プールされた血液サンプルの試験方法
【課題】１組の流体サンプル中の特定の剤の存在について試験するのに使用するための
サブプールの形成方法の提供。
【解決手段】（ａ）前記流体サンプルのそれぞれをＮ−次元マトリックスの別個のマト
リックス要素と関連付け、該マトリックス要素の各々はＮ個の指数の値により同定され、該Ｎ個の指数は該マトリックスのＮ個の次元に１：１で対応し；（ｂ）前記流体サンプルの各々からＮ個のアリコートを形成し；そして（ｃ）アリコートを組合わせてサブプールを形成し、該サブプールの各々が、Ｎ個の指数の１つについての同定値を有するマトリックス要素と関連付けられる前記流体サンプルからの１つのアリコートを含むようにする；ことを含んで成る方法。
サブプールの形成方法の提供。
【解決手段】（ａ）前記流体サンプルのそれぞれをＮ−次元マトリックスの別個のマト
リックス要素と関連付け、該マトリックス要素の各々はＮ個の指数の値により同定され、該Ｎ個の指数は該マトリックスのＮ個の次元に１：１で対応し；（ｂ）前記流体サンプルの各々からＮ個のアリコートを形成し；そして（ｃ）アリコートを組合わせてサブプールを形成し、該サブプールの各々が、Ｎ個の指数の１つについての同定値を有するマトリックス要素と関連付けられる前記流体サンプルからの１つのアリコートを含むようにする；ことを含んで成る方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、一般的に、ウィルス汚染されている供与物を特異的に同定するために、血漿供与物から採取されたサンプルを調製し、そして分析するためのシステム及び方法に関する。特に、本発明は、供与体に含まれるのと同じ血漿のサンプルを保持する、それぞれ別々に密封され、且つ連結された容器を形成するための装置及び方法に関する。本発明はまた、前記容器から初期スクリーニング試験プールを形成し、そして最少数の試験サイクルで個々の汚染された供与物を同定するためのアルゴリズムに従って、ウィルスの存在について前記プールを試験するための装置及び方法にも関する。
【背景技術】
【０００２】
血液、血漿及び生物学的流体供与プログラムは、生命の本質を改良し、そして種々の外傷状況下での生命を助けるために使用される医薬及び血液製剤の製造における必須の最初の段階である。そのような生成物は、免疫学的障害の治療、血友病の治療のために使用され、そしてまた、手術方法及び他の処理プロトコールにおいて血液体積を維持し、そして回復することにも使用される。血液、血漿及び生物学的流体の療法的使用は、それらの材料の供与物がウィルス汚染をできるだけ免れることを必要とする。
【０００３】
典型的には、個々の血液、血漿又は他の流体供与物からの血清学的試験サンプルは、特定のウィルス、例えばＣ型肝炎ウィルス(HCV）及び２種の形のヒト免疫欠損ウィルス(HIV−１及びHIV−２）に対する応答に従って誘発される種々の抗体について試験される。さらに、血清学的試験サンプルは、特定のウィルス、たとえばＢ型肝炎ウィルス(HBV）と呼ばれる抗原、及びそのようなウィルスに対する応答に従って誘発される抗体についても試験され得る。サンプルが特異的抗体又は抗原のいづれかの存在について血清学的陽性である場合、供与物はさらなる使用から排除される。
【０００４】
一定のウィルス、たとえばＢ型肝炎ウィルスについての抗原試験は感染能に密接に関係していると思われるが、抗体試験はそうだと思われない。血漿ドナーは実際、あるウィルスに関連する抗体について血清学的陰性であると試験されるが、そのウィルスにより感染されることは長く知られている。たとえば、ドナーがあるウィルスにより感染されるようになることができる時間と、そのウィルスに応答して誘発される、ドナーの免疫系における抗体の出現との間に、窓が存在する。血液におけるあるウィルスの最初の出現とそのウィルスに応答して誘発される検出できる抗体の存在との間の時間は、“ウインド−ピリオド(windowperiod)”として知られている。
【０００５】
HIVの場合、平均のウインド−ピリオドは約22日であり、そしてHCVに関しては、その
平均のウインド−ピリオドは約98日と見積もられている。従って、抗体の検出に向けられる試験は、そのウインド−ピリオド、すなわちウィルス感染と抗体の生成との間の期間中に実施される場合、感染されたドナーに関して誤った表示を与える。さらに、HBVについての従来の試験が抗体及び抗原の両者についての試験を包含したとしても、より敏感な方法による試験は、HBV抗原試験において陰性であったサンプルにおけるHBVウィルスの存
在を確認して来た。
【０００６】
初期ウィルス汚染からの試験供与物の独立性をさらに確かめるために、利用できる抗体及び抗原試験を通過して来た供与物を試験する１つの方法は、ポリメラーゼ鎖反応(PCR）方法による供与物の試験を包含する。PCRは、ウィルスゲノムを増幅することによって、生物学的材料における注目のウィルスに関連する特定の DNA又は RNA配列の存在を検出するための非常に敏感な方法である。PCR試験はウィルス自体の必須成分の存在の検出に向
けられるので、ドナーにおけるその存在は、感染の直後にほとんど見出され得る。従って、理論的には、試験が感染能の独立性の誤った表示を与える間、ウインド−ピリオドは存在しない。PCR試験の方法論及び実際の用途の適切な記載は、引用により本明細書中に組込まれるアメリカ特許第 5,176,995号に含まれる。
【０００７】
しかしながら、 PCR試験は非常に高価であり、そして一般的なドナー集団は比較的少数の PCR陽性ドナーを含むので、個々の供与物の個々の試験は費用効果的又は経済的に実施可能ではない。従って、予定されたレベル以上のウィルス汚染を有するユニットを排除するために多数の血液又は血漿供与物を試験するための有効且つ費用効果的な方法が必要とされる。
【０００８】
多数の血漿供与物を試験する１つの方法は、多数の個々の血漿供与物をプールすることである。次に、そのプールが PCR試験され、そしてプールを含む個々の供与物が、PCR試験の結果に依存して、保持され、又は廃棄される。 PCR試験の数及びそれに関連する費用を減じると共に、この方法は、ウィルスフリー供与物の有意な部分の実質的な廃棄をもたらす。
【０００９】
予定されたレベル以上のウィルス汚染を有する単一の供与物のみがプールの PCR陽性試験を引き起こすであろうから、プールに寄与する、残存する供与物は、それぞれPCR陰性で十分にあり得る。この結果は、比較的少数の PCR陽性ドナーが一般的なドナー集団に存在する場合、非常に有望である。従来のプールのアプローチにおいては、それぞれPCR陰性であるそれらの供与物を包含する、プールを含んで成るすべての供与物は、 PCR陽性結果に基づいて処理される。
【００１０】
さらに、血漿供与物は、それらが受容された後、すぐにしばしば凍結される。プールするために個々の血漿供与物のサンプルが必要とされる場合、個々の供与物が融解され、血液又は血漿のアリコートがその供与物から除かれ、そして次に、供与物が保存のために再び凍結される。複数回の凍結−融解は、興味あるRNA又は DNA、及び血漿内に含まれるタンパク質の回収に悪影響を与え、従って、 PCR試験の完全性に悪影響を与える。さらに、個々の血漿供与物のアリコートがプールを形成するために取り出されるたびに、供与物は、周囲の環境及びアリコートを取り出すために使用される装置の両者からの汚染を受けやすい。
【００１１】
さらに、供与物がウィルスを含む場合、それは他の供与物を汚染する可能性がある。ウィルスフリー供与体中へのウィルス汚染の導入を回避するために、サンプル採取装置は、それぞれ個々の使用の後、殺菌されるか、又は単一の個々の供与物から単一のアリコートのみを採取するために使用されるべきであり、そして新しいサンプル採取装置が続く個々の供与物からアリコートを採取するために使用される。それらの方法のいづれも、相当に高価であり、そしてまったくの時間の浪費である。
【００１２】
従って、特定のサンプルが残存するサンプルを汚染しないでプールされ得るよう、個々の供与物から複数の血液又は血漿サンプルを得るための方法及びシステムについての必要性が存在する。また所望には、前記方法及びシステムは、臨床試験実験技術者又は試験実験室環境のいづれも汚染しないで、早く且つ効果的な態様でどのようなプールをも形成することができる。
【００１３】
さらに、望ましくは、前記方法及びシステムは、可能な最少数の試験サイクルで特異的な PCR陽性供与物のみを同定するために血液又は血漿供与物の有効且つ費用効果的試験を提供する。
【発明の開示】
【００１４】
従って、ウィルスにより感染された供与物を特異的に同定するために複数の血液又は血漿供与物からのサンプルを調製し、そして試験するための費用効果的且つ有効な方法、及び前記方法を実施するためのシステム及び装置が、本発明の実施において提供される。
本発明の方法は、血液又は血漿供給物におけるウィルス汚染について直接的に容易に試験することができるので、実質的により安全である血液及び血漿生成物をもたらす。費用効果的で高感度試験が、感染性ウインド−ピリオドに関係なく、即座に実施され得、そして汚染された供与物が同定され得る。
【００１５】
本発明の実施の１つの態様においては、前記方法は、収集容器に血液又は血漿供与物を供給する段階を含んで成る。柔軟な収集セグメントが容器に連結され、そして容器の内部に開放される。収集セグメントが収集容器からの血液又は血漿により満たされ、そしてその収集セグメントの部分が両端で密封される。収集セグメントの密封された部分が容器から除かれ、そして密封された収集セグメント部分が除かれる前又は後、多くの互いに間隔を開けられたシールが密封された端間の収集セグメントの長さにそって一定の間隔で供給される。隣接するシール間の間隔におけるセグメント部分は容器を示し、ここで個々のそのような容器は血漿又は血液サンプルを含み、そしてシール間の間隔は計画された試験のための個々のそのような容器に十分な容積を提供する。
【００１６】
本発明のより詳細な態様においては、個々血漿供与物が、柔軟な中空管セグメントによりその連結される試験容器を有する血漿収集ボトルに集められる。ドナーの血漿により満たされた後、その血漿ボトルは試験容器及び柔軟な管セグメントに血漿を移行するために傾けられ、それにより管セグメントを満たす。管セグメントがその長さにそって互いに間隔を開けられて密封され、シール間の間隔における管セグメント部分が血漿供与物のサンプルを個々に含むパウチを定義する。一連のパウチに転換された管セグメントは、次に、血漿収集ボトルから切り離され、そして試験のために必要とされるまで、凍結される。
【００１７】
本発明のさらなる観点においては、中空管セグメントは、Ｙの１つの脚上に供給される注入部位を包含する、一連の一緒に連結されたＹ−部位を含んで成り、そしてここで注入部位を含まない特定のＹ−部位の個々の分岐脚は柔軟なプラスチック管セグメントにより次のＹ−部位の基部に連鎖して連結される。互いに間隔を開けられたヒートシールが、Ｙ−部位を分離する個々の柔軟なプラスチック管セグメントの長さにそって形成される。
【００１８】
本発明のさらなる観点においては、血液又は血漿供与物により満たされる管セグメントの長さにそって複数のヒートシールを供給する装置は、第１及び第２の対向するシール定盤を含んで成る。個々のシール定盤は、くぼみ部分を交互にその長さにそって多くの互いに間隔を開けられた突出部分を含む。第１定盤上の突出及びくぼみ部分は、第２定盤上の対応する突出及びくぼみ部分と位置合せして存在する。
【００１９】
対立するシール定盤は、突出部分間で圧縮される管セグメントのそれらの部分上にヒートシールを形成し、そして対立するくぼみ部分により定義されるチャンバーを形成するために、血液又は血漿供与物により満たされるプラスチック管セグメント上に一緒に移動される。ヒートシールは、それらの間の多くの個々の及び連続的パウチを定義し、そして個々の独立した対のくぼみ部分により定義される個々のチャンバーは、パウチを収容するよう形成される。
【００２０】
特に、血液又は血漿供与物により満たされる管セグメントの長さにそって複数のヒートシールを供給するための装置が、市場後変更として、市販のヒートシール装置上に固定されるよう形成される。
【００２１】
本発明のさらなる態様においては、試験のための血漿サンプルを収集し、そして調製するためのシステムは、血漿収集容器及びその容器に連結された中空プラスチック管を含んで成り、ここでそれらの個々はプラスチックにより構成され、そしてプラスチック中に成形されるコードされた表示を含む。コードされた表示は、管セグメントの主軸にそって配置され、そしてコードは、管セグメントがその長さにそって多くの互いに間隔を開けられたシールを供給し、それにより、シール間のパウチを定義するために、互いに間隔を開けられて反復する。その表示のコード間隔は、パウチの間隔に対応し、その結果、個々のパウチは少なくとも１つのコードサイクルを含むであろう。
【００２２】
本発明の試験方法を開始するためには、第１パウチが、多くの別々の血漿供与物に対応する管セグメントグループの個々から除去される。個々のそのような第１パウチの内容物の一部が取り出され、そしてその内容物が容器にプールとして形成される。
【００２３】
本発明の典型的な態様においては、第１プールがウィルスの徴候について試験される。その第１プールがウィルス徴候について陽性であると試験される場合、次の又は第２の逐次のパウチが第１プールを形成するために使用された管セグメントの個々から除去される。第２パウチが２つのほぼ等しいサブグループに分割され、そしてサブグループプールの１つの内容物が特定のウィルスの存在について試験される。試験されたサブグループがウィルスについて陰性であると試験される場合、さらなる逐次のパウチが未試験のサブグループを形成するために使用される対応する管セグメントから除去される。そのパウチが２つのほぼ等しい次世代サブグループに分割され、そのサブグループのパウチの内容物がプール中に形成される。次世代サブグループのプールの１つが、ウィルス徴候について試験される。
【００２４】
試験されたサブグループのプールがそのようなウィルス徴候について陽性であると試験される場合、パウチがその試験されたサブグループを形成するために使用される対応する管セグメントから除去される。その工程は、単一の血漿供与物に対応する最終パウチが同定されるまで、連続的により小さなサブグループにさらに分割される個々の陽性プールによりくり返され、ここで前記連続的サブグループの個々は前記陽性サブグループのサンプルの画分を含んで成る。
【００２５】
本発明のさらなる態様においては、単一の PCR試験サイクルで陽性ウィルス徴候を有する供与物を特異的に同定するために多くの血漿供与物を試験するための追加の方法は、グリッドのｎ−次元の個々の交点で内部要素を定義するｎ−次元グリッドを定義する段階を包含する。多くの血漿供与物の個々からのサンプルがグリッドの対応する要素に位置づけられ、そして個々のサンプルがマトリックス表示Ｘrcsにより定義され、ここでマトリックス要素表示の下付き文字はグリッドの次元指数を定義する。
【００２６】
アリコートが血漿供与物の個々のサンプルから採取され、そしてサブプールに形成される。個々のサブプールは、次元指数の１つが固定されているすべての血漿供与物サンプルのアリコートを含む。サブプールは、単一のPCR試験サイクルで、一度にすべて試験され、そして陽性であることが試験されている個々のサブプールの次元指数がマイナーな方法による縮小に従って評価され、それにより、個々の陽性サブプールの次元指数により定義されるユニーク要素を明確に同定し、そして従って、特異的な陽性サンプルを明確に同定する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２７】
本発明は、予定されるレベル以上のウィルス汚染を有するそれらの特定の供与物を検出するために血液又は血漿供与物を試験するために有用なシステム、方法及び装置に関する。次に、そのような汚染された供与物は廃棄され、それにより、医薬製品のための原料流
中へのそれらの組込み、及びヒト患者中へのそれらの移入が妨げられる。本発明の実施に従って使用されるウィルス検出試験は、ウィルスに応答して誘発される抗体の代わりにウィルスを直接的に検出するいづれかの試験であり得る。前記試験は、ポリメラーゼ鎖反応(PCR）試験、及び複数の供与物からのサンプルをプールした後でさえ、ウィルスを直接的に検出するために十分に敏感である他の試験を包含する。
【００２８】
本発明の実施の１つの態様においては、多くの別々の血液又は血漿供与物が供給される。血液又は血漿サンプルは、個々の供与物から対応する柔軟な中空管セグメント中に取られる。多くの互いに間隔を開けられたシールが管セグメントの長さにそって一定の間隔で供給され、その結果、シール間の間隔におけるセグメント部分がパウチを定義し、ここで個々のパウチは血液又は血漿サンプルを含む。下記においてより詳細に論じられるように、ユニークな方法論が、サンプルがプール中に形成された後、パウチからの血漿サンプルを試験するために本発明に従って提供され、それにより、ウィルスにより汚染されるそのようないづれかの血液又は血漿が効率良く且つ効果的に検出され、そして単離される。
【００２９】
図１を参照すれば、サンプリング工程をもたらすために本発明の実施に従って供給されるシステムの典型的な態様が示されている。前記システムは、非反応性材料、たとえばポリ塩化ビニル(PVC）から構成される標準の血漿供与物容器20を含む。その供与物容器20は、その上部表面に結合されるそれぞれ２つの中空のエルボ形状継手23及び24を有するキャップ22を含む。継手は、そのような目的のためにキャップ22に供給されるオリフィスを通して供与物ボトルの内部と通じている。
【００３０】
生物学的に中性の材料、たとえば PVCプラスチックから構成される柔軟な中空充填剤管26がエルボ継手23に一端で連結され、そして他端で、たとえば、供与物を得るためにドナー中に挿入される針に連結される。例示される態様においては、試験容器28がまた、血清学的に試験されるべき供与物からのサンプルを収集するため供給される。試験容器28は一般的に、試験管形成を有し、そしてまた、生物学的に非反応性の材料から構成される。試験容器28は、一体キャップメンバー30を含み、このメンバーを通して、オリフィスが試験容器の内部に通じるよう供給される。
【００３１】
生物学的に非反応性のプラスチック材料から構成される、柔軟な中空管セグメント32が、試験容器28のキャップメンバー30と血漿供与物容器キャップの中空エルボ継手24との間に連結される。管セグメント32は、管セグメントを通して通過する流体がそのような目的のためにキャップメンバー30に供給されるオリフィスを通して試験容器28に入るであろうような態様で、キャップメンバー30に連結される。管セグメント32は、前記オリフィス中に摩擦嵌合され、それらに音波融着され、又は他方では、当業者に十分理解されている技法によりオリフィスと同軸関係して結合され得る。
【００３２】
第２オリフィスがまた、キャップメンバー30に供給され、これに、ベント管34が管セグメント32に類似する態様で連結される。ベント管34は典型的には、長さわずか１〜２インチであり、そして典型的には、挿入された摩擦嵌合細菌排除フィルター36により終結される。
【００３３】
典型的な態様においては、血液又は血漿供与物がドナーから取られ、そして必要とされるまで、続く貯蔵のために血漿供与物容器20に収集される。血漿供与物の場合、血液が典型的には、ドナーから採取され、そして連続的遠心分離装置に通され、ここで赤血球細胞が支持血漿流体から遠心分離され、そしてドナーに戻される。次に、血漿が収集される。血漿供与物がドナーから採取され、そして供与物容器20が充填された後、供与物容器は、管セグメント32に連結されるエルボ継手24以上に流体レベルを高めるために傾けられる。
【００３４】
血漿は、管セグメントに入り、管セグメントを通して流れ、そして試験容器28を充填する。充填の間、試験容器28内にトラップされる空気は、ベント管34を通して排出し、試験容器の完全な充填を可能にする。細菌排除フィルター36は戻ってくる空気におけるいづれの細菌でも濾過し、従って、周囲環境によるサンプルの汚染を妨げる。試験容器が充填された後、供与物からの血漿は、管セグメント32の充填を可能にする。
【００３５】
図２−Ａを参照すれば、供与物からの血漿サンプルが管セグメント32中に引き抜かれた後、管セグメントは、血漿供与物容器への管セグメントの連結に最とも近い位置で、熱溶接38又は他の適切な密封手段、たとえば音波溶接により密封される。追加のヒートシール40が、試験容器28へのセグメントの連結に最とも近い位置で、管セグメントに適用される。従って、両端で密閉され、そして多量の血漿供与物を含む拡大された中空管が供給される。
【００３６】
管セグメントの充填された部分が血漿供与物及び試験容器から、シール38及び40の中央から管セグメントを切除することによって除かれる。次に、別の血漿供与物容器が凍結及び貯蔵のために除かれ、そして別の試験容器が血清学的試験のために実験室に除かれる。典型的には、その内容物が、特定ウィルス、たとえばＣ型肝炎(HCV）、又はHIV−１及び
HIV−２に応答して誘発される種々の抗体について試験される。
【００３７】
追加のシール42がまた、中空管セグメント部分44を適切には個々に含んで成る、連続的な個々の及び連結されたパウチを定義するために、管セグメントの長さにそって、互いに間隔を開けられて供給される。個々のそのような部分44は、形成されるべき特定の発生プールのために必要とされる特定量の血液又は血漿を含む。たとえば、PCR試験のために形成されるべきパウチに関しては、宿主供与物から約0.02〜0.5 mlの血液又は血漿が密封され得る。
【００３８】
管セグメントは、５〜15個の個々の及び連結されたパウチを供給するような態様で密封される。パウチを定義するための密封は、管セグメントが血漿供与物容器と血清学試験容器との間から除かれた後、実施されるか、又は好ましくは、管セグメントが、静水圧発生を回避するために、血漿供与物容器にまだ結合されている状態で実施され得る。
【００３９】
密封は、圧縮され、そして密封される領域の長さが図３−Ａ及び３−Ｂにより明確に示されているように、いづれの側上のパウチの結合性を妨害しないで、シールの中央を通して切断することによってお互いからのその連結されたパウチの分離を可能にするのに十分である限り、いづれか既知の方法、たとえば熱−圧縮密封（溶封）、音波溶接又は同様の方法により実施され得る。血液又は血漿サンプル−含有アリコート部分に再分されるよう適合された管セグメントの第２態様が、血漿供与物ボトル20とサンプル容器28との間で連結され、そして本発明に従って、アリコート含有部分に分けられる収集管セグメント態様の半−透視略図である図２−Ｂに示される。
【００４０】
収集管セグメント50は、試験容器28のキャップメンバー30と血漿供与物容器キャップの中空エルボ継手24との間に連結されている。その管セグメント50は適切には、柔軟な中空の医学的品種のプラスチック管セグメント52により連続して一緒に連結される多くのＹ−部位51を含んで成る。Ｙ−部位51は、静脈内注入セットへの連結のために通常適合された形のものであり、そしてそれらを通して定義される流路を有する円柱状本体部分53を含み、これは流路の一端で出口54及び他端で入口部位55を有する。分岐口56は、Ｙ−部位の本体53にそって供給され、そして本体53を通して流体路に通じる流体路を含む。
【００４１】
１つのＹ−部位は、１つのＹ−部位の底部上の出口54と次のＹ−部位の分岐口56との間に、柔軟な中空の医学的品種のプラスチック管52を溶剤接着することによって、次のＹ−部位に連結される。初期中空入口管57は連続して、初期Ｙ−部位の分岐口に溶剤接着される。次に、初期入口管57は、血漿供与物容器キャップのエルボ継手24に連結される。連結は、エルボ継手24上に初期入口管57を摩擦固定し、それに前記管を音波溶接し、又は他方では、当業者により良く理解されている技法により継手と同軸関係で管を結合することによって実施され得る。さらに、初期入口管57は、エルボ24の末端で嵌め合いルアータイプコネクターを供給される供与物容器への直列接続されるＹ−部位の脱着しうる結合を可能にする標準のルアータイプ継手58で終結する。
【００４２】
同様な態様において、最終Ｙ−部位は、その出口部分で最終Ｙ−部位に溶剤接着される柔軟な中空の最終出口管59を嵌合される。この管はまた、その遠位端で標準のルアータイプ継手にも連結され得る。
【００４３】
第１の態様に関して記載される態様に類似する態様においては、血漿供与物がドナーから取られ、そして供与物容器20が充填された後、その供与体容器は、入口管セグメント57に連結されるエルボ継手24以上に流体レベルを高めるために傾けられる。血漿は管セグメントに入り、そして直列接続されたＹ−部位を通して流れ、そして分岐口56を通して個々のＹ−部位に入り、そして前のＹ−部位の出口54から次のＹ−部位中に流れる。血漿は、試験容器28が満たされるまで、デカントされる。試験容器が充填された後、供与物はさらに、管セグメント50を含んで成る直列接続されたＹ−部位がまた満たされるまで、デカントされる。
【００４４】
供与物からの血漿サンプルが管セグメント50中に抜き取られた後、最終出口管セグメント59は、試験容器28への最終出口管セグメントの連結に最とも近い、その長さにそっての適切な位置で、ヒートシール又は溶接40ａ、又は他の適切な密封手段、たとえば音波溶接により密閉される。
