デコイを含む薬学的組成物およびその使用方法
【課題】ＮＦ−κＢまたはｅｔｓに制御される遺伝子の発現に起因する疾患を
処置する薬学的組成物およびその使用方法を提供する。
【解決手段】ＮＦ−κＢまたはｅｔｓに制御される遺伝子の発現に起因する疾
患を治療および予防するための薬学的組成物であって、少なくとも１つのデコイ
、および薬学的に受容可能なキャリアを含む、組成物。本発明者らは、ＮＦ−κＢまたはｅｔｓにより制御される遺伝子の発現に起因する疾患を処置するために、ＮＦ−κＢのデコイ、またはｅｔｓのデコイ、またはＮＦ−κＢとｅｔｓとのキメラ（ダブル）デコイを投与することが有効であることを見出した。
処置する薬学的組成物およびその使用方法を提供する。
【解決手段】ＮＦ−κＢまたはｅｔｓに制御される遺伝子の発現に起因する疾
患を治療および予防するための薬学的組成物であって、少なくとも１つのデコイ
、および薬学的に受容可能なキャリアを含む、組成物。本発明者らは、ＮＦ−κＢまたはｅｔｓにより制御される遺伝子の発現に起因する疾患を処置するために、ＮＦ−κＢのデコイ、またはｅｔｓのデコイ、またはＮＦ−κＢとｅｔｓとのキメラ（ダブル）デコイを投与することが有効であることを見出した。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、染色体上に存在する、転写調節因子が結合する部位と特異的に結合
する化合物（例えば、核酸およびその類似体）を含む組成物およびその使用方法
に関する。より詳細には、本発明は、デコイ化合物を含む組成物およびその使用
方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
喘息、癌、心臓病、動脈瘤、自己免疫疾患およびウイルス感染症などの種々の
疾患は、それぞれ異なる症状を示すにもかかわらず、その大部分は、１種類また
は数種類のタンパク質が、異常発現（過剰発現または過少発現）したことに起因
することが示唆されている。一般に、これらタンパク質の発現は、種々の転写活
性因子および転写抑制遺伝子などの転写調節因子によって制御されている。
【０００３】
ＮＦ−κＢは、ｐ６５とｐ５０のヘテロダイマーからなる転写調節因子である
。ＮＦ−κＢは、通常、その阻害因子ＩκＢが結合した形で細胞質内に存在し、
その核内移行が阻止されている。ところが、何らかの原因で、サイトカイン、虚
血、再灌流などの刺激が加わると、ＩκＢがリン酸化を受けて分解され、それに
よってＮＦ−κＢが活性化されて核内に移行する。核内に移行したＮＦ−κＢは
、染色体上のＮＦ−κＢ結合部位に結合し、その下流にある遺伝子の転写を促進
する。ＮＦ−κＢ結合部位の下流にある遺伝子として、例えば、ＩＬ−１、ＩＬ
−６、ＩＬ−８、腫瘍壊死因子α（ＴＮＦα）などの炎症性サイトカイン類、Ｖ
ＣＡＭ−１、ＩＣＡＭ−１などの接着因子が知られている。
【０００４】
ＮＦ−κＢは、腫瘍悪性度の進行の開始に関与し得る（Ｒａｙｅｔ Ｂら、Ｏ
ｎｃｏｇｅｎｅ １９９９ Ｎｏｖ ２２；１８（４９）６９３８−４７）；Ｎ
Ｆ−κＢは、低酸素症ストレスに対する腫瘍細胞の応答に関与する（Ｒｏｙｄｓ
ＪＡら、Ｍｏｌ Ｐａｔｈｏｌ １９９８ Ａｐｒ；５１（２）：５５−６１
）；ＮＦ−κＢデコイは、慢性関節リウマチ患者由来の滑膜細胞におけるサイト
カインおよび接着分子の発現を阻害する（Ｔｏｍｉｔａ Ｔら、Ｒｈｅｕｍａｔ
ｏｌｏｇｙ（Ｏｘｆｏｒｄ） ２０００ Ｊｕｌ；３９（７）：７４９−５７）
；ＮＦ−κＢを含む複数の転写因子間の協力作用の抑制は、種々の癌の悪性表現
型を変える（Ｄｅｎｈａｒｄｔ ＤＴ、Ｃｒｉｔ Ｒｅｖ Ｏｎｃｏｇ １９９
６；７（３−４）：２６１−９１）；緑茶ポリフェノールによるＮＦ−κＢ活性
のダウンレギュレーションは、一酸化窒素合成酵素の誘導をブロックし、Ａ４３
１ヒト類表皮癌細胞を抑制する（Ｌｉｎ ＪＫら、Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｐｈａｒｍ
ａｃｏｌ １９９９ Ｓｅｐ １５；５８（６）：９１１−５）；アルツハイマ
ー病患者の脳で見られるアミロイドβペプチドは、神経芽腫細胞において、７５
ｋＤ神経栄養因子レセプター（ｐ７５ＮＴＲ）に結合することにより、ＮＦ−κ
Ｂを時間依存性様式および用量依存性様式で活性化する（Ｋｕｐｅｒ Ｐら、Ｊ
Ｎｅｕｒｏｓｃｉ Ｒｅｓ １９９８ Ｄｅｃ １５；５４（６）：７９８−
８０４）；ＮＦ−κＢで活性化されるＴＮＦαは、糸球体腎炎の発症に重要な役
割を演じる（Ａｒｄａｉｌｌｏｕら、Ｂｕｌｌ Ａｃａｄ Ｎａｔｌ Ｍｅｄ
１９９５ Ｊａｎ；１７９（１）１０３−１５）。ＮＦ−κＢデコイは、ＴＮＦ
αで誘導されるマウス腎炎においてサイトカインおよび接着分子の発現をインビ
ボで阻害する（Ｔｏｍｌｔａ Ｎら、Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ ２０００ Ａｕｇ；
７（１５）１３２６−３２）；など。
【０００５】
ＮＦ−κＢは、マトリックスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）のメンバーであ
るＭＭＰ１およびＭＭＰ９を転写レベルで抑制することが示唆された（Ａｍｐｌ
ｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ＩＬ−１ｂｅｔａ−ｉｎｄｕｃｅｄ ｍａｔｒｉｘ
ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ−９ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｂｙ ｓ
ｕｐｅｒｏｘｉｄｅ ｉｎ ｒａｔ ｇｌｏｍｅｒｕｌａｒ ｍｅｓａｎｇｉａ
ｌ ｃｅｌｌｓ ｉｓ ｍｅｄｉａｔｅｄ ｂｙ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ａｃｔ
ｉｖｉｔｉｅｓ ｏｆ ＮＦ−ｋａｐｐａＢ ａｎｄ ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ
ｐｒｏｔｅｉｎ−１ ａｎｄ ｉｎｖｏｌｖｅｓ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ
ｔｈｅ ｍｉｔｏｇｅｎ−ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｋｉｎａｓ
ｅ ｐａｔｈｗａｙｓ． Ｅｂｅｒｈａｒｄｔ Ｗ， Ｈｕｗｉｌｅｒ Ａ，
Ｂｅｃｋ ＫＦ， Ｗａｌｐｅｎ Ｓ， Ｐｆｅｉｌｓｃｈｉｆｔｅｒ Ｊ．
Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２０００ Ｎｏｖ １５、１６５（１０）、５７８８−９
７;Ｎｕｃｌｅａｒ ｆａｃｔｏｒ ｋａｐｐａＢ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｉｓ
ｅｓｓｅｎｔｉａｌ ｆｏｒ ｍａｔｒｉｘ ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａ
ｓｅ−１ ａｎｄ −３ ｕｐｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｉｎ ｒａｂｂｉｔ ｄ
ｅｒｍａｌ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ． Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ｒ
ｅｓ Ｃｏｍｍｕｎ．Ｂｏｎｄ Ｍ，Ｂａｋｅｒ ＡＨ， Ｎｅｗｂｙ ＡＣ．
１９９９ Ｏｃｔ ２２、２６４（２）、５６１−７；Ｓｙｎｅｒｇｉｓｔｉ
ｃ ｕｐｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ−
９ ｂｙ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒｓ ａｎｄ ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ
ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ： ａｎ ａｂｓｏｌｕｔｅ ｒｅｑｕｉｒｅｍｅｎｔ
ｆｏｒ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ ＮＦ−ｋａｐｐａ Ｂ．
Ｂｏｎｄ Ｍ， Ｆａｂｕｎｍｉ ＲＰ， Ｂａｋｅｒ ＡＨ， Ｎｅｗｂｙ
ＡＣ． ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ １９９８ Ｓｅｐ １１、４３５（１）、２９−
３４；およびＬｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ ａｃｔｉｖａｔｅｓ ｍ
ａｔｒｉｘ ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ−２ ｉｎ ｅｎｄｏｔｈｅ
ｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ ｔｈｒｏｕｇｈ ａｎ ＮＦ−ｋａｐｐａＢ−ｄｅｐｅ
ｎｄｅｎｔ ｐａｔｈｗａｙ． Ｋｉｍ Ｈ，Ｋｏｈ Ｇ．Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｂ
ｉｏｐｈｙｓ Ｒｅｓ Ｃｏｍｍｕｎ． ２０００ Ｍａｒ １６、２６９（２
）、４０１−５）。
【０００６】
ＭＭＰは、細胞外マトリックス成分の分解に関与する亜鉛依存性酵素の多遺伝
子ファミリーである。またｅｔｓも、マトリックスメタロプロテイナーゼ（ＭＭ
Ｐ）のメンバーであるＭＭＰ１およびＭＭＰ９を転写レベルで抑制することが知
られている（Ｓｉｇｎａｌ ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｔｒａｎｓｃ
ｒｉｐｔｉｏｎａｌ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ
． Ｓａｔｏ Ｙ，Ａｂｅ Ｍ，Ｔａｎａｋａ Ｋ，Ｉｗａｓａｋａ Ｃ，Ｏｄ
ａ Ｎ，Ｋａｎｎｏ Ｓ，Ｏｉｋａｗａ Ｍ，Ｎａｋａｎｏ Ｔ，Ｉｇａｒａｓ
ｈｉ Ｔ．Ａｄｖ Ｅｘｐ Ｍｅｄ Ｂｉｏｌ ２０００、４７６、１０９−１
５；およびＥＴＳ−１ ｃｏｎｖｅｒｔｓ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌ
ｓ ｔｏ ｔｈｅ ａｎｇｉｏｇｅｎｉｃ ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ ｂｙ ｉｎｄ
ｕｃｉｎｇ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｍａｔｒｉｘ ｍｅｔａｌ
ｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅｓ ａｎｄ ｉｎｔｅｇｒｉｎ ｂｅｔａ３．Ｏｄａ
Ｎ，Ａｂｅ Ｍ，Ｓａｔｏ Ｙ．Ｊ Ｃｅｌｌ Ｐｈｙｓｉｏｌ １９９９
Ｆｅｂ、１７８（２）、１２１−３２）。
【０００７】
ＭＭＰは、細胞外マトリックスタンパク質の分解を仲介することにより癌細胞
侵入において重要な役割を果たす。多くの癌研究によって、ＭＭＰのインヒビタ
ー（ＴＩＭＰなど）が、癌の進行を抑制することが示唆されている：血清中のＴ
ＩＭＰ１レベルは、結腸直腸の予後および診断マーカーとなり、そして転移性癌
の選択的マーカーとして用い得る（Ｐｅｌｌｅｇｒｉｎｌ Ｐら、Ｃａｎｃｅｒ
Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ ２０００ Ｓｅｐ；４９（７）：３
８８−９４）；ヒト膀胱癌細胞中のＭＭＰ２およびＭＭＰ９の発現および活性は
、腫瘍壊死因子αとγインターフェロンの影響を受ける（Ｓｈｉｎ ＫＹら、Ｃ
ａｎｃｅｒ Ｌｅｔｔ ２０００ Ｏｃｔ ３１；１５９（２）：１２７−１３
４）；卵巣上皮腫瘍で、ＭＭＰ２、ＭＭＰ９、ＭＴ１−ＭＭＰ、およびそれらの
インヒビターＴＩＭＰ１、ＴＩＭＰ２が発現する（ＳａｋａｔａＫら、Ｉｎｔ
Ｊ Ｏｎｃｏｌ ２０００ Ｏｃｔ；１７（４）：６７３−６８１）；ＭＭＰ
１、ＭＭＰ２、ＭＭＰ３およびＭＭＰ９の各々のレベルおよび総ＭＭＰ活性は、
結腸直腸腫瘍でアップレギュレートし、ＭＭＰ１が結腸直腸癌進行に最も重要で
ある（Ｂａｋｅｒ ＥＡら、Ｂｒ Ｊ Ｓｕｒｇ ２０００ Ｓｅｐ；８７（９
）：１２１５−１２２１）；活性化されたＭＭＰ２が、尿路上皮癌の浸潤に重要
な役割を演じ、しかも活性化されたＭＭＰ２発現のレベルが有用な予後指標とな
る（Ｋａｎｅｄａ Ｋら、ＢＪＵ Ｉｎｔ ２０００ Ｓｅｐ；８６（４）：５
５３−５５７）；プロスタグランジン合成のインヒビターが、ヒト前立腺腫瘍細
胞浸潤を阻害し、かつＭＭＰの放出を低減する（Ａｔｔｉｇａ ＦＡら、Ｃａｎ
