ヘテロ多量体分子
本発明はヘテロ多量抗体と、これら抗体を高収率と高純度で製造する方法を提供する。本発明はまたこれら抗体を使用する方法及び組成物を提供する。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
第一軽鎖ポリペプチドと対をなす第一重鎖ポリペプチドと第二軽鎖ポリペプチドと対をなす第二重鎖ポリペプチドを含んでなり、第一重鎖ポリペプチドと第二重鎖ポリペプチドが重鎖間ジスルフィド結合不能の変異ヒンジ領域をそれぞれ含む二重特異性抗体を製造する方法であって、
（ａ）第一重鎖ポリペプチドと第一軽鎖ポリペプチドを第一宿主細胞で発現させ；
（ｂ）第二重鎖ポリペプチドと第二軽鎖ポリペプチドを第二宿主細胞で発現させ；
（ｃ）（ａ）及び（ｂ）の重鎖及び軽鎖ポリペプチドを単離し；
（ｄ）（ｃ）の単離ポリペプチドをアニールして、第一軽鎖と対をなす第一重鎖を含む第一アームと第二軽鎖と対をなす第二重鎖を含む第二アームを含んでなる二重特異性抗体を生成することを含む方法。
【請求項２】
（ａ）第一標的分子結合アームを生成可能な免疫グロブリン重鎖及び軽鎖ポリペプチドの第一の対を第一宿主細胞で発現させ、
（ｂ）第二標的分子結合アームを生成可能な免疫グロブリン重鎖及び軽鎖ポリペプチドの第二の対を第二宿主細胞で発現させ、ここで、第一対及び第二対の重鎖ポリペプチドが重鎖間ジスルフィド結合不能の変異ヒンジ領域を含み、第一対及び第二対の軽鎖が異なった可変ドメイン配列を含み、
（ｃ）工程（ａ）の宿主細胞からポリペプチドを単離し；
（ｄ）単離ポリペプチドの多量体化を許容する条件下でポリペプチドをインビトロで接触させ、二つの区別される標的分子に対して結合特異性を有する抗体の実質的に均一な集団を生成することを含んでなる方法。
【請求項３】
（ａ）４つのポリペプチドの混合物を含むサンプルを取得し、ここで、該４つのポリペプチドは、第一標的分子結合アームを生成可能な免疫グロブリン重鎖及び軽鎖ポリペプチドの第一の対と、第二標的分子結合アームを生成可能な免疫グロブリン重鎖及び軽鎖ポリペプチドの第二の対であり、第一対及び第二対の重鎖ポリペプチドが重鎖間ジスルフィド結合不能の変異ヒンジ領域を含み、
（ｂ）ポリペプチドの多量体化を許容する条件下で４つのポリペプチドをインキュベートし、二つの区別される標的分子に対して結合特異性を有する抗体の実質的に均一な集団を生成することを含んでなる方法。
【請求項４】
４つの免疫グロブリンポリペプチドを、ポリペプチドの多量体化を許容する条件下でインキュベートして実質的に均一な抗体の集団を生成し、ここで、各抗体は二つの区別される標的分子に対して結合特異性を有し、
ここで、４つの免疫グロブリンポリペプチドは、第一標的分子結合アームを生成可能な免疫グロブリン重鎖及び軽鎖ポリペプチドの第一の対と、第二標的分子結合アームを生成可能な免疫グロブリン重鎖及び軽鎖ポリペプチドの第二の対であり、
ここで、第一対及び第二対の各重鎖ポリペプチドは重鎖間ジスルフィド結合不能の変異ヒンジ領域を含む方法。
【請求項５】
免疫グロブリン重鎖及び軽鎖ポリペプチドの第一の対と、免疫グロブリン重鎖及び軽鎖ポリペプチドの第二の対を、第一対及び第二対のポリペプチドの多量体化を許容する条件下でインキュベートして実質的に均一な抗体の集団を生成し、
ここで、ポリペプチドの第一の対は第一標的分子に結合可能であり；
ここで、ポリペプチドの第二の対は第二標的分子に結合可能であり；
ここで、第一対及び第二対の各重鎖ポリペプチドは重鎖間ジスルフィド結合不能の変異ヒンジ領域を含む方法。
【請求項６】
免疫グロブリン重鎖及び軽鎖ポリペプチドの第一の対と、免疫グロブリン重鎖及び軽鎖ポリペプチドの第二の対を、第一対及び第二対のポリペプチドの多量体化を許容する条件下でインキュベートして実質的に均一な抗体の集団を生成し、
ここで、ポリペプチドの第一の対は第一標的分子に結合可能であり；
ここで、ポリペプチドの第二の対は第二標的分子に結合可能であり；
