シクロオキシゲナーゼ活性阻害剤
【課題】ＣＯＸ阻害活性を有する、好ましくはシクロオキシゲナーゼ１型に比べてシクロオキシゲナーゼ２型を選択的に強く阻害するシクロオキシゲナーゼ阻害活性を有する安全性の高いエキス、該エキスを含有するシクロオキシゲナ−ゼ活性阻害剤、およびこれらを含有する組成物を提供すること。
【解決手段】仙草、エキナセア、ヘラオオバコ、ハマナスから選ばれる１種以上から有機溶媒又は有機溶媒水溶液により抽出して得られ、かつシクロオキシゲナーゼ阻害活性を含有することを特徴とするエキス、該エキスを含有してなるシクロオキシゲナーゼ活性阻害剤、ならびに前記エキスまたは前記シクロオキシゲナーゼ活性阻害剤を含有することを特徴とする組成物。
【解決手段】仙草、エキナセア、ヘラオオバコ、ハマナスから選ばれる１種以上から有機溶媒又は有機溶媒水溶液により抽出して得られ、かつシクロオキシゲナーゼ阻害活性を含有することを特徴とするエキス、該エキスを含有してなるシクロオキシゲナーゼ活性阻害剤、ならびに前記エキスまたは前記シクロオキシゲナーゼ活性阻害剤を含有することを特徴とする組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、天然物由来であり、従来から食材として用いられてきた植物である仙草、エキナセア、ヘラオオバコ、ハマナスから得られるシクロオキシゲナーゼ阻害活性を有するエキス、シクロオキシゲナーゼ活性阻害剤、およびこれらを含有する組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
シクロオキシゲナーゼ（Ｃｙｃｌｏｏｘｙｇｅｎａｓｅ，以下ＣＯＸと称す）は、アラキドン酸からプロスタグランジンやトロンボキサン等のケミカルメディエーターを産生するアラキドン酸カスケードの律速酵素である。生体内には、２つのＣＯＸアイソザイムが存在し、それぞれシクロオキシゲナーゼ１型（ＣＯＸ−１）及びシクロオキシゲナーゼ２型（ＣＯＸ−２）と呼ばれている。ＣＯＸ−１は、血小板や胃、血管内皮細胞など多くの細胞に恒常的に発現しており、血小板凝集、胃酸分泌抑制作用、胃粘膜保護などの作用を有し、生体の保護に関わる。ＣＯＸ−２は炎症性刺激やホルモン刺激によってその産生が誘導される誘導型酵素であり、発熱、発痛、浮腫などの炎症といった反応を担っているプロスタグランジン類を産生すると考えられている。
【０００３】
アスピリンやインドメタシンなどのこれまでに知られる非ステロイド系抗炎症剤はＣＯＸ−１、ＣＯＸ−２ともによく阻害する。このとき、ＣＯＸ−２だけでなく、ＣＯＸ−１も強く阻害することから、消化性潰瘍、めまいなどの副作用が生じる。これらのことから、より副作用が少ない、つまりＣＯＸ−２に対する選択性の高いＣＯＸ活性阻害剤で、安全性の高いＣＯＸ活性阻害剤の開発が望まれている（例えば、特許文献１、非特許文献１参照）。
【特許文献１】特開２００６−７６９１０号公報
【非特許文献１】ＦｉｔｚＧｅｒａｌｄ ＧＡ．Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ ２：８７９−８９０，２００３
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本発明の課題は、ＣＯＸ阻害活性を有する、好ましくはＣＯＸ−１に比べてＣＯＸ−２を選択的に強く阻害するシクロオキシゲナーゼ阻害活性を有する安全性の高いエキス、該エキスを含有するシクロオキシゲナ−ゼ活性阻害剤、およびこれらを含有する組成物を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明者らは、安全性の観点から、食用素材の抽出物について、イン・ビトロ（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）での系を用いてＣＯＸ阻害物質の検索を行った。その結果、仙草、エキナセア、ヘラオオバコ、ハマナスに高いＣＯＸ阻害活性があることを見出し、本発明の完成に至った。
すなわち、本発明の要旨は、
〔１〕 仙草、エキナセア、ヘラオオバコ、ハマナスから選ばれる1種以上から有機溶媒又は有機溶媒水溶液により抽出して得られ、かつＣＯＸ阻害活性を含有することを特徴とするエキス（以下、ＣＯＸ阻害活性エキスともいう）、
〔２〕 シクロオキシゲナーゼ１型に比べ、シクロオキシゲナ−ゼ２型をより強く阻害することを特徴とする前記〔１〕記載のエキス、
〔３〕 前記〔１〕または〔２〕記載のエキスを含有してなるシクロオキシゲナーゼ活性阻害剤、
〔４〕 前記〔１〕もしくは〔２〕記載のエキスまたは前記〔３〕記載のシクロオキシゲナーゼ活性阻害剤を含有することを特徴とする組成物、に関する。
【発明の効果】
【０００６】
本発明のＣＯＸ阻害活性エキスは、食品由来のため、安全性の高いものである。また、本発明のＣＯＸ活性阻害剤は、ＣＯＸ−１の阻害活性は緩和でありながら、ＣＯＸ−２には比較的強い阻害活性を有しているというＣＯＸ−２に比べて選択的な阻害活性を示すことから、副作用の少ないと期待される。ここでいうＣＯＸ−２に対する選択性とは、ＣＯＸ−１とＣＯＸ−２のＩＣ５０値の比率（ＣＯＸ−１／ＣＯＸ−２）が１．５以上の数を示す。なお、ＩＣ５０値は、後述の実施例に記載の方法で測定された値である。
【０００７】
更に、本発明は食品組成物をはじめ、外用剤組成物、医薬品組成物並びに医薬部外品組成物への応用が可能であり、ＣＯＸ活性阻害作用に基づき、炎症を伴う様々な疾患、機能低下の予防及び改善効果が期待される。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００８】
本発明で使用する仙草は、中国原産のシソ科センソウ属の植物であり、学名メソナ・チネンシス（Ｍｅｓｏｎａ ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ）やメソナ・プロカンベンス（Ｍｅｓｏｎａ ｐｒｏｃｕｍｂｅｎｓ）が挙げられる。中国や台湾では、茎や葉を米と共に煮て、砂糖を加えて漉したものは冷やすと褐色のところてんのようになり、飲料にされる（例えば、世界有用植物事典 平凡社 ６７７頁参照）。また、中国では全草を薬用とし、風邪、関節炎の痛みに用いられるが、その作用機構については知られていない。
【０００９】
本発明に使用される仙草試料として、茎や葉をミキサーなどで粉砕したものを用いることが出来る。必要に応じて、全草を使用しても良い。また、粉砕するには試料は乾燥していることが好ましいが、乾燥状態は限定されない。
【００１０】
本発明で使用するエキナセアは、北米東岸からテキサスにかけて分布するキク科エキナセア属の植物で、学名エキナセア・アングスチフォリア（Ｅｃｈｉｎａｃｅａ ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ）が挙げられる。本植物は古くからインディアンによって、根を噛み砕いた液体が、咳止めや咽喉のただれに効果があるとして用いられ、食経験の長い植物である。しかし、その効果についての作用機構は調べられていなかった。
