トリテルペン化合物、その製造方法及びそれを有効成分として含有する発癌プロモーション抑制組成物
【課題】新規なトリテルペン化合物、その製造方法及びそれを有効成分として含有する癌抑制剤の提供。
【解決手段】カバノアナタケに含有する成分の各種トリテルペンを抽出し、トリテルペンの新規物質も含むそれらの構造を決定し、各物質における発ガンのプロモーション段階を抑制する癌抑制剤を開発した。それらの製造方法も開示した。またトリテルペンであるイノトジオールが、悪性の強いｐ３８８マウスリンパ性白血病細胞に対する抑制効果を持つことも明らかにした。
【解決手段】カバノアナタケに含有する成分の各種トリテルペンを抽出し、トリテルペンの新規物質も含むそれらの構造を決定し、各物質における発ガンのプロモーション段階を抑制する癌抑制剤を開発した。それらの製造方法も開示した。またトリテルペンであるイノトジオールが、悪性の強いｐ３８８マウスリンパ性白血病細胞に対する抑制効果を持つことも明らかにした。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
新規なトリテルペン化合物、その製造方法及びそれを有効成分として含有する癌抑制剤に関する発明。
【背景技術】
【０００１】
高齢化社会に入りますます健康を渇望する人が増加している。ウイルスの変種も最新の課題として取りざたされている。その中に癌は重い課題として人類を迎え撃っている。診療及び治療法の開発等により、癌は昨今と比べるとずっと「治る病気」となりつつあるが、高齢化社会の進行とともに羅患者と死亡者は依然として増加している。日本癌学会の発表によると現在、死亡統計上３人に１人は癌によって死亡していると報告されている。癌の抑制については、羅患後の医療だけではなく、癌が発生する前にその発生を抑えようとする考え方、即ち癌予防に対する関心も近年高まりつつある。
癌の抑制のうち羅患後の治療において、悪性腫瘍、即ち癌に対する治療法は早期発見・外科的手術とともに化学療法が併用されているが、臨床的に実用又は試用されている多くの抗癌剤は、例えば、固形癌に対して必ずしも充分に満足できる効果を有するものではないと言わざるを得ない場合が存在している。
一方、癌の抑制のうち癌予防において、化学物質による癌発症（化学発癌）の機構に関しては、近年、発癌イニシエーション及び発癌プロモーションと呼ばれる二つの過程を経由すると考える発癌二段階説が広く認められている。
【０００２】
イニシエーションとは、発癌イニシエーターと総称される物質が、正常細胞のＤＮＡに不可逆的に損傷を与えて潜在性細胞（ｉｎｉｔｉａｔｅｄ ｃｅｌｌ）に変化させる過程であり、発癌プロモーションとは、発癌プロモーターと総称される物質が、発癌イニシエーターで生じた発癌潜在性細胞に働きかけ、それを癌細胞に導く過程である。発癌イニシエーション及び発癌プロモーションの両方の過程を抑えることができれば、癌の発生を抑制することが可能となる。とりわけ、発癌プロモーションの抑制は、正常細胞に復帰することのできない潜在性細胞を既に保有する固体に対しても有効な発癌抑制手段となる。
【発明の技術分野】
【０００３】
木材腐朽菌キノコの新規トリテルペン、具体的にはカバノアナタケ［学名Ｉｎｏｎｏｔｕｓｏｂｌｉｑｕｕｓ］に含有されるトリテルペンの製造方法とその発癌プロモーション抑制活性を持つ組成物及び抗癌剤に関する。
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
上記前者の治療の観点からは、腫瘍の縮小・撲滅及び成長の抑制に有効な医薬となり得るよう殺癌細胞活性化合物の開発が切望されており、一方、上記後者発癌の予防の観点からは、発癌プロモーションを抑制する活性を有する成分を含有し発癌の抑制に有効な医薬品、食品等の発癌プロモーション抑制化合物の開発が切望されていてカバノアナタケの化合物からそうした作用をもつ抗癌剤を提供する。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明者らは、担子菌キノコ類、中でもカバノアナタケ菌核から分離精製されたトリテルペン化合物類が、発癌のプロモーションを抑制する活性（以下、発癌プロモーション抑制活性と記すこともある。）を有することを見出し、本発明に至った。
即ち本発明は、
１．式（Ｉ）で示されるトリテルペン化合物又はその薬学的に許容される塩。
２．前項１記載のトリテルペン化合物又はその薬学的に許容される塩を担子菌キノコ類、中でもカバノアナタケ菌核から抽出する工程を有することを特徴とするトリテルペン化合物の製造方法。
【０００６】
本発明化合物には不斉炭素が存在するが、発癌プロモーション抑制活性を有する限り可能な立体配置の化合物が全て含まれる。
カバノアナタケにおけるトリテルペン成分に関しては申らの抽出方法［文献：申有英 他，Ｅｕｒａｓｉａｎ Ｊ．Ｆｏｒ．Ｒｅｓ．１：４３−５０（２０００）；日本木材学会北海道支部講演集 第３０号 平成１０年１１月ｐ７５−７７；Ｙｕｓｏｏ Ｓｈｉｎ ｅｔ．ａｌ．，Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｍｕｓｈｒｏｏｍｓ Ｖｏｌ．２，ｐｐ．２０１−２０７（２０００）］で示されているが、それはエタノール抽出方法を用いるためカバノアナタケに含有されるトリテルペン成分の全体を抽出することは、他の成分が混在しているため不適であった。また、トリテルペン成分が抽出されてもごく一部分であった。種々検討した結果、クロロホルムによる抽出方法を表１に示すごとく確立するに至った。これはエタノール抽出方法の約１０００倍の抽出効率があった。クロロホルムの後、メタノールで抽出を行った。メタノールエキスにはトリテルペン画分は溶出されない。
【０００７】
また、本成分のトリテルペンにおけるｉｎ ｖｉｔｒｏ ＥＢＶ−ＥＡ誘導化抑制活性およびｉｎ ｖｉｖｏ発癌プロモーション抑制活性、すなわち生体（マウス）を実験系に取り入れ証明したものは今迄になかった。本技術をすべて開示している訳ではないが，日本薬学会１２５年会（３月３１日）において本成分の一部およびｉｎ ｖｉｔｒｏマウス白血病細胞Ｐ３８８のスクリーニングの結果を明らかにしている．
【０００８】
本発明化合物のプロモーション抑制活性を測定する方法としては、例えば、ＥＢＶ−ＥＡ誘導試験法［文献：Ｋｏｎｉｓｈｉ，Ｔ．ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｌ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．，２１，９９３（１９９８）］が挙げられる。この試験法は、１２−Ｏ−テトラデカノイルホルボール−１３−アセテート（以下ＴＰＡと記す。）、テレオシジン等の発癌プロモーターが、バーキットリンパ腫由来エプスタイン・バー・ウイルス潜在感染ヒトリンパ芽球様細胞株（Ｒａｊｉ細胞、ＡＴＣＣから入手可能）中に潜在するエプスタイン・バー・ウイルス（以下、ＥＢＶと記す。）を活性化する現象に基づいた方法であり、当該測定の工程としては、まず前記のような発癌プロモーターと被検物質とをＲａｊｉ細胞に接触させ、発癌プロモーターによるＥＢＶ活性化を被検物質が抑制する効力を測定する。当該方法で測定されたＥＢＶ活性化抑制活性とｉｎ ｖｉｖｏ発癌プロモーション抑制活性との高い相関性が、多くの化合物で示されている。
【０００９】
さらにまた、プロモーション抑制活性は、げっ歯類を用いたｉｎ ｖｉｖｏ二段階発癌実験によって調べることもできる。例えば、マウスの背中の毛を手術用バリカン等で刈り落とし、背中の皮膚に、アセトン又はメタノール等の有機溶媒に溶解した７，１２−ジメチルベンズアントラセン（以下、ＤＭＢＡと記す。）を適量、例えば、約１μｇ〜１０００μｇ程度塗布する。ＤＭＢＡ塗布より一定期間（例えば、１週間）経過した後から、被検物質とを一定頻度（例えば、週２回程度）で皮膚に塗布する。具体的に例えば、前記のようにＤＭＢＡを塗布した皮膚に、まずアセトン又はメタノール等の有機溶媒に溶解した被検物質を塗布し、約１時間後に、アセトン又はメタノール等の有機溶媒に溶解したＴＰＡを適量（例えば、約０．１μｇ〜１０μｇ程度）塗布する。このような処理を行いながら、一定期間（例えば、約１０〜５０週間程度）に渡って経時的に観察を行い、処理を行った背中の皮膚に腫瘍の発生したマウスの数及び発生した腫瘍の数を測定する。被検物質とＴＰＡを塗布した群における腫瘍の発生したマウスの数及び発生した腫瘍の数を、被検物質の代わりに溶媒を塗布した群における腫瘍の発生したマウスの数及び発生した腫瘍の数と比較することにより、被検物質の発癌プロモーション抑制活性を調べることができる。
【００１０】
本発明の発癌プロモーション抑制組成物は、例えば、本発明化合物を含む天然由来の抽出物若しくはその加工品、本発明化合物自体、或いは、本発明化合物と、医薬担体若しくは賦形剤、食品成分又は化粧品成分等とが混合されてなる組成物等を含み、腫瘍や癌の発生を抑制し、かつ、発生した腫瘍や癌を治療する医薬品、食品又は化粧品等として利用され得る。用いられる医薬担体若しくは賦形剤、食品成分又は化粧品成分等は、当該癌抑制剤の具体的用途に応じて適宜選択することができる。また、抑制剤の形態も、具体的用途に応じて、例えば、種々の固体や液体の形態とすることができる。
【００１１】
例えば、本発明化合物を医薬品として用いる場合には、その投与形態を必要に応じて適宜選択することができる。具体的な形態としては、例えば、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤等の経口剤、注射剤、経皮吸収剤、ローション剤、クリーム剤、軟膏剤、坐剤等の非経口剤等をあげることができる。これら製剤は常法に準じて製造すればよい。
【実施例】
【００１２】
以下、実施例により本研究を更に詳細に説明するが、本研究はこれらによって限定されるものではない。
参考１（本化合物の調製）
北海道名寄市（株）サラダメロン構内において採取されたカバノアナタケの菌核１０ｋｇを細かく刻み、２０Ｌのクロロホルム、６０℃にて２週間浸漬し、濾過後、濾液を減圧下、溶媒を留去して、クロロホルムエキス２００ｇを得た。表１に示すように当該エキス全量をクロロホルムに溶かし、クロロホルムで調製したシリカゲル（シリカゲル６０，メルク社製）３．５ｋｇを用いたカラムクロマトグラフィーに供し、クロロホルム及び酢酸エチルの混合溶媒（クロロホルム：酢酸エチル＝１０：１）を流して１Ｌずつ分画を行い、フラクション４０−４６を集めた画分Ａ（１８．０ｇ，７ｘ１Ｌ）及びフラクション４７−５２を集めた画分Ｂ（４９．０ｇ，６ｘ１Ｌ）を得た。次にクロロホルム：酢酸エチル＝５：１を流して１Ｌずつ分画を行い、フラクション６２−７０を集めた画分Ｃ（３．０ｇ，９ｘ１Ｌ）及びフラクション７１−７９を集めた画分Ｄ（６．０ｇ，９ｘ１Ｌ）を得た。さらにクロロホルム：酢酸エチル＝２：１を流して１Ｌずつ分画を行い、フラクション８０−１０５を集めた画分Ｅ（１２．５ｇ，２６ｘ１Ｌ）を得た。以上得られた各画分をさらにシリカゲルカラムクロマトグラフィー及びＯＤＳとメタノール系による高速液体クロマトグラフィーにより分離精製し、化合物の単離を行った。画分Ａをシリカゲルカラムクロマトグラフィーに供し、クロロホルムで溶出するフラクションより化合物３、クロロホルム：酢酸エチル＝５：１で溶出するフラクションより化合物６及び７、さらにクロロホルム：酢酸エチル＝２：１で溶出するフラクションより化合物８及び９をそれぞれ得た。画分Ｂからはクロロホルムで溶出するフラクションより化合物１、４、５および１１を得た。画分Ｄからはクロロホルムで溶出するフラクションより化合物１０を、画分Ｅからはクロロホルム：酢酸エチル＝５：１で溶出するフラクションより化合物２を得た。
【００１３】
【表１】
【００１６】
試験例１（プロモーション抑制活性の測定）
参考１で得られた化合物１、２、２−アセテート、３、４、５、６、７、７アセテート及び１１について、ＥＢＶ活性化抑制試験法（Ｋｏｎｉｓｈｉ，Ｔ．ｅｔ．ａｌ．，Ｂｉｏｌ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．，２１，９９３（１９９８））により、プロモーション抑制活性の測定を行った。パーキットリンパ腫由来ＥＢＶ潜在感染ヒトリンパ芽球細胞株（Ｒａｊｉ細胞）の培養には、ＰＰＭＩ １６４０培地（日水製薬）に１０ｖ／ｖ％となるように牛胎仔血清（ＧＩＢＣＯ−ＢＲＬ）を加えた培地を使用した。この培地で培養した場合のＥＢＶの活性化率（Ｒａｊｉ細胞の自然誘発率）は、０．１％以下であった．前記培地で培養したＲａｊｉ細胞の培養液を１ｘ１０６細胞／ｍｌとなるように調製し、ＤＭＳＯに溶解した酪酸（終濃度４ｍＭ）とＴＰＡ（終濃度２０ｎｇ／ｍｌ）とを加えて、ＣＯ２インキュベーター中で ３７℃にて４８時間培養した後、得られた培養液の塗沫標本を作製した。上咽頭がん患者血清を用いた間接蛍光抗体法によりＥＢＶ初期抗原（ＥＢＶ−ＥＡ）を染色し、陽性細胞（該初期抗原の発現した細胞）の発現率を測定してこれを陽性コントロール（１００）とした。一方、前記と同様に調製したＲａｊｉ細胞の培養液に、ＤＭＳＯにを染色し、陽性細胞（該初期抗原の発現した細胞）の発現率を測定してこれを陽性コントロール（１００）とした。一方、前記と同様に調製したＲａｊｉ細胞の培養液に、ＤＭＳＯに溶解した酪酸（終濃度４ｍＭ）とＴＰＡ（終濃度２０ｎｇ／ｍｌ）
および被験化合物を加えて同様に培養した後、陽性細胞の発現率を測定し陽性コントロ−ル（１００）に対する割合（％）を求めた。各試験において、少なくとも５００細胞を測定し、また３回の繰り返し実験を行った。なお毎回、ＴＰＡおよび被験化合物は添加せず酪酸だけを添加した系（陰性コントロール）と上記陽性コントロールについての試験を併行して行った。
【００１７】
測定結果を表２に示した。いずれの化合物についても、用量相関的にＥＢＶ−ＥＡの活性化の抑制が認められた。なお，化合物１、２、２−アセテート、３、４、５、６、７、７アセテート及び１１はいずれの試験においても、細胞に対する強い毒性は認められなかった。マウス及び豚では０．１ｇ（体重１ｋ当り）経口投与でも毒性はでない。
【表２】
【００１８】
試験例２（マウス皮膚２段階発癌実験におけるプロモーション抑制活性の測定）
参考１で得られた化合物１について、マウスを用いた２段階発癌実験法により、プロモーション抑制活性の測定を行った。６週齢のＩＣＲ雌マウスの背部の毛を剃り、０．１ｍｌに溶解した化合物１を前記のＤＭＢＡ塗布部位に塗布し、溶媒処置群には、化合物１に替えてアセトン（０．１ｍｌ）を塗布した。次いで１時間後に、被験化合物処置群および溶媒処置群のいずれにも、前記の塗布部位に、０．１ｍｌのアセトンに溶解したＴＰＡ（１ｍｇ，１．７ｎｍｏｌ）を塗布し、以後週２回の頻度で、２０週に亘ってＴＰＡを同様に塗布した。マウスは１群当たり３匹を使用した。プロモーション抑制活性は、パピローマが発生したマウスの数と、マウス１匹当たりのパピローマ発生数の平均値とを被験化合物処置群と溶媒処置群とで比較することにより判定した。その結果、図２および３に示すように、化合物１はＴＰＡによる発癌プロモーションに対し抑制活性を示した。
（図２）マウス皮膚二段階発癌実験法により、化合物１のプロモーション抑制活性を測定した結果を示す図である。横軸は、ＴＰＡ及び被検化合物を皮膚に塗布したプロモーションの期間（週）を示す。縦軸は、各処理群におけるパピローマの発生頻度を百分率にて示す。
（図３）マウス皮膚二段階発癌実験法により、化合物１のプロモーション抑制活性を測定した結果を示す図である。横軸は、ＴＰＡ及び被検化合物を皮膚に塗布したプロモーションの期間（週）を示す。縦軸は、各処理群における個体あたりのパピローマの発生数を個数にて示す。
【００１９】
Ｐ３８８マウスリンパ性白血病細胞に対する増殖阻害活性試験を代表としてトリテルペン４種でおこなった。（被検物１，２，５，７は化合物１，２，５，７と同じ表現である。）以下の方法で行い結果をえた。
Ｐ３８８マウスリンパ性白血病細胞に対する増殖阻害活性試験
［方法］
１０％牛胎児血清含有イーグルＭｉｎｉｍｕｍ Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ Ｍｅｄｉｕｍを用いて，Ｐ３８８マウスリンパ性白血病細胞を３７℃で培養し、約７×１０５ｃｅｌｌ／ｍｌになったところで培養液を９００ｒｐｍ、５分間、遠心分離した。上澄液を捨て、残った細胞に一定量の培地を加え１×１０５ｃｅｌｌ／ｍｌ（初濃度）の細胞浮遊液を調節した。一方、検体をＤＭＳＯで溶解（１０ｍｇ／ｍｌ）し，培地で２００，２０，２μｇ／ｍｌになるように希釈した。またコントロールの溶液はＤＭＳＯの濃度が２，０．２，０．０２％になるように希釈した。９６穴マイクロプレートの各穴に検体又はコントロールの溶液と細胞の浮遊溶液を各々１００μｌ入れ、ＣＯ２インキュベーター内で３７℃、１３日間培養した後、ＭＴＴ（６ｍｇ／ｍｌ，リン酸緩衝液）２５μｌを加え、細胞を染色する。４時間後さらにドデシル硫酸ナトリウム（２０％，０．０２Ｎ ＨＣｌ）５０μｌを加えホルマゾンを溶解し，一夜放置後マイクロプレートリーダー（ＢＩＯ ＲＡＤ ｍｏｄｅｌ４５０）で吸光度を測定した．
次式よりｇｒｏｗｔｈ（Ｇ）％を計算し，片対数グラフを用いて細胞の増殖を５０％抑制する濃
度ＥＤ５０（μｇ／ｍｌ）を求めた。
【００２０】
［結果］
試験結果を以下の表３に示した。４個の被検化合物（トリテルペン化合物）（１），（２），（５）及び（７）のうち、（２）を除くすべての化合物に縁やかな細胞増殖阻害活性が認められた。（（２）は結晶の凝結がつよい。）
【表３】
以上のようにカバノアナタケ由来のトリテルペン化合物に抗癌活性があきらかとなったから癌抑制や生理活性著大なものがある。
【００２１】
化合物１
