リン脂質を含む免疫原性組成物
本発明は微粒子およびエマルジョン組成物を含むリン脂質アジュバントを含有する免疫原性組成物である。本発明の１つの特徴によれば、水；生体分解性重合体、例えばポリ（α−ヒドロキシ酸）、ポリヒドロキシ酪酸、ポリカプロラクトン、ポリオルトエステル、ポリ無水物およびポリシアノアクリレートから選択される重合体を含む重合体微粒子；微粒子に吸着させた抗原；およびリン脂質化合物、例えば（ｉ）独立してホスフェート基およびホスホジエステル基から選択されるホスホリル基１つ以上；（ｉｉ）直鎖アルカン基複数、を含む合成リン脂質化合物、を含む免疫原性組成物が提供される。本発明の別の特徴によれば、水；代謝可能な油；乳化剤；抗原；およびリン脂質化合物、例えば上記したもののようなリン脂質化合物を含む免疫原性エマルジョン組成物が提供される。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願の言及）
本出願は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる２００２年１２月２７日出願の米国出願６０／４３６，９１９の優先権を主張する。本出願はまた参照によりその全体が本明細書に組み込まれる２００３年１０月２１日出願の米国出願６０／５１３，０７５の優先権を主張する。
【０００２】
（発明の分野）
本発明は一般的に医薬組成物に関する。特に本発明はリン脂質アジュバントを含む免疫原性組成物に関する。
【背景技術】
【０００３】
（背景）
組み換えＤＮＡ技術により創生されたサブユニットワクチンの出現は安全で効果的なアジュバント含有組成物の必要性を高めている。サブユニットは安全性および製造費用の点で伝統的な生ワクチンおよび非生ワクチンよりも顕著に優れた利点を与える一方で、一般的には免疫家員意対して単離されたポリペプチドまたは単離されたポリペプチドの混合物を与えるものであり、これは例えば全ウィルス、細菌等と比較して限定された免疫原性を有するものである。その結果、これらのワクチンは一般的には顕著な免疫刺激能力を有するアジュバントから利益を被っており、これにより疾患治療における十分な能力に達することができる。
【０００４】
一方で伝統的な生ワクチンは通常はアジュバントを必要としない。さらにまた、非生ワクチンは一般的にはサブユニットワクチンより免疫原性が高く、通常はアジュバントを必要としない。しかしなお、これらのワクチンはサブユニットワクチンと同様、顕著な免疫刺激能力を有するアジュバントから利益を被ることができる。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【０００５】
（発明の要旨）
本発明は顕著な免疫刺激能力を有するアジュバントを含む免疫原性組成物、そして特にリン脂質アジュバントを含む組成物に関する。
【０００６】
本発明の第１の特徴によれば、（ａ）薬学的に受容可能な賦形剤；（ｂ）生体分解性重合体、例えばポリ（α−ヒドロキシ酸）、ポリヒドロキシ酪酸、ポリカプロラクトン、ポリオルトエステル、ポリ無水物およびポリシアノアクリレートから選択される重合体を含む重合体微粒子；（ｃ）微粒子に吸着させた抗原；および（ｄ）リン脂質化合物、例えば（ｉ）典型的には独立して下記ホスフェート基：
【０００７】
【化２３】
および下記ホスホジエステル基：
【０００８】
【化２４】
から選択されるホスホリル基１つ以上（ここでホスホリル基は基Ｐ＝Ｏにより表される）；および（ｉｉ）下記直鎖アルカン基：
【０００９】
【化２５】
［式中、ｎは独立して６〜２０の範囲の整数、即ち６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０である］複数（典型的には３〜１０、より典型的には４〜８、さらに典型的には６つ）を含む合成リン脂質化合物、および適宜、その薬学的に受容可能な塩、を含む免疫原性組成物が提供される。
【００１０】
多くの実施形態において、微粒子はポリ（α−ヒドロキシ酸）、例えばポリ（ラクチド）（「ＰＬＡ」）、ラクチドトグリコリドの共重合体、例えばポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド−ｃｏ−グリコリド）（「ＰＬＧ」）またはＤ，Ｌ−ラクチドとカプロラクトンの共重合体から形成される。ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド−ｃｏ−グリコリド）重合体は／グリコリドのモル比が例えば２０：８０〜８０：２０、２５：７５〜７５：２５、４０：６０〜６０：４０、または５５：４５〜４５：５５のラクチド／グリコリドのモル比を有し、そして、例えば５，０００〜２００，０００ダルトン、１０，０００〜１００，０００ダルトン、２０，０００〜７０，０００ダルトンまたは４０，０００〜５０，０００ダルトンの分子量を有するものが包含される。
【００１１】
抗原、リン脂質および種々の任意の補充的成分は独立して、例えば、（ａ）微粒子の表面に吸着、（ｂ）微粒子内部に捕獲、（ｃ）溶液中、（ｄ）微粒子の別の集団に吸着、および／または（ｅ）微粒子の別の集団内に捕獲してよい。
【００１２】
本発明の第２の特徴によれば、（ａ）水；（ｂ）代謝可能な油；（ｃ）乳化剤；（ｄ）抗原；および（ｅ）上記したもののようなリン脂質化合物を含み、ここで組成物は油相および水相を有する水中油のエマルジョンであり、そして、ここで油相は実質的に全てが直径１ミクロン未満である油滴の形態である免疫原性組成物が提供される。
【００１３】
抗原、リン脂質分子および種々の補充的成分は独立して、エマルジョンの油相（油滴の別の集団も含む）内に溶解または分散、エマルジョンの水相内に溶解または分散、および／またはエマルジョンの水相および油相の間の界面に配置してよい。
【００１４】
代謝可能な油は典型的には動物油（魚油を含む）および植物油、より典型的には炭素原子２０〜４０個を有する不飽和の炭化水素、より典型低的には炭素原子２０〜４０個を有する分枝鎖の多不飽和の炭化水素、例えばテルペノイド、例えばスクワランから選択される。
【００１５】
乳化剤は典型的にはノニオン系界面活性剤少なくとも１つ、より典型的には脂肪酸エステルおよび／またはポリオキシエチレン部分を含む脂肪酸エステル、例えばソルビタン誘導体、例えば、ソルビタン脂肪酸モノエステル、ソルビタン脂肪酸セスキエステル、ソルビタン脂肪酸トリエステル、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸モノエステルおよびポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸トリエステルを含む。より典型的な例においては、乳化剤はポリオキシエチレンソルビタンモノオレエートおよびソルビタントリオレエートを含む。乳化剤が２種以上の界面活性剤を含む場合は、１つの界面活性剤は例えば１〜９のＨＬＢ価を有することができ、他方の界面活性剤は１０〜２０のＨＬＢ価を有することができる。
【００１６】
医薬品類、ホルモン、酵素、転写または翻訳のメディエーター、代謝経路中間体、免疫モジュレーター、付加的な免疫アジュバントおよびこれらの組み合わせを含む補充的成分は本発明の種々の組成物に含有させることができる。
【００１７】
抗原は例えばポリペプチド含有抗原またはポリヌクレオチド含有抗原であることができる。ポリヌクレオチド含有抗原の例は、（ａ）ポリペプチド含有抗原を直接コードする核酸配列（例えばｍＲＮＡ分子）および（ｂ）ポリペプチド含有抗原を間接的にコードするベクターコンストラクト、例えばポリペプチド含有抗原をコードする異種核酸配列を発現するコンストラクト（ＤＮＡベクターコンストラクトおよびＲＮＡベクターコンストラクト）を包含する。
【００１８】
ポリペプチド含有抗原は例えば腫瘍抗原および病原性生物、例えばウィルス、真菌および寄生生物に由来する抗原であることができる。即ち、一部の実施形態においては、ポリペプチド含有抗原は例えばＡ型肝炎ウィルス（ＨＡＶ）、Ｂ型肝炎ウィルス（ＨＢＶ）、Ｃ型肝炎ウィルス（ＨＣＶ）、単純疱疹ウィルス（ＨＳＶ）、ヒト免疫不全ウィルス（ＨＩＶ）、サイトメガロウィルス（ＣＭＶ）、インフルエンザウィルス（例えばＡ型インフルエンザウィルス）および狂犬病ウィルス由来である。別の実施形態においては、ポリペプチド含有抗原は細菌、例えばコレラ、ジフテリア、破傷風、ストレプトコッカス（例えばストレプトコッカスＡおよびＢ）、百日咳、髄膜炎菌（例えばＡ、Ｂ、Ｃ、Ｗ、Ｙ型髄膜炎）、淋菌、ヘリコバクター・ピロリおよびインフルエンザ菌（例えばヘモフィルスインフルエンザタイプＢ菌）由来である。さらに別の実施形態においては、ポリペプチド含有抗原は寄生生物、例えばマラリア寄生生物由来である。
【００１９】
本発明の他の実施形態は本明細書に記載した免疫原性組成物のいずれかを宿主動物に投与することを含む宿主動物への抗原の送達方法に関する。宿主動物は好ましくは脊椎動物、より好ましくは哺乳動物、さらに好ましくはヒトである。
【００２０】
本発明はさらに体液性および／または細胞性免疫応答を誘導するために効果的な量の本明細書に記載の免疫原性組成物のいずれかを動物に投与することを含む、宿主動物における宿主動物内部の体液性免疫応答および／または細胞性免疫応答、例えばＴｈ１免疫応答またはＣＴＬ応答、またはリンパ増殖またはサイトカイン生産を刺激する方法に関する。
【００２１】
別の実施形態においては、本発明は本明細書に記載した免疫原性組成物の何れかの治療有効量を宿主動物に投与することを含む免疫化の方法に関する。
【００２２】
本発明はさらに保護応答を誘導するのに有効な量の本明細書に記載の免疫原性組成物のいずれかを宿主動物に投与することを含む、例えば腫瘍またはウィルス、細菌または寄生生物の感染に対して動物を免疫化する方法に関する。
【００２３】
本発明の免疫原性組成物の送達は何れかの知られた方法、例えば直接の注射、例えば皮下、腹腔内、静脈内または筋肉内）により実施してよい。
【００２４】
従って、本発明の一部の実施形態によれば、例えば、ウィルス、真菌、マイコプラズマ、細菌または原虫の感染に対して、並びに、腫瘍に対して、宿主動物を予防的および／または治療的に免疫化することを含む治療のための組成物および方法が提供される。本発明の方法は宿主、好ましくはヒトに対し、予防的および／または治療的な免疫化をもたらすために有用である。本発明の方法はまた生物医学的な研究用とを含むヒト以外の動物に対しても実施できる。
【００２５】
本発明の他の実施形態は上記組成物を製造するための方法に関する。例えば、上記した重合体微粒子は下記工程、即ち（ａ）水、有機溶媒、生体分解性重合体およびアニオン、カチオン、ノニオンまたは両性イオン系の界面活性剤を含む水中油中水エマルジョンを形成すること；および（ｂ）エマルジョンから有機溶媒を除去して重合体微粒子を形成することを含む方法により製造できる。
【００２６】
別の実施例として、上記エマルジョンは下記工程、即ち（ａ）有機溶媒、水、代謝可能な油および乳化剤を含む混合物を準備すること；および（ｂ）この混合物を、油相が実質的に全てが直径１ミクロン未満である液滴の形態である油中水エマルジョンを生成するために十分な剪断応力に付すこと、を含む方法により製造できる。
【００２７】
本発明の免疫原性組成物の１つの特定の利点は脊椎動物対象における免疫応答を発生させる能力である。従来の抗体応答に加えて、本明細書に記載した組成物は例えば、抗原をさらに認識できるようにする細胞溶解性Ｔ細胞（「ＣＴＬ」）の生産を刺激する目的の抗原へのインビボの細胞性免疫応答が確立できるようにクラスＩＭＨＣ分子との発現抗原の会合をもたらすことができる。さらにまた、ヘルパーＴ細胞による抗原特異的応答も起こる場合がある、従って本発明の方法は種々の抗原に対する細胞および／または体液性の免疫応答を起こすために使用できる。特定の試料として、ウィルス病原体から誘導した抗原は抗体、Ｔ細胞ヘルパーエピトープおよびＴ細胞毒性エピトープを誘導できる。このような抗原にはヒトおよび動物のウィルスによりコードされるものが包含され、そして構造または非構造の蛋白のいずれかに相当することができる。
【００２８】
本発明の上記および他の実施形態、特徴および利点は本明細書の開示を参照すれば当業者が容易に知りえるものである。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２９】
（発明の詳細な説明）
本発明の実施は、特段の記載が無い限り、当業者が知る従来の化学、重合体化学、生化学、分子生物学、免疫学および薬学を使用する。このような技術は文献に詳細に説明されている。例えばＲｅｍｉｎｇｔｏｎｓ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１８ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｅａｓｔｏｎ，Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ：Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ，１９９０）；Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ（Ｓ．Ｃｏｌｏｗｉｃｋ ａｎｄ Ｎ．Ｋａｐｌａｎ，ｅｄｓ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．）；Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌｓ．Ｉ−ＩＶ（Ｄ．Ｍ．Ｗｅｉｒ ａｎｄ Ｃ．Ｃ．Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ，ｅｄｓ．，１９８６，Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ）；Ｓａｍｂｒｏｏｋ，ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（２ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，１９８９）；Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｓｕｒｆａｃｅ ａｎｄ Ｃｏｌｌｏｉｄａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（Ｂｉｒｄｉ，Ｋ．Ｓ．，ｅｄ，ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，１９９７）ａｎｄ Ｓｅｙｍｏｕｒ／Ｃａｒｒａｈｅｒ’ｓ Ｐｏｌｙｍｅｒ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（４ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ， Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ Ｉｎｃ．，１９９６）を参照できる。
【００３０】
上記または後述の部分を含めて本明細書および請求項において使用する限り、内容を特に明示しない限り呼称には複数のものが意図される。即ち、「微粒子」という用語は微粒子１個以上を指す。
【００３１】
特段の記載が無い限り、本明細書に記載する全てのパーセントおよび比は重量に基づくものとする。
【００３２】
（Ａ．定義）
本発明を説明するに際し、以下の用語を用い、そして以下に記載するとおり定義づけられるものとする。
【００３３】
本明細書においては、「微粒子」という用語は直径約１０ｎｍ〜約１５０μｍ、より典型的には直径約２００ｎｍ〜約３０μｍ、そして、より典型的には直径約５００ｎｍ〜約１０〜２０μｍの粒子を指す。本発明の微粒子はある状況下においては凝集してより大きい塊となる場合がある。特定の例として、吸着されたＤＮＡを有する本発明の微粒子は、例えば凍結乾燥前は直径約０．５〜２μｍであるが、同じ粒子が、例えば凍結乾燥後には直径約５〜１５μｍを有する凝集塊となる。微粒子は一般的に針および毛管を閉塞させること無く非経腸または粘膜への投与を可能とする直径のものである。微粒子の大きさは当該分野でよく知られた方法、例えば光量子相関スペクトル分析、レーザー回折計および／または走査電子顕微鏡観察により容易に測定される。「粒子」という用語もまた、本明細書においては、微粒子を指すために使用される場合がある。
【００３４】
本明細書において使用するための重合体微粒子は典型的には滅菌可能であり、実質的に非毒性で生体分解性の物質から形成される。このような物質は生体分解性重合体、例えばポリ（α−ヒドロキシ酸）、ポリヒドロキシ酪酸、ポリカプロラクトン、ポリオルトエステル、ポリ無水物およびポリシアノアクリレート（例えばポリアルキルシアノアクリレート即ちＰＡＣＡ）を包含する。より典型的には、本発明において使用する微粒子はポリ（α−ヒドロキシ酸）、例えばポリ（ラクチド）（「ＰＬＡ」）、またはラクチドトグリコリドの共重合体、例えばポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド−ｃｏ−グリコリド）（「ＰＬＧ」）またはＤ，Ｌ−ラクチドとカプロラクトンの共重合体から誘導される重合体微粒子である。重合体微粒子は、種々の分子量、そしてＰＬＧのような共重合体の場合は、種々の単量体比（例えばラクチド：グリコリド）を有する種々の重合体原料の何れかから誘導してよく、その選択は部分的には同時投与される物質種に応じて広範に変動する。これらのパラメーターは後に詳述する。
【００３５】
本明細書においては、「界面活性剤」という用語は洗剤、分散剤、懸濁剤およびエマルジョン安定化剤を包含するものとする。本発明の重合体微粒子組成物において使用するためのカチオン系界面活性剤は、例えばセチルトリメチルアンモニウムブロミド即ち「ＣＴＡＢ」（例えばセトリミド）、塩化ベンザルコニウム、ＤＤＡ（ジメチルジオクトデシルアンモニウムブロミド）、ＤＯＴＡＰ（ジオレオイル−３−トリメチルアンモニウム−プロパン）等を包含する。アニオン系界面活性剤は例えばＳＤＳ（ドデシル硫酸ナトリウム）、ＳＬＳ（ラウリル硫酸ナトリウム）、ＤＳＳ（ジスルホスクシネート）、硫酸化脂肪アルコール等を包含する。ノニオン系界面活性剤は例えばＰＶＡ、ポビドン（ポリビニルピロリドン即ちＰＶＰとしても知られている）、ソルビタンエステル、ポリソルベート、ポリオキシエチル化グリコールモノエーテル、ポリオキシエチル化アルキルフェノール、ポロキサマー等を包含する。
【００３６】
「サブミクロンエマルジョン」という用語は、本明細書においては、実質的に全てが大きさ１０００ｎｍまで、例えば１０ｎｍ〜１０００ｎｍである油滴を含む水中油エマルジョンを指すものとする。
【００３７】
「医薬品」という用語は生物学的に活性な化合物、例えば抗体、抗ウィルス剤、成長因子、ホルモン、抗原等を指す。
【００３８】
「アジュバント」という用語は医薬品の作用を支援または改変する何れかの物質、例えば抗原への免疫応答を増強または多様化させる免疫学的アジュバントを指す。従って、免疫学的アジュバントは抗原への免疫応答を強化することができる化合物である。免疫学的アジュバントは体液性および／または細胞性免疫を強化できる。
【００３９】
「ポリヌクレオチド」とは核酸重合体である。ポリヌクレオチドは５、６、７または８ヌクレオチド程度の少量のみ含むことができる。ポリヌクレオチドは２本鎖および１本鎖の配列の両方を包含し、そして、例えばウィルス由来ｃＤＮＡ、原核生物または真核生物ｍＲＮＡ、ウィルス由来のゲノムＲＮＡおよびＤＮＡ配列（例えばＲＮＡおよびＤＮＡウィルスおよびレトロウィルス）または原核生物ＤＮＡおよび合成ＤＮＡ配列を指す。用語はまたＤＮＡおよびＲＮＡの既知の塩基類縁体のいずれかを含む配列も含む。用語はさらに、核酸分子が抗原蛋白をコードしているネイティブの配列への修飾、例えば欠失、付加および置換（一般的には保存的な性質）を包含する。これらの修飾は部位指向性突然変異誘発を介する場合のように意図的であってよく、または抗原を生産する宿主の突然変異を介する場合のように偶然であってよい。
【００４０】
本明細書においては、「核酸」という表現はＤＮＡ、ＲＮＡまたはそれらから形成されたキメラを指す。
【００４１】
「ポリヌクレオチド含有物質種」とは少なくともその一部がポリヌクレオチドである分子である。例としてはＲＮＡベクターコンストラクト、ＤＮＡベクターコンストラクト等が包含される。
【００４２】
「ポリペプチド」および「蛋白」という用語はアミノ酸残留物の重合体を指し、生成物の最小長さに限定されない。即ち、ペプチド、オリゴペプチド、二量体、多量体等は定義に包含される。完全長蛋白およびそのフラグメントが定義に包含される。用語はまた、例えば、蛋白が投与される対象に対して免疫応答を誘起するか、治療効果を有する能力を蛋白が温存しているようなネイティブの配列への修飾、例えば欠失、付加および置換（一般的には保存的な性質）を包含する。
【００４３】
「ポリペプチド含有物質種」とは、その少なくとも一部がポリペプチドである分子である。例はポリペプチド、蛋白、例えば糖蛋白、担体蛋白にコンジュゲートした糖抗原等を包含する。
【００４４】
「抗原」とは抗原が提示された場合に細胞抗原特異的免疫応答または体液性抗体応答を示すように宿主の免疫系を刺激することのできるエピトープ１つ以上を含有する分子を意味する。抗原はそれ自体で、または別の分子と組み合わせて提示された場合に、細胞および／または体液性免疫応答を誘起できてもよい。
【００４５】
「エピトープ」とはその免疫学的特異性を決定する抗原分子または抗原複合体の部分である。エピトープは本発明における抗原の定義に包含される。通常はエピトープは天然の抗原内のポリペプチドまたは多糖類である。人工抗原においては、アルサニリン酸誘導体のような低分子量の物質である場合がある。エピトープは例えば相同の抗体またはＴリンパ球とインビボまたはインビトロで特異的に反応する。代替記述法は抗原決定基、抗原構造基およびハプテン基である。
【００４６】
典型的には、エピトープは約５〜１５アミノ酸を含む。ある蛋白のエピトープは当該分野で知られた多くのエピトープマッピング技術のいずれかを用いて発見できる。例えばＥｐｉｔｏｐｅ Ｍａｐｐｉｎｇ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ， Ｖｏｌ．６６（Ｇｌｅｎｎ Ｅ．Ｍｏｒｒｉｓ，Ｅｄ．，１９９６） Ｈｕｍａｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，Ｎｅｗ Ｊｅｒｓｅｙを参照できる。例えば、線状エピトープは例えば、蛋白分子の部分に相当するペプチドを固体支持体上で多数同時に合成し、そして、ペプチドがなお支持体に結合している間に抗体にペプチドを反応させることにより決定してよい。このような技術は当該分野で知られており、例えば米国特許４，７０８，８７１；Ｇｅｙｓｅｎ ｅｔ ａｌ．，（１９８４），Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８１：３９９８−４００２；Ｇｅｙｓｅｎ ｅｔ ａｌ．（１９８６）Ｍｏｌｅｃ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２３：７０９−７１５を参照できる。同様に、コンホーメーションエピトープは例えばＸ線結晶分析および二次元核磁気共鳴によりアミノ酸の空間的コンホーメーションを測定することにより容易に発見される。上出のＥｐｉｔｏｐｅ Ｍａｐｐｉｎｇ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓを参照できる。
【００４７】
本明細書においては、「抗原」という用語は、サブユニット抗原、即ち、天然において抗原が会合している全生物体とは分離され個別化されている抗原、並びに、非生存化、減衰または不活性化された細菌、ウィルス、寄生生物または他の病原体または腫瘍細胞を指す。抗体、例えば抗イディオタイプの抗体またはそのフラグメントおよび抗原または抗原決定基を模倣できる合成ペプチドミモトープもまた本明細書において使用する抗原の定義に含まれる。
【００４８】
同様に、免疫蛋白または抗原決定基を、例えば核酸免疫化適用の場合のように、インビボで発現するオリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドもまた本明細書における抗原の定義に包含される。
【００４９】
さらにまた、本発明の目的のためには「抗原」とは免疫学的応答を誘起する能力を蛋白が温存している限り、ネイティブの配列への修飾、例えば欠失、付加および置換（一般的には保存的な性質）のような修飾を含む蛋白を指す。これらの修飾は部位指向性突然変異誘発を介する場合のように意図的であってよく、または抗原を生産する宿主の突然変異を介する場合のように偶然であってよい。
【００５０】
抗原組成物に対する「免疫学的応答」とは目的の組成物中に存在する分子に対する体液性および／または細胞性免疫応答の対象内における発生を意味する。本発明の目的のためには「体液性免疫応答」とは抗体分子により媒介される免疫応答を指し、「細胞性免疫」とはＴリンパ球および／または他の白血球により媒介されるものである。細胞性免疫の１つの重要な特徴には細胞溶解性Ｔ細胞（「ＣＴＬ」）による抗原特異的応答が関連する。ＣＴＬは主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）によりコードされる蛋白に会合して存在し、細胞表面上で発現されるペプチド抗原に対する特異性を有する。ＣＴＬは細胞内微生物の細胞内破壊またはそのような微生物に感染した細胞の溶解を誘導し、促進する。細胞性免疫別の特徴にはヘルパーＴ細胞による抗原特異的応答が関連している。ヘルパーＴ細胞は機能の促進に寄与し、そしてその表面にＭＨＣ分子が会合しているペプチド抗原を示す細胞に対した非特異的エフェクター細胞の活性に着目している。「細胞性免疫応答」とはまた、サイトカイン、ケモカインおよび活性化Ｔ細胞および／または他の白血球により生産される他のこのような分子、例えばＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞由来であるもの生産を指す。
【００５１】
細胞性免疫応答を誘起する免疫原性組成物またはワクチンのような組成物は細胞表面におけるＭＨＣ分子に会合した抗原の提示により脊椎動物対象を感作する働きを有してよい。細胞媒介免疫応答は、その表面に抗原を提示する細胞を指向するかその近傍にある。さらに、抗原特異的Ｔリンパ球は免疫化された宿主の生来の保護を可能とするように作成することができる。
【００５２】
細胞媒介免疫学的応答を刺激する特定の抗原または組成物の能力は、多くの試験法、例えばリンパ増殖（リンパ球活性化）試験、ＣＴＬ細胞毒性細胞試験により、感作した対象における抗原に特異的なＴリンパ球を試験することにより、または抗原による再刺激に応答したＴ細胞によるサイトカイン生産の測定により調べてよい。このような試験法は当該分野で知られている。例えばＥｒｉｃｋｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（１９９３）１５１：４１８９−４１９９；Ｄｏｅ ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（１９９４）２４：２３６９−２３７６；および以下に記載する実施例を参照できる。
【００５３】
目的とする抗原はまた抗体媒介免疫応答を誘起してもよい。従って、免疫学的応答は以下の作用、即ち：Ｂ細胞による抗体の生産；および／または目的の組成物中に存在する抗原に特異的に指向されたサプレッサーＴ細胞および／またはγδＴ細胞の活性化の１つ以上を含んでよい。これらの応答は感染性の中和のために寄与および／または抗体補完性または抗体依存性の細胞毒性（ＡＤＣＣ）を媒介し、これにより、免疫化された宿主を保護する。このような応答は当該分野でよく知られた標準的な免疫試験法および中和試験法、例えばラジオイムノアッセイおよびＥＬＩＳＡを用いて測定できる。
【００５４】
本発明の免疫原性組成物は、異なる組成物中の抗原の等しい量により誘起される免疫応答よりも免疫応答を誘起する大きい能力を保有する場合に「増強された免疫原性」を示す。即ち組成物は例えば、組成物がより大きい免疫応答を発生させるという理由のために、または投与相手の対象における免疫応答を達成するためにより小用量の抗原が必要であるという理由のために、「増強された免疫原性」を示すのである。このような増強された免疫原性は、例えば本発明の組成物および抗原対照を動物に投与し、二者の試験結果を比較することにより測定できる。
【００５５】
本明細書においては、「治療」（その変形型、例えば「投与する」または「治療された」を含む）とは、（ｉ）問題となる病原体または障害（例えば癌または伝統的なワクチンの場合のような病原性感染症）の予防、（ｉｉ）症状の減少または排除、および（ｉｉｉ）問題となる病原体または障害の実質的または完全な排除のいずれかを指す。治療は予防的（問題となる病原体または障害の到達より前）または治療的（到達後）に行ってよい。
【００５６】
本発明の免疫原性組成物の「有効量」または「医薬品有効量」という用語は本明細書においては、目的の状態を治療または診断するための免疫原性組成物の十分な量を指す。必要となる厳密な量は例えば対象の種、齢および全身状態；治療すべき状態の重症度；目的となる特定の抗原；免疫学的応答の場合は抗体を合成する対象の免疫系の能力および所望の保護の程度；および投与様式などの要因に応じて対象ごとに異なっている。何れの個体の症例における適切な「有効」量も当業者が決定してよい。即ち「治療有効量」は典型的には日常的試行により決定できる比較的広範な範囲にある。
【００５７】
「脊椎動物対象」または「脊椎動物」とは、脊椎動物亜門の何れかのメンバー、例えば哺乳動物、例えばウシ、ヒツジ、ブタ、ヤギ、ウマおよびヒト；家畜動物、例えばイヌおよびネコ；および鳥類、例えば家禽類、野生および狩猟用の鳥類、例えば雄鶏および雌鶏、例えばニワトリ、シチメンチョウおよび他のキジ科の鳥類を包含する。用語は特定の齢を示すものではない。即ち、成熟および新生仔の動物が包含される。
【００５８】
「薬学的に受容可能な」または「薬理学的に許容される」とは、生物学的または他の面において望ましくないものではない物質を指し、即ち、物質は、個体において過剰に望ましくない生物学的作用を誘発したり、または含有される組成物の成分の何れとも過剰に不都合な態様で相互作用をすることなく、個体に投与してよい。
【００５９】
「賦形剤」という用語は採集剤型中に存在してよい何れかの本質的に補助的な物質を指す。例えば、「賦形剤」という用語はベヒクル、バインダー、錠剤崩壊剤、充填剤（希釈剤）、潤滑剤、滑剤（流動増強剤）、圧縮補助剤、着色料、甘味料、保存料、懸濁／分散剤、膜形成剤／コーティング、フレーバーおよび印刷用インクを包含する。
【００６０】
「生理学的ｐＨ」または「生理学的範囲のｐＨ」とは、約７．２〜８．０の範囲、より典型的に歯約７．２〜７．６の範囲のｐＨを意味する。
【００６１】
本明細書においては「ベクターコンストラクト」という表現は一般的には目的の核酸配列または遺伝子の発現を検出できる何れかの組み立て物を指す。ベクターコンストラクトは典型的には転写プロモーター／エンハンサーまたは遺伝子座決定エレメント、または他の手段、例えばオルタナティブスプライシング、各ＲＮＡ移出、メッセンジャーの転写後修飾または蛋白の転写後の修飾により遺伝子発現を制御する他のエレメントを包含する。さらにまた、ベクターコンストラクトは典型的には転写されると目的の配列または遺伝子に作動可能に連結して転写開始配列として作用する配列を包含する。ベクターコンストラクトはまた、必要に応じて、ポリアデニル化を試行するシグナル、選択マーカー、並びに１つ以上の制限部位および翻訳終止配列を含んでよい。さらにまた、ベクターコンストラクトがレトロウィルス内に入れられる場合は、ベクターコンストラクトはパッケージングシグナル、長末端リピート（ＬＴＲ）および使用するレトロウィルスに対して適切なプラス鎖またはマイナス鎖のプライマーの結合部位（これらが既に存在していない場合）を含んでよい。
【００６２】
「ＤＮＡベクターコンストラクト」とは、目的の核酸配列または遺伝子の発現を指向することができるＤＮＡ分子を指す。
【００６３】
ＤＮＡベクターコンストラクトの１つの特定の型はプラスミドであり、これは宿主細胞内で自律複製可能な環状のエピソームＤＮＡ分子である。典型的にはプラスミドは別のＤＮＡセグメントをライゲーションできる環状２本鎖ＤＮＡループである。ｐＣＭＶが当該分野でよく知られた特定のプラスミドである。好ましいｐＣＭＶベクターはＣＭＶの即時型エンハンサー／プロモーターおよびウシ成長ホルモンターミネーターを含有するものである。これはＣｈａｐｍａｎ，Ｂ．Ｓ．，ｅｔ ａｌ．，１９９１，”Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｉｎｔｒｏｎ Ａ ｆｒｏｍ ｈｕｍａｎ ｃｙｔｏｍｅｇａｌｏｖｉｒｕｓ （Ｔｏｗｎｅ） ｉｍｍｅｄｉａｔｅ−ｅａｒｌｙ ｇｅｎｅ ｏｎ ｈｅｔｅｒｏｌｏｇｏｕｓ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｍａｍｍａｌｉａｎ ｃｅｌｌｓ”， Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１９：３９７９−８６に詳述されている。
【００６４】
他のＤＮＡベクターコンストラクトはＲＮＡウィルスに基づくものが知られている。これらのＤＮＡベクターコンストラクトは典型的には、真核細胞内で機能するプロモーター、それに対する転写産物がＲＮＡベクターコンストラクト（例えばアルファウィルスＲＮＡウィルスレプリコン）となるｃＤＮＡ配列の５’、および３’終止領域を含む。ＲＮＡベクターコンストラクトは好ましくは、目的の生成物をコードする選択された非相同の核酸配列による構造蛋白遺伝子の１つ以上の置き換えにより修飾されている、ピコナウィルス、トガウィルス、フラビウィルス、コロナウィルス、パラミキソウィルス、黄熱病ウィルスまたはアルファウィルス（例えばシンドビスウィルス、セムリキフォレストウィルス、ベネズエラウマ脳脊髄膜炎ウィルス、またはロス川ウィルス）を包含する。ＲＮＡベクターコンストラクトはＤＮＡ鋳型からのインビトロの転写により得ることができる。特定の例はシンドビスウィルス系プラスミド（ｐＳＩＮ）、例えば米国特許５，８１４，４８２および６，０１５，６８６並びに国際特許出願ＷＯ９７／３８０８７、ＷＯ９９／１８２２６および共通保有しているＷＯ０２／２６２０９記載のｐＳＩＮＣＰを包含する。このようなベクターの構築は一般的に米国特許５，８１４，４８２および６，０１５，６８６に記載されている。
【００６５】
ベクターコンストラクトの他の例はＲＮＡベクターコンストラクト（例えばアルファウィルスベクターコンストラクト）等を包含する。本明細書においては、「ＲＮＡベクターコンストラクト」、「ＲＮＡベクターレプリコン」および「レプリコン」とは典型的には標的細胞内におけるインビボのそれ自体の増殖または自己複製を指向することができるＲＮＡ分子を指す。ＲＮＡベクターコンストラクトは細胞へのＤＮＡの導入および転写が起こる核への輸送を必要とすることなく直接使用する。宿主細胞の原形質内への直接の送達のためにＲＮＡベクターを使用することにより、自律複製および非相同核酸配列の翻訳が効率的に起こる。
【００６６】
（Ｂ．一般的方法）
（１．リン脂質）
リン脂質化合物を本発明との関連において使用する。実施例には（ａ）１つ以上のホスホリル基（ホスホリル基はＰ＝Ｏ基により示される）、典型的には下記ホスフェート基：
【００６７】
【化２６】
および下記ホスホジエステル基：
【００６８】
【化２７】
から選択されるホスホリル基１つ以上（ここでホスホリル基は基Ｐ＝Ｏにより表される）；および（ｂ）下記直鎖アルカン基：
【００６９】
【化２８】
［式中、ｎは独立して６〜１８の範囲の整数、即ち６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７または１８である］複数（典型的には３〜１０、より典型的には４〜８、さらに典型的には６つ）を含む合成リン脂質化合物ならびに薬学的に受容可能なその塩を包含する。特定の実施形態においては、少なくとも３つ、そして他の実施形態においては少なくとも４つのアルカン基が独立してアルカノイル基、即ち、下記基：
【００７０】
【化２９】
と会合する。特定の実施形態においては、複数、そして特定の実施形態においては少なくとも２つ、３つまたは４つのアルカン基がアルカノイルオキシ基、即ち、下記基：
【００７１】
【化３０】
に相当し、これがさらに例えば、アルカノイルオキシ−アルコキシ基、例えば下記基：
【００７２】
【化３１】
またはアルカノイルオキシ−アルカノイル基、例えば、下記基：
【００７３】
【化３２】
に相当する。
【００７４】
特定の実施形態においては、リン脂質化合物は２つ、３つ、４つまたはそれ以上のジホスホリル基を含む。例えば、リン脂質化合物はジホスフェートリン脂質化合物、またはジホスホジエステルリン脂質化合物であることができる。
【００７５】
多くの実施形態において、リン脂質化合物はグルコサミン２糖類基、例えば下記基：
【００７６】
【化３３】
または単一のグルコサミン糖類基、例えば下記基：
【００７７】
【化３４】
でさえも含まない。別の場合において、リン脂質は全く糖基を含まない。
【００７８】
本発明において使用するためのリン脂質化合物のファミリーの１つの例は、下記式：
【００７９】
【化３５】
［式中、
Ｒ１は下記：
（ａ）Ｃ（Ｏ）；
（ｂ）Ｃ（Ｏ）Ｃ１−１４アルキル−Ｃ（Ｏ）、ここでＣ１−１４アルキルは、必要に応じてヒドロキシ、Ｃ１−５アルコキシ、Ｃ１−５アルキレンジオキシ、Ｃ１−５アルキルアミノまたはＣ１−５アルキル−アリールで置換されており、ここでＣ１−５アルキル−アリールのアリール部分は、必要に応じてＣ１−５アルコキシ、Ｃ１−５アルキルアミノ、Ｃ１−５アルコキシ−アミノ、Ｃ１−５アルキルアミノ−Ｃ１−５アルコキシ、ＯＣ１−５アルキルアミノ−Ｃ１−５アルコキシ、ＯＣ１−５アルキルアミノ−Ｃ（Ｏ）Ｃ１−５アルキルＣ（Ｏ）ＯＨ、ＯＣ１−５アルキルアミノ−Ｃ（Ｏ）Ｃ１−５アルキル−Ｃ（Ｏ）Ｃ１−５アルキルで置換されているもの；
（ｃ）必要に応じてヒドロキシまたはアルコキシで置換されているＣ２〜Ｃ１５の直鎖または分枝鎖のアルキル；および
（ｄ）Ｃ（Ｏ）Ｃ６−１２アリーレン−Ｃ（Ｏ）、ただし、アリーレンは、必要に応じてヒドロキシ、ハロゲン、ニトロまたはアミノにより置換されているもの；
よりなる群から選択され；
ａおよびｂは独立して０、１、２、３または４であり；
ｄ、ｄ’、ｄ’’、ｅ、ｅ’’は独立して１〜４の整数であり；
Ｘ１、Ｘ２、Ｙ１およびＹ２は独立して非存在、酸素、ＮＨおよびＮ（Ｃ（Ｏ）Ｃ１−４アルキル）およびＮ（Ｃ１−４アルキル）２よりなる群から選択され；
Ｗ１およびＷ２は独立してカルボニル、メチレン、スルホンおよびスルホキシドよりなる群から選択され；
Ｒ２およびＲ５は独立して下記：
（ａ）必要に応じてオキソ、ヒドロキシまたはアルコキシで置換されたＣ２〜Ｃ２０の直鎖または分枝鎖のアルキル；
（ｂ）必要に応じてオキソ、ヒドロキシまたはアルコキシで置換されたＣ２〜Ｃ２０の直鎖または分枝鎖のアルケニルまたはジアルケニル；
（ｃ）必要に応じてオキソ、ヒドロキシまたはアルコキシで置換されたＣ２〜Ｃ２０の直鎖または分枝鎖のアルコキシ；
（ｄ）アルキル基が、必要に応じてオキソ、ヒドロキシまたはアルコキシで置換されたＮＨＣ２〜Ｃ２０の直鎖または分枝鎖のアルキル；および
（ｅ）下記基：
【００８０】
【化３６】
｛式中、ＺはＯおよびＮＨよりなる群から選択され、そしてＭおよびＮは独立してＣ２〜Ｃ２０の直鎖または分枝鎖のアルキル、アルケニル、アルコキシ、アシルオキシ、アルキルアミノおよびアシルアミノよりなる群から選択される｝；
よりなる群から選択され；
Ｒ３およびＲ６は独立して、必要に応じてフルオロまたはオキソで置換されたＣ２〜Ｃ２０の直鎖または分枝鎖のアルキルまたはアルケニルよりなる群から選択され；
Ｒ４およびＲ７は独立してＣ（Ｏ）Ｃ２〜Ｃ２０の直鎖または分枝鎖のアルキルまたはアルケニル；Ｃ２〜Ｃ２０の直鎖または分枝鎖のアルキル；Ｃ２〜Ｃ２０の直鎖または分枝鎖のアルコキシ；Ｃ２〜Ｃ２０の直鎖または分枝鎖のアルケニルよりなる群から選択され、ここでアルキル、アルケニルまたはアルコキシ基は独立して、そして必要に応じて、ヒドロキシ、フルオロまたはＣ１〜Ｃ５アルコキシで置換されており；
Ｇ１、Ｇ２、Ｇ３およびＧ４は独立して酸素、メチレン、アミノ、チオール、ＮＨＣ（Ｏ）およびＮ（Ｃ（Ｏ）Ｃ１−４アルキル）よりなる群から選択されるか；またはＧ２Ｒ４またはＧ４Ｒ７は一緒になって水素原子またはヒドロキシルとなる］を有するリン脂質化合物、
または薬学的に受容可能なその塩のファミリーである。
【００８１】
１つの実施形態においては、Ｒ１はＣ（Ｏ）であり；ａ、ｂ、ｄ、ｄ’、ｄ’’、ｅ、ｅ’およびｅ’’は独立して１または２であり；Ｘ１、Ｘ２、Ｙ１およびＹ２はＮＨであり；Ｗ１およびＷ２はカルボニルであり；Ｒ２およびＲ５はオキソで置換されたＣ１０〜Ｃ２０の直鎖または分枝鎖のアルキルであり；Ｒ３およびＲ６はＣ５〜Ｃ１０の直鎖のアルキルであり；Ｒ４およびＲ７はＣ（Ｏ）Ｃ８−Ｃ１１直鎖のアルキルまたはアルケニルであり；そして、Ｇ１、Ｇ２、Ｇ３およびＧ４は酸素である。
【００８２】
本発明との関連において使用するための特定の化合物の例は、下記化合物：
【００８３】
【化３７】
である。
【００８４】
記載した化合物は（Ｒ，Ｒ，Ｒ，Ｒ）エナンチオマー型であるが、他のエナンチオマー型、例えば（Ｒ，Ｓ，Ｓ，Ｒ）型もまた望ましい。これらの化合物はＥｉｓａｉ Ｃｏ．Ｌｔｄ．，Ｔｏｋｙｏ，Ｊａｐａｎの合成化合物であり、そして、ＥＲ８０４０５７およびＥＲ８０４０５３と命名されている。それらは、Ｒ１がＣ（Ｏ）であり；ａおよびｂが２であり；ｄ、ｄ’、ｅおよびｅ’が１であり；ｄ’’およびｅ’’は２であり；Ｘ１、Ｘ２、Ｙ１およびＹ２はＮＨであり；Ｗ１およびＷ２はカルボニルであり；Ｒ２およびＲ５は２位においてオキソで置換されたＣ１３の直鎖または分枝鎖のアルキルであり；Ｒ３およびＲ６はＣ７の直鎖のアルキルであり；Ｒ４およびＲ７はＣ（Ｏ）Ｃ１１の直鎖のアルキルであり；そしてＧ１、Ｇ２、Ｇ３およびＧ４は酸素であるところのナトリウム塩型のリン脂質の上記ファミリーのメンバーである。本化合物は如何なる糖基も含まず；それは、それが２つのホスホジエステル基：
【００８５】
【化３８】
を有することから、２リン脂質化合物（ここではナトリウム塩型）である。この化合物はまた下記直鎖アルカン基：
【００８６】
【化３９】
［式中ｎは独立して６〜１０の整数である］６つを含む。アルカン基の４つは下記アルカノイル基：
【００８７】
【化４０】
［式中ｎは１０である］に相当する。これらのアルカノイル基の２つは下記アルカノイルオキシ基：
【００８８】
【化４１】
に相当し、これはさらに、下記アルカノイルオキシアルコキシ基：
【００８９】
【化４２】
に相当する。
【００９０】
上記化合物に関するその他の情報およびその製造法は例えばＥｉｓａｉ Ｃｏ．，Ｌｔｄへの米国特許６，２９０，９７３に記載されている。
【００９１】
（２．抗原）
本発明は病原体および腫瘍に関わる抗原を含む広範な種類の抗原に対する免疫応答を刺激するために使用できる。
【００９２】
ヘルペスウィルスファミリー由来の抗原、例えば単純疱疹ウィルス（ＨＳＶ）１型および２型から誘導された蛋白、例えばＨＳＶ−１およびＨＳＶ−２糖蛋白ｇＢ、ｇＤおよびｇＨ；水痘帯状疱疹ウィルス（ＶＺＶ）、エプスタイン−バーウィルス（ＥＢＶ）およびサイトメガロウィルス（ＣＭＶ）から誘導された抗原、例えばＣＭＶｇＢおよびｇＨ；および他のヒトヘルペスウィルス、例えばＨＨＶ６およびＨＨＶ７から誘導された抗原を本発明に関連して好都合に使用することができる。（例えばサイトメガロウィルスの蛋白コーディング含量の検討のためにはＣｈｅｅ ｅｔ ａｌ．，Ｃｙｔｏｍｅｇａｌｏｖｉｒｕｓｅｓ （Ｊ．Ｋ．ＭｃＤｏｕｇａｌｌ，ｅｄ．，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ １９９０）ｐｐ．１２５−１６９；種々のＨＳＶ−１コード蛋白の考察のためにはＭｃＧｅｏｃｈ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｇｅｎ．Ｖｉｒｏｌ．（１９８８）６９：１５３１−１５７４；ＨＳＶ−１およびＨＳＶ−２ｇＢおよびｇＤ蛋白およびこれらをコードする遺伝子の考察のためには米国特許５，１７１，５６８；ＥＢＶゲノムの蛋白コーディング配列の発見のためにはＢａｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ（１９８４）３１０：２０７−２１１；およびＶＺＶの検討のためにはＤａｖｉｄｓｏｎ ａｎｄ Ｓｃｏｔｔ，Ｊ．Ｇｅｎ．Ｖｉｒｏｌ．（１９８６）６７：１７５９−１８１６を参照できる）。
【００９３】
ウィルスの肝炎ファミリー、例えばＡ型肝炎ウィルス（ＨＡＶ）、Ｂ型肝炎ウィルス（ＨＢＶ）、Ｃ型肝炎ウィルス（ＨＣＶ）、デルタ肝炎ウィルス（ＨＤＶ）、Ｅ型肝炎ウィルス（ＨＥＶ）およびＧ型肝炎ウィルス（ＨＧＶ）由来の抗原もまた本明細書に記載した技術において好都合に使用できる。例えばＨＣＶのウイルスゲノム配列は配列を得るための方法と同様に知られている。例えば国際特許出願ＷＯ８９／０４６６９；ＷＯ９０／１１０８９；およびＷＯ９０／１４４３６を参照できる。ＨＣＶゲノムは幾つかのウィルス蛋白、例えばＥ１（Ｅとしても知られている）およびＥ２（Ｅ２／ＮＳＩとしても知られている）およびＮ末端ヌクレオカプシド蛋白（「コア」と称される）をコードしている（ＨＣＶ蛋白、例えばＥ１およびＥ２の考察のためにはＨｏｕｇｈｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ（１９９１）１４：３８１−３８８を参照できる）。これらの蛋白の各々、並びにその抗原フラグメントは本発明の組成物および方法において使用できる。
【００９４】
同様に、ＨＤＶ由来のδ−抗原に対する配列も知られており（例えば米国特許５，３７８，８１４参照）、そして、この抗原もまた本発明の組成物および方法において好都合に用いることができる。さらにまた、ＨＢＶから誘導された抗原、例えばコア抗原、表面抗原、ｓＡｇ並びにｐｒｅ−表面配列、ｐｒｅ−Ｓ１およびｐｒｅ−Ｓ２（以前はｐｒｅ−Ｓと称されている）並びにこれらの組み合わせ、例えばｓＡｇ／ｐｒｅ−Ｓ１、ｓＡｇ／ｐｒｅ−Ｓ２、ｓＡｇ／ｐｒｅ−Ｓ１／ｐｒｅ−Ｓ２およびｐｒｅ−Ｓ１／ｐｒｅ−Ｓ２も使用される。例えばＨＶＢこうぞの考察のためには”ＨＢＶ Ｖａｃｃｉｎｅｓ−ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｔｏ ｌｉｃｅｎｓｅ： ａ ｃａｓｅ ｓｔｕｄｙ”， Ｍａｃｋｅｔｔ， Ｍ． ａｎｄ Ｗｉｌｌｉａｍｓｏｎ，Ｊ，Ｄ．，Ｈｕｍａｎ Ｖａｃｃｉｎｅｓ ａｎｄ Ｖａｃｃｉｎａｔｉｏｎ，ｐｐ．１５９−１７６；参照によりその全体が本明細書に組み込まれる米国特許４，７２２，８４０、５，０９８，７０４、５，３２４，５１３；Ｂｅａｍｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．（１９９５）６９：６８３３−６８３８，Ｂｉｒｎｂａｕｍ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．（１９９０）６４：３３１９−３３３０；およびＺｈｏｕ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．（１９９１）６５：５４５７−５４６４を参照できる。
【００９５】
他のウィルスから誘導された抗原は本発明の組成物および方法において使用され、例えばピコナウィルス科（例えばポリオウィルス等）；カルシウイルス科；トガウィルス科（例えば風疹ウィルス、デングウイルス等）；フラビウィルス科；コロナウィルス科；レオウィルス科；ビルナウィルス科；ラボドウィルス科（例えば狂犬病ウィルス等）；フィロウィルス科；パラミクソウィルス科（例えばおたふくかぜウィルス、はしかウィルス、呼吸器シンシチウムウィルス等）；オルトミクソウィルス科（例えばＡ、ＢおよびＣ型インフルエンザウィルス等）；ブンヤウィルス科；アレナウィルス科；レトロウィルス科（例えばＨＴＬＶ−Ｉ；ＨＴＬＶ−ＩＩ；ＨＩＶ−１（ＨＴＬＶ−ＩＩＩ、ＬＡＶ、ＡＲＶ、ｈＴＬＲ等としても知られている））、例えば単離株ＨＩＶＩＩＩｂ、ＨＩＶＳＦ２、ＨＩＶＬＡＶ、ＨＩＶＬＡＩ、ＨＩＶＭＮ）；ＨＩＶ−１ＣＭ２３５、ＨＩＶ−１ＵＳ４；ＨＩＶ−２由来の抗原；サル免疫不全ウィルス（ＳＩＶ）等が挙げられる。さらにまた、抗原はヒト乳頭腫ウィルス（ＨＰＶ）およびダニ媒介脳炎ウィルスから誘導してもよい。例えばこれらおよび他のウィルスの説明についてはＶｉｒｏｌｏｇｙ，３ｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｗ．Ｋ．Ｊｏｋｌｉｋ ｅｄ．１９８８）；Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，２ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｂ．Ｎ．Ｆｉｅｌｄｓ ａｎｄ Ｄ．Ｍ．Ｋｎｉｐｅ，ｅｄｓ．１９９１）を参照できる。
【００９６】
より詳しくは、上記ＨＩＶ単離株、例えばＨＩＶの種々の遺伝子サブタイプのメンバーの何れかに由来するｇｐ１２０またはｇｐ１４０エンベロープ蛋白が知られており、報告されており（例えばＨＩＶ単離株の種々のエンベロープ配列の比較についてはＭｙｅｒｓ ｅｔ ａｌ．，Ｌｏｓ Ａｌａｍｏｓ Ｄａｔａｂａｓｅ，Ｌｏｓ Ａｌａｍｏｓ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｌｏｓ Ａｌａｍｏｓ，Ｎｅｗ Ｍｅｘｉｃｏ（１９９２）；Ｍｙｅｒｓ ｅｔ ａｌ．，Ｈｕｍａｎ Ｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓｅｓ ａｎｄ Ａｉｄｓ，１９９０，Ｌｏｓ Ａｌａｍｏｓ，Ｎｅｗ Ｍｅｘｉｃｏ：Ｌｏｓ Ａｌａｍｏｓ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ；Ｍｏｄｒｏｗ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．（１９８７）６１：５７０−５７８を参照できる）、そしてこれらの単離株の何れかから誘導した抗原を本発明の方法において使用する。さらにまた、本発明は種々のＨＩＶ単離株から誘導した他の免疫原性蛋白、例えば種々のエンベロープ蛋白の何れか、例えばｇｐ１６０およびｇｐ４１、ｇａｇ抗原、例えばｐ２４ｇａｇおよびｐ５５ｇａｇ並びにｐｏｌおよびｔａｔ領域から誘導した蛋白にも等しく適用される。
【００９７】
インフルエンザウィルスは本発明が特に有用となるウィルスの別の例である。特にＡ型インフルエンザのエンベロープ糖蛋白ＨＡおよびＮＡが免疫応答を発生させる場合に特に有利である。Ａ型インフルエンザの多くのＨＡサブタイプが発見されている（Ｋａｗａｏｋａ ｅｔ ａｌ．，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ（１９９０）１７９：７５９−７６７；Ｗｅｂｓｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，”Ａｎｔｉｇｅｎｉｃ ｖａｒｉａｔｉｏｎ ａｍｏｎｇ ｔｙｐｅ Ａ ｉｎｆｌｕｅｎｚａ ｖｉｒｕｓｅｓ”，ｐ．１２７−１６８． Ｐ．Ｐａｌｅｓｅ ａｄｎ Ｄ．Ｗ．Ｋｉｎｇｓｂｕｒｙ（ｅｄ），Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ｏｆ ｉｎｆｌｕｅｎｚａ ｖｉｒｕｓｅｓ． Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）。即ち、上記単離株の何れかから誘導した蛋白もまた本明細書に記載した組成物および方法において使用できる。
【００９８】
本明細書に記載した組成物および方法は多くの細菌性抗原、例えばジフテリア、コレラ、結核、破傷風、百日咳、髄膜炎および他の病理学的状態を誘発する生物、例えばパラ百日咳菌、髄膜炎菌（Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｙ）、淋菌、ヘリコバクター・ピロリおよびインフルエンザ菌、ヘモフィルスインフルエンザタイプＢ菌（ＨＩＢ）、ヘリコバクター・ピロリおよびこれらの組み合わせから誘導されたものに対して使用される。Ｂ型髄膜炎菌由来の抗原の例は、出願人等の以下の特許出願、即ちＰＣＴ／ＵＳ９９／０９３４６；ＰＣＴＩＢ９８／０１６６５；およびＰＣＴＩＢ９９／００１０３に開示されている。寄生生物抗原の例は、マラリヤおよびライム病を誘発する生物から誘導されたものを包含する。
【００９９】
本発明と共に使用する別の抗原は本明細書に記載したものが全てではなく、例えば（ａ）髄膜炎菌の血清群Ｂに由来する蛋白抗原、例えば後に記載する参考文献１〜７に記載されているもの；（ｂ）髄膜炎菌の血清群Ｂに由来する外膜小疱（ＯＭＶ）調製物、例えば記載する参考文献８、９、１０、１１等に記載されているもの；（ｃ）髄膜炎菌の血清群Ａ、Ｃ、Ｗ１３５および／またはＹに由来する糖抗原、例えば血清群Ｃに由来する後記参考文献１２に開示されているオリゴ糖（参考文献１３も参照）；（ｄ）ストレプトコッカス・ニューモニア由来の糖抗原（例えば参考文献１４、１５、１６）；（ｅ）淋菌由来の抗原（例えば参考文献１、２、３）；（ｅ）クラミジア・ニューモニア由来の抗原（例えば参考文献１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３）；（ｆ）クラミジア・トラコーマチス由来の抗原（例えば参考文献２４）；（ｇ）Ａ型肝炎ウィルス由来の抗原、例えば不活性化ウィルス（例えば参考文献２５、２６）；（ｈ）Ｂ型肝炎ウィルス由来の抗原、例えば表面および／またはコア抗原（例えば参考文献２６、２７）；（ｉ）Ｃ型肝炎ウィルス由来の抗原（例えば参考文献２８）；（ｊ）百日咳菌由来の抗原、例えば百日咳菌由来の百日咳ホロトキシン（ＰＴ）およびフィラメント様ヘマグルチニン（ＦＨＡ）を、必要に応じてペルタクチンおよび／またはアグルチノゲン２および３と組み合わせたもの（例えば参考文献２９および３０）；（ｋ）ジフテリア抗原、例えばジフテリアトキソイド（例えば参考文献３１の第３章）、例えばＣＲＭ１９７突然変異体（例えば参考文献３２）；（ｌ）破傷風抗原、例えば破傷風トキソイド（例えば参考文献３１の第４章）；（ｍ）ヘリコバクター・ピロリ由来の蛋白抗原、例えばＣａｇＡ（例えば参考文献３３）、ＶａｃＡ（例えば参考文献３３）、ＮＡＰ（例えば参考文献３４）、ＨｏｐＸ（例えば参考文献３５）、ＨｏｐＹ（例えば参考文献３５）および／またはウレアーゼ；（ｎ）ヘモフィルスインフルエンザタイプＢ菌由来の糖抗原（例えば参考文献１３）；（ｏ）ポルフィラモナス・ギンギバリス由来の抗原（例えば参考文献３６）；（ｐ）ポリオ抗原（例えば参考文献３７、３８）、例えばＩＰＶまたはＯＰＶ；（ｑ）狂犬病抗原（例えば参考文献３９）、例えば凍結乾燥不活性化ウィルス（例えば参考文献４０、ＲａｂａｖｅｒｔＴＭ）；（ｒ）はしか、おたふくかぜおよび／または風疹の抗原（例えば参考文献３１の第９、１０および１１章）；（ｓ）インフルエンザ抗原（例えば参考文献３１の第１９章）、例えばヘマグルチニンおよび／またはノイラミニダーゼ表面蛋白；（ｔ）モラキセラ・カタラリス由来のアンフェ（例えば参考文献４１参照）；（ｕ）ストレプトコッカス・アガラクチア（Ｂ群ストレプトコッカス）由来の抗原（例えば参考文献４２、４３）；（ｖ）ストレプトコッカス・パイオゲン（Ａ群ストレプトコッカス）由来の抗原（例えば参考文献４３、４４、４５）；（ｗ）スタフィロコッカス・アウレウス由来の抗原（例えば参考文献４６）；および（ｘ）これらの抗原の１つ以上を含む複合物を包含する。糖類または炭水化物の抗原を使用する場合は、それは好ましくは免疫原性を増強するために担体蛋白にコンジュゲートする（例えば参考文献４７〜５６）。好ましい担体蛋白は細菌毒素またはトキソイド、例えばジフテリアまたは破傷風のトキソイドである。ＣＲＭ１９７ジフテリアトキソイドが特に好ましい。他の適当な担体蛋白は脳髄膜炎外膜蛋白（例えば参考文献５７）、合成ペプチド（例えば参考文献５８、５９）、熱ショック蛋白（例えば参考文献６０）、百日咳蛋白（例えば参考文献６１、６２）、インフルエンザ菌由来蛋白Ｄ（例えば参考文献６３）、Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ由来の毒素ＡまたはＢ（例えば参考文献６４）等を包含する。混合物が血清群ＡおよびＣの両方に由来する被膜糖を含む場合は、ＭｅｎＡ糖：ＭｅｎＣ糖の比（ｗ／ｗ）は１より大きい（例えば２：１、３：１、４：１、５：１、１０：１以上）であることが好ましい。髄膜炎菌の異なる血清群に由来する糖を同じかまたは異なる担体蛋白にコンジュゲートしてよい。必要に応じて何れかの適当なリンカーを使用しながら、何れかの適当なコンジュゲートゲート形成反応を用いる。毒性蛋白抗原は必要に応じて無毒化してよい（例えば化学的手段による百日咳毒素の無毒化（参考文献３０））。参考となるものは、国際特許出願９９／２４５７８（参考文献１）；国際特許出願ＷＯ９９／３６５４４（参考文献２）；国際特許出願ＷＯ９９／５７２８０（参考文献３）；国際特許出願ＷＯ００／２２４３０（参考文献４）；Ｔｅｔｔｅｌｉｎ ｅｔ ａｌ．，（２０００）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２８７：１８０９−１８１５（参考文献５）；国際特許出願ＷＯ９６／２９４１２（参考文献６）；Ｐｉｚｚａ ｅｔ ａｌ．，（２０００）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２８７：１８１６−１８２０（参考文献７）；国際特許出願ＰＣＴ・ＩＢ０１／００１６６（参考文献８）；Ｂｊｕｎｅ ｅｔ ａｌ（１９９１）Ｌａｎｃｅｔ ３３８（８７７５）：１０９３−１０９６（参考文献９）；Ｆｕｋａｓａｗａ ｅｔ ａｌ．，（１９９０）Ｖａｃｃｉｎｅ １７：２９５１−２９５８（参考文献１０）；Ｒｏｓｅｎｑｖｉｓｔ ｅｔ ａｌ．，（１９９８）Ｄｅｖ．Ｂｉｏｌ．Ｓｔａｎｄ．９２：３２３−３３３（参考文献１１）；Ｃｏｎｓｔａｎｔｉｎｏ ｅｔ ａｌ．，（１９９２）Ｖａｃｃｉｎｅ １０：６９１−６９８（参考文献１２）；Ｃｏｓｔａｎｔｉｎｏ ｅｔ ａｌ．，（１９９９）Ｖａｃｃｉｎｅ １７：１２５１−１２６３（参考文献１３）；Ｗａｔｓｏｎ（２０００）Ｐａｄｉａｔｒ Ｉｎｆｅｃｔ Ｄｉｓ Ｊ１９：３３１−３３２（参考文献１４）；Ｒｕｂｉｎ（２０００）Ｐｅｄｉａｔｒ Ｃｌｉｎ Ｎｏｒｔｈ Ａｍ ４７：２６９−２８５，ｖ（参考文献１５）；Ｊｅｄｒｚｅｊａｓ（２００１）Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ Ｒｅｖ６５：１８７−２０７（参考文献１６）；ＧＢ−００１６３６３．４の優先権を主張する２００１年７月３日出願の国際特許出願（参考文献１７）；Ｋａｌｍａｎ ｅｔ ａｌ．（１９９９）Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ２１：３８５−３８９（参考文献１８）；Ｒｅａｄ ｅｔ ａｌ（２０００）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ ２８：１３９７−４０６（参考文献１９）；Ｓｈｉｒａｉ ｅｔ ａｌ．（２０００），Ｊ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．１８１（Ｓｕｐｐｌ３）：Ｓ５２４−Ｓ５２７（参考文献２０）；国際特許出願ＷＯ９９／２７１０５（参考文献２１）；国際特許出願ＷＯ００／２７９９４（参考文献２２）；国際特許出願ＷＯ００／３７４９４（参考文献２３）；国際特許出願ＷＯ９９／２８４７５（参考文献２４）；Ｂｅｌｌ（２０００）Ｐｅｄｉａｔｒ Ｉｎｆｅｃｔ Ｄｉｓ Ｊ１９：１１８７−１１８８（参考文献２５）；Ｉｗａｒｓｏｎ（１９９５）ＡＰＭＩＳ１０３：３２１−３２６（参考文献２６）；Ｇｅｒｌｉｃｈ ｅｔ ａｌ．（１９９０）Ｖａｃｃｉｎｅ ８ Ｓｕｐｐｌｅ：Ｓ６３−６８＆７９−８０（参考文献２７）；Ｈｓｕ ｅｔ ａｌ．（１９９９）Ｃｌｉｎ Ｌｉｖｅｒ Ｄｉｓ ３：９０１−９１５（参考文献２８）；Ｇｕｓｔａｆｓｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，（１９９６）Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３３４：３４９−３５５（参考文献２９）；Ｒａｐｐｕｏｌｉ ｅｔ ａｌ．（１９９１）ＴＩＢＴＥＣＨ ９：２３２−２３８（参考文献３０）；Ｖａｃｃｉｎｅｓ（１９８８）ｅｄｓ．Ｐｌｏｔｋｉｎ＆Ｍｏｒｔｉｍｅｒ．ＩＳＢＮ ０−７２１６−１９４６−０（参考文献３１）；Ｄｅｌ Ｇｕｉｄｉｃｅ ｅｔ ａｌ．（１９９８）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ａｓｐｅｃｔｓ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ １９：１−７０（参考文献３２）；国際特許出願ＷＯ９３／１８１５０（参考文献３３）；国際特許出願ＷＯ９９／５３３１０（参考文献３４）；国際特許出願ＷＯ９８／０４７０２（参考文献３５）；Ｒｏｓｓ ｅｔ ａｌ．（２００１）Ｖａｃｃｉｎｅ １９：４１３５−４１４２（参考文献３６）；Ｓｕｔｔｅｒ ｅｔ ａｌ．（２０００）Ｐｅｄｉａｔｒ Ｃｌｉｎ Ｎｏｒｔｈ Ａｍ．４７：２８７−３０８（参考文献３７）；Ｚｉｍｍｅｒｍａｎ＆Ｓｐａｎｎ（１９９９）Ａｍ Ｆａｍ Ｐｈｙｓｉｃｉａｎ ５９：１１３−１１８，１２５−１２６（参考文献３８）；Ｄｒｅｅｓｅｎ（１９９７）Ｖａｃｃｉｎｅ １５ Ｓｕｐｐｌ：Ｓ２−６（参考文献３９）；ＭＭＷＲ Ｍｏｒｂ Ｍｏｒｔａｌ Ｗｋｌｙ Ｒｅｐ １９９８ Ｊａｎ １６；４７（１）：１２．１９（参考文献４０）；ＭｃＭｉｃｈａｅｌ（２０００）Ｖａｃｃｉｎｅ １９ Ｓｕｐｐｌ１：Ｓ１０１−１０７（参考文献４１）；Ｓｃｈｕｃｈａｔ（１９９９）Ｌａｎｃｅｔ ３５３（９１４６）：５１−６（参考文献４２）；英国特許出願００２６３３３．５、００２７￥８７２７．６＆０１０５６４０．７（参考文献４３）；Ｄａｌｅ（１９９９）Ｉｎｆｅｃｔ Ｄｉｓ Ｃｌｉｎ Ｎｏｒｔｈ Ａｍ １３：２２７−４３，ｖｉｉｉ（参考文献４４）；Ｆｅｒｒｅｔｔｉ ｅｔ ａｌ．（２００１）ＰＮＡＳ ＵＳＡ ９８：４６５８−４６６３（参考文献４５）；Ｋｕｒｏｄａ ｅｔ ａｌ．（２００１）Ｌａｎｃｅｔ ３５７（９２６４）：１２２５−１２４０；ｐ．１２１８−１２１９（参考文献４６）；Ｒａｍｓａｙ ｅｔ ａｌ．（２００１）Ｌａｎｃｅｔ ３５７（９２５１）：１９５−１９６（参考文献４７）；Ｌｉｎｄｂｅｒｇ（１９９９）Ｖａｃｃｉｎｅ １７ Ｓｕｐｐｌ ２：Ｓ２８−３６（参考文献４８）；Ｂｕｔｔｅｒｙ＆Ｍｏｘｏｎ（２０００）Ｊ Ｒ Ｃｏｌｌ Ｐｈｙｓｉｃｉａｎｓ Ｌｏｎｄｏｎ ３４：１６３−１６８（参考文献４９）；Ａｈｍａｄ＆Ｃｈａｐｎｉｃｋ（１９９９）Ｉｎｆｅｃｔ Ｄｉｓ Ｃｌｉｎ Ｎｏｒｔｈ Ａｍ １３：１１３−１３３，ｖｉｉ（参考文献５０）；Ｇｏｌｄｂｌａｔｔ（１９９８）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．４７：５６３−５６７（参考文献５１）；欧州特許０４７７５０８（参考文献５２）；米国特許５，３０６，４９２（参考文献５３）；国際特許出願ＷＯ９８／４２７２１（参考文献５４）；Ｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｖａｃｃｉｎｅｓ （ｅｄｓ．Ｃｒｕｓｅ ｅｔ ａｌ．）ＩＳＢＮ ３８０５５４９３２６，ｖｏｌ．１０：４８−１１４（参考文献５５）；Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ（１９９６）Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ＩＳＢＮ：０１２３４２３３６８＆０１２３４２３３５Ｘ（参考文献５６）；欧州特許出願０３７２５０１（参考文献５７）；欧州特許出願０３７８８８１８（参考文献５８）；欧州特許出願０４２７３４７（参考文献５９）；国際特許出願ＷＯ９３／１７７１２（参考文献６０）；国際特許出願ＷＯ９８／５８６６８（参考文献６１）；欧州特許出願０４７１１７７（参考文献６２）；国際特許出願ＷＯ００／５６３６０（参考文献６３）；国際特許出願ＷＯ００／６１７６１（参考文献６４）である。
【０１００】
ジフテリア抗原を組成物に含有させる場合は、破傷風抗原および百日咳抗原も含有させることが好ましい。同様に、破傷風抗原を含有させる場合は、ジフテリアおよび百日咳抗原を含有させることが好ましい。同様に百日咳抗原を含有させる場合は、ジフテリアおよび破傷風抗原を含有させることが好ましい。
【０１０１】
別の抗原にはペスト、ロッキー山紅斑熱、痘瘡、チフス様、チフス、ネコ白血病ウィルスおよび黄熱病を指向した抗原も包含される。
【０１０２】
（３．免疫原性エマルジョン組成物）
本発明の種々の実施形態は免疫原性エマルジョン組成物に関する。リン脂質および抗原物質種（上記）、並びに、任意の補充的成分（上記）に加えて、本発明の免疫原性エマルジョン組成物は（ａ）水、（ｂ）代謝可能な油、および（ｃ）乳化剤を好都合に含んでいる。典型的には、免疫学的エマルジョンは油滴の実質的に全てが直径１ミクロン未満、典型的には２５０ｎｍ未満である水中油エマルジョンである。特定の実施形態においては、組成物は何れかのポリオキシプロピレン−ポリオキシエチレンブロック共重合体の非存在下に存在する。
【０１０３】
これらの免疫原性エマルジョン組成物は典型的には油０．５〜２０容量％、より典型的には油１〜１０容量％、そしてさらに典型的には油２〜６容量％；および水８０〜９９．５容量％、より典型低には９０〜９９容量％を含む。組成物はやはり典型的には、乳化剤約０．００１〜約５重量％、より典型的には乳化剤０．００１〜１重量％、さらに典型的には乳化剤０．０１〜０．１重量％；リン脂質約０．１〜５重量％、より典型的にはリン脂質０．５〜１重量％；ポリペプチド含有抗原を使用する場合は、ポリペプチド含有抗原約０．１〜５重量％、より典型的にはポリペプチド含有抗原０．５〜１重量％；そしてポリヌクレオチド含有抗原を使用する場合は、ポリヌクレオチド含有抗原約０．１〜２０重量％、より典型的にはポリヌクレオチド含有抗原約１〜１０重量％を含む。
【０１０４】
代謝可能な油は通常は炭素原子約６〜約３０個を有するもの、例えばアルカン、アルケン、アルキンおよびこれらの相当する酸およびアルコール、そのエーテルおよびエステルおよびそれらの混合物である。油は本質的には何れかの植物性の油、魚油、動物性油または合成により製造された油であって、免疫原性エマルジョン組成物の投与対象である宿主動物の身体で代謝されることができ、そして、対象に対して実質的に毒性ではないものである。鉱物油および同様の毒性石油蒸留油は本発明から除外される。
【０１０５】
例えば本発明の油成分は何れかの長鎖アルカン、アルケンまたはアルキン、またはその酸またはアルコール誘導体、例えば遊離酸、その塩またはエステル、例えばモノ、またはジまたはトリエステル、例えばトリグリセリド、１，２−プロパンジオールのエステル、または同様の多価アルコールであることができる。アルコールは網のまたは多官能性の酸、例えば酢酸、プロパン酸、クエン酸等を用いてアシル化できる。油であり上記した基準に合致する長鎖アルコールから誘導されたエーテルも使用できる。
【０１０６】
個々のアルカン、アルケンまたはアルキン部分およびその酸またはアルコール誘導体は一般的に炭素原子約６〜約３０個を有する。この部分は直鎖または分枝鎖の構造であることができる。完全飽和または１つ以上の二重または三重結合を有することができる。モノまたはポリエステルまたはエーテル系の油を使用する場合は、全炭素数ではなく個々の脂肪酸または脂肪アルコール部分について約６〜約３０炭素原子の制限が適用される。
【０１０７】
特定の例として、多くの魚類は容易に回収できる代謝可能な油を含有している。例えばタラ肝油、サメ肝油および鯨油、例えば鯨蝋が魚油の数例として挙げることができ、これらを本発明において使用してよい。多くの分枝鎖の油は５炭素イソプレン単位において生化学的に合成でき、そして一般的にはテルペノイドと称される。サメ肝油はスクワレン、即ち２，６，１０，１５，１９，２３−ヘキサメチル−１，６，１０，１４，１８，２２−テトラコサヘキサアエンとして知られている分枝鎖不飽和テルペノイドを含有する。魚油、例えばスクワレンおよびスクワラン、スクワレンの飽和類縁体は市販品を容易に入手でき、あるいは、当該分野で知られた方法により得てよい。
【０１０８】
多数の安定な乳化剤（本明細書においては界面活性剤、洗剤等とも称する）が医薬品科学において使用され、その多くが、十分非毒性であるかぎり、本発明の免疫原性エマルジョン組成物において有用である。これらには天然から誘導された物質、例えば樹木から誘導したが無類、植物性蛋白、糖系の重合体、例えばアルギネートおよびセルロース等が包含される。炭素骨格上にヒドロキシドまたは他の親水性置換基を有する特定のオキシ重合体または重合体は界面活性を有し、例えばポビドン、ポリビニルアルコールおよびグリコールエーテル系の１官能性または多官能性の化合物が挙げられる。長鎖脂肪酸誘導化合物が本発明において使用できる乳化剤の別の多く名グループを形成する。
【０１０９】
本発明において使用できる適当な乳化剤の特定の例は以下に示す通りである。（１）水溶性石鹸、例えば高級脂肪酸（Ｃ１０−Ｃ２２）のナトリウム、カリウム、アンモニウムおよびアルカノールアンモニウム塩、および特にナトリウムおよびカリウムタローおよびココナツ石鹸。（２）アニオン系合成非石鹸洗剤であって、炭素原子約８〜２２個およびスルホン酸および硫酸エステル基よりなる群から選択される基を含むアルキル基をその分子構造に有する有機の硫酸反応性生物の水溶性の塩として代表されるもの。
【０１１０】
（３）有機疎水性化合物とのアルキレンオキシド基の縮合により生成されるノニオン系合成洗剤。典型的な疎水性基はプロピレンオキシドのプロピレングリコールとの縮合生成物、アルキルフェノール、プロピレンオキシドとエチレンジアミンの縮合生成物、炭素原子８〜２２個を有する脂肪族アルコール、および脂肪酸のアミドを包含する。
【０１１１】
（４）ノニオン系洗剤、例えばアミンオキシド、ホスフィンオキシドおよびスルホキシドであって半極性の特性を有するもの。（５）長鎖スルホキシド、例えば式Ｒ１ＳＯＲ２に相当するもの、ただしここでＲ１およびＲ２は置換または未置換のアルキル基であり、前者は炭素原子約１０〜約２８個を含み、Ｒ２は炭素原子１〜３個を含む。（６）両性合成洗剤、例えば３−ドデシルアミノプロピオン酸ナトリウムおよび３−ドデシルアミノプロパンスルホン酸ナトリウム。（７）両性イオン合成洗剤、例えば３−（Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−ヘキサデシルアンモニオ）プロパン−１−スルホネートおよび３−（Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−ヘキサデシルアンモニオ）−２−ヒドロキシプロパン−１−スルホネート。
【０１１２】
上記段落に記載したものを除外する必然性は無いが、以下の型の乳化剤、即ち（ａ）脂肪酸、ロジン酸およびトール油の石鹸（即ちアルカリ塩）；（ｂ）アルキルアレンスルホネート；（ｃ）アルキルスルフェート、例えば分枝鎖および直鎖の両方の疎水性の基、並びに、第１および第２スルフェート基を有する界面活性剤；（ｄ）疎水性および親水性の基の間に中間的結合を含むスルフェートおよびスルホネート、例えば脂肪アシル化メチルタウリドおよび硫酸化脂肪モノグリセリド；（ｅ）ポリエチレングリコールの長鎖酸エステル、特にトール油エステル；（ｆ）アルキルフェノールのポリエチレングリコールエーテル；（ｇ）長鎖アルコールおよびメルカプタンのポリエチレングリコールエーテル；および（ｈ）脂肪アシルジエタノールアミドもまた本発明の免疫原性エマルジョン組成物中に使用できる。
【０１１３】
生物学的状況に対して特に設計され、そして一般的に使用されている多くの乳化剤がある。例えば、多くの生物学的洗剤（界面活性剤）が例えばＳｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐａｎｙ の１９８７ Ｃａｔａｌｏｇ ｏｆ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ ａｎｄ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓの３１０〜３１６ページに列挙されている。このような界面活性剤は４種の基本的な型、即ち、アニオン系、カチオン系、両性イオン系およびノニオン系に分類される。アニオン系洗剤の例はアルギン酸、カプリル酸、コール酸、１−デカンスルホン酸、デオキシコール酸、１−ドデカンスルホン酸、Ｎ−ラウロイルサルコシンおよびタウロコール酸を包含する。カチオン系洗剤は臭化ドデシルトリメチルアンモニウム、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンジルジメチルヘキサデシルアンモニウム、塩化セチルピリジニウム、塩化メチルベンゼトニウムおよび４−ピコリンドデシルスルフェートを包含する。両性イオン洗剤の例は３−［（３−クロロアミドプロピル）−ジメチルアンモニオ］−１−プロパンスルホネート（一般的にはＣＨＡＰＳと略記）、３−［（クロラミドプロピル）ジメチルアンモニオ］−２−ヒドロキシ−１−プロパンスルホネート（一般的にはＣＨＡＰＳＯと略記）、Ｎ−ドデシル−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−アンモニオ−１−プロパンスルホネートおよびリソ−アルファ−ホスファチジルコリンを包含する。ノニオン系洗剤の例はデカノイル−Ｎ−メチルグルカミド、ジエチレングリコールモノペンチルエーテル、ｎ−ドデシルベータ−Ｄ−グルコピラノシド、脂肪アルコールのエチレンオキシド縮合物（例えばＬｕｂｒｏｌの商品名で販売されているもの）、脂肪酸のポリオキシエチレンエーテル（特にＣ１２−Ｃ２０脂肪酸）、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル（例えばＴｗｅｅｎ（登録商標）の商品名で販売）およびソルビオタン脂肪酸エステル（例えばＳｐａｎ（登録商標）の商品名で販売）を包含する。
【０１１４】
界面活性剤の特に有用なグループはソルビタン系のノニオン系界面活性剤である。これらの界面活性剤は典型的にはソルビトールを脱水して１，４−ソルビタンとし、これを次に１等量以上の脂肪酸と反応させることにより製造する。脂肪酸置換部分はさらにエチレンオキシドと反応させて界面活性剤の第２のグループとしてよい。
【０１１５】
脂肪酸置換ソルビタン界面活性剤は典型的には１，４−ソルビタンを脂肪酸、例えばラウリル酸、パルミチン酸、ステアリン酸、オレイン酸または同様の調査脂肪酸と反応させて１，４−ソルビタンモノエステル、１，４−ソルビタンセスキエステルまたは１，４−ソルビタントリエステルとすることにより製造する。これらの界面活性剤の一部に対する共通の名称は、例えば、ソルビタンモノラウレート、ソルビタンモノパルミテート、ソルビタンモノステアレート、ソルビタンモノオレエート、ソルビタンセスキオレエートおよびソルビタントリオレエートを包含する。これらの界面活性剤はＳＰＡＮ（登録商標）またはＡＲＬＡＣＥＬ（登録商標）の商品名で市販されている。
【０１１６】
ＳＰＡＮ（登録商標）およびＡＲＬＡＣＥＬ（登録商標）界面活性剤は親油性であり、一般的には油中に可溶または分散性である。それらはまた大部分の有機溶媒に可溶である。水中ではこれらは一般的には不溶であるが分散可能である。一般的にこれらの界面活性剤は１．８および８．６の間の親水性−親油性バランス（ＨＬＢ）を有する。このような界面活性剤は当該分野で知られた手段により容易に製造できるか、または例えばＩＣＩ Ａｍｅｒｉｃａ’ｓ Ｉｎｃ．，Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＤＥから登録商標ＡＴＬＡＳ（登録商標）の下に販売されている。
【０１１７】
界面活性剤の関連するグループはポリオキシエチレンソルビタンモノエステルおよびポリオキシエチレンソルビタントリエステルを含む。これらの物質は典型的にはエチレンオキシドを１，４−ソルビタンモノエステルまたはトリエステルに添加することにより製造する。ポリオキシエチレンの添加は親油性のソルビタンモノまたはトリエステル界面活性剤を一般的には水中に可溶または分散可能であり、そして様々な程度で有機性液体に可溶である親水性の界面活性剤に変換する。ＴＷＥＥＮ（登録商標）界面活性剤は例えば関連するソルビタンモノエステルまたはトリエステル界面活性剤と組み合わせることによりエマルジョンの安定性を向上させる。ＴＷＥＥＮ（登録商標）界面活性剤は一般的に９．６および１６．７の間のＨＬＢ値を有する。ＴＷＥＥＮ（登録商標）界面活性剤は多くの製造元、例えばＩＣＩ Ａｍｅｒｉｃａ’ｓ Ｉｎｃ．，Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，Ｄｅｌ．より、登録商標ＡＴＬＡＳ（登録商標）界面活性剤の下で販売されている。
【０１１８】
単独またはＳＰＡＮ（登録商標）、ＡＲＬＡＣＥＬ（登録商標）および／またはＴＷＥＥＮ（登録商標）界面活性剤と組み合わせて使用されるノニオン界面活性剤の別の群はエチレンオキシドと長鎖脂肪酸との反応により製造されるポリオキシエチレン脂肪酸である。この型の最も一般的な市販の界面活性剤はＮＹＲＪ（登録商標）の名称で販売されている固体であり、そしてステアリン酸のポリオキシエチレン誘導体である。ＭＹＲＪ（登録商標）界面活性剤はＴＷＥＥＮ（登録商標）と同様、親水性であり、そして水中に可溶または分散可能である。ＭＹＲＪ（登録商標）界面活性剤は、エマルジョンの形成において使用するためには、例えばＴＷＥＥＮ（登録商標）界面活性剤と、またはＴＷＥＥＮ（登録商標）／ＳＰＡＮ（登録商標）と、またはＡＲＬＡＣＥＬ（登録商標）界面活性剤混合物とブレンドしてよい。ＭＹＲＪ（登録商標）界面活性剤は当該分野で知られた方法により製造するか、またはＩＣＩ Ａｍｅｒｉｃａ’ｓ Ｉｎｃ．から購入してよい。
【０１１９】
ポリオキシエチレン系のノニオン系界面活性剤の別のグループはラウリル、アセチル、ステアリルおよびオレイルアルコールから誘導したポリオキシエチレン脂肪酸エーテルである。これらの物質は典型的にはエチレンオキシドを脂肪アルコールに添加することにより上記したとおり製造する。これらの界面活性剤の市販品の名称はＢＲＩＪ（登録商標）である。ＢＲＩＪ（登録商標）界面活性剤は界面活性剤中のポリオキシエチレン部分のサイズにより親水性または親油性となる。これらの化合物の製造は当該分野において可能であるが、ＩＣＩ Ａｍｅｒｉｃａ’ｓ Ｉｎｃのような販売元から容易に入手することもできる。
【０１２０】
本発明の実施において使用してよい他のノニオン系界面活性剤は、例えば、ポリオキシエチレン、ポリオール脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンエーテル、ポリオキシプロピレン脂肪エーテル、ポリオキシエチレン含有蜜蝋誘導体、ポリオキシエチレンラノリン誘導体、ポリオキシエチレン脂肪グリセリド、グリセロール脂肪酸エステルまたは他のポリオキシエチレン酸アルコールまたは炭素原子１２〜２２個の長鎖脂肪酸のエーテル誘導体である。
【０１２１】
上記したとおり、特定の実施形態においては、２種以上の界面活性剤を本発明の免疫原性エマルジョン組成物中で組み合わせる。例えば、免疫原性エマルジョン組成物は１〜９のＨＬＢ価を有する親水性乳化剤および１０〜１８のＨＬＢ価を有する親油性乳化剤を含むことができる。特定の例として、ソルビタン脂肪酸エステルはポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステルと組み合わせることができる（これらの乳化剤の一部とそのＨＬＢ価を示した下記の表１参照）。
【０１２２】
【表１】
本発明の免疫原性エマルジョン組成物は一般的に非経腸投与を意図しているため、免疫原性組成物の張力、即ち浸透圧は、典型的には、例えば組成物と通常の生理学的液体との間の溶質の濃度の相違による組成物の投与後の膨潤または急速な吸収を防止するためには、生理学的液体と適合性を有するものである。本質的に何れかの生理学的に許容される溶質、例えば塩化ナトリウムを、浸透圧の調節のために使用することができる。
【０１２３】
エマルジョン組成物はまた典型的には正常な生理学的条件に適合するｐＨを維持するために緩衝性を付与される。さらにまた、特定の実施形態においては、グリコペプチドのような特定の組成物成分の安定性を確保するため特定の水準に維持することが必要である。何れかの生理学的に許容される緩衝物質、例えばリン酸塩緩衝物質を本明細書において使用できる。他の許容される緩衝物質、例えば酢酸塩、トリス、重炭酸塩、炭酸塩等もまた同様に使用できる。水性成分のｐＨは典型的には約６．０〜８．０である。
【０１２４】
サブミクロンのエマルジョンをまず調製する場合は、エマルジョンの水性成分としては典型的には純粋な水を使用するが、その理由は、例えば、漸増塩濃度は所望の小さい液滴サイズを達成することをより困難にするためである。
【０１２５】
しかしながらエマルジョンを形成した後には、張力およびｐＨを例えば溶質および／または適切な緩衝物質の添加により適宜調節できる。一部の実施形態においては、抗原は最終免疫原性組成物に所望の浸透圧とｐＨを付与するために適切な浸透圧およびｐＨを有する緩衝溶液中に添加することができる。同様に、一部の実施形態においては、リン脂質を適切な浸透圧およびｐＨを有する緩衝溶液中に溶解または分散してエマルジョンに添加することができる。
【０１２６】
本発明の免疫原性エマルジョン組成物は当該分野でよく知られた数種の方法の何れかを用いて調製する。好ましくは、本発明のエマルジョン組成物はサブミクロンの油滴の水注油エマルジョン、即ち、直径約１ミクロン未満でありナノメートルの粒径範囲である分散（油）層液滴を有するエマルジョンの形態である。例えば高圧下に小型の穿孔に液体を強制的に通過させることにより生じさせた高剪断力の原理により作動する市販の乳化装置を用いることができる。市販の乳化装置の例は、Ｍｏｄｅｌ １１０Ｙマイクロ流動化装置（Ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｃｓ， Ｎｅｗｔｏｎ， Ｍａｓｓ．）、Ｇａｕｌｉｎ Ｍｏｄｅｌ３０ＣＤ（Ｇａｕｌｉｎ，Ｉｎｃ．，Ｅｖｅｒｅｔｔ，Ｍａｓｓ．）およびＲａｉｎｎｉｅ Ｍｉｎｉｌａｂ Ｔｙｐｅ８．３０Ｈ（Ｍｉｒｏ Ａｔｏｍｉｚｅｒ Ｆｏｏｄ ａｎｄ Ｄａｉｒｙ，Ｉｎｃ．，Ｈｕｄｓｏｎ，Ｗｉｓ．）である。個々のエマルジョンと共に使用する適切な圧力は当業者が容易に決定できる。代謝可能な油エマルジョンに関するその他の情報は例えば共通保有している国際特許出願ＷＯ００／５０００６記載および米国特許６，２９９，８８４号に記載されている。
【０１２７】
油滴の粒径は例えば乳化剤の油に対する比（比が増大すると液滴粒径は典型的には減少する）、操作圧力（作動圧力が増大すると液滴粒径は典型的には減少する）および操作温度（温度が上昇すると液滴粒径は典型的には減少する）を変化させることにより変動させることができる。液滴粒径はまた、使用する特定の乳化剤および油、並びに、乳化の際に存在する他の成分（例えばリン脂質、抗原および以下に記載する任意の補充的化合物）に応じて変化する。
【０１２８】
液滴の粒径はサイジング機器、例えば市販のＣｏｕｌｔｅｒ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ製のＳｕｂ−Ｍｉｃｒｏｎ Ｐａｒｔｉｃｌｅ Ａｎａｌｙｚｅｒ（Ｍｏｄｅｌ Ｎ４ＭＤ）およびを用いて評価でき、そして方法のパラメーターは例えば実質的に全ての液滴が直径１ミクロン未満、典型的には直径０．８ミクロン未満、より典型的には直径０．５ミクロン未満となるまで上記した指針を用いて変化させることができる。「実質的に全て」とは少なくとも約８０％（数に基づく）、典型的には少なくとも約９０％、より典型的には約９５％またはさらには少なくとも９８％を意味する。粒径分布は、平均直径が記載した限度より小さくなるためには、典型的にはガウス分布である。
【０１２９】
１つの特徴的な例によれば、リン脂質、代謝可能な油、１〜９のＨＬＢ値を有する乳化剤、そして必要に応じて有機溶媒を合わせることにより油相とする。同時に、１０〜１８の範囲のＨＬＢ値を有する乳化剤を水または別の水溶液と合わせることにより水相とする。油相および水相を合わせ、高剪断の装置に付し、所望の粒径を有する分散（油相）粒子を含有するエマルジョンを形成する。方法は好ましくは何れの残留有機溶媒も除去することにより完了する。
【０１３０】
目的の抗原は多くの手法により本発明の免疫原性エマルジョン組成物内に存在させることができる。典型的には、エマルジョンは水、代謝可能な油、乳化剤、および必要に応じてリン脂質から、上記したとおり調製し、その後、ワクチンにおいて用いられる抗原を添加する。記載した通り、エマルジョンはまず、純粋な水（例えば脱イオン水）を用いて調製し、次に適切な緩衝液中の抗原を添加することにより所望の浸透圧およびｐＨを有する最終組成物を形成する。エマルジョン組成物は典型的には安定であるため、抗原およびエマルジョンは単純な振とうにより混合できる。他の手法、例えば抗原およびエマルジョンを急速に小型開口部（例えば注射針）を通過させること等によっても、有用なワクチン組成物を容易に得ることができる。しかしながら、目的の抗原をエマルジョン組成物の形成後に添加することは必須ではない。むしろ、抗原は上記した通り乳化よりも前に添加できる。
【０１３１】
種々の成分、例えばリン脂質および／または以下に記載する任意の補充的成分は、例えば乳化の前後において、（ａ）油溶性または油分散性形態においては油相に付加的成分を添加することにより、または（ｂ）水溶性または水分散性形態においては水相に付加的成分を添加することにより、本発明のエマルジョン組成物に導入できる。
【０１３２】
（４．免疫原性微粒子組成物）
本明細書に記載した免疫原性微粒子組成物を形成するための有用な生体分解性の重合体はポリヒドロキシ酪酸（ポリヒドロキシブチレートとも称する）；ポリヒドロキシ吉草酸（ポリヒドロキシバレレートとも称する）；ポリグリコール酸（ＰＧＡ）（ポリグリコリドとも称する）；ポリ乳酸（ＰＬＡ）（ポリラクチドとも称する）；ポリジオキサノン；ポリカプロラクトン；ポリオルトエステルおよびポリ無水物から誘導される単独重合体、共重合体およびポリマーブレンドである。より典型的なものは、ポリ（α−ヒドロキシ酸）例えばポリ（Ｌ−ラクチド）、ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド）（共に本明細書においては「ＰＬＡ」と称する）、ポリ（ヒドロキシブチレート）、ラクチドとグリコリドの共重合体、例えばポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド−ｃｏ−グリコリド）（本明細書においては「ＰＬＧ」と記載する）またはＤ，Ｌ−ラクチドおよびカプロラクトンの共重合体である。
【０１３３】
上記重合体は種々の分子量のものが入手可能であり、そして、所定の用途のための適切な分子量は当業者が容易に決定できる。即ち、例えば、ＰＬＡの適当な分子量は約２０００〜５０００のオーダーであってよい。ＰＬＧの適当な分子量は約１０，０００〜約２００，０００、典型的には約１５，０００〜約１５０，０００の範囲である。
【０１３４】
共重合体を使用する場合は、種々のモノマー比率を有する共重合体を使用してよい。例えばＰＬＧを使用して微粒子を形成する場合は、種々のラクチド：グリコリドモル比が使用でき、そして、比は、部分的には併用吸着および／または捕獲物質種および所望の分解速度に応じて、広範な範囲で選択できる。例えば５０％Ｄ，Ｌ−ラクチドおよび５０％グリコリドを含有する５０：５０ＰＬＧ重合体は急速再吸収重合体を形成するが、ラクチド成分の増大により、７５：２５ＰＬＧはより緩徐に、そして８５：１５および９０：１０のものはさらに緩徐に分解する。種々のラクチド：グリコリド比の微粒子の混合物を本発明において使用することにより所望の放出動態を達成してよい。本発明の微粒子の分解速度はまた重合体の分子量および重合体の結晶性のような要因により制御できる。
【０１３５】
種々のラクチド：グリコリド比および分子量を有するＰＬＧ共重合体は多くの製造元、例えばＢｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ，ＧｅｒｍａｎｙおよびＢｉｒｍｉｎｇｈａｍ Ｐｏｌｙｍｅｒｓ，Ｉｎｃ．，Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ，ＡＬより容易に購入できる。例示される一部のＰＬＧ共重合体は（ａ）ＲＧ５０２、即ち５０：５０のラクチド／グリコリドモル比および分子量１２，０００Ｄａを有するＰＬＧ；（ｂ）ＲＧ５０３、即ち５０：５０のラクチド／グリコリドモル比および分子量３４，０００Ｄａを有するＰＬＧ；（ｃ）ＲＧ５０４、即ち５０：５０のラクチド／グリコリドモル比および分子量４８，０００Ｄａを有するＰＬＧ；（ｄ）ＲＧ７５２、即ち７５：２５のラクチド／グリコリドモル比および分子量２２，０００Ｄａを有するＰＬＧ；および（ｅ）ＲＧ５０５、即ち７５：２５のラクチド／グリコリドモル比および分子量６８，０００Ｄａを有するＰＬＧを包含する。ＰＬＧ重合体はまた当該分野でよく知られた手法、例えばＴａｂａｔａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｍａｔｅｒ．Ｒｅｓ．（１９８８）２２：８３７−８５８に記載のものを用いて乳酸成分の単純な縮重合によっても合成できる。
【０１３６】
ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド−ｃｏ−グリコリド）重合体を使用する場合は、典型的にはラクチド／グリコリドのモル比２０：８０〜８０：２０、より典型的には４０：６０〜６０：４０を有志、そして、分子量１０，０００〜１００，０００ダルトン、より典型的には２０，０００〜７０，０００ダルトンを有するものとする。
【０１３７】
微粒子は当該分野でよく知られた数種の方法の何れかを用いて調製する。例えば、一部の実施形態においては二重エマルジョン／溶媒蒸発法、例えば米国特許３，５２３，９０７号およびＯｇａｗａ ｅｔ ａｌ．，Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．（１９８８）３６：１０９５−１１０３に記載のものを本発明において使用することにより微粒子を形成する。これらの手法では、重合体溶液の液滴よりなる一次エマルジョンを形成し、これをその後、粒子安定化剤／界面活性剤を含有する連続水相と混合する。
【０１３８】
別の実施形態においては、微粒子はまた、例えばＴｈｏｍａｓｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ （１９９６）４１：１３１；米国特許２，８００，４５７；Ｍａｓｔｅｒｓ，Ｋ．（１９７６）Ｓｐｒａｙ Ｄｒｙｉｎｇ ２ｎｄ Ｅｄ． Ｗｉｌｅｙ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋに記載の噴霧乾燥およびコアセルベーション、Ｈａｌｌ ｅｔ ａｌ．，（１９８０） Ｔｈｅ ”Ｗｕｓｔｅｒ Ｐｒｏｃｅｓｓ” ｉｎ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ：Ｍｅｔｈｏｄｓ， Ｔｈｅｏｒｙ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ （Ａ．Ｆ．Ｋｙｄｏｎｉｅｕｓ，ｅｄ．），Ｖｏｌ．２，ｐｐ．１３３−１５４ ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ， Ｆｌｏｒｉｄａ ａｎｄ Ｄｅａｓｙ， Ｐ．Ｂ．，Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｔｈｅｒ．Ｄｒｕｇ Ｃａｒｒｉｅｒ Ｓｙｓｔ．（１９８８）Ｓ（２）：９９−１３９に記載のエアサスペンションコーティング法；および例えばＬｉｍ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ（１９８０）２１０：９０８−９１０に記載のイオンゲル化を用いて形成することができる。
【０１３９】
好ましい実施形態においては、水中油中水（ｗ／ｏ／ｗ）溶媒蒸発系を用いながら、Ｏ’Ｈａｇａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｖａｃｃｉｎｅ（１９９３）１１：９６５−９６９， Ｏ’Ｈａｇｅｎ ｅｔ ａｌへのＰＣＴ／ＵＳ９９／１７３０８（ＷＯ００／０６１２３）およびＪｅｆｆｅｒｙ ｅｔ ａｌ．，Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．（１９９３）１０：３６２に記載の通り微粒子を形成することができる。
【０１４０】
一般的に、ＰＬＧのような目的の重合体を有機溶媒、例えば酢酸エチル、ジメチルクロリド（塩化メチレンおよびジクロロメタンとも称する）、アセトニトリル、アセトン、クロロホルム等に溶解する。重合体は典型的には有機溶媒中約１〜３０％、より典型的には約２〜１５％、さらに典型的には約３〜１０％、そして最も典型的には約４〜８％の溶液とする。次に重合体溶液を水溶液の第１の容量と合わせ、乳化してｏ／ｗエマルジョンを形成する。水溶液は例えば脱イオン水、生理食塩水、緩衝溶液、例えばリン酸塩緩衝食塩水（ＰＢＳ）またはクエン酸ナトリウム／エチレンジアミン４酢酸（クエン酸ナトリウム／ＥＴＤＡ）緩衝液であることができる。後者の溶液は（ａ）正常な生理学的液体と本質的に同じ張力、即ち浸透圧を提供し、そして（ｂ）正常な生理学的状態に適合するｐＨを維持することができる。或は、本発明の組成物の張力および／またはｐＨ特性は、微粒子形成の後、投与前に調節できる。好ましくは重合体溶液の水溶液に対する容量比は、約５：１〜約２０：１の範囲、より好ましくは約１０：１である。乳化はこの作業のために適切な何れかの装置を用いて実施し、そして典型的には例えばホモゲナイザーのような高剪断装置である。
【０１４１】
一部の実施形態においては、１つ以上の付加的な成分を微粒子内に捕獲する。例えば、抗原、リン脂質および／または以下に記載するような任意の補充的成分は、これを（ａ）油溶性または油分散性形態である場合は重合体溶液に、または（ｂ）水溶性または水分散性形態である場合は水溶液に添加することにより導入できる。
【０１４２】
次にｏ／ｗエマルジョンの容量を、典型的には界面活性剤を含有する水溶液のより多量の第２の容量に合わせる。水溶液のｏ／ｗエマルジョンに対する容量比は、典型的には約２：１〜１０：１、より典型的には約４：１の範囲である。本発明の実施のために適切な界面活性剤の例は、上記に列挙した通りである。吸着すべき物質種の型に対して適切な界面活性剤の選択は当業者が容易に行える。例えば、荷電した界面活性剤、例えばアニオン系またはカチオン系の界面活性剤の存在下に製造された微粒子は広範な種類の分子を吸着できる実効負電荷または実効正電荷を有する表面を持った微粒子をもたらす。例えばアニオン系界面活性剤、例えばドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）を用いて製造した微粒子、例えばＳＤＳ−ＰＬＧ微粒子は正荷電した物質種、例えばポリペプチド含有物質種、例えば蛋白を吸着する。同様に、カチオン系界面活性剤、例えばＣＴＡＢを用いて製造した微粒子、例えばＰＬＧ／ＣＴＡＢ微粒子は負荷電の物質種、例えばポリヌクレオチド含有物質種、例えばＤＮＡを吸着する。吸着すべき物質種が正および負の電荷の領域を有する場合は、カチオンまたはアニオンまたはノニオン系の界面活性剤のいずれかが適している。特定の物質種は界面活性剤の組み合わせを有する微粒子にさらに容易に吸着する。さらにまた、一部の例においては、上記有機溶液に界面活性剤を添加することが望ましい。
【０１４３】
ＣＴＡＢのようなカチオン系界面活性剤を使用する場合は、典型的には約０．０００２５〜１％溶液、より典型的には約０．００２５〜０．１％溶液として提供される。ＤＳＳのようなアニオン系界面活性剤を使用する場合は、典型的には約０．００００１〜０．２５％溶液、より典型的には約０．０００１〜０．００２５％溶液として提供される。ＰＶＡのようなノニオン系界面活性剤を使用する場合は、典型的には約２〜１５％溶液、より典型的には約４〜１０％溶液として提供される。カチオン系界面活性剤の場合、界面活性剤の重合体に対する重量比は典型的には約０．００００１：１〜約０．５：１；より典型的には約０．００１：１〜約０．１：１、そしてさらに典型的には約０．００２５：１〜約０．０５：１であり；ＤＳＳのようなアニオン系界面活性剤の場合は、界面活性剤の重合体に対する重量比は典型的には約０．００００１：１〜約０．０２５：１；より典型的には約０．０００１：１〜約０．００２５：１であり；ＰＶＡのようなノニオン系界面活性剤の場合は、界面活性剤の重合体に対する重量比は典型的には約０．００１：１〜約０．１：１；より典型的には約０．００２５：１〜約０．０５：１である。
【０１４４】
次にこの混合物をホモゲナイズして安定なｗ／ｏ／ｗ二重エマルジョンを製造する。上記したホモゲナイズ工程の各々は典型的には室温（即ち２５℃）以下、より典型的には、例えばアイスバス中で冷却しながら実施する。
【０１４５】
次に有機溶媒を蒸発させる。調製の後、微粒子はそのまま使用するか、後の使用のために凍結乾燥できる。
【０１４６】
処方パラメーターを操作することにより０．０５μｍ（５０ｎｍ）のオーダーの小型の微粒子からより大きい微粒子、５０μｍ以上のものを製造できる。例えばＪｅｆｆｅｒｙ ｅｔ ａｌ．，Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．（１９９３）１０：３６２−３６８；ＭｃＧｅｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｉｃｒｏｅｎｃａｐ．（１９９６）を参照できる。例えば、低減した攪拌混合では典型的にはより大きい微粒子となり、内相の容量の増大および重合体濃度の上昇でも同様である。小型粒子は典型的には増強された攪拌混合並びに小さい水相容量、高濃度のエマルジョン安定化剤および重合体濃度の低下により生じる。
【０１４７】
粒径は例えばレーザ光散乱により、例えばヘリウムネオンレーザー搭載の分光光度計を用いて測定できる。一般的に、粒径は室温で測定し、対象となる試料の複数の分析を行い（例えば５〜１０回）、粒径の平均値を求める。粒径はまた走査電子顕微鏡（ＳＥＭ）を用いて容易に測定される。
【０１４８】
調製の際には、種々の成分、例えば抗原、リン脂質および任意の補充的成分、例えば後に記載するものを微粒子と混合し、得られた処方を所望により使用時まで凍結乾燥する。典型的には、これらの成分は水溶液または分散液として微粒子に添加する。一部の例においては、これらの物質種は微粒子の表面に吸着される（例えばポリペプチド抗原が微粒子表面に吸着される後述の実施例を参照）。吸着された物質種の含量は標準的手法を用いて測定できる。
【０１４９】
即ち、本発明の重合体粒子はその内部に捕獲またはカプセル化された種々の成分を有してよく、それと同時にその上に吸着された種々の成分を有する。例えば当業者は本発明に従って、吸着された抗原のほかに、吸着された微粒子を有する微粒子を製造してよい。当業者はまた、抗原、リン脂質および／または後に記載する補充的成分の何れかのようなカプセル化された成分を有する微粒子を製造してよい。
【０１５０】
（５．補充的成分）
本発明の免疫原性組成物は広範な種類の任意の補充的成分を包含できる。このような補充的成分には（ａ）医薬品、例えば抗体および抗ウィルス剤、非ステロイド抗炎症剤、鎮痛剤、血管拡張剤、心臓血管剤、向精神薬、神経弛緩剤、抗欝剤、抗パーキンソン剤、ベータブロッカー、カルシウムチャンネルブロッカー、ブラジキニン阻害剤、ＡＣＥ阻害剤、血管拡張剤、プロラクチン阻害剤、ステロイド、ホルモン拮抗剤、抗ヒスタミン剤、セロトニン拮抗剤、ヘパリン、化学療法剤、抗新生物剤および成長因子、例えばＰＤＧＦ、ＥＧＦ、ＫＧＦ、ＩＧＦ−１およびＩＧＦ−２、ＦＧＦ、（ｂ）ホルモン類、例えばペプチドホルモン、例えばインスリン、プロインスリン、成長因子、ＧＨＲＨ、ＬＨＲＨ、ＥＧＦ、ソマトスタチン、ＳＮＸ−１１１、ＢＮＰ、インスリノトロピン、ＡＮＰ、ＦＳＨ、ＬＨ、ＰＳＨおよびｈＣＨ、ゴナダルステロイドホルモン（アンドロゲン、エストロゲンおよびプロゲステロン）、甲状腺刺激ホルモン、インヒビン、コレシストキニン、ＡＣＴＨ、ＣＲＦ、ヂノルフィン、エンドルフィン、エンドセリン、フィブロネクチンフラグメント、ガラニン、ガストリン、インスリノトロピン、グルカゴン、ＧＴＰ結合蛋白フラグメント、グアニリン、ロイコキニン、マガイニン、マストパラン、デルマセプチン、システミン、ニューロメジン、ニューロテンシン、パンクレスタチン、パンクレアチンポリペプチド、物質Ｐ、セクレチン、チモシン等、（ｃ）酵素、（ｄ）転写または翻訳メディエーター、（ｅ）代謝経路の中間体、（ｆ）免疫モジュレーター、例えば種々のサイトカイン、例えばインターロイキン−１、インターロイキン−２、インターロイキン−３、インターロイキン−４およびガンマ−インターフェロン、および（ｇ）補充的な免疫学的アジュバント、例えば後に記載するものが包含される。
【０１５１】
免疫原性の微粒子組成物の場合は、このような補充的成分は例えば微粒子の表面に吸着、微粒子内部に捕獲、微粒子に未結合のまま溶液中に溶解または分散、微粒子の別のグループに吸着または捕獲させるなどすることができる。
【０１５２】
免疫原性エマルジョン組成物の場合、このような補充的成分は、例えば、エマルジョンの油相内に溶解または分散、エマルジョンの水相内に溶解または分散、エマルジョンの水相と油相の界面に配置するなどが可能である。
【０１５３】
補充的免疫学的アジュバントを用いることにより免疫原性組成物の有効性を増強してよい。例えば、このような免疫学的アジュバントは本発明の免疫原性組成物と同時に、例えば同じ組成物中で、または個別の組成物中で投与してよい。或はこのようなアジュバントは本発明の免疫原性組成物よりも前または後に投与してよい。
【０１５４】
補充的免疫学的アジュバントは例えば（１）アルミニウム塩（アルム）、例えば水酸化アルミニウム、リン酸アルミニウム、硫酸アルミニウム等；（２）サポニンアジュバント、例えばＱｕｉｌＡまたはＱＳ２１（例えばＳｔｉｍｕｌｏｎＴＭ（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ，Ｗｏｒｃｅｓｔｅｒ，ＭＡ））を使用するか、それから生成した粒子、例えばＩＳＣＯＭ（免疫刺激複合体）、このＩＣＯＭＳは例えばＷＯ００／０７６２１に記載の通りさらに洗剤を含有しなくて良い；（３）完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ）および不完全フロイントアジュバント（ＩＦＡ）；（４）サイトカイン、例えばインターロイキン類（例えばＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−１２（ＷＯ９９／４４６３６）等）、インターフェロン類（例えばガンマインターフェロン）、マクロファージコロニー刺激因子（Ｍ−ＣＳＦ）、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）等、（５）ＣｐＧモチーフを含むオリゴヌクレオチド（Ｒｏｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．，１９９７，３．８４９−８５４；Ｗｅｉｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ ＵＳＡ，１９９７，９４，１０８３３−１０８３７；Ｄａｖｉｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９８８，１６０，８７０−８７６；Ｃｈｕ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，１９９７，１８６，１６２３−１６３１；Ｌｉｐｆｏｒｄ ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９７，２７，２３４０−２３４４；Ｍｏｌｄｏｖｅａｎｕ ｅｔ ａｌ．， Ｖａｃｃｉｎｅ，１９８８，１６，１２１６−１２２４，Ｋｒｉｅｇ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，１９９５，３７４，５４６−５４９；Ｋｌｉｎｍａｎ ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ ＵＳＡ，１９９６，９３，２８７９−２８８３：Ｂａｌｌａｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｌ．，１９９６，１５７，１８４９０１８４５；Ｃｏｗｄｅｒｙ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１９９６，１５６，４５７０−４５７５；Ｈａｌｐｅｒｎ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１９９６，１６７，７２−７８；Ｙａｍａｍｏｔｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊｐｎ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，１９８８，７９，８６６−８７３；Ｓｔａｃｅｙ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９６，１５７，２１１６−２１２２；Ｍｅｓｓｉｎａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１９９１，１４７，１７５９−１７６４；Ｙｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１９９６，１５７，４９１８−４９２５；Ｙｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１９９６，１５７，５３９４−５４０２；Ｙｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１９９８，１６０，４７５５−４７６１；およびＹｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１９９８，１６０，５８９８−５９０６；国際特許出願ＷＯ９６／０２５５５、ＷＯ９８／１６２４７、ＷＯ９８／１８８１０、ＷＯ９８／４０１００、ＷＯ９８／５５４９５、ＷＯ９８／３７９１９およびＷＯ９８／５２５８１）、即ち、少なくとも１つのＣＧジヌクレオチド（シトシンヌクレオチドとその後のグアニンヌクレオチド）を含むオリゴヌクレオチドであり、必要に応じてシトシンの代わりに５メチルシトシンを用いたもの；（６）ポリオキシエチレンエーテルまたはポリオキシエチレンエステル、例えばＷＯ９９／５２５４９；（７）ポリオキシエチレンソルビタンエステル界面活性剤をオクトキシノールと組み合わせたもの（ＷＯ０１／２１２０７）またはポリオキシエチレンアルキルエーテルまたはエステル界面活性剤を少なくとも１つの別のノニオン系界面活性剤、例えばオクトキシノールと組み合わせたもの（ＷＯ０１／２１１５２）；（８）サポニンおよび免疫刺激オリゴヌクレオチド（例えばＣｐＧオリゴヌクレオチド）（ＷＯ００／６２８００）；（９）免疫刺激剤および金属塩粒子、例えばＷＯ００／２３１０５；（１０）サポニンおよび水中油エマルジョン、例えばＷＯ９９／１１２４１；（１１）サポニン（例えばＱＳ２１）＋３ｄＭＰＬ＋ＩＬ−１２（必要に応じて＋ステロール）例えばＷＯ９８／５７６５９；（１２）細菌性ＡＤＰリボシル化毒素の無毒化突然変異体、例えばコレラ毒素（ＣＴ）、百日咳毒素（ＰＴ）またはＥ．ｃｏｌｉ熱不安定性毒素（ＬＴ）、特にＬＴ−Ｋ６３（野生型アミノ酸ではリジンが６３位で置換）、ＬＴ−Ｒ７２（野生型アミノ酸ではアルギニンが７２位で置換）、ＣＴ−Ｓ１０９（野生型アミノ酸ではセリンが１０９位で置換え）およびＰＴ−Ｋ９／Ｇ１２９（野生型アミノ酸ではリジンが９位で置換、グリシンが１２９位で置換）（例えば国際特許出願ＷＯ９３／１３２０２およびＷＯ９２／１９２６５参照）；（１３）天然または合成の２本鎖ＲＮＡ（「ｄｓＲＮＡ」）を含むアジュバント、これは一般的には間歇的なリボグアニル酸−リボシチジル酸（［ｒＧ−ｒＣ］）およびリボアデニル酸−ポリリボウリジル酸（［ｒＡ−ｒＵ］）塩基対；詳細は共通保有しているＰＣＴ／ＵＳ０２／３０４２３参照；および（１４）免疫刺激剤として作用して組成物の有効性を増強する他の物質である。
【０１５５】
ムラミルペプチドは、例えばＮ−アセチル−ムラミル−Ｌ−スレオニル−Ｄ−イソグルタミン（ｔｈｒ−ＭＤＰ）、Ｎ−アセチル−ノルムラニル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタム（ｎｏｒ−ＭＤＰ）、Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタミニル−Ｌ−アラニン−２−（１’−２’−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ヒドロキシホスホリルオキシ）−エチルアミン（ＭＴＰ−ＰＥ）等を包含する。
【０１５６】
アジュバントの別の例は、Ｖａｃｃｉｎｅ Ｄｅｓｉｇｎ，Ｔｈｅ Ｓｕｂｕｎｉｔ ａｎｄ ｔｈｅ Ａｄｊｕｖａｎｔ Ａｐｐｒｏａｃｈ，Ｐｏｗｅｌｌ，Ｍ．Ｆ． ａｎｄ Ｎｅｗｍａｎ，Ｍ．Ｊ．ｅｄｓ．，Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ，１９９５を参照できる。
【０１５７】
（６．投与）
処方された後には、本発明の組成物は非経腸、例えば注射（針不使用であってもよい）により投与できる。組成物は例えば皮下、腹腔内、静脈内、動脈内、皮内または筋肉内に注射できる。投与の他の方法は鼻、粘膜、眼内、直腸、膣、口腔および肺への投与、坐剤および経皮または皮内の適用を包含する。
【０１５８】
一部の実施形態において、本発明の組成物は部位特異的ターゲティング送達のために使用できる。例えば、組成物の静脈内投与は肺、肝、脾臓、血液循環系または骨髄をターゲティングするために使用できる。
【０１５９】
上記より明らかな通り、本発明の組成物は一般的に薬学的に受容可能な賦形剤１種以上を含有する。例えば水、食塩水、グリセロール、ポリエチレングリコール、ヒアルロン酸、エタノール等のようなベヒクルを使用してよい。他の賦形剤、例えば水和剤または乳化剤、生物学的緩衝物質等を存在させてよい。生物学的鑑賞物質は、薬学的に許容でき、そして所望のｐＨ、即ち生理学的範囲のｐＨの処方を与えるような実質的には何れの溶液であることもできる。その例としては、食塩水、リン酸塩緩衝食塩水、トリス緩衝食塩水、Ｈａｎｋ緩衝食塩水等が包含される。最終剤型に応じて、当該分野で知られた他の賦形剤、例えばバインダー、錠剤崩壊剤、充填剤（希釈剤）、潤滑剤、滑剤（流動性増強剤）、圧縮補助剤、着色料、甘味料、保存料、懸濁／分散剤、膜形成剤／コーティング、フレーバーおよび印刷インキも導入することができる。
【０１６０】
治療は単一用量日程または多用量日程に従って行ってよい。多用量日程は投与の初期過程を例えば１〜１０個別用量で行い、その後、治療応答の維持および／または強化のために選択された他の用量を、例えば第２用量では１〜４ヶ月、そして必要に応じて数ヵ月後にその後の用量を与える。用量用法は少なくとも部分的には対象の必要性により決定され、そして医師の判断により異なる。
【０１６１】
さらにまた、疾患の予防が望まれる場合は、組成物は一般的には感染症または目的の障害の原発時よりも前に投与する。治療の別の形態、例えば症状または再発の低減または除去が望まれる場合は、組成物は一般的には感染症または目的の障害の原発時の後に投与する。
【０１６２】
（Ｃ．実験）
以下に示すものは、本発明の方法の実施に関する特定の実施形態の例である。実施例は説明を目的とするのみであり、如何なる点においても本発明の範囲を制限する意図はない。
【０１６３】
使用した数値（例えば量、温度等）は正確であるよう努めたが、一部の実験誤差および偏りは当然ながら妥協せざるを得ない。
【実施例】
【０１６４】
（実施例１）
（ブランクＰＬＧ微粒子の製造および特性化）
微粒子は塩化メチレン中ＲＧ５０４重合体（５０：５０のラクチド／グリコリドモル比および分子量４２〜４５ｋＤａを有するＰＬＧ、Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍより入手可能）の６％ｗ／ｖ溶液を用いて製造した。この溶液１０ｍｌを１５０００ｒｐｍで３分間、ホモゲナイザー（Ｕｌｔｒａ−ＴｕｒｒａｘＴ２５ＩＫＡ−Ｌａｂｏｒｔｅｃｈｎｉｋ，Ｇｅｒｍａｎｙ）の１０ｍｍプローブを用いて２．５ｍｌＰＢＳとともにホモゲナイズすることにより、油中水エマルジョンを形成した。このエマルジョンを次に６μｇ／ｍｌジオクチルナトリウムスルホスクシネート（ＤＳＳ）（Ｓｉｇｍａ，ＵＳＡより入手可能）を含有する蒸留水５０ｍｌに添加し、アイスバス中２５分間２０ｍｍプローブ（ＥＳ−１５ Ｏｍｎｉ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，ＧＡ，ＵＳＡ）を装着したホモゲナイザーを用いて極めて高速度でホモゲナイズした。これにより水注油中水エマルジョンが得られ、これを室温で１２時間１０００ｒｐｍで攪拌することにより、塩化メチレンを蒸発させた。得られた微粒子を凍結乾燥した。得られた微粒子は０．０５％ＤＳＳｗｔ／ｗｔを含有していた。得られた微粒子の粒径分布は粒径分布分析器（Ｍａｓｔｅｒ Ｓｉｚｅｒ，Ｍａｌｖｅｒｎ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，ＵＫ）を用いて測定し、０．８〜１．２μｍであることがわかった。
【０１６５】
（実施例２）
（捕獲されたＥｉｓａｉ５７またはＥｉｓａｉ５３を有するＰＬＧ微粒子の製造および特性化）
微粒子は（ａ）クロロホルム懸濁液中のＥｉｓａｉ５７（ＥＲ−８０４０５７，Ｅｉｓａｉ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．，Ｔｏｋｙｏ，ＪＰ）リン脂質３ｍｇ、または（ｂ）エタノール懸濁液中のＥｉｓａｉ５３（ＥＲ−８０４０５３，Ｅｉｓａｉ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．，Ｔｏｋｙｏ，ＪＰ）リン脂質３ｍｇを予め添加した塩化メチレン中ＲＧ５０４ＰＬＧ重合体の６％ｗ／ｖ溶液１０ｍｌを、２．５ｍｌＰＢＳと共に、１０ｍｍプローブ（Ｕｌｔｒａ−Ｔｕｒｒａｘ Ｔ２５ ＩＫＡ−Ｌａｂｏｒｔｅｃｈｎｉｋ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を用いて、３分間、１５０００ｒｐｍでホモゲナイズして油中水エマルジョンを形成することにより製造した。エマルジョン３つの各々を、次に、６μｇ／ｍｌＤＳＳを含有する蒸留水５０ｍｌに添加し、アイスバス中２５分間２０ｍｍプローブ（ＥＳ−１５ Ｏｍｎｉ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，ＧＡ，ＵＳＡ）を装着したホモゲナイザーを用いて極めて高速度でホモゲナイズした。これにより水注油中水エマルジョンが得られ、これを室温で１２時間１０００ｒｐｍで攪拌することにより、塩化メチレンを蒸発させた。得られた微粒子を凍結乾燥した。得られた微粒子は０．０５％ＤＳＳｗｔ／ｗｔを含有していた。得られた微粒子の粒径分布は粒径分布分析器（Ｍａｓｔｅｒ Ｓｉｚｅｒ，Ｍａｌｖｅｒｎ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，ＵＫ）を用いて測定し、０．８〜１．２μｍであることがわかった。
【０１６６】
（実施例３）
（注射可能組成物の製造）
実施例１のＤＳＳ粒子１０ｍｇ（即ち１０ｍｇ／ｍｌ懸濁液１０ｍｌ）をヒスチジン緩衝液（１０ミリモル、ｐＨ５．０）１ｍｌ中のＢ型髄膜炎抗原（「ＭｅｎＢ」）（例えばＰＣＴ／ＩＢ０２／０３９０４；ＷＯ０１／５２８８５；Ｖｏｌ／２８７ Ｓｃｉｅｎｃｅ，１８１６（２０００）参照）１ｍｇと共に室温で一夜インキュベートした。懸濁液に賦形剤（マンニトール：スクロース、４５：１５ｍｇ／ｍｌ）を添加した後に凍結乾燥した。
【０１６７】
これらの組成物は（ａ）注射用水で希釈再調製した後にマウスに筋肉内注射（「ＰＬＧ／ＭｅｎＢ」）、（ｂ）ＴＥ緩衝液中１．０ｍｇ／ｍｌＣｐＧオリゴヌクレオチド（Ｏｌｉｇｏｓ Ｉｎｃ．，ＵＳＡより入手可能）を含有する溶液０．１ｍｌと合わせ（「ＰＬＧ／ＭｅｎＢ＋ｓｏｌＣＰＧ」）てから注射、（ｃ）エタノール中１．０ｍｇ／ｍｌＥＲ−８０４０５３を含有する溶液０．１ｍｌと合わせ（「ＰＬＧ／ＭｅｎＢ＋ｓｏｌＥｉｓａｉ５３」）てから注射、（ｄ）エタノール中１．０ｍｇ／ｍｌＥＲ−８０４０５７を含有する溶液０．１ｍｌと合わせ（「ＰＬＧ／ＭｅｎＢ＋ｓｏｌＥｉｓａｉ５７」）てから注射、（ｅ）実施例２の捕獲ＥＲ−８０４０５３を有する凍結乾燥ＤＳＳ粒子１０ｍｇと合わせ（「ＰＬＧ／ＭｅｎＢ＋ＰＬＧ／Ｅｉｓａｉ５３」）てから注射、または（ｆ）実施例２の捕獲ＥＲ−８０４０５７を有する凍結乾燥ＤＳＳ粒子１０ｍｇと合わせ（「ＰＬＧ／ＭｅｎＢ＋ＰＬＧ／Ｅｉｓａｉ５７」）てから注射した。
【０１６８】
さらにまた、実施例２の捕獲リン脂質を有する凍結乾燥ＤＳＳ粒子１００ｍｇをヒスチジン緩衝液（ｐＨ５．０）１ｍｌ中Ｂ型髄膜炎抗原１．０ｍｇと共に室温で一夜インキュベートした。これらの組成物の各々（本明細書においては「ＰＬＧ／Ｅｉｓａｉ５３／ＭｅｎＢ」または「ＰＬＧ／Ｅｉｓａｉ５７／ＭｅｎＢ」と称する）を直接マウスに筋肉内注射した。
【０１６９】
上記した場合の各々において、マウスは２１日および３５日においてブースター投与した。
【０１７０】
（実施例４）
（ＭＦ５９エマルジョンの製造および特性化）
クロロホルム５００μｌを５０ｍｌ容ビーカーにいれ、１００μｌのＳｐａｎ（登録商標）８５（Ｓｉｇｍａ，ＵＳＡより入手）およびスクワラン１ｍｌ（Ｓｉｇｍａ，ＵＳＡより入手）を添加し、混合した。１００μｌのＴｗｅｅｎ（登録商標）８０（Ｓｉｇｍａ，ＵＳＡより入手）を１８．８ｍｌのＤＩ水に添加し、１５分間攪拌することにより混合した。Ｔｗｅｅｎ（登録商標）溶液を油性混合物に添加し、１分間１０ｍｍプローブ（Ｕｌｔｒａ−Ｔｕｒｎａｘ Ｔ２５ ＩＫＡ−Ｌａｂｏｒｔｅｃｈｎｉｋ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を用いてホモゲナイズした。乳化した混合物をマイクロ流動化装置（Ｍ１１０５型、Ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｃｓ）に９０ｐｓｉで５回通した。残留クロロホルムを３０分間蒸発させた。エマルジョンの粒径は動的光散乱により分析し、粒径分布は＜２００ｎｍであった。
【０１７１】
（実施例５）
（Ｅｉｓａｉ５７およびＥｉｓａｉ５３ＭＦ５９エマルジョンの製造および特性化）
油相に取り込まれたＥｉｓａｉ５７およびＥｉｓａｉ５３を用いて水中油エマルジョンを製造した。慨すれば、８００μｌのクロロホルム中５ｍｇ／ｍｌのＥｉｓａｉ５７および８００μｌのクロロホルム中５ｍｇ／ｍｌのＥｉｓａｉ５３を個別の５０ｍｌ容ビーカーに入れた。クロロホルムは各々約５００μｌの容量となるまで蒸発させた。１００μｌのＳｐａｎ（登録商標）８５およびスクワレン１ｍｌを各々に添加し、混合した。１００μｌのＴｗｅｅｎ（登録商標）を１８．８ｍｌのＤＩ水に添加し、１５分間攪拌することにより混合した。Ｔｗｅｅｎ（登録商標）溶液を各油性混合物に添加し、１分間１０ｍｍプローブ（Ｕｌｔｒａ−Ｔｕｒｎａｘ Ｔ２５ ＩＫＡ−Ｌａｂｏｒｔｅｃｈｎｉｋ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を用いてホモゲナイズした。各々の乳化した混合物をマイクロ流動化装置に９０ｐｓｉで５回通した。エマルジョンの粒径は動的光散乱により分析し、粒径分布は＜２００ｎｍであった。
【０１７２】
（実施例６）
（注射可能組成物の製造）
実施例４および５において形成したエマルジョンの各々０．５ｍｌにＰＢＳ中抗原０．２ｍｇ／ｍｌを含有する溶液０．５ｍｌを添加し、得られた組成物を５分間混合した。使用した抗原は、（ａ）Ｂ型髄膜炎抗原、得られる注射可能組成物は本明細書においては、「ＭＦ５９＋ｓｏｌＭｅｎＢ」、「ＭＦ５９／Ｅｉｓａｉ５３＋ｓｏｌＭｅｎＢ」および「ＭＦ５９／Ｅｉｓａｉ５７＋ｓｏｌＭｅｎＢ」；（ｂ）ＨＩＶｇｐ１２０エンベロープ蛋白（例えばＷＯ００／０６１２３；ＷＯ０２／２６２０９）、得られる注射可能組成物は本明細書においては、「ＭＦ５９＋ｓｏｌｇｐ１２０」、「ＭＦ５９／Ｅｉｓａｉ５３＋ｓｏｌｇｐ１２０」および「ＭＦ５９／Ｅｉｓａｉ５７＋ｓｏｌｇｐ１２０」；（ｃ）ＨＣＶ Ｅ１Ｅ２ポリペプチド（例えばＰＣＴ／ＵＳ０２／２０６７６参照）、得られる注射可能組成物は本明細書においては、「ＭＦ５９＋ｓｏｌＥ１Ｅ２」、「ＭＦ５９／Ｅｉｓａｉ５３＋ｓｏｌＥ１Ｅ２」および「ＭＦ５９／Ｅｉｓａｉ５７＋ｓｏｌＥ１Ｅ２」とした。
【０１７３】
実施例４で形成したエマルジョン０．５ｍｌに（ａ）ＰＢＳ中ＣｐＧオリゴヌクレオチド０．１ｍｇ／ｍｌを含有する溶液０．５ｍｌ、および（ｂ）ＰＢＳ中抗原０．２ｍｇ／ｍｌを含有する溶液０．５ｍｌを添加した。得られた組成物を５分間混合した。使用した抗原は（ａ）Ｂ型髄膜炎蛋白（「ＭＦ５９＋ｓｏｌＭｅｎＢ＋ｓｏｌＣｐＧ」）；（ｂ）ＨＩＶｇｐ１２０エンベロープ蛋白（ＭＦ５９＋ｓｏｌｇｐ１２０＋ｓｏｌＣｐＧ）；（ｃ）ＨＣＶ Ｅ１Ｅ２ポリペプチド（「ＭＦ５９＋ｓｏｌＥ１Ｅ２＋ｓｏｌＣｐＧ」）とした。
【０１７４】
これらの組成物の各々を直接マウスに筋肉内注射した。各々の場合において、マウスには２１日および３５日においてブースター投与した。
【０１７５】
（実施例７）
（インビボ評価）
（抗体試験）
抗原特異的抗体ＩｇＧおよびＩｇＧ異性体タイプ（ＩｇＧ１およびＩｇＧ２ａ）は３，３，５，５’−テトラメチルベンジジン系比色検出を用いてＥＬＩＳＡにより測定した。ＥＬＩＳＡプレート（Ｎｕｃｎ Ｍａｘｉｓｏｒｂ Ｕ９６）を４℃で一夜５μｇ／ｍｌの精製抗原５０μｌでコーティングした。コーティングされたウェルをリン酸塩緩衝食塩水（ＰＢＳ）中５％ヤギ血清（Ｇｉｂｃｏ ＢＲＬ，Ｇｒａｎｄ Ｉｓｌａｎｄ，ＮＹ）１５０μｌで３７℃で１時間ブロッキングした。プレートを洗浄緩衝液（ＰＢＳ、０．３％Ｔｗｅｅｎ−２０）で３回洗浄し、タッピングし、乾燥した。血清試料および血清標準物質は、まずブロッキング緩衝液中に稀釈し、次にコーティングされブロッキングされたプレートに移し、そこで同じ緩衝液を用いて試料を連続３倍希釈した。３７℃１時間インキュベートした後にプレートを洗浄した。セイヨウワサビペルオキシダーゼコンジュゲートヤギ抗マウスＩｇＧガンマ鎖特異的（Ｇａｌｔａｇ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．）を用いて全ＩｇＧを測定し、そして抗マウスＩｇＧ１およびＩｇＧ２を用いてアイソタイプを測定した。３７℃１時間インキュベートした後、プレートを洗浄して未結合の抗体を除去し、ＴＭＢ基質を用いてプレートを展開し、そして呈色反応は１５分後に２ＮのＨＣを添加することによりブロックした。抗体の力価は試料希釈度の逆数として表示し、その場合、希釈試料の光学密度は４５０ｎｍで０．５とした。結果は表２および３Ａ〜３Ｃに示す。
【０１７６】
【表２】
【０１７７】
【表３Ａ】
【０１７８】
【表３Ｂ】
【０１７９】
【表３Ｃ】
要件となる発明の好ましい実施形態を幾分詳細に説明したが、本発明の精神および範囲を外れることなく顕著な変更が可能であると理解される。
【技術分野】
【０００１】
（関連出願の言及）
本出願は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる２００２年１２月２７日出願の米国出願６０／４３６，９１９の優先権を主張する。本出願はまた参照によりその全体が本明細書に組み込まれる２００３年１０月２１日出願の米国出願６０／５１３，０７５の優先権を主張する。
【０００２】
（発明の分野）
本発明は一般的に医薬組成物に関する。特に本発明はリン脂質アジュバントを含む免疫原性組成物に関する。
【背景技術】
【０００３】
（背景）
組み換えＤＮＡ技術により創生されたサブユニットワクチンの出現は安全で効果的なアジュバント含有組成物の必要性を高めている。サブユニットは安全性および製造費用の点で伝統的な生ワクチンおよび非生ワクチンよりも顕著に優れた利点を与える一方で、一般的には免疫家員意対して単離されたポリペプチドまたは単離されたポリペプチドの混合物を与えるものであり、これは例えば全ウィルス、細菌等と比較して限定された免疫原性を有するものである。その結果、これらのワクチンは一般的には顕著な免疫刺激能力を有するアジュバントから利益を被っており、これにより疾患治療における十分な能力に達することができる。
【０００４】
一方で伝統的な生ワクチンは通常はアジュバントを必要としない。さらにまた、非生ワクチンは一般的にはサブユニットワクチンより免疫原性が高く、通常はアジュバントを必要としない。しかしなお、これらのワクチンはサブユニットワクチンと同様、顕著な免疫刺激能力を有するアジュバントから利益を被ることができる。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【０００５】
（発明の要旨）
本発明は顕著な免疫刺激能力を有するアジュバントを含む免疫原性組成物、そして特にリン脂質アジュバントを含む組成物に関する。
【０００６】
本発明の第１の特徴によれば、（ａ）薬学的に受容可能な賦形剤；（ｂ）生体分解性重合体、例えばポリ（α−ヒドロキシ酸）、ポリヒドロキシ酪酸、ポリカプロラクトン、ポリオルトエステル、ポリ無水物およびポリシアノアクリレートから選択される重合体を含む重合体微粒子；（ｃ）微粒子に吸着させた抗原；および（ｄ）リン脂質化合物、例えば（ｉ）典型的には独立して下記ホスフェート基：
【０００７】
【化２３】
および下記ホスホジエステル基：
【０００８】
【化２４】
から選択されるホスホリル基１つ以上（ここでホスホリル基は基Ｐ＝Ｏにより表される）；および（ｉｉ）下記直鎖アルカン基：
【０００９】
【化２５】
［式中、ｎは独立して６〜２０の範囲の整数、即ち６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０である］複数（典型的には３〜１０、より典型的には４〜８、さらに典型的には６つ）を含む合成リン脂質化合物、および適宜、その薬学的に受容可能な塩、を含む免疫原性組成物が提供される。
【００１０】
多くの実施形態において、微粒子はポリ（α−ヒドロキシ酸）、例えばポリ（ラクチド）（「ＰＬＡ」）、ラクチドトグリコリドの共重合体、例えばポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド−ｃｏ−グリコリド）（「ＰＬＧ」）またはＤ，Ｌ−ラクチドとカプロラクトンの共重合体から形成される。ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド−ｃｏ−グリコリド）重合体は／グリコリドのモル比が例えば２０：８０〜８０：２０、２５：７５〜７５：２５、４０：６０〜６０：４０、または５５：４５〜４５：５５のラクチド／グリコリドのモル比を有し、そして、例えば５，０００〜２００，０００ダルトン、１０，０００〜１００，０００ダルトン、２０，０００〜７０，０００ダルトンまたは４０，０００〜５０，０００ダルトンの分子量を有するものが包含される。
【００１１】
抗原、リン脂質および種々の任意の補充的成分は独立して、例えば、（ａ）微粒子の表面に吸着、（ｂ）微粒子内部に捕獲、（ｃ）溶液中、（ｄ）微粒子の別の集団に吸着、および／または（ｅ）微粒子の別の集団内に捕獲してよい。
【００１２】
本発明の第２の特徴によれば、（ａ）水；（ｂ）代謝可能な油；（ｃ）乳化剤；（ｄ）抗原；および（ｅ）上記したもののようなリン脂質化合物を含み、ここで組成物は油相および水相を有する水中油のエマルジョンであり、そして、ここで油相は実質的に全てが直径１ミクロン未満である油滴の形態である免疫原性組成物が提供される。
【００１３】
抗原、リン脂質分子および種々の補充的成分は独立して、エマルジョンの油相（油滴の別の集団も含む）内に溶解または分散、エマルジョンの水相内に溶解または分散、および／またはエマルジョンの水相および油相の間の界面に配置してよい。
【００１４】
代謝可能な油は典型的には動物油（魚油を含む）および植物油、より典型的には炭素原子２０〜４０個を有する不飽和の炭化水素、より典型低的には炭素原子２０〜４０個を有する分枝鎖の多不飽和の炭化水素、例えばテルペノイド、例えばスクワランから選択される。
【００１５】
乳化剤は典型的にはノニオン系界面活性剤少なくとも１つ、より典型的には脂肪酸エステルおよび／またはポリオキシエチレン部分を含む脂肪酸エステル、例えばソルビタン誘導体、例えば、ソルビタン脂肪酸モノエステル、ソルビタン脂肪酸セスキエステル、ソルビタン脂肪酸トリエステル、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸モノエステルおよびポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸トリエステルを含む。より典型的な例においては、乳化剤はポリオキシエチレンソルビタンモノオレエートおよびソルビタントリオレエートを含む。乳化剤が２種以上の界面活性剤を含む場合は、１つの界面活性剤は例えば１〜９のＨＬＢ価を有することができ、他方の界面活性剤は１０〜２０のＨＬＢ価を有することができる。
【００１６】
医薬品類、ホルモン、酵素、転写または翻訳のメディエーター、代謝経路中間体、免疫モジュレーター、付加的な免疫アジュバントおよびこれらの組み合わせを含む補充的成分は本発明の種々の組成物に含有させることができる。
【００１７】
抗原は例えばポリペプチド含有抗原またはポリヌクレオチド含有抗原であることができる。ポリヌクレオチド含有抗原の例は、（ａ）ポリペプチド含有抗原を直接コードする核酸配列（例えばｍＲＮＡ分子）および（ｂ）ポリペプチド含有抗原を間接的にコードするベクターコンストラクト、例えばポリペプチド含有抗原をコードする異種核酸配列を発現するコンストラクト（ＤＮＡベクターコンストラクトおよびＲＮＡベクターコンストラクト）を包含する。
【００１８】
ポリペプチド含有抗原は例えば腫瘍抗原および病原性生物、例えばウィルス、真菌および寄生生物に由来する抗原であることができる。即ち、一部の実施形態においては、ポリペプチド含有抗原は例えばＡ型肝炎ウィルス（ＨＡＶ）、Ｂ型肝炎ウィルス（ＨＢＶ）、Ｃ型肝炎ウィルス（ＨＣＶ）、単純疱疹ウィルス（ＨＳＶ）、ヒト免疫不全ウィルス（ＨＩＶ）、サイトメガロウィルス（ＣＭＶ）、インフルエンザウィルス（例えばＡ型インフルエンザウィルス）および狂犬病ウィルス由来である。別の実施形態においては、ポリペプチド含有抗原は細菌、例えばコレラ、ジフテリア、破傷風、ストレプトコッカス（例えばストレプトコッカスＡおよびＢ）、百日咳、髄膜炎菌（例えばＡ、Ｂ、Ｃ、Ｗ、Ｙ型髄膜炎）、淋菌、ヘリコバクター・ピロリおよびインフルエンザ菌（例えばヘモフィルスインフルエンザタイプＢ菌）由来である。さらに別の実施形態においては、ポリペプチド含有抗原は寄生生物、例えばマラリア寄生生物由来である。
【００１９】
本発明の他の実施形態は本明細書に記載した免疫原性組成物のいずれかを宿主動物に投与することを含む宿主動物への抗原の送達方法に関する。宿主動物は好ましくは脊椎動物、より好ましくは哺乳動物、さらに好ましくはヒトである。
【００２０】
本発明はさらに体液性および／または細胞性免疫応答を誘導するために効果的な量の本明細書に記載の免疫原性組成物のいずれかを動物に投与することを含む、宿主動物における宿主動物内部の体液性免疫応答および／または細胞性免疫応答、例えばＴｈ１免疫応答またはＣＴＬ応答、またはリンパ増殖またはサイトカイン生産を刺激する方法に関する。
【００２１】
別の実施形態においては、本発明は本明細書に記載した免疫原性組成物の何れかの治療有効量を宿主動物に投与することを含む免疫化の方法に関する。
【００２２】
本発明はさらに保護応答を誘導するのに有効な量の本明細書に記載の免疫原性組成物のいずれかを宿主動物に投与することを含む、例えば腫瘍またはウィルス、細菌または寄生生物の感染に対して動物を免疫化する方法に関する。
【００２３】
本発明の免疫原性組成物の送達は何れかの知られた方法、例えば直接の注射、例えば皮下、腹腔内、静脈内または筋肉内）により実施してよい。
【００２４】
従って、本発明の一部の実施形態によれば、例えば、ウィルス、真菌、マイコプラズマ、細菌または原虫の感染に対して、並びに、腫瘍に対して、宿主動物を予防的および／または治療的に免疫化することを含む治療のための組成物および方法が提供される。本発明の方法は宿主、好ましくはヒトに対し、予防的および／または治療的な免疫化をもたらすために有用である。本発明の方法はまた生物医学的な研究用とを含むヒト以外の動物に対しても実施できる。
【００２５】
本発明の他の実施形態は上記組成物を製造するための方法に関する。例えば、上記した重合体微粒子は下記工程、即ち（ａ）水、有機溶媒、生体分解性重合体およびアニオン、カチオン、ノニオンまたは両性イオン系の界面活性剤を含む水中油中水エマルジョンを形成すること；および（ｂ）エマルジョンから有機溶媒を除去して重合体微粒子を形成することを含む方法により製造できる。
【００２６】
別の実施例として、上記エマルジョンは下記工程、即ち（ａ）有機溶媒、水、代謝可能な油および乳化剤を含む混合物を準備すること；および（ｂ）この混合物を、油相が実質的に全てが直径１ミクロン未満である液滴の形態である油中水エマルジョンを生成するために十分な剪断応力に付すこと、を含む方法により製造できる。
【００２７】
本発明の免疫原性組成物の１つの特定の利点は脊椎動物対象における免疫応答を発生させる能力である。従来の抗体応答に加えて、本明細書に記載した組成物は例えば、抗原をさらに認識できるようにする細胞溶解性Ｔ細胞（「ＣＴＬ」）の生産を刺激する目的の抗原へのインビボの細胞性免疫応答が確立できるようにクラスＩＭＨＣ分子との発現抗原の会合をもたらすことができる。さらにまた、ヘルパーＴ細胞による抗原特異的応答も起こる場合がある、従って本発明の方法は種々の抗原に対する細胞および／または体液性の免疫応答を起こすために使用できる。特定の試料として、ウィルス病原体から誘導した抗原は抗体、Ｔ細胞ヘルパーエピトープおよびＴ細胞毒性エピトープを誘導できる。このような抗原にはヒトおよび動物のウィルスによりコードされるものが包含され、そして構造または非構造の蛋白のいずれかに相当することができる。
【００２８】
本発明の上記および他の実施形態、特徴および利点は本明細書の開示を参照すれば当業者が容易に知りえるものである。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２９】
（発明の詳細な説明）
本発明の実施は、特段の記載が無い限り、当業者が知る従来の化学、重合体化学、生化学、分子生物学、免疫学および薬学を使用する。このような技術は文献に詳細に説明されている。例えばＲｅｍｉｎｇｔｏｎｓ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１８ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｅａｓｔｏｎ，Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ：Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ，１９９０）；Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ（Ｓ．Ｃｏｌｏｗｉｃｋ ａｎｄ Ｎ．Ｋａｐｌａｎ，ｅｄｓ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．）；Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌｓ．Ｉ−ＩＶ（Ｄ．Ｍ．Ｗｅｉｒ ａｎｄ Ｃ．Ｃ．Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ，ｅｄｓ．，１９８６，Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ）；Ｓａｍｂｒｏｏｋ，ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（２ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，１９８９）；Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｓｕｒｆａｃｅ ａｎｄ Ｃｏｌｌｏｉｄａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（Ｂｉｒｄｉ，Ｋ．Ｓ．，ｅｄ，ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，１９９７）ａｎｄ Ｓｅｙｍｏｕｒ／Ｃａｒｒａｈｅｒ’ｓ Ｐｏｌｙｍｅｒ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（４ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ， Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ Ｉｎｃ．，１９９６）を参照できる。
【００３０】
上記または後述の部分を含めて本明細書および請求項において使用する限り、内容を特に明示しない限り呼称には複数のものが意図される。即ち、「微粒子」という用語は微粒子１個以上を指す。
【００３１】
特段の記載が無い限り、本明細書に記載する全てのパーセントおよび比は重量に基づくものとする。
【００３２】
（Ａ．定義）
本発明を説明するに際し、以下の用語を用い、そして以下に記載するとおり定義づけられるものとする。
【００３３】
本明細書においては、「微粒子」という用語は直径約１０ｎｍ〜約１５０μｍ、より典型的には直径約２００ｎｍ〜約３０μｍ、そして、より典型的には直径約５００ｎｍ〜約１０〜２０μｍの粒子を指す。本発明の微粒子はある状況下においては凝集してより大きい塊となる場合がある。特定の例として、吸着されたＤＮＡを有する本発明の微粒子は、例えば凍結乾燥前は直径約０．５〜２μｍであるが、同じ粒子が、例えば凍結乾燥後には直径約５〜１５μｍを有する凝集塊となる。微粒子は一般的に針および毛管を閉塞させること無く非経腸または粘膜への投与を可能とする直径のものである。微粒子の大きさは当該分野でよく知られた方法、例えば光量子相関スペクトル分析、レーザー回折計および／または走査電子顕微鏡観察により容易に測定される。「粒子」という用語もまた、本明細書においては、微粒子を指すために使用される場合がある。
【００３４】
本明細書において使用するための重合体微粒子は典型的には滅菌可能であり、実質的に非毒性で生体分解性の物質から形成される。このような物質は生体分解性重合体、例えばポリ（α−ヒドロキシ酸）、ポリヒドロキシ酪酸、ポリカプロラクトン、ポリオルトエステル、ポリ無水物およびポリシアノアクリレート（例えばポリアルキルシアノアクリレート即ちＰＡＣＡ）を包含する。より典型的には、本発明において使用する微粒子はポリ（α−ヒドロキシ酸）、例えばポリ（ラクチド）（「ＰＬＡ」）、またはラクチドトグリコリドの共重合体、例えばポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド−ｃｏ−グリコリド）（「ＰＬＧ」）またはＤ，Ｌ−ラクチドとカプロラクトンの共重合体から誘導される重合体微粒子である。重合体微粒子は、種々の分子量、そしてＰＬＧのような共重合体の場合は、種々の単量体比（例えばラクチド：グリコリド）を有する種々の重合体原料の何れかから誘導してよく、その選択は部分的には同時投与される物質種に応じて広範に変動する。これらのパラメーターは後に詳述する。
【００３５】
本明細書においては、「界面活性剤」という用語は洗剤、分散剤、懸濁剤およびエマルジョン安定化剤を包含するものとする。本発明の重合体微粒子組成物において使用するためのカチオン系界面活性剤は、例えばセチルトリメチルアンモニウムブロミド即ち「ＣＴＡＢ」（例えばセトリミド）、塩化ベンザルコニウム、ＤＤＡ（ジメチルジオクトデシルアンモニウムブロミド）、ＤＯＴＡＰ（ジオレオイル−３−トリメチルアンモニウム−プロパン）等を包含する。アニオン系界面活性剤は例えばＳＤＳ（ドデシル硫酸ナトリウム）、ＳＬＳ（ラウリル硫酸ナトリウム）、ＤＳＳ（ジスルホスクシネート）、硫酸化脂肪アルコール等を包含する。ノニオン系界面活性剤は例えばＰＶＡ、ポビドン（ポリビニルピロリドン即ちＰＶＰとしても知られている）、ソルビタンエステル、ポリソルベート、ポリオキシエチル化グリコールモノエーテル、ポリオキシエチル化アルキルフェノール、ポロキサマー等を包含する。
【００３６】
「サブミクロンエマルジョン」という用語は、本明細書においては、実質的に全てが大きさ１０００ｎｍまで、例えば１０ｎｍ〜１０００ｎｍである油滴を含む水中油エマルジョンを指すものとする。
【００３７】
「医薬品」という用語は生物学的に活性な化合物、例えば抗体、抗ウィルス剤、成長因子、ホルモン、抗原等を指す。
【００３８】
「アジュバント」という用語は医薬品の作用を支援または改変する何れかの物質、例えば抗原への免疫応答を増強または多様化させる免疫学的アジュバントを指す。従って、免疫学的アジュバントは抗原への免疫応答を強化することができる化合物である。免疫学的アジュバントは体液性および／または細胞性免疫を強化できる。
【００３９】
「ポリヌクレオチド」とは核酸重合体である。ポリヌクレオチドは５、６、７または８ヌクレオチド程度の少量のみ含むことができる。ポリヌクレオチドは２本鎖および１本鎖の配列の両方を包含し、そして、例えばウィルス由来ｃＤＮＡ、原核生物または真核生物ｍＲＮＡ、ウィルス由来のゲノムＲＮＡおよびＤＮＡ配列（例えばＲＮＡおよびＤＮＡウィルスおよびレトロウィルス）または原核生物ＤＮＡおよび合成ＤＮＡ配列を指す。用語はまたＤＮＡおよびＲＮＡの既知の塩基類縁体のいずれかを含む配列も含む。用語はさらに、核酸分子が抗原蛋白をコードしているネイティブの配列への修飾、例えば欠失、付加および置換（一般的には保存的な性質）を包含する。これらの修飾は部位指向性突然変異誘発を介する場合のように意図的であってよく、または抗原を生産する宿主の突然変異を介する場合のように偶然であってよい。
【００４０】
本明細書においては、「核酸」という表現はＤＮＡ、ＲＮＡまたはそれらから形成されたキメラを指す。
【００４１】
「ポリヌクレオチド含有物質種」とは少なくともその一部がポリヌクレオチドである分子である。例としてはＲＮＡベクターコンストラクト、ＤＮＡベクターコンストラクト等が包含される。
【００４２】
「ポリペプチド」および「蛋白」という用語はアミノ酸残留物の重合体を指し、生成物の最小長さに限定されない。即ち、ペプチド、オリゴペプチド、二量体、多量体等は定義に包含される。完全長蛋白およびそのフラグメントが定義に包含される。用語はまた、例えば、蛋白が投与される対象に対して免疫応答を誘起するか、治療効果を有する能力を蛋白が温存しているようなネイティブの配列への修飾、例えば欠失、付加および置換（一般的には保存的な性質）を包含する。
【００４３】
「ポリペプチド含有物質種」とは、その少なくとも一部がポリペプチドである分子である。例はポリペプチド、蛋白、例えば糖蛋白、担体蛋白にコンジュゲートした糖抗原等を包含する。
【００４４】
「抗原」とは抗原が提示された場合に細胞抗原特異的免疫応答または体液性抗体応答を示すように宿主の免疫系を刺激することのできるエピトープ１つ以上を含有する分子を意味する。抗原はそれ自体で、または別の分子と組み合わせて提示された場合に、細胞および／または体液性免疫応答を誘起できてもよい。
【００４５】
「エピトープ」とはその免疫学的特異性を決定する抗原分子または抗原複合体の部分である。エピトープは本発明における抗原の定義に包含される。通常はエピトープは天然の抗原内のポリペプチドまたは多糖類である。人工抗原においては、アルサニリン酸誘導体のような低分子量の物質である場合がある。エピトープは例えば相同の抗体またはＴリンパ球とインビボまたはインビトロで特異的に反応する。代替記述法は抗原決定基、抗原構造基およびハプテン基である。
【００４６】
典型的には、エピトープは約５〜１５アミノ酸を含む。ある蛋白のエピトープは当該分野で知られた多くのエピトープマッピング技術のいずれかを用いて発見できる。例えばＥｐｉｔｏｐｅ Ｍａｐｐｉｎｇ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ， Ｖｏｌ．６６（Ｇｌｅｎｎ Ｅ．Ｍｏｒｒｉｓ，Ｅｄ．，１９９６） Ｈｕｍａｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，Ｎｅｗ Ｊｅｒｓｅｙを参照できる。例えば、線状エピトープは例えば、蛋白分子の部分に相当するペプチドを固体支持体上で多数同時に合成し、そして、ペプチドがなお支持体に結合している間に抗体にペプチドを反応させることにより決定してよい。このような技術は当該分野で知られており、例えば米国特許４，７０８，８７１；Ｇｅｙｓｅｎ ｅｔ ａｌ．，（１９８４），Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８１：３９９８−４００２；Ｇｅｙｓｅｎ ｅｔ ａｌ．（１９８６）Ｍｏｌｅｃ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２３：７０９−７１５を参照できる。同様に、コンホーメーションエピトープは例えばＸ線結晶分析および二次元核磁気共鳴によりアミノ酸の空間的コンホーメーションを測定することにより容易に発見される。上出のＥｐｉｔｏｐｅ Ｍａｐｐｉｎｇ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓを参照できる。
【００４７】
本明細書においては、「抗原」という用語は、サブユニット抗原、即ち、天然において抗原が会合している全生物体とは分離され個別化されている抗原、並びに、非生存化、減衰または不活性化された細菌、ウィルス、寄生生物または他の病原体または腫瘍細胞を指す。抗体、例えば抗イディオタイプの抗体またはそのフラグメントおよび抗原または抗原決定基を模倣できる合成ペプチドミモトープもまた本明細書において使用する抗原の定義に含まれる。
【００４８】
同様に、免疫蛋白または抗原決定基を、例えば核酸免疫化適用の場合のように、インビボで発現するオリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドもまた本明細書における抗原の定義に包含される。
【００４９】
さらにまた、本発明の目的のためには「抗原」とは免疫学的応答を誘起する能力を蛋白が温存している限り、ネイティブの配列への修飾、例えば欠失、付加および置換（一般的には保存的な性質）のような修飾を含む蛋白を指す。これらの修飾は部位指向性突然変異誘発を介する場合のように意図的であってよく、または抗原を生産する宿主の突然変異を介する場合のように偶然であってよい。
【００５０】
抗原組成物に対する「免疫学的応答」とは目的の組成物中に存在する分子に対する体液性および／または細胞性免疫応答の対象内における発生を意味する。本発明の目的のためには「体液性免疫応答」とは抗体分子により媒介される免疫応答を指し、「細胞性免疫」とはＴリンパ球および／または他の白血球により媒介されるものである。細胞性免疫の１つの重要な特徴には細胞溶解性Ｔ細胞（「ＣＴＬ」）による抗原特異的応答が関連する。ＣＴＬは主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）によりコードされる蛋白に会合して存在し、細胞表面上で発現されるペプチド抗原に対する特異性を有する。ＣＴＬは細胞内微生物の細胞内破壊またはそのような微生物に感染した細胞の溶解を誘導し、促進する。細胞性免疫別の特徴にはヘルパーＴ細胞による抗原特異的応答が関連している。ヘルパーＴ細胞は機能の促進に寄与し、そしてその表面にＭＨＣ分子が会合しているペプチド抗原を示す細胞に対した非特異的エフェクター細胞の活性に着目している。「細胞性免疫応答」とはまた、サイトカイン、ケモカインおよび活性化Ｔ細胞および／または他の白血球により生産される他のこのような分子、例えばＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞由来であるもの生産を指す。
【００５１】
細胞性免疫応答を誘起する免疫原性組成物またはワクチンのような組成物は細胞表面におけるＭＨＣ分子に会合した抗原の提示により脊椎動物対象を感作する働きを有してよい。細胞媒介免疫応答は、その表面に抗原を提示する細胞を指向するかその近傍にある。さらに、抗原特異的Ｔリンパ球は免疫化された宿主の生来の保護を可能とするように作成することができる。
【００５２】
細胞媒介免疫学的応答を刺激する特定の抗原または組成物の能力は、多くの試験法、例えばリンパ増殖（リンパ球活性化）試験、ＣＴＬ細胞毒性細胞試験により、感作した対象における抗原に特異的なＴリンパ球を試験することにより、または抗原による再刺激に応答したＴ細胞によるサイトカイン生産の測定により調べてよい。このような試験法は当該分野で知られている。例えばＥｒｉｃｋｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（１９９３）１５１：４１８９−４１９９；Ｄｏｅ ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（１９９４）２４：２３６９−２３７６；および以下に記載する実施例を参照できる。
【００５３】
目的とする抗原はまた抗体媒介免疫応答を誘起してもよい。従って、免疫学的応答は以下の作用、即ち：Ｂ細胞による抗体の生産；および／または目的の組成物中に存在する抗原に特異的に指向されたサプレッサーＴ細胞および／またはγδＴ細胞の活性化の１つ以上を含んでよい。これらの応答は感染性の中和のために寄与および／または抗体補完性または抗体依存性の細胞毒性（ＡＤＣＣ）を媒介し、これにより、免疫化された宿主を保護する。このような応答は当該分野でよく知られた標準的な免疫試験法および中和試験法、例えばラジオイムノアッセイおよびＥＬＩＳＡを用いて測定できる。
【００５４】
本発明の免疫原性組成物は、異なる組成物中の抗原の等しい量により誘起される免疫応答よりも免疫応答を誘起する大きい能力を保有する場合に「増強された免疫原性」を示す。即ち組成物は例えば、組成物がより大きい免疫応答を発生させるという理由のために、または投与相手の対象における免疫応答を達成するためにより小用量の抗原が必要であるという理由のために、「増強された免疫原性」を示すのである。このような増強された免疫原性は、例えば本発明の組成物および抗原対照を動物に投与し、二者の試験結果を比較することにより測定できる。
【００５５】
本明細書においては、「治療」（その変形型、例えば「投与する」または「治療された」を含む）とは、（ｉ）問題となる病原体または障害（例えば癌または伝統的なワクチンの場合のような病原性感染症）の予防、（ｉｉ）症状の減少または排除、および（ｉｉｉ）問題となる病原体または障害の実質的または完全な排除のいずれかを指す。治療は予防的（問題となる病原体または障害の到達より前）または治療的（到達後）に行ってよい。
【００５６】
本発明の免疫原性組成物の「有効量」または「医薬品有効量」という用語は本明細書においては、目的の状態を治療または診断するための免疫原性組成物の十分な量を指す。必要となる厳密な量は例えば対象の種、齢および全身状態；治療すべき状態の重症度；目的となる特定の抗原；免疫学的応答の場合は抗体を合成する対象の免疫系の能力および所望の保護の程度；および投与様式などの要因に応じて対象ごとに異なっている。何れの個体の症例における適切な「有効」量も当業者が決定してよい。即ち「治療有効量」は典型的には日常的試行により決定できる比較的広範な範囲にある。
【００５７】
「脊椎動物対象」または「脊椎動物」とは、脊椎動物亜門の何れかのメンバー、例えば哺乳動物、例えばウシ、ヒツジ、ブタ、ヤギ、ウマおよびヒト；家畜動物、例えばイヌおよびネコ；および鳥類、例えば家禽類、野生および狩猟用の鳥類、例えば雄鶏および雌鶏、例えばニワトリ、シチメンチョウおよび他のキジ科の鳥類を包含する。用語は特定の齢を示すものではない。即ち、成熟および新生仔の動物が包含される。
【００５８】
「薬学的に受容可能な」または「薬理学的に許容される」とは、生物学的または他の面において望ましくないものではない物質を指し、即ち、物質は、個体において過剰に望ましくない生物学的作用を誘発したり、または含有される組成物の成分の何れとも過剰に不都合な態様で相互作用をすることなく、個体に投与してよい。
【００５９】
「賦形剤」という用語は採集剤型中に存在してよい何れかの本質的に補助的な物質を指す。例えば、「賦形剤」という用語はベヒクル、バインダー、錠剤崩壊剤、充填剤（希釈剤）、潤滑剤、滑剤（流動増強剤）、圧縮補助剤、着色料、甘味料、保存料、懸濁／分散剤、膜形成剤／コーティング、フレーバーおよび印刷用インクを包含する。
【００６０】
「生理学的ｐＨ」または「生理学的範囲のｐＨ」とは、約７．２〜８．０の範囲、より典型的に歯約７．２〜７．６の範囲のｐＨを意味する。
【００６１】
本明細書においては「ベクターコンストラクト」という表現は一般的には目的の核酸配列または遺伝子の発現を検出できる何れかの組み立て物を指す。ベクターコンストラクトは典型的には転写プロモーター／エンハンサーまたは遺伝子座決定エレメント、または他の手段、例えばオルタナティブスプライシング、各ＲＮＡ移出、メッセンジャーの転写後修飾または蛋白の転写後の修飾により遺伝子発現を制御する他のエレメントを包含する。さらにまた、ベクターコンストラクトは典型的には転写されると目的の配列または遺伝子に作動可能に連結して転写開始配列として作用する配列を包含する。ベクターコンストラクトはまた、必要に応じて、ポリアデニル化を試行するシグナル、選択マーカー、並びに１つ以上の制限部位および翻訳終止配列を含んでよい。さらにまた、ベクターコンストラクトがレトロウィルス内に入れられる場合は、ベクターコンストラクトはパッケージングシグナル、長末端リピート（ＬＴＲ）および使用するレトロウィルスに対して適切なプラス鎖またはマイナス鎖のプライマーの結合部位（これらが既に存在していない場合）を含んでよい。
【００６２】
「ＤＮＡベクターコンストラクト」とは、目的の核酸配列または遺伝子の発現を指向することができるＤＮＡ分子を指す。
【００６３】
ＤＮＡベクターコンストラクトの１つの特定の型はプラスミドであり、これは宿主細胞内で自律複製可能な環状のエピソームＤＮＡ分子である。典型的にはプラスミドは別のＤＮＡセグメントをライゲーションできる環状２本鎖ＤＮＡループである。ｐＣＭＶが当該分野でよく知られた特定のプラスミドである。好ましいｐＣＭＶベクターはＣＭＶの即時型エンハンサー／プロモーターおよびウシ成長ホルモンターミネーターを含有するものである。これはＣｈａｐｍａｎ，Ｂ．Ｓ．，ｅｔ ａｌ．，１９９１，”Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｉｎｔｒｏｎ Ａ ｆｒｏｍ ｈｕｍａｎ ｃｙｔｏｍｅｇａｌｏｖｉｒｕｓ （Ｔｏｗｎｅ） ｉｍｍｅｄｉａｔｅ−ｅａｒｌｙ ｇｅｎｅ ｏｎ ｈｅｔｅｒｏｌｏｇｏｕｓ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｍａｍｍａｌｉａｎ ｃｅｌｌｓ”， Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１９：３９７９−８６に詳述されている。
【００６４】
他のＤＮＡベクターコンストラクトはＲＮＡウィルスに基づくものが知られている。これらのＤＮＡベクターコンストラクトは典型的には、真核細胞内で機能するプロモーター、それに対する転写産物がＲＮＡベクターコンストラクト（例えばアルファウィルスＲＮＡウィルスレプリコン）となるｃＤＮＡ配列の５’、および３’終止領域を含む。ＲＮＡベクターコンストラクトは好ましくは、目的の生成物をコードする選択された非相同の核酸配列による構造蛋白遺伝子の１つ以上の置き換えにより修飾されている、ピコナウィルス、トガウィルス、フラビウィルス、コロナウィルス、パラミキソウィルス、黄熱病ウィルスまたはアルファウィルス（例えばシンドビスウィルス、セムリキフォレストウィルス、ベネズエラウマ脳脊髄膜炎ウィルス、またはロス川ウィルス）を包含する。ＲＮＡベクターコンストラクトはＤＮＡ鋳型からのインビトロの転写により得ることができる。特定の例はシンドビスウィルス系プラスミド（ｐＳＩＮ）、例えば米国特許５，８１４，４８２および６，０１５，６８６並びに国際特許出願ＷＯ９７／３８０８７、ＷＯ９９／１８２２６および共通保有しているＷＯ０２／２６２０９記載のｐＳＩＮＣＰを包含する。このようなベクターの構築は一般的に米国特許５，８１４，４８２および６，０１５，６８６に記載されている。
【００６５】
ベクターコンストラクトの他の例はＲＮＡベクターコンストラクト（例えばアルファウィルスベクターコンストラクト）等を包含する。本明細書においては、「ＲＮＡベクターコンストラクト」、「ＲＮＡベクターレプリコン」および「レプリコン」とは典型的には標的細胞内におけるインビボのそれ自体の増殖または自己複製を指向することができるＲＮＡ分子を指す。ＲＮＡベクターコンストラクトは細胞へのＤＮＡの導入および転写が起こる核への輸送を必要とすることなく直接使用する。宿主細胞の原形質内への直接の送達のためにＲＮＡベクターを使用することにより、自律複製および非相同核酸配列の翻訳が効率的に起こる。
【００６６】
（Ｂ．一般的方法）
（１．リン脂質）
リン脂質化合物を本発明との関連において使用する。実施例には（ａ）１つ以上のホスホリル基（ホスホリル基はＰ＝Ｏ基により示される）、典型的には下記ホスフェート基：
【００６７】
【化２６】
および下記ホスホジエステル基：
【００６８】
【化２７】
から選択されるホスホリル基１つ以上（ここでホスホリル基は基Ｐ＝Ｏにより表される）；および（ｂ）下記直鎖アルカン基：
【００６９】
【化２８】
［式中、ｎは独立して６〜１８の範囲の整数、即ち６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７または１８である］複数（典型的には３〜１０、より典型的には４〜８、さらに典型的には６つ）を含む合成リン脂質化合物ならびに薬学的に受容可能なその塩を包含する。特定の実施形態においては、少なくとも３つ、そして他の実施形態においては少なくとも４つのアルカン基が独立してアルカノイル基、即ち、下記基：
【００７０】
【化２９】
と会合する。特定の実施形態においては、複数、そして特定の実施形態においては少なくとも２つ、３つまたは４つのアルカン基がアルカノイルオキシ基、即ち、下記基：
【００７１】
【化３０】
に相当し、これがさらに例えば、アルカノイルオキシ−アルコキシ基、例えば下記基：
【００７２】
【化３１】
またはアルカノイルオキシ−アルカノイル基、例えば、下記基：
【００７３】
【化３２】
に相当する。
【００７４】
特定の実施形態においては、リン脂質化合物は２つ、３つ、４つまたはそれ以上のジホスホリル基を含む。例えば、リン脂質化合物はジホスフェートリン脂質化合物、またはジホスホジエステルリン脂質化合物であることができる。
【００７５】
多くの実施形態において、リン脂質化合物はグルコサミン２糖類基、例えば下記基：
【００７６】
【化３３】
または単一のグルコサミン糖類基、例えば下記基：
【００７７】
【化３４】
でさえも含まない。別の場合において、リン脂質は全く糖基を含まない。
【００７８】
本発明において使用するためのリン脂質化合物のファミリーの１つの例は、下記式：
【００７９】
【化３５】
［式中、
Ｒ１は下記：
（ａ）Ｃ（Ｏ）；
（ｂ）Ｃ（Ｏ）Ｃ１−１４アルキル−Ｃ（Ｏ）、ここでＣ１−１４アルキルは、必要に応じてヒドロキシ、Ｃ１−５アルコキシ、Ｃ１−５アルキレンジオキシ、Ｃ１−５アルキルアミノまたはＣ１−５アルキル−アリールで置換されており、ここでＣ１−５アルキル−アリールのアリール部分は、必要に応じてＣ１−５アルコキシ、Ｃ１−５アルキルアミノ、Ｃ１−５アルコキシ−アミノ、Ｃ１−５アルキルアミノ−Ｃ１−５アルコキシ、ＯＣ１−５アルキルアミノ−Ｃ１−５アルコキシ、ＯＣ１−５アルキルアミノ−Ｃ（Ｏ）Ｃ１−５アルキルＣ（Ｏ）ＯＨ、ＯＣ１−５アルキルアミノ−Ｃ（Ｏ）Ｃ１−５アルキル−Ｃ（Ｏ）Ｃ１−５アルキルで置換されているもの；
（ｃ）必要に応じてヒドロキシまたはアルコキシで置換されているＣ２〜Ｃ１５の直鎖または分枝鎖のアルキル；および
（ｄ）Ｃ（Ｏ）Ｃ６−１２アリーレン−Ｃ（Ｏ）、ただし、アリーレンは、必要に応じてヒドロキシ、ハロゲン、ニトロまたはアミノにより置換されているもの；
よりなる群から選択され；
ａおよびｂは独立して０、１、２、３または４であり；
ｄ、ｄ’、ｄ’’、ｅ、ｅ’’は独立して１〜４の整数であり；
Ｘ１、Ｘ２、Ｙ１およびＹ２は独立して非存在、酸素、ＮＨおよびＮ（Ｃ（Ｏ）Ｃ１−４アルキル）およびＮ（Ｃ１−４アルキル）２よりなる群から選択され；
Ｗ１およびＷ２は独立してカルボニル、メチレン、スルホンおよびスルホキシドよりなる群から選択され；
Ｒ２およびＲ５は独立して下記：
（ａ）必要に応じてオキソ、ヒドロキシまたはアルコキシで置換されたＣ２〜Ｃ２０の直鎖または分枝鎖のアルキル；
（ｂ）必要に応じてオキソ、ヒドロキシまたはアルコキシで置換されたＣ２〜Ｃ２０の直鎖または分枝鎖のアルケニルまたはジアルケニル；
（ｃ）必要に応じてオキソ、ヒドロキシまたはアルコキシで置換されたＣ２〜Ｃ２０の直鎖または分枝鎖のアルコキシ；
（ｄ）アルキル基が、必要に応じてオキソ、ヒドロキシまたはアルコキシで置換されたＮＨＣ２〜Ｃ２０の直鎖または分枝鎖のアルキル；および
（ｅ）下記基：
【００８０】
【化３６】
｛式中、ＺはＯおよびＮＨよりなる群から選択され、そしてＭおよびＮは独立してＣ２〜Ｃ２０の直鎖または分枝鎖のアルキル、アルケニル、アルコキシ、アシルオキシ、アルキルアミノおよびアシルアミノよりなる群から選択される｝；
よりなる群から選択され；
Ｒ３およびＲ６は独立して、必要に応じてフルオロまたはオキソで置換されたＣ２〜Ｃ２０の直鎖または分枝鎖のアルキルまたはアルケニルよりなる群から選択され；
Ｒ４およびＲ７は独立してＣ（Ｏ）Ｃ２〜Ｃ２０の直鎖または分枝鎖のアルキルまたはアルケニル；Ｃ２〜Ｃ２０の直鎖または分枝鎖のアルキル；Ｃ２〜Ｃ２０の直鎖または分枝鎖のアルコキシ；Ｃ２〜Ｃ２０の直鎖または分枝鎖のアルケニルよりなる群から選択され、ここでアルキル、アルケニルまたはアルコキシ基は独立して、そして必要に応じて、ヒドロキシ、フルオロまたはＣ１〜Ｃ５アルコキシで置換されており；
Ｇ１、Ｇ２、Ｇ３およびＧ４は独立して酸素、メチレン、アミノ、チオール、ＮＨＣ（Ｏ）およびＮ（Ｃ（Ｏ）Ｃ１−４アルキル）よりなる群から選択されるか；またはＧ２Ｒ４またはＧ４Ｒ７は一緒になって水素原子またはヒドロキシルとなる］を有するリン脂質化合物、
または薬学的に受容可能なその塩のファミリーである。
【００８１】
１つの実施形態においては、Ｒ１はＣ（Ｏ）であり；ａ、ｂ、ｄ、ｄ’、ｄ’’、ｅ、ｅ’およびｅ’’は独立して１または２であり；Ｘ１、Ｘ２、Ｙ１およびＹ２はＮＨであり；Ｗ１およびＷ２はカルボニルであり；Ｒ２およびＲ５はオキソで置換されたＣ１０〜Ｃ２０の直鎖または分枝鎖のアルキルであり；Ｒ３およびＲ６はＣ５〜Ｃ１０の直鎖のアルキルであり；Ｒ４およびＲ７はＣ（Ｏ）Ｃ８−Ｃ１１直鎖のアルキルまたはアルケニルであり；そして、Ｇ１、Ｇ２、Ｇ３およびＧ４は酸素である。
【００８２】
本発明との関連において使用するための特定の化合物の例は、下記化合物：
【００８３】
【化３７】
である。
【００８４】
記載した化合物は（Ｒ，Ｒ，Ｒ，Ｒ）エナンチオマー型であるが、他のエナンチオマー型、例えば（Ｒ，Ｓ，Ｓ，Ｒ）型もまた望ましい。これらの化合物はＥｉｓａｉ Ｃｏ．Ｌｔｄ．，Ｔｏｋｙｏ，Ｊａｐａｎの合成化合物であり、そして、ＥＲ８０４０５７およびＥＲ８０４０５３と命名されている。それらは、Ｒ１がＣ（Ｏ）であり；ａおよびｂが２であり；ｄ、ｄ’、ｅおよびｅ’が１であり；ｄ’’およびｅ’’は２であり；Ｘ１、Ｘ２、Ｙ１およびＹ２はＮＨであり；Ｗ１およびＷ２はカルボニルであり；Ｒ２およびＲ５は２位においてオキソで置換されたＣ１３の直鎖または分枝鎖のアルキルであり；Ｒ３およびＲ６はＣ７の直鎖のアルキルであり；Ｒ４およびＲ７はＣ（Ｏ）Ｃ１１の直鎖のアルキルであり；そしてＧ１、Ｇ２、Ｇ３およびＧ４は酸素であるところのナトリウム塩型のリン脂質の上記ファミリーのメンバーである。本化合物は如何なる糖基も含まず；それは、それが２つのホスホジエステル基：
【００８５】
【化３８】
を有することから、２リン脂質化合物（ここではナトリウム塩型）である。この化合物はまた下記直鎖アルカン基：
【００８６】
【化３９】
［式中ｎは独立して６〜１０の整数である］６つを含む。アルカン基の４つは下記アルカノイル基：
【００８７】
【化４０】
［式中ｎは１０である］に相当する。これらのアルカノイル基の２つは下記アルカノイルオキシ基：
【００８８】
【化４１】
に相当し、これはさらに、下記アルカノイルオキシアルコキシ基：
【００８９】
【化４２】
に相当する。
【００９０】
上記化合物に関するその他の情報およびその製造法は例えばＥｉｓａｉ Ｃｏ．，Ｌｔｄへの米国特許６，２９０，９７３に記載されている。
【００９１】
（２．抗原）
本発明は病原体および腫瘍に関わる抗原を含む広範な種類の抗原に対する免疫応答を刺激するために使用できる。
【００９２】
ヘルペスウィルスファミリー由来の抗原、例えば単純疱疹ウィルス（ＨＳＶ）１型および２型から誘導された蛋白、例えばＨＳＶ−１およびＨＳＶ−２糖蛋白ｇＢ、ｇＤおよびｇＨ；水痘帯状疱疹ウィルス（ＶＺＶ）、エプスタイン−バーウィルス（ＥＢＶ）およびサイトメガロウィルス（ＣＭＶ）から誘導された抗原、例えばＣＭＶｇＢおよびｇＨ；および他のヒトヘルペスウィルス、例えばＨＨＶ６およびＨＨＶ７から誘導された抗原を本発明に関連して好都合に使用することができる。（例えばサイトメガロウィルスの蛋白コーディング含量の検討のためにはＣｈｅｅ ｅｔ ａｌ．，Ｃｙｔｏｍｅｇａｌｏｖｉｒｕｓｅｓ （Ｊ．Ｋ．ＭｃＤｏｕｇａｌｌ，ｅｄ．，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ １９９０）ｐｐ．１２５−１６９；種々のＨＳＶ−１コード蛋白の考察のためにはＭｃＧｅｏｃｈ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｇｅｎ．Ｖｉｒｏｌ．（１９８８）６９：１５３１−１５７４；ＨＳＶ−１およびＨＳＶ−２ｇＢおよびｇＤ蛋白およびこれらをコードする遺伝子の考察のためには米国特許５，１７１，５６８；ＥＢＶゲノムの蛋白コーディング配列の発見のためにはＢａｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ（１９８４）３１０：２０７−２１１；およびＶＺＶの検討のためにはＤａｖｉｄｓｏｎ ａｎｄ Ｓｃｏｔｔ，Ｊ．Ｇｅｎ．Ｖｉｒｏｌ．（１９８６）６７：１７５９−１８１６を参照できる）。
【００９３】
ウィルスの肝炎ファミリー、例えばＡ型肝炎ウィルス（ＨＡＶ）、Ｂ型肝炎ウィルス（ＨＢＶ）、Ｃ型肝炎ウィルス（ＨＣＶ）、デルタ肝炎ウィルス（ＨＤＶ）、Ｅ型肝炎ウィルス（ＨＥＶ）およびＧ型肝炎ウィルス（ＨＧＶ）由来の抗原もまた本明細書に記載した技術において好都合に使用できる。例えばＨＣＶのウイルスゲノム配列は配列を得るための方法と同様に知られている。例えば国際特許出願ＷＯ８９／０４６６９；ＷＯ９０／１１０８９；およびＷＯ９０／１４４３６を参照できる。ＨＣＶゲノムは幾つかのウィルス蛋白、例えばＥ１（Ｅとしても知られている）およびＥ２（Ｅ２／ＮＳＩとしても知られている）およびＮ末端ヌクレオカプシド蛋白（「コア」と称される）をコードしている（ＨＣＶ蛋白、例えばