血清半減期または血清安定性が増大した、トランスフェリンおよびナトリウム利尿ペプチドの融合タンパク質が開示されている。好ましい融合タンパク質は、トランスフェリン部分がグリコシル化、鉄との結合および／またはトランスフェリン受容体との結合がないことまたは減少を示すよう修飾されたものを含む。
【図１】

【特許請求の範囲】
【請求項１】
ナトリウム利尿ペプチドと、天然トランスフェリン分子と比較してグリコシル化の減少を示す修飾されたトランスフェリン（ｍＴｆ）分子とを含んでなる融合タンパク質。
【請求項２】
リンカーペプチドが、前記ペプチドとｍＴｆを分けている、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項３】
ｍＴｆ分子が、天然トランスフェリン分子と比較して金属結合の減少またはトランスフェリン受容体結合の減少を示す、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項４】
ナトリウム利尿ペプチドが融合タンパク質のＮ末端にある、請求項２に記載の融合タンパク質。
【請求項５】
ナトリウム利尿ペプチドが融合タンパク質のＣ末端にある、請求項２に記載の融合タンパク質。
【請求項６】
ナトリウム利尿ペプチドが融合タンパク質内に挿入されている、請求項２に記載の融合タンパク質。
【請求項７】
少なくとも２種のナトリウム利尿ペプチドを含んでなる、請求項４に記載の融合タンパク質。
【請求項８】
融合タンパク質のＮ末端が、分泌シグナル配列を含んでなる、請求項４に記載の融合タンパク質。
【請求項９】
シグナル配列が、血清トランスフェリン、ラクトフェリン、メラノトランスフェリンまたはそれらの変異体に由来するシグナル配列である、請求項８に記載の融合タンパク質。
【請求項１０】
シグナル配列が、ＨＳＡシグナル配列、ＨＳＡ／ＭＦα−１ハイブリッドシグナル配列またはＴｆシグナル配列である、請求項８に記載の融合タンパク質。
【請求項１１】
シグナル配列が、配列番号２のアミノ酸１〜１９を含んでなるＴｆシグナル配列である、請求項１０に記載の融合タンパク質。
【請求項１２】
ナトリウム利尿ペプチドが修飾されている、請求項４に記載の融合タンパク質。
【請求項１３】
ナトリウム利尿ペプチドがアミノ酸置換、付加または欠失によって修飾されている、請求項１２に記載の融合タンパク質。
【請求項１４】
ｍＴｆ分子のトランスフェリン受容体（ＴｆＲ）に対する親和性が低下している、請求項３に記載の融合タンパク質。
【請求項１５】
ｍＴｆ分子がＴｆＲと結合しない、請求項３に記載の融合タンパク質。
【請求項１６】
ｍＴｆ分子が、修飾されたラクトフェリンまたは修飾されたメラノトランスフェリンである、請求項３に記載の融合タンパク質。
【請求項１７】
ｍＴｆタンパク質の鉄に対する親和性が低下している、請求項３に記載の融合タンパク質。
【請求項１８】
ｍＴｆタンパク質が鉄と結合しない、請求項１５に記載の融合タンパク質。
【請求項１９】
ｍＴｆタンパク質がＮ結合型グリコシル化を示さない、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項２０】
ｍＴｆタンパク質がグリコシル化を示さない、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項２１】
前記ｍＴｆタンパク質が、少なくとも１つのグリコシル化を妨げる突然変異を含んでなる、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項２２】
ナトリウム利尿ペプチドが、心房性ナトリウム利尿ペプチド（ＡＮＰ）、脳性ナトリウム利尿ペプチド（ＢＮＰ）、Ｃ型ナトリウム利尿ペプチド（ＣＮＰ）、長時間作用型ナトリウム利尿ペプチド（ＬＡＮＰ）、Ｖｅｓｓｅｌ Ｄｉｌａｔｏｒ、カリウム利尿ペプチドまたはキメラナトリウム利尿ペプチドである、請求項１から２１のいずれか一項に記載の融合タンパク質。
【請求項２３】
請求項１から２２のいずれか一項に記載の融合タンパク質をコードする核酸分子。
【請求項２４】
請求項２３に記載の核酸分子を含んでなるベクター。
【請求項２５】
請求項２４に記載のベクターを含んでなる宿主細胞。
【請求項２６】
請求項２３に記載の核酸分子を含んでなる宿主細胞。
【請求項２７】
コードされる融合タンパク質を発現する条件下で、請求項２５に記載の宿主細胞を培養するステップを含んでなる、融合タンパク質を発現させる方法。
【請求項２８】
コードされる融合タンパク質を発現する条件下で、請求項２６に記載の宿主細胞を培養するステップを含んでなる、融合タンパク質を発現させる方法。