【００４５】
充填された管セグメント50は、シール40ａの中央を通して試験容器から最終出口管セグメント59を切断することによって、試験容器から除去される。他方では、管セグメント50がルアータイプコネクターで終結する場合、その管セグメント50は、ルアーを分離することにより試験容器28から除去される。第２ヒートシール38ａは、供与物容器20への初期セグメントの連結に最とも近い、その長さにそっての位置で初期入口管セグメント57に適用される。
【００４６】
管セグメント50の充填された部分は、シール38ａの中央を通して初期入口セグメント57を切断することによって、又はルアータイプ継手58（そのようなものが供給される場合）を分離することによって、血漿供与物から除去される。両端で密封され、そして連続して一緒に結合される多くのＹ−部位を含んで成る、拡張された、中空の分節管が提供される。一緒に結合されたＹ−部位の個々は、血液又は血漿供与物のアリコートを含む。
【００４７】
下記においてより詳細に記載されるように、前のＹ−部位出口を次のＹ−部位分岐口に結合する管セグメントはまた、連続的な、個々の及び結合されたサンプルアリコートを定義するためにヒートシール42ａを供給され、ここで個々は適切には、個々のＹ−部位を含んで成る。個々のそのようなＹ−部位は、形成されるべき特定の発生プールのために必要とされる特定量の血液又は血漿を含む。個々のＹ−部位を単離するための密封は、管セグメント50が血漿供与物容器から除去された後、実施され得、又は管セグメントがまだ結合されている間に実施され得る。好ましくは、Ｙ−部位を単離するための密封は、管セグメント50が血漿供与物容器にまだ結合している間に実施され、その結果、密封工程の間、管の一部の偏平化を引き起こす体積減少がサンプルの内部静水圧の上昇を引き起こさない。管セグメント50が血漿供与物容器に連結したまま存在する場合、ヒートシールにより創造される管の体積低下により創造される過剰の流体が、供与物容器中への戻りを可能にされる。従って、サンプル抽出の間、危険な噴出を導びく過剰の静水圧が安全に軽減される。
【００４８】
密封は、圧縮され、そして密封される領域の長さがシールのいづれかの側上の管セグメントの結合性を妨害しないで、シールの中央を通して切断することによって、お互いからの結合されたＹ−部位の分離を可能にするのに十分である限り、いづれかの既知方法、たとえば熱−圧縮密封（溶封）、音波溶接、又は同様の方法により実施され得る。
【００４９】
図３−Ａ及び３−Ｂを参照すれば、好ましい態様においては、パウチ（図２−Ａの42）及び／又はＹ−部位（図２−Ｂの51）間のシールは、平らなパッド領域46を含み、そのパッド領域は中央の狭い部分47を含み、これを通して、シールが連結されたパウチを分離するために切断又は裂かれる。切断は、個々の分離されたパウチが分離の後、いづれかの端での圧縮されたタブ部分48で密封されたまま存続することを確かにするために、中央部分を通して行なわれる。シールパッドの長さは、選択される分離方法に依存して、大きく又は小さくされ得る。分離は、外科用メス、断裁カッター、又は単純な一対のハサミの使用により行なわれ得る。
【００５０】
図４−Ａを参照すれば、パウチを容易に分離し、そしてセグメントにそってそれらの序列番号を同定するための手段を包含する、特定の所望するサイズのパウチを供給するために有用な密封装置60の典型的な態様が示されている。密封装置60は適切には、それぞれ対立する第１及び第２定盤を含んで成り、個々は定盤の対立する表面上で互いに間隔を開けられた関係で配置される多くの突出されたシールヘッド部分63を含む。
【００５１】
密封装置60は好ましくは、突出されるシールヘッド部分63が、１つの突出されるシールヘッド部分からもう１つのその部分までの空間が変化できるよう、それらのそれぞれの定盤にそって移動できるよう構成される。突出されたシールヘッド63は、くぼみのシールヘッド間の距離が段階的により小さくなり、その結果、密封が段階的により密接した空間の間隔で管セグメントの長さにそって実施されるよう、定盤にそって配置され得る。従って、段階的により小さなサイズのサンプルパウチ、及び従って、段階的により小さな容積含有物が、所望する位置に、それらのそれぞれの定盤にそって対立するシールヘッドの対を動かすことによって形成され得る。
【００５２】
血液又は血漿サンプルにより充填されたプラスチック管セグメントの長さにそって複数のヒートシールを形成するためには、管セグメントが、密封装置60内のそれぞれ、上方及び下方の密封定盤61及び62間に配置される。対立する定盤がお互い密接せしめられ、従って、管セグメントを圧縮し、そして密封する。図４−Ａに示されるように、個々の定盤の長さにそって多くの互いに間隔を開けられ、拡張され、又は突出されたシールヘッド部分63は、くぼみ部分64と交互に存在する。
【００５３】
対立する定盤が突出されたシールヘッド部分63間で圧縮される、血液又は血漿サンプルにより充填されるプラスチック管セグメントのそれらの部分上にヒートシールを形成するために一緒に移動されるにつれて、チャンバーがその対立するくぼみ部分64により形成される。チャンバーは、圧縮される予定でないが、しかしむしろパウチ中に形成される予定である管セグメントのそれらの部分を適応するために供給される。個々の密封された対のくぼみ部分により定義される個々のチャンバーは、パウチを収容するよう形状化される。
【００５４】
ヒーター65は、密封装置が接近される場合、管セグメント上に対立する突出部分がヒートシールを形成するよう、定盤の個々のシールヘッド部分を加熱するよう形状化される。ヒーター65は、良く知られたヒータータイプの１つ、たとえば輻射ヒーター、誘導又は抵抗ヒーター、又は同様のものであり得る。ヒーター65は好ましくは、くぼみを過度に加熱しないで、突出部分を加熱するよう、突出されたシールヘッド63の個々に直接的に連結さ
れる。
【００５５】
所望には、絶縁が、突出された部分とくぼみ部分との間での熱伝達を減じるよう提供され得る。典型的な態様においては、冷却装置66、たとえば冷却又はラジエータフィン、移動空気流、又は低温フィンガーがまた、密封装置60に連結され得る。冷却装置66は、くぼみ部分64の個々に直接的に連結され、その結果、対立するくぼみ部分が一緒に移動する場合に定義されるチャンバーが低温で維持される。従って、密封工程の間、チャンバー内に形成されるパウチに含まれる血液又は血漿サンプルは、ヒートシールの高温により損傷を受けない。
【００５６】
シールのほぼ中央を通しての狭い領域（図３−Ｂの47）は、シール定盤の拡張されたシールヘッド部分64の中央下に供給される延伸された隆起構造体67により形成される。管セグメントが上部及び下部密封ヘッド間で圧縮されるにつれて、隆起67がシール部分の上部及び底部表面上にくぼみを強制する。くぼみはシールの中央を含んで成るプラスチック材料を狭くし、従って、その分離を容易にする。
【００５７】
本発明の１つの態様において、隆起67は、管セグメントの主軸に対して直交する方向に配置されるパーホレーションを提供するためにのこ歯状にされ得る。パーホレーションは、サンプル含有領域を通しての偶然な切断によるパウチの結合性を妨害することの、鋭い目的物による切断に固有の危険性を伴わないで、個々の及び結合されたパウチのお互いからの除去を可能にする。パーホレーションは、好ましくは、シールヘッドにのこ歯を供給することによって、密封工程の間に提供される。他方では、パーホレーションは、別々の孔あけジグ又はダイの使用により、その後すぐに提供される。
【００５８】
手段68はまた、密封定盤を一緒に圧縮し、そして従って、管セグメントの長さにそってシールを形成するために、密封装置60を開放し、そして閉じるよう供給される。そのような手段は、当業界において良く知られており、そして適切には、１つの支持フレームに結合されるレバーハンドルにより開放し、そして閉じ、そしてたとえばヒンヂに対してそのフレームを動かす手動装置を含んで成る。他の適切な集成装置は、垂直ガイド、バネ、又は水力学的に作動されるピストンプレス、又は他の通常の機械的、電気的又は水力学的プレスを含んで成る。
【００５９】
図４−Ｂを参照すると、特定の所望するサイズのパウチを形成するために、又は一緒に連結されたＹ−部位を個々のサンプル含有アリコートに単離するために、均等な互いに間隔を開けられた間隔で熱−圧縮ヒートシールを提供するために有用な密封装置70の特定の態様が半−略図で示されている。密封装置70は適切には、市販のインパルスシーラー、たとえばSantaFeSprings, Californiaの ALINE Companyにより製造され、そして市販され
ているALINE Ｍ−シリーズのインパルスシーラーのそれぞれの圧力レバー及びシールバンドにそって固定されるよう適合された、それぞれ、上部及び底部定盤71及び72を含んで成る。図４−Ｂに示される特定の態様は、ALINEMC−15 Impulser ヒートシーラーに結合されるよう適合された二部分ヒートシールヘッドであり、そして本発明のシステム及び方法に従ってさらに処理するためにMC−15による血漿の予備充填されたパウチの生成を可能にする。
【００６０】
ヒートシールヘッド70の底部定盤72は、適切な硬く、耐熱性材料、たとえばDuPont Corporationにより製造され、そして市販されている積層されたKevlar・により構成される。示される態様においては、底部定盤72は好ましくは、MC−15Impulseヒートシーラーの固定表面上に固定するために約15インチの長さである。底部定盤72は、中心に配置され、そして底部定盤72の全体の長さにそって存在する縦スロット73を包含する。その縦スロット73の幅は、スロットの長さにそっての嵌合された態様において、約0.1875（３／16）インチの外径を典型的には有する標準の医学用管を適合せしめるために約0.2インチである。
【００６１】
多くの横スロット74が、中央のスロット73の方向に対して直交する方向に配置される底部定盤72の長さにそって互いに間隔を開けられた一定間隔で供給される。横スロット74は、約0.5インチの幅を有し、そして1.125(１−１／８）インチの中心上に位置する。従って、個々の横スロットは、約0.625(５／８）インチの幅である中央の縦スロット73により中心から分けられた定盤材料の残留ブロックによりその隣接物から分離される。
【００６２】
それぞれ、縦及び横スロット73及び74の両者は、底部定盤72の材料を通して単に部分的に切断され、それにより、縦及び横スロットの両者の底部表面を定義する実質的に平らなベッドが形成される。装置がヒートシールを形成するために使用される場合、長さ0.1875（３／16）インチの標準の医学用管が、縦スロット73にそって正しい位置に嵌合され、そしてヒートシール工程の間、軸受面として機能する底部定盤のベッド75上に位置する。
【００６３】
加熱要素76、たとえばニッケル−クロム（NiCr)抵抗ワイヤがスロットからスロットに
スネーク−型で供給され、そしてスロットのほぼ中央に底部定盤を含んで成る個々の横スロットにそって長く配置される。加熱要素76が横スロット74の中央を横切る場合、NiCrワイヤは、たとえばTiflon・テープの断片によりワイヤを被覆することによって、感温性プラスチック管との接触を妨げられる。従って、密封工程の間、その密封装置内に形成されるパウチに含まれる血液又は血漿サンプルは、ヒートシールの高温により損傷を受けない。
【００６４】
上部定盤71はまた、約15インチの長さであり、そしてMC−15ヒートシーラーの圧力レバーにより、底部定盤72上に吊り下げらられている。上部定盤71は、耐熱性プラスチック材料、たとえばLexan・又はミルドKevlar・から構成され、そしてその底部表面から突出し
、そして底部定盤の方向に延長する一組の等しく互いに間隔を開けられた、一般的に長方形の歯を含んで成る。歯77は約 0.5インチの長さであり、そして中心から1.125(１−１／８）インチの間隔で存在する。
【００６５】
従って、歯77の個々は、底部定盤72の横スロット74により定義されるキャビティ中に嵌合するよう必要な寸法にされていることが見出され得る。上部定盤71の歯77の個々は、底部定盤72の横スロット74及び縦スロット73の対応する交点上に吊り下げられるよう位置する。従って、個々の歯77は、ヒートシール定盤がMC−15装置の移転操作により一緒に閉鎖される場合に定義されるキャビティ中に嵌合するよう形状化される。
【００６６】
柔軟な管セグメントが縦スロット73内に配置された後、上部定盤71が、MC−15ヒートシール装置の蓋を下げることによって、底部定盤72と接触せしめられる。蓋が下げられるにつれて、上部定盤71の歯77が、底部定盤72の横スロット74により定義されるキャビティ中に入り、そして個々の横スロット74の交点でベッド75上に暴露されたまま存在する管セグメントの部分を、中央の縦スロット73と接触せしめる。電流が、管セグメントのプラスチック材料の軟化を引き起こすニッケル−クロム耐熱性ワイヤに適用される。同時に、上部定盤71が底部定盤上に圧縮され、従って、加熱要素76により軟化されるプラスチック材料に圧力が適用される。
【００６７】
密封した後、管セグメントは、元の血漿表示に対応するユニーク識別体により、少なくとも１つの端上にラベルされる。これは、たとえばセグメント上にラベルを接着することによって、又は管材料上に直接、バーコードされた標識を付与することによって達成され得る。調製されたくぼみ78は適切には、予備プリントされたバーコード識別体タッグを保持し、そして並べるためにヒートシーラー70上に提供される。そのようなタッグは、適切な溶封可能材料から形成され、そして同定目的のために第１のシール位置で管セグメント
に溶封される。次に、サンプル含有パウチを包含する管セグメントが保存のために凍結される。
【００６８】
図２−Ａに戻ると、個々の血漿表示を含んで成るシステムの種々の部分のすべてを明確に同定することが重要である。従って、ユニーク識別体、たとえばコードされた糸状物、コードされたドット、バーコード、又はユニーク識別体によりコードされる他の構造体が、血漿収集システムの物理的構造体に配置され得る。
【００６９】
たとえば、１つの態様においては、コードされた糸状物37が供与物容器20に成形され、コードされた糸状物39がボトルキャップ22の縁にそって成形され、コードされた糸状物41が試験容器28の側部にそって成形され、そしてコードされた糸状物43が互いに間隔を開けられて管セグメント中に成形される。管セグメントにおけるユニーク識別体は、管セグメントの長さにそって移動し、そしてコードが、そのように調製された個々のセグメントの識別完全性を維持しながら、管セグメントの断片化を可能にするために反復される。さらに、供与物システムの個々の部分が同じコードにより同定され、その結果、供与物の同一性がシステムのすべての部分のために維持される。
【００７０】
図３−Ａ，３−Ｂ及び４−Ａに戻ると、元の管セグメントの直線の長さにそってのパウチの位置に等しいα又は数字コードにより同定されるセグメントにそってそれぞれ個々のパウチを有することがさらに所望される。そのようなコードは、たとえばスタンピングダイの使用により隣接するパウチ間に位置するシールパッドの圧縮された部分上にプリントされ得る。
【００７１】
そのようなスタンピングダイは、図４−Ａ及び４−Ｂに示されるように密封装置の一体部分を含んで成り、その結果、密封、種々のサイズのパウチの形成、及び容易な分離のためへの狭いか又はパーホレートされた領域の供給、並びに番号の識別が、すべて単一の効果的段階で達成され得る。他方では、α又は数字識別体は、パーホレートジグ又はダイの部分を含んで成ることができる。管セグメントにおける連続的なパウチがα（ａ，ｂ，ｃ，…）又は数字（１，２，３，…）特性の対応する連続的ストリングにより、それぞれ同定されるように、α又は数字特性を次の連続的特性に進めるための手段を包含するスタンピングダイは知られている。
【００７２】
従って、第１の試験プールがいくつかの供与物からのパウチから調製される場合、品質管理検査は、個々の管セグメントからプールされるすべてのパウチが同じ位置コード、たとえば番号１を有することを確かめることによって実施され得る。同様に、同じ供与物のサンプルから第２の試験プールを調製する場合、品質管理検査は、個々の管セグメントからプールされるすべてのパウチが、たとえばパウチの圧縮された部分上にいくつかの点でプリントされた番号２を有することを確かめることによって実施され得る。
【００７３】
供与物の効果的 PCR試験をもたらすためには、試験容器28における個々の供与物から取られる血清学的試験サンプルが、特定のウィルスに対して表示される種々の既知の抗原及び／又は抗体について試験される。サンプルが１又は複数の既知の抗原又は抗体試験に関して陽性である場合、個々の供与物及びその対応する管セグメントがさらなる試験から排除され、そして両者が適切な態様で廃棄され得る。
【００７４】
残存する血清学的陰性供与物に対応する管セグメントが同定されたグループに分割され、ここで個々のグループは、選択された数の供与物を含んで成る。下記にさらに記載されるように、グループ当たりの供与物の数は、特定の高感度試験、たとえばPCR試験の感度、血漿サンプルにおける興味あるウィルス RNA又は DNAの予測される濃度、及び一般的なドナー集団内に存在する PCR陽性サンプルの予測される頻度により決定される。たとえば
、反復プラスマフェレーゼドナーの集団において興味ある RNAを含むＣ型肝炎ウィルスの検出のためには、100〜700 の個々の供与物のサンプルをプールすることが適切である。
ウィルス汚染がしばしば生じる集団のためには、50〜100 の個々の供与物のより少ないプールが適切である。
【００７５】
本発明に従ってPCR試験プールを調製するための方法の１つの態様は、図５及び図６に
記載されるであろう。一般的に力価プレートへの適用において類似するが、しかし本発明の実施に従って形状化されたサンプリングプレート80が供給される。サンプリングプレート80は、一般的に規則的な配列でプレート上に水平に配置される半円柱状サンプルウェル81を含むよう形状化される。本発明の方法を実施するために使用される適切なサンプリングプレートは、８×８（横／縦）の長方形態様で配列される64のそのようなサンプルウェルを有する。サンプリングプレート80とほぼ同じ外寸を有するカバープレート82がまた供給される。
【００７６】
カバープレート82は、サンプリングプレート80の表面を、締り嵌め結合して被覆するよう適合される。貫通穴83は、サンプリングプレート80のサンプルウェルと同じ配列態様でカバープレート上に配置される。カバー82がサンプリングプレート80の表面上に置かれる場合、貫通穴83はサンプルウェル81上に垂直に位置し、それにより貫通穴を通してサンプルウェルとの連結を可能にする。貫通穴の直径は、試験サンプルパウチ及びその対応するサンプルウェルの表面積よりも実質的に小さい。しかしながら、貫通穴の直径は、針又は他のカニューラ様物体が穴を通過し、そしてその下のサンプルウェルに入るよう十分に大きい。
【００７７】
図６に示されるように、最終（第１世代、“番号１")パウチ84は、試験されるべき特定の PCRグループに属するものとして同定された個々の管セグメントから除去される。個々の最終パウチ84は洗浄されるが、しかし開放されず、そしてサンプリングプレート80の対応するサンプルウェル81に配置される。カバープレート82が、サンプリングプレート80の上部に固定され、そしてプレート、カバー及びパウチが適切な温度で融解される。
【００７８】
約0.02〜0.5mlの等体積の血漿が、個々のパウチから除去され、そして試験容器にプー
ルされる。針85又は他のカニューラ様装置が、カバープレートにおける貫通穴を通して、そして下部のサンプリングプレートサンプルウェル中に直接的に挿入され、それにより、パウチの側壁の管材料を突き刺し、そしてそこにおける血漿サンプルに近づく。典型的な態様においては、針は、パウチに含まれる血液又は血漿のすべてを抽出し、そして周囲トレーへの流体のいづれかの漏れを最少にするために連続した真空又は吸込を提供する装置に連結される。
【００７９】
針は、針の貫通穴及びパウチの上部壁を通しての移動を可能にするが、しかしその下方向への進行を制限する装置に保持され得、その結果、針は、パウチがサンプルウェルにある場合、パウチの底壁の接触又は突刺しから保護される。カニューラが、サンプルを抽出した後、抜き取られる場合、貫通穴を囲むカバープレート材料86は、図６に示されるように、カニューラと共にパウチの偶発的抜取りを妨げる。
【００８０】
PCR試験プールを調製するための方法は個々のサンプルウェル中にカニューラをそれぞ
れ挿入することによって、サンプルを手動的に抽出することにより記載されて来たが、その方法は自動化された方法を用いて同等に実施され得る。個々のウェルにパウチを含むサンプリングプレートは、カバープレートにおける貫通穴の配置に対応する態様で配列されるカニューラのサンプリングプレート上への圧縮下降を可能にし、それにより、サンプルパウチのすべての突き刺しを可能にし、そして同時に、サンプルがそれから抽出されるよう保持され得る。他方では、単一のカニューラ又はカニューラ保持装置が個々のパウチを
連続的に突き刺し、そして流体を抜き取るよう自動化されるか又はプログラムされ得る。キャリーオーバーの汚染を防ぐために、きれいなカニューラが個々のプールのためのサンプルを抜き取るために使用される。
【００８１】
さらに、サンプリングプレート、サンプルウェル、カバー、貫通穴及びカニューラの組合せが、サンプルパケットからのサンプル流体の抽出に関して記載されるが、図２−ＢのＹ−部位サンプル容器からのサンプル流体の抽出に同等に適用できることは、当業者に明らかであろう。図５及び図６のサンプルウェルの形状は、流体保持容器の形状により決定され、そして単にマイナーの変更が、Ｙ−部位のためにそれらを再形状化するために必要とされる。たとえば、サンプルウェルは、個々のＹ−部位が挿入される、垂直に配向された、拡張されたシリンダーを含んで成る。
【００８２】
ノッチが、Ｙ−部位の分岐口が位置する戻り止めとして機能する個々のサンプルウェルの上方周囲近くの適切な位置に供給され得る。これはまた、個々のＹ−部位を方向づけ、そして追加の位置安全性を提供するよう機能することができる。図５及び図６に関して記載されるのと同じ態様において、流体は、個々のＹ−部位の接近口を通して及びサンプルとの流体連絡中にカニューラを挿入することによって、個々のＹ−部位から抽出され得る。カニューラがその接近口から除かれる場合、個々の貫通穴を取り囲むカバープレート材料が止めとして作用し、そしてサンプルウェルからのＹ−部位の抜き取りを妨げる。
【００８３】
この形状が自動化された方法を用いて本発明の実施のために同等に適切であることは、当業者に明らかであろう。一群のカニューラがカバープレートにおける貫通穴の配置に対応する態様で配置され得、それにより、Ｙ−部位の接近口のすべての突き刺しを可能にし、そしてサンプルがそれから同時に抽出される。他方では、単一のカニューラ又はカニューラ保持装置が、個々の接近口を連続的に突き刺し、そして個々のＹ−部位から流体を抜き取るよう自動化されるか又はプログラムされ得る。
【００８４】
本発明に従ってPCR試験プールを調製するために適切な装置及び方法のさらなる態様が
、図７，８，９−Ａ，９−Ｂ及び10に記載されるであろう。まず、図７を参照すれば、複数の血漿サンプルからの押し出された流体を含んで成る血漿供与物プールが、電動化された水圧プレス90において、多くの血漿供与物サンプルパケットから調製される。水圧プレス90は適切には、サンプルパケットが配置される圧縮シリンダー91、及びサンプルパケットを圧縮する水圧的に作動されるピストン92を含んで成る。パケット内に含まれるサンプルは、適切な圧縮ガス、たとえば圧縮空気又は窒素により圧縮シリンダー91から押し出され、そしてプールとしてプール用容器に収集される。
【００８５】
最初に、発生パウチ（たとえばパウチ＃１）が、試験される特定の PCRグループに属するものとして同定されている個々管セグメントから除去される。個々の発生パウチは、洗浄されるが、しかし開口されず、そしてプレス90の圧縮シリンダー91内に配置される。圧縮シリンダーの負荷は、構造的結合性を失なっているパケットによる周囲環境の偶然な汚染に対して安全にするために、クラス・生物安全フード及び空気−流路の環境内で実施される。
【００８６】
下記でより詳細に記載されるべき態様においては、圧縮ピストン92は、その圧縮シリンダー91の内容物の封じ込めが確かめられ、そしてシリンダー91及びピストン92の組合せがサンプルパケットを完全に密閉するような態様で、圧縮シリンダー91の開放スロート91ａ中に堅く嵌合される。圧縮ピストン92が圧縮シリンダー91にかみ合う態様は、シリンダー91の外部環境がサンプルパケットにより含まれるいづれかのサンプルに存在することができるいづれかの有害なウィルスによる汚染から保護されることを確保するよう企画される。
【００８７】
圧縮シリンダー91は、次に、水圧プレス90上の正しい位置にシリンダーを配置し、そしてさらに、水圧シリンダー95に操作的に連結される水圧軸94の圧縮ピストン92への配置及び嵌合を可能にするシリンダー受座93上に固定される。下記でさらに詳細に記載されるであろう態様においては、圧縮ピストン92は、そのピストン92が水圧シリンダー95の操作により高められ、そして低められるよう、水圧軸94に開放可能的に結合される。
