基対挿入がｈＫ７ｍＲＮＡを安定化して、ｈＫ７の過剰発現をもたらすと仮定している。第二に、ｈＫ７は層状体を介して角質層細胞外空間に酵素原として分泌され、自己活性化することができないため、別のプロテアーゼ、例えばｈＫ５によって活性化される必要がある（５）。かかる活性化酵素の制御されていない活性はｈＫ７の過剰活性化をもたらす可能性がある。第三に、活性化ｈＫ７はＬＥＫＴＩ、ＡＬＰまたはエラフィンのような天然阻害剤によって阻害することができる（１０、１１）。かかる阻害剤の発現低下または欠如は、ｈＫ７の活性上昇を引き起こす可能性がある。近年、ＬＥＫＴＩをコードするｓｐｉｎｋ５遺伝子における変異がネザートン症候群の原因であり（１２）、該遺伝子における点突然変異がアトピー性皮膚炎に関連している（１３、１４）ことが見出された。最後に、ｈＫ７の活性を制御する別のレベルはｐＨである。ｈＫ７は中性乃至わずかにアルカリ性のｐＨが至適であり（２）、皮膚の最内層から最外層にかけて中性から酸性のｐＨ勾配が存在する。石けんのような環境因子は、角質層の最外層においてｈＫ７の至適ｐＨにｐＨを上昇させて、ｈＫ７活性を上昇させる可能性がある。
【００６９】
上昇したｈＫ７活性は炎症性および過増殖性皮膚疾患を含む皮膚障壁機能不全による皮膚疾患に関与している。第一に、ネザートン症候群患者はセリンプロテアーゼ活性の表現型依存性上昇、コルネオデスモソームの減少、脂質プロセッシング酵素β−グルコセレブロシダーゼおよび酸性スフィンゴミエリナーゼの減少および障壁機能不全を示す（１５、１６）。第二に、ヒトカリクレイン７を過剰発現するトランスジェニックマウスはアトピー性皮膚炎を有する患者において見られるものと同様の皮膚表現型を示す（１７、１８、１９）。第三に、アトピー性皮膚炎および乾癬患者の皮膚において、上昇したｈＫ７濃度が記載された（１７、２０）。さらにまた、上昇したＫ７の活性およびそれによる上皮障壁機能不全はまた、炎症性腸疾患およびクローン病のような他の上皮疾患の病理に重要な役割を果たし得る。
【００７０】
処置はそれぞれ、当該技術分野において周知の、局所または全身投与、例えばクリーム、軟膏および座薬によって、または経口、皮下または静脈内投与であってよい。
【００７１】
一つの局面において、本発明のデプシペプチドはＤＳＭＺに２００７年４月２４日に寄託したコンドロマイセス・クロカツス（Chondromyces crocatus）株（DSM 19329）を培養して得られ、あるいはＤＳＭＺに２００７年４月２４日に寄託したコンドロマイセス・ロブスツス（Chondromyces robustus）株（DSM 19330）を培養して得られる。
菌株の寄託は特許手続上の微生物の寄託の国際承認に関するブダペスト条約に基づいて行った。寄託した菌株は特許の発行によって取引不能の形で、制限または条件を付加することなく公に開放される。寄託した菌株は単に便宜のために当業者に提供され、寄託が実施可能用件であることを認めるわけではない。
【００７２】
本発明は特定の菌株コンドロマイセス・クロカツスおよびコンドロマイセス・ロブスツスの培養に限定されないと理解される。むしろ本発明は、デプシペプチドを生産することができる他の生物、例えばＸ線照射、紫外線照射、化学変異誘発剤、ファージ曝露、抗生物質選択等のような既知の方法による、この生物に由来し得る株の突然変異体または変異体の培養を意図する。
【００７３】
本発明のデプシペプチドは、多様な微生物によって生合成され得る。本発明の化合物を合成することができる微生物は、粘液細菌とも称されるミクソコックス目の細菌を含むが、これらに限定されない。粘液細菌属に属するメンバーの非限定的な例は、コンドロマイセス、ソランギウム、ポリアンギウム、ビソファーガ（Byssophaga）、ハプロアンギウム（Haploangium）、ジャーニア（Jahnia）、ナノシスティス、コフレリア（Koffleria）、ミキソコッカス、コラロコッカス（Corallococcus）、シストバクター、アーキアンギウム、スチグマテラ、ヒアランギウム、メリタンギウム、ピクシコッカス（Pyxicoccus）を含む。粘液細菌の分類学は複雑であり、２００４年５月５日に発売されたGarrity GM, Bell JY, Lilburn TG (2004) Taxonomic outline of the prokaryotes, Bergey’s manual of systematic bacteriology、第二版（http://141.150.157.80/bergeysoutline/main.htm）を参照する。
【００７４】
構造式（Ｉ〜Ｘ）の化合物は、好適な培地の好気的発酵によって、制御された条件下で、コンドロマイセス・クロカツスまたはコンドロマイセス・ロブスツスの培養によって生産される。好適な培地は、好ましくは水性であり、同化炭素、窒素および無機塩源を含む。
【００７５】
好適な培地は、実施例１および２に記載の増殖培地を含むが限定されない。発酵は約３〜約２０日間、約１０℃〜約４０℃で実施し；しかし最適な結果のために、約３０℃で発酵を実施することが好ましい。発酵の間、培養液のｐＨは約６．０〜約９．０であり得る。
【００７６】
デプシペプチド産生微生物を播種した培養培地は、例えば回転振盪機または撹拌タンク発酵槽を用いて、好気的条件下でインキュベートすることができる。インキュベーション中に播種培養培地に空気、酸素または適切な気体混合物を注入して、通気を行うことができる。十分量の抗生物質化合物が蓄積すると、これを常套の通常の方法で、例えば抽出およびクロマトグラフ法、沈殿または結晶化および／または本明細書に記載の方法で、培養物から濃縮し、単離することができる。抽出の例として、培養物をｎ−ブタノール、酢酸エチル、シクロヘキサン、ｎ−ヘキサン、トルエン、ｎ−ブチルアセテートまたは４−メチル−２−ペンタノンのような好適な有機溶媒と混合し、撹拌して、減圧下で溶媒を除去して、有機層中の抗生物質化合物を回収することができる。得られた残留物は、所望により、例えば水、エタノール、メタノールまたはそれらの混合物で再構成して、ヘキサン、四塩化炭素、塩化メチレン、ジクロロメタンまたはそれらの混合物のような好適な有機溶媒で再抽出することができる。溶媒を除去した後、例えばクロマトグラフ法によって化合物をさらに精製してもよい。クロマトグラフィーの例として、エーテル、ケトン、エステル、ハロゲン化炭化水素またはアルコールを含む有機溶出溶媒またはそれらの混合物によるシリカゲルまたは酸化アルミナのような固定相、あるいは多様な官能基を有する修飾シリカゲルでの、多様なｐＨのアセトニトリル、メタノールまたはテトロヒドロフランのような有機溶媒またはその水性混合物で溶出する逆相クロマトグラフィーを適用することができる。別の例は、例えば固体−液体または液体−液体モードの分配クロマトグラフィーである。また、例えばSephadex LH-20（Sigma-Aldrich）を用いて、多様な溶媒、好ましくはアルコールで溶出するサイズ排除クロマトグラフィーが適用される。
【００７７】
この分野において一般的である通り、生産ならびに回収および精製プロセスは、多様な分析方法、例えばバイオアッセイ、ＴＬＣ、ＨＰＬＣまたはそれらの組合せによって、そして種々の検出方法（ＴＬＣには典型的にはＵＶ光、ヨウ素蒸気または着色剤スプレー、ＨＰＬＣには典型的にＵＶ光、質量感知または光散乱法）を適用して、モニターすることができる。例えば、ＨＰＬＣ技術は、機能化シリカゲルでの逆相カラムを用いて、極性水混和性溶媒と水の特定のｐＨでの直線グラジエント混合物である溶離剤および多様な波長でのＵＶ光または質量感知検出器による検出方法を適用することによって代表される。
【００７８】
微生物から生合成したデプシペプチドは、所望により無作為および／または定方向化学修飾に付して誘導体または構造アナログである化合物を形成してもよい。同様の機能的活性を有するかかる誘導体または構造アナログは、本発明の範囲に含まれる。デプシペプチドは所望により、当該技術分野において周知または本明細書に記載の方法を用いて修飾してもよい。
【００７９】
例えば、本発明のデプシペプチドの誘導体は、次の製造を含む式
【化６】
の環状デプシペプチドの誘導化によって製造することができる：
ａ）− Ａ４が
【化７】
である化合物を有機または無機酸、例えばトリフルオロ酢酸、硫酸、塩酸またはルイス酸、例えば三フッ化ホウ素エーテルで、溶媒、例えばジクロロメタン、ＴＨＦ中または溶媒の非存在下、−７８℃〜１５０℃、好ましくは−３０℃〜室温で処理することによる、Ａ４が
【化８】
である化合物の製造。
【００８０】
ｂ）− Ａ４が
【化９】
である化合物を水素分子または水素源、例えばシクロヘキセン、ギ酸アンモニウムで、触媒、例えばパラジウムの存在下、溶媒、例えば２−プロパノール中、−５０℃〜１００℃、好ましくは室温で処理することによる、Ａ４が
【化１０】
である化合物の製造。
【００８１】
ｃ）− Ａ４が
【化１１】
である化合物を有機または無機酸、例えば硫酸、塩酸またはルイス酸、例えば三フッ化ホウ素エーテルで、還元剤、例えばトリエチルシランの存在下、溶媒、例えばジクロロメタン、ＴＨＦ中または溶媒の非存在下、−７８℃〜１５０℃、好ましくは−５０℃〜室温で処理することによる、Ａ４が
【化１２】
である化合物の製造。
【００８２】
ｄ）− Ａ４が
【化１３】
である化合物を置換または非置換アルカノールと有機または無機酸、例えばトリフルオロ酢酸、硫酸、塩酸またはルイス酸、例えば三フッ化ホウ素エーテルで、還元剤、例えばトリエチルシランの存在下、溶媒、例えば置換または非置換アルカノール中または溶媒の非存在下、−７８℃〜１５０℃、好ましくは−３０℃〜室温で処理することによる、Ａ４が
【化１４】
である化合物の製造。
【００８３】
特に定めのない限り、本明細書および特許請求の範囲において用いる成分の量、分子量の様な特性、反応条件、ＩＣ５０等を表現するあらゆる数は、全ての場合において用語「約」で修飾されているものと理解される。したがって、異なることが特記されない限り、本明細書および添付の特許請求の範囲に記載の数値パラメーターは、近似値である。少なくとも、特許請求の範囲への均等論の適用を限定することを意図しないが、それぞれの数値パラメーターは、少なくとも有効桁数を踏まえて、そして通常の四捨五入を適用して構成される。本発明の広い範囲を説明する数値範囲およびパラメーターは近似値であるが、実施例、表および図に示す数値は可能な限り正確に報告している。あらゆる数値は、実験のゆらぎ、測定試験、統計的分析等に由来するある種の誤差を潜在的に含んでいてもよい。
【００８４】
特に定義がない限り、本明細書において使用されるあらゆる技術および化学用語は、本発明が属する技術分野における通常の知識を有する者によって通常理解されるものと同じ意味を有する。本明細書に記載のものと同様または均等な方法および物質が本発明の実施または試験において使用されてもよいが、好適な方法および物質は次に記載する。本明細書に記載の全ての公報、特許出願、特許および他の参考文献はそれらの全体において引用して本明細書に組み込む。相反する記載がある場合には、定義を含め、本明細書が制御下に置く。さらに、本物質、方法および実施例は、単なる説明であり、限定されることを意図しない。
【実施例】
【００８５】
実施例１
式（ＩＩ）〜（ＶＩＩ）の化合物の製造
株： コンドロマイセス・クロカツス菌株は、発明者らの研究室において、クルミの木の腐木の環境サンプルから単離した。
子実体の形態学ならびに１６Ｓ−ＲＮＡ遺伝子の部分配列に基づいて、当該株がコンドロマイセス・クロカツスと明確に同定した。コンドロマイセス・クロカツスはＤＳＭＺによって生物学的リスク群１に指定されている（DSMZ (2007)）。コンドロマイセスはポリアンギウム科（Polyangiaceae）の１種であり、デルタプロテオバクテリアのミキソコッカス目（Myxocccales）に属する。粘液細菌目とも称されるミキソコッカス目の細菌は、他のほとんどの細菌とそれらを区別する２個の特徴を有する、グラム陰性桿菌である。それらは、飢餓状態になると能動的滑走メカニズムを用いて固体表面上に集合し、集合して子実体を形成する（Kaiser (2003)）。
【００８６】
本発明のコンドロマイセス・クロカツス菌株は、ＤＳＭＺに受託番号１９３２９で寄託した。
【００８７】
本発明のコンドロマイセス・クロカツス菌株は純粋培養としての生存能力がなく、共生菌株の非存在下では維持することができない。共生菌株は寒天プレートの発酵共培養物（ＬＢ培地）のアリコートを画線して、純粋培養物として得て、維持することができる。同様の観察がReichenbachのグループによって行われた（Jacobi, et al. (1996), Jacobi, et al. (1997)）。本発明のコンドロマイセス・クロカツスの共生菌株の１６Ｓ−ｒＲＮＡ遺伝子の部分ＤＮＡ配列に基づくと、最も近いマッチはアルファ−プロテオバクテリアのリゾビウム目（Rhizobiales）由来のボセア・チオオキシダンス（Bosea thiooxidans）である。調査した４２４ｂｐ配列フラグメント１６Ｓ−ｒＲＮＡは、遺伝子バンクのＡＦ５０８１１２配列（B. thiooxidans）と約９８％の同一性（少なくとも８ヌクレオチド交換）を有する。ボセア・チオオキシダンス（B. thiooxidans）はインドのカルカッタ周辺の様々な農業用地から採取された土壌サンプルから単離された。これはある有機基質の存在下で還元無機硫黄化合物を酸化することができ、１９９６年に新菌種および新属として記載された（Das, et al. (1996)）。記載されたボセア種５種類全ての部分１６Ｓ−ＲＮＡ配列に由来する系統樹は、コンドロマイセス・クロカツスから単離されたボセア共生菌株とは別の位置を示している。
【００８８】
培養： １００Ｌの発酵槽培養を次のプロトコルに従って実施した：
本発明のコンドロマイセス・クロカツス菌株の液体培養物５ｍｌ（＝１０％）を２００ｍｌのバッフル付振盪フラスコ中の５０ｍｌのＭＤ１培地（Bode et al. 2003に適合している、表６参照）に播種して、前培養を開始する。３０℃、回転振盪機で１２０ｒｐｍで１１日間インキュベーションした後、５００ｍｌのバッフル付振盪フラスコ中の５×１００ｍｌのＭＤ１培地に前培養物１０ｍｌ（＝１０％）をそれぞれ播種して、一次中間培養を開始した。３０℃、回転振盪機で１２０ｒｐｍで７日間インキュベーションした後、２Ｌのバッフル無し振盪フラスコ中の１９×５００ｍｌのＭＤ１培地に一次中間培養物２５ｍｌ（＝５％）をそれぞれ播種して、二次中間培養を開始した。３０℃、回転振盪機で１２０ｒｐｍで６日間インキュベーションした後、全二次中間培養物（９．５リットル＝９．５％）を用いて１００リットルのＰＯＬ１生産培地（Kunze et al. 1995に適合している、表７参照）に播種した。この１００Ｌ主培養物は１００Ｌスケールの鉄タンク発酵槽中で実施した。温度は３０℃で制御し、通気は２０リットル／分（＝０．２ｖｖｍ）であり、撹拌速度は５０ｒｐｍであった。０．５ｂａｒのわずかな加圧を培養槽容器内で維持した。３ＮのＨ２ＳＯ４または３ＮのＮａＯＨを加えて、培養ｐＨは６．９〜７．１で維持した。約１日間の遅滞期の後、酸素消費が約４日間加速したが、これは培養の指数的増殖を示している。最後の２日間で、酸素消費はわずかに減少したが、これは培養の静止期を示している。７日後、培養物を濃度５．３ｍｇ／ｌの式ＩＩの環状デプシペプチドとして収穫した。
【００８９】
抽出： 全ての発酵ブロスを１６００Ｌの鉄容器に移し、１時間デキャンタした。濾紙で濾過して、湿った細胞ペレット（２００ｇ）を底分画から得た。細胞ペレットを１０リットルの酢酸エチルでそれぞれ３０分間turax処理(turaxing)して３回抽出した。次いで、残留水を溶媒相から分離した。溶媒相を５リットルの水で洗浄し、次いで蒸発させて、「細胞抽出物」と称する乾燥抽出物を得た。
培養濾液を２００リットルの酢酸エチルで抽出した。１時間のturax処理を含む２時間の接触時間の後、有機相を分離し、２０リットルの水で洗浄し、最後に蒸発させて、「培養濾液抽出物」と称する乾燥抽出物を得た。
【００９０】
化合物単離： 培養濾液抽出物（４．４ｇ）を８０ｍＬのメタノールに溶解させた。遠心分離して不溶性成分を除去し、上清を蒸発乾固させて３．３ｇの抽出物を得た。該抽出物を７．５ｍＬのＭｅＯＨ、３ｍＬのＤＭＳＯおよび０．５ｍＬのジクロロメタンに溶解させて、０．０１％のギ酸（溶媒Ａ）および０．１％のギ酸を含むアセトニトリル（溶媒Ｂ）を溶媒として用いる逆相クロマトグラフィー（Waters Sunfire RP18 10μm, 30 x 150 mm）で精製した。流速は５０ｍＬ／分であった。グラジエントは表１に示す。７回クロマトグラフを実施して、物質を精製した。それぞれの実行から回収した濾液をＨＰＬＣで分析し、本発明の環状デプシペプチドを含む分画を合併し、真空下で蒸発乾固させた。クロマトグラフィーによって１３４ｍｇの式（ＩＩ）の環状デプシペプチドを純度＞９７％で、８０ｍｇを純度＞９０％で得た。
【００９１】
表２
式（ＩＩ）の環状デプシペプチドの精製に用いたＨＰＬＣグラジエント
【表６】
【００９２】
表３
通常相分離で用いたグラジエント
【表７】
【００９３】
細胞抽出物（６．６７ｇ）をジクロロメタン／メタノール ４：１に溶解させた。該溶液を濾過し、濾液を珪藻（２ｇの珪藻／１ｇの抽出物、Isolute（登録商標）、International Sorbent Technology Ltd., Hengoed Mid Glam, UK）に吸着させ、次いで蒸発させた。予め詰め込んだシリカゲルカラム（４ｘ１８ｃｍ、９０ｇのシリカゲル４０〜６３）に固体残渣をロードし、シクロヘキサン、酢酸エチルおよびメタノールのグラジエントで溶出した。グラジエントは表２に示し、流速は２８ｍｌ／分であった。２８ｍｌの分画体積を回収した。ＵＶトレースで目に見えるピークに従ってフラクションを合併して、１２個のプールフラクション（Ａ〜Ｌ）を得た。逆相クロマトグラフィーを用いてデプシペプチドを含む分画（Ｈ〜Ｊ）をさらに精製した。クロマトグラフ法および後処理方法は培養濾液について記載した精製方法と同じである。全体で、４６．１ｍｇの式（ＩＩ）の環状デプシペプチド、１７．９ｍｇの式（ＩＩＩ）の環状デプシペプチドおよび６．１ｍｇの式（ＶＩ）デプシペプチドと式（ＶＩＩ）のデプシペプチドの１：１混合物を単離した。化合物（ＶＩ）および（ＶＩＩ）の構造の帰属は、高分解能ＭＳおよび化合物（ＶＩ）と（ＶＩＩ）の混合物の１Ｈ−ＮＭＲと、化合物（ＩＩ）の１Ｈ−ＮＭＲの比較に基づく。
他の式（ＩＩ）の環状デプシペプチドはまた、細胞抽出物においてより低い濃度で見出される。これらの他の環状デプシペプチドは式（ＩＶ）および（Ｖ）のものであった。
【００９４】
化合物の特徴付け：
式（ＩＩ）の化合物の物理データ
IR (KBr ペレット): 3337, 3297, 3062, 2966, 2936, 2877, 1736, 1659, 1533, 1519, 1464, 1445, 1410, 1385, 1368, 1249, 1232, 1205, 989, 832 cm -1
FT-MS (9.4 T APEX-III): 951.5165; C46H72N8O12+Naの計算値: 951.5162
1H NMR (600 MHz, d6-DMSO) δH: -0.10 (3H, d, J =7.0 Hz), 0.65 (4H, m), 0.78 (3H, d, J = 7.0 Hz), 0.82 (3H, t, J = 7.2 Hz), 0.85 (3H, d, J = 7.0 Hz), 0.89 (3H, d, J = 7.0 Hz), 1.02 (1H, m), 1.03 (6H, 2 x d, J = 7.0 Hz), 1.10 (1H, m), 1.21 (3H, d, J = 7.0 Hz), 1.25 (1H, m), 1.40 (1H, m), 1.52 (1H, m), 1.76 (6H, m), 1.84 (1H, m), 1.93 (1H, m), 2.15 (2H, m), 2.48 (1H, m), 2.59 (1H, m), 2.69 (1H, m), 2.72 (3H, s), 3.17 (1H, m), 4.32 (2H, m), 4.44 (2H, m), 4.64 (1H, d, J = 9.5 Hz), 4.71 (1H, m), 4.94 (1H, s), 5.06 (1H, m), 5.49 (1H, m), 6.08 (1H, d, J = 2.2 Hz), 6.65 (2H, d, J = 8.4), 6.74 (1H, s), 7.00 (2H, d, J = 8.4 Hz), 7.27 (1H, s), 7.36 (1H, d, J = 9.5 Hz), 7.66 (1H, d, J = 10.2 Hz), 7.74 (1H, d, J = 8.8 Hz), 8.02 (1H, d, J = 8.1 Hz), 8.43 (1H, d, J = 8.1 Hz), 9.19 (1H, s).
13C NMR (150 MHz) d6-DMSO δC: 10.35, CH3; 11.22, CH3; 13.79, CH3; 16.00, CH3; 17.63, CH3; 19.49, 2 x CH3; 20.83, CH3; 21.72, CH2 ; 23.30, CH3; 23.70, CH2 ; 24.16, CH; 24.41, CH2 ; 27.35, CH2; 29.74, CH2; 30.07, CH3; 31.44, CH2; 33.13, CH; 33.19, CH2; 33.68, CH; 37.39, CH; 39.05, CH2; 48.75, CH; 50.59, CH; 52.01, CH; 54.11, CH; 54.65, CH; 55.24, CH; 60.60, CH; 71.86 CH; 73.89, CH; 115.28, 2 x CH; 127.31, Cq; 130.35, 2 x CH; 156.25, Cq; 169.09, Cq; 169.25, Cq; 169.34, Cq; 169.74, Cq; 170.60, Cq; 172.41, Cq; 172.52, Cq; 173.78, Cq; 176.32, Cq
【００９５】
式（ＩＩＩ）の化合物の物理データ
FT-MS (9.4 T APEX-III):実測値: 965.5318;C47H74N8O12+Naの計算値: 965.5318
1H NMR (600 MHz) d6-DMSO δH: -0.10 (3H, d, J = 7.0 Hz), 0.64 (4H, m), 0.78 (3H,d, J = 7.0 Hz), 0.82 (3H, t, J = 7.0 Hz), 0.83 (3H, t, J = 7.3 Hz), 0.85 (3H, d, J = 7.0 Hz), 0.89 (3H, d, J = 7.0 Hz), 1.01 (3H, d, J = 7.1 Hz), 1.04 (1H, m), 1.10 (1H, m), 1.21 (3H, d, J = 7.0 Hz), 1.25 (1H, m), 1.32 (1H, m), 1.40 (1H, m), 1.53 (2H, m), 1.77 (6H, m), 1.84 (1H, m), 1.92 (1H, m), 2.12 (1H, m), 2.16 (1H, m), 2.28 (1H, m), 2.59 (1H, m), 2.68 (1H, m), 2.72 (3H, s), 3.17 (1H, m), 4.32 (1H, m), 4.38 (1H, m), 4.43 (1H, d, J = 10.2 Hz), 4.46 (1H, m), 4.63 (1H, d, J = 9.5 Hz), 4.71 (1H, m), 4.94 (1H, m), 5.06 (1H, m), 5.49 (1H, m), 6.11 (1H, s, broad), 6.65 (2H, d, J = 8.8 Hz), 6.73 (1H, s), 7.00 (2H, d, J = 8.8 Hz), 7.27 (1H, s), 7.37 (1H, d, J = 9.5 Hz), 7.66 (1H, d, J = 10.2 Hz), 7.75 (1H, d, J = 9.7 Hz), 8.07 (1H, d, J = 8.1 Hz), 8.45 (1H, d, J = 8.8 Hz), 9.24 (1H, broad)
【００９６】
式（ＩＶ）の化合物の物理データ
FT-MS (9.4 T APEX-III): 実測値: 947.5196; C47H72N8O11+Naの計算値: 947.5213
1H NMR (600 MHz) d6-DMSO δH: 0.08 (3H, d, J = 7.0 Hz), 0.68 (3H, t, J = 7.2 Hz), 0.71 (3H, d, J = 7.0 Hz), 0.78 (3H, d, J = 7.0 Hz), 0.83 (3H, t, J = 7.3 Hz), 0.84 (1H, m), 0.87 (3H, t, J = 7.2 Hz), 0.88 (3H, d, J = 7.0 Hz), 0.99 (3H, d, J = 7.1 Hz), 1.08 (1H, m), 1.17 (3H, d, J = 6.7 Hz), 1.18 (1H, m), 1.31 (2H, m), 1.43 (1H, m), 1.51 (1H, m), 1.54 (1H, m), 1.76 (2H, m), 1.90 (1H, m), 1.94 (1H, m), 2.01 (1H, m), 2.10 (1H, m), 2.16 (1H, m), 2.26 (1H, m), 2.46 (2H, m), 2.73 (1H, m), 2.74 (3H, s), 3.19 (1H, m), 4.34 (1H, m), 4.36 (1H, m), 4.51 (1H, m), 4.55 (1H, m), 4.66 (1H, d, J = 10.0 Hz), 4.79 (1H, d, J = 11.0 Hz), 5.19 (1H, m), 5.28 (1H, m), 5.44 (1H, m), 6.25 (1H, d, J = 7.3 Hz), 6.33 (1H, d, J = 8.8 Hz), 6.68 (2H, d, J = 8.8 Hz), 6.75 (1H, s), 7.04 (2H, d, J = 8.8 Hz), 7.28 (1H, s), 7.32 (1H, d, J = 8.8 Hz), 7.91 (1H, d, J = 9.5 Hz), 8.05 (1H, d, J = 8.1 Hz), 8.57 (1H, d, J = 8.9 Hz), 9.38 (1H, broad)
【００９７】
式（Ｖ）の化合物の物理データ
FT-MS (9.4 T APEX-III): 実測値: 933.5053; C46H70N8O11+Naの計算値: 953.5056
1H NMR (600 MHz) d6-DMSO δH: 0.08 (3H, d, J = 7.0 Hz), 0.68 (3H, t, J = 7.2 Hz), 0.71 (3H, d, J = 7.0 Hz), 0.79 (3H, d, J = 7.0 Hz), 0.83 (1H, m), 0.88 (3H, t, J = 7.2 Hz), 0.89 (3H, d, J = 7.0 Hz), 1.01 (3H, d, J = 7.0 Hz), 1.03 (3H, d, J = 7.0 Hz) 1.08 (1H, m), 1.17 (3H, d, J = 6.7 Hz), 1.20 (1H, m), 1.31 (1H, m), 1.42 (1H, m), 1.54 (1H, m), 1.74 (2H, m), 1.91 (2H, m), 2.02 (1H, m), 2.10 (1H, m), 2.15 (1H, m), 2.46 (3H, m), 2.75 (3H, s), 2.76 (1H, m), 3.19 (1H, m), 4.32 (1H, m), 4.34 (1H, m), 4.51 (1H, m), 4.55 (1H, m), 4.66 (1H, d, J = 9.5 Hz), 4.79 (1H, d, J = 11.0 Hz), 5.19 (1H, m), 5.28 (1H, m), 5.43 (1H, m), 6.25 (1H, d, J = 7.0 Hz), 6.33 (1H, d, J = 8.5 Hz), 6.68 (2H, d, J = 8.8 Hz), 6.75 (1H, s), 7.04 (2H, d, J = 8.8 Hz), 7.28 (1H, s), 7.31 (1H, d, J = 8.8 Hz), 7.90 (1H, d, J = 9.5 Hz), 7.99 (1H, d, J = 8.1 Hz), 8.52 (1H, d, J = 8.8 Hz), 9.30 (1H, broad)
【００９８】
実施例２： 式（ＶＩＩＩ、ＩＸ、Ｘ）の化合物の生産
株： コンドロマイセス・ロブスツス菌株を糞サンプルから単離した。子実体の形態学ならびに１６Ｓ−ＲＮＡ遺伝子の部分配列に基づいて、本発明のコンドロマイセス・ロブスツス菌株はコンドロマイセス・ロブスツスと同定した。コンドロマイセス・ロブスツスはＤＳＭＺによって生物学的リスク群１に指定されている（DSMZ (2007)）。コンドロマイセスはポリアンギウム科（Polyangiaceae）の１種であり、デルタプロテオバクテリアのミキソコッカス目（Myxocccales）に属する。粘液細菌目とも称されるミキソコッカス目の細菌は、他のほとんどの細菌とそれらを区別する２個の特徴を有する、グラム陰性桿菌である。それらは、飢餓状態になると能動的滑走メカニズムを用いて固体表面上に集合し、集合して子実体を形成する（Kaiser (2003)）。
【００９９】
本発明のコンドロマイセス・ロブスツス属菌株は、ＤＳＭＺに受託番号１９３３０で寄託している。
【０１００】
培養： １００Ｌの発酵槽培養を次のプロトコルに従って実施した：
本発明のコンドロマイセス・ロブスツス菌株の液体培養物２０ｍｌ（＝２０％）を５００ｍｌのバッフル付振盪フラスコ中の６×１００ｍｌのＭＤ１培地（Bode et al. 2003に適合している）に播種して、前培養を開始する。３０℃、回転振盪機で１２０ｒｐｍで１日間インキュベーションした後、２Ｌのバッフル付振盪フラスコ中の６×４００ｍｌのＭＤ１培地に前培養物１００ｍｌ（＝２５％）をそれぞれ播種して、一次中間培養を開始した。３０℃、回転振盪機で１２０ｒｐｍで３日間インキュベーションした後、１５リットルのＭＤ１培地を含む２０Ｌ鉄タンク発酵槽に一次中間培養物３リットル（＝２０％）を播種して、二次中間培養を開始した。温度は３０℃で制御し、通気は２０リットル／分（＝１．０ｖｖｍ）であり、撹拌速度は８０ｒｐｍであった。０．５ｂａｒのわずかな加圧を培養槽容器内で維持した。ｐＨ制御は行わなかったが、培養物のｐＨは開始時のｐＨ６．９５から７日目のｐＨ６．８８にわずかに低下しただけであった。７日後、全二次中間培養物（１８リットル＝２０％）を用いて９０リットルのＰＯＬ１生産培地（Kunze et al. 1995に適合している、表７参照）に播種した（開始体積＝１０８リットル）。この主培養物は１００Ｌスケールの鉄タンク発酵槽中で実施した。温度は３０℃で制御し、通気は３０リットル／分（＝０．３ｖｖｍ）であり、撹拌速度は最初は５０ｒｐｍ、４日後は８０ｒｐｍであった。０．５ｂａｒのわずかな加圧を培養槽容器内で維持した。２ＮのＨ２ＳＯ４または１．５ＮのＮａＯＨを加えて、培養ｐＨは６．８〜７．２で維持した。
１４日後、培養物を濃度３ｍｇ／ｌで収穫した。
【０１０１】
抽出： 全ての発酵ブロスを１６００Ｌの鉄容器に移し、１時間デキャンタした。濾紙で濾過して、湿った細胞ペレット（約２００ｇ）を底分画から得た。細胞ペレットを１０リットルの酢酸エチルでそれぞれ３０分間turax処理して３回抽出した。次いで、残留水を溶媒相から分離した。溶媒相を５リットルの水で洗浄し、次いで蒸発させて、「細胞抽出物」と称する乾燥抽出物１１．９ｇを得た。
培養濾液を２００リットルの酢酸エチルで抽出した。１時間のturax処理を含む２時間の接触時間の後、有機相を分離し、２０リットルの水で洗浄し、最後に蒸発させて、「培養濾液抽出物」と称する乾燥抽出物１２．５ｇを得た。
【０１０２】
化合物単離： 各抽出物（菌糸体および培養濾液由来）をジクロロメタン／メタノール ４：１に溶解させた。溶液を濾過し、濾液を珪藻（２ｇの珪藻／１ｇの抽出物、Isolute（登録商標）、International Sorbent Technology Ltd., Hengoed Mid Glam, UK）に吸着させ、次いで蒸発させた。予め詰め込んだシリカゲルカラム（４ｘ１８ｃｍ、９０ｇのシリカゲル４０〜６３）に固体残渣をロードし、シクロヘキサン、酢酸エチルおよびメタノールのグラジエントで溶出した。グラジエントは表４に示し、流速は２８ｍｌ／分であった。２８ｍｌの分画体積を回収した。ＵＶトレースで目に見えるピークに従ってフラクションを合併した。０．０１％のギ酸（溶媒Ａ）および０．１％のギ酸を含むアセトニトリル（溶媒Ｂ）を溶媒として用いる逆相クロマトグラフィー（Waters Sunfire RP18 10μm, 30 x 150 mm）で本発明の環状デプシペプチドを含む分画をさらに精製した。流速は５０ｍＬ／分であった。グラジエントは表５に示す。注入のために、物質はＭｅＯＨ／ＤＭＳＯ １：１（濃度２００ｍｇ／ｍＬ）に溶解させた。回収した分画をＨＰＬＣで分析し、本発明の環状デプシペプチドを含む分画を合併して、真空下で蒸発乾固させた。抽出物のクロマトグラフィーによって、５２ｍｇの純粋な（＞９７％）式（ＶＩＩＩ）の環状デプシペプチドを得た。全体で、８５ｍｇの純粋な式（ＶＩＩＩ）の環状デプシペプチドを合併した抽出物から単離した。
他の式（ＶＩＩＩ）の環状デプシペプチドはまた、細胞抽出物においてより低い濃度で見出される。これらの他の環状デプシペプチドは式（ＩＸ）および（Ｘ）のものであった。
【０１０３】
（ａ）表４
（ｂ）通常相分離で用いたグラジエント
【表８】
【０１０４】
（ｃ）表５
（ｄ）式（ＶＩＩＩ）の環状デプシペプチドの精製で用いたＨＰＬＣグラジエント
【表９】
【０１０５】
培地 （５０ｍＭのＨＥＰＥＳでｐＨを７．０に調節した）
表６
（ｅ）ＭＤ１（前培養培地）
【表１０】
【０１０６】
表７
（ｆ）ＰＯＬ１（生産培地）
【表１１】
【０１０７】
化合物の特徴付け：
式（ＶＩＩＩ）の化合物の物理データ
FT-MS (9.4 T APEX-III): 実測値: 985.5007; C49H70N8O12+Naの計算値: 985.5005.
1H NMR (600 MHz) d6-DMSO δH: 0.74 (6H, d, J = 7.0 Hz), 0.85 (3H, d, J = 7.0 Hz), 0.88 (3H, d, J = 7.0 Hz), 0.89 (6H, d, J = 7.0 Hz), 1.18 (3H, d, J = 6.7 Hz), 1.32 (1H, m), 1.46 (1H, m), 1.57 (2H, m), 1.72 (3H, m), 1.81 (1H, m), 1.88 (1H, m), 1.98 (1H, m), 2.02 (2H, m), 2.11 (3H, m), 2.42 (1H, m), 2.73 (1H, m), 2.77 (3H, s), 2.87 (1H, m), 3.12 (1H, m), 3.64 (1H, m), 4.23 (1H, m), 4.40 (1H, m), 4.58 (1H, d, J = 9.5 Hz), 4.75 (2H, m), 4.93 (1H, m), 5.07 (1H, s), 5.40 (1H, m), 6.03 (1H, s), 6.74 (1H, s), 6.79 (2H, d, J = 8.4 Hz), 6.84 (2H, d, J = 7.8 Hz), 7.02 (2H, d, J = 8.4 Hz), 7.10 (1H, d, J = 9.3 Hz), 7.14 (1H, t, J = 7.8 Hz), 7.19 (2H, t, J = 7.8 Hz), 7.26 (1H, s), 7.42 (1H, d, J = 9.8 Hz), 7.89 (1H, d, J = 9.2 Hz), 8.03 (1H, d, J = 7.9 Hz), 8.38 (1H, d, J = 8.9 Hz), 9.40 (1H, s)
13C NMR (150 MHz) d6-DMSO δC: 17.13, CH3; 17.63, CH3; 19.32, CH3; 20.90, CH3; 21.64, CH2; 22.34, CH3; 22.34, CH3; 23.32, CH3; 24.10, CH; 25.63, CH; 27.63, CH2; 29.30, CH2; 30.37, CH3; 30.86, CH; 31.52, CH2; 32.83, CH2; 35.33, CH2; 38.98, CH2; 44.42, CH2; 48.52, CH; 50.19, CH; 50.24, CH; 51.99, CH; 54.62, CH; 55.63, CH; 60.90, CH; 71.86 CH; 73.70, CH; 115.32, 2 x CH; 126.21, CH; 127.50, Cq; 127.74, 2 x CH; 129.42, 2 x CH; 130.43, 2 x CH; 136.72, Cq; 156.23, Cq; 168.93, Cq; 169.18, Cq; 169.18, Cq; 170.18, Cq; 170.39, Cq; 171.72, Cq; 171.96, Cq; 172.50, Cq; 173.82, Cq
【０１０８】
式（ＩＸ）の化合物の物理データ
FT-MS (9.4 T APEX-III): 実測値: 969.5058; C49H70N8O11+Naの計算値; 969.5056.
1H NMR (600 MHz) d6-DMSO δH: 0.53 (3H, d, J = 6.6 Hz), 0.73 (3H, d, J = 6.6 Hz), 0.74 (3H, d, J = 6.6 Hz), 0.81 (3H, d, J = 6.6 Hz), 0.86 (6H, d, J = 6.6 Hz), 1.08 (3H, d, J = 6.5 Hz), 1.20 (1H, m), 1.33 (3H, m), 1.52 (1H, m), 1.64 (1H, m), 1.80 (2H, m), 2.01 (1H, m), 2.04 (2H, m), 2.15 (4H, m), 2.25 (1H, m), 2.30 (1H, m), 2.74 (3H, s), 2.83 (1H, m), 3.12 (1H, m), 3.32 (1H, m), 3.38 (1H, m), 4.14 (1H, m), 4.27 (1H, m), 4.40 (1H, m), 4.59 (1H, m), 4.61 (1H, m), 4.94 (1H, m), 4.99 (1H, m), 5.10 (1H, m), 6.42 (2H, d, J = 8.8 Hz), 6.75 (1H, s), 7.04 (2H, d, J = 8.8 Hz),7.10 (1H, t, J = 7.3 Hz), 7.15 (2H, t, J = 7.3 Hz), 7.23 (2H, d, J = 7.3 Hz), 7.30 (1H, s), 7.41 (1H, d, J = 9.5 Hz), 8.05 (1H, d, J = 9.5 Hz), 8.23 (1H, d, J = 8.1 Hz), 8.47 (1H, d, J = 4.4 Hz), 8.71 (1H, d, J = 10.2 Hz). （チロシンのヒドロキシ基のプロトンのシグナルは見えなかった）
【０１０９】
式（Ｘ）の化合物の物理データ
FT-MS (9.4 T APEX-III): 実測値: 955.4896; C48H68N8O11+Naの計算値:955.4900.
