グルコサミンおよびＮ−アセチルグルコサミン製造のためのプロセスおよび材料
【課題】グルコサミンを製造する方法を提供すること。
【解決手段】グルコサミンおよびＮ−アセチルグルコサミンの生合成法が開示される。この様な方法には、遺伝子修飾された微生物による発酵でグルコサミンおよび／またはＮ−アセチルグルコサミンを生産する工程が含まれる。グルコサミンおよびＮ−アセチルグルコサミンの生産に有用な遺伝子修飾微生物も開示される。さらに、高純度のＮ−アセチルグルコサミンが得られる方法を含む、発酵プロセスで製造されたＮ−アセチルグルコサミンの回収法も説明する。Ｎ−アセチルグルコサミンからグルコサミンの製造法も開示される。
【解決手段】グルコサミンおよびＮ−アセチルグルコサミンの生合成法が開示される。この様な方法には、遺伝子修飾された微生物による発酵でグルコサミンおよび／またはＮ−アセチルグルコサミンを生産する工程が含まれる。グルコサミンおよびＮ−アセチルグルコサミンの生産に有用な遺伝子修飾微生物も開示される。さらに、高純度のＮ−アセチルグルコサミンが得られる方法を含む、発酵プロセスで製造されたＮ−アセチルグルコサミンの回収法も説明する。Ｎ−アセチルグルコサミンからグルコサミンの製造法も開示される。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
ａ）グルコサミン−６−燐酸アセチルトランスフェラーゼ活性を増加する少なくとも一つの遺伝子修飾を含む微生物を発酵培地中で培養する工程；および
ｂ）グルコサミン−６−燐酸、グルコサミン、グルコサミン−１−燐酸、Ｎ−アセチルグルコサミン−１−燐酸、Ｎ−アセチルグルコサミン−６−燐酸、およびＮ−アセチルグルコサミンでなる群より選ばれる、培養工程から製造された生成物を採集する工程
を包含する、発酵によるグルコサミンまたはＮ−アセチルグルコサミンの製造方法であって、
該微生物は、該グルコサミン−６−燐酸アセチルトランスフェラーゼをコードする核酸配列を含む少なくとも一つの組み換え核酸分子で、形質転換される、方法。
【請求項２】
ａ）内因性グルコサミン−６−燐酸アセチルトランスフェラーゼとグルコサミン−６−燐酸シンターゼ活性を増加する少なくとも１種の遺伝子修飾とを含む微生物を発酵培地中で培養する工程；および
ｂ）グルコサミン−６−燐酸、グルコサミン、グルコサミン−１−燐酸、Ｎ−アセチルグルコサミン−１−燐酸、Ｎ−アセチルグルコサミン−６−燐酸およびＮ−アセチルグルコサミンからなる群から選ばれる、培養工程から生産された生成物を採集する工程、
を包含する、発酵によるグルコサミンまたはＮ−アセチルグルコサミンの製造方法であって、
該微生物は、該グルコサミン−６−燐酸アセチルトランスフェラーゼをコードする核酸配列を含む少なくとも一つの組み換え核酸分子で、形質転換される、方法。
【請求項３】
前記グルコサミン−６−燐酸アセチルトランスフェラーゼが、配列番号３０、配列番号３２および配列番号３４からなる群より選ばれるアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有し、該グルコサミン−６−燐酸アセチルトランスフェラーゼが酵素活性を有する、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記グルコサミン−６−燐酸アセチルトランスフェラーゼが、配列番号３０、配列番号３２および配列番号３４からなる群より選ばれるアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有し、該グルコサミン−６−燐酸アセチルトランスフェラーゼが酵素活性を有する、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記グルコサミン−６−燐酸アセチルトランスフェラーゼが、配列番号３０、配列番号３２および配列番号３４からなる群より選ばれるアミノ酸配列と少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を有し、該グルコサミン−６−燐酸アセチルトランスフェラーゼが酵素活性を有する、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記グルコサミン−６−燐酸アセチルトランスフェラーゼが、１つまたは複数のアミノ酸欠失、置換および／または付加を有する、配列番号３０、配列番号３２および配列番号３４からなる群より選ばれるアミノ酸配列を有し、該グルコサミン−６−燐酸シンターゼが酵素活性を有する、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記グルコサミン−６−燐酸アセチルトランスフェラーゼが配列番号３０、配列番号３２および配列番号３４でなる群より選ばれるアミノ酸配列を有する、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記組み換え核酸分子の発現が誘導可能である、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