ＮＭＲスペクトル１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ０．７３（３Ｈ，ｓ），０．８１（３Ｈ，ｓ），０．８８（３Ｈ，ｓ），０．９４（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．５Ｈｚ），０．８４（３Ｈ，ｓ），１．００（３Ｈ，ｓ），１．６５（３Ｈ，ｓ），１．７５（３Ｈ，ｓ），３．２４（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１１．８，４．５Ｈｚ），３．６７（１Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ＝９．０，５．２，４．４Ｈｚ），５．１８（１Ｈ，ｍ）．マススペクトルｍ／ｚ：４４２（２９）［Ｍ］＋，４２７（３４），４１１（４４），４０９（１６），３７２（２８），３５７（５９），３３９（１６），２９９（１８），１８７（２３），６９（１００）．
化合物２
ＮＭＲスペクトル１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ０．７５（３Ｈ，ｓ），０．８１（３Ｈ，ｓ），０．８９（３Ｈ，ｓ），０．９７（３Ｈ，ｓ），１．００（３Ｈ，ｓ），１．５９（３Ｈ，ｓ），１．６２（３Ｈ，ｓ），３．２２（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１１．８，４．８Ｈｚ）．マススペクトルｍ／ｚ：４５６（６０）［Ｍ］＋，４４１（６６），４２３（１００），３９５（１１），３０１（１０），２８１（１７），１８７（１９）．
化合物３
ＮＭＲスペクトル１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ０．６９（３Ｈ，ｓ），０．８１（３Ｈ，ｓ），０．８８（３Ｈ，ｓ），０．９１（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．５Ｈｚ），０．９８（３Ｈ，ｓ），１．００（３Ｈ，ｓ），３．２２（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１１．８，４．８Ｈｚ），５．１０（１Ｈ，ｍ）．マススペクトルｍ／ｚ：４４２（７７）［Ｍ］＋，４２７（６２），４０９（１００），３９１（２６），３５７（１５），３２７（１０），２９９（１０），２７３（１１），２５９（１１），２５５（１０）．
化合物４
ＮＭＲスペクトル１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ０．６９（３Ｈ，ｓ），０．８１（３Ｈ，ｓ），０．８７（３Ｈ，ｓ），０．９１（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．５Ｈｚ），０．９８（３Ｈ，ｓ），１．００（３Ｈ，ｓ），３．２２（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１１．８，４．８Ｈｚ），４．０１（１Ｈ，ｍ），４．８２（１Ｈ，ｓ），４．９３（１Ｈ，ｓ），マススペクトルｍ／ｚ：４４２（７７）［Ｍ］＋，４２７（６２），４０９（１００），３９１（２６），３５７（１５），３２７（１０），２９９（１０），２７３（１１），２５９（１１），２５５（１０）．
化合物５
ＮＭＲスペクトル１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ０．６９（３Ｈ，ｓ），０．８１（３Ｈ，ｓ），０．９０（３Ｈ，ｓ），０．９６（３Ｈ，ｓ），１．００（３Ｈ，ｓ），１．５７（３Ｈ，ｓ），１．６８（３Ｈ，ｓ），３．２４（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１１．５，４．４Ｈｚ），５．０４（１Ｈ，ｍ），９．４６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．５Ｈｚ）．マススペクトルｍ／ｚ：４４０（５４）［Ｍ］＋，４２５（１００），４０７（９７），３８９（１６），３５８（６８），２９９（５９），２８８（５１），２８１（５９），２７３（３０），２４７（２４）．
化合物６
ＮＭＲスペクトル１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ０．７３（３Ｈ，ｓ），０．８０（３Ｈ，ｓ），０．９０（３Ｈ，ｓ），０．９７（３Ｈ，ｓ），０．９９（３Ｈ，ｓ），１．２０（３Ｈ，ｓ），１．２２（３Ｈ，ｓ），３．２３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１１．５，４．４Ｈｚ），３．７２（１Ｈ，ｍ）．マススペクトルｍ／ｚ：４５８（４５）［Ｍ］＋，４４３（３２），４２５（１００），４０７（９０），３８９（１３），２９９（４５），２８１（２８），
化合物７
ＮＭＲスペクトル１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ０．７１（３Ｈ，ｓ，Ｈ−１８），０．８１（３Ｈ，ｓ，Ｈ−２９），０．８６（３Ｈ，ｓ，Ｈ−３０），０．８８（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，Ｈ−２１），０．９８（３Ｈ，ｓ，Ｈ−１９），１．００（３Ｈ，ｓ，Ｈ−２８），１．０５（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１２．８，３．０Ｈｚ，Ｈ−５），１．１９（１Ｈ，ｍ，Ｈ−１５α），１．２２（３Ｈ，ｓ，Ｈ−２７），１．２３（３Ｈ，ｓ，Ｈ−２６），１．２３（１Ｈ，ｔｄ，Ｊ＝１３．５，４．２Ｈｚ，Ｈ−１α），１．４０（１Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ＝１２．０，１０．８，７．２Ｈｚ，Ｈ−１７），１．４８（１Ｈ，ｍ，Ｈ−１６β），１．５０（１Ｈ，ｍ，Ｈ−６β），１．５８（１Ｈ，ｔｄｄ，Ｊ＝１３．５，１１．７，４．２Ｈｚ，Ｈ−２β），１．６２（１Ｈ，ｍ，Ｈ−１５β），１．６５（１Ｈ，ｍ，Ｈ−２３β），１．６６（１Ｈ，ｍ，Ｈ−２α），１．６７（１Ｈ，ｍ，Ｈ−６α），１．７０（１Ｈ，ｍ，Ｈ−１２），１．７３（１Ｈ，ｔｄ，Ｊ＝１３．５，４．２Ｈｚ，Ｈ−１β），１．８３（１Ｈ，ｍ，Ｈ−１６α），１．８３（１Ｈ，ｄ ｑｕｉｎｔ．，Ｊ＝１２．０，６．７Ｈｚ，Ｈ−２０），２．０１（１Ｈ，ｍ，Ｈ−１１），２．０１（１Ｈ，ｍ，Ｈ−２３α），２．０４（１Ｈ，ｍ，Ｈ−７），３．２３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１１．７，４．６Ｈｚ，Ｈ−３），３．９２（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝６．４，４．１Ｈｚ，Ｈ−２４），４．２６（１Ｈ ｄｄｄ，Ｊ＝１０．３，６．６，３．７Ｈｚ，Ｈ−２２）．１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ１２．３（Ｃ−２１），１５．４（Ｃ−２９），１５．７（Ｃ−１８），１８．２（Ｃ−６），１９．１（Ｃ−１９），２１．０（Ｃ−１１），２１．２（Ｃ−２６），２４．３（Ｃ−３０），２６．５（Ｃ−７），２７．３（Ｃ−１６），２７．５（Ｃ−２７），２７．８（Ｃ−２），２８．０（Ｃ−２８），３０．９（Ｃ−１２），３１．０（Ｃ−１５），３３．３（Ｃ−２３），３５．６（Ｃ−１），３７．０（Ｃ−１０），３８．５（Ｃ−２０），３８．９（Ｃ−４），４５．０（Ｃ−１３），４７．８（Ｃ−１７），４９．３（Ｃ−１４），５０．４（Ｃ−５），７８．１（Ｃ−２２），７８．５（Ｃ−２４），７９．０（Ｃ−３），８１．７（Ｃ−２５），１３４．２（Ｃ−８），１３４．５（Ｃ−９）．マススペクトルｍ／ｚ：４５８（５２）［Ｍ］＋，４４３（７５），４２５（６６），４０７（１１），３３９（１７），３１４（１０），３１１（１０），３０１（１１），２８３（１２），１１５（１００），７１（６８）．
化合物８