【００８８】
シリンダー91及びピストン92がシリンダー受座93上に正しく配置され、そして軸94を通して水圧シリンダー95に結合された後、制御弁96が圧縮シリンダー91内のサンプルパケットを圧縮する軸94及びピストン92上への水圧シリンダーの力の発揮を引き起こすために作動される。水圧シリンダー95は、流体溜め99に対して低圧流体をポンピングし、それによりシリンダー95を作動せしめる水圧往復ポンプを作動する４馬力の240ボルトAC電気モー
ター97により作動される。約4,000ポンドの力が、ピストン92によりサンプルパケットに
適用される約800〜900psiの圧力を展開する水圧軸94でポイント負荷される。
【００８９】
サンプルパケットが圧縮された後、そこに含まれる流体供与物サンプルは、たとえば、圧縮ピストン92に供給されるポプ−オフ(pop-off)弁 102に圧力調節器101を通して連結
される圧縮された空気シリンダー 100により供給される圧縮ガスにより、圧縮シリンダー91から抽出される。ポプ−オフ弁102の正しい作動を可能にするために、まず、ピストン
92がその十分に延長された圧縮ピストンからわずかに上げられる。
【００９０】
圧縮された空気は、ポプ−オフ弁の限界圧力に達するまで、圧力調節器 101を通してシリンダー91中にガス抜きされる。次に、弁102が開き、シリンダーの底部に供給される収
集口 103を通して、圧縮シリンダー91から血漿プールを押出すシリンダーの内部のその圧縮されたガスによる加圧を可能にする。次に、血漿プールは、流体が圧縮された空気によりシリンダーから押出されるにつれて、急送ライン又は管により収集口103に連結されるプーリング容器に集められる。圧縮された空気は、ブリーチトラップを通過した後、クラス・生物学的安全性フード中に排出される。
【００９１】
図８を参照すれば、本発明の原理に従って構成された圧縮シリンダー91の部分的に切断された断面図が示される。圧縮シリンダー91は適切には、上部及び底部表面を有する一般的に円状のベースプレート105、及び上部表面から上方に延長する円周方向リップ 106、並びにその内面中に切られるねじ山を含んで成る。両端で開口する円柱状シリンダー壁 107がその底部端の外面上にねじ山が切られる。
【００９２】
溝又はノッチ108がシリンダー壁 107の底部端の内面に切られ、その結果、ベースプレ
ート 105の上部表面に平行に配置され、そしてそれに対して反対の面を表わす環状リップ
109が定義される。シリンダー壁107がベースプレート 105中にねじ込まれるにつれて、
ベースプレート105の表面上に配置されるスクリーンプレート 110がシリンダー壁 107の
環状リップ 109により嵌合され、そして環状リップ109とベースプレートの上部表面との
間に圧縮される。
【００９３】
図９−Ａ及び９−Ｂを参照すると、スクリーンプレート 110は一般的に、サンプル含有パケットが、それらが圧縮ピストン92により圧縮される場合に押しつけられる円状のディスク形状プレートである。図９−Ｂに示されるように、スクリーンプレート110は、流体側溝含有ラジアルスロット 111、及び同軸円形スロット 112を包含し、すべてのスロットは約１／32インチの幅を有し、そしてそれらはスクリーンプレートの上部表面に切り込まれる。ラジアルスロット111は、スクリーンプレート 110の中央に向かって傾斜する角度で切り込まれ、ここでそれらはベースプレート 105を通して穴開けされる１／４インチの排水管114(図８に見出される）を通して排出する、軸方向に位置するドレン又は溜め113
で終結する。
【００９４】
図８に戻れば、シールが、シリンダー壁 107とスクリーンプレート 110との間に、そのような目的のためにベースプレート 105中に切り込まれるシールレース116に供給されるＯ−リング 115を嵌合し、そして圧縮することによって形成される。シールレース116は
、Ｏ−リング115がスクリーンプレート 110及びシリンダー壁 107の垂直交点下に存在す
るようベースプレートに位置する。
【００９５】
ステップ 117はベースプレート105中に切り込まれ、そして嵌め合い溝 118はスクリー
ンプレート中に切り込まれ、その結果、正の戻り止めは、シリンダー壁 107がスクリーンプレートと正しく嵌合し、そしてそれらの交点がＯ−リング 115と正しく嵌合するよう、Ｏ−リングとの正しい配置のために、ベースプレート上にスクリーンプレートを正確に設置することができる。
【００９６】
図10を参照すれば、本発明の原理に従って供給される圧縮ピストン92の部分的に切断された断面図が示される。圧縮ピストン92は、ピストンヘッド 120から突出する、軸方向に延長し、中心に位置するカップ121を有する一般的に円柱状のピストンヘッド 120を含んで成り、前記カップ121は、一般的に円柱状の壁及び１つの開方端を有し、それにより、
一般的に円柱状の水圧シリンダー軸94を受けるためのソケット 123を定義する。
【００９７】
環状フランジ122は、円柱状カップ 121の円周のまわりに供給され、そしてカップの開
放マウスを取り囲む。フランジ 122の外面は、面取りされており、その結果、その面取りされた表面は、ピストンヘッド 120の本体の方に直径が大きくなる。水圧軸94がソケット
123中に進行するにつれて、一対のバネ押しの止めクリップ124は、それらが環状フラン
ジの位置の戻りを止め、そしてその下面をグリップするまで、環状フランジの面取りされた表面上に進行する。
【００９８】
ソケット 123との嵌合を適合するためには、個々の止めクリップ124は、ピストンヘッ
ドの環状止めリング122の面取りされた表面にそって進む面取りされた歯 125を包含し、
それにより、バネ押し止めクリップ 124のジョーを広げ開口する。水圧軸94が進行し続けるにつれて、止めクリップ 124の面取りされた歯 125は最終的に、環状止めリング122の面取りされた表面を通過し進行する。止めクリップのバネ押しは、カップ側壁の外面と面取りされた歯との接触を可能にする。従って、止めクリップ 124の歯は、環状止めカラー
122の下表面と嵌合され、それにより、圧縮ピストン92をグリップし、そしてピストンの両方向への移動を引き起こすための手段を提供する。
【００９９】
さらに、バネ押し止めクリップ 124が、面取りされた止め歯 125の反対側のクリップの端を一緒に単純に絞ることによって、環状止めリング 122から容易に分離され得ることは、当業者に明らかであろう。従って、ピストンヘッド120、円柱状の中心方向に固定されるカップ 121、環状止めリング122及び止めクリップ 124は組合して、圧縮ピストン92か
ら水圧軸94をすばやく且つ容易に分離するための手段を提供することが見出されるであろう。このすばやい分離特徴は、洗浄、殺菌、追加のサンプルパケットによる再充填及び同様のもののために水圧110のシリンダー受座93からのピストン92及びシリンダー91の組合せの容易な移動を可能にする。
【０１００】
図10に示されるように、圧縮ピストン92はさらに、ピストンヘッド120の周囲に提供さ
れるシールレース178に配置されるいくつかのＯ−リング 126を包含する。Ｏ−リングは
、ピストンヘッド120の円周方向外表面と圧縮シリンダー91のシリンダー壁 107の円周方
向内表面との間に密圧シールを形成するために供給される。複数のＯ−リングシールは、シリンダー91の限界内への実質的に汚染されたサンプル流体の閉じ込めを確保するために
、一定基準の安全性及び保障を提供する。３本のＯ−リング 126が図10の例示態様に示されているが、より多くの又はより少ない数のＯ−リングシールが、本発明に従って供給され得る。必要とされるすべては、シールが、シリンダー内への実質的に汚染された流体の閉じ込めを確保するために、圧縮ピストン92と圧縮シリンダー91との間に形成されることである。
【０１０１】
図８に戻ると、圧縮シリンダー側壁は、その側壁の内面中に規格化される 0.020インチの面取りされたステップを包含する。従って、シリンダー側壁 107の上部から約１インチの第１の側壁は、スクリーンプレート110及びベース 105の方に下方に延長するシリンダー側壁 107の残る部分の内径(ID) よりも約 0.040インチ大きなIDを有するよう規格化さ
れる。ステップと残る側壁部分との間の界面は、わずかに大きな上方IDからわずかに小さな下方IDまで比較的滑らかな、ある角度に方向転換された遷移を提供するために、面取りされている。
【０１０２】
シリンダー側壁107上のステップは、圧縮ピストン92がＯ−リング（図10の126)とシリ
ンダーのID表面との間に作られる単にわずかな接触を伴って、圧縮シリンダー91の開放スロート中に手動的に挿入され得る。手動的に集成されたピストン及びシリンダーの組合せがシリンダー受座（図７の93）上に配置されるとすぐに、水圧軸94がピストンのソケット
123と嵌合するよう進められ、そして止めクリップ124がピストンヘッドの環状止めカラ
ー 122の下面に対して戻り止めになるまで延長される。次に、水圧軸94がシリンダー中にさらにピストンを押し込むために、さらに進められ、それにより、シリンダー壁のID上にステップ130を越えてＯ−リングを押し進める。ステップを越えて押される場合、Ｏ−リングはシリンダー側壁 107のIDとピストンシールレース 127との間で十分に圧縮し、それにより密封を形成する。
【０１０３】
操作においては、圧縮ピストン92が、シリンダー内に含まれるサンプルパケットを圧縮するのに十分な圧力である約 800〜900psi(4,000ポンドの力点が水圧軸で負荷される)の圧力を発生する。血液又は血漿サンプル流体は、スクリーンプレートに供給される流体側溝にそって流れ、そして中央の溜めに流れ、ここでそれが集められ、そして抽出口からの流出、そしてプーリング容器中への流れを可能にされる。
【０１０４】
圧縮操作に続いて、水圧シリンダー95は、圧縮されたサンプルパケットの塊状物以上に少しの距離（約１／２〜１インチ）、圧縮ピストン92を押し上げるよう操作され、それにより、シリンダー内にチャンバーを創造する。圧縮されたガ、たとえば圧縮された空気が、ピストン92におけるポプ−オフ弁102を通してチャンバー中に押込められる。そのチャ
ンバーの加圧は、いづれかの残存する血液又は血漿サンプル流体の出口 103を通してのシリンダーからのプーリング容器への押出しを引き起こす。
【０１０５】
圧縮及びプーリング操作が完結されるとすぐに、出口 103に連結される押出しラインがクランプされ、いづれかの追加のサンプル流体のシリンダーからの排出を妨げる。この押出しラインはブリーチ容器中に配置され、そして水圧シリンダー95がシリンダーにおけるピストンのさらなる上昇を引き起こされ、それにより、容器からシリンダー中にブリーチを吸い上げる吸引力を創造する。好ましくは、圧縮及びブリーチ吸い上げ段階は、いづれかの血液又は血漿サンプルの“フラッシュバック”流体が圧縮シリンダー91から十分に押出され、そしてブリーチが圧縮チャンバーの内部容積を満たすための十分な機会を有し、それにより、その内部に見出され得るいづれかの著しいウィルス汚染を減じることを確保するために、さらに２度、反復される。
【０１０６】
次に、すばやいクランプの開放が操作され、そしてピストン／シリンダーの組合せが水圧プレス90から除かれ、そしてたとえばオートクレーブにおける殺菌工程にゆだねられる
。ピストン及びシリンダーは続いて、それらを10％のブリーチ溶液に15分間ソークし、次に水、１％ SDS（ドデシル硫酸ナトリウム）界面活性剤、及び再び水により、オートクレーブの前、すすぐことによって、化学的に清浄され得る。オートクレーブ殺菌のための十分な時間が存在しない場合、化学的な清浄は70％のETOH及び無菌水の溶液により行なわれ得る。
【０１０７】
そのような追加の化学的清浄が所望される場合、それは、HEPAフィルターを通して消耗するクラス・生物安全フードにおいて実施される。そのフード下で、圧縮シリンダーは圧縮されるべき次のグループのサンプルパケットにより充填され、そして圧縮ピストン92が圧縮シリンダー91の開放口中に手動的に挿入され、そしてピストンのＯ−リングがシリンダーの側壁に形成される面取りされたステップと接触するまで、押し下げられる。新しく再負荷されたシリンダー／ピストンの組合せは現在、圧縮プレス90のシリンダー受座93上に容易に配置される。水圧シリンダー95が、すばやい開放クランプがピストン上の環状止めリングと嵌合するよう、水圧軸94のピストン92上への押し下げを引き起こすよう操作される。圧縮、押出し、及びブリーチ−清浄工程が反復される。
【０１０８】
前述から、電気的に作動される水圧プレス（クラッシャー）90は、最少の時間での多数のサンプルパケットからの血液又は血漿サンプルの収穫を可能にする。そのような装置により圧縮され得るサンプルパケットの数は、装置の規模、及びシリンダーに含まれるサンプルパケットの塊状物に対しての圧縮ピストンにより発生せしめられ得る圧力により主に制限される。例示される態様の水圧プレスにより発生される800〜900psiの圧力は、図２−Ａに関して記載されるタイプの64個までのサンプル含有パケットを完全に圧縮するのに十分である。従って、 512個までのサンプルを含んで成る大規模プールは、本発明のクラッシャーによる８回の操作サイクルにより形成され得る。これは、512個のサンプルポケットがそれからサンプルを収穫するためにカニューラにより個々に接近される方法よりもプール形成時間において有意な減少を提供する。
【０１０９】
さらに、 512個までのサンプルを含んで成る単一の大規模プールは、シリンダーにおける多数のサンプルポケットを収容するのに十分に大きくされたクラッシャー装置から形成され得ることは、当業者に明らかであろう。水圧プレス部分はまた、高められた数のポケットのより高い抵抗を克服するために高い圧縮力を提供するようサイズ的に大きくされ得る。上記で言及されたように、プールサイズは単に、クラッシャーの所望する規模により制限される。
【０１１０】
図11を参照すれば、最少数の個々の試験によりユニークPCR陽性供与物の同定を可能に
する、本発明のPCR試験方法のフローチャートが示される。
工程は、種々の因子、たとえば一般的なドナー集団における興味あるウィルスの発生の頻度、プールへの希釈の後のウィルス DNA又は RNAのありそうな最終濃度、及び同様のものに依存する適切な初期プールサイズの定義を伴ってブロック200で開始する。
【０１１１】
PCR試験はひじょうに敏感であり、そして汚染されたサンプルにおける単一のウィルス
を検出できるけれども、ウィルスは、 PCR試験が陽性結果を付与するサンプルに必然的に存在すべきである。たとえば、比較的低いウィルス濃度を有する汚染された供与物からのサンプルが汚染されていない多数のサンプルと一緒にプールされる場合、その得られるプールにおけるウィルスの濃度は、ウィルスがPCR試験のためのプールから採取されるサンプルに存在しない統計学的確立が存在するほど、ひじょうに低いかも知れない。実際、そのようなプールは、ウィルス汚染について陰性の誤った試験結果を付与する。
【０１１２】
たとえば、0.02mlのサンプルがサンプル１ml当たり500個のウィルスの濃度でウィルス
により汚染された血漿供与物から調製される場合、その0.02mlのサンプルは平均して、10
個のウィルスを含む。この0.02mlの汚染されたサンプルが汚染さていない供与物からの他の0.02mlのサンプルと共にプールされる場合、その得られる10mlのプールは、１ml当たり１個の濃度でウィルスを含んで成る。従って、１mlのサンプルがPCR試験のためにプールから取られる場合、PCRサンプルがウィルスを含まない有意な統計学的確立が存在する。
【０１１３】
ウィルス汚染のそのような低濃度は、いくつかの方法がそのような低濃度供与物に存在するウィルスを不活性化するために利用できるので、血漿から生成される生成物に対してほとんど脅威を与えない。そのようなウィルス不活性化方法は、溶媒／界面活性剤の使用、60℃以上での適切な時間の加熱、又は同様の手段を包含する。それらの方法は一般的に、多くの“対数単位”、ウィルスの濃度を低めることができるものとして記載される。たとえば、溶媒／界面活性剤方法は、Ｃ型肝炎のウィルス汚染を、１ml当たり少なくとも107個、又は“７対数単位”、減じることができる。従って、血漿生成物、たとえば第・因子、第・因子又はプロトロンビン複合体は、たとえば陰性であることがPCR試験された後、溶媒／界面活性剤方法により通常処理された血漿供与物から調製され得る。
受容体に直接的に通常輸血される血液生成物に関しては、そのような供与物が陰性であると PCR試験された後、低濃度ウィルス汚染のいくらかの小さな危険性が残っている。
【０１１４】
図11に例示される態様においては、上記で論じられた因子、たとえばドナー集団における興味あるウィルスの発生の頻度、及び希釈の後、ウィルスの見込み濃度が評価される。低濃度で存在するウィルスが検出されない統計学的確立を最少にする、適切に分類された第１レベルのPCR試験プールが企画される。そのプールは、上記態様で、同定された管セグメントの最終パウチの含有物をプールすることによって、ブロック 201で調製される。ブロック202で、PCR試験が第１レベルの PCRプールに対して実施される。
【０１１５】
ブロック 203は、ブロック202において実施された PCR試験の結果に依存する本発明の
方法における決定点を表わす。試験に対して陰性の結果の場合、第１レベルの PCRプールを製造するために使用されるサンプルに対応するすべての供与物は、ウィルス汚染がないものとして仮定され、そして医薬製品にさらに加工するために放される。前記方法は、負のPCR試験結果を受け取り次第に出る。
【０１１６】
PCR試験が陽性表示を戻す場合、これは、ウィルス汚染が元の第１レベルのPCRプール
を製造した、１又は１よりも多くの供与物に存在することを示す。ブロック 204で、追加のサンプルパウチ、すなわち１つの最初に除かれたパウチの次のパウチが、元の第１レベルのPCRプールを含んで成る供与物に対応する管セグメントから取られる。それらの追加のサンプルパウチは、明確には、本明細書においてＡ及びＢと命名された２種のほぼ等しいサブグループに分割される。
【０１１７】
それらのサブグループが、上記と同じ態様で、個々のサブグループプールを形成するために、別々のきれいなカニューラを用いて、別々にプールされ、そしてブロック205で示されるように、サブグループプールの１つのみが PCR試験される。２種のサブグループの１つが試験されることは、本発明のためには重要でない。ブロック205においては、サブグループＡが試験されるべきサブグループとして同定されるが、しかしサブグループＢは本発明の方法を妨害しないで、容易に表示され得た。
【０１１８】
ブロック 206では、サブグループプールＡのPCR試験の結果に依存して、決定が行なわ
れる。 PCRウィルス表示に関して陰性のサブグループプールＡ試験においては、さらなる試験が、サブグループＡを含んで成る供与物からのサンプルに対して行なわれない。むしろ、ブロック207で示されるように、次々に、次のサンプルパウチが、次に２種のほぼ等
しいサブグループＡ′及びＢ′に分けられるサブグループＢを含んで成る管セグメントから取られる。この段階における個々のサブグループは、直前のサブグループを含んで成る
場合、約半分の数のサンプルを含んで成る。
【０１１９】
サブグループのサンプルパウチの内容物は再び、上記と同じ態様で別々にプールされる。その成分供与物の少なくとも１つを示す、 PCR試験で陽性であるサブグループＡがウィルス汚染されている場合、他の試験されていないサブグループ（図11の例においてはサブグループＢ）が、それがまた、PCR陽性でないことを確かめるために、ブロック 208で PCR試験される。サブグループＡは現在、ブロック209で示されるように、２種のほぼ等し
いサブグループ（Ａ′及びＢ′）にさらに分割されるサブグループになる。
【０１２０】
ブロック 210では、PCR試験が、前段階 207又は 209において定義されたサブグループ
Ａ′又はＢ′の１つのみに対して行なわれる。この方法が現在、反復し、そしてブロック
206に戻り、ここで決定段階がブロック210で実施された PCR試験の結果に適用される。
再び、 PCR試験結果が試験されたサブグループに関して陰性であることがわかる場合、試験されていないサブグループは、前のサブグループの約半分のサンプルをそれぞれ含んで成る、２種のほぼ等しいサブグループにさらに細分割される。試験されたサブグループが
PCR陽性結果に戻る場合、試験されたサブグループは、前のサブグループの半分のサンプルをそれぞれ含んで成る、２種のほぼ等しいサブグループにさらに細分割される。この場合、処理されていないサブグループが再び、それがまた、PCR陽性でなかったことを確かめるために、 PCR試験される。
【０１２１】
前記試験方法は、試験が完全であることが決定されるまで、ブロック 206〜ブロック 210を反復し続ける。試験の完結は、サブグループ分割が、単一の供与物に対応する１つのサンプルパウチのみをそれぞれ含む２種のサブグループの創造をもたらす場合のように定義される。サンプルの１つがブロック210で PCR試験され、そしてその試験結果が陰性である場合、他のサンプルはウィルス汚染された血漿供与物に属するものとして同定される。試験されたサンプルが陽性である場合、次に、その残るサンプルはまた、それがまたPCR陽性でないことを確かめるために、PCR試験される。
【０１２２】
すべての試験の完結に基づいて、本発明の方法は、ブロック 211で終了する。本発明の試験方法は、初めに試験されたプールが陽性である場合、次のような２つのPCR試験が個々の試験レベルで行なわれることを単に必要とすることは、図11のフローチャートから明白であるにちがいない：２種のサブグループの１つについての１つの初期試験、及びその対応する初期に試験されていないプールが実際、陰性であることを確かめるための１つの続く試験。その試験方法は、初期に試験されたプールが陰性である場合、個々の試験レベルで単一のPCR試験を単に必要とする。
【０１２３】
本発明のサンプル試験のためのシステム及び方法の適用が、図12に示されるように、特定の PCR試験プールサイズに関して、現在記載されるであろう。図12においては、512個
の個々の供与体の最終パウチが、 212で初期 PCR試験プールに形成される。例示のためには、 512個のサンプルのわずか１のサンプルが興味あるウィルスにより汚染された供与物から採取された。10個の個々の及び連結されるパウチを含んで成る、図12に示される管セグメントは、汚染された血漿供与物容器に元来、連結され、そしてそれから取られる管セグメントを表わす。
【０１２４】
初期 512サンプルプールがPCR試験され、そして汚染されたサンプルの存在のために、
陽性ウィルス表示に戻る。段階 213で、２種の 256供与物プール(256Ａ及び 256Ｂ）が、前の陽性プールを製造したセグメントから取られた次の連続したパウチから調製される。プール256Ｂが現在、PCR試験され、そして図12に示されるように、陰性ウィルス表示に
戻り、従ってプール256Ａが汚染された供与物からのサンプルを含むことを示す。
【０１２５】
段階 214では、２種の128供与物プールが、プール256Ａを製造した管セグメントの次
の連続的なパウチから調製される。従って、本発明によれば、プール 256Ａは、 PCR試験されずに、細分割されている。段階 203では、プール 128ＡがPCR試験され、そしてそれが陰性ウィルス表示に戻るので、プール 128Ｂは汚染された供与物からのサンプルパウチを含むことが知られている。次に、プール 128Ｂは、前のパウチがプール128Ｂを製造するそれらの管セグメントから次の連続的なパウチを除去することによって、２種の64供与物プール（64Ａ及び64Ｂ）に細分割される。
【０１２６】
次に、プール64ＢがPCR試験され、そして図12の例においては、陽性ウィルス表示に戻
る。この場合、PCR試験は、それが実際、陰性であり、そしてさらなる汚染されたサンプ
ルがプール64Ｂにおけるサンプル以上に存在しないことを確証するために、プール64Ａに対して実施される。段階 216では、プール64Ｂが、前のプール64Ｂを製造するために使用される管セグメントから次の連続的パウチを除去することによって、２種の供与物プール、すなわち32Ａ及び32Ｂにさらに細分割される。プール32ＢがPCR試験され、陰性ウィル
ス表示に戻り、そして従って、プール32Ａは２種の16供与物プール、16Ａ及び16Ｂにさらに細分割される。再び、16供与物プールは、前の陽性プール32Ａを製造した管セグメントから次の連続的なサンプルパウチを除去することによって調製される。
【０１２７】
段階 217では、プール16ＢがPCR試験され、そして陽性ウィルス表示に戻る。従って、
プール16Ａが、それが陰性であり、そしてすべての汚染されたサンプルがプール16Ｂに存在することを確かめるために PCR試験される。
【０１２８】
218では、プール16Ｂが、前の陽性プール16Ｂを製造した管セグメントから次の連続したサンプルパウチを除くことによって、２種の８供与物プール８Ａ及び８Ｂに分割される。次に、プール18ＢはPCR試験され、そして示されるように、陰性ウィルス表示に戻り、
これはプール８Ａが汚染された供与物からのサンプルを含むことを示す。次に、プール８Ａはさらに、段階219で、２種の４供与物プール４Ａ及び４Ｂに細分割される。PCR試験
が、陰性表示に戻るプール４Ｂに対して実施され、従って、プール４Ａが汚染された供与物からのサンプルを含むことを示す。次に、プール４Ａが、 220で、上記のように、同じ態様でプール２Ａ及び２Ｂに細分割される。PCR試験に基づいて、プール２Ａは陰性ウィルス表示に戻り、これは、グループ２Ｂを含んで成る２種のサンプルの１つが対応する汚染された供与物の管セグメントから取られることを示す。
【０１２９】
段階 221で、個々の供与物がグループ２Ｂを製造した管セグメントから最終パウチを除くことによって試験される。個々の最終供与物が、次に貯蔵から除かれ、そして適切に処置される、特定の陽性供与物を同定するためにPCR試験される。残る 511ウィルスフリー供与物は、医薬生成物へのさらなる加工のために保持される。
【０１３０】
上記例においては、単一の汚染された供与物が、元の 512供与物プールに対する一次 PCR試験を包含するわずか13の別々のPCR試験を実施することによって、そのような512供
与物のグループから独得に同定された。本発明の方法は、その対応する試験されたサブプールが陰性ウィルス表示に戻る限り、特定のサブプールに対する PCR試験の省略を可能にする。従って、一定のPCR試験を省略することによって、本発明の方法は、 PCR試験方法の決定を犠牲にしないで、特定の陽性供与物を同定するために実施されるべき PCR試験の回数を減じる。本発明の方法下で、すべての陽性供与物は同定されるであろうが、しかしすべての供与物が試験される必要はない。
【０１３１】
図12の典型的な態様においては、連続的により小さなサブグループのいづれか１つがP
CR試験され得、そして陽性サンプルの任意の位置が変更され得ることは明白であろう。従って、陽性供与物からのサンプルが個々の初期に試験されたサブグループに存在した場合、18回の試験が陽性供与物を独得に同定するために必要とされる（陽性表示に戻る１つの初期試験、及びその対応するサブグループが陰性であることを確かめるための１つの追加の試験）。
【０１３２】
同じように、個々の初期に試験されたサブプールが陰性表示に戻る場合、10回の試験が、陽性供与物を同定するために必要とされるであろう。実際、サブプールに対する陽性及び陰性の試験結果は、平等に分布する傾向があり、従って、平均14回の試験が、512単位に関して、初期供与物プールから独得に陽性の供与物を同定するために必要とされるであろう。
【０１３３】
従って、血漿供与物のサンプルをそれぞれ含む、個々の及び連結されたパウチを含んで成る管セグメントの供給を包含する、本発明の方法は複数の PCR試験プールを提供することにおいて好都合であることが前述から明らかである。初期及び続く一連のプールが個々の供与物の単一サンプルから同時に形成される、従来のプール調製とは異なって、本発明は試験の直前、試験プールの形成を可能にする。“ちょうど良い時”のプール形成のこの態様は、単に必要とされるような個々のパウチからの試験プールの構成を可能にする。
【０１３４】
汚染の可能性は、そのプールが密封されたサンプルパウチからそれぞれ、異なった時間で構成されるので、排除される。さらに、サンプルパウチは、試験プールを生成するために必要とされるまで、凍結されたまま存続する。DNA又は RNAの回収に悪影響を与えるかも知れない複数回の凍結−融解サイクルが回避され、従って、 PCR試験の完全性を保証する。
【０１３５】
上記方法は最少回の比較的高価な PCR試験によりウィルス陽性供与物を同定するために効果的であるが、個々の陽性供与物を同定するための他の方法もまた、本発明の実施に従って提供される。特に、１つのそのような方法は、２〜３回のPCR試験サイクル内で個々の陽性供与物を同定することができる性質を有し、従って、多数の供与物をスクリーンするために必要とされる時間及び管理経費の量を有意に減じる。
【０１３６】
たとえば、上記方法においては、特定のサブプールが陽性供与物を含むものとして同定されるとすぐに、技術者は、その特定のサブプールの形成に寄与するそれらの供与物を同定すべきである。次に、それらの供与物は再訪され、そして追加のサンプルパケットが個々の対応する管セグメントから収穫されるべきである。次に、２種の次の発生サブグループが形成されるべきであり、そしてPCR試験が反復される。この収穫、サブグループプール形成、及びPCR試験工程は、その方法がウィルス汚染された供与物を独得に同定するま
で、ますます小さな発生サブプールのために反復される。
【０１３７】
しかしながら、有意な長さの時間が、個々の PCR試験サイクル（収穫、サブグループプール形成、及びPCR試験）において消費される。例として 512のサンプルの第１発生プー
ルを取る場合、少なくとも10回の PCR試験サイクルが独得なウィルス汚染された供与物を同定するために必要とされるであろう。ひじょうに費用効果性であるが、上記方法は、時間が本質的なものである場合、PCR試験実験に対して難題を提供する。
【０１３８】
最少数の PCR試験サイクルでウィルス陽性血液又は血漿供与物を独得に同定するための方法が、図13及び14に記載されるであろう。
図13を参照すれば、最少数のPCR分析サイクルでプール中の PCR陽性の個々の供与物を
効果的に検出するための本発明に従っての PCR試験方法のフローチャートが示される。前記 PCR試験方法にあることだが、図13の方法は、PCR試験が適切なサイズのプールにおけ
る陽性サンプルの存在を検出するために十分な感度を有することを仮定する。単に例示目的のために、初期グループは、 512の血液又は血漿供与物を表わすために選択されている
。初期グループサイズが、評価される特定のゲノムマーカー、使用される PCR試験方法の感度、サンプルアリコート内のゲノムマーカー濃度の予測値、及びサンプルアリコートサイズに依存して、大きくも又は小さくもなり得ることは、当業者に理解されるであろう。
【０１３９】
前記方法は、Ｎ−次元のサンプルマトリックス又はグリッドを定義することによって、ブロック 301で開始する。マトリックスは、いづれのサイズのものでもあり得、そして２〜Ｎの数の次元のものであるが、しかし好ましくは、正方形として組織化される３−次元マトリックスである。
【０１４０】
そのようなマトリックスの例が、図14に示されており、ここで次の３次元指数により特徴づけられる正方形マトリックスのグラフが例示されている：横列、縦列、及びスライス列（ｒ，ｃ，ｓ）。図14の典型的なマトリックスにおいては、３×横列、３×縦列及び３×スライス列が存在し、それにより３3、又は27の要素を定義する。典型的な態様においては、横列は、正方形マトリックスを通して想像上の垂直な断面を取ることによって定義されるすべての要素を含んで成るものとして見なされる。図14の態様においては、たとえばマトリックスの横列３を含んで成る要素が、それらの横面上に文字ｒ3により同定される。
【０１４１】
同様に、縦列は、横列の方向に対して直交する方向に、マトリックスを通して第２の想像上の垂直な断面を取ることによって定義されるすべてのマトリックス要素を含んで成る。図14の典型的な態様においては、たとえば縦列１を含んで成る要素は、それらの縦面上に文字ｃ1を有する。スライス列は、図14の典型的なマトリックスを通して取られる水平断面を含んで成るすべての要素として定義される。横列及び縦列の定義に対して同様の態様において、スライス１を含んで成る要素は、それらのスライス面上で文字Ｓ1により同定される。
【０１４２】
従って、図14のマトリックスにおける27の要素の個々は、３×横列の１つ、３×縦列の１つ及び３×スライス列の１つに属する。数学的には、これはＸrcsの関係により表わされ得、ここでＸは要素を表わし、そしてrcs は次元指数であり、ここで指数の個々は１〜３の値を取ることができる。特定要素Ｘ113は、横列１、縦列１及びスライス列３の交点での要素として同定される。
【０１４３】
前述から、図14の典型的なマトリックスは３×３×３のマトリックスであるが、マトリックス定義及び要素形成の原理は、より多くの数の横列、縦列及びスライス列を有するマトリックスを維持するであろうことは明らかであろう。特に、８×横列、８×縦列、８×スライス列のマトリックスは数学的には、Ｘrcsとして表わされ、ここでｒ，ｃ及びｓは、１〜８の値を取ることができる。従って、３−次元８×８×８マトリックスは、 512の要素のための同定物を提供することができる。
【０１４４】
図13の方法のフロー図に戻ると、Ｎ−次元サンプルマトリックスの定義に従って、特に血液又は血漿供与物サンプルがマトリックスにより定義される要素の個々にマッピングされる。典型的な３−次元８×８×８マトリックスにおいては、512の個々の供与物からのサンプルがマトリックス要素に関係し、そして対応するユニークＸrcs インジケーターにより同定される。
【０１４５】
次に、アリコートが個々のサンプルから取られ、そして複数のマイナーなサブグループのプールが形成される。個々のマイナーなプールは、サンプル（Ｘrcs) のすべてのアリコートを含んで成り、ここで１の次元指数が定められている。換言すれば、上記典型的なマトリックスに従って、縦列又はスライス列の値にかかわらず、ｒ＝１を有するサンプル（Ｘrcs) のすべてがマイナーなプールに形成され；同様に、ｒ＝２，ｒ＝３…ｒ＝Ｎ；同様に、横列又はスライス列の値にかかわらず、ｃ＝１，ｃ＝２…ｃ＝Ｎ；横列又は縦列の値にかかわらず、ｓ＝１，ｓ＝２，…ｓ＝Ｎにより同定されるすべてのサンプルからサブプールが形成される。
【０１４６】
従って、個々のマイナーなプールは、個々の横列、縦列、スライス列、又は他の次元指数を表わし、その結果、Ｎ−次元マトリックスが定義されたなら、Ｎ−次元Ｘ（サンプルの合計数）1/nのマイナーなプールが存在するであろう。 512のサンプルを含む典型的な３−次元８×８×８マトリックスに関しては、24のマイナーなサブグループプール（８の横列プール、８の縦列プール、及び８のスライス列プール）が存在する。本発明に従ってのマイナーなプールの創造は、マイナーな方法により決定因子を減じる数学的方法に類似するように見える。同様の態様において、個々のサンプルは、マトリックスの個々の１の次元において、Ｎのマイナーなプールにおいて表わされることが理解されるであろう。
【０１４７】
マイナーなプールの形成の他に、個々のサンプルのアリコート、又は個々のマイナーなプールのアリコートが、本発明の供与物空間を含んで成る 512の供与物のすべてからのサンプルを含む単一のマスタープールを形成するために組合される。プールのすべてが形成された後、いづれかの残存するサンプル及びマイナーなプール及びマスタープールは再凍結され、そしてPCR試験のような時間が必要とされるまで、貯蔵され得る。
【０１４８】
PCR試験が所望される場合、PCR試験はまず、マトリックスを含んで成る個々のサンプ
ルのアリコートを表わすマスタープールに対して行なわれる。マスタープールに関する試験結果が陰性である場合、 PCR試験の少なくとも感度レベルまで、マトリックスを形成するサンプルにより表わされるウィルス陽性供与物は存在しない。サンプルをマトリックスに寄与して来た血液又は血漿供与物は、さらなる使用のために開放され得る。しかしながら、マスタープールのPCR試験が特定のゲノムマーカーに関して陽性である場合、第２の
PCR試験サイクルが300で入り、ここで個々のマイナーなプールが試験される。
【０１４９】
上記態様に類似する態様において、主要プール(512のサンプル）において１よりも多くの陽性サンプルであるそれらの統計学的確立が低く、好ましくは１〜２％以下であるよう、主要プールサイズが選択される。これは、一般的なドナー集団における興味あるウィルスの発生頻度を、98％〜99％の依頼レベルまで評価することによって行なわれ得る。たとえば、1,000の一般的ドナー集団からのわずか１つのドナーが98％の信頼レベルまで、興味あるウィルスにより汚染されていることが決定される場合、評価される次の1,000のドナーにおいて１つよりも多くの汚染されたドナーを発見する２％の確立が存在する。
【０１５０】
一般的に、これは、アルゴリズムが PCR試験サイクル内の適切なサイズのプールにおいて単一の反応性単位を同定することができるであろうことを保証する。本発明に従って、マトリックス内の単一の陽性サンプルが与えられる場合、マイナーなプールのうち３個のプールは、１の個々の次元において、陽性供与体のアリコートを含むであろう。典型的な態様(512のサンプルのマトリックス）においては、８のマイナーな横列プール、８のマイナーな縦列プール及び８のマイナー層プールが存在する。マスタープール試験が陽性である場合、１の横列、１の縦列及び１の層プールは、307で示されるように、第２の PCR試験サイクルの間、陽性であろう。横列、縦列及び層の要素指数の交点は、 309で示されるように、明らかに反応性供与物を同定する。
【０１５１】
例として、反応性サンプルがマトリックス要素Ｘ113 にマッピングされる場合、縦列１のマイナーなプールが陽性の PCR試験結果に戻り、そして横列２及び続く横列のマイナーなプールが陰性を示すであろう。さらに、縦列１のマイナーなプールは陽性試験結果に戻り、そして縦列２及び続く縦列のマイナーなプールが陰性を示すであろう。同様に、層１及び２のマイナーなプールは陰性結果に戻り、層３のプールは陽性を示し、そして続く層のマイナーなプールは陰性を示すであろう。３個の陽性のマイナーなプール（横列１、縦列１及び層３）は、通常、単一の要素Ｘ113のみを有する。従って、陽性供与物は、要素Ｘ113 にマッピングされるサンプルにより表わされるように、独得に同定される。
【０１５２】
マトリックスに１よりも多くの反応性供与物が存在する場合、その反応性供与物は、わずか１回の追加のPCR試験サイクルにより、本発明の方法に従って明確に同定され得る。
単一の次元指数の１よりも多くのマイナーなプールが陽性の試験結果に戻り、そして残る個々の次元指数を表わす単一のマイナーなプールのみが陽性の試験結果に戻ることが観察される場合、１よりも多くの陽性供与物が、第３のPCR試験サイクルの必要性を伴わないで、試験結果を数学的に評価することによって明確に同定され得る。
【０１５３】
たとえば、横列１のマイナーなプール（及び他は存在しない）が陽性を示し；縦列１のマイナーなプール（及び他は存在しない）が陽性を示し；そして層１のマイナーなプール及び層３のマイナーなプールの両者が陽性を示す場合、マトリックスを含んで成るわずか２つの陽性供与物が存在し、そしてそれらはＸ111及びＸ113 として明確に同定され得る。この結果に達するためには、さらなる試験は必要とされない。
【０１５４】
他方では、複数のマイナーなプールの陽性試験及びそれらの独自性が 310で示されるように、２次元指数にそって変化を示すことが観察される場合、陽性供与物に対して潜在的にマッピングされる場合に同定されるＺ2要素（ここで２はグリッドを含んで成る陽性供与物の実際の数である）が存在することが明らかであろう。
【０１５５】
たとえば、横列１のマイナーなプール（及び他は存在しない）が陽性を示し；縦列１及び３のマイナーなプールが陽性を示し；そして層１及び３マイナーなプールが陽性を示す場合、これは、潜在的に陽性の候補体要素が、Ｘ111，Ｘ113 ，Ｘ131 及びＸ133である
ことを示唆する。候補体要素に関しては、わずか２種の次元指数（縦列及び層列）が存在するので、マトリックスを含んで成る、わずか２種の実際的な陽性供与物が存在することが見出されるであろう。この情況下で、すべての４種の供与物が、陽性であるものとして任意に同定され、そして処置され、又は他方では、アリコートが個々の候補体要素から取られ、そして前記４種のうち２種が実際的な陽性の供与物を含んで成ることを独得に同定するために、311での第３のPCR試験サイクルの間、それぞれ PCR試験される。
【０１５６】
同様の態様において、マトリックスに２種以上の陽性供与物が存在し、そしてそれらの同定物が２次元以上で変化する場合、多くても、Ｚn の潜在的に陽性の同定された候補体要素が存在することが数学的に明らかであり、ここでＺは陽性供与物の実際の数であり、そしてｎは変化する次元の数である。この状況下で、アリコートがマトリックスにおけるすべての疑わしい要素から取られ、そして直接的に試験される。
【０１５７】
従って、本発明の方法は、初期の陽性マスタープールについての一回の PCR試験サイクル内で、単一の反応性供与物、又は単一の次元指数にそってのみ変化する複数の反応性供与体を含むすべてのマトリックスについての２回のPCR試験サイクル内で、及びいづれか他の状況についての３回の PCR試験サイクル内で、特定のゲノムマーカーに対して反応性である供与物の明確な同定を可能にすることが見出され得る。
【０１５８】
従って、本発明の実施は、ウィルス汚染ができる限り無いことにより実質的に安全な血液供給物及びそれから調製された血液又は血漿生成物をもたらす。好都合には、費用有効性で、高感度の試験が直接的にウィルスの存在について容易に実施される。従って、感染性窓期間の間、抗体試験に通常関係するウィルス汚染の誤った表示が回避される。さらに、本発明は、試験サンプルにおける単一のウィルスの存在を検出することができる高感度試験の費用有効使用を可能にし、従って、初期のウィルス汚染が全たくないことの保証を助ける。
【０１５９】
当業者は、本発明の種々の好ましい態様の前述の例及び記載は全体として、単なる本発明の例示であり、そして本発明の種々の成分の形状、サイズ及び数、及び包含される試験のタイプの変更が本発明の範囲内で行なわれ得ることを理解するであろう。たとえば、個々の及び連結されるパウチの長さ、及び従って、それらの容積含有物が、管セグメントの長さにそって段階的に高められ得ることは、当業者に明らかであろう。
【０１６０】
連続的な試験サブプールがより少ない数のサンプルから形成されるので、そのプールを含んで成る血漿の体積は必然的に低下する。個々の連続的サブプールにおける血漿の十分な体積を維持するためには、連続的なサンプルパウチは、所望する最終プール体積を収容するためにより多くの体積を含むことができることは、明白であるべきである。約１ml〜約10mlのサイズ範囲のプールを収容するために、連続的サンプルパウチの体積は、連続的段階において、約0.02mlから約0.5mlに高まるであろうことは明らかであろう。
【０１６１】
本発明のシステムは典型的な血漿収集容器及び関連する管セグメントに限定されないことはまた、当業者に明らかであろう。血液バッグ又は他の生物学的流体容器は容易に使用され得、そして適切な管セグメントが、流体収集の前、及び流体収集が完結された後、それらに結合され得る。サンプル量の生物学的流体が、本発明の実施に従ってパウチ中に形成される管セグメントに移行されることが、必要とされるすべてである。
従って、本発明は、本明細書に記載される特定の態様に限定されず、むしろ請求の範囲により定義される。
【０１６２】
（発明の要旨）
本発明は以下を提供する。
（１）1回のPCR試験サイクルで、陽性ウィルス表示を有する供与物を特異的に同定するために多数の血漿供与物を試験するための方法であって:
多くの血漿供与物を用意し、ここで個々の供与物の一部が互いに間隔を開けられたシールによりその長さにそって分離される管セグメントに含まれ、前記シール間の管セグメントが連続的容器を定義し、個々の容器は前記供与物の血漿サンプルを含み;
n次元のグリッドを定義し、ここでnは整数であり、前記グリーッドはさらに、多数の内部要素を含んで成り、個々の要素はn次元のグリッドの交点により定義され;
多くの血漿供与物の特定の1つからのサンプルを、前記グリッドの個々の要素の対応す
る1つに対してマッピングし、個々のサンプルはマトリックス表示Xｒｃｓにより定義され、ここでマトリックス表示の下付き文字はグリッドの次元指数を定義し;
個々の多くの血漿供与物の個々のサンプルからアリコートを取り、ここで個々のサンプルから取られるアリコートの数はグリッドを含んで成る次元指数の数により定義され;
個々のサンプルのアリコートからサブプールを形成し、ここで個々のサブプールは1次
元指数が定められるすべてのサンプルのアリコートを含んで成り;
1回のPCR試験サイクルで、ウィルス表示について前記サブプールのすべてを試験し;そ
して
マイナーな方法による縮小に従って、1回のPCR試験サイクルで陽性であると試験された個々のサブプールの次元指数を評価し、それにより、個々の陽性サブプールの次元指数により定義されるユニ一ク要素を明白に同定し、従って、特異的な陽性サンプルを明白に同定することを含んで成る方法。
（２）前記n次元グリッドが少なくとも3一次元グリッドである第1項記載の方法。
（３）前記グリッドが3次元グリッドであり、そして個々のサンプルがXｒｃｓとして同定されるマトリックス要素表示により特徴づけられ、ここで前記次元指数r,c及びsは前記グリッドの横列、縦列、及びスライス列を同定する第2項記載の方法。
（４）3種のアリコートが供与物の個々の血漿サンプルから取られる第3項記載の方法。
（５）前記サブプール形成段階がさらに、
ユニーク整数により同定されるr指数を有する個々のサンプルのアリコートからサブプ
ールを形成し;
ユニーク整数により同定されるc指数を有する個々のサンプルのアリコートからサブプ
ールを形成し;
ユニーク整数により同定されるs指数を有する個々のサンプルのアリコートからサブプ
ールを形成し;そして
ウィルス表示について個々のr,c及びsサブプールをPCR試験することを含んで成る第4項記載の方法。
（６）陽性のウィルス表示に戻された個々のrサブプールの整数指数を決定し;
陽性のウィルス表示に戻された個々のcサブプールの整数指数を決定し；そして
陽性のウィルス表示に戻された個々のsサブプールの整数指数を決定する段階をさらに
含んで成る第5項記載の方法。
（７）陽性のウィルス表示に戻った、r、,c、及びsサブプールの整数指数が、その整数表示が次元指数r,c及びsの代わりに置換され、それにより前記マッピングXｒｃｓからサン
プルが同定される場合、陽性のサンプルを独得に同定する第6項記載の方法。
（８）すべての候補体サンプルが、1つよりも多くの指数が陽性の、ウィルス表示を有す
るものとして、1つよりも多くのサブプールを同定するかどうか、個々に試験される第7項記載の方法。
【図面の簡単な説明】
【０１６３】
【図１】図１は、本発明の実施において有用な管セグメントにより結合される血漿供与物ボトル及びサンプル容器の１つの例の半−透視略図である。
【図２−Ａ】図2-Aは、血漿供与物ボトルとサンプル容器との間で連結され、そして本発明に従ってパウチに分割される管セグメントの半−透視略図である。
【図２−Ｂ】図2-Bは、血漿供与物ボトルとサンプル容器との間で連結され、そして本発明に従って一連の一緒に連結されたＹ−部位を含む管セグメントの半−透視略図である。
【図３−Ａ】図3-Aは、パウチを分離するシールの追加の詳細を示す、図2-Aに示される管セグメントの一部の拡大された上部平面図である。
【図３−Ｂ】図3-Bは、管セグメントシールの半−略図断面図である。
【図４−Ａ】図4-Aは、個々のパウチ中に管を密封するために本発明の実施に従って供給される装置の半−透視略図である。
【図４−Ｂ】図4-Bは、市販のヒートシーラー上に固定するための本発明の実施に従って供給されるヒートシール装置の上部及び底部定盤の半−透視略図である。
【図５】図５は、本発明に従って供給されるサンプリングプレート及びカバーの半−透視略図である。
【図６】図６は、本発明に従って供給されるサンプリングプレートのサンプルウェルに含まれる血漿パウチの部分的半−略図断面図である。
【図７】図７は、サンプルパウチを圧縮し、そしてそこにおける流体サンプル容器をプール中に送るための本発明に従って供給される装置の半−透視略図である。
【図８】図８は、図７の装置の圧縮シリンダーの半−略図断面図である。
【図９−Ａ】図9-Aは、サンプル含有パケットが圧縮されるスクリーンプレートの半−略図部分断面図である。
【図９−Ｂ】図9-Bは、圧縮されたサンプル容器からサンプル流体を収集するための放射状及び同心性流体側溝を示すスクリーンプレートの半−略図上部図である。
【図１０】図10は、図７の装置の圧縮ピストンの半−略図部分断面図である。
【図１１】図11は、供与物プールからPCR陽性ドナーを決定するための本発明の試験方法論を示すフローチャートである。
【図１２】図12は、512供与物プールか単一の PCR陽性供与物を同定するための本発明の試験順序を示すフローチャートである。
【図１３】図13は、供与物プールからPCR陽性ドナーを決定するための本発明の第２の試験方法論を示すフローチャートである。
【図１４】図14は、ｒ，ｃ及びｓ指数の定義を示す本発明の３次元グリッドの表示である。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、一般的に、ウィルス汚染されている供与物を特異的に同定するために、血漿供与物から採取されたサンプルを調製し、そして分析するためのシステム及び方法に関する。特に、本発明は、供与体に含まれるのと同じ血漿のサンプルを保持する、それぞれ別々に密封され、且つ連結された容器を形成するための装置及び方法に関する。本発明はまた、前記容器から初期スクリーニング試験プールを形成し、そして最少数の試験サイクルで個々の汚染された供与物を同定するためのアルゴリズムに従って、ウィルスの存在について前記プールを試験するための装置及び方法にも関する。
【背景技術】
【０００２】
血液、血漿及び生物学的流体供与プログラムは、生命の本質を改良し、そして種々の外傷状況下での生命を助けるために使用される医薬及び血液製剤の製造における必須の最初の段階である。そのような生成物は、免疫学的障害の治療、血友病の治療のために使用され、そしてまた、手術方法及び他の処理プロトコールにおいて血液体積を維持し、そして回復することにも使用される。血液、血漿及び生物学的流体の療法的使用は、それらの材料の供与物がウィルス汚染をできるだけ免れることを必要とする。
【０００３】
典型的には、個々の血液、血漿又は他の流体供与物からの血清学的試験サンプルは、特定のウィルス、例えばＣ型肝炎ウィルス(HCV）及び２種の形のヒト免疫欠損ウィルス(HIV−１及びHIV−２）に対する応答に従って誘発される種々の抗体について試験される。さらに、血清学的試験サンプルは、特定のウィルス、たとえばＢ型肝炎ウィルス(HBV）と呼ばれる抗原、及びそのようなウィルスに対する応答に従って誘発される抗体についても試験され得る。サンプルが特異的抗体又は抗原のいづれかの存在について血清学的陽性である場合、供与物はさらなる使用から排除される。
【０００４】
一定のウィルス、たとえばＢ型肝炎ウィルスについての抗原試験は感染能に密接に関係していると思われるが、抗体試験はそうだと思われない。血漿ドナーは実際、あるウィルスに関連する抗体について血清学的陰性であると試験されるが、そのウィルスにより感染されることは長く知られている。たとえば、ドナーがあるウィルスにより感染されるようになることができる時間と、そのウィルスに応答して誘発される、ドナーの免疫系における抗体の出現との間に、窓が存在する。血液におけるあるウィルスの最初の出現とそのウィルスに応答して誘発される検出できる抗体の存在との間の時間は、“ウインド−ピリオド(windowperiod)”として知られている。
【０００５】
HIVの場合、平均のウインド−ピリオドは約22日であり、そしてHCVに関しては、その
平均のウインド−ピリオドは約98日と見積もられている。従って、抗体の検出に向けられる試験は、そのウインド−ピリオド、すなわちウィルス感染と抗体の生成との間の期間中に実施される場合、感染されたドナーに関して誤った表示を与える。さらに、HBVについての従来の試験が抗体及び抗原の両者についての試験を包含したとしても、より敏感な方法による試験は、HBV抗原試験において陰性であったサンプルにおけるHBVウィルスの存
在を確認して来た。
【０００６】
初期ウィルス汚染からの試験供与物の独立性をさらに確かめるために、利用できる抗体及び抗原試験を通過して来た供与物を試験する１つの方法は、ポリメラーゼ鎖反応(PCR）方法による供与物の試験を包含する。PCRは、ウィルスゲノムを増幅することによって、生物学的材料における注目のウィルスに関連する特定の DNA又は RNA配列の存在を検出するための非常に敏感な方法である。PCR試験はウィルス自体の必須成分の存在の検出に向
けられるので、ドナーにおけるその存在は、感染の直後にほとんど見出され得る。従って、理論的には、試験が感染能の独立性の誤った表示を与える間、ウインド−ピリオドは存在しない。PCR試験の方法論及び実際の用途の適切な記載は、引用により本明細書中に組込まれるアメリカ特許第 5,176,995号に含まれる。
【０００７】
しかしながら、 PCR試験は非常に高価であり、そして一般的なドナー集団は比較的少数の PCR陽性ドナーを含むので、個々の供与物の個々の試験は費用効果的又は経済的に実施可能ではない。従って、予定されたレベル以上のウィルス汚染を有するユニットを排除するために多数の血液又は血漿供与物を試験するための有効且つ費用効果的な方法が必要とされる。
【０００８】
多数の血漿供与物を試験する１つの方法は、多数の個々の血漿供与物をプールすることである。次に、そのプールが PCR試験され、そしてプールを含む個々の供与物が、PCR試験の結果に依存して、保持され、又は廃棄される。 PCR試験の数及びそれに関連する費用を減じると共に、この方法は、ウィルスフリー供与物の有意な部分の実質的な廃棄をもたらす。
【０００９】
予定されたレベル以上のウィルス汚染を有する単一の供与物のみがプールの PCR陽性試験を引き起こすであろうから、プールに寄与する、残存する供与物は、それぞれPCR陰性で十分にあり得る。この結果は、比較的少数の PCR陽性ドナーが一般的なドナー集団に存在する場合、非常に有望である。従来のプールのアプローチにおいては、それぞれPCR陰性であるそれらの供与物を包含する、プールを含んで成るすべての供与物は、 PCR陽性結果に基づいて処理される。
【００１０】
さらに、血漿供与物は、それらが受容された後、すぐにしばしば凍結される。プールするために個々の血漿供与物のサンプルが必要とされる場合、個々の供与物が融解され、血液又は血漿のアリコートがその供与物から除かれ、そして次に、供与物が保存のために再び凍結される。複数回の凍結−融解は、興味あるRNA又は DNA、及び血漿内に含まれるタンパク質の回収に悪影響を与え、従って、 PCR試験の完全性に悪影響を与える。さらに、個々の血漿供与物のアリコートがプールを形成するために取り出されるたびに、供与物は、周囲の環境及びアリコートを取り出すために使用される装置の両者からの汚染を受けやすい。
【００１１】
さらに、供与物がウィルスを含む場合、それは他の供与物を汚染する可能性がある。ウィルスフリー供与体中へのウィルス汚染の導入を回避するために、サンプル採取装置は、それぞれ個々の使用の後、殺菌されるか、又は単一の個々の供与物から単一のアリコートのみを採取するために使用されるべきであり、そして新しいサンプル採取装置が続く個々の供与物からアリコートを採取するために使用される。それらの方法のいづれも、相当に高価であり、そしてまったくの時間の浪費である。
【００１２】
従って、特定のサンプルが残存するサンプルを汚染しないでプールされ得るよう、個々の供与物から複数の血液又は血漿サンプルを得るための方法及びシステムについての必要性が存在する。また所望には、前記方法及びシステムは、臨床試験実験技術者又は試験実験室環境のいづれも汚染しないで、早く且つ効果的な態様でどのようなプールをも形成することができる。
【００１３】
さらに、望ましくは、前記方法及びシステムは、可能な最少数の試験サイクルで特異的な PCR陽性供与物のみを同定するために血液又は血漿供与物の有効且つ費用効果的試験を提供する。
【発明の開示】
【００１４】
従って、ウィルスにより感染された供与物を特異的に同定するために複数の血液又は血漿供与物からのサンプルを調製し、そして試験するための費用効果的且つ有効な方法、及び前記方法を実施するためのシステム及び装置が、本発明の実施において提供される。
本発明の方法は、血液又は血漿供給物におけるウィルス汚染について直接的に容易に試験することができるので、実質的により安全である血液及び血漿生成物をもたらす。費用効果的で高感度試験が、感染性ウインド−ピリオドに関係なく、即座に実施され得、そして汚染された供与物が同定され得る。
【００１５】
本発明の実施の１つの態様においては、前記方法は、収集容器に血液又は血漿供与物を供給する段階を含んで成る。柔軟な収集セグメントが容器に連結され、そして容器の内部に開放される。収集セグメントが収集容器からの血液又は血漿により満たされ、そしてその収集セグメントの部分が両端で密封される。収集セグメントの密封された部分が容器から除かれ、そして密封された収集セグメント部分が除かれる前又は後、多くの互いに間隔を開けられたシールが密封された端間の収集セグメントの長さにそって一定の間隔で供給される。隣接するシール間の間隔におけるセグメント部分は容器を示し、ここで個々のそのような容器は血漿又は血液サンプルを含み、そしてシール間の間隔は計画された試験のための個々のそのような容器に十分な容積を提供する。
【００１６】
本発明のより詳細な態様においては、個々血漿供与物が、柔軟な中空管セグメントによりその連結される試験容器を有する血漿収集ボトルに集められる。ドナーの血漿により満たされた後、その血漿ボトルは試験容器及び柔軟な管セグメントに血漿を移行するために傾けられ、それにより管セグメントを満たす。管セグメントがその長さにそって互いに間隔を開けられて密封され、シール間の間隔における管セグメント部分が血漿供与物のサンプルを個々に含むパウチを定義する。一連のパウチに転換された管セグメントは、次に、血漿収集ボトルから切り離され、そして試験のために必要とされるまで、凍結される。
【００１７】
本発明のさらなる観点においては、中空管セグメントは、Ｙの１つの脚上に供給される注入部位を包含する、一連の一緒に連結されたＹ−部位を含んで成り、そしてここで注入部位を含まない特定のＹ−部位の個々の分岐脚は柔軟なプラスチック管セグメントにより次のＹ−部位の基部に連鎖して連結される。互いに間隔を開けられたヒートシールが、Ｙ−部位を分離する個々の柔軟なプラスチック管セグメントの長さにそって形成される。
【００１８】
本発明のさらなる観点においては、血液又は血漿供与物により満たされる管セグメントの長さにそって複数のヒートシールを供給する装置は、第１及び第２の対向するシール定盤を含んで成る。個々のシール定盤は、くぼみ部分を交互にその長さにそって多くの互いに間隔を開けられた突出部分を含む。第１定盤上の突出及びくぼみ部分は、第２定盤上の対応する突出及びくぼみ部分と位置合せして存在する。
【００１９】
対立するシール定盤は、突出部分間で圧縮される管セグメントのそれらの部分上にヒートシールを形成し、そして対立するくぼみ部分により定義されるチャンバーを形成するために、血液又は血漿供与物により満たされるプラスチック管セグメント上に一緒に移動される。ヒートシールは、それらの間の多くの個々の及び連続的パウチを定義し、そして個々の独立した対のくぼみ部分により定義される個々のチャンバーは、パウチを収容するよう形成される。
【００２０】
特に、血液又は血漿供与物により満たされる管セグメントの長さにそって複数のヒートシールを供給するための装置が、市場後変更として、市販のヒートシール装置上に固定されるよう形成される。
【００２１】
本発明のさらなる態様においては、試験のための血漿サンプルを収集し、そして調製するためのシステムは、血漿収集容器及びその容器に連結された中空プラスチック管を含んで成り、ここでそれらの個々はプラスチックにより構成され、そしてプラスチック中に成形されるコードされた表示を含む。コードされた表示は、管セグメントの主軸にそって配置され、そしてコードは、管セグメントがその長さにそって多くの互いに間隔を開けられたシールを供給し、それにより、シール間のパウチを定義するために、互いに間隔を開けられて反復する。その表示のコード間隔は、パウチの間隔に対応し、その結果、個々のパウチは少なくとも１つのコードサイクルを含むであろう。
【００２２】
本発明の試験方法を開始するためには、第１パウチが、多くの別々の血漿供与物に対応する管セグメントグループの個々から除去される。個々のそのような第１パウチの内容物の一部が取り出され、そしてその内容物が容器にプールとして形成される。
【００２３】
本発明の典型的な態様においては、第１プールがウィルスの徴候について試験される。その第１プールがウィルス徴候について陽性であると試験される場合、次の又は第２の逐次のパウチが第１プールを形成するために使用された管セグメントの個々から除去される。第２パウチが２つのほぼ等しいサブグループに分割され、そしてサブグループプールの１つの内容物が特定のウィルスの存在について試験される。試験されたサブグループがウィルスについて陰性であると試験される場合、さらなる逐次のパウチが未試験のサブグループを形成するために使用される対応する管セグメントから除去される。そのパウチが２つのほぼ等しい次世代サブグループに分割され、そのサブグループのパウチの内容物がプール中に形成される。次世代サブグループのプールの１つが、ウィルス徴候について試験される。
【００２４】
試験されたサブグループのプールがそのようなウィルス徴候について陽性であると試験される場合、パウチがその試験されたサブグループを形成するために使用される対応する管セグメントから除去される。その工程は、単一の血漿供与物に対応する最終パウチが同定されるまで、連続的により小さなサブグループにさらに分割される個々の陽性プールによりくり返され、ここで前記連続的サブグループの個々は前記陽性サブグループのサンプルの画分を含んで成る。
【００２５】
本発明のさらなる態様においては、単一の PCR試験サイクルで陽性ウィルス徴候を有する供与物を特異的に同定するために多くの血漿供与物を試験するための追加の方法は、グリッドのｎ−次元の個々の交点で内部要素を定義するｎ−次元グリッドを定義する段階を包含する。多くの血漿供与物の個々からのサンプルがグリッドの対応する要素に位置づけられ、そして個々のサンプルがマトリックス表示Ｘrcsにより定義され、ここでマトリックス要素表示の下付き文字はグリッドの次元指数を定義する。
【００２６】
アリコートが血漿供与物の個々のサンプルから採取され、そしてサブプールに形成される。個々のサブプールは、次元指数の１つが固定されているすべての血漿供与物サンプルのアリコートを含む。サブプールは、単一のPCR試験サイクルで、一度にすべて試験され、そして陽性であることが試験されている個々のサブプールの次元指数がマイナーな方法による縮小に従って評価され、それにより、個々の陽性サブプールの次元指数により定義されるユニーク要素を明確に同定し、そして従って、特異的な陽性サンプルを明確に同定する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２７】
本発明は、予定されるレベル以上のウィルス汚染を有するそれらの特定の供与物を検出するために血液又は血漿供与物を試験するために有用なシステム、方法及び装置に関する。次に、そのような汚染された供与物は廃棄され、それにより、医薬製品のための原料流
中へのそれらの組込み、及びヒト患者中へのそれらの移入が妨げられる。本発明の実施に従って使用されるウィルス検出試験は、ウィルスに応答して誘発される抗体の代わりにウィルスを直接的に検出するいづれかの試験であり得る。前記試験は、ポリメラーゼ鎖反応(PCR）試験、及び複数の供与物からのサンプルをプールした後でさえ、ウィルスを直接的に検出するために十分に敏感である他の試験を包含する。
【００２８】
本発明の実施の１つの態様においては、多くの別々の血液又は血漿供与物が供給される。血液又は血漿サンプルは、個々の供与物から対応する柔軟な中空管セグメント中に取られる。多くの互いに間隔を開けられたシールが管セグメントの長さにそって一定の間隔で供給され、その結果、シール間の間隔におけるセグメント部分がパウチを定義し、ここで個々のパウチは血液又は血漿サンプルを含む。下記においてより詳細に論じられるように、ユニークな方法論が、サンプルがプール中に形成された後、パウチからの血漿サンプルを試験するために本発明に従って提供され、それにより、ウィルスにより汚染されるそのようないづれかの血液又は血漿が効率良く且つ効果的に検出され、そして単離される。
【００２９】
図１を参照すれば、サンプリング工程をもたらすために本発明の実施に従って供給されるシステムの典型的な態様が示されている。前記システムは、非反応性材料、たとえばポリ塩化ビニル(PVC）から構成される標準の血漿供与物容器20を含む。その供与物容器20は、その上部表面に結合されるそれぞれ２つの中空のエルボ形状継手23及び24を有するキャップ22を含む。継手は、そのような目的のためにキャップ22に供給されるオリフィスを通して供与物ボトルの内部と通じている。
【００３０】
生物学的に中性の材料、たとえば PVCプラスチックから構成される柔軟な中空充填剤管26がエルボ継手23に一端で連結され、そして他端で、たとえば、供与物を得るためにドナー中に挿入される針に連結される。例示される態様においては、試験容器28がまた、血清学的に試験されるべき供与物からのサンプルを収集するため供給される。試験容器28は一般的に、試験管形成を有し、そしてまた、生物学的に非反応性の材料から構成される。試験容器28は、一体キャップメンバー30を含み、このメンバーを通して、オリフィスが試験容器の内部に通じるよう供給される。
【００３１】
生物学的に非反応性のプラスチック材料から構成される、柔軟な中空管セグメント32が、試験容器28のキャップメンバー30と血漿供与物容器キャップの中空エルボ継手24との間に連結される。管セグメント32は、管セグメントを通して通過する流体がそのような目的のためにキャップメンバー30に供給されるオリフィスを通して試験容器28に入るであろうような態様で、キャップメンバー30に連結される。管セグメント32は、前記オリフィス中に摩擦嵌合され、それらに音波融着され、又は他方では、当業者に十分理解されている技法によりオリフィスと同軸関係して結合され得る。
【００３２】
第２オリフィスがまた、キャップメンバー30に供給され、これに、ベント管34が管セグメント32に類似する態様で連結される。ベント管34は典型的には、長さわずか１〜２インチであり、そして典型的には、挿入された摩擦嵌合細菌排除フィルター36により終結される。
【００３３】
典型的な態様においては、血液又は血漿供与物がドナーから取られ、そして必要とされるまで、続く貯蔵のために血漿供与物容器20に収集される。血漿供与物の場合、血液が典型的には、ドナーから採取され、そして連続的遠心分離装置に通され、ここで赤血球細胞が支持血漿流体から遠心分離され、そしてドナーに戻される。次に、血漿が収集される。血漿供与物がドナーから採取され、そして供与物容器20が充填された後、供与物容器は、管セグメント32に連結されるエルボ継手24以上に流体レベルを高めるために傾けられる。
【００３４】
血漿は、管セグメントに入り、管セグメントを通して流れ、そして試験容器28を充填する。充填の間、試験容器28内にトラップされる空気は、ベント管34を通して排出し、試験容器の完全な充填を可能にする。細菌排除フィルター36は戻ってくる空気におけるいづれの細菌でも濾過し、従って、周囲環境によるサンプルの汚染を妨げる。試験容器が充填された後、供与物からの血漿は、管セグメント32の充填を可能にする。
【００３５】
図２−Ａを参照すれば、供与物からの血漿サンプルが管セグメント32中に引き抜かれた後、管セグメントは、血漿供与物容器への管セグメントの連結に最とも近い位置で、熱溶接38又は他の適切な密封手段、たとえば音波溶接により密封される。追加のヒートシール40が、試験容器28へのセグメントの連結に最とも近い位置で、管セグメントに適用される。従って、両端で密閉され、そして多量の血漿供与物を含む拡大された中空管が供給される。
【００３６】
管セグメントの充填された部分が血漿供与物及び試験容器から、シール38及び40の中央から管セグメントを切除することによって除かれる。次に、別の血漿供与物容器が凍結及び貯蔵のために除かれ、そして別の試験容器が血清学的試験のために実験室に除かれる。典型的には、その内容物が、特定ウィルス、たとえばＣ型肝炎(HCV）、又はHIV−１及び
HIV−２に応答して誘発される種々の抗体について試験される。
【００３７】
追加のシール42がまた、中空管セグメント部分44を適切には個々に含んで成る、連続的な個々の及び連結されたパウチを定義するために、管セグメントの長さにそって、互いに間隔を開けられて供給される。個々のそのような部分44は、形成されるべき特定の発生プールのために必要とされる特定量の血液又は血漿を含む。たとえば、PCR試験のために形成されるべきパウチに関しては、宿主供与物から約0.02〜0.5 mlの血液又は血漿が密封され得る。
【００３８】
管セグメントは、５〜15個の個々の及び連結されたパウチを供給するような態様で密封される。パウチを定義するための密封は、管セグメントが血漿供与物容器と血清学試験容器との間から除かれた後、実施されるか、又は好ましくは、管セグメントが、静水圧発生を回避するために、血漿供与物容器にまだ結合されている状態で実施され得る。
【００３９】
密封は、圧縮され、そして密封される領域の長さが図３−Ａ及び３−Ｂにより明確に示されているように、いづれの側上のパウチの結合性を妨害しないで、シールの中央を通して切断することによってお互いからのその連結されたパウチの分離を可能にするのに十分である限り、いづれか既知の方法、たとえば熱−圧縮密封（溶封）、音波溶接又は同様の方法により実施され得る。血液又は血漿サンプル−含有アリコート部分に再分されるよう適合された管セグメントの第２態様が、血漿供与物ボトル20とサンプル容器28との間で連結され、そして本発明に従って、アリコート含有部分に分けられる収集管セグメント態様の半−透視略図である図２−Ｂに示される。
【００４０】
収集管セグメント50は、試験容器28のキャップメンバー30と血漿供与物容器キャップの中空エルボ継手24との間に連結されている。その管セグメント50は適切には、柔軟な中空の医学的品種のプラスチック管セグメント52により連続して一緒に連結される多くのＹ−部位51を含んで成る。Ｙ−部位51は、静脈内注入セットへの連結のために通常適合された形のものであり、そしてそれらを通して定義される流路を有する円柱状本体部分53を含み、これは流路の一端で出口54及び他端で入口部位55を有する。分岐口56は、Ｙ−部位の本体53にそって供給され、そして本体53を通して流体路に通じる流体路を含む。
【００４１】
１つのＹ−部位は、１つのＹ−部位の底部上の出口54と次のＹ−部位の分岐口56との間に、柔軟な中空の医学的品種のプラスチック管52を溶剤接着することによって、次のＹ−部位に連結される。初期中空入口管57は連続して、初期Ｙ−部位の分岐口に溶剤接着される。次に、初期入口管57は、血漿供与物容器キャップのエルボ継手24に連結される。連結は、エルボ継手24上に初期入口管57を摩擦固定し、それに前記管を音波溶接し、又は他方では、当業者により良く理解されている技法により継手と同軸関係で管を結合することによって実施され得る。さらに、初期入口管57は、エルボ24の末端で嵌め合いルアータイプコネクターを供給される供与物容器への直列接続されるＹ−部位の脱着しうる結合を可能にする標準のルアータイプ継手58で終結する。
【００４２】
同様な態様において、最終Ｙ−部位は、その出口部分で最終Ｙ−部位に溶剤接着される柔軟な中空の最終出口管59を嵌合される。この管はまた、その遠位端で標準のルアータイプ継手にも連結され得る。
【００４３】
第１の態様に関して記載される態様に類似する態様においては、血漿供与物がドナーから取られ、そして供与物容器20が充填された後、その供与体容器は、入口管セグメント57に連結されるエルボ継手24以上に流体レベルを高めるために傾けられる。血漿は管セグメントに入り、そして直列接続されたＹ−部位を通して流れ、そして分岐口56を通して個々のＹ−部位に入り、そして前のＹ−部位の出口54から次のＹ−部位中に流れる。血漿は、試験容器28が満たされるまで、デカントされる。試験容器が充填された後、供与物はさらに、管セグメント50を含んで成る直列接続されたＹ−部位がまた満たされるまで、デカントされる。
【００４４】
供与物からの血漿サンプルが管セグメント50中に抜き取られた後、最終出口管セグメント59は、試験容器28への最終出口管セグメントの連結に最とも近い、その長さにそっての適切な位置で、ヒートシール又は溶接40ａ、又は他の適切な密封手段、たとえば音波溶接により密閉される。
【００４５】
充填された管セグメント50は、シール40ａの中央を通して試験容器から最終出口管セグメント59を切断することによって、試験容器から除去される。他方では、管セグメント50がルアータイプコネクターで終結する場合、その管セグメント50は、ルアーを分離することにより試験容器28から除去される。第２ヒートシール38ａは、供与物容器20への初期セグメントの連結に最とも近い、その長さにそっての位置で初期入口管セグメント57に適用される。
【００４６】
管セグメント50の充填された部分は、シール38ａの中央を通して初期入口セグメント57を切断することによって、又はルアータイプ継手58（そのようなものが供給される場合）を分離することによって、血漿供与物から除去される。両端で密封され、そして連続して一緒に結合される多くのＹ−部位を含んで成る、拡張された、中空の分節管が提供される。一緒に結合されたＹ−部位の個々は、血液又は血漿供与物のアリコートを含む。
【００４７】
下記においてより詳細に記載されるように、前のＹ−部位出口を次のＹ−部位分岐口に結合する管セグメントはまた、連続的な、個々の及び結合されたサンプルアリコートを定義するためにヒートシール42ａを供給され、ここで個々は適切には、個々のＹ−部位を含んで成る。個々のそのようなＹ−部位は、形成されるべき特定の発生プールのために必要とされる特定量の血液又は血漿を含む。個々のＹ−部位を単離するための密封は、管セグメント50が血漿供与物容器から除去された後、実施され得、又は管セグメントがまだ結合されている間に実施され得る。好ましくは、Ｙ−部位を単離するための密封は、管セグメント50が血漿供与物容器にまだ結合している間に実施され、その結果、密封工程の間、管の一部の偏平化を引き起こす体積減少がサンプルの内部静水圧の上昇を引き起こさない。管セグメント50が血漿供与物容器に連結したまま存在する場合、ヒートシールにより創造される管の体積低下により創造される過剰の流体が、供与物容器中への戻りを可能にされる。従って、サンプル抽出の間、危険な噴出を導びく過剰の静水圧が安全に軽減される。
【００４８】
密封は、圧縮され、そして密封される領域の長さがシールのいづれかの側上の管セグメントの結合性を妨害しないで、シールの中央を通して切断することによって、お互いからの結合されたＹ−部位の分離を可能にするのに十分である限り、いづれかの既知方法、たとえば熱−圧縮密封（溶封）、音波溶接、又は同様の方法により実施され得る。
【００４９】
図３−Ａ及び３−Ｂを参照すれば、好ましい態様においては、パウチ（図２−Ａの42）及び／又はＹ−部位（図２−Ｂの51）間のシールは、平らなパッド領域46を含み、そのパッド領域は中央の狭い部分47を含み、これを通して、シールが連結されたパウチを分離するために切断又は裂かれる。切断は、個々の分離されたパウチが分離の後、いづれかの端での圧縮されたタブ部分48で密封されたまま存続することを確かにするために、中央部分を通して行なわれる。シールパッドの長さは、選択される分離方法に依存して、大きく又は小さくされ得る。分離は、外科用メス、断裁カッター、又は単純な一対のハサミの使用により行なわれ得る。
【００５０】
図４−Ａを参照すれば、パウチを容易に分離し、そしてセグメントにそってそれらの序列番号を同定するための手段を包含する、特定の所望するサイズのパウチを供給するために有用な密封装置60の典型的な態様が示されている。密封装置60は適切には、それぞれ対立する第１及び第２定盤を含んで成り、個々は定盤の対立する表面上で互いに間隔を開けられた関係で配置される多くの突出されたシールヘッド部分63を含む。
【００５１】
密封装置60は好ましくは、突出されるシールヘッド部分63が、１つの突出されるシールヘッド部分からもう１つのその部分までの空間が変化できるよう、それらのそれぞれの定盤にそって移動できるよう構成される。突出されたシールヘッド63は、くぼみのシールヘッド間の距離が段階的により小さくなり、その結果、密封が段階的により密接した空間の間隔で管セグメントの長さにそって実施されるよう、定盤にそって配置され得る。従って、段階的により小さなサイズのサンプルパウチ、及び従って、段階的により小さな容積含有物が、所望する位置に、それらのそれぞれの定盤にそって対立するシールヘッドの対を動かすことによって形成され得る。
【００５２】
血液又は血漿サンプルにより充填されたプラスチック管セグメントの長さにそって複数のヒートシールを形成するためには、管セグメントが、密封装置60内のそれぞれ、上方及び下方の密封定盤61及び62間に配置される。対立する定盤がお互い密接せしめられ、従って、管セグメントを圧縮し、そして密封する。図４−Ａに示されるように、個々の定盤の長さにそって多くの互いに間隔を開けられ、拡張され、又は突出されたシールヘッド部分63は、くぼみ部分64と交互に存在する。
【００５３】
対立する定盤が突出されたシールヘッド部分63間で圧縮される、血液又は血漿サンプルにより充填されるプラスチック管セグメントのそれらの部分上にヒートシールを形成するために一緒に移動されるにつれて、チャンバーがその対立するくぼみ部分64により形成される。チャンバーは、圧縮される予定でないが、しかしむしろパウチ中に形成される予定である管セグメントのそれらの部分を適応するために供給される。個々の密封された対のくぼみ部分により定義される個々のチャンバーは、パウチを収容するよう形状化される。
【００５４】
ヒーター65は、密封装置が接近される場合、管セグメント上に対立する突出部分がヒートシールを形成するよう、定盤の個々のシールヘッド部分を加熱するよう形状化される。ヒーター65は、良く知られたヒータータイプの１つ、たとえば輻射ヒーター、誘導又は抵抗ヒーター、又は同様のものであり得る。ヒーター65は好ましくは、くぼみを過度に加熱しないで、突出部分を加熱するよう、突出されたシールヘッド63の個々に直接的に連結さ
れる。
【００５５】
所望には、絶縁が、突出された部分とくぼみ部分との間での熱伝達を減じるよう提供され得る。典型的な態様においては、冷却装置66、たとえば冷却又はラジエータフィン、移動空気流、又は低温フィンガーがまた、密封装置60に連結され得る。冷却装置66は、くぼみ部分64の個々に直接的に連結され、その結果、対立するくぼみ部分が一緒に移動する場合に定義されるチャンバーが低温で維持される。従って、密封工程の間、チャンバー内に形成されるパウチに含まれる血液又は血漿サンプルは、ヒートシールの高温により損傷を受けない。
【００５６】
シールのほぼ中央を通しての狭い領域（図３−Ｂの47）は、シール定盤の拡張されたシールヘッド部分64の中央下に供給される延伸された隆起構造体67により形成される。管セグメントが上部及び下部密封ヘッド間で圧縮されるにつれて、隆起67がシール部分の上部及び底部表面上にくぼみを強制する。くぼみはシールの中央を含んで成るプラスチック材料を狭くし、従って、その分離を容易にする。
【００５７】
本発明の１つの態様において、隆起67は、管セグメントの主軸に対して直交する方向に配置されるパーホレーションを提供するためにのこ歯状にされ得る。パーホレーションは、サンプル含有領域を通しての偶然な切断によるパウチの結合性を妨害することの、鋭い目的物による切断に固有の危険性を伴わないで、個々の及び結合されたパウチのお互いからの除去を可能にする。パーホレーションは、好ましくは、シールヘッドにのこ歯を供給することによって、密封工程の間に提供される。他方では、パーホレーションは、別々の孔あけジグ又はダイの使用により、その後すぐに提供される。
【００５８】
手段68はまた、密封定盤を一緒に圧縮し、そして従って、管セグメントの長さにそってシールを形成するために、密封装置60を開放し、そして閉じるよう供給される。そのような手段は、当業界において良く知られており、そして適切には、１つの支持フレームに結合されるレバーハンドルにより開放し、そして閉じ、そしてたとえばヒンヂに対してそのフレームを動かす手動装置を含んで成る。他の適切な集成装置は、垂直ガイド、バネ、又は水力学的に作動されるピストンプレス、又は他の通常の機械的、電気的又は水力学的プレスを含んで成る。
【００５９】
図４−Ｂを参照すると、特定の所望するサイズのパウチを形成するために、又は一緒に連結されたＹ−部位を個々のサンプル含有アリコートに単離するために、均等な互いに間隔を開けられた間隔で熱−圧縮ヒートシールを提供するために有用な密封装置70の特定の態様が半−略図で示されている。密封装置70は適切には、市販のインパルスシーラー、たとえばSantaFeSprings, Californiaの ALINE Companyにより製造され、そして市販され
ているALINE Ｍ−シリーズのインパルスシーラーのそれぞれの圧力レバー及びシールバンドにそって固定されるよう適合された、それぞれ、上部及び底部定盤71及び72を含んで成る。図４−Ｂに示される特定の態様は、ALINEMC−15 Impulser ヒートシーラーに結合されるよう適合された二部分ヒートシールヘッドであり、そして本発明のシステム及び方法に従ってさらに処理するためにMC−15による血漿の予備充填されたパウチの生成を可能にする。
【００６０】
ヒートシールヘッド70の底部定盤72は、適切な硬く、耐熱性材料、たとえばDuPont Corporationにより製造され、そして市販されている積層されたKevlar・により構成される。示される態様においては、底部定盤72は好ましくは、MC−15Impulseヒートシーラーの固定表面上に固定するために約15インチの長さである。底部定盤72は、中心に配置され、そして底部定盤72の全体の長さにそって存在する縦スロット73を包含する。その縦スロット73の幅は、スロットの長さにそっての嵌合された態様において、約0.1875（３／16）インチの外径を典型的には有する標準の医学用管を適合せしめるために約0.2インチである。
【００６１】
多くの横スロット74が、中央のスロット73の方向に対して直交する方向に配置される底部定盤72の長さにそって互いに間隔を開けられた一定間隔で供給される。横スロット74は、約0.5インチの幅を有し、そして1.125(１−１／８）インチの中心上に位置する。従って、個々の横スロットは、約0.625(５／８）インチの幅である中央の縦スロット73により中心から分けられた定盤材料の残留ブロックによりその隣接物から分離される。
【００６２】
それぞれ、縦及び横スロット73及び74の両者は、底部定盤72の材料を通して単に部分的に切断され、それにより、縦及び横スロットの両者の底部表面を定義する実質的に平らなベッドが形成される。装置がヒートシールを形成するために使用される場合、長さ0.1875（３／16）インチの標準の医学用管が、縦スロット73にそって正しい位置に嵌合され、そしてヒートシール工程の間、軸受面として機能する底部定盤のベッド75上に位置する。
【００６３】
加熱要素76、たとえばニッケル−クロム（NiCr)抵抗ワイヤがスロットからスロットに
スネーク−型で供給され、そしてスロットのほぼ中央に底部定盤を含んで成る個々の横スロットにそって長く配置される。加熱要素76が横スロット74の中央を横切る場合、NiCrワイヤは、たとえばTiflon・テープの断片によりワイヤを被覆することによって、感温性プラスチック管との接触を妨げられる。従って、密封工程の間、その密封装置内に形成されるパウチに含まれる血液又は血漿サンプルは、ヒートシールの高温により損傷を受けない。
【００６４】
上部定盤71はまた、約15インチの長さであり、そしてMC−15ヒートシーラーの圧力レバーにより、底部定盤72上に吊り下げらられている。上部定盤71は、耐熱性プラスチック材料、たとえばLexan・又はミルドKevlar・から構成され、そしてその底部表面から突出し
、そして底部定盤の方向に延長する一組の等しく互いに間隔を開けられた、一般的に長方形の歯を含んで成る。歯77は約 0.5インチの長さであり、そして中心から1.125(１−１／８）インチの間隔で存在する。
【００６５】
従って、歯77の個々は、底部定盤72の横スロット74により定義されるキャビティ中に嵌合するよう必要な寸法にされていることが見出され得る。上部定盤71の歯77の個々は、底部定盤72の横スロット74及び縦スロット73の対応する交点上に吊り下げられるよう位置する。従って、個々の歯77は、ヒートシール定盤がMC−15装置の移転操作により一緒に閉鎖される場合に定義されるキャビティ中に嵌合するよう形状化される。
【００６６】
柔軟な管セグメントが縦スロット73内に配置された後、上部定盤71が、MC−15ヒートシール装置の蓋を下げることによって、底部定盤72と接触せしめられる。蓋が下げられるにつれて、上部定盤71の歯77が、底部定盤72の横スロット74により定義されるキャビティ中に入り、そして個々の横スロット74の交点でベッド75上に暴露されたまま存在する管セグメントの部分を、中央の縦スロット73と接触せしめる。電流が、管セグメントのプラスチック材料の軟化を引き起こすニッケル−クロム耐熱性ワイヤに適用される。同時に、上部定盤71が底部定盤上に圧縮され、従って、加熱要素76により軟化されるプラスチック材料に圧力が適用される。
【００６７】
密封した後、管セグメントは、元の血漿表示に対応するユニーク識別体により、少なくとも１つの端上にラベルされる。これは、たとえばセグメント上にラベルを接着することによって、又は管材料上に直接、バーコードされた標識を付与することによって達成され得る。調製されたくぼみ78は適切には、予備プリントされたバーコード識別体タッグを保持し、そして並べるためにヒートシーラー70上に提供される。そのようなタッグは、適切な溶封可能材料から形成され、そして同定目的のために第１のシール位置で管セグメント
に溶封される。次に、サンプル含有パウチを包含する管セグメントが保存のために凍結される。
【００６８】
図２−Ａに戻ると、個々の血漿表示を含んで成るシステムの種々の部分のすべてを明確に同定することが重要である。従って、ユニーク識別体、たとえばコードされた糸状物、コードされたドット、バーコード、又はユニーク識別体によりコードされる他の構造体が、血漿収集システムの物理的構造体に配置され得る。
【００６９】
たとえば、１つの態様においては、コードされた糸状物37が供与物容器20に成形され、コードされた糸状物39がボトルキャップ22の縁にそって成形され、コードされた糸状物41が試験容器28の側部にそって成形され、そしてコードされた糸状物43が互いに間隔を開けられて管セグメント中に成形される。管セグメントにおけるユニーク識別体は、管セグメントの長さにそって移動し、そしてコードが、そのように調製された個々のセグメントの識別完全性を維持しながら、管セグメントの断片化を可能にするために反復される。さらに、供与物システムの個々の部分が同じコードにより同定され、その結果、供与物の同一性がシステムのすべての部分のために維持される。
【００７０】
図３−Ａ，３−Ｂ及び４−Ａに戻ると、元の管セグメントの直線の長さにそってのパウチの位置に等しいα又は数字コードにより同定されるセグメントにそってそれぞれ個々のパウチを有することがさらに所望される。そのようなコードは、たとえばスタンピングダイの使用により隣接するパウチ間に位置するシールパッドの圧縮された部分上にプリントされ得る。
【００７１】
そのようなスタンピングダイは、図４−Ａ及び４−Ｂに示されるように密封装置の一体部分を含んで成り、その結果、密封、種々のサイズのパウチの形成、及び容易な分離のためへの狭いか又はパーホレートされた領域の供給、並びに番号の識別が、すべて単一の効果的段階で達成され得る。他方では、α又は数字識別体は、パーホレートジグ又はダイの部分を含んで成ることができる。管セグメントにおける連続的なパウチがα（ａ，ｂ，ｃ，…）又は数字（１，２，３，…）特性の対応する連続的ストリングにより、それぞれ同定されるように、α又は数字特性を次の連続的特性に進めるための手段を包含するスタンピングダイは知られている。
【００７２】
従って、第１の試験プールがいくつかの供与物からのパウチから調製される場合、品質管理検査は、個々の管セグメントからプールされるすべてのパウチが同じ位置コード、たとえば番号１を有することを確かめることによって実施され得る。同様に、同じ供与物のサンプルから第２の試験プールを調製する場合、品質管理検査は、個々の管セグメントからプールされるすべてのパウチが、たとえばパウチの圧縮された部分上にいくつかの点でプリントされた番号２を有することを確かめることによって実施され得る。
【００７３】
供与物の効果的 PCR試験をもたらすためには、試験容器28における個々の供与物から取られる血清学的試験サンプルが、特定のウィルスに対して表示される種々の既知の抗原及び／又は抗体について試験される。サンプルが１又は複数の既知の抗原又は抗体試験に関して陽性である場合、個々の供与物及びその対応する管セグメントがさらなる試験から排除され、そして両者が適切な態様で廃棄され得る。
【００７４】
残存する血清学的陰性供与物に対応する管セグメントが同定されたグループに分割され、ここで個々のグループは、選択された数の供与物を含んで成る。下記にさらに記載されるように、グループ当たりの供与物の数は、特定の高感度試験、たとえばPCR試験の感度、血漿サンプルにおける興味あるウィルス RNA又は DNAの予測される濃度、及び一般的なドナー集団内に存在する PCR陽性サンプルの予測される頻度により決定される。たとえば
、反復プラスマフェレーゼドナーの集団において興味ある RNAを含むＣ型肝炎ウィルスの検出のためには、100〜700 の個々の供与物のサンプルをプールすることが適切である。
ウィルス汚染がしばしば生じる集団のためには、50〜100 の個々の供与物のより少ないプールが適切である。
【００７５】
本発明に従ってPCR試験プールを調製するための方法の１つの態様は、図５及び図６に
記載されるであろう。一般的に力価プレートへの適用において類似するが、しかし本発明の実施に従って形状化されたサンプリングプレート80が供給される。サンプリングプレート80は、一般的に規則的な配列でプレート上に水平に配置される半円柱状サンプルウェル81を含むよう形状化される。本発明の方法を実施するために使用される適切なサンプリングプレートは、８×８（横／縦）の長方形態様で配列される64のそのようなサンプルウェルを有する。サンプリングプレート80とほぼ同じ外寸を有するカバープレート82がまた供給される。
【００７６】
カバープレート82は、サンプリングプレート80の表面を、締り嵌め結合して被覆するよう適合される。貫通穴83は、サンプリングプレート80のサンプルウェルと同じ配列態様でカバープレート上に配置される。カバー82がサンプリングプレート80の表面上に置かれる場合、貫通穴83はサンプルウェル81上に垂直に位置し、それにより貫通穴を通してサンプルウェルとの連結を可能にする。貫通穴の直径は、試験サンプルパウチ及びその対応するサンプルウェルの表面積よりも実質的に小さい。しかしながら、貫通穴の直径は、針又は他のカニューラ様物体が穴を通過し、そしてその下のサンプルウェルに入るよう十分に大きい。
【００７７】
図６に示されるように、最終（第１世代、“番号１")パウチ84は、試験されるべき特定の PCRグループに属するものとして同定された個々の管セグメントから除去される。個々の最終パウチ84は洗浄されるが、しかし開放されず、そしてサンプリングプレート80の対応するサンプルウェル81に配置される。カバープレート82が、サンプリングプレート80の上部に固定され、そしてプレート、カバー及びパウチが適切な温度で融解される。
【００７８】
約0.02〜0.5mlの等体積の血漿が、個々のパウチから除去され、そして試験容器にプー
ルされる。針85又は他のカニューラ様装置が、カバープレートにおける貫通穴を通して、そして下部のサンプリングプレートサンプルウェル中に直接的に挿入され、それにより、パウチの側壁の管材料を突き刺し、そしてそこにおける血漿サンプルに近づく。典型的な態様においては、針は、パウチに含まれる血液又は血漿のすべてを抽出し、そして周囲トレーへの流体のいづれかの漏れを最少にするために連続した真空又は吸込を提供する装置に連結される。
【００７９】
針は、針の貫通穴及びパウチの上部壁を通しての移動を可能にするが、しかしその下方向への進行を制限する装置に保持され得、その結果、針は、パウチがサンプルウェルにある場合、パウチの底壁の接触又は突刺しから保護される。カニューラが、サンプルを抽出した後、抜き取られる場合、貫通穴を囲むカバープレート材料86は、図６に示されるように、カニューラと共にパウチの偶発的抜取りを妨げる。
【００８０】
PCR試験プールを調製するための方法は個々のサンプルウェル中にカニューラをそれぞ
れ挿入することによって、サンプルを手動的に抽出することにより記載されて来たが、その方法は自動化された方法を用いて同等に実施され得る。個々のウェルにパウチを含むサンプリングプレートは、カバープレートにおける貫通穴の配置に対応する態様で配列されるカニューラのサンプリングプレート上への圧縮下降を可能にし、それにより、サンプルパウチのすべての突き刺しを可能にし、そして同時に、サンプルがそれから抽出されるよう保持され得る。他方では、単一のカニューラ又はカニューラ保持装置が個々のパウチを
連続的に突き刺し、そして流体を抜き取るよう自動化されるか又はプログラムされ得る。キャリーオーバーの汚染を防ぐために、きれいなカニューラが個々のプールのためのサンプルを抜き取るために使用される。
【００８１】
さらに、サンプリングプレート、サンプルウェル、カバー、貫通穴及びカニューラの組合せが、サンプルパケットからのサンプル流体の抽出に関して記載されるが、図２−ＢのＹ−部位サンプル容器からのサンプル流体の抽出に同等に適用できることは、当業者に明らかであろう。図５及び図６のサンプルウェルの形状は、流体保持容器の形状により決定され、そして単にマイナーの変更が、Ｙ−部位のためにそれらを再形状化するために必要とされる。たとえば、サンプルウェルは、個々のＹ−部位が挿入される、垂直に配向された、拡張されたシリンダーを含んで成る。
【００８２】
ノッチが、Ｙ−部位の分岐口が位置する戻り止めとして機能する個々のサンプルウェルの上方周囲近くの適切な位置に供給され得る。これはまた、個々のＹ−部位を方向づけ、そして追加の位置安全性を提供するよう機能することができる。図５及び図６に関して記載されるのと同じ態様において、流体は、個々のＹ−部位の接近口を通して及びサンプルとの流体連絡中にカニューラを挿入することによって、個々のＹ−部位から抽出され得る。カニューラがその接近口から除かれる場合、個々の貫通穴を取り囲むカバープレート材料が止めとして作用し、そしてサンプルウェルからのＹ−部位の抜き取りを妨げる。
【００８３】
この形状が自動化された方法を用いて本発明の実施のために同等に適切であることは、当業者に明らかであろう。一群のカニューラがカバープレートにおける貫通穴の配置に対応する態様で配置され得、それにより、Ｙ−部位の接近口のすべての突き刺しを可能にし、そしてサンプルがそれから同時に抽出される。他方では、単一のカニューラ又はカニューラ保持装置が、個々の接近口を連続的に突き刺し、そして個々のＹ−部位から流体を抜き取るよう自動化されるか又はプログラムされ得る。
【００８４】
本発明に従ってPCR試験プールを調製するために適切な装置及び方法のさらなる態様が
、図７，８，９−Ａ，９−Ｂ及び10に記載されるであろう。まず、図７を参照すれば、複数の血漿サンプルからの押し出された流体を含んで成る血漿供与物プールが、電動化された水圧プレス90において、多くの血漿供与物サンプルパケットから調製される。水圧プレス90は適切には、サンプルパケットが配置される圧縮シリンダー91、及びサンプルパケットを圧縮する水圧的に作動されるピストン92を含んで成る。パケット内に含まれるサンプルは、適切な圧縮ガス、たとえば圧縮空気又は窒素により圧縮シリンダー91から押し出され、そしてプールとしてプール用容器に収集される。
【００８５】
最初に、発生パウチ（たとえばパウチ＃１）が、試験される特定の PCRグループに属するものとして同定されている個々管セグメントから除去される。個々の発生パウチは、洗浄されるが、しかし開口されず、そしてプレス90の圧縮シリンダー91内に配置される。圧縮シリンダーの負荷は、構造的結合性を失なっているパケットによる周囲環境の偶然な汚染に対して安全にするために、クラス・生物安全フード及び空気−流路の環境内で実施される。
【００８６】
下記でより詳細に記載されるべき態様においては、圧縮ピストン92は、その圧縮シリンダー91の内容物の封じ込めが確かめられ、そしてシリンダー91及びピストン92の組合せがサンプルパケットを完全に密閉するような態様で、圧縮シリンダー91の開放スロート91ａ中に堅く嵌合される。圧縮ピストン92が圧縮シリンダー91にかみ合う態様は、シリンダー91の外部環境がサンプルパケットにより含まれるいづれかのサンプルに存在することができるいづれかの有害なウィルスによる汚染から保護されることを確保するよう企画される。
【００８７】
圧縮シリンダー91は、次に、水圧プレス90上の正しい位置にシリンダーを配置し、そしてさらに、水圧シリンダー95に操作的に連結される水圧軸94の圧縮ピストン92への配置及び嵌合を可能にするシリンダー受座93上に固定される。下記でさらに詳細に記載されるであろう態様においては、圧縮ピストン92は、そのピストン92が水圧シリンダー95の操作により高められ、そして低められるよう、水圧軸94に開放可能的に結合される。
【００８８】
シリンダー91及びピストン92がシリンダー受座93上に正しく配置され、そして軸94を通して水圧シリンダー95に結合された後、制御弁96が圧縮シリンダー91内のサンプルパケットを圧縮する軸94及びピストン92上への水圧シリンダーの力の発揮を引き起こすために作動される。水圧シリンダー95は、流体溜め99に対して低圧流体をポンピングし、それによりシリンダー95を作動せしめる水圧往復ポンプを作動する４馬力の240ボルトAC電気モー
ター97により作動される。約4,000ポンドの力が、ピストン92によりサンプルパケットに
適用される約800〜900psiの圧力を展開する水圧軸94でポイント負荷される。
【００８９】
サンプルパケットが圧縮された後、そこに含まれる流体供与物サンプルは、たとえば、圧縮ピストン92に供給されるポプ−オフ(pop-off)弁 102に圧力調節器101を通して連結
される圧縮された空気シリンダー 100により供給される圧縮ガスにより、圧縮シリンダー91から抽出される。ポプ−オフ弁102の正しい作動を可能にするために、まず、ピストン
92がその十分に延長された圧縮ピストンからわずかに上げられる。
【００９０】
圧縮された空気は、ポプ−オフ弁の限界圧力に達するまで、圧力調節器 101を通してシリンダー91中にガス抜きされる。次に、弁102が開き、シリンダーの底部に供給される収
集口 103を通して、圧縮シリンダー91から血漿プールを押出すシリンダーの内部のその圧縮されたガスによる加圧を可能にする。次に、血漿プールは、流体が圧縮された空気によりシリンダーから押出されるにつれて、急送ライン又は管により収集口103に連結されるプーリング容器に集められる。圧縮された空気は、ブリーチトラップを通過した後、クラス・生物学的安全性フード中に排出される。
【００９１】
図８を参照すれば、本発明の原理に従って構成された圧縮シリンダー91の部分的に切断された断面図が示される。圧縮シリンダー91は適切には、上部及び底部表面を有する一般的に円状のベースプレート105、及び上部表面から上方に延長する円周方向リップ 106、並びにその内面中に切られるねじ山を含んで成る。両端で開口する円柱状シリンダー壁 107がその底部端の外面上にねじ山が切られる。
【００９２】
溝又はノッチ108がシリンダー壁 107の底部端の内面に切られ、その結果、ベースプレ
ート 105の上部表面に平行に配置され、そしてそれに対して反対の面を表わす環状リップ
109が定義される。シリンダー壁107がベースプレート 105中にねじ込まれるにつれて、
ベースプレート105の表面上に配置されるスクリーンプレート 110がシリンダー壁 107の
環状リップ 109により嵌合され、そして環状リップ109とベースプレートの上部表面との
間に圧縮される。
【００９３】
図９−Ａ及び９−Ｂを参照すると、スクリーンプレート 110は一般的に、サンプル含有パケットが、それらが圧縮ピストン92により圧縮される場合に押しつけられる円状のディスク形状プレートである。図９−Ｂに示されるように、スクリーンプレート110は、流体側溝含有ラジアルスロット 111、及び同軸円形スロット 112を包含し、すべてのスロットは約１／32インチの幅を有し、そしてそれらはスクリーンプレートの上部表面に切り込まれる。ラジアルスロット111は、スクリーンプレート 110の中央に向かって傾斜する角度で切り込まれ、ここでそれらはベースプレート 105を通して穴開けされる１／４インチの排水管114(図８に見出される）を通して排出する、軸方向に位置するドレン又は溜め113
で終結する。
【００９４】
図８に戻れば、シールが、シリンダー壁 107とスクリーンプレート 110との間に、そのような目的のためにベースプレート 105中に切り込まれるシールレース116に供給されるＯ−リング 115を嵌合し、そして圧縮することによって形成される。シールレース116は
、Ｏ−リング115がスクリーンプレート 110及びシリンダー壁 107の垂直交点下に存在す
るようベースプレートに位置する。
【００９５】
ステップ 117はベースプレート105中に切り込まれ、そして嵌め合い溝 118はスクリー
ンプレート中に切り込まれ、その結果、正の戻り止めは、シリンダー壁 107がスクリーンプレートと正しく嵌合し、そしてそれらの交点がＯ−リング 115と正しく嵌合するよう、Ｏ−リングとの正しい配置のために、ベースプレート上にスクリーンプレートを正確に設置することができる。
【００９６】
図10を参照すれば、本発明の原理に従って供給される圧縮ピストン92の部分的に切断された断面図が示される。圧縮ピストン92は、ピストンヘッド 120から突出する、軸方向に延長し、中心に位置するカップ121を有する一般的に円柱状のピストンヘッド 120を含んで成り、前記カップ121は、一般的に円柱状の壁及び１つの開方端を有し、それにより、
一般的に円柱状の水圧シリンダー軸94を受けるためのソケット 123を定義する。
【００９７】
環状フランジ122は、円柱状カップ 121の円周のまわりに供給され、そしてカップの開
放マウスを取り囲む。フランジ 122の外面は、面取りされており、その結果、その面取りされた表面は、ピストンヘッド 120の本体の方に直径が大きくなる。水圧軸94がソケット
123中に進行するにつれて、一対のバネ押しの止めクリップ124は、それらが環状フラン
ジの位置の戻りを止め、そしてその下面をグリップするまで、環状フランジの面取りされた表面上に進行する。
【００９８】
ソケット 123との嵌合を適合するためには、個々の止めクリップ124は、ピストンヘッ
ドの環状止めリング122の面取りされた表面にそって進む面取りされた歯 125を包含し、
それにより、バネ押し止めクリップ 124のジョーを広げ開口する。水圧軸94が進行し続けるにつれて、止めクリップ 124の面取りされた歯 125は最終的に、環状止めリング122の面取りされた表面を通過し進行する。止めクリップのバネ押しは、カップ側壁の外面と面取りされた歯との接触を可能にする。従って、止めクリップ 124の歯は、環状止めカラー
122の下表面と嵌合され、それにより、圧縮ピストン92をグリップし、そしてピストンの両方向への移動を引き起こすための手段を提供する。
【００９９】
さらに、バネ押し止めクリップ 124が、面取りされた止め歯 125の反対側のクリップの端を一緒に単純に絞ることによって、環状止めリング 122から容易に分離され得ることは、当業者に明らかであろう。従って、ピストンヘッド120、円柱状の中心方向に固定されるカップ 121、環状止めリング122及び止めクリップ 124は組合して、圧縮ピストン92か
ら水圧軸94をすばやく且つ容易に分離するための手段を提供することが見出されるであろう。このすばやい分離特徴は、洗浄、殺菌、追加のサンプルパケットによる再充填及び同様のもののために水圧110のシリンダー受座93からのピストン92及びシリンダー91の組合せの容易な移動を可能にする。
【０１００】
図10に示されるように、圧縮ピストン92はさらに、ピストンヘッド120の周囲に提供さ
れるシールレース178に配置されるいくつかのＯ−リング 126を包含する。Ｏ−リングは
、ピストンヘッド120の円周方向外表面と圧縮シリンダー91のシリンダー壁 107の円周方
向内表面との間に密圧シールを形成するために供給される。複数のＯ−リングシールは、シリンダー91の限界内への実質的に汚染されたサンプル流体の閉じ込めを確保するために
、一定基準の安全性及び保障を提供する。３本のＯ−リング 126が図10の例示態様に示されているが、より多くの又はより少ない数のＯ−リングシールが、本発明に従って供給され得る。必要とされるすべては、シールが、シリンダー内への実質的に汚染された流体の閉じ込めを確保するために、圧縮ピストン92と圧縮シリンダー91との間に形成されることである。
【０１０１】
図８に戻ると、圧縮シリンダー側壁は、その側壁の内面中に規格化される 0.020インチの面取りされたステップを包含する。従って、シリンダー側壁 107の上部から約１インチの第１の側壁は、スクリーンプレート110及びベース 105の方に下方に延長するシリンダー側壁 107の残る部分の内径(ID) よりも約 0.040インチ大きなIDを有するよう規格化さ
れる。ステップと残る側壁部分との間の界面は、わずかに大きな上方IDからわずかに小さな下方IDまで比較的滑らかな、ある角度に方向転換された遷移を提供するために、面取りされている。
【０１０２】
シリンダー側壁107上のステップは、圧縮ピストン92がＯ−リング（図10の126)とシリ
ンダーのID表面との間に作られる単にわずかな接触を伴って、圧縮シリンダー91の開放スロート中に手動的に挿入され得る。手動的に集成されたピストン及びシリンダーの組合せがシリンダー受座（図７の93）上に配置されるとすぐに、水圧軸94がピストンのソケット
123と嵌合するよう進められ、そして止めクリップ124がピストンヘッドの環状止めカラ
ー 122の下面に対して戻り止めになるまで延長される。次に、水圧軸94がシリンダー中にさらにピストンを押し込むために、さらに進められ、それにより、シリンダー壁のID上にステップ130を越えてＯ−リングを押し進める。ステップを越えて押される場合、Ｏ−リングはシリンダー側壁 107のIDとピストンシールレース 127との間で十分に圧縮し、それにより密封を形成する。
【０１０３】
操作においては、圧縮ピストン92が、シリンダー内に含まれるサンプルパケットを圧縮するのに十分な圧力である約 800〜900psi(4,000ポンドの力点が水圧軸で負荷される)の圧力を発生する。血液又は血漿サンプル流体は、スクリーンプレートに供給される流体側溝にそって流れ、そして中央の溜めに流れ、ここでそれが集められ、そして抽出口からの流出、そしてプーリング容器中への流れを可能にされる。
【０１０４】
圧縮操作に続いて、水圧シリンダー95は、圧縮されたサンプルパケットの塊状物以上に少しの距離（約１／２〜１インチ）、圧縮ピストン92を押し上げるよう操作され、それにより、シリンダー内にチャンバーを創造する。圧縮されたガ、たとえば圧縮された空気が、ピストン92におけるポプ−オフ弁102を通してチャンバー中に押込められる。そのチャ
ンバーの加圧は、いづれかの残存する血液又は血漿サンプル流体の出口 103を通してのシリンダーからのプーリング容器への押出しを引き起こす。
【０１０５】
圧縮及びプーリング操作が完結されるとすぐに、出口 103に連結される押出しラインがクランプされ、いづれかの追加のサンプル流体のシリンダーからの排出を妨げる。この押出しラインはブリーチ容器中に配置され、そして水圧シリンダー95がシリンダーにおけるピストンのさらなる上昇を引き起こされ、それにより、容器からシリンダー中にブリーチを吸い上げる吸引力を創造する。好ましくは、圧縮及びブリーチ吸い上げ段階は、いづれかの血液又は血漿サンプルの“フラッシュバック”流体が圧縮シリンダー91から十分に押出され、そしてブリーチが圧縮チャンバーの内部容積を満たすための十分な機会を有し、それにより、その内部に見出され得るいづれかの著しいウィルス汚染を減じることを確保するために、さらに２度、反復される。
【０１０６】
次に、すばやいクランプの開放が操作され、そしてピストン／シリンダーの組合せが水圧プレス90から除かれ、そしてたとえばオートクレーブにおける殺菌工程にゆだねられる
。ピストン及びシリンダーは続いて、それらを10％のブリーチ溶液に15分間ソークし、次に水、１％ SDS（ドデシル硫酸ナトリウム）界面活性剤、及び再び水により、オートクレーブの前、すすぐことによって、化学的に清浄され得る。オートクレーブ殺菌のための十分な時間が存在しない場合、化学的な清浄は70％のETOH及び無菌水の溶液により行なわれ得る。
【０１０７】
そのような追加の化学的清浄が所望される場合、それは、HEPAフィルターを通して消耗するクラス・生物安全フードにおいて実施される。そのフード下で、圧縮シリンダーは圧縮されるべき次のグループのサンプルパケットにより充填され、そして圧縮ピストン92が圧縮シリンダー91の開放口中に手動的に挿入され、そしてピストンのＯ−リングがシリンダーの側壁に形成される面取りされたステップと接触するまで、押し下げられる。新しく再負荷されたシリンダー／ピストンの組合せは現在、圧縮プレス90のシリンダー受座93上に容易に配置される。水圧シリンダー95が、すばやい開放クランプがピストン上の環状止めリングと嵌合するよう、水圧軸94のピストン92上への押し下げを引き起こすよう操作される。圧縮、押出し、及びブリーチ−清浄工程が反復される。
【０１０８】
前述から、電気的に作動される水圧プレス（クラッシャー）90は、最少の時間での多数のサンプルパケットからの血液又は血漿サンプルの収穫を可能にする。そのような装置により圧縮され得るサンプルパケットの数は、装置の規模、及びシリンダーに含まれるサンプルパケットの塊状物に対しての圧縮ピストンにより発生せしめられ得る圧力により主に制限される。例示される態様の水圧プレスにより発生される800〜900psiの圧力は、図２−Ａに関して記載されるタイプの64個までのサンプル含有パケットを完全に圧縮するのに十分である。従って、 512個までのサンプルを含んで成る大規模プールは、本発明のクラッシャーによる８回の操作サイクルにより形成され得る。これは、512個のサンプルポケットがそれからサンプルを収穫するためにカニューラにより個々に接近される方法よりもプール形成時間において有意な減少を提供する。
【０１０９】
さらに、 512個までのサンプルを含んで成る単一の大規模プールは、シリンダーにおける多数のサンプルポケットを収容するのに十分に大きくされたクラッシャー装置から形成され得ることは、当業者に明らかであろう。水圧プレス部分はまた、高められた数のポケットのより高い抵抗を克服するために高い圧縮力を提供するようサイズ的に大きくされ得る。上記で言及されたように、プールサイズは単に、クラッシャーの所望する規模により制限される。
【０１１０】
図11を参照すれば、最少数の個々の試験によりユニークPCR陽性供与物の同定を可能に
する、本発明のPCR試験方法のフローチャートが示される。
工程は、種々の因子、たとえば一般的なドナー集団における興味あるウィルスの発生の頻度、プールへの希釈の後のウィルス DNA又は RNAのありそうな最終濃度、及び同様のものに依存する適切な初期プールサイズの定義を伴ってブロック200で開始する。
【０１１１】
PCR試験はひじょうに敏感であり、そして汚染されたサンプルにおける単一のウィルス
を検出できるけれども、ウィルスは、 PCR試験が陽性結果を付与するサンプルに必然的に存在すべきである。たとえば、比較的低いウィルス濃度を有する汚染された供与物からのサンプルが汚染されていない多数のサンプルと一緒にプールされる場合、その得られるプールにおけるウィルスの濃度は、ウィルスがPCR試験のためのプールから採取されるサンプルに存在しない統計学的確立が存在するほど、ひじょうに低いかも知れない。実際、そのようなプールは、ウィルス汚染について陰性の誤った試験結果を付与する。
【０１１２】
たとえば、0.02mlのサンプルがサンプル１ml当たり500個のウィルスの濃度でウィルス
により汚染された血漿供与物から調製される場合、その0.02mlのサンプルは平均して、10
個のウィルスを含む。この0.02mlの汚染されたサンプルが汚染さていない供与物からの他の0.02mlのサンプルと共にプールされる場合、その得られる10mlのプールは、１ml当たり１個の濃度でウィルスを含んで成る。従って、１mlのサンプルがPCR試験のためにプールから取られる場合、PCRサンプルがウィルスを含まない有意な統計学的確立が存在する。
【０１１３】
ウィルス汚染のそのような低濃度は、いくつかの方法がそのような低濃度供与物に存在するウィルスを不活性化するために利用できるので、血漿から生成される生成物に対してほとんど脅威を与えない。そのようなウィルス不活性化方法は、溶媒／界面活性剤の使用、60℃以上での適切な時間の加熱、又は同様の手段を包含する。それらの方法は一般的に、多くの“対数単位”、ウィルスの濃度を低めることができるものとして記載される。たとえば、溶媒／界面活性剤方法は、Ｃ型肝炎のウィルス汚染を、１ml当たり少なくとも107個、又は“７対数単位”、減じることができる。従って、血漿生成物、たとえば第・因子、第・因子又はプロトロンビン複合体は、たとえば陰性であることがPCR試験された後、溶媒／界面活性剤方法により通常処理された血漿供与物から調製され得る。
受容体に直接的に通常輸血される血液生成物に関しては、そのような供与物が陰性であると PCR試験された後、低濃度ウィルス汚染のいくらかの小さな危険性が残っている。
【０１１４】
図11に例示される態様においては、上記で論じられた因子、たとえばドナー集団における興味あるウィルスの発生の頻度、及び希釈の後、ウィルスの見込み濃度が評価される。低濃度で存在するウィルスが検出されない統計学的確立を最少にする、適切に分類された第１レベルのPCR試験プールが企画される。そのプールは、上記態様で、同定された管セグメントの最終パウチの含有物をプールすることによって、ブロック 201で調製される。ブロック202で、PCR試験が第１レベルの PCRプールに対して実施される。
【０１１５】
ブロック 203は、ブロック202において実施された PCR試験の結果に依存する本発明の
方法における決定点を表わす。試験に対して陰性の結果の場合、第１レベルの PCRプールを製造するために使用されるサンプルに対応するすべての供与物は、ウィルス汚染がないものとして仮定され、そして医薬製品にさらに加工するために放される。前記方法は、負のPCR試験結果を受け取り次第に出る。
【０１１６】
PCR試験が陽性表示を戻す場合、これは、ウィルス汚染が元の第１レベルのPCRプール
を製造した、１又は１よりも多くの供与物に存在することを示す。ブロック 204で、追加のサンプルパウチ、すなわち１つの最初に除かれたパウチの次のパウチが、元の第１レベルのPCRプールを含んで成る供与物に対応する管セグメントから取られる。それらの追加のサンプルパウチは、明確には、本明細書においてＡ及びＢと命名された２種のほぼ等しいサブグループに分割される。
【０１１７】
それらのサブグループが、上記と同じ態様で、個々のサブグループプールを形成するために、別々のきれいなカニューラを用いて、別々にプールされ、そしてブロック205で示されるように、サブグループプールの１つのみが PCR試験される。２種のサブグループの１つが試験されることは、本発明のためには重要でない。ブロック205においては、サブグループＡが試験されるべきサブグループとして同定されるが、しかしサブグループＢは本発明の方法を妨害しないで、容易に表示され得た。
【０１１８】
ブロック 206では、サブグループプールＡのPCR試験の結果に依存して、決定が行なわ
れる。 PCRウィルス表示に関して陰性のサブグループプールＡ試験においては、さらなる試験が、サブグループＡを含んで成る供与物からのサンプルに対して行なわれない。むしろ、ブロック207で示されるように、次々に、次のサンプルパウチが、次に２種のほぼ等
しいサブグループＡ′及びＢ′に分けられるサブグループＢを含んで成る管セグメントから取られる。この段階における個々のサブグループは、直前のサブグループを含んで成る
場合、約半分の数のサンプルを含んで成る。
【０１１９】
サブグループのサンプルパウチの内容物は再び、上記と同じ態様で別々にプールされる。その成分供与物の少なくとも１つを示す、 PCR試験で陽性であるサブグループＡがウィルス汚染されている場合、他の試験されていないサブグループ（図11の例においてはサブグループＢ）が、それがまた、PCR陽性でないことを確かめるために、ブロック 208で PCR試験される。サブグループＡは現在、ブロック209で示されるように、２種のほぼ等し
いサブグループ（Ａ′及びＢ′）にさらに分割されるサブグループになる。
【０１２０】
ブロック 210では、PCR試験が、前段階 207又は 209において定義されたサブグループ
Ａ′又はＢ′の１つのみに対して行なわれる。この方法が現在、反復し、そしてブロック
206に戻り、ここで決定段階がブロック210で実施された PCR試験の結果に適用される。
再び、 PCR試験結果が試験されたサブグループに関して陰性であることがわかる場合、試験されていないサブグループは、前のサブグループの約半分のサンプルをそれぞれ含んで成る、２種のほぼ等しいサブグループにさらに細分割される。試験されたサブグループが
PCR陽性結果に戻る場合、試験されたサブグループは、前のサブグループの半分のサンプルをそれぞれ含んで成る、２種のほぼ等しいサブグループにさらに細分割される。この場合、処理されていないサブグループが再び、それがまた、PCR陽性でなかったことを確かめるために、 PCR試験される。
【０１２１】
前記試験方法は、試験が完全であることが決定されるまで、ブロック 206〜ブロック 210を反復し続ける。試験の完結は、サブグループ分割が、単一の供与物に対応する１つのサンプルパウチのみをそれぞれ含む２種のサブグループの創造をもたらす場合のように定義される。サンプルの１つがブロック210で PCR試験され、そしてその試験結果が陰性である場合、他のサンプルはウィルス汚染された血漿供与物に属するものとして同定される。試験されたサンプルが陽性である場合、次に、その残るサンプルはまた、それがまたPCR陽性でないことを確かめるために、PCR試験される。
【０１２２】
すべての試験の完結に基づいて、本発明の方法は、ブロック 211で終了する。本発明の試験方法は、初めに試験されたプールが陽性である場合、次のような２つのPCR試験が個々の試験レベルで行なわれることを単に必要とすることは、図11のフローチャートから明白であるにちがいない：２種のサブグループの１つについての１つの初期試験、及びその対応する初期に試験されていないプールが実際、陰性であることを確かめるための１つの続く試験。その試験方法は、初期に試験されたプールが陰性である場合、個々の試験レベルで単一のPCR試験を単に必要とする。
【０１２３】
本発明のサンプル試験のためのシステム及び方法の適用が、図12に示されるように、特定の PCR試験プールサイズに関して、現在記載されるであろう。図12においては、512個
の個々の供与体の最終パウチが、 212で初期 PCR試験プールに形成される。例示のためには、 512個のサンプルのわずか１のサンプルが興味あるウィルスにより汚染された供与物から採取された。10個の個々の及び連結されるパウチを含んで成る、図12に示される管セグメントは、汚染された血漿供与物容器に元来、連結され、そしてそれから取られる管セグメントを表わす。
【０１２４】
初期 512サンプルプールがPCR試験され、そして汚染されたサンプルの存在のために、
陽性ウィルス表示に戻る。段階 213で、２種の 256供与物プール(256Ａ及び 256Ｂ）が、前の陽性プールを製造したセグメントから取られた次の連続したパウチから調製される。プール256Ｂが現在、PCR試験され、そして図12に示されるように、陰性ウィルス表示に
戻り、従ってプール256Ａが汚染された供与物からのサンプルを含むことを示す。
【０１２５】
段階 214では、２種の128供与物プールが、プール256Ａを製造した管セグメントの次
の連続的なパウチから調製される。従って、本発明によれば、プール 256Ａは、 PCR試験されずに、細分割されている。段階 203では、プール 128ＡがPCR試験され、そしてそれが陰性ウィルス表示に戻るので、プール 128Ｂは汚染された供与物からのサンプルパウチを含むことが知られている。次に、プール 128Ｂは、前のパウチがプール128Ｂを製造するそれらの管セグメントから次の連続的なパウチを除去することによって、２種の64供与物プール（64Ａ及び64Ｂ）に細分割される。
【０１２６】
次に、プール64ＢがPCR試験され、そして図12の例においては、陽性ウィルス表示に戻
る。この場合、PCR試験は、それが実際、陰性であり、そしてさらなる汚染されたサンプ
ルがプール64Ｂにおけるサンプル以上に存在しないことを確証するために、プール64Ａに対して実施される。段階 216では、プール64Ｂが、前のプール64Ｂを製造するために使用される管セグメントから次の連続的パウチを除去することによって、２種の供与物プール、すなわち32Ａ及び32Ｂにさらに細分割される。プール32ＢがPCR試験され、陰性ウィル
ス表示に戻り、そして従って、プール32Ａは２種の16供与物プール、16Ａ及び16Ｂにさらに細分割される。再び、16供与物プールは、前の陽性プール32Ａを製造した管セグメントから次の連続的なサンプルパウチを除去することによって調製される。
【０１２７】
段階 217では、プール16ＢがPCR試験され、そして陽性ウィルス表示に戻る。従って、
プール16Ａが、それが陰性であり、そしてすべての汚染されたサンプルがプール16Ｂに存在することを確かめるために PCR試験される。
【０１２８】
218では、プール16Ｂが、前の陽性プール16Ｂを製造した管セグメントから次の連続したサンプルパウチを除くことによって、２種の８供与物プール８Ａ及び８Ｂに分割される。次に、プール18ＢはPCR試験され、そして示されるように、陰性ウィルス表示に戻り、
これはプール８Ａが汚染された供与物からのサンプルを含むことを示す。次に、プール８Ａはさらに、段階219で、２種の４供与物プール４Ａ及び４Ｂに細分割される。PCR試験
が、陰性表示に戻るプール４Ｂに対して実施され、従って、プール４Ａが汚染された供与物からのサンプルを含むことを示す。次に、プール４Ａが、 220で、上記のように、同じ態様でプール２Ａ及び２Ｂに細分割される。PCR試験に基づいて、プール２Ａは陰性ウィルス表示に戻り、これは、グループ２Ｂを含んで成る２種のサンプルの１つが対応する汚染された供与物の管セグメントから取られることを示す。
【０１２９】
段階 221で、個々の供与物がグループ２Ｂを製造した管セグメントから最終パウチを除くことによって試験される。個々の最終供与物が、次に貯蔵から除かれ、そして適切に処置される、特定の陽性供与物を同定するためにPCR試験される。残る 511ウィルスフリー供与物は、医薬生成物へのさらなる加工のために保持される。
【０１３０】
上記例においては、単一の汚染された供与物が、元の 512供与物プールに対する一次 PCR試験を包含するわずか13の別々のPCR試験を実施することによって、そのような512供
与物のグループから独得に同定された。本発明の方法は、その対応する試験されたサブプールが陰性ウィルス表示に戻る限り、特定のサブプールに対する PCR試験の省略を可能にする。従って、一定のPCR試験を省略することによって、本発明の方法は、 PCR試験方法の決定を犠牲にしないで、特定の陽性供与物を同定するために実施されるべき PCR試験の回数を減じる。本発明の方法下で、すべての陽性供与物は同定されるであろうが、しかしすべての供与物が試験される必要はない。
【０１３１】
図12の典型的な態様においては、連続的により小さなサブグループのいづれか１つがP
CR試験され得、そして陽性サンプルの任意の位置が変更され得ることは明白であろう。従って、陽性供与物からのサンプルが個々の初期に試験されたサブグループに存在した場合、18回の試験が陽性供与物を独得に同定するために必要とされる（陽性表示に戻る１つの初期試験、及びその対応するサブグループが陰性であることを確かめるための１つの追加の試験）。