前記組み換え核酸分子の発現がラクトースで誘導可能である、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記微生物がラクトースによる転写誘導の阻害を減少する遺伝子修飾をさらに含み、該遺伝子修飾がＬａｃＩレプレッサータンパク質をコードする遺伝子の部分的または完全な欠失または不活性化を含む、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記微生物が、グルコサミン−６−燐酸シンターゼ活性を増加する少なくとも一つの遺伝子修飾をさらに含み、該微生物は、該グルコサミン−６−燐酸アセチルトランスフェラーゼをコードする核酸配列を含む少なくとも一つの組み換え核酸分子で、形質転換される、請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
前記グルコサミン−６−燐酸シンターゼが、配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８および配列番号２０でなる群より選ばれるアミノ酸配列に対し、少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含み、該グルコサミン−６−燐酸シンターゼが酵素活性を有する、請求項２または１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記グルコサミン−６−燐酸シンターゼが、配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８および配列番号２０でなる群より選ばれるアミノ酸配列に対し、少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み、該グルコサミン−６−燐酸シンターゼが酵素活性を有する、請求項２または１１に記載の方法。
【請求項１４】
前記グルコサミン−６−燐酸シンターゼが、配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８および配列番号２０でなる群より選ばれるアミノ酸配列に対し、少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含み、該グルコサミン−６−燐酸シンターゼが酵素活性を有する、請求項２または１１に記載の方法。
【請求項１５】
前記グルコサミン−６−燐酸シンターゼが、１つまたは複数のアミノ酸欠失、置換および／または付加を有する、配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８および配列番号２０でなる群より選ばれるアミノ酸配列を含み、該グルコサミン−６−燐酸シンターゼが酵素活性を有する、請求項２または１１に記載の方法。
【請求項１６】
前記グルコサミン−６−燐酸シンターゼが、配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８および配列番号２０からなる群より選ばれるアミノ酸配列を含む、請求項２または１１に記載の方法。
【請求項１７】
野生型グルコサミン−６−燐酸シンターゼと比較して前記グルコサミン−６−燐酸シンターゼの生成物阻害を減少する修飾を、該グルコサミン−６−燐酸シンターゼが有し、該グルコサミン−６−燐酸シンターゼが、配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、および配列番号１４からなる群より選ばれるアミノ酸配列を含む、請求項２または１１に記載の方法。
【請求項１８】
前記微生物が、グルコサミン−６−燐酸デアミナーゼ活性を減少する少なくとも一つの遺伝子修飾をさらに含み、グルコサミン−６−燐酸デアミナーゼ活性を減少する該遺伝子修飾が、該微生物中でグルコサミン−６−燐酸デアミナーゼをコードする内因性遺伝子の部分的または完全な欠失または不活性化を含む、請求項１、２、または１１に記載の方法。
【請求項１９】
前記発酵培地中で炭素源を０．５％〜５％の濃度に保つ工程を前記培養工程が含む、請求項１、または、２に記載の方法。
【請求項２０】
前記培養工程が酵母抽出物を含む発酵培地中で行われる、請求項１、または、２に記載の方法。