ＮＭＲスペクトル１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ０．７２（３Ｈ，ｓ，Ｈ−１８），０．８１（３Ｈ，ｓ，Ｈ−２９），０．８７（３Ｈ，ｓ，Ｈ−３０），０．９３（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，Ｈ−２１），０．９８（３Ｈ，ｓ，Ｈ−１９），１．００（３Ｈ，ｓ，Ｈ−２８），１．０５（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１２．５，２．５Ｈｚ，Ｈ−５），１．１８（１Ｈ，ｍ，Ｈ−１５α），１．２３（１Ｈ，ｔｄ，Ｊ＝１２．６，３．８Ｈｚ，Ｈ−１α），１．４１（１Ｈ，ｍ，Ｈ−１６β），１．４４（１Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ＝１２．７，９．６，７．３Ｈｚ，Ｈ−１７），１．５０（１Ｈ，ｍ，Ｈ−６β），１．５８（１Ｈ，ｍ，Ｈ−２β），１．５８（１Ｈ，ｍ，Ｈ−２３β），１．６３（１Ｈ，ｍ，Ｈ−１５β），１．６７（１Ｈ，ｄｑｄ，Ｊ＝１２．７，９．６，３．２Ｈｚ，Ｈ−２０），１．６７（１Ｈ，ｍ，Ｈ−２３α），１．６８（１Ｈ，ｍ，Ｈ−２α），１．６８（１Ｈ，ｍ，Ｈ−６α），１．６８（１Ｈ，ｍ，Ｈ−１２β），１．７３（１Ｈ，ｍ，Ｈ−１２α），１．７３（３Ｈ，ｓ，Ｈ−２７），１．７４（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝１２．６，３．８Ｈｚ，Ｈ−１β），１．７８（１Ｈ，ｍ，Ｈ−１６α），２．０１（１Ｈ，ｍ，Ｈ−１１），２．０４（１Ｈ，ｍ，Ｈ−７），３．２３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１１．８，４．５Ｈｚ，Ｈ−３），３．９８（１Ｈ ｄｄｄ，Ｊ＝１０．２，３．２，２．８Ｈｚ，Ｈ−２２），４．３６（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，Ｈ−２４），４．９４（１Ｈ，ｑ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，Ｈ−２６Ａ），５．１１（１Ｈ，ｑ，Ｊ＝１．２Ｈｚ，Ｈ−２６Ｂ）．１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ１２．６（Ｃ−２１），１５．４（Ｃ−２９），１５．７（Ｃ−１８），１８．２（Ｃ−６），１９．１（Ｃ−１９），１９．３（Ｃ−２７），２１．０（Ｃ−１１），２４．３（Ｃ−３０），２６．５（Ｃ−７），２７．２（Ｃ−１６），２７．８（Ｃ−２），２８．０（Ｃ−２８），３１．０（Ｃ−１２），３１．０（Ｃ−１５），３３．１（Ｃ−２３），３５．６（Ｃ−１），３７．０（Ｃ−１０），３８．９（Ｃ−４），４２．８（Ｃ−２０），４４．８（Ｃ−１３），４７．２（Ｃ−１７），４９．４（Ｃ−１４），５０．４（Ｃ−５），７０．３（Ｃ−２２），７３．５（Ｃ−２４），７９．０（Ｃ−３），１１０．２（Ｃ−２６），１３４．１（Ｃ−８），１３４．６（Ｃ−９），１４７．３（Ｃ−２５）．マススペクトルｍ／ｚ：４５８（９）［Ｍ］＋，３５７（７５），３３９（１８），３１１（１３），１５９（１０）．
化合物９
ＮＭＲスペクトル１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ０．７２（３Ｈ，ｓ，Ｈ−１８），０．８１（３Ｈ，ｓ，Ｈ−２９），０．８７（３Ｈ，ｓ，Ｈ−３０），０．９４（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，Ｈ−２１），０．９８（３Ｈ，ｓ，Ｈ−１９），１．００（３Ｈ，ｓ，Ｈ−２８），１．０５（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１３．０，２．３Ｈｚ，Ｈ−５），１．２１（１Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ＝１４．２，９．３，２．５Ｈｚ，Ｈ−１５α），１．２３（１Ｈ，ｔｄ，Ｊ＝１２．６，３．８Ｈｚ，Ｈ−１α），１．４５（１Ｈ，ｍ，Ｈ−１６β），１．４６（１Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ＝１２．７，９．６，７．３Ｈｚ，Ｈ−１７），１．５１（１Ｈ，ｍ，Ｈ−６β），１．５２（１Ｈ，ｍ，Ｈ−２３β），１．５４（１Ｈ，ｍ，Ｈ−２３α），１．５８（１Ｈ，ｑｄ，Ｊ＝１３．５，３．２Ｈｚ，Ｈ−２β），１．６３（１Ｈ，ｍ，Ｈ−１５β），１．６７（１Ｈ，ｍ，Ｈ−２α），１．６８（１Ｈ，ｍ，Ｈ−６α），１．７０（１Ｈ，ｄｑｄ，Ｊ＝１２．７，６．７，３．０Ｈｚ，Ｈ−２０），１．６９（１Ｈ，ｍ，Ｈ−１２β），１．７１（１Ｈ，ｍ，Ｈ−１２α），１．７４（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝１２．６，３．８Ｈｚ，Ｈ−１β），１．７６（３Ｈ，ｓ，Ｈ−２７），１．７８（１Ｈ，ｍ，Ｈ−１６α），２．０２（１Ｈ，ｍ，Ｈ−１１），２．０４（１Ｈ，ｍ，Ｈ−７），３．２４（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１１．７，４．５Ｈｚ，Ｈ−３），３．９６（１Ｈ ｄｔ，Ｊ＝９．２，３．０Ｈｚ，Ｈ−２２），４．２６（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝９．２，３．５Ｈｚ，Ｈ−２４），４．８４（１Ｈ，ｄｑ，Ｊ＝３．８，１．８Ｈｚ，Ｈ−２６Ａ），５．０１（１Ｈ，ｑｕｉｎｔ．，Ｊ＝１．２Ｈｚ，Ｈ−２６Ｂ）．１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ１２．７（Ｃ−２１），１５．４（Ｃ−２９），１５．８（Ｃ−１８），１７．９（Ｃ−２７），１８．２（Ｃ−６），１９．１（Ｃ−１９），２１．０（Ｃ−１１），２４，４（Ｃ−３０），２６．５（Ｃ−７），２７．２（Ｃ−１６），２７．８（Ｃ−２），２８．０（Ｃ−２８），３０．９（Ｃ−１２），３０．９（Ｃ−１５），３４．６（Ｃ−２３），３５．６（Ｃ−１），３７．０（Ｃ−１０），３８．９（Ｃ−４），４２．５（Ｃ−２０），４４．８（Ｃ−１３），４７．３（Ｃ−１７），４９．４（Ｃ−１４），５０．４（Ｃ−５），７４．６（Ｃ−２２），７６．５（Ｃ−２４），７９．０（Ｃ−３），１１０．８（Ｃ−２６），１３４．１（Ｃ−８），１３４．６（Ｃ−９），１４７．６（Ｃ−２５）．マススペクトルｍ／ｚ：４５８（９）［Ｍ］＋，３５７（７５），３３９（１８），３１１（１３），１５９（１０）．
化合物１０
ＮＭＲスペクトル１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ０．７０（３Ｈ，ｓ），０．８１（３Ｈ，ｓ），０．８８（３Ｈ，ｓ），０．９２（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．５Ｈｚ），０．９８（３Ｈ，ｓ），１．００（３Ｈ，ｓ），３．２４（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１１．２，４．６Ｈｚ），３．６２（２Ｈ，ｍ）．マススペクトルｍ／ｚ：４０２（３７）［Ｍ］＋，３８７（１００），３６９（９０），２７３（１６），１８７（２７）．
化合物１１
ＮＭＲスペクトル１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ０．７２（３Ｈ，ｓ），０．８１（３Ｈ，ｓ），０．９０（３Ｈ，ｓ），０．９９（３Ｈ，ｓ），１．００（３Ｈ，ｓ），１．６１（３Ｈ，ｓ），１．６９（３Ｈ，ｓ），３．２４（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１１．７，４．３Ｈｚ），３．６８（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１１．２，４．６Ｈｚ），３．７３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１１．２，３．０Ｈｚ），５．１２（１Ｈ，ｍ）．マススペクトルｍ／ｚ：４４２（５７）［Ｍ］＋，４２７（４９），４０９（２８），１８９（１２），１８７（１１），１０９（１００）．
【技術分野】
新規なトリテルペン化合物、その製造方法及びそれを有効成分として含有する癌抑制剤に関する発明。
【背景技術】
【０００１】
高齢化社会に入りますます健康を渇望する人が増加している。ウイルスの変種も最新の課題として取りざたされている。その中に癌は重い課題として人類を迎え撃っている。診療及び治療法の開発等により、癌は昨今と比べるとずっと「治る病気」となりつつあるが、高齢化社会の進行とともに羅患者と死亡者は依然として増加している。日本癌学会の発表によると現在、死亡統計上３人に１人は癌によって死亡していると報告されている。癌の抑制については、羅患後の医療だけではなく、癌が発生する前にその発生を抑えようとする考え方、即ち癌予防に対する関心も近年高まりつつある。
癌の抑制のうち羅患後の治療において、悪性腫瘍、即ち癌に対する治療法は早期発見・外科的手術とともに化学療法が併用されているが、臨床的に実用又は試用されている多くの抗癌剤は、例えば、固形癌に対して必ずしも充分に満足できる効果を有するものではないと言わざるを得ない場合が存在している。
一方、癌の抑制のうち癌予防において、化学物質による癌発症（化学発癌）の機構に関しては、近年、発癌イニシエーション及び発癌プロモーションと呼ばれる二つの過程を経由すると考える発癌二段階説が広く認められている。
【０００２】
イニシエーションとは、発癌イニシエーターと総称される物質が、正常細胞のＤＮＡに不可逆的に損傷を与えて潜在性細胞（ｉｎｉｔｉａｔｅｄ ｃｅｌｌ）に変化させる過程であり、発癌プロモーションとは、発癌プロモーターと総称される物質が、発癌イニシエーターで生じた発癌潜在性細胞に働きかけ、それを癌細胞に導く過程である。発癌イニシエーション及び発癌プロモーションの両方の過程を抑えることができれば、癌の発生を抑制することが可能となる。とりわけ、発癌プロモーションの抑制は、正常細胞に復帰することのできない潜在性細胞を既に保有する固体に対しても有効な発癌抑制手段となる。