【請求項２９】
原核生物のものまたは真核生物のものである、請求項２５に記載の宿主細胞。
【請求項３０】
原核生物のものまたは真核生物のものである、請求項２６に記載の宿主細胞。
【請求項３１】
酵母細胞である、請求項２９に記載の宿主細胞。
【請求項３２】
酵母細胞である、請求項３０に記載の宿主細胞。
【請求項３３】
請求項１に記載の融合タンパク質をコードする核酸と機能し得る形で連結している、Ｔｆシグナルペプチドをコードする核酸を含んでなる核酸分子。
【請求項３４】
Ｔｆシグナルペプチドが哺乳類Ｔｆシグナルペプチドである、請求項３３に記載の核酸分子。
【請求項３５】
哺乳類ＴｆシグナルペプチドがヒトＴｆシグナルペプチドである、請求項３４に記載の核酸分子。
【請求項３６】
ヒトＴｆシグナルペプチドが配列番号２のアミノ酸１〜１９に示される配列を有する、請求項３５に記載の核酸分子。
【請求項３７】
請求項３３から３６のいずれか一項に記載の核酸分子を含んでなるベクター。
【請求項３８】
請求項３３から３６のいずれか一項に記載の核酸分子を含んでなる宿主細胞。
【請求項３９】
請求項３７に記載のベクターを含んでなる宿主細胞。
【請求項４０】
融合タンパク質を発現および分泌する条件下で、請求項３８に記載の宿主細胞を培養するステップを含んでなる、分泌型融合タンパク質を発現させる方法。
【請求項４１】
融合タンパク質を発現および分泌する条件下で、請求項３８に記載の宿主細胞を培養するステップを含んでなる、分泌型融合タンパク質を発現させる方法。
【請求項４２】
宿主細胞が酵母である、請求項４０または４１に記載の方法。
【請求項４３】
Ｔｆ分子のシグナルペプチドをコードする核酸を、請求項１に記載の融合タンパク質をコードする核酸と機能し得る形で連結するステップと、機能し得る形で連結している核酸を宿主細胞に導入するステップと、融合タンパク質を発現および分泌する条件下で宿主細胞を培養するステップとを含んでなる、分泌型融合タンパク質を発現させる方法。
【請求項４４】
Ｔｆシグナルペプチドが哺乳類Ｔｆシグナルペプチドである、請求項４３に記載の方法。
【請求項４５】
哺乳類ＴｆシグナルペプチドがヒトＴｆシグナルペプチドである、請求項４４に記載の方法。
【請求項４６】
ヒトＴｆシグナルペプチドが、配列番号２のアミノ酸１〜１９に示される配列を有する、請求項４５に記載の方法。
【請求項４７】
宿主細胞が酵母である、請求項４３から４６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４８】
請求項２３に記載の核酸分子を含んでなるトランスジェニック動物。
【請求項４９】
融合タンパク質を製造する方法であって、請求項４８に記載のトランスジェニック動物から融合タンパク質を単離するステップを含んでなる方法。
【請求項５０】
ｍＴｆ融合タンパク質が、ラクトフェリンを含んでなる、請求項４９に記載の方法。
【請求項５１】
融合タンパク質を、トランスジェニック動物から得た生体液から単離する、請求項５０に記載の方法。
【請求項５２】
前記体液が血清または乳である、請求項５１に記載の方法。
【請求項５３】
請求項１に記載の融合タンパク質と担体を含んでなる医薬組成物。
【請求項５４】
対象において血圧を低下させる方法であって、対象に、治療上有効な量の、請求項１から２２のいずれか一項に記載の融合タンパク質を投与するステップを含んでなる方法。
【請求項５５】
対象においてナトリウムと水のバランスを調節する方法であって、対象に、治療上有効な量の、請求項１から２２のいずれか一項に記載の融合タンパク質を投与するステップを含んでなる方法。
【請求項５６】
対象において心血管疾患を治療する方法であって、対象に、治療上有効な量の、請求項１から２２のいずれか一項に記載の融合タンパク質を投与するステップを含んでなる方法。
【請求項５７】
対象において鬱血性心不全を治療する方法であって、対象に、治療上有効な量の請求項１から２２のいずれか一項に記載の融合タンパク質を投与するステップを含んでなる方法。
【請求項５８】
リンカーが、ＰＥＡＰＴＤ（配列番号１４１）、（ＰＥＡＰＴＤ）_２（配列番号１４２）、ＩｇＧヒンジリンカーと組み合わせたＰＥＡＰＴＤ（配列番号１４９および１５２）およびＩｇＧヒンジリンカーと組み合わせた（ＰＥＡＰＴＤ）_２（配列番号１９８および１９９）からなる群から選択される、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項５９】
精製されている、請求項１から２２または５８のいずれか一項に記載の融合タンパク質。