【請求項２１】
グルコース、フラクトース、ペントース糖、ラクトースおよびグルコン酸でなる群から選ばれる炭素源を含む発酵培地中で前記培養工程が行われる、請求項１、または、２に記載の方法。
【請求項２２】
前記ペントース糖がリボース、キシロースおよびアラビノースでなる群より選ばれる、請求項１、または、２に記載の方法。
【請求項２３】
前記培養工程がグルコースおよびリボースを含む発酵培地、ならびにグルコースおよびグルコン酸を含む発酵培地でなる群より選ばれる発酵培地中で行われる、請求項１、または、２に記載の方法。
【請求項２４】
前記培養工程が２５℃〜４５℃の温度で行われる、請求項１、または、２に記載の方法。
【請求項２５】
前記培養工程がｐＨ４〜ｐＨ７．５のｐＨで行われる、請求項１、または、２に記載の方法。
【請求項２６】
前記微生物がバクテリア、菌類および酵母でなる群より選ばれる、請求項１、または、２に記載の方法。
【請求項２７】
前記微生物がＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ、ＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓおよびＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓでなる群から選ばれた属由来のバクテリアである、請求項１、または、２に記載の方法。
【請求項２８】
微生物がＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ、Ｃａｎｄｉｄａ、Ｈａｎｓｅｎｕｌａ、Ｐｉｃｈｉａ、Ｋｌｕｖｅｒｏｍｙｃｅｓ、およびＰｈａｆｆｉａでなる群から選ばれた属由来の酵母である、請求項１、または、２に記載の方法。
【請求項２９】
前記微生物がＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ、Ａｂｓｉｄｉａ、Ｒｈｉｚｏｐｕｓ、Ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ、ＮｅｕｒｏｓｐｏｒａおよびＴｒｉｃｈｏｄｅｒｍａでなる群から選ばれた属由来の真菌類である、請求項１、または、２に記載の方法。
【請求項３０】
前記微生物中でホスフォグルコイソメラーゼ活性を増加する遺伝子修飾を、該微生物がさらに含み、該微生物が配列番号１０５を含む前記ホスフォグルコイソメラーゼをコードする核酸配列を含む組み換え核酸分子で形質転換される、請求項１、または、２に記載の方法。
【請求項３１】
前記微生物中でホスフォフラクトキナーゼの部分的または完全な欠失または不活性化を該微生物がさらに含む、請求項１、または、２に記載の方法。
【請求項３２】
前記微生物がグルタミンシンテターゼ活性を増加する遺伝子修飾をさらに含み、配列番号８９を含むグルタミンシンテターゼをコードする核酸配列を含む組み換え核酸分子で該微生物が形質転換されている、請求項１、または、２に記載の方法。
【請求項３３】
グルコース−６−燐酸デヒドロゲナーゼ活性を増加する遺伝子修飾を、前記微生物がさらに含み、配列番号９５を含むグルコース−６−燐酸デヒドロゲナーゼをコードする核酸配列を含む組み換え核酸分子で、該微生物が形質転換されている、請求項１、または、２に記載の方法。
【請求項３４】
前記微生物中でグリコーゲン合成に関与する酵素をコードする遺伝子の部分的または完全な欠失または不活性化を、該微生物がさらに含み、前記遺伝子修飾が該微生物のガラクトース代謝能を阻害しない、請求項１、または、２に記載の方法。
【請求項３５】
グルコサミン−６−燐酸アセチルトランスフェラーゼ活性を増加する少なくとも一つの遺伝子修飾を含む遺伝子修飾微生物であって、該微生物は、該グルコサミン−６−燐酸アセチルトランスフェラーゼをコードする核酸配列を含む少なくとも一つの組み換え核酸分子で、形質転換される、遺伝子修飾微生物。
【請求項３６】
グルコサミン−６−燐酸シンターゼ活性を増加する少なくとも一つの遺伝子修飾を、前記微生物がさらに含み、該微生物は、該グルコサミン−６−燐酸アセチルトランスフェラーゼをコードする核酸配列を含む少なくとも一つの組み換え核酸分子で、形質転換される、請求項３５に記載の遺伝子修飾微生物。
【請求項３７】
グルコサミン−６−燐酸デアミナーゼ活性を減少する少なくとも一つの遺伝子修飾を、前記微生物がさらに含み、該グルコサミン−６−燐酸デアミナーゼ活性を減少する該遺伝子修飾が、該微生物中でグルコサミン−６−燐酸デアミナーゼをコードする内因性遺伝子の部分的または完全な欠失または不活性化を含む、請求項３５に記載の遺伝子修飾微生物。
【請求項３８】