【００１１】
本発明で使用される抽出試料は、葉をミキサーなどで粉砕したものを用いることが出来る。また、茎や花も抽出試料として含み得る。粉砕するには試料は乾燥していることが好ましいが、乾燥状態は限定されない。
【００１２】
本発明で使用するヘラオオバコは、ヨーロッパ原産でオオバコ科オオバコ属の植物で、学名プランタゴ・ランセオラタ（Ｐｌａｎｔａｇｏ ｌａｎｃｅｏｌａｔａ）が挙げられる。古くから若葉は和え物や天ぷらとして食されたり、干して煎じたものは咳止め、解熱、貧血などの民間薬として使用されてきたが、その効能についての作用機構は調べられていなかった。
【００１３】
本発明で使用するヘラオオバコ試料として、葉をミキサーなどで粉砕したものを用いることが出来る。また、茎や花も抽出試料として含み得る。粉砕するには試料は乾燥していることが好ましいが、乾燥状態は限定されない。
【００１４】
本発明で使用するハマナスはバラ科バラ属の植物で、学名ローザ・ルゴサ（Ｒｏｓａ ｒｕｇｏｓａ）が挙げられる。これまで、収れん作用や胆汁分泌促進作用、α‐グルコシダーゼ阻害活性が知られていたが、ＣＯＸとの関連は明らかにされていなかった（特開２００５−３０６８０１号公報参照）。また、中国では古くから「メイクイ花茶」として飲まれてきており、十分な食経験が知られているものである。
【００１５】
本発明で使用するハマナス試料として、花部及び茎をミキサーなどで粉砕したものを用いることが出来る。粉砕するには試料は乾燥していることが好ましいが、乾燥状態は限定されない。
【００１６】
抽出溶媒としては、有機溶媒または有機溶媒水溶液が用いられる。有機溶媒としては、例えばメタノール、エタノール、プロパノール、ブタノールなどの低級アルコールや酢酸エチルなどのエステル類が挙げられるが、これらに限定されるものではない。また、これらの有機溶媒は単独又は２種類以上を混合して用いても良く、また有機溶媒と水の混合溶媒である有機溶媒水溶液として用いても良い。なお、安全性の点からは、エタノール又はエタノール水溶液で抽出することが好ましい。また、有機溶媒どうしまたは有機溶媒と水とを混合する場合の、各溶媒の比率としては特に限定はない。
【００１７】
抽出方法としては、例えば、前記４種から選ばれる１種以上の植物試料と前記抽出溶媒とを混合し、室温で１−５時間撹拌又は抽出溶媒の煮沸温度で１−５時間還流して抽出を行った後、ろ過や遠心分離などにより抽出液から試料残渣を取り除き、減圧又は限外ろ過により抽出物を濃縮する方法が挙げられる。更に、必要に応じて抽出溶媒を完全に除去して乾固、凍結乾燥などにより乾燥しても良い。
【００１８】
前記のようにして得られるＣＯＸ阻害活性エキスは、ＣＯＸ−１に比べてＣＯＸ−２を選択的に強く阻害するＣＯＸ阻害活性を有する。ここで、ＣＯＸ阻害活性は、後述の実施例に記載の方法で測定される。
【００１９】
なお、仙草、エキナセア、ヘラオオバコ、ハマナスの各１種類の試料から前記の方法で抽出したＣＯＸ阻害活性エキスを、極性の低い有機溶媒で分配した油層（例えば、酢酸エチル層や１−ブタノール層）由来のエキスにＣＯＸ阻害活性が認められ、極性の高い溶媒層（例えば、水層）由来のエキスにはＣＯＸ阻害活性は認められなかった。前記酢酸エチル層や１−ブタノール層によって分配することにより、より精製されたＣＯＸ阻害活性エキスを得ることができる。
【００２０】
本発明のＣＯＸ阻害活性エキスは、ＣＯＸ活性阻害剤として使用することが出来る。従って、本発明は、前記ＣＯＸ阻害活性エキスを含有してなるＣＯＸ活性阻害剤に関する。
【００２１】
前記ＣＯＸ活性阻害剤には、有効成分として前記ＣＯＸ阻害活性エキスを含有しているため、ＣＯＸ−１に比べ、ＣＯＸ−２をより強く阻害することを特徴とするものである。前記ＣＯＸ活性阻害剤は、該エキスによるＣＯＸ阻害活性を損なわなければ、他の成分を混合しても良い。他の成分としては、特に限定は無い。
【００２２】
前記ＣＯＸ阻害活性エキスまたは前記ＣＯＸ活性阻害剤は、各種基材に配合して組成物としても良い。配合量や基材の種類は特に限定されるものではなく、適時設定すれば良い。基材としては、食品、医薬品、医薬部外品などに用いられる物であれば特に限定は無く、例えば経口投与基材としては、錠剤、カプセル、飴、グミ或いは飲料などが挙げられる。これらの各種基材への配合方法としては、食品、医薬品、医薬部外品などの分野の公知の技術を用いて、製造することが出来る。
【実施例】
【００２３】
以下、本発明を実施例により具体的に説明するが、本発明はこれらによって制限されるものではない。
【００２４】
（実施例１）
仙草粉末１０．０ｇに対して１００ｍｌのエタノールを加え、室温で１時間撹拌した。抽出液をろ紙でろ過し、減圧下のロータリーエバポレーターでろ液を濃縮した。１０．０ｇの試料から０．１０ｇの抽出物を得た。抽出物濃度が１０ｍｇ／ｍｌとなるようジメチルスルホキシドに溶解し、以下の実験に用いた。
【００２５】
（試験例１）ＣＯＸ活性阻害試験
カイマン・ケミカル（Ｃａｙｍａｎ ｃｈｅｍｉｃａｌ）社のコックス・インヒビター・スクリーニング・アッセイ（ＣＯＸ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ Ａｓｓａｙ、カタログ番号Ｎｏ．５６０１３１）を用いて試験を行った。
【００２６】
（試料溶液）
試料溶液としては実施例１にて得た仙草抽出物を抽出物濃度が１０、１．０、０．１、０．０１ｍｇ／ｍｌとなるよう、ジメチルスルホキシドにて適宜希釈したものを用いた。対照として、いずれのエキスも含有していないジメチルスルホキシドを陰性対照として用いた。また、陽性対照として、ジメチルスルホキシドにインドメタシン（ＳＩＧＭＡ社製）、「ＮＳ−３９８」（ＣＡＬＢＩＯＣＨＥＭ社製）、イブプロフェン（和光純薬社製）を溶解したものを用いた。
【００２７】
（方法）
酵素液であるＣＯＸ液に、基質であるアラキドン酸を添加し、プロスタグランジンの生成反応を行った（以降、ＣＯＸ反応という）。この時調整した各試料溶液をキットの試験法に従い添加し、プロスタグランジンの生成量への影響を調べた。ＣＯＸ反応によって生成されたプロスタグランジンは酵素免疫測定法（ＥＩＡ法）を利用して定量した。この時、対照として用いられている化合物インドメタシンは、ＣＯＸ−１、ＣＯＸ−２両方の活性を阻害する化合物として知られている。また、ＮＳ−３９８はＣＯＸ−２を特異的に、イブプロフェンはＣＯＸ−１を特異的に阻害する化合物である。（例えば、Ｔｉｍｏｔｈｙ Ｄ．Ｗａｒｎｅｒ．ｅｔ ａｌ． Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（１９９９）；９６：７５６３−６８参照）酵素活性阻害率は対照群に対する各試料溶液のプロスタグランジン産生量から算出した。この結果を用いて各阻害剤のＩＣ５０値（５０％活性阻害を示す阻害剤量）を求めた。結果を表１に示す。
【００２８】
【表１】
【００２９】
表１より、実施例１で得られた本発明品である仙草抽出物にはＣＯＸ−１、ＣＯＸ−２に対して阻害活性が認められた。更に詳しくは、ＮＳ−３９８と同様に、ＣＯＸ−１／ＣＯＸ−２が１．５以上の値を示した。つまり、ＣＯＸ−１に比べてＣＯＸ−２の選択性を認めた。よって、本発明品は炎症時などで発現されるＣＯＸ−２を特異的に抑制する傾向にあることが期待される。
【００３０】
（実施例２）
仙草粉末３０．０ｇに対して３００ｍｌのエタノールを加え、室温で１時間撹拌した。抽出液をろ紙でろ過し、減圧下のロータリーエバポレーターでろ液を濃縮した。３０．０ｇの試料から０．５７ｇの抽出物を得た。
【００３１】
上記の仙草抽出物を水と酢酸エチルを用いて分配を行った。得られた抽出物を酢酸エチル（４０ｍｌ）と水（４０ｍｌ）の混合溶液中で溶解し、静置した後に上層を酢酸エチル画分として回収した。この操作を計３回繰り返し、約１２０ｍｌの酢酸エチル層画分を得た。更にこの溶液画分をロータリーエバポレーターにより乾固し、０．１７ｇの酢酸エチル抽出画分を得た。水層については、更に１‐ブタノールを加え、同様に分配を行い、０．２３ｇの水層抽出画分と０．１５ｇのブタノール層抽出画分を得た。更に、各抽出画分の濃度が１ｍｇ／ｍｌとなるようジメチルスルホキシドに溶解した。
【００３２】
（試験例２）
試験例１と同様の方法で、実施例２で得られた仙草分画エキスのＣＯＸ活性阻害率を算出した。ＣＯＸ−１については、酢酸エチル層（ＡｃＯＥｔ）で９３．０４％、ブタノール層（ＢｕＯＨ）では７１．０６％の阻害が認められたが、水層は陰性対照と同程度であった。同様にＣＯＸ−２についても酢酸エチル層で９６．４２％、ブタノール層で９７．１７％の阻害が認められたが、水層は陰性対照と同程度であった（図１参照）。
【００３３】
（試験例３）
実施例２で得られた仙草分画エキスを１．０，０．１，０．０１ｍｇ／ｍｌとなるよう、ジメチルスルホキシドにて調整した。対照として、インドメタシンをジメチルスルホキシドに溶解したものを用いた。
【００３４】
試験例１と同様の方法で、上記仙草分画エキスのＣＯＸ活性阻害率を算出した。この結果を用いて各阻害剤のＩＣ５０値を求めた。結果を表２に示す。
【００３５】
【表２】
【００３６】
表２より、仙草エキスの酢酸エチル及びブタノール層画分にＣＯＸ−２阻害活性が認められた。また、仙草ブタノール層画分から得られたエキスには、酢酸エチル層画分に比べて、約２．２倍の阻害活性が認められたが、水層画分にはほとんど活性が見られなかった。
【００３７】
（実施例３）
エキナセア粉末１０．０ｇに対して１００ｍｌのエタノールを加え、室温で１時間撹拌した。抽出液をろ紙でろ過し、減圧下のロータリーエバポレーターでろ液を濃縮した。１０．０ｇの試料から０．１３ｇの抽出物を得た。抽出物濃度が１０ｍｇ／ｍｌとなるようジメチルスルホキシドに溶解し、エキナセアエキスとして以下の実験に用いた。
【００３８】
（試験例４）
試験例１と同様の方法で、上記エキナセア分画エキスのＣＯＸ−１及びＣＯＸ−２活性阻害率を算出した。この結果を用いて各阻害剤のＩＣ５０値を求めた。結果を表３に示す。
【００３９】
【表３】
【００４０】
表３より、実施例３で得られた本発明品であるエキナセア抽出物にはＣＯＸ−１、ＣＯＸ−２に対して阻害活性が認められた。更に詳しくは、ＮＳ−３９８と同様に、ＣＯＸ−１／ＣＯＸ−２が１．５以上の値を示した。つまり、ＣＯＸ−１に比べてＣＯＸ−２の選択性を認めた。よって、本発明品は炎症時などで発現されるＣＯＸ−２を特異的に抑制する傾向にあることが期待される。
【００４１】
（実施例４）
エキナセア粉末３０．０ｇに対して３００ｍｌのエタノールを加え、室温で１時間撹拌した。抽出液をろ紙でろ過し、減圧下のロータリーエバポレーターでろ液を濃縮した。３０．０ｇの試料から０．５８ｇの抽出物を得た。
【００４２】
上記のエキナセア抽出物を水と酢酸エチルを用いて分配を行った。得られた抽出物を酢酸エチル（４０ｍｌ）と水（４０ｍｌ）の混合溶液中で溶解し、静置した後に上層を酢酸エチル画分として回収した。この操作を計３回繰り返し、約１２０ｍｌの酢酸エチル層画分を得た。更にこの溶液画分をロータリーエバポレーターにより乾固し、０．２３ｇの酢酸エチル抽出画分を得た。水層については、更に１‐ブタノールを加え、同様に分配を行い、０．１３ｇの水層抽出画分と０．２１ｇのブタノール層抽出画分を得た。更に、各抽出画分の濃度が１ｍｇ／ｍｌとなるようジメチルスルホキシドに溶解した。
【００４３】
（試験例５）
試験例１と同様の方法で、実施例４で得られたエキナセア分画エキスのＣＯＸ活性阻害率を算出した。ＣＯＸ−１については、酢酸エチル層で５８．２７％、ブタノール層では７８．５１％の阻害が認められたが、水層に阻害活性は認められなかった。同様にＣＯＸ−２についても酢酸エチル層で９９．４０％、ブタノール層で９８．１６％の阻害が認められたが、水層は陰性対照と同程度であった（図２参照）。
【００４４】
（試験例６）
実施例４で得られたエキナセア分画エキスを１．０，０．１，０．０１ｍｇ／ｍｌとなるよう、ジメチルスルホキシドにて調整した。対照として、インドメタシンをジメチルスルホキシドに溶解したものを用いた。
【００４５】
試験例１と同様の方法で、上記エキナセア分画エキスのＣＯＸ活性阻害率を算出した。この結果を用いて各阻害剤のＩＣ５０値を求めた。結果を表４に示す。
【００４６】
【表４】
【００４７】
表４より、エキナセアエキスの酢酸エチル層画分およびブタノール層画分にＣＯＸ−２阻害活性が認められた。エキナセアの酢酸エチル層画分から得られたエキスには、ブタノール層画分に比べて、約２．８倍の阻害活性が認められたが、水層画分にはほとんど活性が見られなかった。
【００４８】
（実施例５）
ヘラオオバコ粉末１０．０ｇに対して１００ｍｌのエタノールを加え、室温で１時間撹拌した。抽出液をろ紙でろ過し、減圧下のロータリーエバポレーターで濃縮した。１０．０ｇの試料から０．５０ｇの抽出物を得た。抽出物濃度が１０ｍｇ／ｍｌとなるようジメチルスルホキシドに溶解し、ヘラオオバコエキスとして以下の実験に用いた。
【００４９】
（試験例７）
試験例１と同様の方法で、上記ヘラオオバコ分画エキスのＣＯＸ−１及びＣＯＸ−２活性阻害率を算出した。この結果を用いて各阻害剤のＩＣ５０値を求めた。結果を表５に示す。
【００５０】
【表５】
【００５１】
表５より、実施例５で得られた本発明品であるヘラオオバコ抽出物にはＣＯＸ−１、ＣＯＸ−２に対して阻害活性が認められた。更に詳しくは、ＮＳ−３９８と同様に、ＣＯＸ−１／ＣＯＸ−２が１．５以上の値を示した。つまり、ＣＯＸ−１に比べてＣＯＸ−２の選択性を認めた。よって、本発明品は炎症時などで発現されるＣＯＸ−２を特異的に抑制する傾向にあることが期待される。
【００５２】
（実施例６）
ヘラオオバコ粉末３０．０ｇに対して３００ｍｌのエタノールを加え、室温で１時間撹拌した。抽出液をろ紙でろ過し、減圧下のロータリーエバポレーターでろ液を濃縮した。３０．０ｇの試料から１．２４ｇの抽出物を得た。
【００５３】
上記のヘラオオバコ抽出物を水と酢酸エチルを用いて分配を行った。得られた抽出物を酢酸エチル（４０ｍｌ）と水（４０ｍｌ）の混合溶液中で溶解し、静置した後に上層を酢酸エチル画分として回収した。この操作を計３回繰り返し、約１２０ｍｌの酢酸エチル層画分を得た。更にこの溶液画分をロータリーエバポレーターにより乾固し、０．４０ｇの酢酸エチル抽出画分を得た。水層については、更に１‐ブタノールを加え、同様に分配を行い、０．４９ｇの水層抽出画分と０．３３ｇのブタノール層抽出画分を得た。更に、各抽出画分の濃度が１ｍｇ／ｍｌとなるようジメチルスルホキシドに溶解した。
【００５４】
（試験例８）
試験例１と同様の方法で、実施例６で得られたヘラオオバコ分画エキスのＣＯＸ活性阻害率を算出した。ＣＯＸ−１については、酢酸エチル層で６０．５９％、ブタノール層では３７．０３％の阻害が認められたが、水層は陰性対照と同程度であった。同様にＣＯＸ−２についても酢酸エチル層で９７．８１％、ブタノール層で７８．９７％の阻害が認められたが、水層は陰性対照と同程度であった（図３参照）。
【００５５】
（試験例９）
実施例６で得られたヘラオオバコ分画エキスを１．０，０．１，０．０１ｍｇ／ｍｌとなるよう、ジメチルスルホキシドにて調整した。対照として、インドメタシンをジメチルスルホキシドに溶解したものを用いた。
【００５６】
試験例１と同様の方法で、上記ヘラオオバコ分画エキスのＣＯＸ活性阻害率を算出した。この結果を用いて各阻害剤のＩＣ５０値を求めた。結果を表６に示す。
【００５７】
【表６】
【００５８】
表６より、ヘラオオバコエキスの酢酸エチル層画分およびブタノール層画分にＣＯＸ−２阻害活性が認められた。ヘラオオバコの酢酸エチル層画分から得られたエキスには、ブタノール層画分に比べて、約８．２倍の阻害活性が認められたが、水層画分にはほとんど活性が見られなかった。
【００５９】
（実施例７）
ハマナス粉末１０．０ｇに対して１００ｍｌのエタノールを加え、室温で１時間撹拌した。抽出液をろ紙でろ過し、減圧下のロータリーエバポレーターでろ液を濃縮した。１０．０ｇの試料から０．２２ｇの抽出物を得た。抽出物濃度が１０ｍｇ／ｍｌとなるようジメチルスルホキシドに溶解し、以下の実験に用いた。
【００６０】
（試験例１０）
試験例１と同様の方法で、上記ハマナス分画エキスのＣＯＸ−１及びＣＯＸ−２活性阻害率を算出した。この結果を用いて各阻害剤のＩＣ５０値を求めた。結果を表７に示す。
【００６１】
【表７】
【００６２】
表７より、実施例７で得られた本発明品であるハマナス抽出物にはＣＯＸ−１、ＣＯＸ−２に対して阻害活性が認められた。更に詳しくは、ＮＳ−３９８と同様に、ＣＯＸ−１／ＣＯＸ−２が１．５以上の値を示した。つまり、ＣＯＸ−１に比べてＣＯＸ−２の選択性を認めた。よって、本発明品は炎症時などで発現されるＣＯＸ−２を特異的に抑制する傾向にあることが期待される。
【００６３】
（実施例８）
ハマナス粉末３０．０ｇに対して３００ｍｌのエタノールを加え、室温で１時間撹拌した。抽出液をろ紙でろ過し、減圧下のロータリーエバポレーターで濃縮した。３０．０ｇの試料から１．３６ｇの抽出物を得た。
【００６４】
上記のハマナス抽出物を水と酢酸エチルを用いて分配を行った。得られた抽出物を酢酸エチル（４０ｍｌ）と水（４０ｍｌ）の混合溶液中で溶解し、静置した後に上層を酢酸エチル画分として回収した。この操作を計３回繰り返し、約１２０ｍｌの酢酸エチル層画分を得た。更にこの溶液画分をロータリーエバポレーターにより乾固し、０．８７ｇの酢酸エチル抽出画分を得た。水層については、更に１‐ブタノールを加え、同様に分配を行い、０．２４ｇの水層抽出画分と０．２４ｇのブタノール層抽出画分を得た。更に、各抽出画分の濃度が１ｍｇ／ｍｌとなるようジメチルスルホキシドに溶解した。
【００６５】
（試験例１１）
試験例１と同様の方法で、実施例８で得られたハマナス分画エキスのＣＯＸ活性阻害率を算出した。ＣＯＸ−１については、酢酸エチル層で９６．６６％、ブタノール層では１９．０４％の阻害が認められた。同様にＣＯＸ−２についても酢酸エチル層で９７．１０％、ブタノール層で４３．８１％の阻害が認められた（図４参照）。
【００６６】
（試験例１２）
実施例８で得られたハマナス分画エキスを１．０，０．１，０．０１ｍｇ／ｍｌとなるよう、ジメチルスルホキシドにて調整した。対照として、インドメタシンをジメチルスルホキシドに溶解したものを用いた。
【００６７】
試験例１と同様の方法で、上記ハマナス分画エキスのＣＯＸ活性阻害率を算出した。この結果を用いて各阻害剤のＩＣ５０値を求めた。結果を表８に示す。
【００６８】
【表８】
【００６９】
表８より、ハマナスの酢酸エチル層画分およびブタノール層画分にＣＯＸ−２阻害活性が認められた。ハマナスの酢酸エチル層画分から得られたエキスには、ブタノール層画分に比べて、１７倍以上の阻害活性が認められたが、水層画分にはほとんど活性が見られなかった。
【産業上の利用可能性】
【００７０】
本発明のＣＯＸ活性阻害エキスは、安全性の高いＣＯＸ活性阻害剤、好ましくはＣＯＸ−１に比べてＣＯＸ−２をより強く阻害する安全性の高いＣＯＸ活性阻害剤として好適に使用することが出来る。
【図面の簡単な説明】
【００７１】
【図１】図１は、実施例２の分配操作による仙草の各抽出画分を用いて、試験例１と同様の方法でＣＯＸ活性阻害実験を行い、分析した結果を示すグラフである。縦軸は阻害物を含んでいない場合の活性を１００とし、化合物又は抽出エキスを添加した場合の活性を１００から差し引いた分を阻害率（％）として相対的に表したものである。
【図２】図２は、実施例４の分配操作によるエキナセアの各抽出画分を用いて、試験例１と同様の方法でＣＯＸ活性阻害実験を行い、分析した結果を示すグラフである。縦軸は阻害物を含んでいない場合の活性を１００とし、化合物又は抽出エキスを添加した場合の活性を１００から差し引いた分を阻害率（％）として相対的に表したものである。
【図３】図２は、実施例６の分配操作によるヘラオオバコの各抽出画分を用いて、試験例１と同様の方法でＣＯＸ活性阻害実験を行い、分析した結果を示すグラフである。縦軸は阻害物を含んでいない場合の活性を１００とし、化合物又は抽出エキスを添加した場合の活性を１００から差し引いた分を阻害率（％）として相対的に表したものである。
【図４】図４は、実施例８の分配操作によるハマナスの各抽出画分を用いて、試験例１と同様の方法でＣＯＸ活性阻害実験を行い、分析した結果である。縦軸は阻害物を含んでいない場合の活性を１００とし、化合物又は抽出エキスを添加した場合の活性を１００から差し引いた分を阻害率（％）として相対的に表したものである。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、天然物由来であり、従来から食材として用いられてきた植物である仙草、エキナセア、ヘラオオバコ、ハマナスから得られるシクロオキシゲナーゼ阻害活性を有するエキス、シクロオキシゲナーゼ活性阻害剤、およびこれらを含有する組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
シクロオキシゲナーゼ（Ｃｙｃｌｏｏｘｙｇｅｎａｓｅ，以下ＣＯＸと称す）は、アラキドン酸からプロスタグランジンやトロンボキサン等のケミカルメディエーターを産生するアラキドン酸カスケードの律速酵素である。生体内には、２つのＣＯＸアイソザイムが存在し、それぞれシクロオキシゲナーゼ１型（ＣＯＸ−１）及びシクロオキシゲナーゼ２型（ＣＯＸ−２）と呼ばれている。ＣＯＸ−１は、血小板や胃、血管内皮細胞など多くの細胞に恒常的に発現しており、血小板凝集、胃酸分泌抑制作用、胃粘膜保護などの作用を有し、生体の保護に関わる。ＣＯＸ−２は炎症性刺激やホルモン刺激によってその産生が誘導される誘導型酵素であり、発熱、発痛、浮腫などの炎症といった反応を担っているプロスタグランジン類を産生すると考えられている。
【０００３】
アスピリンやインドメタシンなどのこれまでに知られる非ステロイド系抗炎症剤はＣＯＸ−１、ＣＯＸ−２ともによく阻害する。このとき、ＣＯＸ−２だけでなく、ＣＯＸ−１も強く阻害することから、消化性潰瘍、めまいなどの副作用が生じる。これらのことから、より副作用が少ない、つまりＣＯＸ−２に対する選択性の高いＣＯＸ活性阻害剤で、安全性の高いＣＯＸ活性阻害剤の開発が望まれている（例えば、特許文献１、非特許文献１参照）。
【特許文献１】特開２００６−７６９１０号公報
【非特許文献１】ＦｉｔｚＧｅｒａｌｄ ＧＡ．Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ ２：８７９−８９０，２００３
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本発明の課題は、ＣＯＸ阻害活性を有する、好ましくはＣＯＸ−１に比べてＣＯＸ−２を選択的に強く阻害するシクロオキシゲナーゼ阻害活性を有する安全性の高いエキス、該エキスを含有するシクロオキシゲナ−ゼ活性阻害剤、およびこれらを含有する組成物を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明者らは、安全性の観点から、食用素材の抽出物について、イン・ビトロ（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）での系を用いてＣＯＸ阻害物質の検索を行った。その結果、仙草、エキナセア、ヘラオオバコ、ハマナスに高いＣＯＸ阻害活性があることを見出し、本発明の完成に至った。
すなわち、本発明の要旨は、
〔１〕 仙草、エキナセア、ヘラオオバコ、ハマナスから選ばれる1種以上から有機溶媒又は有機溶媒水溶液により抽出して得られ、かつＣＯＸ阻害活性を含有することを特徴とするエキス（以下、ＣＯＸ阻害活性エキスともいう）、
〔２〕 シクロオキシゲナーゼ１型に比べ、シクロオキシゲナ−ゼ２型をより強く阻害することを特徴とする前記〔１〕記載のエキス、
〔３〕 前記〔１〕または〔２〕記載のエキスを含有してなるシクロオキシゲナーゼ活性阻害剤、
〔４〕 前記〔１〕もしくは〔２〕記載のエキスまたは前記〔３〕記載のシクロオキシゲナーゼ活性阻害剤を含有することを特徴とする組成物、に関する。
【発明の効果】
【０００６】
本発明のＣＯＸ阻害活性エキスは、食品由来のため、安全性の高いものである。また、本発明のＣＯＸ活性阻害剤は、ＣＯＸ−１の阻害活性は緩和でありながら、ＣＯＸ−２には比較的強い阻害活性を有しているというＣＯＸ−２に比べて選択的な阻害活性を示すことから、副作用の少ないと期待される。ここでいうＣＯＸ−２に対する選択性とは、ＣＯＸ−１とＣＯＸ−２のＩＣ５０値の比率（ＣＯＸ−１／ＣＯＸ−２）が１．５以上の数を示す。なお、ＩＣ５０値は、後述の実施例に記載の方法で測定された値である。
【０００７】
更に、本発明は食品組成物をはじめ、外用剤組成物、医薬品組成物並びに医薬部外品組成物への応用が可能であり、ＣＯＸ活性阻害作用に基づき、炎症を伴う様々な疾患、機能低下の予防及び改善効果が期待される。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００８】
本発明で使用する仙草は、中国原産のシソ科センソウ属の植物であり、学名メソナ・チネンシス（Ｍｅｓｏｎａ ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ）やメソナ・プロカンベンス（Ｍｅｓｏｎａ ｐｒｏｃｕｍｂｅｎｓ）が挙げられる。中国や台湾では、茎や葉を米と共に煮て、砂糖を加えて漉したものは冷やすと褐色のところてんのようになり、飲料にされる（例えば、世界有用植物事典 平凡社 ６７７頁参照）。また、中国では全草を薬用とし、風邪、関節炎の痛みに用いられるが、その作用機構については知られていない。
【０００９】
本発明に使用される仙草試料として、茎や葉をミキサーなどで粉砕したものを用いることが出来る。必要に応じて、全草を使用しても良い。また、粉砕するには試料は乾燥していることが好ましいが、乾燥状態は限定されない。
【００１０】
本発明で使用するエキナセアは、北米東岸からテキサスにかけて分布するキク科エキナセア属の植物で、学名エキナセア・アングスチフォリア（Ｅｃｈｉｎａｃｅａ ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ）が挙げられる。本植物は古くからインディアンによって、根を噛み砕いた液体が、咳止めや咽喉のただれに効果があるとして用いられ、食経験の長い植物である。しかし、その効果についての作用機構は調べられていなかった。
【００１１】
本発明で使用される抽出試料は、葉をミキサーなどで粉砕したものを用いることが出来る。また、茎や花も抽出試料として含み得る。粉砕するには試料は乾燥していることが好ましいが、乾燥状態は限定されない。
【００１２】
本発明で使用するヘラオオバコは、ヨーロッパ原産でオオバコ科オオバコ属の植物で、学名プランタゴ・ランセオラタ（Ｐｌａｎｔａｇｏ ｌａｎｃｅｏｌａｔａ）が挙げられる。古くから若葉は和え物や天ぷらとして食されたり、干して煎じたものは咳止め、解熱、貧血などの民間薬として使用されてきたが、その効能についての作用機構は調べられていなかった。
【００１３】
本発明で使用するヘラオオバコ試料として、葉をミキサーなどで粉砕したものを用いることが出来る。また、茎や花も抽出試料として含み得る。粉砕するには試料は乾燥していることが好ましいが、乾燥状態は限定されない。
【００１４】
本発明で使用するハマナスはバラ科バラ属の植物で、学名ローザ・ルゴサ（Ｒｏｓａ ｒｕｇｏｓａ）が挙げられる。これまで、収れん作用や胆汁分泌促進作用、α‐グルコシダーゼ阻害活性が知られていたが、ＣＯＸとの関連は明らかにされていなかった（特開２００５−３０６８０１号公報参照）。また、中国では古くから「メイクイ花茶」として飲まれてきており、十分な食経験が知られているものである。
【００１５】
本発明で使用するハマナス試料として、花部及び茎をミキサーなどで粉砕したものを用いることが出来る。粉砕するには試料は乾燥していることが好ましいが、乾燥状態は限定されない。
【００１６】