ここで、第一重鎖ポリペプチドのＦｃポリペプチドと第二重鎖ポリペプチドのＦｃポリペプチドは界面で合致し、第二Ｆｃポリペプチドの界面は、第一Ｆｃポリペプチドの界面のキャビティに位置せしめることが可能な隆起を含む方法。
【請求項７】
第一対及び第二対の各重鎖ポリペプチドが、重鎖間ジスルフィド結合不能の変異ヒンジ領域を含む請求項１から６の何れか一項に記載の方法。
【請求項８】
免疫グロブリン重鎖及び軽鎖ポリペプチドの第一対及び第二対が、別個の発現ユニットから得られる請求項１から６の何れか一項に記載の方法。
【請求項９】
発現ユニットが細胞である請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
発現ユニットが細胞培養物である請求項８に記載の方法。
【請求項１１】
発現ユニットがインビトロタンパク質発現サンプル／系である請求項８に記載の方法。
【請求項１２】
上記重鎖間ジスルフィド結合がＦｃ領域間にある請求項１から６の何れか一項に記載の方法。
【請求項１３】
上記変異重鎖ヒンジ領域が、ジスルフィド結合を形成可能なシステイン残基を欠く請求項１から６の何れか一項に記載の方法。
【請求項１４】
上記ジスルフィド結合が分子間にある請求項１から６の何れか一項に記載の方法。
【請求項１５】
上記分子間ジスルフィド結合が２つの免疫グロブリン重鎖のシステイン間にある請求項１から６の何れか一項に記載の方法。
【請求項１６】
ジスルフィド結合を通常は形成可能なヒンジ領域システイン残基が欠失している請求項１から６の何れか一項に記載の方法。
【請求項１７】
ジスルフィド結合を通常は形成可能なヒンジ領域システイン残基が他のアミノ酸で置換されている請求項１から６の何れか一項に記載の方法。
【請求項１８】
上記システイン残基がセリンで置換されている請求項１から６の何れか一項に記載の方法。
【請求項１９】
上記抗体が重鎖定常ドメインと軽鎖定常ドメインを含む請求項１から６の何れか一項に記載の方法。
【請求項２０】
重鎖がヒトＣＨ２及び／又はＣＨ３ドメインの少なくとも一部を含む請求項１から６の何れか一項に記載の方法。
【請求項２１】
重鎖及び軽鎖ポリペプチドの一方又は両方の対がヒト化されている請求項１から６の何れか一項に記載の方法。
【請求項２２】
上記抗体がヒト化されている請求項１から６の何れか一項に記載の方法。
【請求項２３】
抗体が完全長抗体である請求項１から６の何れか一項に記載の方法。
【請求項２４】
上記完全長抗体が重鎖及び軽鎖を含む請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
重鎖及び軽鎖の一方又は両方の対がヒトである請求項１から６の何れか一項に記載の方法。
【請求項２６】
上記抗体がヒトである請求項１から６の何れか一項に記載の方法。
【請求項２７】
抗体が、ヒトＣＨ２及び／又はＣＨ３ドメインの少なくとも一部を含む抗体断片である請求項１から６の何れか一項に記載の方法。
【請求項２８】
上記抗体断片がＦｃ融合ポリペプチドである請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
抗体がＩｇＧ、ＩｇＡ及びＩｇＤからなる群から選択される請求項１から６の何れか一項に記載の方法。
【請求項３０】
抗体がＩｇＧである請求項１から６の何れか一項に記載の方法。
【請求項３１】
抗体がＩｇＧ１である請求項１から６の何れか一項に記載の方法。
【請求項３２】
抗体がＩｇＧ２である請求項１から６の何れか一項に記載の方法。
【請求項３３】
抗体が治療用抗体である請求項１から６の何れか一項に記載の方法。
【請求項３４】
抗体がアゴニスト抗体である請求項１から６の何れか一項に記載の方法。
【請求項３５】
抗体がアンタゴニスト抗体である請求項１から６の何れか一項に記載の方法。
【請求項３６】
抗体が診断用抗体である請求項１から６の何れか一項に記載の方法。
【請求項３７】
抗体が阻止抗体である請求項１から６の何れか一項に記載の方法。
【請求項３８】
抗体が中和抗体である請求項１から６の何れか一項に記載の方法。
【請求項３９】
抗体が腫瘍抗原に結合可能である請求項１から６の何れか一項に記載の方法。
【請求項４０】
腫瘍抗原が細胞表面分子ではない請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
腫瘍抗原がクラスター分類因子ではない請求項３９に記載の方法。
【請求項４２】
抗体がクラスター分類因子に結合可能である請求項１から６の何れか一項に記載の方法。
【請求項４３】
抗体が細胞生存調節因子に結合可能である請求項１から６の何れか一項に記載の方法。
【請求項４４】
抗体が細胞増殖調節因子に特異的に結合可能である請求項１から６の何れか一項に記載の方法。
【請求項４５】
抗体が組織発生又は分化に関連する分子に結合可能である請求項１から６の何れか一項に記載の方法。
【請求項４６】
抗体が細胞表面分子に結合可能である請求項１から６の何れか一項に記載の方法。
【請求項４７】
抗体がリンホカインに結合可能である請求項１から６の何れか一項に記載の方法。
【請求項４８】
第一対及び第二対の軽鎖が異なった可変ドメイン配列を含む請求項１から６の何れか一項に記載の方法。
【請求項４９】
第一重鎖ポリペプチドのＦｃポリペプチドと第二重鎖ポリペプチドのＦｃポリペプチドが界面で合致し、第二Ｆｃポリペプチドの界面が第一Ｆｃポリペプチドの界面のキャビティに位置させることが可能な隆起を含む請求項１から６の何れか一項に記載の方法。
【請求項５０】
ポリペプチドの少なくとも９０％が上記二重特異性抗体を生成する請求項４９に記載の方法。
【請求項５１】
第二Ｆｃポリペプチドが鋳型／元のポリペプチドから改変されて隆起をコードし、又は第一Ｆｃポリペプチドが鋳型／元のポリペプチドから改変されてキャビティをコードし、又はその双方をコードする請求項４９に記載の方法。
【請求項５２】
第二Ｆｃポリペプチドが鋳型／元のポリペプチドから改変されて隆起をコードし、かつ第一Ｆｃポリペプチドが鋳型／元のポリペプチドから改変されてキャビティをコードし、又はその双方をコードする請求項４９に記載の方法。
【請求項５３】
第一Ｆｃポリペプチドと第二Ｆｃポリペプチドが界面で合致し、ここで第二Ｆｃポリペプチドの界面が、第一Ｆｃポリペプチドのキャビティに位置させることが可能な隆起を含み、キャビティ又は隆起あるいは双方が、第一及び第二Ｆｃポリペプチドの界面中にそれぞれ導入されている請求項４９に記載の方法。
【請求項５４】
上記二重特異性抗体が二つの標的分子に特異的に結合可能である請求項１から６の何れか一項に記載の方法。
【請求項５５】
第一アームが第一標的分子に特異的に結合し、第二アームが第二標的分子に特異的に結合する請求項１から６の何れか一項に記載の方法。
【請求項５６】
第一宿主細胞と第二宿主細胞が別の細胞培養物中にある請求項１から６の何れか一項に記載の方法。
【請求項５７】
第一宿主細胞と第二宿主細胞が双方の宿主細胞を含む混合培養物中にある請求項１から６の何れか一項に記載の方法。
【請求項５８】
宿主細胞が原核生物である請求項１から６の何れか一項に記載の方法。
【請求項５９】
原核宿主細胞が大腸菌である請求項５８に記載の方法。
【請求項６０】
大腸菌が内因性プロテアーゼ活性を欠く株のものである請求項５９に記載の方法。
【請求項６１】
宿主細胞が真核生物である請求項１から６の何れか一項に記載の方法。
【請求項６２】
宿主細胞がＣＨＯである請求項６１に記載の方法。
【請求項６３】
ポリペプチドをコードする核酸が、ほぼ等しい強度の翻訳開始領域（ＴＩＲ）に作用可能に結合している請求項１から６の何れか一項に記載の方法。
【請求項６４】
アニーリング又は接触工程が、単離ポリペプチドの混合物を室温でインキュベートすることを含む請求項１から６の何れか一項に記載の方法。
【請求項６５】
アニーリング又は接触工程が、単離ポリペプチドの混合物を加熱することを含む請求項１から６の何れか一項に記載の方法。
【請求項６６】
混合物を少なくとも４０℃に加熱する請求項６５に記載の方法。
【請求項６７】
混合物を少なくとも５０℃に加熱する請求項６５に記載の方法。
【請求項６８】
混合物を約４０℃と６０℃の間に加熱する請求項６５に記載の方法。
【請求項６９】
混合物が５０℃である請求項６５に記載の方法。
【請求項７０】
アニーリング又は接触工程が、単離ポリペプチドの混合物を少なくとも２分間加熱することを含む請求項１から６の何れか一項に記載の方法。
【請求項７１】
加熱後に混合物を冷却する請求項６５に記載の方法。
【請求項７２】
アニーリング又は接触工程が、単離ポリペプチドの混合物を、約４から約１１の間（約４と約１１を含む）のｐＨでインキュベートすることを含む請求項１から６の何れか一項に記載の方法。
【請求項７３】
ｐＨが約５．５である請求項７２に記載の方法。
【請求項７４】
ｐＨが約７．５である請求項７２に記載の方法。
【請求項７５】
アニーリング又は接触工程が、単離ポリペプチドの混合物を、変性剤中でインキュベートすることを含む請求項１から６の何れか一項に記載の方法。
【請求項７６】
変性剤が尿素である請求項７５に記載の方法。
【請求項７７】
アニーリング又は接触工程が、第一及び第二重鎖ポリペプチド間に化学結合を含まない請求項１から６の何れか一項に記載の方法。
【請求項７８】
ポリペプチドの少なくとも７５％が、第一重鎖及び軽鎖対と第二重鎖及び軽鎖対を含む複合体中にある請求項１から６の何れか一項に記載の方法。
【請求項７９】
単離ポリペプチドの１０％以下が、抗体精製工程の前に、単量体又は二量体として存在している請求項１から６の何れか一項に記載の方法。
【請求項８０】
第一の対及び第二の対の軽鎖が異なった可変ドメイン配列を含む請求項１から６の何れか一項に記載の方法。
【請求項８１】
第一及び第二の重-軽鎖対はそれぞれ互いにジスルフィド結合した重鎖及び軽鎖を含んでなる請求項１から６の何れか一項に記載の方法。
【請求項８２】
第一の対及び第二の対のポリペプチドがアニール又は接触工程においてほぼ等モル量［比］で提供される請求項１から６の何れか一項に記載の方法。
【請求項８３】
第一の対と第二の対の間のｐＩ値の差が少なくとも０．５である請求項１から６の何れか一項に記載の方法。
【請求項８４】
請求項１から８３の何れか一項に記載の方法によって製造された二重特異性抗体。
【請求項８５】
第一の対の重鎖及び軽鎖ポリペプチドと第二の対の重鎖及び軽鎖ポリペプチドを含んでなり、軽鎖ポリペプチドが異なった可変ドメイン配列を含み、重鎖が重鎖間ジスルフィド結合不可の変異ヒンジ領域を含む二重特異性抗体。
【請求項８６】
請求項１から８５の何れか一項に記載の抗体をコードする単離された核酸。
【請求項８７】
請求項８６に記載の核酸を含んでなる宿主細胞。
【請求項８８】
各対の重鎖及び軽鎖ポリペプチドをコードする核酸が単一のベクター中に存在している請求項８７に記載の宿主細胞。
【請求項８９】
各対の重鎖及び軽鎖ポリペプチドをコードする核酸が別のベクター中に存在している請求項８７に記載の宿主細胞。
【請求項９０】
請求項１から８５の何れか一項に記載の二重特異性抗体を集合的にコードする一又は複数の組換え核酸を含んでなる組成物。
【請求項９１】
請求項１から８５の何れか一項に記載の二重特異性抗体と担体を含有してなる組成物。
【請求項９２】
免疫グロブリンの少なくとも８０％が請求項１から８５の何れか一項に記載の二重特異性抗体である免疫グロブリン群を含んでなる組成物。
【請求項１】
第一軽鎖ポリペプチドと対をなす第一重鎖ポリペプチドと第二軽鎖ポリペプチドと対をなす第二重鎖ポリペプチドを含んでなり、第一重鎖ポリペプチドと第二重鎖ポリペプチドが重鎖間ジスルフィド結合不能の変異ヒンジ領域をそれぞれ含む二重特異性抗体を製造する方法であって、
（ａ）第一重鎖ポリペプチドと第一軽鎖ポリペプチドを第一宿主細胞で発現させ；
（ｂ）第二重鎖ポリペプチドと第二軽鎖ポリペプチドを第二宿主細胞で発現させ；
（ｃ）（ａ）及び（ｂ）の重鎖及び軽鎖ポリペプチドを単離し；
（ｄ）（ｃ）の単離ポリペプチドをアニールして、第一軽鎖と対をなす第一重鎖を含む第一アームと第二軽鎖と対をなす第二重鎖を含む第二アームを含んでなる二重特異性抗体を生成することを含む方法。