【発明の技術分野】
【０００３】
木材腐朽菌キノコの新規トリテルペン、具体的にはカバノアナタケ［学名Ｉｎｏｎｏｔｕｓｏｂｌｉｑｕｕｓ］に含有されるトリテルペンの製造方法とその発癌プロモーション抑制活性を持つ組成物及び抗癌剤に関する。
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
上記前者の治療の観点からは、腫瘍の縮小・撲滅及び成長の抑制に有効な医薬となり得るよう殺癌細胞活性化合物の開発が切望されており、一方、上記後者発癌の予防の観点からは、発癌プロモーションを抑制する活性を有する成分を含有し発癌の抑制に有効な医薬品、食品等の発癌プロモーション抑制化合物の開発が切望されていてカバノアナタケの化合物からそうした作用をもつ抗癌剤を提供する。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明者らは、担子菌キノコ類、中でもカバノアナタケ菌核から分離精製されたトリテルペン化合物類が、発癌のプロモーションを抑制する活性（以下、発癌プロモーション抑制活性と記すこともある。）を有することを見出し、本発明に至った。
即ち本発明は、
１．式（Ｉ）で示されるトリテルペン化合物又はその薬学的に許容される塩。
２．前項１記載のトリテルペン化合物又はその薬学的に許容される塩を担子菌キノコ類、中でもカバノアナタケ菌核から抽出する工程を有することを特徴とするトリテルペン化合物の製造方法。
【０００６】
本発明化合物には不斉炭素が存在するが、発癌プロモーション抑制活性を有する限り可能な立体配置の化合物が全て含まれる。
カバノアナタケにおけるトリテルペン成分に関しては申らの抽出方法［文献：申有英 他，Ｅｕｒａｓｉａｎ Ｊ．Ｆｏｒ．Ｒｅｓ．１：４３−５０（２０００）；日本木材学会北海道支部講演集 第３０号 平成１０年１１月ｐ７５−７７；Ｙｕｓｏｏ Ｓｈｉｎ ｅｔ．ａｌ．，Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｍｕｓｈｒｏｏｍｓ Ｖｏｌ．２，ｐｐ．２０１−２０７（２０００）］で示されているが、それはエタノール抽出方法を用いるためカバノアナタケに含有されるトリテルペン成分の全体を抽出することは、他の成分が混在しているため不適であった。また、トリテルペン成分が抽出されてもごく一部分であった。種々検討した結果、クロロホルムによる抽出方法を表１に示すごとく確立するに至った。これはエタノール抽出方法の約１０００倍の抽出効率があった。クロロホルムの後、メタノールで抽出を行った。メタノールエキスにはトリテルペン画分は溶出されない。
【０００７】
また、本成分のトリテルペンにおけるｉｎ ｖｉｔｒｏ ＥＢＶ−ＥＡ誘導化抑制活性およびｉｎ ｖｉｖｏ発癌プロモーション抑制活性、すなわち生体（マウス）を実験系に取り入れ証明したものは今迄になかった。本技術をすべて開示している訳ではないが，日本薬学会１２５年会（３月３１日）において本成分の一部およびｉｎ ｖｉｔｒｏマウス白血病細胞Ｐ３８８のスクリーニングの結果を明らかにしている．
【０００８】
本発明化合物のプロモーション抑制活性を測定する方法としては、例えば、ＥＢＶ−ＥＡ誘導試験法［文献：Ｋｏｎｉｓｈｉ，Ｔ．ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｌ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．，２１，９９３（１９９８）］が挙げられる。この試験法は、１２−Ｏ−テトラデカノイルホルボール−１３−アセテート（以下ＴＰＡと記す。）、テレオシジン等の発癌プロモーターが、バーキットリンパ腫由来エプスタイン・バー・ウイルス潜在感染ヒトリンパ芽球様細胞株（Ｒａｊｉ細胞、ＡＴＣＣから入手可能）中に潜在するエプスタイン・バー・ウイルス（以下、ＥＢＶと記す。）を活性化する現象に基づいた方法であり、当該測定の工程としては、まず前記のような発癌プロモーターと被検物質とをＲａｊｉ細胞に接触させ、発癌プロモーターによるＥＢＶ活性化を被検物質が抑制する効力を測定する。当該方法で測定されたＥＢＶ活性化抑制活性とｉｎ ｖｉｖｏ発癌プロモーション抑制活性との高い相関性が、多くの化合物で示されている。
【０００９】
さらにまた、プロモーション抑制活性は、げっ歯類を用いたｉｎ ｖｉｖｏ二段階発癌実験によって調べることもできる。例えば、マウスの背中の毛を手術用バリカン等で刈り落とし、背中の皮膚に、アセトン又はメタノール等の有機溶媒に溶解した７，１２−ジメチルベンズアントラセン（以下、ＤＭＢＡと記す。）を適量、例えば、約１μｇ〜１０００μｇ程度塗布する。ＤＭＢＡ塗布より一定期間（例えば、１週間）経過した後から、被検物質とを一定頻度（例えば、週２回程度）で皮膚に塗布する。具体的に例えば、前記のようにＤＭＢＡを塗布した皮膚に、まずアセトン又はメタノール等の有機溶媒に溶解した被検物質を塗布し、約１時間後に、アセトン又はメタノール等の有機溶媒に溶解したＴＰＡを適量（例えば、約０．１μｇ〜１０μｇ程度）塗布する。このような処理を行いながら、一定期間（例えば、約１０〜５０週間程度）に渡って経時的に観察を行い、処理を行った背中の皮膚に腫瘍の発生したマウスの数及び発生した腫瘍の数を測定する。被検物質とＴＰＡを塗布した群における腫瘍の発生したマウスの数及び発生した腫瘍の数を、被検物質の代わりに溶媒を塗布した群における腫瘍の発生したマウスの数及び発生した腫瘍の数と比較することにより、被検物質の発癌プロモーション抑制活性を調べることができる。
【００１０】
本発明の発癌プロモーション抑制組成物は、例えば、本発明化合物を含む天然由来の抽出物若しくはその加工品、本発明化合物自体、或いは、本発明化合物と、医薬担体若しくは賦形剤、食品成分又は化粧品成分等とが混合されてなる組成物等を含み、腫瘍や癌の発生を抑制し、かつ、発生した腫瘍や癌を治療する医薬品、食品又は化粧品等として利用され得る。用いられる医薬担体若しくは賦形剤、食品成分又は化粧品成分等は、当該癌抑制剤の具体的用途に応じて適宜選択することができる。また、抑制剤の形態も、具体的用途に応じて、例えば、種々の固体や液体の形態とすることができる。
【００１１】
例えば、本発明化合物を医薬品として用いる場合には、その投与形態を必要に応じて適宜選択することができる。具体的な形態としては、例えば、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤等の経口剤、注射剤、経皮吸収剤、ローション剤、クリーム剤、軟膏剤、坐剤等の非経口剤等をあげることができる。これら製剤は常法に準じて製造すればよい。
【実施例】
【００１２】
以下、実施例により本研究を更に詳細に説明するが、本研究はこれらによって限定されるものではない。
参考１（本化合物の調製）
北海道名寄市（株）サラダメロン構内において採取されたカバノアナタケの菌核１０ｋｇを細かく刻み、２０Ｌのクロロホルム、６０℃にて２週間浸漬し、濾過後、濾液を減圧下、溶媒を留去して、クロロホルムエキス２００ｇを得た。表１に示すように当該エキス全量をクロロホルムに溶かし、クロロホルムで調製したシリカゲル（シリカゲル６０，メルク社製）３．５ｋｇを用いたカラムクロマトグラフィーに供し、クロロホルム及び酢酸エチルの混合溶媒（クロロホルム：酢酸エチル＝１０：１）を流して１Ｌずつ分画を行い、フラクション４０−４６を集めた画分Ａ（１８．０ｇ，７ｘ１Ｌ）及びフラクション４７−５２を集めた画分Ｂ（４９．０ｇ，６ｘ１Ｌ）を得た。次にクロロホルム：酢酸エチル＝５：１を流して１Ｌずつ分画を行い、フラクション６２−７０を集めた画分Ｃ（３．０ｇ，９ｘ１Ｌ）及びフラクション７１−７９を集めた画分Ｄ（６．０ｇ，９ｘ１Ｌ）を得た。さらにクロロホルム：酢酸エチル＝２：１を流して１Ｌずつ分画を行い、フラクション８０−１０５を集めた画分Ｅ（１２．５ｇ，２６ｘ１Ｌ）を得た。以上得られた各画分をさらにシリカゲルカラムクロマトグラフィー及びＯＤＳとメタノール系による高速液体クロマトグラフィーにより分離精製し、化合物の単離を行った。画分Ａをシリカゲルカラムクロマトグラフィーに供し、クロロホルムで溶出するフラクションより化合物３、クロロホルム：酢酸エチル＝５：１で溶出するフラクションより化合物６及び７、さらにクロロホルム：酢酸エチル＝２：１で溶出するフラクションより化合物８及び９をそれぞれ得た。画分Ｂからはクロロホルムで溶出するフラクションより化合物１、４、５および１１を得た。画分Ｄからはクロロホルムで溶出するフラクションより化合物１０を、画分Ｅからはクロロホルム：酢酸エチル＝５：１で溶出するフラクションより化合物２を得た。
【００１３】
【表１】
【００１６】
試験例１（プロモーション抑制活性の測定）