1H NMR (600 MHz) d6-DMSO δH:)δH: 化合物（ＩＸ）のＮＭＲデータについてケミカルシフトの帰属は行わなかった（回転異性体の混合物、ＮＭＲデータ（Ｎ−メチル基を含まない）の比較に基づく構造の帰属）。
【０１１０】
実施例３： 生物学的活性
例えば式（ＩＩ）〜（Ｘ）の化合物を含む本発明の化合物は薬理学的活性を示し、したがって医薬として有用である。例えば本発明の化合物はカリクレイン−７活性を阻害することが見出される。
本発明の化合物は次のアッセイで測定したとき、１ｎＭ〜１０μＭのＩＣ５０値を有する：
物質およびバッファー
蛍光消光基質Ａｃ−Ｇｌｕ−Ａｓｐ（ＥＤＡＮＳ）−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ｉｌｅ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ＾Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ（ＤＡＢＣＹＬ）−Ｇｌｕ−ＮＨ２（ここで、＾はＭＳ分析で同定した解離しやすい結合を示す）をBiosyntan（Berlin, Germany）から購入し、ＤＭＳＯ中５ｍＭ原液として２０℃で保った。他の全ての化学物質は分析グレードである。
１５０ｍＭのＮａＣｌおよび０．０５％（ｗ／ｖ）のＣＨＡＰＳを含む５０ｍＭのクエン酸ナトリウムバッファー ｐＨ５．６中で酵素反応を実施する。
全タンパク質およびペプチドを含む溶液はシリコン化試験管（Life Systems Design, Merenschwand, Switzerland）中で取り扱う。化合物溶液ならびに酵素と基質の溶液をCyBi-Well 96チャンネルピペッター（CyBio AG, Jena, Germany）によって３８４ウェルプレート（黒色、Cliniplate；カタログ番号95040020、Labsystems Oy, Finland）に移す。
【０１１１】
ＦＩ測定のための装置
蛍光強度（ＦＩ）測定のために、Ultra Evolution リーダー（TECAN, Maennedorf, Switzerland）を用いる。該装置は、蛍光励起および放出捕捉のためのそれぞれ３５０ｎｍ（２０ｎｍのバンド幅）および５００ｎｍ（２５ｎｍのバンド幅）バンド通過フィルターの組合せを備えている。シグナル：バックグラウンド比を増加させるため、適切なダイクロイックミラーを使用する。光学フィルターおよびダイクロイックミラーはTECANから購入する。各ウェルのフルオロフォアは、３フラッシュ／測定で励起する。
【０１１２】
ＩＣ５０値の測定
ＩＣ５０値の測定のため、アッセイを室温で、３８４ウェルプレート中で実施する。総最終アッセイ体積は３０μｌであった。試験化合物を９０％（ｖ／ｖ）のＤＭＳＯ／水に溶解させ、水（０．０５％（ｗ／ｖ）のＣＨＡＰＳ）で所望のアッセイ濃度の３倍に希釈した。１１種類の最終化合物濃度は：０．３ｎＭ、１ｎＭ、３ｎＭ、１０ｎＭ、３０ｎＭ、１００ｎＭ、３００ｎＭ、１μＭ、３μＭ、１０μＭおよび３０μＭである。それぞれのアッセイについて、１０μｌの水／ＣＨＡＰＳ（±試験化合物）、次いで１０μｌのプロテアーゼ溶液（１．５ｘアッセイバッファーで希釈）をウェル毎に加える。最終アッセイ溶液のプロテアーゼ濃度は０．２ｎＭ（Bradford法によって測定した酵素濃度による）である。室温で１時間インキュベートした後、１０μｌの基質溶液（１．５ｘアッセイバッファーに溶解させた基質、最終濃度は２μＭである）を加えて反応を開始させる。酵素活性に対する化合物の効果は、線形プログレス曲線から得られ、基質の添加直後に得た最初のもの（ｔ＝０分）と１時間後の第二のもの（ｔ＝６０分）の２つの読み取りから決定する。ＩＣ５０値は非線形回帰分析ソフトウェア（XLfit, Vers. 4.0; ID Business Solution Ltd., Guildford, Surrey, UK）を用いて阻害率対阻害剤濃度のプロットから計算する。
【０１１３】
表８
【表１２】
【０１１４】
さらに、本環状デプシペプチドはヒトキモトリプシンおよびヒト好中球エラスターゼをそれぞれ０．００１μＭ〜０．０２μＭおよび０．０１μＭ〜０．０７μＭのＩＣ５０で阻害した。
式（ＶＩＩＩ）の環状デプシペプチドの生物学的活性はカリクレイン７で測定した。本発明の環状デプシペプチドは、３ｎＭ未満のＩＣ５０でヒトカリクレイン７を阻害する。この環状デプシペプチドはヒトキモトリプシンおよびヒト好中球エラスターゼをそれぞれ約０．００４μＭおよび約０．００２５μＭのＩＣ５０で阻害した。
【０１１５】
実施例４： 本発明の環状デプシペプチドの誘導体化
式（ＩＩ）の環状デプシペプチド（２０ｍｇ）とトリエチルシラン（０．０２７ｍＬ）のジクロロメタン／アセトニトリル（１：１、２ｍＬ）溶液に、−５０℃で三フッ化ホウ素エーテル（０．０１４ｍＬ）をゆっくりと加えた。反応混合物を−５℃まで温め、この温度でさらに３０分間保ち、飽和ＮａＨＣＯ３溶液に注ぎ、酢酸エチルで抽出した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させて、溶媒を真空下で除去した。ＨＰＬＣ（XTerra［5cm］；アセトニトリル／炭酸アンモニウムバッファーｐＨ１０グラジエント）で得られた残渣を精製して、Ａｈｐが３−アミノ−２−ピペリドンに変換された式（ＩＩ）の環状ペプチド誘導体（９．８ｍｇ）を得た。
【０１１６】
実施例５： 本発明の環状デプシペプチドの誘導体化
式（ＩＩ）の環状デプシペプチド（７５ｍｇ、０．０８１ｍｍｏｌ）の１−ＰｒＯＨ（５ｍＬ）溶液に硫酸（３０μＬ）を加え、反応混合物をｒｔで４８時間撹拌した。後処理のために反応混合物を塩化メチレンで希釈し、飽和ビカルボネート溶液で洗浄した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させた後、溶媒を除去し、得られた残渣をシリカゲルのクロマトグラフィー（ｃＨｅｘ／ＥｔＯＡｃ（１：１）＋１０％のＭｅＯＨ）で精製した。収率：Ａｈｐが１−プロピル−ケタール−Ａｈｐに変換された式（ＩＩ）の環状デプシペプチド誘導体（６５ｍｇ（８３％））。
【０１１７】
実施例６： 本発明の環状デプシペプチドの誘導体化
式（ＩＩ）の環状デプシペプチド（７５ｍｇ、０．０８１ｍｍｏｌ）の１−オクチルＯＨ（５ｍＬ）溶液に、硫酸（３０μＬ）を加え、反応混合物をｒｔで４８時間撹拌した。後処理のために反応混合物を塩化メチレンで希釈し、飽和ビカルボネート溶液で洗浄した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させた後、溶媒を除去し、得られた残渣をシリカゲルのクロマトグラフィー（ｃＨｅｘ／ＥｔＯＡｃ（１：１）＋１０％のＭｅＯＨ）で精製した。収率：Ａｈｐが１−オクチル−ケタール−Ａｈｐに変換された式（ＩＩ）の環状デプシペプチド誘導体（５２ｍｇ（６２％））。
【０１１８】
実施例７： 本発明の環状デプシペプチドの誘導体化
式（ＩＩ）の環状デプシペプチド（２５ｍｇ、０．０２７ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（ＭＣ）（２ｍＬ）溶液を０℃に冷却した。次いでＤＩＥＡおよびトリフルオロ酢酸無水物（ＴＦＡＡ）を加えた。反応混合物を室温までゆっくりと温め、さらに４時間撹拌した。後処理のために反応混合物をＭＣで希釈し、塩酸および飽和ビカルボネート溶液で洗浄した。硫酸ナトリウムで乾燥させた後、溶媒を除去し、得られた残渣をシリカゲルのクロマトグラフィー（ｃＨｅｘ／ＥｔＯＡｃ（１：１）＋１０％のＭｅＯＨ）で精製した。収率：Ａ１のアミドがニトリルに変換された式（ＩＩ）の環状デプシペプチド誘導体（１４ｍｇ（５７％））。
【０１１９】
実施例８： 本発明の環状デプシペプチドの誘導体化
式（ＩＩ）環状デプシペプチド（１ｇ）のジクロロメタン／アセトニトリル（１：１、３００ｍＬ）溶液に、−５０℃で三フッ化ホウ素エーテル（０．６８ｍＬ）をゆっくりと加えた。反応混合物を−２０℃まで温めた。さらなる三フッ化ホウ素エーテル（０．６８ｍＬ）をゆっくりと加え、出発物質が観察されなくなるまで（ＨＰＬＣ）該反応混合物をこの温度で保った。次いで、反応混合物を飽和ＮａＨＣＯ３溶液に注ぎ、酢酸エチルで抽出した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、溶媒を真空下で除去して、Ａｈｐが３−アミノ−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−ピリジン−２−オンに変換された式（ＩＩ）の環状デプシペプチド誘導体を得た。
該粗物質を２−プロパノール（４００ｍＬ）に溶解させ、Ｐｄ／Ｃ（１０％、１１５ｍｇ）を加え、出発物質が消費されるまで（ＨＰＬＣ）混合物を大気圧下で水素化した。得られた残渣をクロマトグラフィー（ＳｉＯ２；ｃＨｅｘ／ＥｔＯＡｃ（１：１）＋１０％のＭｅＯＨ）で精製して、Ａｈｐが３−アミノ−２−ピペリドンに変換された式（ＩＩ）の環状デプシペプチド（６８４ｍｇ）を得た。
【０１２０】
参考文献
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【技術分野】
【０００１】
本発明は環状デプシペプチドまたはその誘導体に関する。
【背景技術】
【０００２】
発明の背景
カリクレイン７は、キモトリプシン様活性を示すカリクレイン遺伝子ファミリーのＳ１セリンプロテアーゼである。ヒトカリクレイン７（ｈＫ７、ＫＬＫ７または角質層キモトリプシン酵素（ＳＣＣＥ）、Swissprot P49862）は皮膚生理学において重要な役割を果たす（１、２、３）。これは主として皮膚において発現し、皮膚生理に深く関与していることが報告されている。ｈＫ７は落屑プロセスにおける角化扁平上皮細胞の細胞間接着構造の分解に関与する。落屑プロセスは、皮膚障壁機能に深く関与する皮膚の最外層である角質層の一定の厚みを維持するために十分に制御され、角質細胞のデノボ生産と繊細に釣り合いを取っている。この観点から、ｈＫ７は角質接着斑タンパク質コルネオデスモシンおよびデスモコリン１を切断することができると報告されている（４、５、６）。両方のコルネオデスモソームの分解は、落屑に必要である。さらに、ごく最近、２種の脂質プロセッシング酵素β−グルコセレブロシダーゼおよび酸性スフィンゴミエリナーゼがｈＫ７によって分解され得ることが示されている（７）。両方の脂質プロセッシング酵素は、それらの基質であるグルコシルセラミドおよびスフィンゴミエリンと共に分泌され、これらの極性脂質前駆体をそれらのより非極性な生成物、例えばセラミドに処理し、これは次いで、細胞外層状膜に取り込まれる。該層状膜構造は機能的皮膚障壁に重要である。最後に、ｈＫ７はインビトロでインターロイキン−１β（ＩＬ−１β）前駆体をその活性形態に活性化することが示されている（８）。角化細胞はＩＬ−１βを発現するが、特異的ＩＬ−１β変換酵素（ＩＣＥまたはカスパーゼ１）の活性形態を発現しないため、ヒト上皮におけるＩＬ−１β活性化は別のプロテアーゼ（潜在的な候補はｈＫ７である）を介して生じることが提案されている。
【０００３】
最近の研究は、ｈＫ７の増加した活性を、アトピー性皮膚炎、乾癬またはネザートン症候群のような炎症性皮膚疾患と関連付けている。これは脱制御落屑を引き起こすコルネオデスモソームの脱制御分解、阻害された層状膜構造を引き起こす脂質プロセッシング酵素の向上した分解または前炎症性サイトカインＩＬ−１βの脱制御活性化を導き得る。その最終結果は、皮膚障壁機能不全および炎症である（WO-A-2004/108139も参照されたい）。
【０００４】
ｈＫ７活性が様々なレベルで制御されているため、炎症性皮膚疾患において、多様な因子が上昇したｈＫ７活性に関与している可能性がある。第一に、発現されるプロテアーゼの量は遺伝的因子によって影響され得る。かかる遺伝的リンク、ｈＫ７遺伝子の３’−ＵＴＲにおける多型は、近年記載された（９）。著者らはカリクレイン７遺伝子の３’−ＵＴＲにおける記載の４塩基対挿入がｈＫ７ｍＲＮＡを安定化して、ｈＫ７の過剰発現をもたらすと仮定している。第二に、ｈＫ７は層状体を介して角質層細胞外空間に酵素原として分泌され、自己活性化することができないため、別のプロテアーゼ、例えばｈＫ５によって活性化される必要がある（５）。かかる活性化酵素の制御されていない活性はｈＫ７の過剰活性化をもたらす可能性がある。第三に、活性化ｈＫ７はＬＥＫＴＩ、ＡＬＰまたはエラフィンのような天然阻害剤によって阻害することができる（１０、１１）。かかる阻害剤の発現低下または欠如は、ｈＫ７の活性上昇を引き起こす可能性がある。近年、ＬＥＫＴＩをコードするｓｐｉｎｋ５遺伝子における変異がネザートン症候群の原因であり（１２）、該遺伝子における点突然変異がアトピー性皮膚炎に関連している（１３、１４）ことが見出された。最後に、ｈＫ７の活性を制御する別のレベルはｐＨである。ｈＫ７は中性乃至わずかにアルカリ性のｐＨが至適であり（２）、皮膚の最内層から最外層にかけて中性から酸性のｐＨ勾配が存在する。石けんのような環境因子は、角質層の最外層においてｈＫ７の至適ｐＨにｐＨを上昇させて、ｈＫ７活性を上昇させる可能性がある。
【０００５】
上昇したｈＫ７活性が炎症性および過増殖性皮膚疾患を含む皮膚障壁機能不全による皮膚疾患に関与しているという仮説は、次の研究によって支持される：第一に、ネザートン症候群患者はセリンプロテアーゼ活性の表現型依存性上昇、コルネオデスモソームの減少、脂質プロセッシング酵素β−グルコセレブロシダーゼおよび酸性スフィンゴミエリナーゼの減少および障壁機能不全を示す（１５、１６）。第二に、ヒトカリクレイン７を過剰発現するトランスジェニックマウスはアトピー性皮膚炎を有する患者において見られるものと同様の皮膚表現型を示す（１７、１８、１９）。第三に、アトピー性皮膚炎および乾癬患者の皮膚において、上昇したｈＫ７濃度が記載された（１７、２０）。さらにまた、上昇したＫ７の活性およびそれによる上皮障壁機能不全はまた、炎症性腸疾患およびクローン病のような他の上皮疾患の病理に重要な役割を果たし得る。
【０００６】
したがって、ｈＫ７は、アトピー性皮膚炎、乾癬、ネザートン症候群または他の掻痒性皮膚疾患、例えば結節性痒疹、老人の不特定の掻痒ならびに上記障壁機能不全を伴う他の疾患、例えば炎症性腸疾患およびクローン病のような炎症性および／または過増殖性および掻痒性皮膚疾患の処置のための潜在的な標的と考えられ、その特異的調節剤（アゴニストまたは阻害剤）が必要とされている。
【０００７】
処置はそれぞれ、局所または全身投与、例えばクリーム、軟膏および座薬によって、または経口、皮下または静脈内投与であってよい。
【０００８】
コンドロマイセス（Chondromyces）はポリアンギウム科（Polyangiaceae）の１種であり、デルタプロテオバクテリアのミキソコッカス目（Myxocccales）に属する。粘液細菌目とも称されるミキソコッカス目の細菌は、他のほとんどの細菌とそれらを区別する２個の特徴を有する、グラム陰性桿菌である。それらは、飢餓状態になると能動的滑走メカニズムを用いて固体表面上に集合し、集合して子実体を形成する（Kaiser (2003)）。本発明者らは、カリクレイン７を特異的に調節することができるコンドロマイセスによって生産される環状デプシペプチドを同定した。
【発明の概要】
【０００９】
発明の要約
本発明は、カリクレイン７依存性疾患の処置用医薬として使用するための、式（Ｉ）：
【化１】
〔式中、Ａ７のカルボキシ基とＡ２のヒドロキシ基の間にエステル結合が見られ、ＸおよびＡ１はそれぞれ独立して任意的に存在しており、Ｘは何れかの化学残基であり、Ａ１は標準アミノ酸であり、Ａ２はスレオニン、セリンまたは５−メチルヒドロキシプロリンであり、Ａ３は非塩基性標準アミノ酸または非塩基性非標準アミノ酸、またはその非塩基性誘導体であり、Ａ４はＡｈｐ、デヒドロ−ＡＨＰ、プロリンまたはその誘導体であり、Ａ５はイソロイシン、ロイシン、フェニルアラニン、プロリン、スレオニンまたはバリンであり、Ａ６はアラニン、フェニルアラニン、トリプトファン、チロシンまたはその誘導体であり、Ａ７はロイシン、イソロイシンまたはバリンである〕
の構造を有する環状デプシペプチドまたはその誘導体、または環状デプシペプチドまたはその誘導体の薬学的に許容される塩に関する。
【００１０】
好ましくは、カリクレイン７依存性疾患はネザートン症候群、掻痒性皮膚疾患、例えば結節性痒疹、膿疱性乾癬およびがん、特に卵巣がんから成る群から選択される。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】式（ＩＩ）の化合物の１Ｈ−ＮＭＲスペクトル（６００ＭＨｚ、ｄ６−ＤＭＳＯ）。
【図２】式（ＩＩ）の化合物の１３Ｃ−ＮＭＲスペクトル（１５０ＭＨｚ、ｄ６−ＤＭＳＯ）。
【図３】式（ＶＩＩＩ）の化合物の１Ｈ−ＮＭＲスペクトル（６００ＭＨｚ、ｄ６−ＤＭＳＯ）。
【図４】式（ＶＩＩＩ）の化合物の１３Ｃ−ＮＭＲスペクトル（１５０ＭＨｚ、ｄ６−ＤＭＳＯ）。
【図５】Ａｈｐが３−アミノ−２−ピペリドンに変換されている式（ＩＩ）の環状デプシペプチド誘導体の１Ｈ−ＮＭＲスペクトル（実施例４）。
【図６】実施例５の環状デプシペプチド誘導体の１Ｈ−ＮＭＲスペクトル。
【図７】実施例６の環状デプシペプチド誘導体の１Ｈ−ＮＭＲスペクトル。
【図８】実施例７の環状デプシペプチド誘導体の１Ｈ−ＮＭＲスペクトル。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
発明の詳細な説明
上記のとおり、本発明は、カリクレイン７依存性疾患の処置用医薬として使用するための、式（Ｉ）：
【化２】
〔式中、Ａ７のカルボキシ基とＡ２のヒドロキシ基の間にエステル結合が見られ、ＸおよびＡ１はそれぞれ独立して任意的に存在しており、Ｘは何れかの化学残基であり、Ａ１は標準アミノ酸であり、Ａ２はスレオニン、セリンまたは５−メチルヒドロキシプロリンであり、Ａ３は非塩基性標準アミノ酸または非塩基性非標準アミノ酸、またはその非塩基性誘導体であり、Ａ４はＡｈｐ、デヒドロ−ＡＨＰ、プロリンまたはその誘導体であり、Ａ５はイソロイシン、ロイシン、フェニルアラニン、プロリン、スレオニンまたはバリンであり、Ａ６はアラニン、フェニルアラニン、トリプトファン、チロシンまたはその誘導体であり、Ａ７はロイシン、イソロイシンまたはバリンである〕
の構造を有する環状デプシペプチドまたはその誘導体、または環状デプシペプチドまたはその誘導体の薬学的に許容される塩に関する。
【００１３】
好ましくは、カリクレイン７依存性疾患はネザートン症候群、掻痒性皮膚疾患、例えば結節性痒疹、膿疱性乾癬およびがん、特に卵巣がんから成る群から選択される。
【００１４】
本発明の環状デプシペプチドの具体的な態様は：
【化３】
である。
【００１５】
式（ＩＩ）〜（ＶＩＩ）の環状デプシペプチドは、本発明のコンドロマイセス・クロカツス（Chondromyces crocatus）株（DSM 19329）によって生産することができる。
【００１６】
本発明の環状デプシペプチドの他の態様は：
【化４】
である。
【００１７】
式（ＶＩＩＩ）〜（Ｘ）の環状デプシペプチドは、本発明のコンドロマイセス・ロブスツス（Chondromyces robustus）（DSM 19330）によって生産することができる。
【００１８】
本発明の環状デプシペプチドのさらなる具体的な態様は次のとおりである：
表１
【表１】
【表２】
【表３】
【表４】
【００１９】
略語表
【表５】
【００２０】
「化学残基」は何れかの有機または無機化学基であってよい。表現「化学残基」は、置換もしくは非置換脂肪族基、例えばＣ１−Ｃ３アルキル、Ｃ１−Ｃ６アルキルまたはＣ１−Ｃ１２アルキル、置換もしくは非置換アリール、置換もしくは非置換アリールアルキル、置換もしくは非置換ヘテロアリールまたはハロゲンを含むが、これらに限定されない。例えば、特許請求の範囲に定義の化学残基は下記の化学基のいずれかであってよい。