抽出溶媒としては、有機溶媒または有機溶媒水溶液が用いられる。有機溶媒としては、例えばメタノール、エタノール、プロパノール、ブタノールなどの低級アルコールや酢酸エチルなどのエステル類が挙げられるが、これらに限定されるものではない。また、これらの有機溶媒は単独又は２種類以上を混合して用いても良く、また有機溶媒と水の混合溶媒である有機溶媒水溶液として用いても良い。なお、安全性の点からは、エタノール又はエタノール水溶液で抽出することが好ましい。また、有機溶媒どうしまたは有機溶媒と水とを混合する場合の、各溶媒の比率としては特に限定はない。
【００１７】
抽出方法としては、例えば、前記４種から選ばれる１種以上の植物試料と前記抽出溶媒とを混合し、室温で１−５時間撹拌又は抽出溶媒の煮沸温度で１−５時間還流して抽出を行った後、ろ過や遠心分離などにより抽出液から試料残渣を取り除き、減圧又は限外ろ過により抽出物を濃縮する方法が挙げられる。更に、必要に応じて抽出溶媒を完全に除去して乾固、凍結乾燥などにより乾燥しても良い。
【００１８】
前記のようにして得られるＣＯＸ阻害活性エキスは、ＣＯＸ−１に比べてＣＯＸ−２を選択的に強く阻害するＣＯＸ阻害活性を有する。ここで、ＣＯＸ阻害活性は、後述の実施例に記載の方法で測定される。
【００１９】
なお、仙草、エキナセア、ヘラオオバコ、ハマナスの各１種類の試料から前記の方法で抽出したＣＯＸ阻害活性エキスを、極性の低い有機溶媒で分配した油層（例えば、酢酸エチル層や１−ブタノール層）由来のエキスにＣＯＸ阻害活性が認められ、極性の高い溶媒層（例えば、水層）由来のエキスにはＣＯＸ阻害活性は認められなかった。前記酢酸エチル層や１−ブタノール層によって分配することにより、より精製されたＣＯＸ阻害活性エキスを得ることができる。
【００２０】
本発明のＣＯＸ阻害活性エキスは、ＣＯＸ活性阻害剤として使用することが出来る。従って、本発明は、前記ＣＯＸ阻害活性エキスを含有してなるＣＯＸ活性阻害剤に関する。
【００２１】
前記ＣＯＸ活性阻害剤には、有効成分として前記ＣＯＸ阻害活性エキスを含有しているため、ＣＯＸ−１に比べ、ＣＯＸ−２をより強く阻害することを特徴とするものである。前記ＣＯＸ活性阻害剤は、該エキスによるＣＯＸ阻害活性を損なわなければ、他の成分を混合しても良い。他の成分としては、特に限定は無い。
【００２２】
前記ＣＯＸ阻害活性エキスまたは前記ＣＯＸ活性阻害剤は、各種基材に配合して組成物としても良い。配合量や基材の種類は特に限定されるものではなく、適時設定すれば良い。基材としては、食品、医薬品、医薬部外品などに用いられる物であれば特に限定は無く、例えば経口投与基材としては、錠剤、カプセル、飴、グミ或いは飲料などが挙げられる。これらの各種基材への配合方法としては、食品、医薬品、医薬部外品などの分野の公知の技術を用いて、製造することが出来る。
【実施例】
【００２３】
以下、本発明を実施例により具体的に説明するが、本発明はこれらによって制限されるものではない。
【００２４】
（実施例１）
仙草粉末１０．０ｇに対して１００ｍｌのエタノールを加え、室温で１時間撹拌した。抽出液をろ紙でろ過し、減圧下のロータリーエバポレーターでろ液を濃縮した。１０．０ｇの試料から０．１０ｇの抽出物を得た。抽出物濃度が１０ｍｇ／ｍｌとなるようジメチルスルホキシドに溶解し、以下の実験に用いた。
【００２５】
（試験例１）ＣＯＸ活性阻害試験
カイマン・ケミカル（Ｃａｙｍａｎ ｃｈｅｍｉｃａｌ）社のコックス・インヒビター・スクリーニング・アッセイ（ＣＯＸ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ Ａｓｓａｙ、カタログ番号Ｎｏ．５６０１３１）を用いて試験を行った。
【００２６】
（試料溶液）
試料溶液としては実施例１にて得た仙草抽出物を抽出物濃度が１０、１．０、０．１、０．０１ｍｇ／ｍｌとなるよう、ジメチルスルホキシドにて適宜希釈したものを用いた。対照として、いずれのエキスも含有していないジメチルスルホキシドを陰性対照として用いた。また、陽性対照として、ジメチルスルホキシドにインドメタシン（ＳＩＧＭＡ社製）、「ＮＳ−３９８」（ＣＡＬＢＩＯＣＨＥＭ社製）、イブプロフェン（和光純薬社製）を溶解したものを用いた。
【００２７】
（方法）
酵素液であるＣＯＸ液に、基質であるアラキドン酸を添加し、プロスタグランジンの生成反応を行った（以降、ＣＯＸ反応という）。この時調整した各試料溶液をキットの試験法に従い添加し、プロスタグランジンの生成量への影響を調べた。ＣＯＸ反応によって生成されたプロスタグランジンは酵素免疫測定法（ＥＩＡ法）を利用して定量した。この時、対照として用いられている化合物インドメタシンは、ＣＯＸ−１、ＣＯＸ−２両方の活性を阻害する化合物として知られている。また、ＮＳ−３９８はＣＯＸ−２を特異的に、イブプロフェンはＣＯＸ−１を特異的に阻害する化合物である。（例えば、Ｔｉｍｏｔｈｙ Ｄ．Ｗａｒｎｅｒ．ｅｔ ａｌ． Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（１９９９）；９６：７５６３−６８参照）酵素活性阻害率は対照群に対する各試料溶液のプロスタグランジン産生量から算出した。この結果を用いて各阻害剤のＩＣ５０値（５０％活性阻害を示す阻害剤量）を求めた。結果を表１に示す。
【００２８】
【表１】
【００２９】
表１より、実施例１で得られた本発明品である仙草抽出物にはＣＯＸ−１、ＣＯＸ−２に対して阻害活性が認められた。更に詳しくは、ＮＳ−３９８と同様に、ＣＯＸ−１／ＣＯＸ−２が１．５以上の値を示した。つまり、ＣＯＸ−１に比べてＣＯＸ−２の選択性を認めた。よって、本発明品は炎症時などで発現されるＣＯＸ−２を特異的に抑制する傾向にあることが期待される。
【００３０】
（実施例２）
仙草粉末３０．０ｇに対して３００ｍｌのエタノールを加え、室温で１時間撹拌した。抽出液をろ紙でろ過し、減圧下のロータリーエバポレーターでろ液を濃縮した。３０．０ｇの試料から０．５７ｇの抽出物を得た。
【００３１】
上記の仙草抽出物を水と酢酸エチルを用いて分配を行った。得られた抽出物を酢酸エチル（４０ｍｌ）と水（４０ｍｌ）の混合溶液中で溶解し、静置した後に上層を酢酸エチル画分として回収した。この操作を計３回繰り返し、約１２０ｍｌの酢酸エチル層画分を得た。更にこの溶液画分をロータリーエバポレーターにより乾固し、０．１７ｇの酢酸エチル抽出画分を得た。水層については、更に１‐ブタノールを加え、同様に分配を行い、０．２３ｇの水層抽出画分と０．１５ｇのブタノール層抽出画分を得た。更に、各抽出画分の濃度が１ｍｇ／ｍｌとなるようジメチルスルホキシドに溶解した。
【００３２】
（試験例２）
試験例１と同様の方法で、実施例２で得られた仙草分画エキスのＣＯＸ活性阻害率を算出した。ＣＯＸ−１については、酢酸エチル層（ＡｃＯＥｔ）で９３．０４％、ブタノール層（ＢｕＯＨ）では７１．０６％の阻害が認められたが、水層は陰性対照と同程度であった。同様にＣＯＸ−２についても酢酸エチル層で９６．４２％、ブタノール層で９７．１７％の阻害が認められたが、水層は陰性対照と同程度であった（図１参照）。
【００３３】
（試験例３）
実施例２で得られた仙草分画エキスを１．０，０．１，０．０１ｍｇ／ｍｌとなるよう、ジメチルスルホキシドにて調整した。対照として、インドメタシンをジメチルスルホキシドに溶解したものを用いた。