前記採集工程が、細胞内の、グルコサミン−６−燐酸、グルコサミン−１−燐酸、Ｎ−アセチルグルコサミン−６−燐酸、Ｎ−アセチルグルコサミン−１−燐酸、Ｎ−アセチルグルコサミンおよびグルコサミンでなる群から選ばれる細胞内生成物を前記微生物から回収する工程、またはグルコサミンおよびＮ−アセチルグルコサミンでなる群より選ばれる細胞外生成物を前記発酵培地から回収する工程を包含する、請求項１、または、２に記載の方法。
【請求項３９】
ａ）グルコサミンおよびＮ−アセチルグルコサミンでなる群より選ばれた生成物を前記発酵培地から精製する工程；
ｂ）グルコサミン−６−燐酸、グルコサミン−１−燐酸、Ｎ−アセチルグルコサミン−６−燐酸およびＮ−アセチルグルコサミン−１−燐酸でなる群より選ばれた生成物を前記微生物から回収する工程；
ｃ）グルコサミン−６−燐酸およびグルコサミン−１−燐酸でなる群より選ばれた生成物を脱燐酸し、グルコサミンを製造する工程；
ｄ） Ｎ−アセチルグルコサミン−６−燐酸およびＮ−アセチルグルコサミン−１−燐酸でなる群より選ばれた生成物を脱燐酸し、Ｎ−アセチルグルコサミンを製造する工程；ならびに
ｅ）Ｎ−アセチルグルコサミン、Ｎ−アセチルグルコサミン−６−燐酸およびＮ−アセチルグルコサミン−１−燐酸でなる群より選ばれた生成物を処理し、グルコサミン、グルコサミン−６−燐酸およびグルコサミン−１−燐酸でなる群より選ばれたグルコサミン製品を製造する工程、
でなる群から選ばれた工程をさらに包含する、請求項１、または、２に記載の方法。
【請求項４０】
Ｎ−アセチルグルコサミン、Ｎ−アセチルグルコサミン−６−燐酸およびＮ−アセチルグルコサミン−１−燐酸でなる群より選ばれた前記生成物を、酸および加熱条件下または酵素的脱アセチル化で加水分解する工程を工程（ｅ）が含む、請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
Ｎ−アセチルグルコサミンの固体を発酵ブロスから沈殿または結晶化させて、前記発酵法で製造されたＮ−アセチルグルコサミンが回収される、請求項１、または、２に記載の方法。
【請求項１】
ａ）グルコサミン−６−燐酸アセチルトランスフェラーゼ活性を増加する少なくとも一つの遺伝子修飾を含む微生物を発酵培地中で培養する工程；および
ｂ）グルコサミン−６−燐酸、グルコサミン、グルコサミン−１−燐酸、Ｎ−アセチルグルコサミン−１−燐酸、Ｎ−アセチルグルコサミン−６−燐酸、およびＮ−アセチルグルコサミンでなる群より選ばれる、培養工程から製造された生成物を採集する工程
を包含する、発酵によるグルコサミンまたはＮ−アセチルグルコサミンの製造方法であって、
該微生物は、該グルコサミン−６−燐酸アセチルトランスフェラーゼをコードする核酸配列を含む少なくとも一つの組み換え核酸分子で、形質転換される、方法。
【請求項２】
ａ）内因性グルコサミン−６−燐酸アセチルトランスフェラーゼとグルコサミン−６−燐酸シンターゼ活性を増加する少なくとも１種の遺伝子修飾とを含む微生物を発酵培地中で培養する工程；および
ｂ）グルコサミン−６−燐酸、グルコサミン、グルコサミン−１−燐酸、Ｎ−アセチルグルコサミン−１−燐酸、Ｎ−アセチルグルコサミン−６−燐酸およびＮ−アセチルグルコサミンからなる群から選ばれる、培養工程から生産された生成物を採集する工程、
を包含する、発酵によるグルコサミンまたはＮ−アセチルグルコサミンの製造方法であって、
該微生物は、該グルコサミン−６−燐酸アセチルトランスフェラーゼをコードする核酸配列を含む少なくとも一つの組み換え核酸分子で、形質転換される、方法。
【請求項３】
前記グルコサミン−６−燐酸アセチルトランスフェラーゼが、配列番号３０、配列番号３２および配列番号３４からなる群より選ばれるアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有し、該グルコサミン−６−燐酸アセチルトランスフェラーゼが酵素活性を有する、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記グルコサミン−６−燐酸アセチルトランスフェラーゼが、配列番号３０、配列番号３２および配列番号３４からなる群より選ばれるアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有し、該グルコサミン−６−燐酸アセチルトランスフェラーゼが酵素活性を有する、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記グルコサミン−６−燐酸アセチルトランスフェラーゼが、配列番号３０、配列番号３２および配列番号３４からなる群より選ばれるアミノ酸配列と少