ｃｅｒ Ｒｅｓ ２０００ Ａｕｇ １５；６０（１６）：４６２９−３７）；
血清真性グロブリン画分中のＭＭＰ活性が、乳癌および肺癌患者で増加し、これ
ら癌の腫瘍マーカーとして用い得る（Ｆａｒｉａｓ Ｅら、Ｉｎｔ Ｊ Ｃａｎ
ｃｅｒ ２０００ Ｊｕｌ ２０；８９（４）：３８９−９４）；ＭＭＰインヒ
ビターは、腫瘍細胞におけるゼラチン分解活性を阻害する（Ｉｋｅｄａ Ｍら、
Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ２０００ Ａｕｇ；６（８）：３２９０−６
）；膜タンパク質ＬＭＰ１によるＭＭＰ９の誘導が、鼻咽頭癌（ＮＰＣ）の転移
性に寄与する（Ｈｏｒｉｋａｗａ Ｔら、Ｃａｎｅｒ ２０００ Ａｕｇ １５
；８９（４）：７１５−２３）；ＭＭＰは、血管形成の初期に重要な役割を演じ
、ＭＭＰインヒビターがヒト微小血管内皮細胞浸潤および形態形成を抑制する（
Ｊｉａ ＭＣら、Ａｄｖ Ｅｘｐ Ｍｅｄ Ｂｉｏｌ ２０００；４７６：１８
１−９４）；浸潤性および再発性下垂体腺腫および下垂体癌においてＭＭＰ９が
発現する（Ｔｕｒｎｅｒ ＨＥら、Ｊ Ｃｌｉｎ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ Ｍｅ
ｔａｂ ２０００ Ａｕｇ；８５（８）：２９３１−５）；など。
【０００８】
ＭＭＰはまた、大動脈瘤の進展に関与することが知られている：ＭＭＰは、脳
動脈瘤形成および破壊に関与する（Ｇａｅｔａｎｉ Ｐら、Ｎｅｕｒｏｌ Ｒｅ
ｓ １９９９ Ｊｕｎ；２１（４）：３８５−９０）；ＭＭＰ−９の活性上昇は
、脳動脈瘤のリスクファクターである（Ｐｅｔｅｒｓ ＤＧは、Ｓｔｒｏｋｅ
１９９９ Ｄｅｃ；３０（１２）：２６１２−６）；ＭＭＰの阻害は、動脈瘤モ
デルにおいて、小動脈瘤の成長の阻害をもたらす（Ｔｒｅｈａｒｎｅ ＧＤは、
Ｂｒ Ｊ Ｓｕｒｇ １９９９ Ａｕｇ；８６（８）：１０５３−８）；など。
【０００９】
ＭＭＰは、遊走血管平滑筋細胞、マクロファージなどから分泌され、血管壁に
存在するコラーゲン、エラスチンを破壊し、これによって血管の緊張が失われ、
血圧に抵抗しきれずに血管径は拡張する。事実、動脈瘤の血管では、顕著なエラ
スチンの破壊が認められる（Ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ ｏｆ ａｎｅｕｒｙｓ
ｍｓ． Ｈａｌｌｏｒａｎ ＢＧ， Ｂａｘｔｅｒ ＢＴ． Ｓｅｍｉｎ Ｖａ
ｓｃ Ｓｕｒｇ １９９５ Ｊｕｎ；８（２）：８５−９２）。
【００１０】
大動脈瘤破裂はほとんどが死に至る。大動脈瘤破裂を防ぐためには、動脈硬化
の危険因子を抑制することが重要である。しかし、このような危険因子の抑制を
完全に行うことは困難である。現在、大動脈瘤破裂を回避する手段は、侵襲的な
手術によるほかない。
【００１１】
３５才から８０才までの成人男性の大動脈径を測定したデータ（Ａｂｄｏｍｉ
ｎａｌ Ａｏｒｔｉｃ Ａｎｅｕｒｙｓｍｓ． Ｄｏｌｏｒｅｓ Ｊ Ｋａｔｚ
， Ｊａｍｅｓ Ｃ． Ｓｔａｎｌｅｙ， Ｇｅｒａｌｄ Ｂ． Ｚｅｌｅｎｏ
ｃｋ． Ｓｅｍｉｎａｒｓ ｉｎ Ｖａｓｃｕｌａｒ Ｓｕｒｇｅｒｙ， ｖｏ
ｌ ８，Ｎｏ４（Ｄｅｃ），１９９５；ｐｐ２８９−２９８）によると、その平
均は１．５ｃｍ〜２．０ｃｍであった。一般に、大動脈径が、平均値の１．５倍
を超えると大動脈瘤と判断されるが、上記データによれば、直径３ｃｍ以上の瘤
を有し、大動脈瘤と判断されるヒトは、４００人に１人の割合で存在していた。
従って、大動脈破裂の危険度は別にして、３５才から８０才までの成人男性にお
いて大動脈瘤の有病率はかなり高く、６５才以上の高齢者においては有病率はさ
らに大きくなると考えらている。
【００１２】
ＭＭＰはまた、慢性関節リウマチに関与することが知られている：薬剤処理に
よる慢性関節リウマチの改善は、滑膜組織中のＭＭＰ１の減少をもたらす（Ｋｒ
ａａｎ ＭＣら、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｈｅｕｍ ２０００ Ａｕｇ；４３（
８）：１８２０−３０）；ＩＬ−１βによるＭＴ−ＭＭＰ発現のアップレギュレ
ーションは、ＭＭＰ−２活性化を部分的に誘導し、慢性関節リウマチにおけるサ
イトカイン媒介関節破壊をもたらす（Ｏｒｉｇｕｃｈｉ Ｔら、Ｃｌｉｎ Ｅｘ
ｐ Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ ２０００ Ｍａｙ−Ｊｕｎ；１８（３）：３３３−９
）；慢性関節リウマチ滑膜により産生される炎症性サイトカインＩＬ−１７は、
ＭＭＰ１の産生を増加する（Ｃｈａｂａｕｄ Ｍら、Ｃｙｔｏｋｉｎｅ ２００
０ Ｊｕｌ；１２（７）：１０９２−９）；ＭＭＰ１、ＭＭＰ２、ＭＭＰ３、Ｍ
ＭＰ８、ＭＭＰ９およびＭＭＰインヒビターは、慢性関節リウマチ滑液中に高レ
ベルで存在し、ＭＭＰ類が活性化されるとＭＭＰインヒビターとのバランスが崩
れ、軟骨破壊に至る（Ｙｏｓｈｉｈａｒａ Ｙら、Ａｎｎ Ｒｈｅｕｍ Ｄｉｓ
２０００ Ｊｕｎ；５９（６）：４５５−６１）；ＭＴ１−ＭＭＰは、リウマ
チ滑膜ライニング細胞層中のプロＭＭＰ−２の活性化に関与し、慢性関節リウマ
チにおける軟骨破壊をもたらす（Ｙａｍａｎａｋａ Ｈら、Ｌａｂ Ｉｎｖｅｓ
ｔ ２０００ Ｍａｙ；８０（５）：６７７−８７）；など。
【００１３】
ＭＭＰはまた、マルファン症候群における心血管病変に関与する（Ｓｅｇｕｒ
ａ ＡＭら、Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ １９９８ Ｎｏｖ １０；９８（１９
Ｓｕｐｐｌ）：１１３３１−７）。
【００１４】
膜タイプ−ＭＭＰ（ＭＴ−ＭＭＰ）の発現は、メサンギウム増殖性糸球体腎炎
で増加する（Ｈａｙａｓｈｉ Ｋら、Ｊ Ａｍ Ｓｏｃ Ｎｅｐｈｒｏｌ １９
９８ Ｄｅｃ；９（１２）：２２６２−７１）。
【００１５】
ＭＭＰインヒビターは、ラット腹部大動脈瘤モデルにおいて、血管径の拡張を
抑制することが報告されている（Ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｅｘｐｅｒｉ
ｍｅｎｔａｌ ａｂｄｏｍｉｎａｌ ａｏｒｔｉｃ ａｎｅｕｒｙｓｍｓ ｂｙ
ｓｙｓｔｅｍｉｃ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｗｉｔｈ ａ ｈｙｄｒｏｘａｍａ
ｔｅ−ｂａｓｅｄ ｍａｔｒｉｘ ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ ｉｎ
ｈｉｂｉｔｏｒ （ＲＳ １３２９０８）． Ｍｏｏｒｅ Ｇ， Ｌｉａｏ Ｓ
， Ｃｕｒｃｉ ＪＡ， Ｓｔａｒｃｈｅｒ ＢＣ， Ｍａｒｔｉｎ ＲＬ，
Ｈｅｎｄｒｉｃｋｓ ＲＴ， Ｃｈｅｎ ＪＪ， Ｔｈｏｍｐｓｏｎ ＲＷ．
Ｊ Ｖａｓｃ Ｓｕｒｇ． １９９９ Ｍａｒ；２９（３）：５２２−３２）。
【００１６】
ＭＭＰインヒビターはまた、糸球体腎炎の治療に用いられ得る（Ｍａｒｔｉ
ＨＰ、Ｓｃｈｗｅｉｚ Ｍｅｄ Ｗｏｃｈｅｎｓｃｈｒ ２０００ Ｍａｙ ２
７；１３０（２１）；７８４−８）。しかし、ＭＭＰインヒビターの全身投与は
、重篤な副作用を生じ、上記種々の疾患の処置（治療および予防）するための臨
床適用は困難である。
【００１７】
このように、ＮＦ−κＢは、その転写制御下にある、多くの遺伝子の発現を介
して、種々の疾患に関与することが示唆されているが、このような疾患を有効に
処置する方法、特に非侵襲的処置法は提供されていない。特に、大動脈瘤は、上
記のように稀ではない疾患であり、高齢化社会にともなう動脈硬化性疾患の増加
は、当然大動脈瘤疾患の増加をもたらす。患者の高齢化を考慮した場合、薬剤に
より大動脈瘤の増長を直接抑制できれば理想的であるが、現在のところその手段
はなく、大動脈瘤の低侵襲的な治療および予防法の開発が切望されている。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１８】
本発明は、ＮＦ−κＢまたはｅｔｓによって制御される遺伝子の発現に起因す
る上記種々の疾患を処置するために適した組成物およびその使用法を提供する。
【課題を解決するための手段】
【００１９】
本発明は、ＮＦ−κＢデコイ、ｅｔｓデコイ、またはＮＦ−κＢとｅｔｓとの
キメラ（ダブル）デコイを主成分として含有し、ＮＦ−κＢまたはｅｔｓにより
制御される遺伝子の発現に起因する種々の疾患を処置（治療および予防）するた
めの組成物および該疾患の処置方法を提供する。
【００２０】
本発明者らは、ＮＦ−κＢまたはｅｔｓにより制御される遺伝子の発現に起因
する疾患を処置するために、ＮＦ−κＢのデコイ、またはｅｔｓのデコイ、また
はＮＦ−κＢとｅｔｓとのキメラ（ダブル）デコイを投与することが有効である
ことを見出し、本発明を完成するに至った。
【００２１】
本発明は、ＮＦ−κＢまたはｅｔｓに制御される遺伝子の発現に起因する疾患
を治療および予防するための薬学的組成物に関し、この組成物は、少なくとも１
つのデコイ、および薬学的に受容可能なキャリアを含む。
【００２２】
好ましくは、上記少なくとも１つのデコイは、ＮＦ−κＢのデコイまたはｅｓ
ｔのデコイ、そしてより好ましくはＮＦ−κＢとｅｓｔとのキメラ（ダブル）デ
コイである。
【００２３】
好ましくは、上記疾患は、大動脈瘤、脳動脈瘤、癌、マルファン症候群、大動
脈解離、血管形成術後再狭窄、慢性関節リウマチ、喘息、アトピー性皮膚炎、腎
炎、腎不全またはプラークラプチャーである。
【００２４】
好ましくは、上記薬学的に受容可能なキャリアは親水性ポリマーである。
【発明の効果】
【００２５】
ＮＦ−κＢまたはｅｔｓに制御される遺伝子の発現に起因する疾患を処置する
薬学的組成物およびそれに用いるキャリアーが提供される。本発明の薬学的組成
物の局所投与は、非侵襲的であって、繰り返し可能な治療方法を提供する。
【図面の簡単な説明】
【００２６】
【図１】ヒト大動脈最拡張部の光学顕微鏡写真である。
【図２】ヒト大動脈最拡張部の光学顕微鏡写真である。
【図３】ヒト大動脈最拡張部の光学顕微鏡写真である。
【図４】本発明の薬学的組成物を用いた試験結果を示す図である。
【図５】本発明の薬学的組成物を用いた試験結果を示す図である。
【図６】本発明の薬学的組成物を用いた試験結果を示す図である。
【図７】本発明の薬学的組成物を用いた試験結果を示す図である。
【図８】本発明の薬学的組成物を用いた試験結果を示すラットの腹部大動脈壁の断面の蛍光顕微鏡写真である。
【図９】本発明の薬学的組成物を用いた試験結果を示すラットの腹部大動脈壁の断面の蛍光顕微鏡写真である。
【図１０】本発明の薬学的組成物を用いた試験結果を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００２７】
本発明で用いられる用語「デコイ」または「デコイ化合物」は、ＮＦ−κＢま
たはｅｔｓが結合する染色体上の部位、あるいはＮＦ−κＢまたはｅｔｓに制御
される遺伝子の他の転写調節因子が結合する染色体上の部位（以下標的結合部位
という）に結合し、ＮＦ−κＢまたはｅｔｓまたはその他の転写因子と、これら
の標的結合部位への結合について拮抗する化合物をいう。代表的には、デコイま
たはデコイ化合物は、核酸およびその類似体である。
【００２８】
デコイが核内に存在する場合、転写調節因子の標的結合部位への結合について
、デコイが転写調節因子と競合し、その結果、転写調節因子の標的結合部位への
結合によってもたらされる生物学的機能が阻害される。デコイは、標的結合配列
に結合し得る核酸配列を少なくとも１つ含む。標的結合配列への結合活性を有す
る限り、デコイは、本発明の薬学的組成物の調製に用いることができる。
【００２９】
好ましいデコイの例として、５’−ＣＣＴ−ＴＧＡ−ＡＧＧ−ＧＡＴ−ＴＴＣ
−ＣＣＴ−ＣＣ−３’（配列番号１）（ＮＦ−κＢデコイ）、もしくは５’−Ａ
ＡＴ−ＴＣＡ−ＣＣＧ−ＧＡＡ−ＧＴＡ−ＴＴＣ−ＧＡ−３’（配列番号３）（
ｅｔｓデコイ）、もしくは５’−ＡＣＣ−ＧＧＡ−ＡＧＴ−ＡＴＧ−ＡＧＧ−Ｇ
ＡＴ−ＴＴＣ−ＣＣＴ−ＣＣ−３’（配列番号５）（ＮＦ−κＢとｅｔｓのキメ
ラ（ダブル）デコイ）、またはこれらの相補体を含むオリゴヌクレオチド、これ
らの変異体、またはこれらを分子内に含む化合物が挙げられる。オリゴヌクレオ
チドは、ＤＮＡでもＲＮＡでもよく、またはそのオリゴヌクレオチド内に核酸修
飾体および／または擬核酸を含むものであってもよい。また、これらのオリゴヌ
クレオチド、その変異体、またはこれらを分子内に含む化合物は、１本鎖でも２
本鎖であってもよく、線状であっても環状であっもよい。変異体とは上記配列の
一部が、変異、置換、挿入、欠失しているもので、ＮＦ−κＢまたはＮＦ−κＢ
に制御される遺伝子のその他の転写調節因子が結合する核酸結合部位と特異的に
拮抗する核酸を示す。さらに好ましいＮＦ−κＢまたはｅｔｓ、あるいはＮＦ−
κＢに制御される遺伝子のその他の転写調節因子のデコイとしては、上記核酸配