【００３４】
試験例１と同様の方法で、上記仙草分画エキスのＣＯＸ活性阻害率を算出した。この結果を用いて各阻害剤のＩＣ５０値を求めた。結果を表２に示す。
【００３５】
【表２】
【００３６】
表２より、仙草エキスの酢酸エチル及びブタノール層画分にＣＯＸ−２阻害活性が認められた。また、仙草ブタノール層画分から得られたエキスには、酢酸エチル層画分に比べて、約２．２倍の阻害活性が認められたが、水層画分にはほとんど活性が見られなかった。
【００３７】
（実施例３）
エキナセア粉末１０．０ｇに対して１００ｍｌのエタノールを加え、室温で１時間撹拌した。抽出液をろ紙でろ過し、減圧下のロータリーエバポレーターでろ液を濃縮した。１０．０ｇの試料から０．１３ｇの抽出物を得た。抽出物濃度が１０ｍｇ／ｍｌとなるようジメチルスルホキシドに溶解し、エキナセアエキスとして以下の実験に用いた。
【００３８】
（試験例４）
試験例１と同様の方法で、上記エキナセア分画エキスのＣＯＸ−１及びＣＯＸ−２活性阻害率を算出した。この結果を用いて各阻害剤のＩＣ５０値を求めた。結果を表３に示す。
【００３９】
【表３】
【００４０】
表３より、実施例３で得られた本発明品であるエキナセア抽出物にはＣＯＸ−１、ＣＯＸ−２に対して阻害活性が認められた。更に詳しくは、ＮＳ−３９８と同様に、ＣＯＸ−１／ＣＯＸ−２が１．５以上の値を示した。つまり、ＣＯＸ−１に比べてＣＯＸ−２の選択性を認めた。よって、本発明品は炎症時などで発現されるＣＯＸ−２を特異的に抑制する傾向にあることが期待される。
【００４１】
（実施例４）
エキナセア粉末３０．０ｇに対して３００ｍｌのエタノールを加え、室温で１時間撹拌した。抽出液をろ紙でろ過し、減圧下のロータリーエバポレーターでろ液を濃縮した。３０．０ｇの試料から０．５８ｇの抽出物を得た。
【００４２】
上記のエキナセア抽出物を水と酢酸エチルを用いて分配を行った。得られた抽出物を酢酸エチル（４０ｍｌ）と水（４０ｍｌ）の混合溶液中で溶解し、静置した後に上層を酢酸エチル画分として回収した。この操作を計３回繰り返し、約１２０ｍｌの酢酸エチル層画分を得た。更にこの溶液画分をロータリーエバポレーターにより乾固し、０．２３ｇの酢酸エチル抽出画分を得た。水層については、更に１‐ブタノールを加え、同様に分配を行い、０．１３ｇの水層抽出画分と０．２１ｇのブタノール層抽出画分を得た。更に、各抽出画分の濃度が１ｍｇ／ｍｌとなるようジメチルスルホキシドに溶解した。
【００４３】
（試験例５）
試験例１と同様の方法で、実施例４で得られたエキナセア分画エキスのＣＯＸ活性阻害率を算出した。ＣＯＸ−１については、酢酸エチル層で５８．２７％、ブタノール層では７８．５１％の阻害が認められたが、水層に阻害活性は認められなかった。同様にＣＯＸ−２についても酢酸エチル層で９９．４０％、ブタノール層で９８．１６％の阻害が認められたが、水層は陰性対照と同程度であった（図２参照）。
【００４４】
（試験例６）
実施例４で得られたエキナセア分画エキスを１．０，０．１，０．０１ｍｇ／ｍｌとなるよう、ジメチルスルホキシドにて調整した。対照として、インドメタシンをジメチルスルホキシドに溶解したものを用いた。
【００４５】
試験例１と同様の方法で、上記エキナセア分画エキスのＣＯＸ活性阻害率を算出した。この結果を用いて各阻害剤のＩＣ５０値を求めた。結果を表４に示す。
【００４６】
【表４】
【００４７】
表４より、エキナセアエキスの酢酸エチル層画分およびブタノール層画分にＣＯＸ−２阻害活性が認められた。エキナセアの酢酸エチル層画分から得られたエキスには、ブタノール層画分に比べて、約２．８倍の阻害活性が認められたが、水層画分にはほとんど活性が見られなかった。
【００４８】
（実施例５）
ヘラオオバコ粉末１０．０ｇに対して１００ｍｌのエタノールを加え、室温で１時間撹拌した。抽出液をろ紙でろ過し、減圧下のロータリーエバポレーターで濃縮した。１０．０ｇの試料から０．５０ｇの抽出物を得た。抽出物濃度が１０ｍｇ／ｍｌとなるようジメチルスルホキシドに溶解し、ヘラオオバコエキスとして以下の実験に用いた。
【００４９】
（試験例７）
試験例１と同様の方法で、上記ヘラオオバコ分画エキスのＣＯＸ−１及びＣＯＸ−２活性阻害率を算出した。この結果を用いて各阻害剤のＩＣ５０値を求めた。結果を表５に示す。
【００５０】
【表５】
【００５１】
表５より、実施例５で得られた本発明品であるヘラオオバコ抽出物にはＣＯＸ−１、ＣＯＸ−２に対して阻害活性が認められた。更に詳しくは、ＮＳ−３９８と同様に、ＣＯＸ−１／ＣＯＸ−２が１．５以上の値を示した。つまり、ＣＯＸ−１に比べてＣＯＸ−２の選択性を認めた。よって、本発明品は炎症時などで発現されるＣＯＸ−２を特異的に抑制する傾向にあることが期待される。
【００５２】
（実施例６）
ヘラオオバコ粉末３０．０ｇに対して３００ｍｌのエタノールを加え、室温で１時間撹拌した。抽出液をろ紙でろ過し、減圧下のロータリーエバポレーターでろ液を濃縮した。３０．０ｇの試料から１．２４ｇの抽出物を得た。
【００５３】
上記のヘラオオバコ抽出物を水と酢酸エチルを用いて分配を行った。得られた抽出物を酢酸エチル（４０ｍｌ）と水（４０ｍｌ）の混合溶液中で溶解し、静置した後に上層を酢酸エチル画分として回収した。この操作を計３回繰り返し、約１２０ｍｌの酢酸エチル層画分を得た。更にこの溶液画分をロータリーエバポレーターにより乾固し、０．４０ｇの酢酸エチル抽出画分を得た。水層については、更に１‐ブタノールを加え、同様に分配を行い、０．４９ｇの水層抽出画分と０．３３ｇのブタノール層抽出画分を得た。更に、各抽出画分の濃度が１ｍｇ／ｍｌとなるようジメチルスルホキシドに溶解した。
【００５４】
（試験例８）
試験例１と同様の方法で、実施例６で得られたヘラオオバコ分画エキスのＣＯＸ活性阻害率を算出した。ＣＯＸ−１については、酢酸エチル層で６０．５９％、ブタノール層では３７．０３％の阻害が認められたが、水層は陰性対照と同程度であった。同様にＣＯＸ−２についても酢酸エチル層で９７．８１％、ブタノール層で７８．９７％の阻害が認められたが、水層は陰性対照と同程度であった（図３参照）。
【００５５】
（試験例９）
実施例６で得られたヘラオオバコ分画エキスを１．０，０．１，０．０１ｍｇ／ｍｌとなるよう、ジメチルスルホキシドにて調整した。対照として、インドメタシンをジメチルスルホキシドに溶解したものを用いた。
【００５６】
試験例１と同様の方法で、上記ヘラオオバコ分画エキスのＣＯＸ活性阻害率を算出した。この結果を用いて各阻害剤のＩＣ５０値を求めた。結果を表６に示す。
【００５７】
【表６】
【００５８】
表６より、ヘラオオバコエキスの酢酸エチル層画分およびブタノール層画分にＣＯＸ−２阻害活性が認められた。ヘラオオバコの酢酸エチル層画分から得られたエキスには、ブタノール層画分に比べて、約８．２倍の阻害活性が認められたが、水層画分にはほとんど活性が見られなかった。
【００５９】
（実施例７）