参考１で得られた化合物１、２、２−アセテート、３、４、５、６、７、７アセテート及び１１について、ＥＢＶ活性化抑制試験法（Ｋｏｎｉｓｈｉ，Ｔ．ｅｔ．ａｌ．，Ｂｉｏｌ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．，２１，９９３（１９９８））により、プロモーション抑制活性の測定を行った。パーキットリンパ腫由来ＥＢＶ潜在感染ヒトリンパ芽球細胞株（Ｒａｊｉ細胞）の培養には、ＰＰＭＩ １６４０培地（日水製薬）に１０ｖ／ｖ％となるように牛胎仔血清（ＧＩＢＣＯ−ＢＲＬ）を加えた培地を使用した。この培地で培養した場合のＥＢＶの活性化率（Ｒａｊｉ細胞の自然誘発率）は、０．１％以下であった．前記培地で培養したＲａｊｉ細胞の培養液を１ｘ１０６細胞／ｍｌとなるように調製し、ＤＭＳＯに溶解した酪酸（終濃度４ｍＭ）とＴＰＡ（終濃度２０ｎｇ／ｍｌ）とを加えて、ＣＯ２インキュベーター中で ３７℃にて４８時間培養した後、得られた培養液の塗沫標本を作製した。上咽頭がん患者血清を用いた間接蛍光抗体法によりＥＢＶ初期抗原（ＥＢＶ−ＥＡ）を染色し、陽性細胞（該初期抗原の発現した細胞）の発現率を測定してこれを陽性コントロール（１００）とした。一方、前記と同様に調製したＲａｊｉ細胞の培養液に、ＤＭＳＯにを染色し、陽性細胞（該初期抗原の発現した細胞）の発現率を測定してこれを陽性コントロール（１００）とした。一方、前記と同様に調製したＲａｊｉ細胞の培養液に、ＤＭＳＯに溶解した酪酸（終濃度４ｍＭ）とＴＰＡ（終濃度２０ｎｇ／ｍｌ）
および被験化合物を加えて同様に培養した後、陽性細胞の発現率を測定し陽性コントロ−ル（１００）に対する割合（％）を求めた。各試験において、少なくとも５００細胞を測定し、また３回の繰り返し実験を行った。なお毎回、ＴＰＡおよび被験化合物は添加せず酪酸だけを添加した系（陰性コントロール）と上記陽性コントロールについての試験を併行して行った。
【００１７】
測定結果を表２に示した。いずれの化合物についても、用量相関的にＥＢＶ−ＥＡの活性化の抑制が認められた。なお，化合物１、２、２−アセテート、３、４、５、６、７、７アセテート及び１１はいずれの試験においても、細胞に対する強い毒性は認められなかった。マウス及び豚では０．１ｇ（体重１ｋ当り）経口投与でも毒性はでない。
【表２】
【００１８】
試験例２（マウス皮膚２段階発癌実験におけるプロモーション抑制活性の測定）
参考１で得られた化合物１について、マウスを用いた２段階発癌実験法により、プロモーション抑制活性の測定を行った。６週齢のＩＣＲ雌マウスの背部の毛を剃り、０．１ｍｌに溶解した化合物１を前記のＤＭＢＡ塗布部位に塗布し、溶媒処置群には、化合物１に替えてアセトン（０．１ｍｌ）を塗布した。次いで１時間後に、被験化合物処置群および溶媒処置群のいずれにも、前記の塗布部位に、０．１ｍｌのアセトンに溶解したＴＰＡ（１ｍｇ，１．７ｎｍｏｌ）を塗布し、以後週２回の頻度で、２０週に亘ってＴＰＡを同様に塗布した。マウスは１群当たり３匹を使用した。プロモーション抑制活性は、パピローマが発生したマウスの数と、マウス１匹当たりのパピローマ発生数の平均値とを被験化合物処置群と溶媒処置群とで比較することにより判定した。その結果、図２および３に示すように、化合物１はＴＰＡによる発癌プロモーションに対し抑制活性を示した。
（図２）マウス皮膚二段階発癌実験法により、化合物１のプロモーション抑制活性を測定した結果を示す図である。横軸は、ＴＰＡ及び被検化合物を皮膚に塗布したプロモーションの期間（週）を示す。縦軸は、各処理群におけるパピローマの発生頻度を百分率にて示す。
（図３）マウス皮膚二段階発癌実験法により、化合物１のプロモーション抑制活性を測定した結果を示す図である。横軸は、ＴＰＡ及び被検化合物を皮膚に塗布したプロモーションの期間（週）を示す。縦軸は、各処理群における個体あたりのパピローマの発生数を個数にて示す。
【００１９】
Ｐ３８８マウスリンパ性白血病細胞に対する増殖阻害活性試験を代表としてトリテルペン４種でおこなった。（被検物１，２，５，７は化合物１，２，５，７と同じ表現である。）以下の方法で行い結果をえた。
Ｐ３８８マウスリンパ性白血病細胞に対する増殖阻害活性試験
［方法］
１０％牛胎児血清含有イーグルＭｉｎｉｍｕｍ Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ Ｍｅｄｉｕｍを用いて，Ｐ３８８マウスリンパ性白血病細胞を３７℃で培養し、約７×１０５ｃｅｌｌ／ｍｌになったところで培養液を９００ｒｐｍ、５分間、遠心分離した。上澄液を捨て、残った細胞に一定量の培地を加え１×１０５ｃｅｌｌ／ｍｌ（初濃度）の細胞浮遊液を調節した。一方、検体をＤＭＳＯで溶解（１０ｍｇ／ｍｌ）し，培地で２００，２０，２μｇ／ｍｌになるように希釈した。またコントロールの溶液はＤＭＳＯの濃度が２，０．２，０．０２％になるように希釈した。９６穴マイクロプレートの各穴に検体又はコントロールの溶液と細胞の浮遊溶液を各々１００μｌ入れ、ＣＯ２インキュベーター内で３７℃、１３日間培養した後、ＭＴＴ（６ｍｇ／ｍｌ，リン酸緩衝液）２５μｌを加え、細胞を染色する。４時間後さらにドデシル硫酸ナトリウム（２０％，０．０２Ｎ ＨＣｌ）５０μｌを加えホルマゾンを溶解し，一夜放置後マイクロプレートリーダー（ＢＩＯ ＲＡＤ ｍｏｄｅｌ４５０）で吸光度を測定した．
次式よりｇｒｏｗｔｈ（Ｇ）％を計算し，片対数グラフを用いて細胞の増殖を５０％抑制する濃
度ＥＤ５０（μｇ／ｍｌ）を求めた。
【００２０】
［結果］
試験結果を以下の表３に示した。４個の被検化合物（トリテルペン化合物）（１），（２），（５）及び（７）のうち、（２）を除くすべての化合物に縁やかな細胞増殖阻害活性が認められた。（（２）は結晶の凝結がつよい。）
【表３】
以上のようにカバノアナタケ由来のトリテルペン化合物に抗癌活性があきらかとなったから癌抑制や生理活性著大なものがある。
【００２１】
化合物１
ＮＭＲスペクトル１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ０．７３（３Ｈ，ｓ），０．８１（３Ｈ，ｓ），０．８８（３Ｈ，ｓ），０．９４（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．５Ｈｚ），０．８４（３Ｈ，ｓ），１．００（３Ｈ，ｓ），１．６５（３Ｈ，ｓ），１．７５（３Ｈ，ｓ），３．２４（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１１．８，４．５Ｈｚ），３．６７（１Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ＝９．０，５．２，４．４Ｈｚ），５．１８（１Ｈ，ｍ）．マススペクトルｍ／ｚ：４４２（２９）［Ｍ］＋，４２７（３４），４１１（４４），４０９（１６），３７２（２８），３５７（５９），３３９（１６），２９９（１８），１８７（２３），６９（１００）．
化合物２
ＮＭＲスペクトル１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ０．７５（３Ｈ，ｓ），０．８１（３Ｈ，ｓ），０．８９（３Ｈ，ｓ），０．９７（３Ｈ，ｓ），１．００（３Ｈ，ｓ），１．５９（３Ｈ，ｓ），１．６２（３Ｈ，ｓ），３．２２（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１１．８，４．８Ｈｚ）．マススペクトルｍ／ｚ：４５６（６０）［Ｍ］＋，４４１（６６），４２３（１００），３９５（１１），３０１（１０），２８１（１７），１８７（１９）．
化合物３
ＮＭＲスペクトル１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ０．６９（３Ｈ，ｓ），０．８１（３Ｈ，ｓ），０．８８（３Ｈ，ｓ），０．９１（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．５Ｈｚ），０．９８（３Ｈ，ｓ），１．００（３Ｈ，ｓ），３．２２（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１１．８，４．８Ｈｚ），５．１０（１Ｈ，ｍ）．マススペクトルｍ／ｚ：４４２（７７）［Ｍ］＋，４２７（６２），４０９（１００），３９１（２６），３５７（１５），３２７（１０），２９９（１０），２７３（１１），２５９（１１），２５５（１０）．
化合物４
ＮＭＲスペクトル１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ０．６９（３Ｈ，ｓ），０．８１（３Ｈ，ｓ），０．８７（３Ｈ，ｓ），０．９１（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．５Ｈｚ），０．９８（３Ｈ，ｓ），１．００（３Ｈ，ｓ），３．２２（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１１．８，４．８Ｈｚ），４．０１（１Ｈ，ｍ），４．８２（１Ｈ，ｓ），４．９３（１Ｈ，ｓ），マススペクトルｍ／ｚ：４４２（７７）［Ｍ］＋，４２７（６２），４０９（１００），３９１（２６），３５７（１５），３２７（１０），２９９（１０），２７３（１１），２５９（１１），２５５（１０）．
化合物５