【０１３２】
同じように、個々の初期に試験されたサブプールが陰性表示に戻る場合、10回の試験が、陽性供与物を同定するために必要とされるであろう。実際、サブプールに対する陽性及び陰性の試験結果は、平等に分布する傾向があり、従って、平均14回の試験が、512単位に関して、初期供与物プールから独得に陽性の供与物を同定するために必要とされるであろう。
【０１３３】
従って、血漿供与物のサンプルをそれぞれ含む、個々の及び連結されたパウチを含んで成る管セグメントの供給を包含する、本発明の方法は複数の PCR試験プールを提供することにおいて好都合であることが前述から明らかである。初期及び続く一連のプールが個々の供与物の単一サンプルから同時に形成される、従来のプール調製とは異なって、本発明は試験の直前、試験プールの形成を可能にする。“ちょうど良い時”のプール形成のこの態様は、単に必要とされるような個々のパウチからの試験プールの構成を可能にする。
【０１３４】
汚染の可能性は、そのプールが密封されたサンプルパウチからそれぞれ、異なった時間で構成されるので、排除される。さらに、サンプルパウチは、試験プールを生成するために必要とされるまで、凍結されたまま存続する。DNA又は RNAの回収に悪影響を与えるかも知れない複数回の凍結−融解サイクルが回避され、従って、 PCR試験の完全性を保証する。
【０１３５】
上記方法は最少回の比較的高価な PCR試験によりウィルス陽性供与物を同定するために効果的であるが、個々の陽性供与物を同定するための他の方法もまた、本発明の実施に従って提供される。特に、１つのそのような方法は、２〜３回のPCR試験サイクル内で個々の陽性供与物を同定することができる性質を有し、従って、多数の供与物をスクリーンするために必要とされる時間及び管理経費の量を有意に減じる。
【０１３６】
たとえば、上記方法においては、特定のサブプールが陽性供与物を含むものとして同定されるとすぐに、技術者は、その特定のサブプールの形成に寄与するそれらの供与物を同定すべきである。次に、それらの供与物は再訪され、そして追加のサンプルパケットが個々の対応する管セグメントから収穫されるべきである。次に、２種の次の発生サブグループが形成されるべきであり、そしてPCR試験が反復される。この収穫、サブグループプール形成、及びPCR試験工程は、その方法がウィルス汚染された供与物を独得に同定するま
で、ますます小さな発生サブプールのために反復される。
【０１３７】
しかしながら、有意な長さの時間が、個々の PCR試験サイクル（収穫、サブグループプール形成、及びPCR試験）において消費される。例として 512のサンプルの第１発生プー
ルを取る場合、少なくとも10回の PCR試験サイクルが独得なウィルス汚染された供与物を同定するために必要とされるであろう。ひじょうに費用効果性であるが、上記方法は、時間が本質的なものである場合、PCR試験実験に対して難題を提供する。
【０１３８】
最少数の PCR試験サイクルでウィルス陽性血液又は血漿供与物を独得に同定するための方法が、図13及び14に記載されるであろう。
図13を参照すれば、最少数のPCR分析サイクルでプール中の PCR陽性の個々の供与物を
効果的に検出するための本発明に従っての PCR試験方法のフローチャートが示される。前記 PCR試験方法にあることだが、図13の方法は、PCR試験が適切なサイズのプールにおけ
る陽性サンプルの存在を検出するために十分な感度を有することを仮定する。単に例示目的のために、初期グループは、 512の血液又は血漿供与物を表わすために選択されている
。初期グループサイズが、評価される特定のゲノムマーカー、使用される PCR試験方法の感度、サンプルアリコート内のゲノムマーカー濃度の予測値、及びサンプルアリコートサイズに依存して、大きくも又は小さくもなり得ることは、当業者に理解されるであろう。
【０１３９】
前記方法は、Ｎ−次元のサンプルマトリックス又はグリッドを定義することによって、ブロック 301で開始する。マトリックスは、いづれのサイズのものでもあり得、そして２〜Ｎの数の次元のものであるが、しかし好ましくは、正方形として組織化される３−次元マトリックスである。
【０１４０】
そのようなマトリックスの例が、図14に示されており、ここで次の３次元指数により特徴づけられる正方形マトリックスのグラフが例示されている：横列、縦列、及びスライス列（ｒ，ｃ，ｓ）。図14の典型的なマトリックスにおいては、３×横列、３×縦列及び３×スライス列が存在し、それにより３3、又は27の要素を定義する。典型的な態様においては、横列は、正方形マトリックスを通して想像上の垂直な断面を取ることによって定義されるすべての要素を含んで成るものとして見なされる。図14の態様においては、たとえばマトリックスの横列３を含んで成る要素が、それらの横面上に文字ｒ3により同定される。
【０１４１】
同様に、縦列は、横列の方向に対して直交する方向に、マトリックスを通して第２の想像上の垂直な断面を取ることによって定義されるすべてのマトリックス要素を含んで成る。図14の典型的な態様においては、たとえば縦列１を含んで成る要素は、それらの縦面上に文字ｃ1を有する。スライス列は、図14の典型的なマトリックスを通して取られる水平断面を含んで成るすべての要素として定義される。横列及び縦列の定義に対して同様の態様において、スライス１を含んで成る要素は、それらのスライス面上で文字Ｓ1により同定される。
【０１４２】
従って、図14のマトリックスにおける27の要素の個々は、３×横列の１つ、３×縦列の１つ及び３×スライス列の１つに属する。数学的には、これはＸrcsの関係により表わされ得、ここでＸは要素を表わし、そしてrcs は次元指数であり、ここで指数の個々は１〜３の値を取ることができる。特定要素Ｘ113は、横列１、縦列１及びスライス列３の交点での要素として同定される。
【０１４３】
前述から、図14の典型的なマトリックスは３×３×３のマトリックスであるが、マトリックス定義及び要素形成の原理は、より多くの数の横列、縦列及びスライス列を有するマトリックスを維持するであろうことは明らかであろう。特に、８×横列、８×縦列、８×スライス列のマトリックスは数学的には、Ｘrcsとして表わされ、ここでｒ，ｃ及びｓは、１〜８の値を取ることができる。従って、３−次元８×８×８マトリックスは、 512の要素のための同定物を提供することができる。
【０１４４】
図13の方法のフロー図に戻ると、Ｎ−次元サンプルマトリックスの定義に従って、特に血液又は血漿供与物サンプルがマトリックスにより定義される要素の個々にマッピングされる。典型的な３−次元８×８×８マトリックスにおいては、512の個々の供与物からのサンプルがマトリックス要素に関係し、そして対応するユニークＸrcs インジケーターにより同定される。
【０１４５】
次に、アリコートが個々のサンプルから取られ、そして複数のマイナーなサブグループのプールが形成される。個々のマイナーなプールは、サンプル（Ｘrcs) のすべてのアリコートを含んで成り、ここで１の次元指数が定められている。換言すれば、上記典型的なマトリックスに従って、縦列又はスライス列の値にかかわらず、ｒ＝１を有するサンプル（Ｘrcs) のすべてがマイナーなプールに形成され；同様に、ｒ＝２，ｒ＝３…ｒ＝Ｎ；同様に、横列又はスライス列の値にかかわらず、ｃ＝１，ｃ＝２…ｃ＝Ｎ；横列又は縦列の値にかかわらず、ｓ＝１，ｓ＝２，…ｓ＝Ｎにより同定されるすべてのサンプルからサブプールが形成される。
【０１４６】
従って、個々のマイナーなプールは、個々の横列、縦列、スライス列、又は他の次元指数を表わし、その結果、Ｎ−次元マトリックスが定義されたなら、Ｎ−次元Ｘ（サンプルの合計数）1/nのマイナーなプールが存在するであろう。 512のサンプルを含む典型的な３−次元８×８×８マトリックスに関しては、24のマイナーなサブグループプール（８の横列プール、８の縦列プール、及び８のスライス列プール）が存在する。本発明に従ってのマイナーなプールの創造は、マイナーな方法により決定因子を減じる数学的方法に類似するように見える。同様の態様において、個々のサンプルは、マトリックスの個々の１の次元において、Ｎのマイナーなプールにおいて表わされることが理解されるであろう。
【０１４７】
マイナーなプールの形成の他に、個々のサンプルのアリコート、又は個々のマイナーなプールのアリコートが、本発明の供与物空間を含んで成る 512の供与物のすべてからのサンプルを含む単一のマスタープールを形成するために組合される。プールのすべてが形成された後、いづれかの残存するサンプル及びマイナーなプール及びマスタープールは再凍結され、そしてPCR試験のような時間が必要とされるまで、貯蔵され得る。
【０１４８】
PCR試験が所望される場合、PCR試験はまず、マトリックスを含んで成る個々のサンプ
ルのアリコートを表わすマスタープールに対して行なわれる。マスタープールに関する試験結果が陰性である場合、 PCR試験の少なくとも感度レベルまで、マトリックスを形成するサンプルにより表わされるウィルス陽性供与物は存在しない。サンプルをマトリックスに寄与して来た血液又は血漿供与物は、さらなる使用のために開放され得る。しかしながら、マスタープールのPCR試験が特定のゲノムマーカーに関して陽性である場合、第２の
PCR試験サイクルが300で入り、ここで個々のマイナーなプールが試験される。
【０１４９】
上記態様に類似する態様において、主要プール(512のサンプル）において１よりも多くの陽性サンプルであるそれらの統計学的確立が低く、好ましくは１〜２％以下であるよう、主要プールサイズが選択される。これは、一般的なドナー集団における興味あるウィルスの発生頻度を、98％〜99％の依頼レベルまで評価することによって行なわれ得る。たとえば、1,000の一般的ドナー集団からのわずか１つのドナーが98％の信頼レベルまで、興味あるウィルスにより汚染されていることが決定される場合、評価される次の1,000のドナーにおいて１つよりも多くの汚染されたドナーを発見する２％の確立が存在する。
【０１５０】
一般的に、これは、アルゴリズムが PCR試験サイクル内の適切なサイズのプールにおいて単一の反応性単位を同定することができるであろうことを保証する。本発明に従って、マトリックス内の単一の陽性サンプルが与えられる場合、マイナーなプールのうち３個のプールは、１の個々の次元において、陽性供与体のアリコートを含むであろう。典型的な態様(512のサンプルのマトリックス）においては、８のマイナーな横列プール、８のマイナーな縦列プール及び８のマイナー層プールが存在する。マスタープール試験が陽性である場合、１の横列、１の縦列及び１の層プールは、307で示されるように、第２の PCR試験サイクルの間、陽性であろう。横列、縦列及び層の要素指数の交点は、 309で示されるように、明らかに反応性供与物を同定する。
【０１５１】
例として、反応性サンプルがマトリックス要素Ｘ113 にマッピングされる場合、縦列１のマイナーなプールが陽性の PCR試験結果に戻り、そして横列２及び続く横列のマイナーなプールが陰性を示すであろう。さらに、縦列１のマイナーなプールは陽性試験結果に戻り、そして縦列２及び続く縦列のマイナーなプールが陰性を示すであろう。同様に、層１及び２のマイナーなプールは陰性結果に戻り、層３のプールは陽性を示し、そして続く層のマイナーなプールは陰性を示すであろう。３個の陽性のマイナーなプール（横列１、縦列１及び層３）は、通常、単一の要素Ｘ113のみを有する。従って、陽性供与物は、要素Ｘ113 にマッピングされるサンプルにより表わされるように、独得に同定される。
【０１５２】
マトリックスに１よりも多くの反応性供与物が存在する場合、その反応性供与物は、わずか１回の追加のPCR試験サイクルにより、本発明の方法に従って明確に同定され得る。
単一の次元指数の１よりも多くのマイナーなプールが陽性の試験結果に戻り、そして残る個々の次元指数を表わす単一のマイナーなプールのみが陽性の試験結果に戻ることが観察される場合、１よりも多くの陽性供与物が、第３のPCR試験サイクルの必要性を伴わないで、試験結果を数学的に評価することによって明確に同定され得る。
【０１５３】
たとえば、横列１のマイナーなプール（及び他は存在しない）が陽性を示し；縦列１のマイナーなプール（及び他は存在しない）が陽性を示し；そして層１のマイナーなプール及び層３のマイナーなプールの両者が陽性を示す場合、マトリックスを含んで成るわずか２つの陽性供与物が存在し、そしてそれらはＸ111及びＸ113 として明確に同定され得る。この結果に達するためには、さらなる試験は必要とされない。
【０１５４】
他方では、複数のマイナーなプールの陽性試験及びそれらの独自性が 310で示されるように、２次元指数にそって変化を示すことが観察される場合、陽性供与物に対して潜在的にマッピングされる場合に同定されるＺ2要素（ここで２はグリッドを含んで成る陽性供与物の実際の数である）が存在することが明らかであろう。
【０１５５】
たとえば、横列１のマイナーなプール（及び他は存在しない）が陽性を示し；縦列１及び３のマイナーなプールが陽性を示し；そして層１及び３マイナーなプールが陽性を示す場合、これは、潜在的に陽性の候補体要素が、Ｘ111，Ｘ113 ，Ｘ131 及びＸ133である
ことを示唆する。候補体要素に関しては、わずか２種の次元指数（縦列及び層列）が存在するので、マトリックスを含んで成る、わずか２種の実際的な陽性供与物が存在することが見出されるであろう。この情況下で、すべての４種の供与物が、陽性であるものとして任意に同定され、そして処置され、又は他方では、アリコートが個々の候補体要素から取られ、そして前記４種のうち２種が実際的な陽性の供与物を含んで成ることを独得に同定するために、311での第３のPCR試験サイクルの間、それぞれ PCR試験される。
【０１５６】
同様の態様において、マトリックスに２種以上の陽性供与物が存在し、そしてそれらの同定物が２次元以上で変化する場合、多くても、Ｚn の潜在的に陽性の同定された候補体要素が存在することが数学的に明らかであり、ここでＺは陽性供与物の実際の数であり、そしてｎは変化する次元の数である。この状況下で、アリコートがマトリックスにおけるすべての疑わしい要素から取られ、そして直接的に試験される。
【０１５７】
従って、本発明の方法は、初期の陽性マスタープールについての一回の PCR試験サイクル内で、単一の反応性供与物、又は単一の次元指数にそってのみ変化する複数の反応性供与体を含むすべてのマトリックスについての２回のPCR試験サイクル内で、及びいづれか他の状況についての３回の PCR試験サイクル内で、特定のゲノムマーカーに対して反応性である供与物の明確な同定を可能にすることが見出され得る。
【０１５８】
従って、本発明の実施は、ウィルス汚染ができる限り無いことにより実質的に安全な血液供給物及びそれから調製された血液又は血漿生成物をもたらす。好都合には、費用有効性で、高感度の試験が直接的にウィルスの存在について容易に実施される。従って、感染性窓期間の間、抗体試験に通常関係するウィルス汚染の誤った表示が回避される。さらに、本発明は、試験サンプルにおける単一のウィルスの存在を検出することができる高感度試験の費用有効使用を可能にし、従って、初期のウィルス汚染が全たくないことの保証を助ける。
【０１５９】
当業者は、本発明の種々の好ましい態様の前述の例及び記載は全体として、単なる本発明の例示であり、そして本発明の種々の成分の形状、サイズ及び数、及び包含される試験のタイプの変更が本発明の範囲内で行なわれ得ることを理解するであろう。たとえば、個々の及び連結されるパウチの長さ、及び従って、それらの容積含有物が、管セグメントの長さにそって段階的に高められ得ることは、当業者に明らかであろう。
【０１６０】
連続的な試験サブプールがより少ない数のサンプルから形成されるので、そのプールを含んで成る血漿の体積は必然的に低下する。個々の連続的サブプールにおける血漿の十分な体積を維持するためには、連続的なサンプルパウチは、所望する最終プール体積を収容するためにより多くの体積を含むことができることは、明白であるべきである。約１ml〜約10mlのサイズ範囲のプールを収容するために、連続的サンプルパウチの体積は、連続的段階において、約0.02mlから約0.5mlに高まるであろうことは明らかであろう。
【０１６１】
本発明のシステムは典型的な血漿収集容器及び関連する管セグメントに限定されないことはまた、当業者に明らかであろう。血液バッグ又は他の生物学的流体容器は容易に使用され得、そして適切な管セグメントが、流体収集の前、及び流体収集が完結された後、それらに結合され得る。サンプル量の生物学的流体が、本発明の実施に従ってパウチ中に形成される管セグメントに移行されることが、必要とされるすべてである。
従って、本発明は、本明細書に記載される特定の態様に限定されず、むしろ請求の範囲により定義される。
【０１６２】
（発明の要旨）
本発明は以下を提供する。
（１）1回のPCR試験サイクルで、陽性ウィルス表示を有する供与物を特異的に同定するために多数の血漿供与物を試験するための方法であって:
多くの血漿供与物を用意し、ここで個々の供与物の一部が互いに間隔を開けられたシールによりその長さにそって分離される管セグメントに含まれ、前記シール間の管セグメントが連続的容器を定義し、個々の容器は前記供与物の血漿サンプルを含み;
n次元のグリッドを定義し、ここでnは整数であり、前記グリーッドはさらに、多数の内部要素を含んで成り、個々の要素はn次元のグリッドの交点により定義され;
多くの血漿供与物の特定の1つからのサンプルを、前記グリッドの個々の要素の対応す
る1つに対してマッピングし、個々のサンプルはマトリックス表示Xｒｃｓにより定義され、ここでマトリックス表示の下付き文字はグリッドの次元指数を定義し;
個々の多くの血漿供与物の個々のサンプルからアリコートを取り、ここで個々のサンプルから取られるアリコートの数はグリッドを含んで成る次元指数の数により定義され;
個々のサンプルのアリコートからサブプールを形成し、ここで個々のサブプールは1次
元指数が定められるすべてのサンプルのアリコートを含んで成り;
1回のPCR試験サイクルで、ウィルス表示について前記サブプールのすべてを試験し;そ
して
マイナーな方法による縮小に従って、1回のPCR試験サイクルで陽性であると試験された個々のサブプールの次元指数を評価し、それにより、個々の陽性サブプールの次元指数により定義されるユニ一ク要素を明白に同定し、従って、特異的な陽性サンプルを明白に同定することを含んで成る方法。
（２）前記n次元グリッドが少なくとも3一次元グリッドである第1項記載の方法。
（３）前記グリッドが3次元グリッドであり、そして個々のサンプルがXｒｃｓとして同定されるマトリックス要素表示により特徴づけられ、ここで前記次元指数r,c及びsは前記グリッドの横列、縦列、及びスライス列を同定する第2項記載の方法。
（４）3種のアリコートが供与物の個々の血漿サンプルから取られる第3項記載の方法。
（５）前記サブプール形成段階がさらに、
ユニーク整数により同定されるr指数を有する個々のサンプルのアリコートからサブプ
ールを形成し;
ユニーク整数により同定されるc指数を有する個々のサンプルのアリコートからサブプ
ールを形成し;
ユニーク整数により同定されるs指数を有する個々のサンプルのアリコートからサブプ
ールを形成し;そして
ウィルス表示について個々のr,c及びsサブプールをPCR試験することを含んで成る第4項記載の方法。
（６）陽性のウィルス表示に戻された個々のrサブプールの整数指数を決定し;
陽性のウィルス表示に戻された個々のcサブプールの整数指数を決定し；そして
陽性のウィルス表示に戻された個々のsサブプールの整数指数を決定する段階をさらに
含んで成る第5項記載の方法。
（７）陽性のウィルス表示に戻った、r、,c、及びsサブプールの整数指数が、その整数表示が次元指数r,c及びsの代わりに置換され、それにより前記マッピングXｒｃｓからサン
プルが同定される場合、陽性のサンプルを独得に同定する第6項記載の方法。
（８）すべての候補体サンプルが、1つよりも多くの指数が陽性の、ウィルス表示を有す
るものとして、1つよりも多くのサブプールを同定するかどうか、個々に試験される第7項記載の方法。
【図面の簡単な説明】
【０１６３】
【図１】図１は、本発明の実施において有用な管セグメントにより結合される血漿供与物ボトル及びサンプル容器の１つの例の半−透視略図である。
【図２−Ａ】図2-Aは、血漿供与物ボトルとサンプル容器との間で連結され、そして本発明に従ってパウチに分割される管セグメントの半−透視略図である。
【図２−Ｂ】図2-Bは、血漿供与物ボトルとサンプル容器との間で連結され、そして本発明に従って一連の一緒に連結されたＹ−部位を含む管セグメントの半−透視略図である。
【図３−Ａ】図3-Aは、パウチを分離するシールの追加の詳細を示す、図2-Aに示される管セグメントの一部の拡大された上部平面図である。
【図３−Ｂ】図3-Bは、管セグメントシールの半−略図断面図である。
【図４−Ａ】図4-Aは、個々のパウチ中に管を密封するために本発明の実施に従って供給される装置の半−透視略図である。
【図４−Ｂ】図4-Bは、市販のヒートシーラー上に固定するための本発明の実施に従って供給されるヒートシール装置の上部及び底部定盤の半−透視略図である。
【図５】図５は、本発明に従って供給されるサンプリングプレート及びカバーの半−透視略図である。
【図６】図６は、本発明に従って供給されるサンプリングプレートのサンプルウェルに含まれる血漿パウチの部分的半−略図断面図である。
【図７】図７は、サンプルパウチを圧縮し、そしてそこにおける流体サンプル容器をプール中に送るための本発明に従って供給される装置の半−透視略図である。
【図８】図８は、図７の装置の圧縮シリンダーの半−略図断面図である。
【図９−Ａ】図9-Aは、サンプル含有パケットが圧縮されるスクリーンプレートの半−略図部分断面図である。
【図９−Ｂ】図9-Bは、圧縮されたサンプル容器からサンプル流体を収集するための放射状及び同心性流体側溝を示すスクリーンプレートの半−略図上部図である。
【図１０】図10は、図７の装置の圧縮ピストンの半−略図部分断面図である。
【図１１】図11は、供与物プールからPCR陽性ドナーを決定するための本発明の試験方法論を示すフローチャートである。
【図１２】図12は、512供与物プールか単一の PCR陽性供与物を同定するための本発明の試験順序を示すフローチャートである。
【図１３】図13は、供与物プールからPCR陽性ドナーを決定するための本発明の第２の試験方法論を示すフローチャートである。
【図１４】図14は、ｒ，ｃ及びｓ指数の定義を示す本発明の３次元グリッドの表示である。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
明細書に記載の方法。
【請求項１】
明細書に記載の方法。
【図１】
【図２−Ａ】
【図２−Ｂ】
【図３−Ａ】
【図３−Ｂ】
【図４−Ａ】
【図４−Ｂ】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９−Ａ】
【図９−Ｂ】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図２−Ａ】
【図２−Ｂ】
【図３−Ａ】
【図３−Ｂ】
【図４−Ａ】
【図４−Ｂ】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９−Ａ】
【図９−Ｂ】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【公開番号】特開２００８−２２０３６９（Ｐ２００８−２２０３６９Ａ）
【公開日】平成２０年９月２５日（２００８．９．２５）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００８−５１０３３（Ｐ２００８−５１０３３）
【出願日】平成２０年２月２９日（２００８．２．２９）
【分割の表示】特願２００６−４６０６２（Ｐ２００６−４６０６２）の分割
【原出願日】平成１０年１月６日（１９９８．１．６）
【出願人】（５９１０１３２２９）バクスター・インターナショナル・インコーポレイテッド (448)
【氏名又は名称原語表記】ＢＡＸＴＥＲ ＩＮＴＥＲＮＡＴＩＯＮＡＬ ＩＮＣＯＲＰ０ＲＡＴＥＤ
【出願人】（５０１４５３１８９）バクスター・ヘルスケヤー・ソシエテ・アノニム (289)
【氏名又は名称原語表記】ＢＡＸＴＥＲ ＨＥＡＬＴＨＣＡＲＥ Ｓ．Ａ．
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２０年９月２５日（２００８．９．２５）
【国際特許分類】
【出願日】平成２０年２月２９日（２００８．２．２９）
【分割の表示】特願２００６−４６０６２（Ｐ２００６−４６０６２）の分割
【原出願日】平成１０年１月６日（１９９８．１．６）
【出願人】（５９１０１３２２９）バクスター・インターナショナル・インコーポレイテッド (448)
【氏名又は名称原語表記】ＢＡＸＴＥＲ ＩＮＴＥＲＮＡＴＩＯＮＡＬ ＩＮＣＯＲＰ０ＲＡＴＥＤ
【出願人】（５０１４５３１８９）バクスター・ヘルスケヤー・ソシエテ・アノニム (289)
【氏名又は名称原語表記】ＢＡＸＴＥＲ ＨＥＡＬＴＨＣＡＲＥ Ｓ．Ａ．
【Ｆターム（参考）】
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