ハマナス粉末１０．０ｇに対して１００ｍｌのエタノールを加え、室温で１時間撹拌した。抽出液をろ紙でろ過し、減圧下のロータリーエバポレーターでろ液を濃縮した。１０．０ｇの試料から０．２２ｇの抽出物を得た。抽出物濃度が１０ｍｇ／ｍｌとなるようジメチルスルホキシドに溶解し、以下の実験に用いた。
【００６０】
（試験例１０）
試験例１と同様の方法で、上記ハマナス分画エキスのＣＯＸ−１及びＣＯＸ−２活性阻害率を算出した。この結果を用いて各阻害剤のＩＣ５０値を求めた。結果を表７に示す。
【００６１】
【表７】
【００６２】
表７より、実施例７で得られた本発明品であるハマナス抽出物にはＣＯＸ−１、ＣＯＸ−２に対して阻害活性が認められた。更に詳しくは、ＮＳ−３９８と同様に、ＣＯＸ−１／ＣＯＸ−２が１．５以上の値を示した。つまり、ＣＯＸ−１に比べてＣＯＸ−２の選択性を認めた。よって、本発明品は炎症時などで発現されるＣＯＸ−２を特異的に抑制する傾向にあることが期待される。
【００６３】
（実施例８）
ハマナス粉末３０．０ｇに対して３００ｍｌのエタノールを加え、室温で１時間撹拌した。抽出液をろ紙でろ過し、減圧下のロータリーエバポレーターで濃縮した。３０．０ｇの試料から１．３６ｇの抽出物を得た。
【００６４】
上記のハマナス抽出物を水と酢酸エチルを用いて分配を行った。得られた抽出物を酢酸エチル（４０ｍｌ）と水（４０ｍｌ）の混合溶液中で溶解し、静置した後に上層を酢酸エチル画分として回収した。この操作を計３回繰り返し、約１２０ｍｌの酢酸エチル層画分を得た。更にこの溶液画分をロータリーエバポレーターにより乾固し、０．８７ｇの酢酸エチル抽出画分を得た。水層については、更に１‐ブタノールを加え、同様に分配を行い、０．２４ｇの水層抽出画分と０．２４ｇのブタノール層抽出画分を得た。更に、各抽出画分の濃度が１ｍｇ／ｍｌとなるようジメチルスルホキシドに溶解した。
【００６５】
（試験例１１）
試験例１と同様の方法で、実施例８で得られたハマナス分画エキスのＣＯＸ活性阻害率を算出した。ＣＯＸ−１については、酢酸エチル層で９６．６６％、ブタノール層では１９．０４％の阻害が認められた。同様にＣＯＸ−２についても酢酸エチル層で９７．１０％、ブタノール層で４３．８１％の阻害が認められた（図４参照）。
【００６６】
（試験例１２）
実施例８で得られたハマナス分画エキスを１．０，０．１，０．０１ｍｇ／ｍｌとなるよう、ジメチルスルホキシドにて調整した。対照として、インドメタシンをジメチルスルホキシドに溶解したものを用いた。
【００６７】
試験例１と同様の方法で、上記ハマナス分画エキスのＣＯＸ活性阻害率を算出した。この結果を用いて各阻害剤のＩＣ５０値を求めた。結果を表８に示す。
【００６８】
【表８】
【００６９】
表８より、ハマナスの酢酸エチル層画分およびブタノール層画分にＣＯＸ−２阻害活性が認められた。ハマナスの酢酸エチル層画分から得られたエキスには、ブタノール層画分に比べて、１７倍以上の阻害活性が認められたが、水層画分にはほとんど活性が見られなかった。
【産業上の利用可能性】
【００７０】
本発明のＣＯＸ活性阻害エキスは、安全性の高いＣＯＸ活性阻害剤、好ましくはＣＯＸ−１に比べてＣＯＸ−２をより強く阻害する安全性の高いＣＯＸ活性阻害剤として好適に使用することが出来る。
【図面の簡単な説明】
【００７１】
【図１】図１は、実施例２の分配操作による仙草の各抽出画分を用いて、試験例１と同様の方法でＣＯＸ活性阻害実験を行い、分析した結果を示すグラフである。縦軸は阻害物を含んでいない場合の活性を１００とし、化合物又は抽出エキスを添加した場合の活性を１００から差し引いた分を阻害率（％）として相対的に表したものである。
【図２】図２は、実施例４の分配操作によるエキナセアの各抽出画分を用いて、試験例１と同様の方法でＣＯＸ活性阻害実験を行い、分析した結果を示すグラフである。縦軸は阻害物を含んでいない場合の活性を１００とし、化合物又は抽出エキスを添加した場合の活性を１００から差し引いた分を阻害率（％）として相対的に表したものである。
【図３】図２は、実施例６の分配操作によるヘラオオバコの各抽出画分を用いて、試験例１と同様の方法でＣＯＸ活性阻害実験を行い、分析した結果を示すグラフである。縦軸は阻害物を含んでいない場合の活性を１００とし、化合物又は抽出エキスを添加した場合の活性を１００から差し引いた分を阻害率（％）として相対的に表したものである。
【図４】図４は、実施例８の分配操作によるハマナスの各抽出画分を用いて、試験例１と同様の方法でＣＯＸ活性阻害実験を行い、分析した結果である。縦軸は阻害物を含んでいない場合の活性を１００とし、化合物又は抽出エキスを添加した場合の活性を１００から差し引いた分を阻害率（％）として相対的に表したものである。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
仙草、エキナセア、ヘラオオバコ、ハマナスから選ばれる１種以上から有機溶媒又は有機溶媒水溶液により抽出して得られ、かつシクロオキシゲナーゼ阻害活性を含有することを特徴とするエキス。
【請求項２】
シクロオキシゲナーゼ１型に比べ、シクロオキシゲナ−ゼ２型をより強く阻害することを特徴とする請求項１記載のエキス。
【請求項３】
請求項１または２記載のエキスを含有してなるシクロオキシゲナーゼ活性阻害剤。
【請求項４】
請求項１もしくは２記載のエキスまたは請求項３記載のシクロオキシゲナーゼ活性阻害剤を含有することを特徴とする組成物。
【請求項１】
仙草、エキナセア、ヘラオオバコ、ハマナスから選ばれる１種以上から有機溶媒又は有機溶媒水溶液により抽出して得られ、かつシクロオキシゲナーゼ阻害活性を含有することを特徴とするエキス。
【請求項２】
シクロオキシゲナーゼ１型に比べ、シクロオキシゲナ−ゼ２型をより強く阻害することを特徴とする請求項１記載のエキス。
【請求項３】
請求項１または２記載のエキスを含有してなるシクロオキシゲナーゼ活性阻害剤。
【請求項４】
請求項１もしくは２記載のエキスまたは請求項３記載のシクロオキシゲナーゼ活性阻害剤を含有することを特徴とする組成物。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図２】
【図３】
【図４】
【公開番号】特開２００７−３２６８３０（Ｐ２００７−３２６８３０Ａ）
【公開日】平成１９年１２月２０日（２００７．１２．２０）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００６−１６０８１２（Ｐ２００６−１６０８１２）
【出願日】平成１８年６月９日（２００６．６．９）
【出願人】（３９００２０１８９）ユーハ味覚糖株式会社 (242)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成１９年１２月２０日（２００７．１２．２０）
【国際特許分類】
【出願日】平成１８年６月９日（２００６．６．９）
【出願人】（３９００２０１８９）ユーハ味覚糖株式会社 (242)
【Ｆターム（参考）】
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