【００２１】
表現「化学残基」は、アミノ酸、ペプチド、ポリペプチド、タンパク質等を含むが、これらに限定されない。
無機化学基の例は、例えばＢｒまたはＣｌのようなハロゲンである。
【００２２】
「脂肪族基」は炭素原子、水素原子、ハロゲン原子、酸素、窒素または他の原子の何れかの組合せを含む非芳香族性基であり、所望により１個以上の不飽和単位、例えば二重および／または三重結合を含んでいてもよい。脂肪族基は直鎖、分枝鎖または環式であってよく、好ましくは約１〜約２４個の炭素原子、より典型的には約１〜約１２個の炭素原子を含む。脂肪族炭化水素基に加えて、脂肪族基は例えば、ポリアルコキシアルキル、例えばポリアルキレングリコール、ポリアミンおよびポリイミンを例えば含む。かかる脂肪族基はさらに置換されていてもよい。
【００２３】
用語「Ｃ１−Ｃ３アルキル」、「Ｃ１−Ｃ６アルキル」、「Ｃ１−Ｃ１２アルキル」は、本明細書において使用するとき、それぞれ１〜３個、１〜６個または１〜１２個の炭素原子を含む飽和直鎖または分枝鎖炭化水素基を意味する。Ｃ１−Ｃ３アルキル基の例はメチル、エチル、プロピルおよびイソプロピル基を含み；Ｃ１−Ｃ６アルキル基の例はメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｎ−ペンチル、ネオペンチルおよびｎ−ヘキシル基を含むがこれらに限定されず；Ｃ１−Ｃ１２アルキル基の例はエチル、プロピル、イソプロピル、ヘキシル、ヘプチル、オクチル、ノニル、デシル、ウンデシル、ドデシル基等を含む。
【００２４】
用語「置換アルキル」は、本明細書において使用するとき、１個、２個、３個またはそれ以上の脂肪族置換基で置換された、Ｃ１−Ｃ１２アルキルまたはＣ１−Ｃ６アルキル基のようなアルキルを意味する。
好適な脂肪族置換基は、−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−Ｉ、−ＯＨ、保護ヒドロキシ、脂肪族エーテル、芳香族性エーテル、オキソ、−ＮＯ２、−ＣＮ、所望によりハロゲンで置換されていてもよい−Ｃ１−Ｃ１２−アルキル（例えばペルハロアルキル）、所望によりハロゲンで置換されていてもよいＣ２−Ｃ１２−アルケニル、所望によりハロゲンで置換されていてもよい−Ｃ２−Ｃ１２−アルキニル、−ＮＨ２、保護アミノ、−ＮＨ−Ｃ１−Ｃ１２−アルキル、−ＮＨ−Ｃ２−Ｃ１２−アルケニル、−ＮＨ−Ｃ２−Ｃ１２−アルケニル、−ＮＨ−Ｃ３−Ｃ１２−シクロアルキル、−ＮＨ−アリール、−ＮＨ−ヘテロアリール、−ＮＨ−ヘテロシクロアルキル、−ジアルキルアミノ、−ジアリールアミノ、−ジヘテロアリールアミノ、−Ｏ−Ｃ１−Ｃ１２−アルキル、−Ｏ−Ｃ２−Ｃ１２−アルケニル、−Ｏ−Ｃ２−Ｃ１２−アルキニル、−Ｏ−Ｃ３−Ｃ１２−シクロアルキル、−Ｏ−アリール、−Ｏ−ヘテロアリール、−Ｏ−ヘテロシクロアルキル、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ１−Ｃ１２−アルキル、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ２−Ｃ１２−アルケニル、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ２−Ｃ１２−アルキニル、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ３−Ｃ１２−シクロアルキル、−Ｃ（Ｏ）−アリール、−Ｃ（Ｏ）−ヘテロアリール、−Ｃ（Ｏ）−ヘテロシクロアルキル、−ＣＯＮＨ２、−ＣＯＮＨ−Ｃ１−Ｃ１２−アルキル、−ＣＯＮＨ−Ｃ２−Ｃ１２−アルケニル、−ＣＯＮＨ−Ｃ２−Ｃ１２−アルキニル、−ＣＯＮＨ−Ｃ３−Ｃ１２−シクロアルキル、−ＣＯＮＨ−アリール、−ＣＯＮＨ−ヘテロアリール、−ＣＯＮＨ−ヘテロシクロアルキル、−ＣＯ２−Ｃ１−Ｃ１２−アルキル、−ＣＯ２−Ｃ２−Ｃ１２−アルケニル、−ＣＯ２−Ｃ２−Ｃ１２−アルキニル、−ＣＯ２−Ｃ３−Ｃ１２−シクロアルキル、−ＣＯ２−アリール、−ＣＯ２−ヘテロアリール、−ＣＯ２−ヘテロシクロアルキル、−ＯＣＯ２−Ｃ１−Ｃ１２−アルキル、−ＯＣＯ２−Ｃ２−Ｃ１２−アルケニル、−ＯＣＯ２−Ｃ２−Ｃ１２−アルキニル、−ＯＣＯ２−Ｃ３−Ｃ１２−シクロアルキル、−ＯＣＯ２−アリール、−ＯＣＯ２−ヘテロアリール、−ＯＣＯ２−ヘテロシクロアルキル、−ＯＣＯＮＨ２、−ＯＣＯＮＨ−Ｃ１−Ｃ１２−アルキル、−ＯＣＯＮＨ−Ｃ２−Ｃ１２−アルケニル、−ＯＣＯＮＨ−Ｃ２−Ｃ１２−アルキニル、−ＯＣＯＮＨ−Ｃ３−Ｃ１２−シクロアルキル、−ＯＣＯＮＨ−アリール、−ＯＣＯＮＨ−ヘテロアリール、−ＯＣＯＮＨ−ヘテロシクロアルキル、−ＮＨＣ（Ｏ）−Ｃ１−Ｃ１２−アルキル、−ＮＨＣ（Ｏ）−Ｃ２−Ｃ１２−アルケニル、−ＮＨＣ（Ｏ）−Ｃ２−Ｃ１２−アルキニル、−ＮＨＣ（Ｏ）−Ｃ３−Ｃ１２−シクロアルキル、−ＮＨＣ（Ｏ）−アリール、−ＮＨＣ（Ｏ）−ヘテロアリール、−ＮＨＣ（Ｏ）−ヘテロシクロアルキル、−ＮＨＣＯ２−Ｃ１−Ｃ１２−アルキル、−ＮＨＣＯ２−Ｃ２−Ｃ１２−アルケニル、−ＮＨＣＯ２−Ｃ２−Ｃ１２−アルキニル、−ＮＨＣＯ２−Ｃ３−Ｃ１２−シクロアルキル、−ＮＨＣＯ２−アリール、−ＮＨＣＯ２−ヘテロアリール、−ＮＨＣＯ２−ヘテロシクロアルキル、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２、ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ−Ｃ１−Ｃ１２−アルキル、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ−Ｃ２−Ｃ１２−アルケニル、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ−Ｃ２−Ｃ１２−アルキニル、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ−Ｃ３−Ｃ１２−シクロアルキル、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ−アリール、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ−ヘテロアリール、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ−ヘテロシクロアルキル、ＮＨＣ（Ｓ）ＮＲ２、ＮＨＣ（Ｓ）ＮＨ−Ｃ１−Ｃ１２−アルキル、−ＮＨＣ（Ｓ）ＮＨ−Ｃ２−Ｃ１２−アルケニル、−ＮＨＣ（Ｓ）ＮＨ−Ｃ２−Ｃ１２−アルキニル、−ＮＨＣ（Ｓ）ＮＨ−Ｃ３−Ｃ１２−シクロアルキル、−ＮＨＣ（Ｓ）ＮＨ−アリール、−ＮＨＣ（Ｓ）ＮＲ−ヘテロアリール、−ＮＨＣ（Ｓ）ＮＨ−ヘテロシクロアルキル、−ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ２、ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ−Ｃ１−Ｃ１２−アルキル、−ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ−Ｃ２−Ｃ１２−アルケニル、−ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ−Ｃ２−Ｃ１２−アルキニル、−ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ−Ｃ３−Ｃ１２−シクロアルキル、−ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ−アリール、−ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ−ヘテロアリール、−ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ−ヘテロシクロアルキル、ＮＨＣ（ＮＨ）−Ｃ１−Ｃ１２−アルキル、−ＮＨＣ（ＮＨ）−Ｃ２−Ｃ１２−アルケニル、−ＮＨＣ（ＮＨ）−Ｃ２−Ｃ１２−アルキニル、−ＮＨＣ（ＮＨ）−Ｃ３−Ｃ１２−シクロアルキル、−ＮＨＣ（ＮＨ）−アリール、−ＮＨＣ（ＮＨ）−ヘテロアリール、−ＮＨＣ（ＮＨ）−ヘテロシクロアルキル、−Ｃ（ＮＲ）ＮＨ−Ｃ１−Ｃ１２−アルキル、−Ｃ（ＮＨ）ＮＨ−Ｃ２−Ｃ１２−アルケニル、−Ｃ（ＮＲ）ＮＨ−Ｃ２−Ｃ１２−アルキニル、−Ｃ（ＮＨ）ＮＨ−Ｃ３−Ｃ１２−シクロアルキル、−Ｃ（ＮＨ）ＮＨ−アリール、−Ｃ（ＮＨ）ＮＨ−ヘテロアリール、−Ｃ（ＮＨ）ＮＨ−ヘテロシクロアルキル、−Ｓ（Ｏ）−Ｃ１−Ｃ１２−アルキル、−Ｓ（Ｏ）−Ｃ２−Ｃ１２−アルケニル、−Ｓ（Ｏ）−Ｃ２−Ｃ１２−アルキニル、−Ｓ（Ｏ）−Ｃ３−Ｃ１２−シクロアルキル、−Ｓ（Ｏ）−アリール、−Ｓ（Ｏ）−ヘテロアリール、−Ｓ（Ｏ）−ヘテロシクロアルキル−ＳＯ２ＮＨ２、−ＳＯ２ＮＨ−Ｃ１−Ｃ１２−アルキル、−ＳＯ２ＮＨ−Ｃ２−Ｃ１２−アルケニル、−ＳＯ２ＮＨ−Ｃ２−Ｃ１２−アルキニル、−ＳＯ２ＮＨ−Ｃ３−Ｃ１２−シクロアルキル、−ＳＯ２ＮＨ−アリール、−ＳＯ２ＮＨ−ヘテロアリール、−ＳＯ２ＮＨ−ヘテロシクロアルキル、−ＮＨＳＯ２−Ｃ１−Ｃ１２−アルキル、−ＮＨＳＯ２−Ｃ２−Ｃ１２−アルケニル、−ＮＨＳＯ２−Ｃ２−Ｃ１２−アルキニル、−ＮＨＳＯ２−Ｃ３−Ｃ１２−シクロアルキル、−ＮＨＳＯ２−アリール、−ＮＨＳＯ２−ヘテロアリール、−ＮＨＳＯ２−ヘテロシクロアルキル、−ＣＨ２ＮＨ２、−ＣＨ２ＳＯ２ＣＨ３、−アリール、−アリールアルキル、−ヘテロアリール、−ヘテロアリールアルキル、−ヘテロシクロアルキル、−Ｃ３−Ｃ１２−シクロアルキル、ポリアルコキシアルキル、ポリアルコキシ、−メトキシメトキシ、−メトキシエトキシ、−ＳＨ、−Ｓ−Ｃ１−Ｃ１２−アルキル、−Ｓ−Ｃ２−Ｃ１２−アルケニル、−Ｓ−Ｃ２−Ｃ１２−アルキニル、−Ｓ−Ｃ３−Ｃ１２−シクロアルキル、−Ｓ−アリール、−Ｓ−ヘテロアリール、−Ｓ−ヘテロシクロアルキルまたはメチルチオメチルを含むがこれらに限定されない。アリール、ヘテロアリール、アルキル等はさらに置換されていてもよいと理解される。
【００２５】
用語「Ｃ２−Ｃ１２アルケニル」または「Ｃ２−Ｃ６アルケニル」は、本明細書において使用するとき、２〜１２個または２〜６個の炭素原子を含み、炭素−炭素二重結合を少なくとも１個有する炭化水素基に由来する１個の水素原子の除去による１価基を意味する。アルケニル基は例えば、エテニル、プロペニル、ブテニル、１−メチル−２−ブテン−１−イル、アルカジエン等を含むが、これらに限定されない。
用語「置換アルケニル」は、本明細書において使用するとき、１個、２個、３個またはそれ以上の脂肪族置換基で置換された上記定義の「Ｃ２−Ｃ１２アルケニル」または「Ｃ２−Ｃ６アルケニル」基を意味する。
【００２６】
用語「Ｃ２−Ｃ１２アルキニル」または「Ｃ２−Ｃ６アルキニル」は、本明細書において使用するとき、２〜１２個または２〜６個の炭素原子を含み、炭素−炭素三重結合を少なくとも１個有する炭化水素基に由来する１個の水素原子の除去による１価基を意味する。代表的なアルキニル基は、例えばエチニル、１−プロピニル、１−ブチニル等を含むが、これらに限定されない。
【００２７】
用語「置換アルキニル」は、本明細書において使用するとき、１個、２個、３個またはそれ以上の脂肪族置換基で置換された上記定義の「Ｃ２−Ｃ１２アルキニル」または「Ｃ２−Ｃ６アルキニル」基を意味する。
用語「Ｃ１−Ｃ６アルコキシ」は、本明細書において使用するとき、酸素原子を介して親分子部分と結合している、上記定義のＣ１−Ｃ６アルキル基を意味する。Ｃ１−Ｃ６−アルコキシの例は、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、イソプロポキシ、ｎ−ブトキシ、ｓｅｃ−ブトキシ、ｔｅｒｔ−ブトキシ、ｎ−ペントキシ、ネオペントキシおよびｎ−ヘキソキシを含むが、これらに限定されない。
【００２８】
用語「ハロ」および「ハロゲン」は、本明細書において使用するとき、フッ素、塩素、臭素およびヨウ素から選択される原子を意味する。
【００２９】
用語「アリール」は、本明細書において使用するとき、１〜２個の芳香環を有する単環または二環式炭素環式環を意味し、フェニル、ナフチル、テトラヒドロナフチル、インダニル、インデニル等を含むが、これらに限定されない。
【００３０】
用語「置換アリール」は、本明細書において使用するとき、１個、２個、３個またはそれ以上の芳香族置換基によって置換された、上記定義のアリール基を意味する。
芳香族置換基は、−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−Ｉ、−ＯＨ、保護ヒドロキシ、脂肪族エーテル、芳香族性エーテル、オキソ、−ＮＯ２、−ＣＮ、所望によりハロゲンで置換されていてもよい−Ｃ１−Ｃ１２−アルキル（例えばペルハロアルキル）、所望によりハロゲンで置換されていてもよいＣ２−Ｃ１２−アルケニル、所望によりハロゲンで置換されていてもよい−Ｃ２−Ｃ１２−アルキニル、−ＮＨ２、保護アミノ、−ＮＨ−Ｃ１−Ｃ１２−アルキル、−ＮＨ−Ｃ２−Ｃ１２−アルケニル、−ＮＨ−Ｃ２−Ｃ１２−アルケニル、−ＮＨ−Ｃ３−Ｃ１２−シクロアルキル、−ＮＨ−アリール、−ＮＨ−ヘテロアリール、−ＮＨ−ヘテロシクロアルキル、−ジアルキルアミノ、−ジアリールアミノ、−ジヘテロアリールアミノ、−Ｏ−Ｃ１−Ｃ１２−アルキル、−Ｏ−Ｃ２−Ｃ１２−アルケニル、−Ｏ−Ｃ２−Ｃ１２−アルキニル、−Ｏ−Ｃ３−Ｃ１２−シクロアルキル、−Ｏ−アリール、−Ｏ−ヘテロアリール、−Ｏ−ヘテロシクロアルキル、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ１−Ｃ１２−アルキル、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ２−Ｃ１２−アルケニル、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ２−Ｃ１２−アルキニル、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ３−Ｃ１２−シクロアルキル、−Ｃ（Ｏ）−アリール、−Ｃ（Ｏ）−ヘテロアリール、−Ｃ（Ｏ）−ヘテロシクロアルキル、−ＣＯＮＨ２、−ＣＯＮＨ−Ｃ１−Ｃ１２−アルキル、−ＣＯＮＨ−Ｃ２−Ｃ１２−アルケニル、−ＣＯＮＨ−Ｃ２−Ｃ１２−アルキニル、−ＣＯＮＨ−Ｃ３−Ｃ１２−シクロアルキル、−ＣＯＮＨ−アリール、−ＣＯＮＨ−ヘテロアリール、−ＣＯＮＨ−ヘテロシクロアルキル、−ＣＯ２−Ｃ１−Ｃ１２−アルキル、−ＣＯ２−Ｃ２−Ｃ１２−アルケニル、−ＣＯ２−Ｃ２−Ｃ１２−アルキニル、−ＣＯ２−Ｃ３−Ｃ１２−シクロアルキル、−ＣＯ２−アリール、−ＣＯ２−ヘテロアリール、−ＣＯ２−ヘテロシクロアルキル、−ＯＣＯ２−Ｃ１−Ｃ１２−アルキル、−ＯＣＯ２−Ｃ２−Ｃ１２−アルケニル、−ＯＣＯ２−Ｃ２−Ｃ１２−アルキニル、−ＯＣＯ２−Ｃ３−Ｃ１２−シクロアルキル、−ＯＣＯ２−アリール、−ＯＣＯ２−ヘテロアリール、−ＯＣＯ２−ヘテロシクロアルキル、−ＯＣＯＮＨ２、−ＯＣＯＮＨ−Ｃ１−Ｃ１２−アルキル、−ＯＣＯＮＨ−Ｃ２−Ｃ１２−アルケニル、−ＯＣＯＮＨ−Ｃ２−Ｃ１２−アルキニル、−ＯＣＯＮＨ−Ｃ３−Ｃ１２−シクロアルキル、−ＯＣＯＮＨ−アリール、−ＯＣＯＮＨ−ヘテロアリール、−ＯＣＯＮＨ−ヘテロシクロアルキル、−ＮＨＣ（Ｏ）−Ｃ１−Ｃ１２−アルキル、−ＮＨＣ（Ｏ）−Ｃ２−Ｃ１２−アルケニル、−ＮＨＣ（Ｏ）−Ｃ２−Ｃ１２−アルキニル、−ＮＨＣ（Ｏ）−Ｃ３−Ｃ１２−シクロアルキル、−ＮＨＣ（Ｏ）−アリール、−ＮＨＣ（Ｏ）−ヘテロアリール、−ＮＨＣ（Ｏ）−ヘテロシクロアルキル、−ＮＨＣＯ２−Ｃ１−Ｃ１２−アルキル、−ＮＨＣＯ２−Ｃ２−Ｃ１２−アルケニル、−ＮＨＣＯ２−Ｃ２−Ｃ１２−アルキニル、−ＮＨＣＯ２−Ｃ３−Ｃ１２−シクロアルキル、−ＮＨＣＯ２−アリール、−ＮＨＣＯ２−ヘテロアリール、−ＮＨＣＯ２−ヘテロシクロアルキル、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２、ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ−Ｃ１−Ｃ１２−アルキル、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ−Ｃ２−Ｃ１２−アルケニル、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ−Ｃ２−Ｃ１２−アルキニル、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ−Ｃ３−Ｃ１２−シクロアルキル、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ−アリール、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ−ヘテロアリール、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ−ヘテロシクロアルキル、ＮＨＣ（Ｓ）ＮＨ２、ＮＨＣ（Ｓ）ＮＨ−Ｃ１−Ｃ１２−アルキル、−ＮＨＣ（Ｓ）ＮＨ−Ｃ２−Ｃ１２−アルケニル、−ＮＨＣ（Ｓ）ＮＨ−Ｃ２−Ｃ１２−アルキニル、−ＮＨＣ（Ｓ）ＮＨ−Ｃ３−Ｃ１２−シクロアルキル、−ＮＨＣ（Ｓ）ＮＨ−アリール、−ＮＨＣ（Ｓ）ＮＨ−ヘテロアリール、−ＮＨＣ（Ｓ）ＮＨ−ヘテロシクロアルキル、−ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ２、ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ−Ｃ１−Ｃ１２−アルキル、−ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ−Ｃ２−Ｃ１２−アルケニル、−ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ−Ｃ２−Ｃ１２−アルキニル、−ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ−Ｃ３−Ｃ１２−シクロアルキル、−ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ−アリール、−ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ−ヘテロアリール、−ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ−ヘテロシクロアルキル、ＮＨＣ（ＮＨ）−Ｃ１−Ｃ１２−アルキル、−ＮＨＣ（ＮＨ）−Ｃ２−Ｃ１２−アルケニル、−ＮＨＣ（ＮＨ）−Ｃ２−Ｃ１２−アルキニル、−ＮＨＣ（ＮＨ）−Ｃ３−Ｃ１２−シクロアルキル、−ＮＨＣ（ＮＨ）−アリール、−ＮＨＣ（ＮＨ）−ヘテロアリール、−ＮＨＣ（ＮＨ）−ヘテロシクロアルキル、−Ｃ（ＮＨ）ＮＨ−Ｃ１−Ｃ１２−アルキル、−Ｃ（ＮＨ）ＮＨ−Ｃ２−Ｃ１２−アルケニル、−Ｃ（ＮＨ）ＮＨ−Ｃ２−Ｃ１２−アルキニル、−Ｃ（ＮＨ）ＮＨ−Ｃ３−Ｃ１２−シクロアルキル、−Ｃ（ＮＨ）ＮＨ−アリール、−Ｃ（ＮＨ）ＮＨ−ヘテロアリール、−Ｃ（ＮＨ）ＮＨ−ヘテロシクロアルキル、−Ｓ（Ｏ）−Ｃ１−Ｃ１２−アルキル、−Ｓ（Ｏ）−Ｃ２−Ｃ１２−アルケニル、−Ｓ（Ｏ）−Ｃ２−Ｃ１２−アルキニル、−Ｓ（Ｏ）−Ｃ３−Ｃ１２−シクロアルキル、−Ｓ（Ｏ）−アリール、−Ｓ（Ｏ）−ヘテロアリール、−Ｓ（Ｏ）−ヘテロシクロアルキル−ＳＯ２ＮＨ２、−ＳＯ２ＮＨ−Ｃ１−Ｃ１２−アルキル、−ＳＯ２ＮＨ−Ｃ２−Ｃ１２−アルケニル、−ＳＯ２ＮＨ−Ｃ２−Ｃ１２−アルキニル、−ＳＯ２ＮＨ−Ｃ３−Ｃ１２−シクロアルキル、−ＳＯ２ＮＨ−アリール、−ＳＯ２ＮＨ−ヘテロアリール、−ＳＯ２ＮＨ−ヘテロシクロアルキル、−ＮＨＳＯ２−Ｃ１−Ｃ１２−アルキル、−ＮＨＳＯ２−Ｃ２−Ｃ１２−アルケニル、−ＮＨＳＯ２−Ｃ２−Ｃ１２−アルキニル、−ＮＨＳＯ２−Ｃ３−Ｃ１２−シクロアルキル、−ＮＨＳＯ２−アリール、−ＮＨＳＯ２−ヘテロアリール、−ＮＨＳＯ２−ヘテロシクロアルキル、−ＣＨ２ＮＨ２、−ＣＨ２ＳＯ２ＣＨ３、−アリール、−アリールアルキル、−ヘテロアリール、−ヘテロアリールアルキル、−ヘテロシクロアルキル、−Ｃ３−Ｃ１２−シクロアルキル、ポリアルコキシアルキル、ポリアルコキシ、−メトキシメトキシ、−メトキシエトキシ、−ＳＨ、−Ｓ−Ｃ１−Ｃ１２−アルキル、−Ｓ−Ｃ２−Ｃ１２−アルケニル、−Ｓ−Ｃ２−Ｃ１２−アルキニル、−Ｓ−Ｃ３−Ｃ１２−シクロアルキル、−Ｓ−アリール、−Ｓ−ヘテロアリール、−Ｓ−ヘテロシクロアルキルまたはメチルチオメチルを含むが、これらに限定されない。アリール、ヘテロアリール、アルキル等はさらに置換されていてもよいと理解される。