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を有し、該グルコサミン−６−燐酸アセチルトランスフェラーゼが酵素活性を有する、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記グルコサミン−６−燐酸アセチルトランスフェラーゼが、１つまたは複数のアミノ酸欠失、置換および／または付加を有する、配列番号３０、配列番号３２および配列番号３４からなる群より選ばれるアミノ酸配列を有し、該グルコサミン−６−燐酸シンターゼが酵素活性を有する、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記グルコサミン−６−燐酸アセチルトランスフェラーゼが配列番号３０、配列番号３２および配列番号３４でなる群より選ばれるアミノ酸配列を有する、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記組み換え核酸分子の発現が誘導可能である、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
前記組み換え核酸分子の発現がラクトースで誘導可能である、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記微生物がラクトースによる転写誘導の阻害を減少する遺伝子修飾をさらに含み、該遺伝子修飾がＬａｃＩレプレッサータンパク質をコードする遺伝子の部分的または完全な欠失または不活性化を含む、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記微生物が、グルコサミン−６−燐酸シンターゼ活性を増加する少なくとも一つの遺伝子修飾をさらに含み、該微生物は、該グルコサミン−６−燐酸アセチルトランスフェラーゼをコードする核酸配列を含む少なくとも一つの組み換え核酸分子で、形質転換される、請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
前記グルコサミン−６−燐酸シンターゼが、配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８および配列番号２０でなる群より選ばれるアミノ酸配列に対し、少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含み、該グルコサミン−６−燐酸シンターゼが酵素活性を有する、請求項２または１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記グルコサミン−６−燐酸シンターゼが、配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８および配列番号２０でなる群より選ばれるアミノ酸配列に対し、少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み、該グルコサミン−６−燐酸シンターゼが酵素活性を有する、請求項２または１１に記載の方法。
【請求項１４】
前記グルコサミン−６−燐酸シンターゼが、配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８および配列番号２０でなる群より選ばれるアミノ酸配列に対し、少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含み、該グルコサミン−６−燐酸シンターゼが酵素活性を有する、請求項２または１１に記載の方法。
【請求項１５】
前記グルコサミン−６−燐酸シンターゼが、１つまたは複数のアミノ酸欠失、置換および／または付加を有する、配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８および配列番号２０でなる群より選ばれるアミノ酸配列を含み、該グルコサミン−６−燐酸シンターゼが酵素活性を有する、請求項２または１１に記載の方法。
【請求項１６】
前記グルコサミン−６−燐酸シンターゼが、配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８および配列番号２０からなる群より選ばれるアミノ酸配列を含む、請求項２または１１に記載の方法。
【請求項１７】
野生型グルコサミン−６−燐酸シンターゼと比較して前記グルコサミン−６−燐酸シンターゼの生成物阻害を減少する修飾を、該グルコサミン−６−燐酸シンターゼが有し、該グルコサミン−６−燐酸シンターゼが、配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、および配列番号１４からなる群より選ばれるアミノ酸配列を含む、請求項２または１１に記載の方法。