列を１つまたは複数含む２本鎖オリゴヌクレオチドまたはその変異体が挙げられ
る。上記核酸配列を１つまたは複数含む核酸は、含まれる核酸配列の数を示すた
めに、含まれる核酸配列が２つの場合キメラ（タブル）デコイと称され、そして
３つの場合トリプルデコイなどと称され得る。
【００３０】
本発明で用いられるオリゴヌクレオチドは、リン酸ジエステル結合部の酸素原
子をイオウ原子で置換したチオリン酸ジエステル結合をもつオリゴヌクレオチド
（Ｓ−オリゴ）、またはリン酸ジエステル結合を電荷をもたないメチルホスフェ
ート基で置換したオリゴヌクレオチド等、生体内でオリゴヌクレオチドが分解を
受けにくくするために改変したオリゴヌクリオチド等が含まれる。
【００３１】
本発明で用いられるデコイの製造方法としては、当該分野で公知の化学合成法
または生化学的合成法を用いることができる。例えば、デコイ化合物として核酸
を用いる場合、遺伝子工学で一般的に用いられる核酸合成法を用いることができ
、例えば、ＤＮＡ合成装置を用いて目的のデコイ核酸を直接合成してもよいし、
またはこれらの核酸、それを含む核酸またはその一部を合成した後、ＰＣＲ法ま
たはクローニングベクター等を用いて増幅してもよい。さらに、これらの方法に
より得られた核酸を、制限酵素等を用いて切断し、ＤＮＡリガーゼ等を用いて結
合等を行い、目的とする核酸を製造してもよい。また、さらに細胞内でより安定
なデコイ核酸を得るために、核酸の塩基、糖、リン酸部分に、例えば、アルキル
化、アシル化等の化学修飾を施してもよい。
【００３２】
本発明は、上記のデコイ化合物を単独で、または安定化化合物、希釈剤、担体
、または別の成分または薬剤のような他の薬剤と組み合わせて含む薬学的組成物
を提供する。
【００３３】
本発明の薬学的組成物は、デコイが患部の細胞内または目的とする組織の細胞
内に取り込まれるような形態で用いられる。
【００３４】
本発明の薬学的組成物は、任意の無菌生体適合性薬学的キャリアー（生理食塩
水、緩衝化生理食塩水、デキストロース、および水を含むが、それらに限定され
ない）中で投与され得る。これらの分子のいずれも、適切な賦形剤、アジュバン
ト、および／または薬学的に受容可能なキャリアーと混合する薬学的組成物中に
て、単独で、あるいは他の薬剤と組み合わせて患者に投与され得る。本発明の実
施態様において、薬学的に受容可能なキャリアーは薬学的に不活性である。
【００３５】
本発明の薬学的組成物の投与は、経口または非経口により達成される。非経口
送達の方法としては、局所、動脈内（例えば、腫瘍、動脈瘤に直接）、筋肉内、
皮下、髄内、クモ膜下腔内、脳室内、静脈内、腹腔内、または鼻孔内の投与が挙
げられる。デコイ化合物に加えて、これらの薬学的組成物は、賦形剤または薬学
的に使用できる製剤を調製するために、デコイ化合物のプロセシングを促進する
他の化合物を含む、適切な、薬学的に受容可能なキャリアーを含み得る。処方お
よび投与のための技術のさらなる詳細は、例えば、「ＲＥＭＩＮＧＴＯＮ’Ｓ
ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ ＳＣＩＥＮＣＥＳ」 （Ｍａａｃｋ Ｐｕｂｌ
ｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ）の最終版に記載されている。
【００３６】
経口投与のための薬学的組成物は、投与に適した投与形において当該分野で周
知の薬学的に受容可能なキャリアを用いて処方され得る。このようなキャリアは
、薬学的組成物が患者による摂取に適した錠剤、丸剤、糖衣剤、カプセル、液体
、ゲル、シロップ、スラリー、懸濁物などに処方されることを可能とする。
【００３７】
経口使用のための薬学的組成物は、活性化合物を固体賦形剤と組合せ、所望に
より得られた混合物を粉砕し、所望ならば、錠剤または糖衣剤のコアを得るため
に、適切なさらなる化合物を添加した後、顆粒の混合物をプロセシングすること
を介して得られ得る。適切な賦形剤は炭水化物またはタンパク質充填剤であり、
以下を含むが、それらに限定されない：ラクトース、スクロース、マンニトール
、またはソルビトールを含む糖；トウモロコシ、コムギ、イネ、ジャガイモ、ま
たは他の植物由来のデンプン；メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセ
ルロース、またはカルボキシメチルセルロースナトリウムのようなセルロース；
ならびにアラビアゴムおよびトラガカントゴムを含むゴム；ならびにゼラチンお
よびコラーゲンのようなタンパク質。所望ならば、架橋されたポリビニルピロリ
ドン、寒天、アルギン酸またはその塩（例えば、アルギン酸ナトリウム）のよう
な崩壊剤または可溶化剤が添加され得る。
【００３８】
糖衣剤コアは、濃縮糖溶液のような適切なコーティングとともに提供される。
これはまた、アラビアガム、タルク、ポリビニルピロリドン、カルボポルゲル、
ポリエチレングリコール、および／または二酸化チタン、ラツカー溶液、および
適切な有機溶媒または溶媒混合液をも含有し得る。製品同定のため、または活性
化合物の量（すなわち用量）を特徴付けるために、染料または色素が錠剤または
糖衣剤に添加され得る。
【００３９】
経口で使用され得る薬学的製剤は、例えば、ゼラチンカプセル、ゼラチンおよ
びコーティング（例えば、グリセロールまたはソルビトール）よりなるソフト封
着カプセルを含む。ゼラチンカプセルは、ラクトースまたは澱粉のような充填剤
またはバインダー、タルクまたはステアリン酸マグネシウムのような潤滑剤、お
よび所望により安定化剤と混合した活性な成分を含有し得る。ソフトカプセルで
は、デコイ化合物は、安定化剤とともにまたはともなわずに、脂肪油、流動パラ
フィンまたは液状ポリエチレングリコールのような適切な液体に溶解または懸濁
され得る。
【００４０】
非経口投与用の薬学的製剤は活性化合物の水溶液を含む。注射のために、本発
明の薬学的組成物は水溶液、好ましくはハンクスの溶液、リンゲル溶液、または
緩衝化生理食塩水のような生理学的に適合する緩衝液中に処方され得る。水性注
射懸濁物は、懸濁物の粘度を増加させる物質（例えば、ナトリウムカルボキシメ
チルセルロース、ソルビトール、またはデキストラン）を含有し得る。さらに、
活性化合物の懸濁物は、適切な油状注射懸濁物として調製され得る。適切な親油
性溶媒またはビヒクルは、ゴマ油のような脂肪酸、あるいはオレイン酸エチルま
たはトリグリセリドのような合成脂肪酸エステル、またはリポソームを含む。所
望により、懸濁物は、高濃度溶液の製剤を可能にする安定化剤または化合物の溶
解度を増加させる適切な薬剤または試薬を含有し得る。
【００４１】
局所または鼻孔投与のために、浸透されるべき特定のバリアに対して適切な浸
透剤が製剤中で使用される。このような浸透剤は一般に当該分野で公知である。
【００４２】
本発明の薬学的組成物は、当該分野で公知の様式と同様の様式（例えば、従来
的な混合、溶解、顆粒化、糖衣剤作製、水簸、乳化、カプセル化、包括、または
凍結乾燥の手段によって）で製造され得る。
【００４３】
好ましくは、患部の細胞または目的とする組織の細胞内に局所投与する場合、
本発明の薬学的組成物は、キャリアとして合成または天然の親水性ポリマーを含
み有る。このような親水性ポリマーの例として、ヒドロキシプロピルセルロース
、ポリエチレングリコールが挙げられる。本発明のデコイ化合物を、適切な溶媒
中のこのような親水性ポリマーと混合し、溶媒を、風乾などの方法により除去し
て、所望の形態、例えば、シート状に成型した後、標的部位に付与し得る。この
ような親水性ポリマーを含む製剤は、水分含量が少ないので、保存性に優れ、使
用の際には、水分を吸収してゲル状になるので、デコイ化合物の貯留性に優れる
。
このようなシートは上記の組成以外にも類似物として、セルロース、デンプン及
びその誘導体あるいは合成高分子化合物などに多価アルコールを混合し硬度を調
整して形成した親水性シートも利用できる。
【００４４】
このようなシートは、例えば、腹腔鏡技術を用いて、腹腔鏡下で標的部位に付
与され得る。現在、腹腔鏡手術は、非侵襲手法として目覚しく発展し、本発明の
薬学的組成物と組み合わせることにより、非侵襲的であって、繰り返し治療が可
能な疾患の処置法が提供され得る。
【００４５】
あるいは、デコイとして核酸またはその修飾体を用いる場合には、本発明の薬
学的組成物は、一般に用いられている遺伝子導入法で用いられる形態、例えば、
センダイウイルス等を用いた膜融合リポソーム製剤や、エンドサイトーシスを利
用するリポソーム製剤等のリポソーム製剤、リポフェクトアミン（ライフテック
オリエンタル社製）等のカチオン性脂質を含有する製剤、またはレトロウイルス
ベクター、アデノウイルスベクター等を用いるウイルス製剤を用いるのが有利で
あり、特に、膜融合リポソーム製剤が好適である。
【００４６】
リポソーム製剤は、そのリポソーム構造体が、大きな１枚膜リポソーム（ＬＵ
Ｖ）、多重膜リポソーム（ＭＬＶ）、小さな一枚膜リポソーム（ＳＵＶ）のいず
れであってもよい。その大きさも、ＬＵＶでは２００から１０００ｎｍ、ＭＬＶ
では４００〜３５００ｎｍ、ＳＵＶでは２０〜５０ｎｍ程度の粒子系をとり得る
が、センダイウイルス等を用いる膜融合リポソーム製剤の場合は粒子系２００〜
１０００ｎｍのＭＬＶを用いるのが好ましい。
【００４７】
リポソームの製造方法は、デコイが保持されるものであれば特に限定されるも
のではなく、慣用の方法、例えば、逆相蒸発法（Ｓｚｏｋａ、Ｆら、Ｂｉｏｃｈ
ｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ、Ｖｏｌ．６０１ ５５９（１９８０））、エ
ーテル注入法（Ｄｅａｍｅｒ、Ｄ．Ｗ．：Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．
，Ｖｏｌ．３０８ ２５０（１９７８））、界面活性剤法（Ｂｒｕｎｎｅｒ，Ｊ
ら：Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ，Ｖｏｌ．４５５ ３２２（１
９７６））等を用いて製造することができる。
【００４８】
リポソーム構造を形成するための脂質としては、リン脂質、コレステロール類
や窒素脂質等が用いられるが、一般に、リン脂質が好適であり、ホスファチジル
コリン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジル
イノシトール、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジン酸、カルジオ
リピン、スフィンゴミエリン、卵黄レシチン、大豆レシチン、リゾレシチン等の
天然リン脂質、あるいはこれらを定法に従って水素添加したものの他、ジセチル
ホスフェート、ジステアロイルホスファチジルコリン、ジパルミトイルホスファ
チジルコリン、ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン、ジパルミトイ
ルホスファチジルセリン、エレオステアロイルホスファチジルコリン、エレオス
テアロイルホスファチジルエタノールアミン、エレオステアロイルホスファチジ
ルセリン等の合成リン脂質を用いることができる。
【００４９】
これらのリン脂質を含む脂質類は単独で用いることができるが，２種以上を併
用することも可能である。このとき、エタノールアミンやコリン等の陽性基をも
つ原子団を分子内にもつものを用いることにより、電気的に陰性のデコイ核酸の
結合率を増加させることもできる。これらリポソーム形成時の主要リン脂質の他
に一般にリポソーム形成用添加剤として知られるコレステロール類、ステアリル
アミン、α−トコフェロール等の添加剤を用いることもできる。
【００５０】
このようにして得られるリポソームには、患部の細胞または目的とする組織の
細胞内への取り込みを促進するために、膜融合促進物質、例えば、センダイウイ
ルス、不活化センダイウイルス、センダウイルスから精製された膜融合促進タン
パク質、ポリエチレングルコール等を添加することができる。
【００５１】
リポソーム製剤の製造法の例を具体的に説明すると、例えば、前記したリポソ
ーム形成物質を、コレステロールとともにテトラヒドロフラン、クロロホルム、
エタノール等の有機溶媒に溶解し、これを適切な容器に入れて減圧下に溶媒を留
去して容器内面にリポソーム形成物質の膜を形成する。これにデコイを含有する
緩衝液を加えて攪拌し、得られたリポソームにさらに所望により前記の膜融合促
進物質を添加した後、リポソームを単離する。こりようにして得られるデコイを
含有するリポソームは適当な溶媒中に懸濁させるか、または一旦凍結乾燥したも
のを、適当な溶媒に再分散させて治療に用いることができる。膜融合促進物質は
リポソーム単離後、使用までの間に添加してもよい。
【００５２】
本発明の薬学的組成物は、デコイ化合物が意図される目的を達成するのに有効
な量で含有される組成物を含む。「治療的有効量」または「薬理学的有効量」は
当業者に十分に認識される用語であり、意図される薬理学的結果を生じるために
有効な薬剤の量をいう。従って、治療的有効量は、処置されるべき疾患の徴候を
軽減するのに十分な量である。所定の適用のための有効量（例えば、治療的有効
量）を確認する１つの有用なアッセイは、標的疾患の回復の程度を測定すること
である。実際に投与される量は、処置が適用されるべき個体に依存し、好ましく
は、所望の効果が顕著な副作用をともなうことなく達成されるように最適化され
た量である。治療的有効用量の決定は十分に当業者の能力内にある。
【００５３】
いずれの化合物についても、治療的有効用量は、細胞培養アッセイまたは任意
の適切な動物モデルのいずれかにおいて、最初に見積もられ得る。動物モデルは
また、所望の濃度範囲および投与経路を達成するために用いられる。次いで、こ
のような情報を用いて、ヒトにおける投与に有用な用量および経路を決定するこ
とができる。
【００５４】
治療的有効量とは、疾患の徴候または状態を軽減するデコイ化合物の量をいう
。このような化合物の治療効果および毒性は、細胞培養または実験動物における
標準的な薬学的手順（例えば、ＥＤ50、集団の５０％において治療的に有効な用
量；およびＬＤ50、集団の５０％に対して致死的である用量）によって決定され
得る。治療効果と毒性効果との間の用量比は治療係数であり、それは比率ＥＤ50
／ＬＤ50として表され得る。大きな治療係数を呈する薬学的組成物が好ましい。
細胞培養アッセイおよび動物実験から得られたデータが、ヒトでの使用のための
量の範囲を公式化するのに使用される。このような化合物の用量は、好ましくは
、毒性をほとんどまたは全くともなわないＥＤ50を含む循環濃度の範囲内にある
。この用量は、使用される投与形態、患者の感受性、および投与経路に依存して
この範囲内で変化する。一例として、デコイの投与量は、年齢その他の患者の条
件、疾患の種類、使用するデコイの種類等により適宜選択されるが、例えば、血
液内投与、筋肉内投与、関節内投与では、一般に、１回あたり、１μｇ〜１００
ｍｇを１日１回から数回投与することができる。
【００５５】
正確な用量は、治療されるべき患者を考慮して、個々の臨床医によって選択さ
れる。用量および投与は、十分なレベルの活性部分を提供するか、または所望の
効果を維持するように調整される。考慮され得るさらなる因子としては、疾患状
態の重症度（例えば、腫瘍のサイズおよび位置；患者の年齢、体重、および性別
；投与の食餌制限時間、および頻度、薬物組合せ、反応感受性、および治療に対
する耐性／応答）が挙げられる。特定の製剤の半減期およびクリアランス速度に
応じて、持続作用性薬学的組成物は、３〜４日毎に、毎週、または２週間に１回
、投与され得る。特定の用量および送達の方法に関するガイダンスは当該分野で
公知の文献に提供されている。
【００５６】
この様にして得られたデコイを主成分として含有する医薬品は、疾患の種類、
使用するデコイの種類等により各種の方法で投与することができ、例えば、虚血
性疾患、炎症性疾患、自己免疫疾患および癌の転移・浸潤、悪疫質においては血
管内投与、疾患部位に塗布、疾患部位内に投与または疾患部位に血管内投与等す
ることができる。さらに具体的な例としては、例えば、臓器梗塞等でＰＴＣＡを
行う場合には、同時またはその前後に患部血管に投与することができ、また臓器
移植等では移植する臓器を予め本願で用いられる製剤で処置して用いてもよい。
また、例えば、慢性関節リウマチ等では、直接関節内に注入して用いることもで
きる。
【実施例】
【００５７】
以下実施例を用いて本発明を説明するが、これらの実施例は、本発明の例示で
あって、限定を意図するものではない。
【００５８】
（実施例１：ヒト大動脈瘤サンプルにおけるｅｔｓ−１の過剰発現）
ｅｔｓ−１は、ＭＭＰ遺伝子の発現を制御する転写因子の１つである。手術に
より除去（摘出）された大動脈瘤サンプルをホルマリン固定し、ｅｔｓ−１に対
する抗体（Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ社（ＵＳＡ））
を用い、常法にて免疫染色を行った。図１、２および３に示すように、いずれの
大動脈瘤サンプルにおいても、主として外膜にｅｔｓ−１の存在が認められた。
【００５９】
図１の左は、ヒト大動脈起始部の光学顕微鏡写真（×１００倍）、そして図１
の右は、図１の左の矩形の区画の同拡大写真（×４００倍）である。
【００６０】
図２の左は、ヒト大動脈最拡張部の光学顕微鏡写真（×１００倍）、そして図
２の右もまた、ヒト大動脈最拡張部の別の部分の蛍光顕微鏡写真（×２００倍）
である。
【００６１】
図３は、ヒト大動脈最拡張部の光学顕微鏡写真（×４００倍）であって、図２
の矩形で示した区画の拡大写真である。図３の左は、図２の右の大きい方の矩形
の区画の同拡大写真（×４００倍）であり、そして図３の右は、図２の右の小さ
い方の矩形の区画の同拡大写真（×４００倍）である。
【００６２】
（実施例２：オーガンカルチャー（組織培養系）におけるデコイ核酸の効果）
手術時に除去された大動脈瘤サンプルを用い、オーガンカルチャー（組織培養
系）でデコイ核酸導入によるＭＭＰ遺伝子の発現抑制効果を試験した。
【００６３】
ヒト大動脈瘤を手術時に取り出し、２ｍｍ2のサンプルに分割した。１００μ
Ｍのそれぞれのデコイあるいはスクランブルデコイ（共に北海道システムサイエ
ンス社にて合成）を含む１０％コラーゲゲルに室温で１時間浸した。その後ゲル
の付着したまま２４ウェルプレートに入れ、培養液（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ ｍ
ｏｄｉｆｉｅｄ Ｅａｇｌｅ’ｓ ｍｅｄｉｕｍ，１％ ＦＣＳ）を１．５ｍｌ
ずつ入れた。以降、３７℃インキュベーターにて培養した。培養液は２４時間後
にウォッシュアウトし、新しい培養液に変更する。さらに４８時間後、培養液中
のＭＭＰ１、ＭＭＰ９を常法に従い、ＥＬＩＳＡ（Ａｍｅｒｓｈａｍ ｐｈａｒ
ｍａｃｉａ ｂｉｏｔｅｃｈ社製）にて測定した。
使用したデコイ：
ＮＦ−κＢデコイ（配列番号１）
【００６４】
【化１】
ＮＦ−κＢスクランブルデコイ（配列番号２）
【００６５】
【化２】
ｅｔｓデコイ（配列番号３）
【００６６】
【化３】
ｅｔｓスクランブルデコイ（配列番号４）
【００６７】
【化４】
結果を、図４および図５に示す。図４および図５の縦軸は、４５０ｎｍにおけ
る吸光度を示し、横軸のｕｎｔｒｅａｔ、ＮＦｓｄ、ＮＦ、ｅｔｓ−ｓｄおよび
ｅｔｓは、それぞれ、核酸試薬を含まず（コントロール）、ＮＦ−κＢスクラン
ブルデコイ、ＮＦ−κＢデコイ、ｅｔｓスクランブルデコイ、およびｅｔｓデコ
イをそれぞれ示す。図中の各棒の上部に記載の横棒は標準偏差を表し、そして図
中の各棒の間をつなぐ線の上にあるＰは、この線でつながれる群間の比較に用い
た有意水準を表し、棒の上にある＊＊はその群の平均値がコントロールに対して
統計的に有意水準１％（図４）または５％（図５）で平均値の差が有意であるこ
とを示す（Ｆｉｓｈｅｒ検定）。
【００６８】
図４および図５に示されるように、ｅｔｓデコイ投与群において、ＭＭＰ１お
よびＭＭＰ９の産生は、コントロール群およびｅｔｓスクランブルデコイ投与群
に比べ有意に抑制された。そしてＮＦ−κＢデコイ投与群においてもまた、ＭＭ
Ｐ１およびＭＭＰ９の産生は、コントロール群およびＮＦ−κＢスクランブルデ
コイ投与群に比べ有意に抑制された。
【００６９】
（実施例３：オーガンカルチャー（組織培養系）におけるデコイ核酸およびダ
ブルデコイ核酸の濃度依存的効果）
デコイ核酸として１００μＭおよび６００μＭ濃度のＮＦ−κＢデコイ、およ
び１００および６００μＭ濃度の以下に示す構造のダブルデコイおよびダブルス
クランブルデコイを用いた点を除いて、実施例２と同様の方法でオーガンカルチ
ャー（組織培養系）におけるデコイ核酸添加によるＭＭＰ遺伝子の発現抑制効果
を試験した。
使用したダブルデコイ（配列番号５）
【００７０】
【化５】
ダブルスクランブルデコイ（配列番号６）
【００７１】
【化６】
結果を、図６および図７に示す。図６および図７の縦軸は、４５０ｎｍにおけ
る吸光度を示し、横軸のｕｎｔｒｅａｔ、ＮＦｓｄ、ＮＦ１００、ＮＦ６００、
ＤＤ ｓｄ、ＤＤ１００およびＤＤ６００は、それぞれ、核酸試薬を含まず（コ
ントロール）、ＮＦ−κＢデコイ１００μＭ、ＮＦ−κＢデコイ６００μＭ、ダ
ブルスクランブルデコイ、ダブルデコイ１００μＭ、およびダブルデコイ６００
μＭをそれぞれ示す。図中の各棒の上部に記載の横棒は、標準偏差を表し、そし
て図中の各棒の間をつなぐ線の上にあるＰは、この線でつながれる群間の比較に
用いた有意水準を表し、＊および＊＊は、コントロールに対して統計的にそれぞ
れ有意水準５％および１％で平均値の差が有意であることを、＃および‡はそれ
ぞれＮＦ１００およびＮＦ６００群の結果に対して有意水準５％で平均値の差が
有意であることをそれぞれ示す（Ｆｉｓｈｅｒ検定）。
【００７２】
図６および図７に示されるように、ＮＦ−κＢ投与群において、ＭＭＰ１およ
びＭＭＰ９の産生は、コントロール群およびＮＦ−κＢスクランブルデコイ投与
群に比べ有意に抑制され、そしてその効果は濃度依存性であった。そしてダブル
デコイ投与群においてもまた、ＭＭＰ１およびＭＭＰ９の産生は、ダブルデコイ
投与群において、スクランブルデコイ投与群に比べ有意に抑制された。そしてダ
ブルデコイの効果は、ＮＦ−κＢデコイ投与群に比べより効果的であった。
【００７３】
（実施例４：インビボにおけるデコイ核酸の効果）
ラットを用い、インビボにおけるデコイ核酸付与によるＭＭＰ遺伝子の発現抑
制効果を試験した。
【００７４】
ラット(ＳＤラット、１２週令)を麻酔下に開腹し、以下の組成のＡＤフィルム
（大きさ１ｃｍ×１ｃｍ）をほぼ１ｃｍの長さにわたって、腹部大動脈に周囲に
巻き付けた。腹部を縫合した後通常の状態で飼育し、３日後に再び開腹し、血管
を取り出して蛍光顕微鏡により解析した。
ＡＤフィルムの組成：ヒドロキシプロピルセルロース １５０〜４００ｃｐｓ（
ＨＰＣ−Ｍ） ７３ｍｇ／４ｃｍ2；ポリエチレングルコール４００（ＰＥＧ）
７．３ｍｇ／４ｃｍ2；ＦＩＴＣ−標識デコイ １００ｎｍｏｌ／ｃｍ2。
ＡＤフィルムの調製方法：まず、上記のヒドロキシプロピルセルロースおよびポ
リエチレングルコールを、それぞれ１００％エタノールに溶解し混合した。この
混合液に、４００ｎｍｏｌのＦＩＴＣ−標識デコイを加えて溶解した後、風乾し
、最終的に４ｃｍ2のシートに成型した。
【００７５】
図８および図９に結果を示す。図８は、腹部大動脈壁の部分断面の蛍光顕微鏡
写真（×２００倍）である。図８の左は、ＦＩＴＣ−標識デコイを含まないＡＤ
フィルムを巻き付けたコントロールラットの腹部大動脈壁の断面の蛍光顕微鏡写
真、図８の右は、ＦＩＴＣ−標識デコイを含むＡＤフィルムを巻き付けたラット
の同蛍光顕微鏡写真である。図９は、腹部大動脈壁の断面および部分断面の蛍光
顕微鏡写真である。図９の左は、１００倍、そして図９の右は、２００倍の拡大
倍率の蛍光顕微鏡写真である。
【００７６】
図８および図９に示されるように、ＦＩＴＣ−標識デコイを含むＡＤフィルム
を巻き付けたラットの腹部大動脈壁では、血管外膜に強い緑色および中膜の一部
に緑色の蛍光が観察され、デコイが血管外膜および中膜の一部に導入されたこと
が確認された。
【００７７】
（実施例５：大動脈瘤モデルラットにおけるデコイ核酸の効果）
大動脈瘤モデルラットが確立されている（Ｉｎｄｏｍｅｔｈａｃｉｎ ｐｒｅ
ｖｅｎｔｓ ｅｌａｓｔａｓｅ−ｉｎｄｕｃｅｄ ａｂｄｏｍｉｎａｌ ａｏｒ
ｔｉｃ ａｎｅｕｒｙｓｍｓ ｉｎ ｔｈｅ ｒａｔ．Ｈｏｌｍｅｓ ＤＲ，Ｐ
ｅｔｒｉｎｅｃ Ｄ，Ｗｅｓｔｅｒ Ｗ，Ｔｈｏｍｐｓｏｎ ＲＷ，Ｒｅｉｌｌ
ｙ ＪＭ．Ｊ Ｓｕｒｇ Ｒｅｓ．１９９６ Ｊｕｎ；６３（１）：３０５−９
）。このモデルはエラスターゼをラット大動脈内に１５０ｃｍＨ2Ｏの圧力で３
０分間貯留させることで作成される。
【００７８】
図１０に示されるように、大動脈瘤モデルラットにおいてスクランブルデコイ
投与群では大動脈断面積は顕著に増大していく。しかし、ＮＦ−κＢとＥｔｓの
ダブルデコイ投与群ではその増大は２週後（図では横軸２Ｗ）、３週後（図では
横軸３Ｗ）で有意に抑制された。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、染色体上に存在する、転写調節因子が結合する部位と特異的に結合
する化合物（例えば、核酸およびその類似体）を含む組成物およびその使用方法
に関する。より詳細には、本発明は、デコイ化合物を含む組成物およびその使用
方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
喘息、癌、心臓病、動脈瘤、自己免疫疾患およびウイルス感染症などの種々の
疾患は、それぞれ異なる症状を示すにもかかわらず、その大部分は、１種類また
は数種類のタンパク質が、異常発現（過剰発現または過少発現）したことに起因
することが示唆されている。一般に、これらタンパク質の発現は、種々の転写活
性因子および転写抑制遺伝子などの転写調節因子によって制御されている。
【０００３】
ＮＦ−κＢは、ｐ６５とｐ５０のヘテロダイマーからなる転写調節因子である
。ＮＦ−κＢは、通常、その阻害因子ＩκＢが結合した形で細胞質内に存在し、
その核内移行が阻止されている。ところが、何らかの原因で、サイトカイン、虚
血、再灌流などの刺激が加わると、ＩκＢがリン酸化を受けて分解され、それに
よってＮＦ−κＢが活性化されて核内に移行する。核内に移行したＮＦ−κＢは
、染色体上のＮＦ−κＢ結合部位に結合し、その下流にある遺伝子の転写を促進
する。ＮＦ−κＢ結合部位の下流にある遺伝子として、例えば、ＩＬ−１、ＩＬ
−６、ＩＬ−８、腫瘍壊死因子α（ＴＮＦα）などの炎症性サイトカイン類、Ｖ
ＣＡＭ−１、ＩＣＡＭ−１などの接着因子が知られている。
【０００４】
ＮＦ−κＢは、腫瘍悪性度の進行の開始に関与し得る（Ｒａｙｅｔ Ｂら、Ｏ
ｎｃｏｇｅｎｅ １９９９ Ｎｏｖ ２２；１８（４９）６９３８−４７）；Ｎ
Ｆ−κＢは、低酸素症ストレスに対する腫瘍細胞の応答に関与する（Ｒｏｙｄｓ
ＪＡら、Ｍｏｌ Ｐａｔｈｏｌ １９９８ Ａｐｒ；５１（２）：５５−６１
）；ＮＦ−κＢデコイは、慢性関節リウマチ患者由来の滑膜細胞におけるサイト
カインおよび接着分子の発現を阻害する（Ｔｏｍｉｔａ Ｔら、Ｒｈｅｕｍａｔ
ｏｌｏｇｙ（Ｏｘｆｏｒｄ） ２０００ Ｊｕｌ；３９（７）：７４９−５７）
；ＮＦ−κＢを含む複数の転写因子間の協力作用の抑制は、種々の癌の悪性表現
型を変える（Ｄｅｎｈａｒｄｔ ＤＴ、Ｃｒｉｔ Ｒｅｖ Ｏｎｃｏｇ １９９
６；７（３−４）：２６１−９１）；緑茶ポリフェノールによるＮＦ−κＢ活性
のダウンレギュレーションは、一酸化窒素合成酵素の誘導をブロックし、Ａ４３
１ヒト類表皮癌細胞を抑制する（Ｌｉｎ ＪＫら、Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｐｈａｒｍ
ａｃｏｌ １９９９ Ｓｅｐ １５；５８（６）：９１１−５）；アルツハイマ
ー病患者の脳で見られるアミロイドβペプチドは、神経芽腫細胞において、７５
ｋＤ神経栄養因子レセプター（ｐ７５ＮＴＲ）に結合することにより、ＮＦ−κ
Ｂを時間依存性様式および用量依存性様式で活性化する（Ｋｕｐｅｒ Ｐら、Ｊ
Ｎｅｕｒｏｓｃｉ Ｒｅｓ １９９８ Ｄｅｃ １５；５４（６）：７９８−
８０４）；ＮＦ−κＢで活性化されるＴＮＦαは、糸球体腎炎の発症に重要な役
割を演じる（Ａｒｄａｉｌｌｏｕら、Ｂｕｌｌ Ａｃａｄ Ｎａｔｌ Ｍｅｄ
１９９５ Ｊａｎ；１７９（１）１０３−１５）。ＮＦ−κＢデコイは、ＴＮＦ
αで誘導されるマウス腎炎においてサイトカインおよび接着分子の発現をインビ
ボで阻害する（Ｔｏｍｌｔａ Ｎら、Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ ２０００ Ａｕｇ；
７（１５）１３２６−３２）；など。
【０００５】
ＮＦ−κＢは、マトリックスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）のメンバーであ
るＭＭＰ１およびＭＭＰ９を転写レベルで抑制することが示唆された（Ａｍｐｌ
ｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ＩＬ−１ｂｅｔａ−ｉｎｄｕｃｅｄ ｍａｔｒｉｘ
ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ−９ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｂｙ ｓ
ｕｐｅｒｏｘｉｄｅ ｉｎ ｒａｔ ｇｌｏｍｅｒｕｌａｒ ｍｅｓａｎｇｉａ
ｌ ｃｅｌｌｓ ｉｓ ｍｅｄｉａｔｅｄ ｂｙ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ａｃｔ
ｉｖｉｔｉｅｓ ｏｆ ＮＦ−ｋａｐｐａＢ ａｎｄ ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ
ｐｒｏｔｅｉｎ−１ ａｎｄ ｉｎｖｏｌｖｅｓ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ
ｔｈｅ ｍｉｔｏｇｅｎ−ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｋｉｎａｓ
ｅ ｐａｔｈｗａｙｓ． Ｅｂｅｒｈａｒｄｔ Ｗ， Ｈｕｗｉｌｅｒ Ａ，
Ｂｅｃｋ ＫＦ， Ｗａｌｐｅｎ Ｓ， Ｐｆｅｉｌｓｃｈｉｆｔｅｒ Ｊ．
Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２０００ Ｎｏｖ １５、１６５（１０）、５７８８−９
７;Ｎｕｃｌｅａｒ ｆａｃｔｏｒ ｋａｐｐａＢ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｉｓ
ｅｓｓｅｎｔｉａｌ ｆｏｒ ｍａｔｒｉｘ ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａ
ｓｅ−１ ａｎｄ −３ ｕｐｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｉｎ ｒａｂｂｉｔ ｄ
ｅｒｍａｌ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ． Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ｒ
ｅｓ Ｃｏｍｍｕｎ．Ｂｏｎｄ Ｍ，Ｂａｋｅｒ ＡＨ， Ｎｅｗｂｙ ＡＣ．
１９９９ Ｏｃｔ ２２、２６４（２）、５６１−７；Ｓｙｎｅｒｇｉｓｔｉ
ｃ ｕｐｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ−
９ ｂｙ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒｓ ａｎｄ ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ
ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ： ａｎ ａｂｓｏｌｕｔｅ ｒｅｑｕｉｒｅｍｅｎｔ
ｆｏｒ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ ＮＦ−ｋａｐｐａ Ｂ．
Ｂｏｎｄ Ｍ， Ｆａｂｕｎｍｉ ＲＰ， Ｂａｋｅｒ ＡＨ， Ｎｅｗｂｙ
ＡＣ． ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ １９９８ Ｓｅｐ １１、４３５（１）、２９−
３４；およびＬｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ ａｃｔｉｖａｔｅｓ ｍ
ａｔｒｉｘ ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ−２ ｉｎ ｅｎｄｏｔｈｅ
ｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ ｔｈｒｏｕｇｈ ａｎ ＮＦ−ｋａｐｐａＢ−ｄｅｐｅ
ｎｄｅｎｔ ｐａｔｈｗａｙ． Ｋｉｍ Ｈ，Ｋｏｈ Ｇ．Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｂ
ｉｏｐｈｙｓ Ｒｅｓ Ｃｏｍｍｕｎ． ２０００ Ｍａｒ １６、２６９（２
）、４０１−５）。
【０００６】
ＭＭＰは、細胞外マトリックス成分の分解に関与する亜鉛依存性酵素の多遺伝
子ファミリーである。またｅｔｓも、マトリックスメタロプロテイナーゼ（ＭＭ
Ｐ）のメンバーであるＭＭＰ１およびＭＭＰ９を転写レベルで抑制することが知
られている（Ｓｉｇｎａｌ ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｔｒａｎｓｃ
ｒｉｐｔｉｏｎａｌ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ
． Ｓａｔｏ Ｙ，Ａｂｅ Ｍ，Ｔａｎａｋａ Ｋ，Ｉｗａｓａｋａ Ｃ，Ｏｄ
ａ Ｎ，Ｋａｎｎｏ Ｓ，Ｏｉｋａｗａ Ｍ，Ｎａｋａｎｏ Ｔ，Ｉｇａｒａｓ
ｈｉ Ｔ．Ａｄｖ Ｅｘｐ Ｍｅｄ Ｂｉｏｌ ２０００、４７６、１０９−１
５；およびＥＴＳ−１ ｃｏｎｖｅｒｔｓ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌ
ｓ ｔｏ ｔｈｅ ａｎｇｉｏｇｅｎｉｃ ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ ｂｙ ｉｎｄ
ｕｃｉｎｇ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｍａｔｒｉｘ ｍｅｔａｌ
ｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅｓ ａｎｄ ｉｎｔｅｇｒｉｎ ｂｅｔａ３．Ｏｄａ
Ｎ，Ａｂｅ Ｍ，Ｓａｔｏ Ｙ．Ｊ Ｃｅｌｌ Ｐｈｙｓｉｏｌ １９９９
Ｆｅｂ、１７８（２）、１２１−３２）。
【０００７】
ＭＭＰは、細胞外マトリックスタンパク質の分解を仲介することにより癌細胞
侵入において重要な役割を果たす。多くの癌研究によって、ＭＭＰのインヒビタ
ー（ＴＩＭＰなど）が、癌の進行を抑制することが示唆されている：血清中のＴ
ＩＭＰ１レベルは、結腸直腸の予後および診断マーカーとなり、そして転移性癌
の選択的マーカーとして用い得る（Ｐｅｌｌｅｇｒｉｎｌ Ｐら、Ｃａｎｃｅｒ
Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ ２０００ Ｓｅｐ；４９（７）：３
８８−９４）；ヒト膀胱癌細胞中のＭＭＰ２およびＭＭＰ９の発現および活性は
、腫瘍壊死因子αとγインターフェロンの影響を受ける（Ｓｈｉｎ ＫＹら、Ｃ
ａｎｃｅｒ Ｌｅｔｔ ２０００ Ｏｃｔ ３１；１５９（２）：１２７−１３
４）；卵巣上皮腫瘍で、ＭＭＰ２、ＭＭＰ９、ＭＴ１−ＭＭＰ、およびそれらの
インヒビターＴＩＭＰ１、ＴＩＭＰ２が発現する（ＳａｋａｔａＫら、Ｉｎｔ
Ｊ Ｏｎｃｏｌ ２０００ Ｏｃｔ；１７（４）：６７３−６８１）；ＭＭＰ
１、ＭＭＰ２、ＭＭＰ３およびＭＭＰ９の各々のレベルおよび総ＭＭＰ活性は、
結腸直腸腫瘍でアップレギュレートし、ＭＭＰ１が結腸直腸癌進行に最も重要で
ある（Ｂａｋｅｒ ＥＡら、Ｂｒ Ｊ Ｓｕｒｇ ２０００ Ｓｅｐ；８７（９
）：１２１５−１２２１）；活性化されたＭＭＰ２が、尿路上皮癌の浸潤に重要
な役割を演じ、しかも活性化されたＭＭＰ２発現のレベルが有用な予後指標とな
る（Ｋａｎｅｄａ Ｋら、ＢＪＵ Ｉｎｔ ２０００ Ｓｅｐ；８６（４）：５
５３−５５７）；プロスタグランジン合成のインヒビターが、ヒト前立腺腫瘍細
胞浸潤を阻害し、かつＭＭＰの放出を低減する（Ａｔｔｉｇａ ＦＡら、Ｃａｎ
ｃｅｒ Ｒｅｓ ２０００ Ａｕｇ １５；６０（１６）：４６２９−３７）；
血清真性グロブリン画分中のＭＭＰ活性が、乳癌および肺癌患者で増加し、これ
ら癌の腫瘍マーカーとして用い得る（Ｆａｒｉａｓ Ｅら、Ｉｎｔ Ｊ Ｃａｎ
ｃｅｒ ２０００ Ｊｕｌ ２０；８９（４）：３８９−９４）；ＭＭＰインヒ
ビターは、腫瘍細胞におけるゼラチン分解活性を阻害する（Ｉｋｅｄａ Ｍら、
Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ２０００ Ａｕｇ；６（８）：３２９０−６
）；膜タンパク質ＬＭＰ１によるＭＭＰ９の誘導が、鼻咽頭癌（ＮＰＣ）の転移
性に寄与する（Ｈｏｒｉｋａｗａ Ｔら、Ｃａｎｅｒ ２０００ Ａｕｇ １５
；８９（４）：７１５−２３）；ＭＭＰは、血管形成の初期に重要な役割を演じ
、ＭＭＰインヒビターがヒト微小血管内皮細胞浸潤および形態形成を抑制する（
Ｊｉａ ＭＣら、Ａｄｖ Ｅｘｐ Ｍｅｄ Ｂｉｏｌ ２０００；４７６：１８
１−９４）；浸潤性および再発性下垂体腺腫および下垂体癌においてＭＭＰ９が
発現する（Ｔｕｒｎｅｒ ＨＥら、Ｊ Ｃｌｉｎ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ Ｍｅ
ｔａｂ ２０００ Ａｕｇ；８５（８）：２９３１−５）；など。
【０００８】
ＭＭＰはまた、大動脈瘤の進展に関与することが知られている：ＭＭＰは、脳
動脈瘤形成および破壊に関与する（Ｇａｅｔａｎｉ Ｐら、Ｎｅｕｒｏｌ Ｒｅ
ｓ １９９９ Ｊｕｎ；２１（４）：３８５−９０）；ＭＭＰ−９の活性上昇は
、脳動脈瘤のリスクファクターである（Ｐｅｔｅｒｓ ＤＧは、Ｓｔｒｏｋｅ
１９９９ Ｄｅｃ；３０（１２）：２６１２−６）；ＭＭＰの阻害は、動脈瘤モ
デルにおいて、小動脈瘤の成長の阻害をもたらす（Ｔｒｅｈａｒｎｅ ＧＤは、
Ｂｒ Ｊ Ｓｕｒｇ １９９９ Ａｕｇ；８６（８）：１０５３−８）；など。
【０００９】
ＭＭＰは、遊走血管平滑筋細胞、マクロファージなどから分泌され、血管壁に
存在するコラーゲン、エラスチンを破壊し、これによって血管の緊張が失われ、
血圧に抵抗しきれずに血管径は拡張する。事実、動脈瘤の血管では、顕著なエラ
スチンの破壊が認められる（Ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ ｏｆ ａｎｅｕｒｙｓ
ｍｓ． Ｈａｌｌｏｒａｎ ＢＧ， Ｂａｘｔｅｒ ＢＴ． Ｓｅｍｉｎ Ｖａ
ｓｃ Ｓｕｒｇ １９９５ Ｊｕｎ；８（２）：８５−９２）。
【００１０】
大動脈瘤破裂はほとんどが死に至る。大動脈瘤破裂を防ぐためには、動脈硬化
の危険因子を抑制することが重要である。しかし、このような危険因子の抑制を
完全に行うことは困難である。現在、大動脈瘤破裂を回避する手段は、侵襲的な
手術によるほかない。
【００１１】
３５才から８０才までの成人男性の大動脈径を測定したデータ（Ａｂｄｏｍｉ
ｎａｌ Ａｏｒｔｉｃ Ａｎｅｕｒｙｓｍｓ． Ｄｏｌｏｒｅｓ Ｊ Ｋａｔｚ
， Ｊａｍｅｓ Ｃ． Ｓｔａｎｌｅｙ， Ｇｅｒａｌｄ Ｂ． Ｚｅｌｅｎｏ
ｃｋ． Ｓｅｍｉｎａｒｓ ｉｎ Ｖａｓｃｕｌａｒ Ｓｕｒｇｅｒｙ， ｖｏ
ｌ ８，Ｎｏ４（Ｄｅｃ），１９９５；ｐｐ２８９−２９８）によると、その平
均は１．５ｃｍ〜２．０ｃｍであった。一般に、大動脈径が、平均値の１．５倍
を超えると大動脈瘤と判断されるが、上記データによれば、直径３ｃｍ以上の瘤
を有し、大動脈瘤と判断されるヒトは、４００人に１人の割合で存在していた。
従って、大動脈破裂の危険度は別にして、３５才から８０才までの成人男性にお
いて大動脈瘤の有病率はかなり高く、６５才以上の高齢者においては有病率はさ
らに大きくなると考えらている。
【００１２】
ＭＭＰはまた、慢性関節リウマチに関与することが知られている：薬剤処理に
よる慢性関節リウマチの改善は、滑膜組織中のＭＭＰ１の減少をもたらす（Ｋｒ
ａａｎ ＭＣら、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｈｅｕｍ ２０００ Ａｕｇ；４３（
８）：１８２０−３０）；ＩＬ−１βによるＭＴ−ＭＭＰ発現のアップレギュレ
ーションは、ＭＭＰ−２活性化を部分的に誘導し、慢性関節リウマチにおけるサ
イトカイン媒介関節破壊をもたらす（Ｏｒｉｇｕｃｈｉ Ｔら、Ｃｌｉｎ Ｅｘ
ｐ Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ ２０００ Ｍａｙ−Ｊｕｎ；１８（３）：３３３−９
）；慢性関節リウマチ滑膜により産生される炎症性サイトカインＩＬ−１７は、
ＭＭＰ１の産生を増加する（Ｃｈａｂａｕｄ Ｍら、Ｃｙｔｏｋｉｎｅ ２００
０ Ｊｕｌ；１２（７）：１０９２−９）；ＭＭＰ１、ＭＭＰ２、ＭＭＰ３、Ｍ
ＭＰ８、ＭＭＰ９およびＭＭＰインヒビターは、慢性関節リウマチ滑液中に高レ
ベルで存在し、ＭＭＰ類が活性化されるとＭＭＰインヒビターとのバランスが崩
れ、軟骨破壊に至る（Ｙｏｓｈｉｈａｒａ Ｙら、Ａｎｎ Ｒｈｅｕｍ Ｄｉｓ
２０００ Ｊｕｎ；５９（６）：４５５−６１）；ＭＴ１−ＭＭＰは、リウマ
チ滑膜ライニング細胞層中のプロＭＭＰ−２の活性化に関与し、慢性関節リウマ
チにおける軟骨破壊をもたらす（Ｙａｍａｎａｋａ Ｈら、Ｌａｂ Ｉｎｖｅｓ
ｔ ２０００ Ｍａｙ；８０（５）：６７７−８７）；など。
【００１３】
ＭＭＰはまた、マルファン症候群における心血管病変に関与する（Ｓｅｇｕｒ
ａ ＡＭら、Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ １９９８ Ｎｏｖ １０；９８（１９
Ｓｕｐｐｌ）：１１３３１−７）。
【００１４】
膜タイプ−ＭＭＰ（ＭＴ−ＭＭＰ）の発現は、メサンギウム増殖性糸球体腎炎
で増加する（Ｈａｙａｓｈｉ Ｋら、Ｊ Ａｍ Ｓｏｃ Ｎｅｐｈｒｏｌ １９
９８ Ｄｅｃ；９（１２）：２２６２−７１）。
【００１５】
ＭＭＰインヒビターは、ラット腹部大動脈瘤モデルにおいて、血管径の拡張を
抑制することが報告されている（Ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｅｘｐｅｒｉ
ｍｅｎｔａｌ ａｂｄｏｍｉｎａｌ ａｏｒｔｉｃ ａｎｅｕｒｙｓｍｓ ｂｙ
ｓｙｓｔｅｍｉｃ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｗｉｔｈ ａ ｈｙｄｒｏｘａｍａ
ｔｅ−ｂａｓｅｄ ｍａｔｒｉｘ ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ ｉｎ
ｈｉｂｉｔｏｒ （ＲＳ １３２９０８）． Ｍｏｏｒｅ Ｇ， Ｌｉａｏ Ｓ
， Ｃｕｒｃｉ ＪＡ， Ｓｔａｒｃｈｅｒ ＢＣ， Ｍａｒｔｉｎ ＲＬ，
Ｈｅｎｄｒｉｃｋｓ ＲＴ， Ｃｈｅｎ ＪＪ， Ｔｈｏｍｐｓｏｎ ＲＷ．
Ｊ Ｖａｓｃ Ｓｕｒｇ． １９９９ Ｍａｒ；２９（３）：５２２−３２）。
【００１６】
ＭＭＰインヒビターはまた、糸球体腎炎の治療に用いられ得る（Ｍａｒｔｉ
ＨＰ、Ｓｃｈｗｅｉｚ Ｍｅｄ Ｗｏｃｈｅｎｓｃｈｒ ２０００ Ｍａｙ ２
７；１３０（２１）；７８４−８）。しかし、ＭＭＰインヒビターの全身投与は
、重篤な副作用を生じ、上記種々の疾患の処置（治療および予防）するための臨
床適用は困難である。
【００１７】
このように、ＮＦ−κＢは、その転写制御下にある、多くの遺伝子の発現を介
して、種々の疾患に関与することが示唆されているが、このような疾患を有効に
処置する方法、特に非侵襲的処置法は提供されていない。特に、大動脈瘤は、上
記のように稀ではない疾患であり、高齢化社会にともなう動脈硬化性疾患の増加
は、当然大動脈瘤疾患の増加をもたらす。患者の高齢化を考慮した場合、薬剤に
より大動脈瘤の増長を直接抑制できれば理想的であるが、現在のところその手段
はなく、大動脈瘤の低侵襲的な治療および予防法の開発が切望されている。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１８】
本発明は、ＮＦ−κＢまたはｅｔｓによって制御される遺伝子の発現に起因す
る上記種々の疾患を処置するために適した組成物およびその使用法を提供する。
【課題を解決するための手段】
【００１９】
本発明は、ＮＦ−κＢデコイ、ｅｔｓデコイ、またはＮＦ−κＢとｅｔｓとの
キメラ（ダブル）デコイを主成分として含有し、ＮＦ−κＢまたはｅｔｓにより
制御される遺伝子の発現に起因する種々の疾患を処置（治療および予防）するた
めの組成物および該疾患の処置方法を提供する。
【００２０】
本発明者らは、ＮＦ−κＢまたはｅｔｓにより制御される遺伝子の発現に起因
する疾患を処置するために、ＮＦ−κＢのデコイ、またはｅｔｓのデコイ、また
はＮＦ−κＢとｅｔｓとのキメラ（ダブル）デコイを投与することが有効である
ことを見出し、本発明を完成するに至った。
【００２１】
本発明は、ＮＦ−κＢまたはｅｔｓに制御される遺伝子の発現に起因する疾患
を治療および予防するための薬学的組成物に関し、この組成物は、少なくとも１
つのデコイ、および薬学的に受容可能なキャリアを含む。
【００２２】
好ましくは、上記少なくとも１つのデコイは、ＮＦ−κＢのデコイまたはｅｓ
ｔのデコイ、そしてより好ましくはＮＦ−κＢとｅｓｔとのキメラ（ダブル）デ
コイである。
【００２３】
好ましくは、上記疾患は、大動脈瘤、脳動脈瘤、癌、マルファン症候群、大動
脈解離、血管形成術後再狭窄、慢性関節リウマチ、喘息、アトピー性皮膚炎、腎
炎、腎不全またはプラークラプチャーである。
【００２４】
好ましくは、上記薬学的に受容可能なキャリアは親水性ポリマーである。
【発明の効果】
【００２５】
ＮＦ−κＢまたはｅｔｓに制御される遺伝子の発現に起因する疾患を処置する
薬学的組成物およびそれに用いるキャリアーが提供される。本発明の薬学的組成
物の局所投与は、非侵襲的であって、繰り返し可能な治療方法を提供する。
【図面の簡単な説明】
【００２６】
【図１】ヒト大動脈最拡張部の光学顕微鏡写真である。
【図２】ヒト大動脈最拡張部の光学顕微鏡写真である。
【図３】ヒト大動脈最拡張部の光学顕微鏡写真である。
【図４】本発明の薬学的組成物を用いた試験結果を示す図である。
【図５】本発明の薬学的組成物を用いた試験結果を示す図である。
【図６】本発明の薬学的組成物を用いた試験結果を示す図である。
【図７】本発明の薬学的組成物を用いた試験結果を示す図である。
【図８】本発明の薬学的組成物を用いた試験結果を示すラットの腹部大動脈壁の断面の蛍光顕微鏡写真である。
【図９】本発明の薬学的組成物を用いた試験結果を示すラットの腹部大動脈壁の断面の蛍光顕微鏡写真である。
【図１０】本発明の薬学的組成物を用いた試験結果を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００２７】
本発明で用いられる用語「デコイ」または「デコイ化合物」は、ＮＦ−κＢま
たはｅｔｓが結合する染色体上の部位、あるいはＮＦ−κＢまたはｅｔｓに制御
される遺伝子の他の転写調節因子が結合する染色体上の部位（以下標的結合部位
という）に結合し、ＮＦ−κＢまたはｅｔｓまたはその他の転写因子と、これら
の標的結合部位への結合について拮抗する化合物をいう。代表的には、デコイま
たはデコイ化合物は、核酸およびその類似体である。
【００２８】
デコイが核内に存在する場合、転写調節因子の標的結合部位への結合について
、デコイが転写調節因子と競合し、その結果、転写調節因子の標的結合部位への
結合によってもたらされる生物学的機能が阻害される。デコイは、標的結合配列
に結合し得る核酸配列を少なくとも１つ含む。標的結合配列への結合活性を有す
る限り、デコイは、本発明の薬学的組成物の調製に用いることができる。
【００２９】
好ましいデコイの例として、５’−ＣＣＴ−ＴＧＡ−ＡＧＧ−ＧＡＴ−ＴＴＣ
−ＣＣＴ−ＣＣ−３’（配列番号１）（ＮＦ−κＢデコイ）、もしくは５’−Ａ
ＡＴ−ＴＣＡ−ＣＣＧ−ＧＡＡ−ＧＴＡ−ＴＴＣ−ＧＡ−３’（配列番号３）（
ｅｔｓデコイ）、もしくは５’−ＡＣＣ−ＧＧＡ−ＡＧＴ−ＡＴＧ−ＡＧＧ−Ｇ
ＡＴ−ＴＴＣ−ＣＣＴ−ＣＣ−３’（配列番号５）（ＮＦ−κＢとｅｔｓのキメ
ラ（ダブル）デコイ）、またはこれらの相補体を含むオリゴヌクレオチド、これ
らの変異体、またはこれらを分子内に含む化合物が挙げられる。オリゴヌクレオ
チドは、ＤＮＡでもＲＮＡでもよく、またはそのオリゴヌクレオチド内に核酸修
飾体および／または擬核酸を含むものであってもよい。また、これらのオリゴヌ
クレオチド、その変異体、またはこれらを分子内に含む化合物は、１本鎖でも２
本鎖であってもよく、線状であっても環状であっもよい。変異体とは上記配列の
一部が、変異、置換、挿入、欠失しているもので、ＮＦ−κＢまたはＮＦ−κＢ
に制御される遺伝子のその他の転写調節因子が結合する核酸結合部位と特異的に
拮抗する核酸を示す。さらに好ましいＮＦ−κＢまたはｅｔｓ、あるいはＮＦ−
κＢに制御される遺伝子のその他の転写調節因子のデコイとしては、上記核酸配
列を１つまたは複数含む２本鎖オリゴヌクレオチドまたはその変異体が挙げられ
る。上記核酸配列を１つまたは複数含む核酸は、含まれる核酸配列の数を示すた
めに、含まれる核酸配列が２つの場合キメラ（タブル）デコイと称され、そして
３つの場合トリプルデコイなどと称され得る。
【００３０】
本発明で用いられるオリゴヌクレオチドは、リン酸ジエステル結合部の酸素原
子をイオウ原子で置換したチオリン酸ジエステル結合をもつオリゴヌクレオチド
（Ｓ−オリゴ）、またはリン酸ジエステル結合を電荷をもたないメチルホスフェ
ート基で置換したオリゴヌクレオチド等、生体内でオリゴヌクレオチドが分解を
受けにくくするために改変したオリゴヌクリオチド等が含まれる。
【００３１】
本発明で用いられるデコイの製造方法としては、当該分野で公知の化学合成法
または生化学的合成法を用いることができる。例えば、デコイ化合物として核酸
を用いる場合、遺伝子工学で一般的に用いられる核酸合成法を用いることができ
、例えば、ＤＮＡ合成装置を用いて目的のデコイ核酸を直接合成してもよいし、
またはこれらの核酸、それを含む核酸またはその一部を合成した後、ＰＣＲ法ま
たはクローニングベクター等を用いて増幅してもよい。さらに、これらの方法に
より得られた核酸を、制限酵素等を用いて切断し、ＤＮＡリガーゼ等を用いて結
合等を行い、目的とする核酸を製造してもよい。また、さらに細胞内でより安定
なデコイ核酸を得るために、核酸の塩基、糖、リン酸部分に、例えば、アルキル
化、アシル化等の化学修飾を施してもよい。
【００３２】
本発明は、上記のデコイ化合物を単独で、または安定化化合物、希釈剤、担体
、または別の成分または薬剤のような他の薬剤と組み合わせて含む薬学的組成物
を提供する。
【００３３】
本発明の薬学的組成物は、デコイが患部の細胞内または目的とする組織の細胞
内に取り込まれるような形態で用いられる。