【請求項２】
（ａ）第一標的分子結合アームを生成可能な免疫グロブリン重鎖及び軽鎖ポリペプチドの第一の対を第一宿主細胞で発現させ、
（ｂ）第二標的分子結合アームを生成可能な免疫グロブリン重鎖及び軽鎖ポリペプチドの第二の対を第二宿主細胞で発現させ、ここで、第一対及び第二対の重鎖ポリペプチドが重鎖間ジスルフィド結合不能の変異ヒンジ領域を含み、第一対及び第二対の軽鎖が異なった可変ドメイン配列を含み、
（ｃ）工程（ａ）の宿主細胞からポリペプチドを単離し；
（ｄ）単離ポリペプチドの多量体化を許容する条件下でポリペプチドをインビトロで接触させ、二つの区別される標的分子に対して結合特異性を有する抗体の実質的に均一な集団を生成することを含んでなる方法。
【請求項３】
（ａ）４つのポリペプチドの混合物を含むサンプルを取得し、ここで、該４つのポリペプチドは、第一標的分子結合アームを生成可能な免疫グロブリン重鎖及び軽鎖ポリペプチドの第一の対と、第二標的分子結合アームを生成可能な免疫グロブリン重鎖及び軽鎖ポリペプチドの第二の対であり、第一対及び第二対の重鎖ポリペプチドが重鎖間ジスルフィド結合不能の変異ヒンジ領域を含み、
（ｂ）ポリペプチドの多量体化を許容する条件下で４つのポリペプチドをインキュベートし、二つの区別される標的分子に対して結合特異性を有する抗体の実質的に均一な集団を生成することを含んでなる方法。
【請求項４】
４つの免疫グロブリンポリペプチドを、ポリペプチドの多量体化を許容する条件下でインキュベートして実質的に均一な抗体の集団を生成し、ここで、各抗体は二つの区別される標的分子に対して結合特異性を有し、
ここで、４つの免疫グロブリンポリペプチドは、第一標的分子結合アームを生成可能な免疫グロブリン重鎖及び軽鎖ポリペプチドの第一の対と、第二標的分子結合アームを生成可能な免疫グロブリン重鎖及び軽鎖ポリペプチドの第二の対であり、
ここで、第一対及び第二対の各重鎖ポリペプチドは重鎖間ジスルフィド結合不能の変異ヒンジ領域を含む方法。
【請求項５】
免疫グロブリン重鎖及び軽鎖ポリペプチドの第一の対と、免疫グロブリン重鎖及び軽鎖ポリペプチドの第二の対を、第一対及び第二対のポリペプチドの多量体化を許容する条件下でインキュベートして実質的に均一な抗体の集団を生成し、
ここで、ポリペプチドの第一の対は第一標的分子に結合可能であり；
ここで、ポリペプチドの第二の対は第二標的分子に結合可能であり；
ここで、第一対及び第二対の各重鎖ポリペプチドは重鎖間ジスルフィド結合不能の変異ヒンジ領域を含む方法。
【請求項６】
免疫グロブリン重鎖及び軽鎖ポリペプチドの第一の対と、免疫グロブリン重鎖及び軽鎖ポリペプチドの第二の対を、第一対及び第二対のポリペプチドの多量体化を許容する条件下でインキュベートして実質的に均一な抗体の集団を生成し、
ここで、ポリペプチドの第一の対は第一標的分子に結合可能であり；
ここで、ポリペプチドの第二の対は第二標的分子に結合可能であり；
ここで、第一重鎖ポリペプチドのＦｃポリペプチドと第二重鎖ポリペプチドのＦｃポリペプチドは界面で合致し、第二Ｆｃポリペプチドの界面は、第一Ｆｃポリペプチドの界面のキャビティに位置せしめることが可能な隆起を含む方法。
【請求項７】
第一対及び第二対の各重鎖ポリペプチドが、重鎖間ジスルフィド結合不能の変異ヒンジ領域を含む請求項１から６の何れか一項に記載の方法。
【請求項８】
免疫グロブリン重鎖及び軽鎖ポリペプチドの第一対及び第二対が、別個の発現ユニットから得られる請求項１から６の何れか一項に記載の方法。
【請求項９】
発現ユニットが細胞である請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
発現ユニットが細胞培養物である請求項８に記載の方法。
【請求項１１】
発現ユニットがインビトロタンパク質発現サンプル／系である請求項８に記載の方法。
【請求項１２】
上記重鎖間ジスルフィド結合がＦｃ領域間にある請求項１から６の何れか一項に記載の方法。
【請求項１３】
上記変異重鎖ヒンジ領域が、ジスルフィド結合を形成可能なシステイン残基を欠く請求項１から６の何れか一項に記載の方法。
【請求項１４】
上記ジスルフィド結合が分子間にある請求項１から６の何れか一項に記載の方法。
【請求項１５】
上記分子間ジスルフィド結合が２つの免疫グロブリン重鎖のシステイン間にある請求項１から６の何れか一項に記載の方法。
【請求項１６】
ジスルフィド結合を通常は形成可能なヒンジ領域システイン残基が欠失している請求項１から６の何れか一項に記載の方法。
【請求項１７】
ジスルフィド結合を通常は形成可能なヒンジ領域システイン残基が他のアミノ酸で置換されている請求項１から６の何れか一項に記載の方法。
【請求項１８】
上記システイン残基がセリンで置換されている請求項１から６の何れか一項に記載の方法。
【請求項１９】
上記抗体が重鎖定常ドメインと軽鎖定常ドメインを含む請求項１から６の何れか一項に記載の方法。
【請求項２０】
重鎖がヒトＣＨ２及び／又はＣＨ３ドメインの少なくとも一部を含む請求項１から６の何れか一項に記載の方法。
【請求項２１】
重鎖及び軽鎖ポリペプチドの一方又は両方の対がヒト化されている請求項１から６の何れか一項に記載の方法。
【請求項２２】
上記抗体がヒト化されている請求項１から６の何れか一項に記載の方法。
【請求項２３】
抗体が完全長抗体である請求項１から６の何れか一項に記載の方法。
【請求項２４】
上記完全長抗体が重鎖及び軽鎖を含む請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
重鎖及び軽鎖の一方又は両方の対がヒトである請求項１から６の何れか一項に記載の方法。
【請求項２６】
上記抗体がヒトである請求項１から６の何れか一項に記載の方法。
【請求項２７】
抗体が、ヒトＣＨ２及び／又はＣＨ３ドメインの少なくとも一部を含む抗体断片である請求項１から６の何れか一項に記載の方法。
【請求項２８】
上記抗体断片がＦｃ融合ポリペプチドである請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
抗体がＩｇＧ、ＩｇＡ及びＩｇＤからなる群から選択される請求項１から６の何れか一項に記載の方法。
【請求項３０】
抗体がＩｇＧである請求項１から６の何れか一項に記載の方法。
【請求項３１】
抗体がＩｇＧ１である請求項１から６の何れか一項に記載の方法。
【請求項３２】
抗体がＩｇＧ２である請求項１から６の何れか一項に記載の方法。
【請求項３３】
抗体が治療用抗体である請求項１から６の何れか一項に記載の方法。
【請求項３４】
抗体がアゴニスト抗体である請求項１から６の何れか一項に記載の方法。
【請求項３５】
抗体がアンタゴニスト抗体である請求項１から６の何れか一項に記載の方法。
【請求項３６】
抗体が診断用抗体である請求項１から６の何れか一項に記載の方法。
【請求項３７】
抗体が阻止抗体である請求項１から６の何れか一項に記載の方法。
【請求項３８】
抗体が中和抗体である請求項１から６の何れか一項に記載の方法。
【請求項３９】
抗体が腫瘍抗原に結合可能である請求項１から６の何れか一項に記載の方法。
【請求項４０】
腫瘍抗原が細胞表面分子ではない請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
腫瘍抗原がクラスター分類因子ではない請求項３９に記載の方法。
【請求項４２】
抗体がクラスター分類因子に結合可能である請求項１から６の何れか一項に記載の方法。
【請求項４３】
抗体が細胞生存調節因子に結合可能である請求項１から６の何れか一項に記載の方法。
【請求項４４】
抗体が細胞増殖調節因子に特異的に結合可能である請求項１から６の何れか一項に記載の方法。
【請求項４５】
抗体が組織発生又は分化に関連する分子に結合可能である請求項１から６の何れか一項に記載の方法。
【請求項４６】
抗体が細胞表面分子に結合可能である請求項１から６の何れか一項に記載の方法。
【請求項４７】
抗体がリンホカインに結合可能である請求項１から６の何れか一項に記載の方法。
【請求項４８】
第一対及び第二対の軽鎖が異なった可変ドメイン配列を含む請求項１から６の何れか一項に記載の方法。
【請求項４９】
第一重鎖ポリペプチドのＦｃポリペプチドと第二重鎖ポリペプチドのＦｃポリペプチドが界面で合致し、第二Ｆｃポリペプチドの界面が第一Ｆｃポリペプチドの界面のキャビティに位置させることが可能な隆起を含む請求項１から６の何れか一項に記載の方法。
【請求項５０】
ポリペプチドの少なくとも９０％が上記二重特異性抗体を生成する請求項４９に記載の方法。
【請求項５１】
第二Ｆｃポリペプチドが鋳型／元のポリペプチドから改変されて隆起をコードし、又は第一Ｆｃポリペプチドが鋳型／元のポリペプチドから改変されてキャビティをコードし、又はその双方をコードする請求項４９に記載の方法。
【請求項５２】
第二Ｆｃポリペプチドが鋳型／元のポリペプチドから改変されて隆起をコードし、かつ第一Ｆｃポリペプチドが鋳型／元のポリペプチドから改変されてキャビティをコードし、又はその双方をコードする請求項４９に記載の方法。
【請求項５３】
第一Ｆｃポリペプチドと第二Ｆｃポリペプチドが界面で合致し、ここで第二Ｆｃポリペプチドの界面が、第一Ｆｃポリペプチドのキャビティに位置させることが可能な隆起を含み、キャビティ又は隆起あるいは双方が、第一及び第二Ｆｃポリペプチドの界面中にそれぞれ導入されている請求項４９に記載の方法。
【請求項５４】
上記二重特異性抗体が二つの標的分子に特異的に結合可能である請求項１から６の何れか一項に記載の方法。
【請求項５５】
第一アームが第一標的分子に特異的に結合し、第二アームが第二標的分子に特異的に結合する請求項１から６の何れか一項に記載の方法。
【請求項５６】
第一宿主細胞と第二宿主細胞が別の細胞培養物中にある請求項１から６の何れか一項に記載の方法。
【請求項５７】
第一宿主細胞と第二宿主細胞が双方の宿主細胞を含む混合培養物中にある請求項１から６の何れか一項に記載の方法。
【請求項５８】
宿主細胞が原核生物である請求項１から６の何れか一項に記載の方法。
【請求項５９】
原核宿主細胞が大腸菌である請求項５８に記載の方法。
【請求項６０】
大腸菌が内因性プロテアーゼ活性を欠く株のものである請求項５９に記載の方法。
【請求項６１】
宿主細胞が真核生物である請求項１から６の何れか一項に記載の方法。
【請求項６２】
宿主細胞がＣＨＯである請求項６１に記載の方法。
【請求項６３】
ポリペプチドをコードする核酸が、ほぼ等しい強度の翻訳開始領域（ＴＩＲ）に作用可能に結合している請求項１から６の何れか一項に記載の方法。
【請求項６４】
アニーリング又は接触工程が、単離ポリペプチドの混合物を室温でインキュベートすることを含む請求項１から６の何れか一項に記載の方法。
【請求項６５】
アニーリング又は接触工程が、単離ポリペプチドの混合物を加熱することを含む請求項１から６の何れか一項に記載の方法。
【請求項６６】
混合物を少なくとも４０℃に加熱する請求項６５に記載の方法。
【請求項６７】
混合物を少なくとも５０℃に加熱する請求項６５に記載の方法。
【請求項６８】
混合物を約４０℃と６０℃の間に加熱する請求項６５に記載の方法。
【請求項６９】
混合物が５０℃である請求項６５に記載の方法。
【請求項７０】
アニーリング又は接触工程が、単離ポリペプチドの混合物を少なくとも２分間加熱することを含む請求項１から６の何れか一項に記載の方法。
【請求項７１】
加熱後に混合物を冷却する請求項６５に記載の方法。
【請求項７２】
アニーリング又は接触工程が、単離ポリペプチドの混合物を、約４から約１１の間（約４と約１１を含む）のｐＨでインキュベートすることを含む請求項１から６の何れか一項に記載の方法。
【請求項７３】
ｐＨが約５．５である請求項７２に記載の方法。
【請求項７４】
ｐＨが約７．５である請求項７２に記載の方法。
【請求項７５】
アニーリング又は接触工程が、単離ポリペプチドの混合物を、変性剤中でインキュベートすることを含む請求項１から６の何れか一項に記載の方法。
【請求項７６】
変性剤が尿素である請求項７５に記載の方法。
【請求項７７】
アニーリング又は接触工程が、第一及び第二重鎖ポリペプチド間に化学結合を含まない請求項１から６の何れか一項に記載の方法。
【請求項７８】
ポリペプチドの少なくとも７５％が、第一重鎖及び軽鎖対と第二重鎖及び軽鎖対を含む複合体中にある請求項１から６の何れか一項に記載の方法。
【請求項７９】
単離ポリペプチドの１０％以下が、抗体精製工程の前に、単量体又は二量体として存在している請求項１から６の何れか一項に記載の方法。
【請求項８０】
第一の対及び第二の対の軽鎖が異なった可変ドメイン配列を含む請求項１から６の何れか一項に記載の方法。
【請求項８１】
第一及び第二の重-軽鎖対はそれぞれ互いにジスルフィド結合した重鎖及び軽鎖を含んでなる請求項１から６の何れか一項に記載の方法。
【請求項８２】
第一の対及び第二の対のポリペプチドがアニール又は接触工程においてほぼ等モル量［比］で提供される請求項１から６の何れか一項に記載の方法。
【請求項８３】
第一の対と第二の対の間のｐＩ値の差が少なくとも０．５である請求項１から６の何れか一項に記載の方法。
【請求項８４】
請求項１から８３の何れか一項に記載の方法によって製造された二重特異性抗体。
【請求項８５】
第一の対の重鎖及び軽鎖ポリペプチドと第二の対の重鎖及び軽鎖ポリペプチドを含んでなり、軽鎖ポリペプチドが異なった可変ドメイン配列を含み、重鎖が重鎖間ジスルフィド結合不可の変異ヒンジ領域を含む二重特異性抗体。
【請求項８６】
請求項１から８５の何れか一項に記載の抗体をコードする単離された核酸。
【請求項８７】
請求項８６に記載の核酸を含んでなる宿主細胞。
【請求項８８】
各対の重鎖及び軽鎖ポリペプチドをコードする核酸が単一のベクター中に存在している請求項８７に記載の宿主細胞。
【請求項８９】
各対の重鎖及び軽鎖ポリペプチドをコードする核酸が別のベクター中に存在している請求項８７に記載の宿主細胞。
【請求項９０】
請求項１から８５の何れか一項に記載の二重特異性抗体を集合的にコードする一又は複数の組換え核酸を含んでなる組成物。
【請求項９１】
請求項１から８５の何れか一項に記載の二重特異性抗体と担体を含有してなる組成物。
【請求項９２】
免疫グロブリンの少なくとも８０％が請求項１から８５の何れか一項に記載の二重特異性抗体である免疫グロブリン群を含んでなる組成物。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【公表番号】特表２００８−５１１３３７（Ｐ２００８−５１１３３７Ａ）
【公表日】平成２０年４月１７日（２００８．４．１７）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００７−５３０３７３（Ｐ２００７−５３０３７３）
【出願日】平成１７年９月１日（２００５．９．１）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００５／０３１２２６
【国際公開番号】ＷＯ２００６／０２８９３６
【国際公開日】平成１８年３月１６日（２００６．３．１６）
【出願人】（５９６１６８３１７）ジェネンテック・インコーポレーテッド (372)
【氏名又は名称原語表記】ＧＥＮＥＮＴＥＣＨ，ＩＮＣ．
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２０年４月１７日（２００８．４．１７）
【国際特許分類】
【出願日】平成１７年９月１日（２００５．９．１）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００５／０３１２２６
【国際公開番号】ＷＯ２００６／０２８９３６
【国際公開日】平成１８年３月１６日（２００６．３．１６）
【出願人】（５９６１６８３１７）ジェネンテック・インコーポレーテッド (372)
【氏名又は名称原語表記】ＧＥＮＥＮＴＥＣＨ，ＩＮＣ．
【Ｆターム（参考）】
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