【請求項１８】
前記微生物が、グルコサミン−６−燐酸デアミナーゼ活性を減少する少なくとも一つの遺伝子修飾をさらに含み、グルコサミン−６−燐酸デアミナーゼ活性を減少する該遺伝子修飾が、該微生物中でグルコサミン−６−燐酸デアミナーゼをコードする内因性遺伝子の部分的または完全な欠失または不活性化を含む、請求項１、２、または１１に記載の方法。
【請求項１９】
前記発酵培地中で炭素源を０．５％〜５％の濃度に保つ工程を前記培養工程が含む、請求項１、または、２に記載の方法。
【請求項２０】
前記培養工程が酵母抽出物を含む発酵培地中で行われる、請求項１、または、２に記載の方法。
【請求項２１】
グルコース、フラクトース、ペントース糖、ラクトースおよびグルコン酸でなる群から選ばれる炭素源を含む発酵培地中で前記培養工程が行われる、請求項１、または、２に記載の方法。
【請求項２２】
前記ペントース糖がリボース、キシロースおよびアラビノースでなる群より選ばれる、請求項１、または、２に記載の方法。
【請求項２３】
前記培養工程がグルコースおよびリボースを含む発酵培地、ならびにグルコースおよびグルコン酸を含む発酵培地でなる群より選ばれる発酵培地中で行われる、請求項１、または、２に記載の方法。
【請求項２４】
前記培養工程が２５℃〜４５℃の温度で行われる、請求項１、または、２に記載の方法。
【請求項２５】
前記培養工程がｐＨ４〜ｐＨ７．５のｐＨで行われる、請求項１、または、２に記載の方法。
【請求項２６】
前記微生物がバクテリア、菌類および酵母でなる群より選ばれる、請求項１、または、２に記載の方法。
【請求項２７】
前記微生物がＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ、ＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓおよびＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓでなる群から選ばれた属由来のバクテリアである、請求項１、または、２に記載の方法。
【請求項２８】
微生物がＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ、Ｃａｎｄｉｄａ、Ｈａｎｓｅｎｕｌａ、Ｐｉｃｈｉａ、Ｋｌｕｖｅｒｏｍｙｃｅｓ、およびＰｈａｆｆｉａでなる群から選ばれた属由来の酵母である、請求項１、または、２に記載の方法。
【請求項２９】
前記微生物がＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ、Ａｂｓｉｄｉａ、Ｒｈｉｚｏｐｕｓ、Ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ、ＮｅｕｒｏｓｐｏｒａおよびＴｒｉｃｈｏｄｅｒｍａでなる群から選ばれた属由来の真菌類である、請求項１、または、２に記載の方法。
【請求項３０】
前記微生物中でホスフォグルコイソメラーゼ活性を増加する遺伝子修飾を、該微生物がさらに含み、該微生物が配列番号１０５を含む前記ホスフォグルコイソメラーゼをコードする核酸配列を含む組み換え核酸分子で形質転換される、請求項１、または、２に記載の方法。
【請求項３１】
前記微生物中でホスフォフラクトキナーゼの部分的または完全な欠失または不活性化を該微生物がさらに含む、請求項１、または、２に記載の方法。
【請求項３２】
前記微生物がグルタミンシンテターゼ活性を増加する遺伝子修飾をさらに含み、配列番号８９を含むグルタミンシンテターゼをコードする核酸配列を含む組み換え核酸分子で該微生物が形質転換されている、請求項１、または、２に記載の方法。
【請求項３３】
グルコース−６−燐酸デヒドロゲナーゼ活性を増加する遺伝子修飾を、前記微生物がさらに含み、配列番号９５を含むグルコース−６−燐酸デヒドロゲナーゼをコードする核酸配列を含む組み換え核酸分子で、該微生物が形質転換されている、請求項１、または、２に記載の方法。
【請求項３４】
前記微生物中でグリコーゲン合成に関与する酵素をコードする遺伝子の部分的または完全な欠失または不活性化を、該微生物がさらに含み、前記遺伝子修飾が該微生物のガラクトース代謝能を阻害しない、請求項１、または、２に記載の方法。
【請求項３５】
グルコサミン−６−燐酸アセチルトランスフェラーゼ活性を増加する少なくとも一つの遺伝子修飾を含む遺伝子修飾微生物であって、該微生物は、該グルコサミン−６−燐酸アセチルトランスフェラーゼをコードする核酸配列を含む少なくとも一つの組み換え核酸分子で、形質転換される、遺伝子修飾微生物。
【請求項３６】