【００３４】
本発明の薬学的組成物は、任意の無菌生体適合性薬学的キャリアー（生理食塩
水、緩衝化生理食塩水、デキストロース、および水を含むが、それらに限定され
ない）中で投与され得る。これらの分子のいずれも、適切な賦形剤、アジュバン
ト、および／または薬学的に受容可能なキャリアーと混合する薬学的組成物中に
て、単独で、あるいは他の薬剤と組み合わせて患者に投与され得る。本発明の実
施態様において、薬学的に受容可能なキャリアーは薬学的に不活性である。
【００３５】
本発明の薬学的組成物の投与は、経口または非経口により達成される。非経口
送達の方法としては、局所、動脈内（例えば、腫瘍、動脈瘤に直接）、筋肉内、
皮下、髄内、クモ膜下腔内、脳室内、静脈内、腹腔内、または鼻孔内の投与が挙
げられる。デコイ化合物に加えて、これらの薬学的組成物は、賦形剤または薬学
的に使用できる製剤を調製するために、デコイ化合物のプロセシングを促進する
他の化合物を含む、適切な、薬学的に受容可能なキャリアーを含み得る。処方お
よび投与のための技術のさらなる詳細は、例えば、「ＲＥＭＩＮＧＴＯＮ’Ｓ
ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ ＳＣＩＥＮＣＥＳ」 （Ｍａａｃｋ Ｐｕｂｌ
ｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ）の最終版に記載されている。
【００３６】
経口投与のための薬学的組成物は、投与に適した投与形において当該分野で周
知の薬学的に受容可能なキャリアを用いて処方され得る。このようなキャリアは
、薬学的組成物が患者による摂取に適した錠剤、丸剤、糖衣剤、カプセル、液体
、ゲル、シロップ、スラリー、懸濁物などに処方されることを可能とする。
【００３７】
経口使用のための薬学的組成物は、活性化合物を固体賦形剤と組合せ、所望に
より得られた混合物を粉砕し、所望ならば、錠剤または糖衣剤のコアを得るため
に、適切なさらなる化合物を添加した後、顆粒の混合物をプロセシングすること
を介して得られ得る。適切な賦形剤は炭水化物またはタンパク質充填剤であり、
以下を含むが、それらに限定されない：ラクトース、スクロース、マンニトール
、またはソルビトールを含む糖；トウモロコシ、コムギ、イネ、ジャガイモ、ま
たは他の植物由来のデンプン；メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセ
ルロース、またはカルボキシメチルセルロースナトリウムのようなセルロース；
ならびにアラビアゴムおよびトラガカントゴムを含むゴム；ならびにゼラチンお
よびコラーゲンのようなタンパク質。所望ならば、架橋されたポリビニルピロリ
ドン、寒天、アルギン酸またはその塩（例えば、アルギン酸ナトリウム）のよう
な崩壊剤または可溶化剤が添加され得る。
【００３８】
糖衣剤コアは、濃縮糖溶液のような適切なコーティングとともに提供される。
これはまた、アラビアガム、タルク、ポリビニルピロリドン、カルボポルゲル、
ポリエチレングリコール、および／または二酸化チタン、ラツカー溶液、および
適切な有機溶媒または溶媒混合液をも含有し得る。製品同定のため、または活性
化合物の量（すなわち用量）を特徴付けるために、染料または色素が錠剤または
糖衣剤に添加され得る。
【００３９】
経口で使用され得る薬学的製剤は、例えば、ゼラチンカプセル、ゼラチンおよ
びコーティング（例えば、グリセロールまたはソルビトール）よりなるソフト封
着カプセルを含む。ゼラチンカプセルは、ラクトースまたは澱粉のような充填剤
またはバインダー、タルクまたはステアリン酸マグネシウムのような潤滑剤、お
よび所望により安定化剤と混合した活性な成分を含有し得る。ソフトカプセルで
は、デコイ化合物は、安定化剤とともにまたはともなわずに、脂肪油、流動パラ
フィンまたは液状ポリエチレングリコールのような適切な液体に溶解または懸濁
され得る。
【００４０】
非経口投与用の薬学的製剤は活性化合物の水溶液を含む。注射のために、本発
明の薬学的組成物は水溶液、好ましくはハンクスの溶液、リンゲル溶液、または
緩衝化生理食塩水のような生理学的に適合する緩衝液中に処方され得る。水性注
射懸濁物は、懸濁物の粘度を増加させる物質（例えば、ナトリウムカルボキシメ
チルセルロース、ソルビトール、またはデキストラン）を含有し得る。さらに、
活性化合物の懸濁物は、適切な油状注射懸濁物として調製され得る。適切な親油
性溶媒またはビヒクルは、ゴマ油のような脂肪酸、あるいはオレイン酸エチルま
たはトリグリセリドのような合成脂肪酸エステル、またはリポソームを含む。所
望により、懸濁物は、高濃度溶液の製剤を可能にする安定化剤または化合物の溶
解度を増加させる適切な薬剤または試薬を含有し得る。
【００４１】
局所または鼻孔投与のために、浸透されるべき特定のバリアに対して適切な浸
透剤が製剤中で使用される。このような浸透剤は一般に当該分野で公知である。
【００４２】
本発明の薬学的組成物は、当該分野で公知の様式と同様の様式（例えば、従来
的な混合、溶解、顆粒化、糖衣剤作製、水簸、乳化、カプセル化、包括、または
凍結乾燥の手段によって）で製造され得る。
【００４３】
好ましくは、患部の細胞または目的とする組織の細胞内に局所投与する場合、
本発明の薬学的組成物は、キャリアとして合成または天然の親水性ポリマーを含
み有る。このような親水性ポリマーの例として、ヒドロキシプロピルセルロース
、ポリエチレングリコールが挙げられる。本発明のデコイ化合物を、適切な溶媒
中のこのような親水性ポリマーと混合し、溶媒を、風乾などの方法により除去し
て、所望の形態、例えば、シート状に成型した後、標的部位に付与し得る。この
ような親水性ポリマーを含む製剤は、水分含量が少ないので、保存性に優れ、使
用の際には、水分を吸収してゲル状になるので、デコイ化合物の貯留性に優れる
。
このようなシートは上記の組成以外にも類似物として、セルロース、デンプン及
びその誘導体あるいは合成高分子化合物などに多価アルコールを混合し硬度を調
整して形成した親水性シートも利用できる。
【００４４】
このようなシートは、例えば、腹腔鏡技術を用いて、腹腔鏡下で標的部位に付
与され得る。現在、腹腔鏡手術は、非侵襲手法として目覚しく発展し、本発明の
薬学的組成物と組み合わせることにより、非侵襲的であって、繰り返し治療が可
能な疾患の処置法が提供され得る。
【００４５】
あるいは、デコイとして核酸またはその修飾体を用いる場合には、本発明の薬
学的組成物は、一般に用いられている遺伝子導入法で用いられる形態、例えば、
センダイウイルス等を用いた膜融合リポソーム製剤や、エンドサイトーシスを利
用するリポソーム製剤等のリポソーム製剤、リポフェクトアミン（ライフテック
オリエンタル社製）等のカチオン性脂質を含有する製剤、またはレトロウイルス
ベクター、アデノウイルスベクター等を用いるウイルス製剤を用いるのが有利で
あり、特に、膜融合リポソーム製剤が好適である。
【００４６】
リポソーム製剤は、そのリポソーム構造体が、大きな１枚膜リポソーム（ＬＵ
Ｖ）、多重膜リポソーム（ＭＬＶ）、小さな一枚膜リポソーム（ＳＵＶ）のいず
れであってもよい。その大きさも、ＬＵＶでは２００から１０００ｎｍ、ＭＬＶ
では４００〜３５００ｎｍ、ＳＵＶでは２０〜５０ｎｍ程度の粒子系をとり得る
が、センダイウイルス等を用いる膜融合リポソーム製剤の場合は粒子系２００〜
１０００ｎｍのＭＬＶを用いるのが好ましい。
【００４７】
リポソームの製造方法は、デコイが保持されるものであれば特に限定されるも
のではなく、慣用の方法、例えば、逆相蒸発法（Ｓｚｏｋａ、Ｆら、Ｂｉｏｃｈ
ｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ、Ｖｏｌ．６０１ ５５９（１９８０））、エ
ーテル注入法（Ｄｅａｍｅｒ、Ｄ．Ｗ．：Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．
，Ｖｏｌ．３０８ ２５０（１９７８））、界面活性剤法（Ｂｒｕｎｎｅｒ，Ｊ
ら：Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ，Ｖｏｌ．４５５ ３２２（１
９７６））等を用いて製造することができる。
【００４８】
リポソーム構造を形成するための脂質としては、リン脂質、コレステロール類
や窒素脂質等が用いられるが、一般に、リン脂質が好適であり、ホスファチジル
コリン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジル
イノシトール、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジン酸、カルジオ
リピン、スフィンゴミエリン、卵黄レシチン、大豆レシチン、リゾレシチン等の
天然リン脂質、あるいはこれらを定法に従って水素添加したものの他、ジセチル
ホスフェート、ジステアロイルホスファチジルコリン、ジパルミトイルホスファ
チジルコリン、ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン、ジパルミトイ
ルホスファチジルセリン、エレオステアロイルホスファチジルコリン、エレオス
テアロイルホスファチジルエタノールアミン、エレオステアロイルホスファチジ
ルセリン等の合成リン脂質を用いることができる。
【００４９】
これらのリン脂質を含む脂質類は単独で用いることができるが，２種以上を併
用することも可能である。このとき、エタノールアミンやコリン等の陽性基をも
つ原子団を分子内にもつものを用いることにより、電気的に陰性のデコイ核酸の
結合率を増加させることもできる。これらリポソーム形成時の主要リン脂質の他
に一般にリポソーム形成用添加剤として知られるコレステロール類、ステアリル
アミン、α−トコフェロール等の添加剤を用いることもできる。
【００５０】
このようにして得られるリポソームには、患部の細胞または目的とする組織の
細胞内への取り込みを促進するために、膜融合促進物質、例えば、センダイウイ
ルス、不活化センダイウイルス、センダウイルスから精製された膜融合促進タン
パク質、ポリエチレングルコール等を添加することができる。
【００５１】
リポソーム製剤の製造法の例を具体的に説明すると、例えば、前記したリポソ
ーム形成物質を、コレステロールとともにテトラヒドロフラン、クロロホルム、
エタノール等の有機溶媒に溶解し、これを適切な容器に入れて減圧下に溶媒を留
去して容器内面にリポソーム形成物質の膜を形成する。これにデコイを含有する
緩衝液を加えて攪拌し、得られたリポソームにさらに所望により前記の膜融合促
進物質を添加した後、リポソームを単離する。こりようにして得られるデコイを
含有するリポソームは適当な溶媒中に懸濁させるか、または一旦凍結乾燥したも
のを、適当な溶媒に再分散させて治療に用いることができる。膜融合促進物質は
リポソーム単離後、使用までの間に添加してもよい。
【００５２】
本発明の薬学的組成物は、デコイ化合物が意図される目的を達成するのに有効
な量で含有される組成物を含む。「治療的有効量」または「薬理学的有効量」は
当業者に十分に認識される用語であり、意図される薬理学的結果を生じるために
有効な薬剤の量をいう。従って、治療的有効量は、処置されるべき疾患の徴候を
軽減するのに十分な量である。所定の適用のための有効量（例えば、治療的有効
量）を確認する１つの有用なアッセイは、標的疾患の回復の程度を測定すること
である。実際に投与される量は、処置が適用されるべき個体に依存し、好ましく
は、所望の効果が顕著な副作用をともなうことなく達成されるように最適化され
た量である。治療的有効用量の決定は十分に当業者の能力内にある。
【００５３】
いずれの化合物についても、治療的有効用量は、細胞培養アッセイまたは任意
の適切な動物モデルのいずれかにおいて、最初に見積もられ得る。動物モデルは
また、所望の濃度範囲および投与経路を達成するために用いられる。次いで、こ
のような情報を用いて、ヒトにおける投与に有用な用量および経路を決定するこ
とができる。
【００５４】
治療的有効量とは、疾患の徴候または状態を軽減するデコイ化合物の量をいう
。このような化合物の治療効果および毒性は、細胞培養または実験動物における
標準的な薬学的手順（例えば、ＥＤ50、集団の５０％において治療的に有効な用
量；およびＬＤ50、集団の５０％に対して致死的である用量）によって決定され
得る。治療効果と毒性効果との間の用量比は治療係数であり、それは比率ＥＤ50
／ＬＤ50として表され得る。大きな治療係数を呈する薬学的組成物が好ましい。
細胞培養アッセイおよび動物実験から得られたデータが、ヒトでの使用のための
量の範囲を公式化するのに使用される。このような化合物の用量は、好ましくは
、毒性をほとんどまたは全くともなわないＥＤ50を含む循環濃度の範囲内にある
。この用量は、使用される投与形態、患者の感受性、および投与経路に依存して
この範囲内で変化する。一例として、デコイの投与量は、年齢その他の患者の条