ＮＭＲスペクトル１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ０．６９（３Ｈ，ｓ），０．８１（３Ｈ，ｓ），０．９０（３Ｈ，ｓ），０．９６（３Ｈ，ｓ），１．００（３Ｈ，ｓ），１．５７（３Ｈ，ｓ），１．６８（３Ｈ，ｓ），３．２４（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１１．５，４．４Ｈｚ），５．０４（１Ｈ，ｍ），９．４６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．５Ｈｚ）．マススペクトルｍ／ｚ：４４０（５４）［Ｍ］＋，４２５（１００），４０７（９７），３８９（１６），３５８（６８），２９９（５９），２８８（５１），２８１（５９），２７３（３０），２４７（２４）．
化合物６
ＮＭＲスペクトル１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ０．７３（３Ｈ，ｓ），０．８０（３Ｈ，ｓ），０．９０（３Ｈ，ｓ），０．９７（３Ｈ，ｓ），０．９９（３Ｈ，ｓ），１．２０（３Ｈ，ｓ），１．２２（３Ｈ，ｓ），３．２３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１１．５，４．４Ｈｚ），３．７２（１Ｈ，ｍ）．マススペクトルｍ／ｚ：４５８（４５）［Ｍ］＋，４４３（３２），４２５（１００），４０７（９０），３８９（１３），２９９（４５），２８１（２８），
化合物７
ＮＭＲスペクトル１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ０．７１（３Ｈ，ｓ，Ｈ−１８），０．８１（３Ｈ，ｓ，Ｈ−２９），０．８６（３Ｈ，ｓ，Ｈ−３０），０．８８（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，Ｈ−２１），０．９８（３Ｈ，ｓ，Ｈ−１９），１．００（３Ｈ，ｓ，Ｈ−２８），１．０５（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１２．８，３．０Ｈｚ，Ｈ−５），１．１９（１Ｈ，ｍ，Ｈ−１５α），１．２２（３Ｈ，ｓ，Ｈ−２７），１．２３（３Ｈ，ｓ，Ｈ−２６），１．２３（１Ｈ，ｔｄ，Ｊ＝１３．５，４．２Ｈｚ，Ｈ−１α），１．４０（１Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ＝１２．０，１０．８，７．２Ｈｚ，Ｈ−１７），１．４８（１Ｈ，ｍ，Ｈ−１６β），１．５０（１Ｈ，ｍ，Ｈ−６β），１．５８（１Ｈ，ｔｄｄ，Ｊ＝１３．５，１１．７，４．２Ｈｚ，Ｈ−２β），１．６２（１Ｈ，ｍ，Ｈ−１５β），１．６５（１Ｈ，ｍ，Ｈ−２３β），１．６６（１Ｈ，ｍ，Ｈ−２α），１．６７（１Ｈ，ｍ，Ｈ−６α），１．７０（１Ｈ，ｍ，Ｈ−１２），１．７３（１Ｈ，ｔｄ，Ｊ＝１３．５，４．２Ｈｚ，Ｈ−１β），１．８３（１Ｈ，ｍ，Ｈ−１６α），１．８３（１Ｈ，ｄ ｑｕｉｎｔ．，Ｊ＝１２．０，６．７Ｈｚ，Ｈ−２０），２．０１（１Ｈ，ｍ，Ｈ−１１），２．０１（１Ｈ，ｍ，Ｈ−２３α），２．０４（１Ｈ，ｍ，Ｈ−７），３．２３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１１．７，４．６Ｈｚ，Ｈ−３），３．９２（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝６．４，４．１Ｈｚ，Ｈ−２４），４．２６（１Ｈ ｄｄｄ，Ｊ＝１０．３，６．６，３．７Ｈｚ，Ｈ−２２）．１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ１２．３（Ｃ−２１），１５．４（Ｃ−２９），１５．７（Ｃ−１８），１８．２（Ｃ−６），１９．１（Ｃ−１９），２１．０（Ｃ−１１），２１．２（Ｃ−２６），２４．３（Ｃ−３０），２６．５（Ｃ−７），２７．３（Ｃ−１６），２７．５（Ｃ−２７），２７．８（Ｃ−２），２８．０（Ｃ−２８），３０．９（Ｃ−１２），３１．０（Ｃ−１５），３３．３（Ｃ−２３），３５．６（Ｃ−１），３７．０（Ｃ−１０），３８．５（Ｃ−２０），３８．９（Ｃ−４），４５．０（Ｃ−１３），４７．８（Ｃ−１７），４９．３（Ｃ−１４），５０．４（Ｃ−５），７８．１（Ｃ−２２），７８．５（Ｃ−２４），７９．０（Ｃ−３），８１．７（Ｃ−２５），１３４．２（Ｃ−８），１３４．５（Ｃ−９）．マススペクトルｍ／ｚ：４５８（５２）［Ｍ］＋，４４３（７５），４２５（６６），４０７（１１），３３９（１７），３１４（１０），３１１（１０），３０１（１１），２８３（１２），１１５（１００），７１（６８）．
化合物８
ＮＭＲスペクトル１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ０．７２（３Ｈ，ｓ，Ｈ−１８），０．８１（３Ｈ，ｓ，Ｈ−２９），０．８７（３Ｈ，ｓ，Ｈ−３０），０．９３（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，Ｈ−２１），０．９８（３Ｈ，ｓ，Ｈ−１９），１．００（３Ｈ，ｓ，Ｈ−２８），１．０５（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１２．５，２．５Ｈｚ，Ｈ−５），１．１８（１Ｈ，ｍ，Ｈ−１５α），１．２３（１Ｈ，ｔｄ，Ｊ＝１２．６，３．８Ｈｚ，Ｈ−１α），１．４１（１Ｈ，ｍ，Ｈ−１６β），１．４４（１Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ＝１２．７，９．６，７．３Ｈｚ，Ｈ−１７），１．５０（１Ｈ，ｍ，Ｈ−６β），１．５８（１Ｈ，ｍ，Ｈ−２β），１．５８（１Ｈ，ｍ，Ｈ−２３β），１．６３（１Ｈ，ｍ，Ｈ−１５β），１．６７（１Ｈ，ｄｑｄ，Ｊ＝１２．７，９．６，３．２Ｈｚ，Ｈ−２０），１．６７（１Ｈ，ｍ，Ｈ−２３α），１．６８（１Ｈ，ｍ，Ｈ−２α），１．６８（１Ｈ，ｍ，Ｈ−６α），１．６８（１Ｈ，ｍ，Ｈ−１２β），１．７３（１Ｈ，ｍ，Ｈ−１２α），１．７３（３Ｈ，ｓ，Ｈ−２７），１．７４（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝１２．６，３．８Ｈｚ，Ｈ−１β），１．７８（１Ｈ，ｍ，Ｈ−１６α），２．０１（１Ｈ，ｍ，Ｈ−１１），２．０４（１Ｈ，ｍ，Ｈ−７），３．２３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１１．８，４．５Ｈｚ，Ｈ−３），３．９８（１Ｈ ｄｄｄ，Ｊ＝１０．２，３．２，２．８Ｈｚ，Ｈ−２２），４．３６（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，Ｈ−２４），４．９４（１Ｈ，ｑ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，Ｈ−２６Ａ），５．１１（１Ｈ，ｑ，Ｊ＝１．２Ｈｚ，Ｈ−２６Ｂ）．１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ１２．６（Ｃ−２１），１５．４（Ｃ−２９），１５．７（Ｃ−１８），１８．２（Ｃ−６），１９．１（Ｃ−１９），１９．３（Ｃ−２７），２１．０（Ｃ−１１），２４．３（Ｃ−３０），２６．５（Ｃ−７），２７．２（Ｃ−１６），２７．８（Ｃ−２），２８．０（Ｃ−２８），３１．０（Ｃ−１２），３１．０（Ｃ−１５），３３．１（Ｃ−２３），３５．６（Ｃ−１），３７．０（Ｃ−１０），３８．９（Ｃ−４），４２．８（Ｃ−２０），４４．８（Ｃ−１３），４７．２（Ｃ−１７），４９．４（Ｃ−１４），５０．４（Ｃ−５），７０．３（Ｃ−２２），７３．５（Ｃ−２４），７９．０（Ｃ−３），１１０．２（Ｃ−２６），１３４．１（Ｃ−８），１３４．６（Ｃ−９），１４７．３（Ｃ−２５）．マススペクトルｍ／ｚ：４５８（９）［Ｍ］＋，３５７（７５），３３９（１８），３１１（１３），１５９（１０）．
化合物９