【００３１】
用語「アリールアルキル」は、本明細書において使用するとき、Ｃ１−Ｃ３アルキルまたはＣ１−Ｃ６アルキル基を介して親化合物と結合しているアリールを意味する。例にはベンジル、フェネチル等が含まれるが、これらに限定されない。
用語「置換アリールアルキル」は、本明細書において使用するとき、１個、２個、３個またはそれ以上の芳香族置換基で置換された上記定義のアリールアルキル基を意味する。
【００３２】
用語「ヘテロアリール」は、本明細書において使用するとき、単、二または三環式芳香族性基または少なくとも１個の環原子がＳ、ＯおよびＮから選択され；０、１または２個の環原子がＳ、ＯおよびＮから独立して選択されるさらなるヘテロ原子であり；残りの環原子が炭素である５〜１０個の環原子を有する環であって、ここで当該環に含まれるいずれかのＮまたはＳは所望により酸化されていてもよい環を意味する。ヘテロアリールはピリジニル、ピラジニル、ピリミジニル、ピロリル、ピラゾリル、イミダゾリル、チアゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、チアジアゾリル、オキサジアゾリル、チオフェニル、フラニル、キノリニル、イソキノリニル、ベンゾイミダゾリル、ベンゾオキサゾリル、キノキサリニル等を含むが、これらに限定されない。ヘテロ芳香環は炭素またはヘテロ原子を介して化学構造と結合することができる。
【００３３】
用語「置換ヘテロアリール」は、本明細書において使用するとき、１個、２個、３個またはそれ以上の芳香族置換基で置換された上記定義のヘテロアリール基を意味する。
用語「Ｃ３−Ｃ１２−シクロアルキル」は、本明細書において使用するとき、単環式または二環式飽和炭素環式環化合物に由来する１個の水素原子の除去による１価基を意味する。例は、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、ビシクロ［２．２．１］ヘプチルおよびビシクロ［２．２．２］オクチルを含むがこれらに限定されない。
【００３４】
用語「置換Ｃ３−Ｃ１２−シクロアルキル」は、本明細書において使用するとき、１個、２個、３個またはそれ以上の脂肪族置換基で置換された上記定義のＣ３−Ｃ１２−シクロアルキル基を意味する。
【００３５】
用語「ヘテロシクロアルキル」は、本明細書において使用するとき、非芳香族性５、６もしくは７員環または二もしくは三環式基縮合系を意味し、ここで（ｉ）各環は酸素、硫黄および窒素から独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を含み、（ｉｉ）各５員環は０〜１個の二重結合を有し、各６員環は０〜２個の二重結合を有し、（ｉｉｉ）窒素および硫黄ヘテロ原子は所望により酸化されていてもよく、（ｉｖ）窒素ヘテロ原子は所望により第四級化されていてもよく、（ｉｖ）何れかの上記環はベンゼン環と縮合していてもよく、そして（ｖ）残りの環原子は所望によりオキソ置換されていてもよい炭素原子である。代表的なヘテロシクロアルキル基は、［１，３］ジオキソラン、ピロリジニル、ピラゾリニル、ピラゾリジニル、イミダゾリニル、イミダゾリジニル、ピペリジニル、ピペラジニル、オキサゾリジニル、イソキサゾリジニル、モルホリニル、チアゾリジニル、イソチアゾリジニル、キノキサリニル、ピリダジノニルおよびテトラヒドロフリルを含むが、これらに限定されない。
【００３６】
用語「置換ヘテロシクロアルキル」は、本明細書において使用するとき、１個、２個、３個またはそれ以上の脂肪族置換基で置換された、上記定義のヘテロシクロアルキル基を意味する。
【００３７】
用語「ヘテロアリールアルキル」は、本明細書において使用するとき、Ｃ１−Ｃ３アルキルまたはＣ１−Ｃ６アルキル基を介して親化合物と結合しているヘテロアリール基を意味する。例にはピリジニルメチル、ピリミジニルエチル等を含むが、これらに限定されない。
【００３８】
用語「置換ヘテロアリールアルキル」は、本明細書において使用するとき、１個、２個、３個またはそれ以上の芳香族置換基で置換された、上記定義のヘテロアリールアルキル基を意味する。
【００３９】
用語「Ｃ１−Ｃ３−アルキルアミノ」は、本明細書において使用するとき、窒素原子を介して親化合物と結合している、上記定義の１または２個のＣ１−Ｃ３−アルキル基を意味する。Ｃ１−Ｃ３−アルキルアミノの例は、メチルアミノ、ジメチルアミノ、エチルアミノ、ジエチルアミノおよびプロピルアミノを含むが、これらに限定されない。
【００４０】
用語「アルキルアミノ」は、構造−ＮＨ（Ｃ１−Ｃ１２アルキル）（ここで、Ｃ１−Ｃ１２アルキルは上記定義のとおりである）を有する基を意味する。
【００４１】
用語「ジアルキルアミノ」は、構造−Ｎ（Ｃ１−Ｃ１２アルキル）（Ｃ１−Ｃ１２アルキル）（ここで、Ｃ１−Ｃ１２アルキルは上記定義のとおりである）を有する基を意味する。ジアルキルアミノの例は、ジメチルアミノ、ジエチルアミノ、メチルエチルアミノ、ピペリジノ等を含むが、これらに限定されない。
用語「アルコキシカルボニル」は、エステル基、すなわちカルボニル基を介して親分子部分と結合しているアルコキシ基、例えばメトキシカルボニル、エトキシカルボニル等を意味する。
【００４２】
用語「カルボキシアルデヒド」は、本明細書において使用するとき、式−ＣＨＯの基を意味する。
用語「カルボキシ」は、本明細書において使用するとき、式−ＣＯＯＨの基を意味する。
用語「カルボキサミド」は、本明細書において使用するとき、式−Ｃ（Ｏ）ＮＨ（Ｃ１−Ｃ１２アルキル）または−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｃ１−Ｃ１２アルキル）（Ｃ１−Ｃ１２アルキル）、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、ＮＨＣ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ１２アルキル）、Ｎ（Ｃ１−Ｃ１２アルキル）Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ１２アルキル）等の基を意味する。
【００４３】
用語「ヒドロキシ保護基」は、本明細書において使用するとき、合成法のあいだヒドロキシル基を望ましくない反応から保護することが当該技術分野において知られている不安定な化学基を意味する。当該合成法の後、本明細書に記載のヒドロキシ保護基は、選択的に除去することができる。当該技術分野において既知のヒドロキシ保護基は、T. H. Greene and P. G. M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 3rd edition, John Wiley & Sons, New York (1999)に一般に記載されいている。ヒドロキシル保護基の例は、ベンジルオキシカルボニル、４−ニトロベンジルオキシカルボニル、４−ブロモベンジルオキシカルボニル、４−メトキシベンジルオキシカルボニル、メトキシカルボニル、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル、イソプロポキシカルボニル、ジフェニルメトキシカルボニル、２，２，２−トリクロロエトキシカルボニル、２−（トリメチルシリル）エトキシカルボニル、２−フルフリルオキシカルボニル、アリルオキシカルボニル、アセチル、ホルミル、クロロアセチル、トリフルオロアセチル、メトキシアセチル、フェノキシアセチル、ベンゾイル、メチル、ｔ−ブチル、２，２，２−トリクロロエチル、２−トリメチルシリルエチル、１，１−ジメチル−２−プロペニル、３−メチル−３−ブテニル、アリル、ベンジル、パラ−メトキシベンジルジフェニルメチル、トリフェニルメチル（トリチル）、テトラヒドロフリル、メトキシメチル、メチルチオメチル、ベンジルオキシメチル、２，２，２−トリクロロエトキシメチル、２−（トリメチルシリル）エトキシメチル、メタンスルホニル、パラ−トルエンスルホニル、トリメチルシリル、トリエチルシリル、トリイソプロピルシリル等を含む。本発明のための好ましいヒドロキシル保護基は、アセチル（Ａｃまたは−Ｃ（Ｏ）ＣＨ３）、ベンゾイル（Ｂｎまたは−Ｃ（Ｏ）Ｃ６Ｈ５）およびトリメチルシリル（ＴＭＳまたは−Ｓｉ（ＣＨ３）３）である。
【００４４】
用語「保護ヒドロキシ」は、本明細書において使用するとき、例えばベンゾイル、アセチル、トリメチルシリル、トリエチルシリル、メトキシメチル基を含む上記定義のヒドロキシル保護基で保護されたヒドロキシ基を意味する。
【００４５】
用語「アミノ保護基」は、本明細書において使用するとき、本明細書において使用するとき、合成法のあいだアミノ基を望ましくない反応から保護することが当該技術分野において知られている不安定な化学基を意味する。当該合成法の後、本明細書に記載のアミノ保護基は、選択的に除去することができる。当該技術分野において既知のアミノ保護基は、T. H. Greene and P. G. M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 3rd edition, John Wiley & Sons, New York (1999)に一般に記載されている。アミノ保護基の例はｔ−ブトキシカルボニル、９−フルオレニルメトキシカルボニル、ベンジルオキシカルボニル等を含むが、これらに限定されない。
【００４６】
用語「保護アミノ」は、本明細書において使用するとき、上記定義のアミノ保護基で保護されたアミノ基を意味する。
【００４７】
用語「アシル」はカルボン酸、カルバミン酸、炭酸、スルホン酸およびリン酸を含むがこれらに限定されない酸に由来する基を含む。例には脂肪族カルボニル、芳香族カルボニル、脂肪族スルホニル、芳香族スルフィニル、脂肪族スルフィニル、芳香族スルホニル、脂肪族スルファミル、芳香族スルファミル、芳香族ホスフェートおよび脂肪族ホスフェートが含まれる。
【００４８】
「アミノ酸」はアミンおよびカルボキシル官能基を両方含む、一般式ＮＨ２ＣＨＲＣＯＯＨを有する分子である。用語アミノ酸は、標準アミノ酸および非標準アミノ酸を含む。
【００４９】
「標準アミノ酸」は、アラニン、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、グルタミン酸、グルタミン、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リシン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、スレオニン、トリプトファン、チロシンおよびバリンを含む。
【００５０】
「アスパラギン酸以外の標準アミノ酸」は、アラニン、アルギニン、アスパラギン、システイン、グルタミン酸、グルタミン、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リシン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、スレオニン、トリプトファン、チロシンおよびバリンから成る群から選択される。
【００５１】
「非標準アミノ酸」は、標準アミノ酸のものではないアミノ酸（アミンおよびカルボキシル官能基の両方を含む分子）を意味する。その例は、セレノシステイン（ＵＧＡコドンでいくつかのタンパク質に挿入される）、ピロリジン（メタン生成細菌によってメタンを生産する酵素において使用され、コドンＵＡＧでコードされる）、ランチオニン、２−アミノイソ酪酸、デヒドロアラニン、３−アミノ−６−ヒドロキシ−２−ピペリドン、ガンマ−アミノ酪酸、オルニチン、シトルリン、ホモシステイン、ドーパミンまたはヒドロキシプロリンである。
【００５２】
「非塩基性標準アミノ酸」は、アラニン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、グルタミン酸、グルタミン、グリシン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、スレオニン、トリプトファン、チロシンおよびバリンである。
【００５３】
「Ａｈｐ」（３−アミノ−６−ヒドロキシ−２−ピペリドン）は、例えばシアノバクテリアにおいて見られる非標準アミノ酸である。「Ａｈｐ誘導体」は、３−アミノ−５，６−ジヒドロ−２−ピペリドン（デヒドロ−ＡＨＰ）、３−アミノ−２−ピペリドンおよび「ＡＨＰのエーテルおよびエステル誘導体」を含むが、これらに限定されない。好ましいＡｈｐ誘導体は３−アミノ−２−ピペリドンである。
【００５４】
非標準アミノ酸のこの群の別のメンバーは：
【化５】
である。
【００５５】
「アミノ酸誘導体」はＯ−アルキル、Ｏ−アリール、Ｏ−アシル、Ｓ−アルキル、Ｓ−アリール、Ｓ−Ｓ−アルキル、アルコキシカルボニル、Ｏ−カルボニル−アルコキシ、カルボネート、Ｏ−カルボニル−アリールオキシ、Ｏ−カルボニル−アルキルアミノ、Ｏ−カルボニル−アリールアミノ、Ｎ−アルキル、Ｎ−ジアルキル、Ｎ−トリアルキルアンモニウム、Ｎ−アシル、Ｎ−カルボニル−アルコキシ、Ｎ−カルボニル−アリールオキシ、Ｎ−カルボニル−アルキルアミノ、Ｎ−カルボニル−アリールアミノ、Ｎ−スルホニルアルキルまたはＮ−スルホニルアリールを含むが、これらに限定されない。
【００５６】
「非塩基性標準アミノ酸誘導体」は、Ｏ−アルキル、Ｏ−アリール、Ｏ−アシル、Ｓ−アルキル、Ｓ−アリール、Ｓ−Ｓ−アルキル、アルコキシカルボニル、Ｏ−カルボニル−アルコキシ、カルボネート、Ｏ−カルボニル−アリールオキシ、Ｏ−カルボニル−アルキルアミノ、Ｏ−カルボニル−アリールアミノ、Ｎ−アルキル、Ｎ−ジアルキル、Ｎ−ｔｒｉアルキルアンモニウム、Ｎ−アシル、Ｎ−カルボニル−アルコキシ、Ｎ−カルボニル−アリールオキシ、Ｎ−カルボニル−アルキルアミノ、Ｎ−カルボニル−アリールアミノ、Ｎ−スルホニルアルキルまたはＮ−スルホニルアリールを含むが、これらに限定されない。
【００５７】
「チロシン誘導体」は−Ｏ−アルキル、Ｏ−アリール、Ｏ−ヘテロアリール、Ｏ−アシル、Ｏ−ＰＯ３ＨおよびＯ−ＳＯ３Ｈならびにオルトまたはメタ位でのハロゲン化を含むが、これらに限定されない。
【００５８】
「デプシペプチド誘導体」は、本明細書に記載のとおり修飾したデプシペプチドおよび後記実施例に具体的に記載したものを含むが、これらに限定されない。該誘導体は当該技術分野において周知の方法を用いて製造することができる。
【００５９】
本発明はさらに、本発明の化合物の薬学的に許容される塩および誘導体、ならびにかかる化合物を得るための方法に関する。当該化合物を得る一つの方法は、コンドロマイセスまたはその突然変異体もしくは変異体を好適な条件下で、好ましくは本明細書に記載の発酵プロトコルを用いて培養することである。
【００６０】
少なくとも１個の塩形成基を有する本発明の化合物の「塩」は、自体公知の方法で製造することができる。例えば、酸性基を有する本発明の化合物の塩は、例えば当該化合物を金属化合物、例えば好適な有機カルボン酸のアルカリ金属塩、例えば２−エチルヘキサン酸のナトリウム塩で、有機アルカリ金属化合物またはアルカリ土類金属化合物、例えば対応するヒドロキシド、カルボネートまたはハイドロゲンカルボネート、例えばナトリウムまたはカリウムのヒドロキシド、カルボネートまたはハイドロゲンカルボネートで、対応するカルシウム化合物で、あるいはアンモニアもしくは好適な有機アミンで、好ましくは化学量論量またはわずかに過剰の塩形成剤を用いて処理して、形成することができる。本発明の化合物の酸付加塩は、常套の方法で、例えば該化合物を酸または好適なアニオン交換剤で処理して得られる。酸性および塩基性塩形性基、例えば遊離カルボキシ基と遊離アミノ基を含む本発明の化合物の分子内塩は、例えば弱塩基による等電点への、酸付加塩のような塩の中和またはイオン交換剤による処理によって形成させることができる。
【００６１】
塩は常套の方法で遊離化合物に変換することができ；金属塩およびアンモニウム塩は例えば好適な酸で処理して変換することができ、酸付加塩は例えば好適な塩基剤で処理して変換することができる。
【００６２】
本発明に従って得られた異性体の混合物は、自体公知の方法で個々の異性体に分離することができる；ジアステレオマーは例えば多相溶媒混合物での分配、再結晶および／または例えばシリカゲルでのクロマトグラフ分離または例えば逆相カラムでの中圧液体クロマトグラフィーによって分離することができ、ラセミ体は例えば光学的に純粋な塩形成剤との塩の形成と例えば分画結晶化による得られたジアステレオマー混合物の分離によって、または光学的に活性なカラム材でのクロマトグラフィーによって分割することができる。
【００６３】
中間体および最終生成物は標準的な方法、例えばクロマトグラフ法、分配法、（再）結晶化等を用いて後処理および／または精製することができる。
【００６４】
本発明の環状デプシペプチドはカリクレイン７を阻害する。「阻害剤」は、１００μＭ未満、５０μＭ、３０μＭ、２０μＭまたは１０μＭ未満の測定ＩＣ５０で酵素反応を阻害する環状デプシペプチドである。特に好ましいものは、ヒトカリクレイン７について３０μＭ未満のＩＣ５０を有する環状デプシペプチド、例えば１０μＭ、１μＭ、１００ｎＭ、５０ｎＭ、４０ｎＭ、３０ｎＭ、２０ｎＭ、１０ｎＭまたはそれ未満のＩＣ５０を有する環状デプシペプチドである。ヒトカリクレインのＩＣ５０はBiosyntan（Berlin, Germany）から購入可能な蛍光消光基質Ａｃ−Ｇｌｕ−Ａｓｐ（ＥＤＡＮＳ）−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ｉｌｅ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ＾Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ（ＤＡＢＣＹＬ）−Ｇｌｕ−ＮＨ２（ここで、＾はＭＳ分析で同定した解離しやすい結合を示す）を用いて測定することができる。酵素反応は１５０ｍＭのＮａＣｌおよび０．０５％（ｗ／ｖ）のＣＨＡＰＳを含む５０ｍＭのクエン酸ナトリウムバッファー中ｐＨ５．６で実施する。ＩＣ５０値の検出のために、該アッセイは室温、３８４ウェルプレートで実施する。総最終アッセイ体積は３０μｌである。試験化合物を９０％（ｖ／ｖ）ＤＭＳＯ／水に溶解し、水（０．０５％（ｗ／ｖ）のＣＨＡＰＳを含む）で所望のアッセイ濃度の３倍に希釈する。１１種類の最終化合物濃度は：０．３ｎＭ、１ｎＭ、３ｎＭ、１０ｎＭ、３０ｎＭ、１００ｎＭ、３００ｎＭ、１μＭ、３μＭ、１０μＭおよび３０μＭである。それぞれのアッセイについて、１０μｌの水／ＣＨＡＰＳ（±試験化合物）、次いで１０μｌのプロテアーゼ溶液（１．５ｘアッセイバッファーで希釈）をウェル毎に加える。最終アッセイ溶液のプロテアーゼ濃度は０．２ｎＭ（Bradford法によって測定した酵素濃度による）である。室温で１時間インキュベートした後、１０μｌの基質溶液（１．５ｘアッセイバッファーに溶解させた基質、最終濃度は２μＭである）を加えて反応を開始させる。酵素活性に対する化合物の効果は、線形プログレス曲線から得られ、基質の添加直後に得た最初のもの（ｔ＝０分）と１時間後の第二のもの（ｔ＝６０分）の２つの読み取りから決定する。ＩＣ５０値は非線形回帰分析ソフトウェア（XLfit, Vers. 4.0; ID Business Solution Ltd., Guildford, Surrey, UK）を用いて阻害率対阻害剤濃度のプロットから計算する。