件、疾患の種類、使用するデコイの種類等により適宜選択されるが、例えば、血
液内投与、筋肉内投与、関節内投与では、一般に、１回あたり、１μｇ〜１００
ｍｇを１日１回から数回投与することができる。
【００５５】
正確な用量は、治療されるべき患者を考慮して、個々の臨床医によって選択さ
れる。用量および投与は、十分なレベルの活性部分を提供するか、または所望の
効果を維持するように調整される。考慮され得るさらなる因子としては、疾患状
態の重症度（例えば、腫瘍のサイズおよび位置；患者の年齢、体重、および性別
；投与の食餌制限時間、および頻度、薬物組合せ、反応感受性、および治療に対
する耐性／応答）が挙げられる。特定の製剤の半減期およびクリアランス速度に
応じて、持続作用性薬学的組成物は、３〜４日毎に、毎週、または２週間に１回
、投与され得る。特定の用量および送達の方法に関するガイダンスは当該分野で
公知の文献に提供されている。
【００５６】
この様にして得られたデコイを主成分として含有する医薬品は、疾患の種類、
使用するデコイの種類等により各種の方法で投与することができ、例えば、虚血
性疾患、炎症性疾患、自己免疫疾患および癌の転移・浸潤、悪疫質においては血
管内投与、疾患部位に塗布、疾患部位内に投与または疾患部位に血管内投与等す
ることができる。さらに具体的な例としては、例えば、臓器梗塞等でＰＴＣＡを
行う場合には、同時またはその前後に患部血管に投与することができ、また臓器
移植等では移植する臓器を予め本願で用いられる製剤で処置して用いてもよい。
また、例えば、慢性関節リウマチ等では、直接関節内に注入して用いることもで
きる。
【実施例】
【００５７】
以下実施例を用いて本発明を説明するが、これらの実施例は、本発明の例示で
あって、限定を意図するものではない。
【００５８】
（実施例１：ヒト大動脈瘤サンプルにおけるｅｔｓ−１の過剰発現）
ｅｔｓ−１は、ＭＭＰ遺伝子の発現を制御する転写因子の１つである。手術に
より除去（摘出）された大動脈瘤サンプルをホルマリン固定し、ｅｔｓ−１に対
する抗体（Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ社（ＵＳＡ））
を用い、常法にて免疫染色を行った。図１、２および３に示すように、いずれの
大動脈瘤サンプルにおいても、主として外膜にｅｔｓ−１の存在が認められた。
【００５９】
図１の左は、ヒト大動脈起始部の光学顕微鏡写真（×１００倍）、そして図１
の右は、図１の左の矩形の区画の同拡大写真（×４００倍）である。
【００６０】
図２の左は、ヒト大動脈最拡張部の光学顕微鏡写真（×１００倍）、そして図
２の右もまた、ヒト大動脈最拡張部の別の部分の蛍光顕微鏡写真（×２００倍）
である。
【００６１】
図３は、ヒト大動脈最拡張部の光学顕微鏡写真（×４００倍）であって、図２
の矩形で示した区画の拡大写真である。図３の左は、図２の右の大きい方の矩形
の区画の同拡大写真（×４００倍）であり、そして図３の右は、図２の右の小さ
い方の矩形の区画の同拡大写真（×４００倍）である。
【００６２】
（実施例２：オーガンカルチャー（組織培養系）におけるデコイ核酸の効果）
手術時に除去された大動脈瘤サンプルを用い、オーガンカルチャー（組織培養
系）でデコイ核酸導入によるＭＭＰ遺伝子の発現抑制効果を試験した。
【００６３】
ヒト大動脈瘤を手術時に取り出し、２ｍｍ2のサンプルに分割した。１００μ
Ｍのそれぞれのデコイあるいはスクランブルデコイ（共に北海道システムサイエ
ンス社にて合成）を含む１０％コラーゲゲルに室温で１時間浸した。その後ゲル
の付着したまま２４ウェルプレートに入れ、培養液（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ ｍ
ｏｄｉｆｉｅｄ Ｅａｇｌｅ’ｓ ｍｅｄｉｕｍ，１％ ＦＣＳ）を１．５ｍｌ
ずつ入れた。以降、３７℃インキュベーターにて培養した。培養液は２４時間後
にウォッシュアウトし、新しい培養液に変更する。さらに４８時間後、培養液中
のＭＭＰ１、ＭＭＰ９を常法に従い、ＥＬＩＳＡ（Ａｍｅｒｓｈａｍ ｐｈａｒ
ｍａｃｉａ ｂｉｏｔｅｃｈ社製）にて測定した。
使用したデコイ：
ＮＦ−κＢデコイ（配列番号１）
【００６４】
【化１】
ＮＦ−κＢスクランブルデコイ（配列番号２）
【００６５】
【化２】
ｅｔｓデコイ（配列番号３）
【００６６】
【化３】
ｅｔｓスクランブルデコイ（配列番号４）
【００６７】
【化４】
結果を、図４および図５に示す。図４および図５の縦軸は、４５０ｎｍにおけ
る吸光度を示し、横軸のｕｎｔｒｅａｔ、ＮＦｓｄ、ＮＦ、ｅｔｓ−ｓｄおよび
ｅｔｓは、それぞれ、核酸試薬を含まず（コントロール）、ＮＦ−κＢスクラン
ブルデコイ、ＮＦ−κＢデコイ、ｅｔｓスクランブルデコイ、およびｅｔｓデコ
イをそれぞれ示す。図中の各棒の上部に記載の横棒は標準偏差を表し、そして図
中の各棒の間をつなぐ線の上にあるＰは、この線でつながれる群間の比較に用い
た有意水準を表し、棒の上にある＊＊はその群の平均値がコントロールに対して
統計的に有意水準１％（図４）または５％（図５）で平均値の差が有意であるこ
とを示す（Ｆｉｓｈｅｒ検定）。
【００６８】
図４および図５に示されるように、ｅｔｓデコイ投与群において、ＭＭＰ１お
よびＭＭＰ９の産生は、コントロール群およびｅｔｓスクランブルデコイ投与群
に比べ有意に抑制された。そしてＮＦ−κＢデコイ投与群においてもまた、ＭＭ
Ｐ１およびＭＭＰ９の産生は、コントロール群およびＮＦ−κＢスクランブルデ
コイ投与群に比べ有意に抑制された。
【００６９】
（実施例３：オーガンカルチャー（組織培養系）におけるデコイ核酸およびダ
ブルデコイ核酸の濃度依存的効果）
デコイ核酸として１００μＭおよび６００μＭ濃度のＮＦ−κＢデコイ、およ
び１００および６００μＭ濃度の以下に示す構造のダブルデコイおよびダブルス
クランブルデコイを用いた点を除いて、実施例２と同様の方法でオーガンカルチ
ャー（組織培養系）におけるデコイ核酸添加によるＭＭＰ遺伝子の発現抑制効果
を試験した。
使用したダブルデコイ（配列番号５）
【００７０】
【化５】
ダブルスクランブルデコイ（配列番号６）
【００７１】
【化６】
結果を、図６および図７に示す。図６および図７の縦軸は、４５０ｎｍにおけ
る吸光度を示し、横軸のｕｎｔｒｅａｔ、ＮＦｓｄ、ＮＦ１００、ＮＦ６００、
ＤＤ ｓｄ、ＤＤ１００およびＤＤ６００は、それぞれ、核酸試薬を含まず（コ
ントロール）、ＮＦ−κＢデコイ１００μＭ、ＮＦ−κＢデコイ６００μＭ、ダ
ブルスクランブルデコイ、ダブルデコイ１００μＭ、およびダブルデコイ６００
μＭをそれぞれ示す。図中の各棒の上部に記載の横棒は、標準偏差を表し、そし
て図中の各棒の間をつなぐ線の上にあるＰは、この線でつながれる群間の比較に
用いた有意水準を表し、＊および＊＊は、コントロールに対して統計的にそれぞ
れ有意水準５％および１％で平均値の差が有意であることを、＃および‡はそれ
ぞれＮＦ１００およびＮＦ６００群の結果に対して有意水準５％で平均値の差が
有意であることをそれぞれ示す（Ｆｉｓｈｅｒ検定）。
【００７２】
図６および図７に示されるように、ＮＦ−κＢ投与群において、ＭＭＰ１およ
びＭＭＰ９の産生は、コントロール群およびＮＦ−κＢスクランブルデコイ投与
群に比べ有意に抑制され、そしてその効果は濃度依存性であった。そしてダブル
デコイ投与群においてもまた、ＭＭＰ１およびＭＭＰ９の産生は、ダブルデコイ
投与群において、スクランブルデコイ投与群に比べ有意に抑制された。そしてダ
ブルデコイの効果は、ＮＦ−κＢデコイ投与群に比べより効果的であった。
【００７３】
（実施例４：インビボにおけるデコイ核酸の効果）
ラットを用い、インビボにおけるデコイ核酸付与によるＭＭＰ遺伝子の発現抑
制効果を試験した。
【００７４】
ラット(ＳＤラット、１２週令)を麻酔下に開腹し、以下の組成のＡＤフィルム
（大きさ１ｃｍ×１ｃｍ）をほぼ１ｃｍの長さにわたって、腹部大動脈に周囲に
巻き付けた。腹部を縫合した後通常の状態で飼育し、３日後に再び開腹し、血管
を取り出して蛍光顕微鏡により解析した。
ＡＤフィルムの組成：ヒドロキシプロピルセルロース １５０〜４００ｃｐｓ（
ＨＰＣ−Ｍ） ７３ｍｇ／４ｃｍ2；ポリエチレングルコール４００（ＰＥＧ）
７．３ｍｇ／４ｃｍ2；ＦＩＴＣ−標識デコイ １００ｎｍｏｌ／ｃｍ2。
ＡＤフィルムの調製方法：まず、上記のヒドロキシプロピルセルロースおよびポ
リエチレングルコールを、それぞれ１００％エタノールに溶解し混合した。この
混合液に、４００ｎｍｏｌのＦＩＴＣ−標識デコイを加えて溶解した後、風乾し
、最終的に４ｃｍ2のシートに成型した。
【００７５】
図８および図９に結果を示す。図８は、腹部大動脈壁の部分断面の蛍光顕微鏡
写真（×２００倍）である。図８の左は、ＦＩＴＣ−標識デコイを含まないＡＤ
フィルムを巻き付けたコントロールラットの腹部大動脈壁の断面の蛍光顕微鏡写
真、図８の右は、ＦＩＴＣ−標識デコイを含むＡＤフィルムを巻き付けたラット
の同蛍光顕微鏡写真である。図９は、腹部大動脈壁の断面および部分断面の蛍光
顕微鏡写真である。図９の左は、１００倍、そして図９の右は、２００倍の拡大
倍率の蛍光顕微鏡写真である。
【００７６】
図８および図９に示されるように、ＦＩＴＣ−標識デコイを含むＡＤフィルム
を巻き付けたラットの腹部大動脈壁では、血管外膜に強い緑色および中膜の一部
に緑色の蛍光が観察され、デコイが血管外膜および中膜の一部に導入されたこと
が確認された。
【００７７】
（実施例５：大動脈瘤モデルラットにおけるデコイ核酸の効果）
大動脈瘤モデルラットが確立されている（Ｉｎｄｏｍｅｔｈａｃｉｎ ｐｒｅ
ｖｅｎｔｓ ｅｌａｓｔａｓｅ−ｉｎｄｕｃｅｄ ａｂｄｏｍｉｎａｌ ａｏｒ
ｔｉｃ ａｎｅｕｒｙｓｍｓ ｉｎ ｔｈｅ ｒａｔ．Ｈｏｌｍｅｓ ＤＲ，Ｐ
ｅｔｒｉｎｅｃ Ｄ，Ｗｅｓｔｅｒ Ｗ，Ｔｈｏｍｐｓｏｎ ＲＷ，Ｒｅｉｌｌ
ｙ ＪＭ．Ｊ Ｓｕｒｇ Ｒｅｓ．１９９６ Ｊｕｎ；６３（１）：３０５−９
）。このモデルはエラスターゼをラット大動脈内に１５０ｃｍＨ2Ｏの圧力で３
０分間貯留させることで作成される。
【００７８】
図１０に示されるように、大動脈瘤モデルラットにおいてスクランブルデコイ
投与群では大動脈断面積は顕著に増大していく。しかし、ＮＦ−κＢとＥｔｓの
ダブルデコイ投与群ではその増大は２週後（図では横軸２Ｗ）、３週後（図では
横軸３Ｗ）で有意に抑制された。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
動脈瘤を治療または予防するための薬学的組成物であって、
ＮＦ−κＢとｅｔｓのキメラダブルデコイ、および
薬学的に受容可能なキャリア
を含む、組成物。
【請求項２】
前記薬学的に受容可能なキャリアが親水性ポリマーである、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記キメラダブルデコイがシート状に成型されており、患部動脈に巻き付けることにより、該デコイの局所投与が達成されることを特徴とする、請求項１または２に記載の組成物。
【請求項１】
動脈瘤を治療または予防するための薬学的組成物であって、
ＮＦ−κＢとｅｔｓのキメラダブルデコイ、および
薬学的に受容可能なキャリア
を含む、組成物。
【請求項２】
前記薬学的に受容可能なキャリアが親水性ポリマーである、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記キメラダブルデコイがシート状に成型されており、患部動脈に巻き付けることにより、該デコイの局所投与が達成されることを特徴とする、請求項１または２に記載の組成物。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【公開番号】特開２００９−１８５０６４（Ｐ２００９−１８５０６４Ａ）
【公開日】平成２１年８月２０日（２００９．８．２０）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００９−１２２５８０（Ｐ２００９−１２２５８０）
【出願日】平成２１年５月２０日（２００９．５．２０）
【分割の表示】特願２０００−３９９６１３（Ｐ２０００−３９９６１３）の分割
【原出願日】平成１２年１２月２７日（２０００．１２．２７）
【出願人】（５００４０９３２３）アンジェスＭＧ株式会社 (34)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２１年８月２０日（２００９．８．２０）
【国際特許分類】
【出願日】平成２１年５月２０日（２００９．５．２０）
【分割の表示】特願２０００−３９９６１３（Ｐ２０００−３９９６１３）の分割
【原出願日】平成１２年１２月２７日（２０００．１２．２７）
【出願人】（５００４０９３２３）アンジェスＭＧ株式会社 (34)
【Ｆターム（参考）】
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