ＮＭＲスペクトル１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ０．７２（３Ｈ，ｓ，Ｈ−１８），０．８１（３Ｈ，ｓ，Ｈ−２９），０．８７（３Ｈ，ｓ，Ｈ−３０），０．９４（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，Ｈ−２１），０．９８（３Ｈ，ｓ，Ｈ−１９），１．００（３Ｈ，ｓ，Ｈ−２８），１．０５（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１３．０，２．３Ｈｚ，Ｈ−５），１．２１（１Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ＝１４．２，９．３，２．５Ｈｚ，Ｈ−１５α），１．２３（１Ｈ，ｔｄ，Ｊ＝１２．６，３．８Ｈｚ，Ｈ−１α），１．４５（１Ｈ，ｍ，Ｈ−１６β），１．４６（１Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ＝１２．７，９．６，７．３Ｈｚ，Ｈ−１７），１．５１（１Ｈ，ｍ，Ｈ−６β），１．５２（１Ｈ，ｍ，Ｈ−２３β），１．５４（１Ｈ，ｍ，Ｈ−２３α），１．５８（１Ｈ，ｑｄ，Ｊ＝１３．５，３．２Ｈｚ，Ｈ−２β），１．６３（１Ｈ，ｍ，Ｈ−１５β），１．６７（１Ｈ，ｍ，Ｈ−２α），１．６８（１Ｈ，ｍ，Ｈ−６α），１．７０（１Ｈ，ｄｑｄ，Ｊ＝１２．７，６．７，３．０Ｈｚ，Ｈ−２０），１．６９（１Ｈ，ｍ，Ｈ−１２β），１．７１（１Ｈ，ｍ，Ｈ−１２α），１．７４（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝１２．６，３．８Ｈｚ，Ｈ−１β），１．７６（３Ｈ，ｓ，Ｈ−２７），１．７８（１Ｈ，ｍ，Ｈ−１６α），２．０２（１Ｈ，ｍ，Ｈ−１１），２．０４（１Ｈ，ｍ，Ｈ−７），３．２４（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１１．７，４．５Ｈｚ，Ｈ−３），３．９６（１Ｈ ｄｔ，Ｊ＝９．２，３．０Ｈｚ，Ｈ−２２），４．２６（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝９．２，３．５Ｈｚ，Ｈ−２４），４．８４（１Ｈ，ｄｑ，Ｊ＝３．８，１．８Ｈｚ，Ｈ−２６Ａ），５．０１（１Ｈ，ｑｕｉｎｔ．，Ｊ＝１．２Ｈｚ，Ｈ−２６Ｂ）．１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ１２．７（Ｃ−２１），１５．４（Ｃ−２９），１５．８（Ｃ−１８），１７．９（Ｃ−２７），１８．２（Ｃ−６），１９．１（Ｃ−１９），２１．０（Ｃ−１１），２４，４（Ｃ−３０），２６．５（Ｃ−７），２７．２（Ｃ−１６），２７．８（Ｃ−２），２８．０（Ｃ−２８），３０．９（Ｃ−１２），３０．９（Ｃ−１５），３４．６（Ｃ−２３），３５．６（Ｃ−１），３７．０（Ｃ−１０），３８．９（Ｃ−４），４２．５（Ｃ−２０），４４．８（Ｃ−１３），４７．３（Ｃ−１７），４９．４（Ｃ−１４），５０．４（Ｃ−５），７４．６（Ｃ−２２），７６．５（Ｃ−２４），７９．０（Ｃ−３），１１０．８（Ｃ−２６），１３４．１（Ｃ−８），１３４．６（Ｃ−９），１４７．６（Ｃ−２５）．マススペクトルｍ／ｚ：４５８（９）［Ｍ］＋，３５７（７５），３３９（１８），３１１（１３），１５９（１０）．
化合物１０
ＮＭＲスペクトル１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ０．７０（３Ｈ，ｓ），０．８１（３Ｈ，ｓ），０．８８（３Ｈ，ｓ），０．９２（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．５Ｈｚ），０．９８（３Ｈ，ｓ），１．００（３Ｈ，ｓ），３．２４（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１１．２，４．６Ｈｚ），３．６２（２Ｈ，ｍ）．マススペクトルｍ／ｚ：４０２（３７）［Ｍ］＋，３８７（１００），３６９（９０），２７３（１６），１８７（２７）．
化合物１１
ＮＭＲスペクトル１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ０．７２（３Ｈ，ｓ），０．８１（３Ｈ，ｓ），０．９０（３Ｈ，ｓ），０．９９（３Ｈ，ｓ），１．００（３Ｈ，ｓ），１．６１（３Ｈ，ｓ），１．６９（３Ｈ，ｓ），３．２４（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１１．７，４．３Ｈｚ），３．６８（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１１．２，４．６Ｈｚ），３．７３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１１．２，３．０Ｈｚ），５．１２（１Ｈ，ｍ）．マススペクトルｍ／ｚ：４４２（５７）［Ｍ］＋，４２７（４９），４０９（２８），１８９（１２），１８７（１１），１０９（１００）．
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）で示されるトリテルペン化合物又はその薬学的に許容される塩。
【化１】
【請求項２】
請求項１記載のトリテルペン化合物又はその薬学的に許容される塩を担子菌キノコから抽出する工程を有することを特徴とするトリテルペン化合物の製造方法。
【請求項３】
担子菌キノコがカバノアナタケである請求項１および２記載のトリテルペン化合物の製造方法
【請求項４】
哺乳動物（人も含む）にたいして、請求項１記載のトリテルペン化合物又はその薬学的に許容される塩あるいはそのプロドラッグの有効成分量を投与することを特徴とする癌抑制剤。
【請求項５】
前記トリテルペン化合物又はその薬学的に許容される塩を有効成分として１以上含有することからなる請求項４記載の癌抑制剤。
【請求項６】
前記トリテルペン化合物又はその薬学的に許容される塩を他の抗がん剤と併用することからなる請求項４記載の癌抑制剤
【請求項７】
前記請求項１記載のトリテルペン化合物又はその薬学的に許容される塩を有効成分とし、他の食品や医薬に含有することからなる発癌プロモーション抑制組成物
【請求項８】
出発材料として（１）カバノキ類の立ち木に天然に生育したカバノアナタケ菌糸、または菌核（２）カバノキ類の立ち木に人口的に植菌し生育させたカバノアナタケ菌核または菌糸、（３）これらカバノアナタケ菌核または菌糸が、繁殖した立ち木の樹皮及び木質部の組織と共に採取したカバノアナタケ菌核または菌糸、（４）固形培地で人工培養したカバノアナタケ菌糸、または菌核（５）固形培地で人口培養した後、培地と共に採取したカバノアナタケ菌糸、または菌核、（６）液体培養した後、培養液と共に採取した菌糸を選び、いずれか選ばれた出発材料からトリテルペン化合物を抽出することからなる請求項３に記載の癌抑制剤。
【請求項９】
担子菌キノコの抽出の工程で少なくとも第一段階でクロロホルムを使用することからなる請求項１記載の製造方法
【請求項１０】
前記担子菌キノコは請求項８にあるカバノアナタケである請求項９記載の製造方法
【請求項１】
式（Ｉ）で示されるトリテルペン化合物又はその薬学的に許容される塩。
【化１】
【請求項２】
請求項１記載のトリテルペン化合物又はその薬学的に許容される塩を担子菌キノコから抽出する工程を有することを特徴とするトリテルペン化合物の製造方法。
【請求項３】
担子菌キノコがカバノアナタケである請求項１および２記載のトリテルペン化合物の製造方法
【請求項４】
哺乳動物（人も含む）にたいして、請求項１記載のトリテルペン化合物又はその薬学的に許容される塩あるいはそのプロドラッグの有効成分量を投与することを特徴とする癌抑制剤。
【請求項５】
前記トリテルペン化合物又はその薬学的に許容される塩を有効成分として１以上含有することからなる請求項４記載の癌抑制剤。
【請求項６】
前記トリテルペン化合物又はその薬学的に許容される塩を他の抗がん剤と併用することからなる請求項４記載の癌抑制剤
【請求項７】
前記請求項１記載のトリテルペン化合物又はその薬学的に許容される塩を有効成分とし、他の食品や医薬に含有することからなる発癌プロモーション抑制組成物
【請求項８】
出発材料として（１）カバノキ類の立ち木に天然に生育したカバノアナタケ菌糸、または菌核（２）カバノキ類の立ち木に人口的に植菌し生育させたカバノアナタケ菌核または菌糸、（３）これらカバノアナタケ菌核または菌糸が、繁殖した立ち木の樹皮及び木質部の組織と共に採取したカバノアナタケ菌核または菌糸、（４）固形培地で人工培養したカバノアナタケ菌糸、または菌核（５）固形培地で人口培養した後、培地と共に採取したカバノアナタケ菌糸、または菌核、（６）液体培養した後、培養液と共に採取した菌糸を選び、いずれか選ばれた出発材料からトリテルペン化合物を抽出することからなる請求項３に記載の癌抑制剤。
【請求項９】
担子菌キノコの抽出の工程で少なくとも第一段階でクロロホルムを使用することからなる請求項１記載の製造方法
【請求項１０】
前記担子菌キノコは請求項８にあるカバノアナタケである請求項９記載の製造方法
【公開番号】特開２００７−６３２４４（Ｐ２００７−６３２４４Ａ）
【公開日】平成１９年３月１５日（２００７．３．１５）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００５−２７８７０２（Ｐ２００５−２７８７０２）
【出願日】平成１７年８月２９日（２００５．８．２９）
【出願人】（５９２１４２４９６）
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成１９年３月１５日（２００７．３．１５）
【国際特許分類】
【出願日】平成１７年８月２９日（２００５．８．２９）
【出願人】（５９２１４２４９６）
【Ｆターム（参考）】
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