【００６５】
ヒトカリクレイン７（ｈＫ７）はヒト皮膚に存在するセリンプロテアーゼ活性を有する酵素である。これは当初は角質層キモトリプシン酵素（ＳＣＣＥ）と記載され、角質層のタンパク質（例えばコルネオデスモシンおよびプラコグロビン）を切断することによって角質層の落屑に関与し得る。角質層は、上皮の障壁形成最外層であり、高度に組織化された脂質に囲まれた角化上皮細胞から成る。これは上皮分化によって継続的に形成され、正常上皮において角質層の一定の厚みは角化細胞の増殖と落屑のバランスによって維持される。炎症性皮膚疾患におけるＳＣＣＥの上昇した発現は、病因的意義が存在し得る（Hansson, et al. (2002)）。上皮角化細胞においてヒトカリクレイン７を発現するトランスジェニックマウスは、増加した上皮厚による病的皮膚変化、角質増殖症、皮膚炎症および重度の掻痒症（掻痒）を発症することが見出された。角質層キモトリプシン酵素遺伝子の３’ＵＴＲにおける４ｂｐ（ＡＡＣＣ）挿入とアトピー性皮膚炎の遺伝的関連性が報告されており（Vasilopoulos, et al. (2004)）、これは該酵素がアトピー性皮膚炎の発症に重要な役割を有する可能性を示唆している。アトピー性皮膚炎は１５〜２０％の小児が罹患している皮膚障壁不全による疾患である。
【００６６】
カリクレイン７は、キモトリプシン様活性を示すカリクレイン遺伝子ファミリーのＳ１セリンプロテアーゼである。ヒトカリクレイン７（ｈＫ７、ＫＬＫ７または角質層キモトリプシン酵素（ＳＣＣＥ）、Swissprot P49862）は皮膚生理学において重要な役割を果たす（１、２、３）。これは主として皮膚において発現し、皮膚生理に深く関与していることが報告されている。ｈＫ７は落屑プロセスにおける角化扁平上皮細胞の細胞間接着構造の分解に関与する。落屑プロセスは、皮膚障壁機能に深く関与する皮膚の最外層である角質層の一定の厚みを維持するために十分に制御され、角質細胞のデノボ生産と繊細に釣り合いを取っている。この観点から、ｈＫ７は角質接着斑タンパク質コルネオデスモシンおよびデスモコリン１を切断することができると報告されている（４、５、６）。両方のコルネオデスモソームの分解は、落屑に必要である。さらに、ごく最近、２種の脂質プロセッシング酵素β−グルコセレブロシダーゼおよび酸性スフィンゴミエリナーゼがｈＫ７によって分解され得ることが示されている（７）。両方の脂質プロセッシング酵素は、それらの基質であるグルコシルセラミドおよびスフィンゴミエリンと共に分泌され、これらの極性脂質前駆体をそれらのより非極性な生成物、例えばセラミドに処理し、これは次いで、細胞外層状膜に取り込まれる。該層状膜構造は機能的皮膚障壁に重要である。最後に、ｈＫ７はインビトロでインターロイキン−１β（ＩＬ−１β）前駆体をその活性形態に活性化することが示されている（８）。角化細胞はＩＬ−１βを発現するが、特異的ＩＬ−１β変換酵素（ＩＣＥまたはカスパーゼ１）の活性形態を発現しないため、ヒト上皮におけるＩＬ−１β活性化は別のプロテアーゼ（潜在的な候補はｈＫ７である）を介して生じることが提案されている。
【００６７】
最近の研究は、ｈＫ７の増加した活性と、アトピー性皮膚炎、乾癬またはネザートン症候群のような炎症性皮膚疾患に関連付けている。これは脱制御落屑を引き起こすコルネオデスモソームの脱制御分解、阻害された層状膜構造を引き起こす脂質プロセッシング酵素の向上した分解または前炎症性サイトカインＩＬ−１βの脱制御活性化を導き得る。その最終結果は、皮膚障壁機能不全および炎症である（WO-A-2004/108139も参照されたい）。
【００６８】
ｈＫ７活性が様々なレベルで制御されているため、炎症性皮膚疾患において、多様な因子が上昇したｈＫ７活性に関与している可能性がある。第一に、発現されるプロテアーゼの量は遺伝的因子によって影響され得る。かかる遺伝的リンク、ｈＫ７遺伝子の３’−ＵＴＲにおける多型は、近年記載された（９）。著者らはカリクレイン７遺伝子の３’−ＵＴＲにおける記載の４塩基対挿入がｈＫ７ｍＲＮＡを安定化して、ｈＫ７の過剰発現をもたらすと仮定している。第二に、ｈＫ７は層状体を介して角質層細胞外空間に酵素原として分泌され、自己活性化することができないため、別のプロテアーゼ、例えばｈＫ５によって活性化される必要がある（５）。かかる活性化酵素の制御されていない活性はｈＫ７の過剰活性化をもたらす可能性がある。第三に、活性化ｈＫ７はＬＥＫＴＩ、ＡＬＰまたはエラフィンのような天然阻害剤によって阻害することができる（１０、１１）。かかる阻害剤の発現低下または欠如は、ｈＫ７の活性上昇を引き起こす可能性がある。近年、ＬＥＫＴＩをコードするｓｐｉｎｋ５遺伝子における変異がネザートン症候群の原因であり（１２）、該遺伝子における点突然変異がアトピー性皮膚炎に関連している（１３、１４）ことが見出された。最後に、ｈＫ７の活性を制御する別のレベルはｐＨである。ｈＫ７は中性乃至わずかにアルカリ性のｐＨが至適であり（２）、皮膚の最内層から最外層にかけて中性から酸性のｐＨ勾配が存在する。石けんのような環境因子は、角質層の最外層においてｈＫ７の至適ｐＨにｐＨを上昇させて、ｈＫ７活性を上昇させる可能性がある。
【００６９】
上昇したｈＫ７活性は炎症性および過増殖性皮膚疾患を含む皮膚障壁機能不全による皮膚疾患に関与している。第一に、ネザートン症候群患者はセリンプロテアーゼ活性の表現型依存性上昇、コルネオデスモソームの減少、脂質プロセッシング酵素β−グルコセレブロシダーゼおよび酸性スフィンゴミエリナーゼの減少および障壁機能不全を示す（１５、１６）。第二に、ヒトカリクレイン７を過剰発現するトランスジェニックマウスはアトピー性皮膚炎を有する患者において見られるものと同様の皮膚表現型を示す（１７、１８、１９）。第三に、アトピー性皮膚炎および乾癬患者の皮膚において、上昇したｈＫ７濃度が記載された（１７、２０）。さらにまた、上昇したＫ７の活性およびそれによる上皮障壁機能不全はまた、炎症性腸疾患およびクローン病のような他の上皮疾患の病理に重要な役割を果たし得る。
【００７０】
処置はそれぞれ、当該技術分野において周知の、局所または全身投与、例えばクリーム、軟膏および座薬によって、または経口、皮下または静脈内投与であってよい。
【００７１】
一つの局面において、本発明のデプシペプチドはＤＳＭＺに２００７年４月２４日に寄託したコンドロマイセス・クロカツス（Chondromyces crocatus）株（DSM 19329）を培養して得られ、あるいはＤＳＭＺに２００７年４月２４日に寄託したコンドロマイセス・ロブスツス（Chondromyces robustus）株（DSM 19330）を培養して得られる。
菌株の寄託は特許手続上の微生物の寄託の国際承認に関するブダペスト条約に基づいて行った。寄託した菌株は特許の発行によって取引不能の形で、制限または条件を付加することなく公に開放される。寄託した菌株は単に便宜のために当業者に提供され、寄託が実施可能用件であることを認めるわけではない。
【００７２】
本発明は特定の菌株コンドロマイセス・クロカツスおよびコンドロマイセス・ロブスツスの培養に限定されないと理解される。むしろ本発明は、デプシペプチドを生産することができる他の生物、例えばＸ線照射、紫外線照射、化学変異誘発剤、ファージ曝露、抗生物質選択等のような既知の方法による、この生物に由来し得る株の突然変異体または変異体の培養を意図する。
【００７３】
本発明のデプシペプチドは、多様な微生物によって生合成され得る。本発明の化合物を合成することができる微生物は、粘液細菌とも称されるミクソコックス目の細菌を含むが、これらに限定されない。粘液細菌属に属するメンバーの非限定的な例は、コンドロマイセス、ソランギウム、ポリアンギウム、ビソファーガ（Byssophaga）、ハプロアンギウム（Haploangium）、ジャーニア（Jahnia）、ナノシスティス、コフレリア（Koffleria）、ミキソコッカス、コラロコッカス（Corallococcus）、シストバクター、アーキアンギウム、スチグマテラ、ヒアランギウム、メリタンギウム、ピクシコッカス（Pyxicoccus）を含む。粘液細菌の分類学は複雑であり、２００４年５月５日に発売されたGarrity GM, Bell JY, Lilburn TG (2004) Taxonomic outline of the prokaryotes, Bergey’s manual of systematic bacteriology、第二版（http://141.150.157.80/bergeysoutline/main.htm）を参照する。
【００７４】
構造式（Ｉ〜Ｘ）の化合物は、好適な培地の好気的発酵によって、制御された条件下で、コンドロマイセス・クロカツスまたはコンドロマイセス・ロブスツスの培養によって生産される。好適な培地は、好ましくは水性であり、同化炭素、窒素および無機塩源を含む。
【００７５】
好適な培地は、実施例１および２に記載の増殖培地を含むが限定されない。発酵は約３〜約２０日間、約１０℃〜約４０℃で実施し；しかし最適な結果のために、約３０℃で発酵を実施することが好ましい。発酵の間、培養液のｐＨは約６．０〜約９．０であり得る。
【００７６】
デプシペプチド産生微生物を播種した培養培地は、例えば回転振盪機または撹拌タンク発酵槽を用いて、好気的条件下でインキュベートすることができる。インキュベーション中に播種培養培地に空気、酸素または適切な気体混合物を注入して、通気を行うことができる。十分量の抗生物質化合物が蓄積すると、これを常套の通常の方法で、例えば抽出およびクロマトグラフ法、沈殿または結晶化および／または本明細書に記載の方法で、培養物から濃縮し、単離することができる。抽出の例として、培養物をｎ−ブタノール、酢酸エチル、シクロヘキサン、ｎ−ヘキサン、トルエン、ｎ−ブチルアセテートまたは４−メチル−２−ペンタノンのような好適な有機溶媒と混合し、撹拌して、減圧下で溶媒を除去して、有機層中の抗生物質化合物を回収することができる。得られた残留物は、所望により、例えば水、エタノール、メタノールまたはそれらの混合物で再構成して、ヘキサン、四塩化炭素、塩化メチレン、ジクロロメタンまたはそれらの混合物のような好適な有機溶媒で再抽出することができる。溶媒を除去した後、例えばクロマトグラフ法によって化合物をさらに精製してもよい。クロマトグラフィーの例として、エーテル、ケトン、エステル、ハロゲン化炭化水素またはアルコールを含む有機溶出溶媒またはそれらの混合物によるシリカゲルまたは酸化アルミナのような固定相、あるいは多様な官能基を有する修飾シリカゲルでの、多様なｐＨのアセトニトリル、メタノールまたはテトロヒドロフランのような有機溶媒またはその水性混合物で溶出する逆相クロマトグラフィーを適用することができる。別の例は、例えば固体−液体または液体−液体モードの分配クロマトグラフィーである。また、例えばSephadex LH-20（Sigma-Aldrich）を用いて、多様な溶媒、好ましくはアルコールで溶出するサイズ排除クロマトグラフィーが適用される。
【００７７】
この分野において一般的である通り、生産ならびに回収および精製プロセスは、多様な分析方法、例えばバイオアッセイ、ＴＬＣ、ＨＰＬＣまたはそれらの組合せによって、そして種々の検出方法（ＴＬＣには典型的にはＵＶ光、ヨウ素蒸気または着色剤スプレー、ＨＰＬＣには典型的にＵＶ光、質量感知または光散乱法）を適用して、モニターすることができる。例えば、ＨＰＬＣ技術は、機能化シリカゲルでの逆相カラムを用いて、極性水混和性溶媒と水の特定のｐＨでの直線グラジエント混合物である溶離剤および多様な波長でのＵＶ光または質量感知検出器による検出方法を適用することによって代表される。
【００７８】
微生物から生合成したデプシペプチドは、所望により無作為および／または定方向化学修飾に付して誘導体または構造アナログである化合物を形成してもよい。同様の機能的活性を有するかかる誘導体または構造アナログは、本発明の範囲に含まれる。デプシペプチドは所望により、当該技術分野において周知または本明細書に記載の方法を用いて修飾してもよい。
【００７９】
例えば、本発明のデプシペプチドの誘導体は、次の製造を含む式
【化６】
の環状デプシペプチドの誘導化によって製造することができる：
ａ）− Ａ４が
【化７】
である化合物を有機または無機酸、例えばトリフルオロ酢酸、硫酸、塩酸またはルイス酸、例えば三フッ化ホウ素エーテルで、溶媒、例えばジクロロメタン、ＴＨＦ中または溶媒の非存在下、−７８℃〜１５０℃、好ましくは−３０℃〜室温で処理することによる、Ａ４が
【化８】
である化合物の製造。
【００８０】
ｂ）− Ａ４が
【化９】
である化合物を水素分子または水素源、例えばシクロヘキセン、ギ酸アンモニウムで、触媒、例えばパラジウムの存在下、溶媒、例えば２−プロパノール中、−５０℃〜１００℃、好ましくは室温で処理することによる、Ａ４が
【化１０】
である化合物の製造。
【００８１】
ｃ）− Ａ４が
【化１１】
である化合物を有機または無機酸、例えば硫酸、塩酸またはルイス酸、例えば三フッ化ホウ素エーテルで、還元剤、例えばトリエチルシランの存在下、溶媒、例えばジクロロメタン、ＴＨＦ中または溶媒の非存在下、−７８℃〜１５０℃、好ましくは−５０℃〜室温で処理することによる、Ａ４が
【化１２】
である化合物の製造。
【００８２】
ｄ）− Ａ４が
【化１３】
である化合物を置換または非置換アルカノールと有機または無機酸、例えばトリフルオロ酢酸、硫酸、塩酸またはルイス酸、例えば三フッ化ホウ素エーテルで、還元剤、例えばトリエチルシランの存在下、溶媒、例えば置換または非置換アルカノール中または溶媒の非存在下、−７８℃〜１５０℃、好ましくは−３０℃〜室温で処理することによる、Ａ４が
【化１４】
である化合物の製造。
【００８３】
特に定めのない限り、本明細書および特許請求の範囲において用いる成分の量、分子量の様な特性、反応条件、ＩＣ５０等を表現するあらゆる数は、全ての場合において用語「約」で修飾されているものと理解される。したがって、異なることが特記されない限り、本明細書および添付の特許請求の範囲に記載の数値パラメーターは、近似値である。少なくとも、特許請求の範囲への均等論の適用を限定することを意図しないが、それぞれの数値パラメーターは、少なくとも有効桁数を踏まえて、そして通常の四捨五入を適用して構成される。本発明の広い範囲を説明する数値範囲およびパラメーターは近似値であるが、実施例、表および図に示す数値は可能な限り正確に報告している。あらゆる数値は、実験のゆらぎ、測定試験、統計的分析等に由来するある種の誤差を潜在的に含んでいてもよい。
【００８４】
特に定義がない限り、本明細書において使用されるあらゆる技術および化学用語は、本発明が属する技術分野における通常の知識を有する者によって通常理解されるものと同じ意味を有する。本明細書に記載のものと同様または均等な方法および物質が本発明の実施または試験において使用されてもよいが、好適な方法および物質は次に記載する。本明細書に記載の全ての公報、特許出願、特許および他の参考文献はそれらの全体において引用して本明細書に組み込む。相反する記載がある場合には、定義を含め、本明細書が制御下に置く。さらに、本物質、方法および実施例は、単なる説明であり、限定されることを意図しない。
【実施例】
【００８５】
実施例１
式（ＩＩ）〜（ＶＩＩ）の化合物の製造
株： コンドロマイセス・クロカツス菌株は、発明者らの研究室において、クルミの木の腐木の環境サンプルから単離した。
子実体の形態学ならびに１６Ｓ−ＲＮＡ遺伝子の部分配列に基づいて、当該株がコンドロマイセス・クロカツスと明確に同定した。コンドロマイセス・クロカツスはＤＳＭＺによって生物学的リスク群１に指定されている（DSMZ (2007)）。コンドロマイセスはポリアンギウム科（Polyangiaceae）の１種であり、デルタプロテオバクテリアのミキソコッカス目（Myxocccales）に属する。粘液細菌目とも称されるミキソコッカス目の細菌は、他のほとんどの細菌とそれらを区別する２個の特徴を有する、グラム陰性桿菌である。それらは、飢餓状態になると能動的滑走メカニズムを用いて固体表面上に集合し、集合して子実体を形成する（Kaiser (2003)）。
【００８６】
本発明のコンドロマイセス・クロカツス菌株は、ＤＳＭＺに受託番号１９３２９で寄託した。
【００８７】
本発明のコンドロマイセス・クロカツス菌株は純粋培養としての生存能力がなく、共生菌株の非存在下では維持することができない。共生菌株は寒天プレートの発酵共培養物（ＬＢ培地）のアリコートを画線して、純粋培養物として得て、維持することができる。同様の観察がReichenbachのグループによって行われた（Jacobi, et al. (1996), Jacobi, et al. (1997)）。本発明のコンドロマイセス・クロカツスの共生菌株の１６Ｓ−ｒＲＮＡ遺伝子の部分ＤＮＡ配列に基づくと、最も近いマッチはアルファ−プロテオバクテリアのリゾビウム目（Rhizobiales）由来のボセア・チオオキシダンス（Bosea thiooxidans）である。調査した４２４ｂｐ配列フラグメント１６Ｓ−ｒＲＮＡは、遺伝子バンクのＡＦ５０８１１２配列（B. thiooxidans）と約９８％の同一性（少なくとも８ヌクレオチド交換）を有する。ボセア・チオオキシダンス（B. thiooxidans）はインドのカルカッタ周辺の様々な農業用地から採取された土壌サンプルから単離された。これはある有機基質の存在下で還元無機硫黄化合物を酸化することができ、１９９６年に新菌種および新属として記載された（Das, et al. (1996)）。記載されたボセア種５種類全ての部分１６Ｓ−ＲＮＡ配列に由来する系統樹は、コンドロマイセス・クロカツスから単離されたボセア共生菌株とは別の位置を示している。
【００８８】
培養： １００Ｌの発酵槽培養を次のプロトコルに従って実施した：
本発明のコンドロマイセス・クロカツス菌株の液体培養物５ｍｌ（＝１０％）を２００ｍｌのバッフル付振盪フラスコ中の５０ｍｌのＭＤ１培地（Bode et al. 2003に適合している、表６参照）に播種して、前培養を開始する。３０℃、回転振盪機で１２０ｒｐｍで１１日間インキュベーションした後、５００ｍｌのバッフル付振盪フラスコ中の５×１００ｍｌのＭＤ１培地に前培養物１０ｍｌ（＝１０％）をそれぞれ播種して、一次中間培養を開始した。３０℃、回転振盪機で１２０ｒｐｍで７日間インキュベーションした後、２Ｌのバッフル無し振盪フラスコ中の１９×５００ｍｌのＭＤ１培地に一次中間培養物２５ｍｌ（＝５％）をそれぞれ播種して、二次中間培養を開始した。３０℃、回転振盪機で１２０ｒｐｍで６日間インキュベーションした後、全二次中間培養物（９．５リットル＝９．５％）を用いて１００リットルのＰＯＬ１生産培地（Kunze et al. 1995に適合している、表７参照）に播種した。この１００Ｌ主培養物は１００Ｌスケールの鉄タンク発酵槽中で実施した。温度は３０℃で制御し、通気は２０リットル／分（＝０．２ｖｖｍ）であり、撹拌速度は５０ｒｐｍであった。０．５ｂａｒのわずかな加圧を培養槽容器内で維持した。３ＮのＨ２ＳＯ４または３ＮのＮａＯＨを加えて、培養ｐＨは６．９〜７．１で維持した。約１日間の遅滞期の後、酸素消費が約４日間加速したが、これは培養の指数的増殖を示している。最後の２日間で、酸素消費はわずかに減少したが、これは培養の静止期を示している。７日後、培養物を濃度５．３ｍｇ／ｌの式ＩＩの環状デプシペプチドとして収穫した。
【００８９】
抽出： 全ての発酵ブロスを１６００Ｌの鉄容器に移し、１時間デキャンタした。濾紙で濾過して、湿った細胞ペレット（２００ｇ）を底分画から得た。細胞ペレットを１０リットルの酢酸エチルでそれぞれ３０分間turax処理(turaxing)して３回抽出した。次いで、残留水を溶媒相から分離した。溶媒相を５リットルの水で洗浄し、次いで蒸発させて、「細胞抽出物」と称する乾燥抽出物を得た。
培養濾液を２００リットルの酢酸エチルで抽出した。１時間のturax処理を含む２時間の接触時間の後、有機相を分離し、２０リットルの水で洗浄し、最後に蒸発させて、「培養濾液抽出物」と称する乾燥抽出物を得た。
【００９０】
化合物単離： 培養濾液抽出物（４．４ｇ）を８０ｍＬのメタノールに溶解させた。遠心分離して不溶性成分を除去し、上清を蒸発乾固させて３．３ｇの抽出物を得た。該抽出物を７．５ｍＬのＭｅＯＨ、３ｍＬのＤＭＳＯおよび０．５ｍＬのジクロロメタンに溶解させて、０．０１％のギ酸（溶媒Ａ）および０．１％のギ酸を含むアセトニトリル（溶媒Ｂ）を溶媒として用いる逆相クロマトグラフィー（Waters Sunfire RP18 10μm, 30 x 150 mm）で精製した。流速は５０ｍＬ／分であった。グラジエントは表１に示す。７回クロマトグラフを実施して、物質を精製した。それぞれの実行から回収した濾液をＨＰＬＣで分析し、本発明の環状デプシペプチドを含む分画を合併し、真空下で蒸発乾固させた。クロマトグラフィーによって１３４ｍｇの式（ＩＩ）の環状デプシペプチドを純度＞９７％で、８０ｍｇを純度＞９０％で得た。
【００９１】
表２
式（ＩＩ）の環状デプシペプチドの精製に用いたＨＰＬＣグラジエント
【表６】
【００９２】
表３
通常相分離で用いたグラジエント
【表７】
【００９３】
細胞抽出物（６．６７ｇ）をジクロロメタン／メタノール ４：１に溶解させた。該溶液を濾過し、濾液を珪藻（２ｇの珪藻／１ｇの抽出物、Isolute（登録商標）、International Sorbent Technology Ltd., Hengoed Mid Glam, UK）に吸着させ、次いで蒸発させた。予め詰め込んだシリカゲルカラム（４ｘ１８ｃｍ、９０ｇのシリカゲル４０〜６３）に固体残渣をロードし、シクロヘキサン、酢酸エチルおよびメタノールのグラジエントで溶出した。グラジエントは表２に示し、流速は２８ｍｌ／分であった。２８ｍｌの分画体積を回収した。ＵＶトレースで目に見えるピークに従ってフラクションを合併して、１２個のプールフラクション（Ａ〜Ｌ）を得た。逆相クロマトグラフィーを用いてデプシペプチドを含む分画（Ｈ〜Ｊ）をさらに精製した。クロマトグラフ法および後処理方法は培養濾液について記載した精製方法と同じである。全体で、４６．１ｍｇの式（ＩＩ）の環状デプシペプチド、１７．９ｍｇの式（ＩＩＩ）の環状デプシペプチドおよび６．１ｍｇの式（ＶＩ）デプシペプチドと式（ＶＩＩ）のデプシペプチドの１：１混合物を単離した。化合物（ＶＩ）および（ＶＩＩ）の構造の帰属は、高分解能ＭＳおよび化合物（ＶＩ）と（ＶＩＩ）の混合物の１Ｈ−ＮＭＲと、化合物（ＩＩ）の１Ｈ−ＮＭＲの比較に基づく。
他の式（ＩＩ）の環状デプシペプチドはまた、細胞抽出物においてより低い濃度で見出される。これらの他の環状デプシペプチドは式（ＩＶ）および（Ｖ）のものであった。
【００９４】
化合物の特徴付け：
式（ＩＩ）の化合物の物理データ
IR (KBr ペレット): 3337, 3297, 3062, 2966, 2936, 2877, 1736, 1659, 1533, 1519, 1464, 1445, 1410, 1385, 1368, 1249, 1232, 1205, 989, 832 cm -1
FT-MS (9.4 T APEX-III): 951.5165; C46H72N8O12+Naの計算値: 951.5162
1H NMR (600 MHz, d6-DMSO) δH: -0.10 (3H, d, J =7.0 Hz), 0.65 (4H, m), 0.78 (3H, d, J = 7.0 Hz), 0.82 (3H, t, J = 7.2 Hz), 0.85 (3H, d, J = 7.0 Hz), 0.89 (3H, d, J = 7.0 Hz), 1.02 (1H, m), 1.03 (6H, 2 x d, J = 7.0 Hz), 1.10 (1H, m), 1.21 (3H, d, J = 7.0 Hz), 1.25 (1H, m), 1.40 (1H, m), 1.52 (1H, m), 1.76 (6H, m), 1.84 (1H, m), 1.93 (1H, m), 2.15 (2H, m), 2.48 (1H, m), 2.59 (1H, m), 2.69 (1H, m), 2.72 (3H, s), 3.17 (1H, m), 4.32 (2H, m), 4.44 (2H, m), 4.64 (1H, d, J = 9.5 Hz), 4.71 (1H, m), 4.94 (1H, s), 5.06 (1H, m), 5.49 (1H, m), 6.08 (1H, d, J = 2.2 Hz), 6.65 (2H, d, J = 8.4), 6.74 (1H, s), 7.00 (2H, d, J = 8.4 Hz), 7.27 (1H, s), 7.36 (1H, d, J = 9.5 Hz), 7.66 (1H, d, J = 10.2 Hz), 7.74 (1H, d, J = 8.8 Hz), 8.02 (1H, d, J = 8.1 Hz), 8.43 (1H, d, J = 8.1 Hz), 9.19 (1H, s).
13C NMR (150 MHz) d6-DMSO δC: 10.35, CH3; 11.22, CH3; 13.79, CH3; 16.00, CH3; 17.63, CH3; 19.49, 2 x CH3; 20.83, CH3; 21.72, CH2 ; 23.30, CH3; 23.70, CH2 ; 24.16, CH; 24.41, CH2 ; 27.35, CH2; 29.74, CH2; 30.07, CH3; 31.44, CH2; 33.13, CH; 33.19, CH2; 33.68, CH; 37.39, CH; 39.05, CH2; 48.75, CH; 50.59, CH; 52.01, CH; 54.11, CH; 54.65, CH; 55.24, CH; 60.60, CH; 71.86 CH; 73.89, CH; 115.28, 2 x CH; 127.31, Cq; 130.35, 2 x CH; 156.25, Cq; 169.09, Cq; 169.25, Cq; 169.34, Cq; 169.74, Cq; 170.60, Cq; 172.41, Cq; 172.52, Cq; 173.78, Cq; 176.32, Cq
【００９５】
式（ＩＩＩ）の化合物の物理データ
FT-MS (9.4 T APEX-III):実測値: 965.5318;C47H74N8O12+Naの計算値: 965.5318
1H NMR (600 MHz) d6-DMSO δH: -0.10 (3H, d, J = 7.0 Hz), 0.64 (4H, m), 0.78 (3H,d, J = 7.0 Hz), 0.82 (3H, t, J = 7.0 Hz), 0.83 (3H, t, J = 7.3 Hz), 0.85 (3H, d, J = 7.0 Hz), 0.89 (3H, d, J = 7.0 Hz), 1.01 (3H, d, J = 7.1 Hz), 1.04 (1H, m), 1.10 (1H, m), 1.21 (3H, d, J = 7.0 Hz), 1.25 (1H, m), 1.32 (1H, m), 1.40 (1H, m), 1.53 (2H, m), 1.77 (6H, m), 1.84 (1H, m), 1.92 (1H, m), 2.12 (1H, m), 2.16 (1H, m), 2.28 (1H, m), 2.59 (1H, m), 2.68 (1H, m), 2.72 (3H, s), 3.17 (1H, m), 4.32 (1H, m), 4.38 (1H, m), 4.43 (1H, d, J = 10.2 Hz), 4.46 (1H, m), 4.63 (1H, d, J = 9.5 Hz), 4.71 (1H, m), 4.94 (1H, m), 5.06 (1H, m), 5.49 (1H, m), 6.11 (1H, s, broad), 6.65 (2H, d, J = 8.8 Hz), 6.73 (1H, s), 7.00 (2H, d, J = 8.8 Hz), 7.27 (1H, s), 7.37 (1H, d, J = 9.5 Hz), 7.66 (1H, d, J = 10.2 Hz), 7.75 (1H, d, J = 9.7 Hz), 8.07 (1H, d, J = 8.1 Hz), 8.45 (1H, d, J = 8.8 Hz), 9.24 (1H, broad)
【００９６】
式（ＩＶ）の化合物の物理データ
FT-MS (9.4 T APEX-III): 実測値: 947.5196; C47H72N8O11+Naの計算値: 947.5213
1H NMR (600 MHz) d6-DMSO δH: 0.08 (3H, d, J = 7.0 Hz), 0.68 (3H, t, J = 7.2 Hz), 0.71 (3H, d, J = 7.0 Hz), 0.78 (3H, d, J = 7.0 Hz), 0.83 (3H, t, J = 7.3 Hz), 0.84 (1H, m), 0.87 (3H, t, J = 7.2 Hz), 0.88 (3H, d, J = 7.0 Hz), 0.99 (3H, d, J = 7.1 Hz), 1.08 (1H, m), 1.17 (3H, d, J = 6.7 Hz), 1.18 (1H, m), 1.31 (2H, m), 1.43 (1H, m), 1.51 (1H, m), 1.54 (1H, m), 1.76 (2H, m), 1.90 (1H, m), 1.94 (1H, m), 2.01 (1H, m), 2.10 (1H, m), 2.16 (1H, m), 2.26 (1H, m), 2.46 (2H, m), 2.73 (1H, m), 2.74 (3H, s), 3.19 (1H, m), 4.34 (1H, m), 4.36 (1H, m), 4.51 (1H, m), 4.55 (1H, m), 4.66 (1H, d, J = 10.0 Hz), 4.79 (1H, d, J = 11.0 Hz), 5.19 (1H, m), 5.28 (1H, m), 5.44 (1H, m), 6.25 (1H, d, J = 7.3 Hz), 6.33 (1H, d, J = 8.8 Hz), 6.68 (2H, d, J = 8.8 Hz), 6.75 (1H, s), 7.04 (2H, d, J = 8.8 Hz), 7.28 (1H, s), 7.32 (1H, d, J = 8.8 Hz), 7.91 (1H, d, J = 9.5 Hz), 8.05 (1H, d, J = 8.1 Hz), 8.57 (1H, d, J = 8.9 Hz), 9.38 (1H, broad)
【００９７】
式（Ｖ）の化合物の物理データ
FT-MS (9.4 T APEX-III): 実測値: 933.5053; C46H70N8O11+Naの計算値: 953.5056
1H NMR (600 MHz) d6-DMSO δH: 0.08 (3H, d, J = 7.0 Hz), 0.68 (3H, t, J = 7.2 Hz), 0.71 (3H, d, J = 7.0 Hz), 0.79 (3H, d, J = 7.0 Hz), 0.83 (1H, m), 0.88 (3H, t, J = 7.2 Hz), 0.89 (3H, d, J = 7.0 Hz), 1.01 (3H, d, J = 7.0 Hz), 1.03 (3H, d, J = 7.0 Hz) 1.08 (1H, m), 1.17 (3H, d, J = 6.7 Hz), 1.20 (1H, m), 1.31 (1H, m), 1.42 (1H, m), 1.54 (1H, m), 1.74 (2H, m), 1.91 (2H, m), 2.02 (1H, m), 2.10 (1H, m), 2.15 (1H, m), 2.46 (3H, m), 2.75 (3H, s), 2.76 (1H, m), 3.19 (1H, m), 4.32 (1H, m), 4.34 (1H, m), 4.51 (1H, m), 4.55 (1H, m), 4.66 (1H, d, J = 9.5 Hz), 4.79 (1H, d, J = 11.0 Hz), 5.19 (1H, m), 5.28 (1H, m), 5.43 (1H, m), 6.25 (1H, d, J = 7.0 Hz), 6.33 (1H, d, J = 8.5 Hz), 6.68 (2H, d, J = 8.8 Hz), 6.75 (1H, s), 7.04 (2H, d, J = 8.8 Hz), 7.28 (1H, s), 7.31 (1H, d, J = 8.8 Hz), 7.90 (1H, d, J = 9.5 Hz), 7.99 (1H, d, J = 8.1 Hz), 8.52 (1H, d, J = 8.8 Hz), 9.30 (1H, broad)
【００９８】
実施例２： 式（ＶＩＩＩ、ＩＸ、Ｘ）の化合物の生産
株： コンドロマイセス・ロブスツス菌株を糞サンプルから単離した。子実体の形態学ならびに１６Ｓ−ＲＮＡ遺伝子の部分配列に基づいて、本発明のコンドロマイセス・ロブスツス菌株はコンドロマイセス・ロブスツスと同定した。コンドロマイセス・ロブスツスはＤＳＭＺによって生物学的リスク群１に指定されている（DSMZ (2007)）。コンドロマイセスはポリアンギウム科（Polyangiaceae）の１種であり、デルタプロテオバクテリアのミキソコッカス目（Myxocccales）に属する。粘液細菌目とも称されるミキソコッカス目の細菌は、他のほとんどの細菌とそれらを区別する２個の特徴を有する、グラム陰性桿菌である。それらは、飢餓状態になると能動的滑走メカニズムを用いて固体表面上に集合し、集合して子実体を形成する（Kaiser (2003)）。
【００９９】
本発明のコンドロマイセス・ロブスツス属菌株は、ＤＳＭＺに受託番号１９３３０で寄託している。
【０１００】
培養： １００Ｌの発酵槽培養を次のプロトコルに従って実施した：
本発明のコンドロマイセス・ロブスツス菌株の液体培養物２０ｍｌ（＝２０％）を５００ｍｌのバッフル付振盪フラスコ中の６×１００ｍｌのＭＤ１培地（Bode et al. 2003に適合している）に播種して、前培養を開始する。３０℃、回転振盪機で１２０ｒｐｍで１日間インキュベーションした後、２Ｌのバッフル付振盪フラスコ中の６×４００ｍｌのＭＤ１培地に前培養物１００ｍｌ（＝２５％）をそれぞれ播種して、一次中間培養を開始した。３０℃、回転振盪機で１２０ｒｐｍで３日間インキュベーションした後、１５リットルのＭＤ１培地を含む２０Ｌ鉄タンク発酵槽に一次中間培養物３リットル（＝２０％）を播種して、二次中間培養を開始した。温度は３０℃で制御し、通気は２０リットル／分（＝１．０ｖｖｍ）であり、撹拌速度は８０ｒｐｍであった。０．５ｂａｒのわずかな加圧を培養槽容器内で維持した。ｐＨ制御は行わなかったが、培養物のｐＨは開始時のｐＨ６．９５から７日目のｐＨ６．８８にわずかに低下しただけであった。７日後、全二次中間培養物（１８リットル＝２０％）を用いて９０リットルのＰＯＬ１生産培地（Kunze et al. 1995に適合している、表７参照）に播種した（開始体積＝１０８リットル）。この主培養物は１００Ｌスケールの鉄タンク発酵槽中で実施した。温度は３０℃で制御し、通気は３０リットル／分（＝０．３ｖｖｍ）であり、撹拌速度は最初は５０ｒｐｍ、４日後は８０ｒｐｍであった。０．５ｂａｒのわずかな加圧を培養槽容器内で維持した。２ＮのＨ２ＳＯ４または１．５ＮのＮａＯＨを加えて、培養ｐＨは６．８〜７．２で維持した。
１４日後、培養物を濃度３ｍｇ／ｌで収穫した。
【０１０１】
抽出： 全ての発酵ブロスを１６００Ｌの鉄容器に移し、１時間デキャンタした。濾紙で濾過して、湿った細胞ペレット（約２００ｇ）を底分画から得た。細胞ペレットを１０リットルの酢酸エチルでそれぞれ３０分間turax処理して３回抽出した。次いで、残留水を溶媒相から分離した。溶媒相を５リットルの水で洗浄し、次いで蒸発させて、「細胞抽出物」と称する乾燥抽出物１１．９ｇを得た。
培養濾液を２００リットルの酢酸エチルで抽出した。１時間のturax処理を含む２時間の接触時間の後、有機相を分離し、２０リットルの水で洗浄し、最後に蒸発させて、「培養濾液抽出物」と称する乾燥抽出物１２．５ｇを得た。
【０１０２】
化合物単離： 各抽出物（菌糸体および培養濾液由来）をジクロロメタン／メタノール ４：１に溶解させた。溶液を濾過し、濾液を珪藻（２ｇの珪藻／１ｇの抽出物、Isolute（登録商標）、International Sorbent Technology Ltd., Hengoed Mid Glam, UK）に吸着させ、次いで蒸発させた。予め詰め込んだシリカゲルカラム（４ｘ１８ｃｍ、９０ｇのシリカゲル４０〜６３）に固体残渣をロードし、シクロヘキサン、酢酸エチルおよびメタノールのグラジエントで溶出した。グラジエントは表４に示し、流速は２８ｍｌ／分であった。２８ｍｌの分画体積を回収した。ＵＶトレースで目に見えるピークに従ってフラクションを合併した。０．０１％のギ酸（溶媒Ａ）および０．１％のギ酸を含むアセトニトリル（溶媒Ｂ）を溶媒として用いる逆相クロマトグラフィー（Waters Sunfire RP18 10μm, 30 x 150 mm）で本発明の環状デプシペプチドを含む分画をさらに精製した。流速は５０ｍＬ／分であった。グラジエントは表５に示す。注入のために、物質はＭｅＯＨ／ＤＭＳＯ １：１（濃度２００ｍｇ／ｍＬ）に溶解させた。回収した分画をＨＰＬＣで分析し、本発明の環状デプシペプチドを含む分画を合併して、真空下で蒸発乾固させた。抽出物のクロマトグラフィーによって、５２ｍｇの純粋な（＞９７％）式（ＶＩＩＩ）の環状デプシペプチドを得た。全体で、８５ｍｇの純粋な式（ＶＩＩＩ）の環状デプシペプチドを合併した抽出物から単離した。
他の式（ＶＩＩＩ）の環状デプシペプチドはまた、細胞抽出物においてより低い濃度で見出される。これらの他の環状デプシペプチドは式（ＩＸ）および（Ｘ）のものであった。
【０１０３】
（ａ）表４
（ｂ）通常相分離で用いたグラジエント
【表８】
【０１０４】
（ｃ）表５
（ｄ）式（ＶＩＩＩ）の環状デプシペプチドの精製で用いたＨＰＬＣグラジエント
【表９】
【０１０５】
培地 （５０ｍＭのＨＥＰＥＳでｐＨを７．０に調節した）
表６
（ｅ）ＭＤ１（前培養培地）
【表１０】
【０１０６】
表７
（ｆ）ＰＯＬ１（生産培地）
【表１１】
【０１０７】
化合物の特徴付け：
式（ＶＩＩＩ）の化合物の物理データ
FT-MS (9.4 T APEX-III): 実測値: 985.5007; C49H70N8O12+Naの計算値: 985.5005.
1H NMR (600 MHz) d6-DMSO δH: 0.74 (6H, d, J = 7.0 Hz), 0.85 (3H, d, J = 7.0 Hz), 0.88 (3H, d, J = 7.0 Hz), 0.89 (6H, d, J = 7.0 Hz), 1.18 (3H, d, J = 6.7 Hz), 1.32 (1H, m), 1.46 (1H, m), 1.57 (2H, m), 1.72 (3H, m), 1.81 (1H, m), 1.88 (1H, m), 1.98 (1H, m), 2.02 (2H, m), 2.11 (3H, m), 2.42 (1H, m), 2.73 (1H, m), 2.77 (3H, s), 2.87 (1H, m), 3.12 (1H, m), 3.64 (1H, m), 4.23 (1H, m), 4.40 (1H, m), 4.58 (1H, d, J = 9.5 Hz), 4.75 (2H, m), 4.93 (1H, m), 5.07 (1H, s), 5.40 (1H, m), 6.03 (1H, s), 6.74 (1H, s), 6.79 (2H, d, J = 8.4 Hz), 6.84 (2H, d, J = 7.8 Hz), 7.02 (2H, d, J = 8.4 Hz), 7.10 (1H, d, J = 9.3 Hz), 7.14 (1H, t, J = 7.8 Hz), 7.19 (2H, t, J = 7.8 Hz), 7.26 (1H, s), 7.42 (1H, d, J = 9.8 Hz), 7.89 (1H, d, J = 9.2 Hz), 8.03 (1H, d, J = 7.9 Hz), 8.38 (1H, d, J = 8.9 Hz), 9.40 (1H, s)
13C NMR (150 MHz) d6-DMSO δC: 17.13, CH3; 17.63, CH3; 19.32, CH3; 20.90, CH3; 21.64, CH2; 22.34, CH3; 22.34, CH3; 23.32, CH3; 24.10, CH; 25.63, CH; 27.63, CH2; 29.30, CH2; 30.37, CH3; 30.86, CH; 31.52, CH2; 32.83, CH2; 35.33, CH2; 38.98, CH2; 44.42, CH2; 48.52, CH; 50.19, CH; 50.24, CH; 51.99, CH; 54.62, CH; 55.63, CH; 60.90, CH; 71.86 CH; 73.70, CH; 115.32, 2 x CH; 126.21, CH; 127.50, Cq; 127.74, 2 x CH; 129.42, 2 x CH; 130.43, 2 x CH; 136.72, Cq; 156.23, Cq; 168.93, Cq; 169.18, Cq; 169.18, Cq; 170.18, Cq; 170.39, Cq; 171.72, Cq; 171.96, Cq; 172.50, Cq; 173.82, Cq
【０１０８】
式（ＩＸ）の化合物の物理データ
FT-MS (9.4 T APEX-III): 実測値: 969.5058; C49H70N8O11+Naの計算値; 969.5056.
1H NMR (600 MHz) d6-DMSO δH: 0.53 (3H, d, J = 6.6 Hz), 0.73 (3H, d, J = 6.6 Hz), 0.74 (3H, d, J = 6.6 Hz), 0.81 (3H, d, J = 6.6 Hz), 0.86 (6H, d, J = 6.6 Hz), 1.08 (3H, d, J = 6.5 Hz), 1.20 (1H, m), 1.33 (3H, m), 1.52 (1H, m), 1.64 (1H, m), 1.80 (2H, m), 2.01 (1H, m), 2.04 (2H, m), 2.15 (4H, m), 2.25 (1H, m), 2.30 (1H, m), 2.74 (3H, s), 2.83 (1H, m), 3.12 (1H, m), 3.32 (1H, m), 3.38 (1H, m), 4.14 (1H, m), 4.27 (1H, m), 4.40 (1H, m), 4.59 (1H, m), 4.61 (1H, m), 4.94 (1H, m), 4.99 (1H, m), 5.10 (1H, m), 6.42 (2H, d, J = 8.8 Hz), 6.75 (1H, s), 7.04 (2H, d, J = 8.8 Hz),7.10 (1H, t, J = 7.3 Hz), 7.15 (2H, t, J = 7.3 Hz), 7.23 (2H, d, J = 7.3 Hz), 7.30 (1H, s), 7.41 (1H, d, J = 9.5 Hz), 8.05 (1H, d, J = 9.5 Hz), 8.23 (1H, d, J = 8.1 Hz), 8.47 (1H, d, J = 4.4 Hz), 8.71 (1H, d, J = 10.2 Hz). （チロシンのヒドロキシ基のプロトンのシグナルは見えなかった）
【０１０９】
式（Ｘ）の化合物の物理データ
FT-MS (9.4 T APEX-III): 実測値: 955.4896; C48H68N8O11+Naの計算値:955.4900.
1H NMR (600 MHz) d6-DMSO δH:)δH: 化合物（ＩＸ）のＮＭＲデータについてケミカルシフトの帰属は行わなかった（回転異性体の混合物、ＮＭＲデータ（Ｎ−メチル基を含まない）の比較に基づく構造の帰属）。
【０１１０】
実施例３： 生物学的活性
例えば式（ＩＩ）〜（Ｘ）の化合物を含む本発明の化合物は薬理学的活性を示し、したがって医薬として有用である。例えば本発明の化合物はカリクレイン−７活性を阻害することが見出される。
本発明の化合物は次のアッセイで測定したとき、１ｎＭ〜１０μＭのＩＣ５０値を有する：
物質およびバッファー
蛍光消光基質Ａｃ−Ｇｌｕ−Ａｓｐ（ＥＤＡＮＳ）−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ｉｌｅ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ＾Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ（ＤＡＢＣＹＬ）−Ｇｌｕ−ＮＨ２（ここで、＾はＭＳ分析で同定した解離しやすい結合を示す）をBiosyntan（Berlin, Germany）から購入し、ＤＭＳＯ中５ｍＭ原液として２０℃で保った。他の全ての化学物質は分析グレードである。
１５０ｍＭのＮａＣｌおよび０．０５％（ｗ／ｖ）のＣＨＡＰＳを含む５０ｍＭのクエン酸ナトリウムバッファー ｐＨ５．６中で酵素反応を実施する。
全タンパク質およびペプチドを含む溶液はシリコン化試験管（Life Systems Design, Merenschwand, Switzerland）中で取り扱う。化合物溶液ならびに酵素と基質の溶液をCyBi-Well 96チャンネルピペッター（CyBio AG, Jena, Germany）によって３８４ウェルプレート（黒色、Cliniplate；カタログ番号95040020、Labsystems Oy, Finland）に移す。
【０１１１】
ＦＩ測定のための装置
蛍光強度（ＦＩ）測定のために、Ultra Evolution リーダー（TECAN, Maennedorf, Switzerland）を用いる。該装置は、蛍光励起および放出捕捉のためのそれぞれ３５０ｎｍ（２０ｎｍのバンド幅）および５００ｎｍ（２５ｎｍのバンド幅）バンド通過フィルターの組合せを備えている。シグナル：バックグラウンド比を増加させるため、適切なダイクロイックミラーを使用する。光学フィルターおよびダイクロイックミラーはTECANから購入する。各ウェルのフルオロフォアは、３フラッシュ／測定で励起する。
【０１１２】
ＩＣ５０値の測定
ＩＣ５０値の測定のため、アッセイを室温で、３８４ウェルプレート中で実施する。総最終アッセイ体積は３０μｌであった。試験化合物を９０％（ｖ／ｖ）のＤＭＳＯ／水に溶解させ、水（０．０５％（ｗ／ｖ）のＣＨＡＰＳ）で所望のアッセイ濃度の３倍に希釈した。１１種類の最終化合物濃度は：０．３ｎＭ、１ｎＭ、３ｎＭ、１０ｎＭ、３０ｎＭ、１００ｎＭ、３００ｎＭ、１μＭ、３μＭ、１０μＭおよび３０μＭである。それぞれのアッセイについて、１０μｌの水／ＣＨＡＰＳ（±試験化合物）、次いで１０μｌのプロテアーゼ溶液（１．５ｘアッセイバッファーで希釈）をウェル毎に加える。最終アッセイ溶液のプロテアーゼ濃度は０．２ｎＭ（Bradford法によって測定した酵素濃度による）である。室温で１時間インキュベートした後、１０μｌの基質溶液（１．５ｘアッセイバッファーに溶解させた基質、最終濃度は２μＭである）を加えて反応を開始させる。酵素活性に対する化合物の効果は、線形プログレス曲線から得られ、基質の添加直後に得た最初のもの（ｔ＝０分）と１時間後の第二のもの（ｔ＝６０分）の２つの読み取りから決定する。ＩＣ５０値は非線形回帰分析ソフトウェア（XLfit, Vers. 4.0; ID Business Solution Ltd., Guildford, Surrey, UK）を用いて阻害率対阻害剤濃度のプロットから計算する。
【０１１３】
表８
【表１２】
【０１１４】
さらに、本環状デプシペプチドはヒトキモトリプシンおよびヒト好中球エラスターゼをそれぞれ０．００１μＭ〜０．０２μＭおよび０．０１μＭ〜０．０７μＭのＩＣ５０で阻害した。
式（ＶＩＩＩ）の環状デプシペプチドの生物学的活性はカリクレイン７で測定した。本発明の環状デプシペプチドは、３ｎＭ未満のＩＣ５０でヒトカリクレイン７を阻害する。この環状デプシペプチドはヒトキモトリプシンおよびヒト好中球エラスターゼをそれぞれ約０．００４μＭおよび約０．００２５μＭのＩＣ５０で阻害した。
【０１１５】
実施例４： 本発明の環状デプシペプチドの誘導体化
式（ＩＩ）の環状デプシペプチド（２０ｍｇ）とトリエチルシラン（０．０２７ｍＬ）のジクロロメタン／アセトニトリル（１：１、２ｍＬ）溶液に、−５０℃で三フッ化ホウ素エーテル（０．０１４ｍＬ）をゆっくりと加えた。反応混合物を−５℃まで温め、この温度でさらに３０分間保ち、飽和ＮａＨＣＯ３溶液に注ぎ、酢酸エチルで抽出した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させて、溶媒を真空下で除去した。ＨＰＬＣ（XTerra［5cm］；アセトニトリル／炭酸アンモニウムバッファーｐＨ１０グラジエント）で得られた残渣を精製して、Ａｈｐが３−アミノ−２−ピペリドンに変換された式（ＩＩ）の環状ペプチド誘導体（９．８ｍｇ）を得た。
【０１１６】
実施例５： 本発明の環状デプシペプチドの誘導体化
式（ＩＩ）の環状デプシペプチド（７５ｍｇ、０．０８１ｍｍｏｌ）の１−ＰｒＯＨ（５ｍＬ）溶液に硫酸（３０μＬ）を加え、反応混合物をｒｔで４８時間撹拌した。後処理のために反応混合物を塩化メチレンで希釈し、飽和ビカルボネート溶液で洗浄した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させた後、溶媒を除去し、得られた残渣をシリカゲルのクロマトグラフィー（ｃＨｅｘ／ＥｔＯＡｃ（１：１）＋１０％のＭｅＯＨ）で精製した。収率：Ａｈｐが１−プロピル−ケタール−Ａｈｐに変換された式（ＩＩ）の環状デプシペプチド誘導体（６５ｍｇ（８３％））。
【０１１７】
実施例６： 本発明の環状デプシペプチドの誘導体化
式（ＩＩ）の環状デプシペプチド（７５ｍｇ、０．０８１ｍｍｏｌ）の１−オクチルＯＨ（５ｍＬ）溶液に、硫酸（３０μＬ）を加え、反応混合物をｒｔで４８時間撹拌した。後処理のために反応混合物を塩化メチレンで希釈し、飽和ビカルボネート溶液で洗浄した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させた後、溶媒を除去し、得られた残渣をシリカゲルのクロマトグラフィー（ｃＨｅｘ／ＥｔＯＡｃ（１：１）＋１０％のＭｅＯＨ）で精製した。収率：Ａｈｐが１−オクチル−ケタール−Ａｈｐに変換された式（ＩＩ）の環状デプシペプチド誘導体（５２ｍｇ（６２％））。
【０１１８】
実施例７： 本発明の環状デプシペプチドの誘導体化
式（ＩＩ）の環状デプシペプチド（２５ｍｇ、０．０２７ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（ＭＣ）（２ｍＬ）溶液を０℃に冷却した。次いでＤＩＥＡおよびトリフルオロ酢酸無水物（ＴＦＡＡ）を加えた。反応混合物を室温までゆっくりと温め、さらに４時間撹拌した。後処理のために反応混合物をＭＣで希釈し、塩酸および飽和ビカルボネート溶液で洗浄した。硫酸ナトリウムで乾燥させた後、溶媒を除去し、得られた残渣をシリカゲルのクロマトグラフィー（ｃＨｅｘ／ＥｔＯＡｃ（１：１）＋１０％のＭｅＯＨ）で精製した。収率：Ａ１のアミドがニトリルに変換された式（ＩＩ）の環状デプシペプチド誘導体（１４ｍｇ（５７％））。
【０１１９】
実施例８： 本発明の環状デプシペプチドの誘導体化
式（ＩＩ）環状デプシペプチド（１ｇ）のジクロロメタン／アセトニトリル（１：１、３００ｍＬ）溶液に、−５０℃で三フッ化ホウ素エーテル（０．６８ｍＬ）をゆっくりと加えた。反応混合物を−２０℃まで温めた。さらなる三フッ化ホウ素エーテル（０．６８ｍＬ）をゆっくりと加え、出発物質が観察されなくなるまで（ＨＰＬＣ）該反応混合物をこの温度で保った。次いで、反応混合物を飽和ＮａＨＣＯ３溶液に注ぎ、酢酸エチルで抽出した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、溶媒を真空下で除去して、Ａｈｐが３−アミノ−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−ピリジン−２−オンに変換された式（ＩＩ）の環状デプシペプチド誘導体を得た。
該粗物質を２−プロパノール（４００ｍＬ）に溶解させ、Ｐｄ／Ｃ（１０％、１１５ｍｇ）を加え、出発物質が消費されるまで（ＨＰＬＣ）混合物を大気圧下で水素化した。得られた残渣をクロマトグラフィー（ＳｉＯ２；ｃＨｅｘ／ＥｔＯＡｃ（１：１）＋１０％のＭｅＯＨ）で精製して、Ａｈｐが３−アミノ−２−ピペリドンに変換された式（ＩＩ）の環状デプシペプチド（６８４ｍｇ）を得た。
【０１２０】
参考文献
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
カリクレイン７依存性疾患の処置用医薬として使用するための、式（Ｉ）：
【化１】
〔式中、Ａ７のカルボキシ基とＡ２のヒドロキシ基の間にエステル結合が見られ、
ＸおよびＡ１はそれぞれ独立して任意的に存在しており、
Ｘは何れかの化学残基であり、
Ａ１は標準アミノ酸であり、
Ａ２はスレオニン、セリンまたは５−メチルヒドロキシプロリンであり、
Ａ３は非塩基性標準アミノ酸または非塩基性非標準アミノ酸、またはその非塩基性誘導体であり、
Ａ４はＡｈｐ、デヒドロ−ＡＨＰ、プロリンまたはその誘導体であり、
Ａ５はイソロイシン、ロイシン、フェニルアラニン、プロリン、スレオニンまたはバリンであり、
Ａ６はアラニン、フェニルアラニン、トリプトファン、チロシンまたはその誘導体であり、
Ａ７はロイシン、イソロイシンまたはバリンであり、
ここでＡ５とＡ６間のアミド結合の窒素原子はメチルで置換されていてもよい〕
の構造を有する環状デプシペプチドまたはその誘導体、または環状デプシペプチドもしくはその誘導体の薬学的に許容される塩。
【請求項２】
カリクレイン７依存性疾患がネザートン症候群、掻痒性皮膚疾患、例えば結節性痒疹、膿疱性乾癬およびがん、特に卵巣がんから成る群から選択される、請求項１の環状デプシペプチドまたはその誘導体。
【請求項３】
ＸがＨまたはアシル残基である、請求項１または２の環状デプシペプチドまたはその誘導体。
【請求項４】
ＸがＣＨ３ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）ＣＯ、（ＣＨ３）２ＣＨＣＨ２ＣＯまたは（ＣＨ３）２ＣＨＣＯである、請求項１〜３の何れかの環状デプシペプチドまたはその誘導体。
【請求項５】
ネザートン症候群、掻痒性皮膚疾患、例えば結節性痒疹、膿疱性乾癬およびがん、特に卵巣がんを有する対象を処置する方法であって、当該対象に治療上有効量の請求項１〜４の何れかの環状デプシペプチドまたはその誘導体を投与することを含む方法。
【請求項６】
カリクレイン７依存性疾患の処置用医薬の製造のための、治療上有効量の請求項１〜４の何れかの環状デプシペプチドまたはその誘導体の使用。
【請求項７】
カリクレイン７依存性疾患がネザートン症候群、掻痒性皮膚疾患、例えば結節性痒疹、膿疱性乾癬およびがん、特に卵巣がんから成る群から選択される、請求項６の使用。
【請求項１】
カリクレイン７依存性疾患の処置用医薬として使用するための、式（Ｉ）：
【化１】
〔式中、Ａ７のカルボキシ基とＡ２のヒドロキシ基の間にエステル結合が見られ、
ＸおよびＡ１はそれぞれ独立して任意的に存在しており、
Ｘは何れかの化学残基であり、
Ａ１は標準アミノ酸であり、
Ａ２はスレオニン、セリンまたは５−メチルヒドロキシプロリンであり、
Ａ３は非塩基性標準アミノ酸または非塩基性非標準アミノ酸、またはその非塩基性誘導体であり、
Ａ４はＡｈｐ、デヒドロ−ＡＨＰ、プロリンまたはその誘導体であり、
Ａ５はイソロイシン、ロイシン、フェニルアラニン、プロリン、スレオニンまたはバリンであり、
Ａ６はアラニン、フェニルアラニン、トリプトファン、チロシンまたはその誘導体であり、
Ａ７はロイシン、イソロイシンまたはバリンであり、
ここでＡ５とＡ６間のアミド結合の窒素原子はメチルで置換されていてもよい〕
の構造を有する環状デプシペプチドまたはその誘導体、または環状デプシペプチドもしくはその誘導体の薬学的に許容される塩。
【請求項２】
カリクレイン７依存性疾患がネザートン症候群、掻痒性皮膚疾患、例えば結節性痒疹、膿疱性乾癬およびがん、特に卵巣がんから成る群から選択される、請求項１の環状デプシペプチドまたはその誘導体。
【請求項３】
ＸがＨまたはアシル残基である、請求項１または２の環状デプシペプチドまたはその誘導体。
【請求項４】
ＸがＣＨ３ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）ＣＯ、（ＣＨ３）２ＣＨＣＨ２ＣＯまたは（ＣＨ３）２ＣＨＣＯである、請求項１〜３の何れかの環状デプシペプチドまたはその誘導体。
【請求項５】
ネザートン症候群、掻痒性皮膚疾患、例えば結節性痒疹、膿疱性乾癬およびがん、特に卵巣がんを有する対象を処置する方法であって、当該対象に治療上有効量の請求項１〜４の何れかの環状デプシペプチドまたはその誘導体を投与することを含む方法。
【請求項６】
カリクレイン７依存性疾患の処置用医薬の製造のための、治療上有効量の請求項１〜４の何れかの環状デプシペプチドまたはその誘導体の使用。
【請求項７】
カリクレイン７依存性疾患がネザートン症候群、掻痒性皮膚疾患、例えば結節性痒疹、膿疱性乾癬およびがん、特に卵巣がんから成る群から選択される、請求項６の使用。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【公表番号】特表２０１０−５３６７３２（Ｐ２０１０−５３６７３２Ａ）
【公表日】平成２２年１２月２日（２０１０．１２．２）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１０−５２０５８７（Ｐ２０１０−５２０５８７）
【出願日】平成２０年８月１４日（２００８．８．１４）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２００８／０６０６９３
【国際公開番号】ＷＯ２００９／０２４５２８
【国際公開日】平成２１年２月２６日（２００９．２．２６）
【出願人】（５０４３８９９９１）ノバルティス アーゲー (806)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２２年１２月２日（２０１０．１２．２）
【国際特許分類】
【出願日】平成２０年８月１４日（２００８．８．１４）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２００８／０６０６９３
【国際公開番号】ＷＯ２００９／０２４５２８
【国際公開日】平成２１年２月２６日（２００９．２．２６）
【出願人】（５０４３８９９９１）ノバルティス アーゲー (806)
【Ｆターム（参考）】
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