グルコサミン−６−燐酸シンターゼ活性を増加する少なくとも一つの遺伝子修飾を、前記微生物がさらに含み、該微生物は、該グルコサミン−６−燐酸アセチルトランスフェラーゼをコードする核酸配列を含む少なくとも一つの組み換え核酸分子で、形質転換される、請求項３５に記載の遺伝子修飾微生物。
【請求項３７】
グルコサミン−６−燐酸デアミナーゼ活性を減少する少なくとも一つの遺伝子修飾を、前記微生物がさらに含み、該グルコサミン−６−燐酸デアミナーゼ活性を減少する該遺伝子修飾が、該微生物中でグルコサミン−６−燐酸デアミナーゼをコードする内因性遺伝子の部分的または完全な欠失または不活性化を含む、請求項３５に記載の遺伝子修飾微生物。
【請求項３８】
前記採集工程が、細胞内の、グルコサミン−６−燐酸、グルコサミン−１−燐酸、Ｎ−アセチルグルコサミン−６−燐酸、Ｎ−アセチルグルコサミン−１−燐酸、Ｎ−アセチルグルコサミンおよびグルコサミンでなる群から選ばれる細胞内生成物を前記微生物から回収する工程、またはグルコサミンおよびＮ−アセチルグルコサミンでなる群より選ばれる細胞外生成物を前記発酵培地から回収する工程を包含する、請求項１、または、２に記載の方法。
【請求項３９】
ａ）グルコサミンおよびＮ−アセチルグルコサミンでなる群より選ばれた生成物を前記発酵培地から精製する工程；
ｂ）グルコサミン−６−燐酸、グルコサミン−１−燐酸、Ｎ−アセチルグルコサミン−６−燐酸およびＮ−アセチルグルコサミン−１−燐酸でなる群より選ばれた生成物を前記微生物から回収する工程；
ｃ）グルコサミン−６−燐酸およびグルコサミン−１−燐酸でなる群より選ばれた生成物を脱燐酸し、グルコサミンを製造する工程；
ｄ） Ｎ−アセチルグルコサミン−６−燐酸およびＮ−アセチルグルコサミン−１−燐酸でなる群より選ばれた生成物を脱燐酸し、Ｎ−アセチルグルコサミンを製造する工程；ならびに
ｅ）Ｎ−アセチルグルコサミン、Ｎ−アセチルグルコサミン−６−燐酸およびＮ−アセチルグルコサミン−１−燐酸でなる群より選ばれた生成物を処理し、グルコサミン、グルコサミン−６−燐酸およびグルコサミン−１−燐酸でなる群より選ばれたグルコサミン製品を製造する工程、
でなる群から選ばれた工程をさらに包含する、請求項１、または、２に記載の方法。
【請求項４０】
Ｎ−アセチルグルコサミン、Ｎ−アセチルグルコサミン−６−燐酸およびＮ−アセチルグルコサミン−１−燐酸でなる群より選ばれた前記生成物を、酸および加熱条件下または酵素的脱アセチル化で加水分解する工程を工程（ｅ）が含む、請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
Ｎ−アセチルグルコサミンの固体を発酵ブロスから沈殿または結晶化させて、前記発酵法で製造されたＮ−アセチルグルコサミンが回収される、請求項１、または、２に記載の方法。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【図１７】
【図１８】
【図１９】
【図２０】
【図２１】
【図２２】
【図２３】
【図２４】
【図２５】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【図１７】
【図１８】
【図１９】
【図２０】
【図２１】
【図２２】
【図２３】
【図２４】
【図２５】
【公開番号】特開２０１０−２５９４４９（Ｐ２０１０−２５９４４９Ａ）
【公開日】平成２２年１１月１８日（２０１０．１１．１８）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１０−１８６７０４（Ｐ２０１０−１８６７０４）
【出願日】平成２２年８月２３日（２０１０．８．２３）
【分割の表示】特願２００４−５１８２２５（Ｐ２００４−５１８２２５）の分割
【原出願日】平成１５年７月１日（２００３．７．１）
【出願人】（５０５００１５２４）アーキオン ライフ サイエンシーズ エルエルシー ディー／ビー／エー バイオ−テクニカル リソーセズ ディビジョン (3)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２２年１１月１８日（２０１０．１１．１８）
【国際特許分類】
【出願日】平成２２年８月２３日（２０１０．８．２３）
【分割の表示】特願２００４−５１８２２５（Ｐ２００４−５１８２２５）の分割
【原出願日】平成１５年７月１日（２００３．７．１）
【出願人】（５０５００１５２４）アーキオン ライフ サイエンシーズ エルエルシー ディー／ビー／エー バイオ−テクニカル リソーセズ ディビジョン (3)
【Ｆターム（参考）】
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