【図１】ヒト（Ｈｕ）トランスフェリン（Ｔｆ）（配列番号３）のＮおよびＣドメインのアラインメントを示す図であり、類似性および同一性が範囲指定されている。
【図２Ａ−２Ｂ】種々の種に由来するトランスフェリン配列のアラインメントを示す図である。明るい陰：類似性；濃い陰：同一性。
【図３】治療用タンパク質、ポリペプチドまたはペプチドのための、いくつかのＴｆ表面に露出された挿入部位の位置を示す図である。
【図４】ベクターｐＲＥＸ０７３０を示す図である。
【図５】ベクターｐＲＥＸ０７３１を示す図である。
【図６】ベクターｐＲＥＸ０７２２を示す図である。
【図７】ベクターｐＲＥＸ０７２３を示す図である。
【図８】ベクターｐＲＥＸ０５４９を示す図である。
【図９】ベクターｐＲＥＸ０５８４を示す図である。
【図１０】ベクターｐＲＥＸ１１４０を示す図である。
【図１１】ベクターｐＲＥＸ１１４６を示す図である。
【図１２】ベクターｐＲＥＸ０８２６を示す図である。
【図１３】ベクターｐＲＥＸ０８２７を示す図である。
【図１４】ベクターｐＲＥＸ０８２８を示す図である。
【図１５】ベクターｐＲＥＸ０８２９を示す図である。
【図１】

【図２−１】

【図２−２】

【図２−３】

【図２−４】

【図３】

【図４】

【図５】

【図６】

【図７】

【図８】

【図９】

【図１０】

【図１１】

【図１２】

【図１３】

【図１４】

【図１５】

【公表番号】特表２００９−５１１０６０（Ｐ２００９−５１１０６０Ａ）
【公表日】平成２１年３月１９日（２００９．３．１９）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００８−５３５７４０（Ｐ２００８−５３５７４０）
【出願日】平成１８年１０月１６日（２００６．１０．１６）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００６／０４０２０７
【国際公開番号】ＷＯ２００７／０４７５０４
【国際公開日】平成１９年４月２６日（２００７．４．２６）
【出願人】（５０８１１３４２４）バイオレクシス　ファーマシューティカル　コーポレーション (6)
【Ｆターム（参考）】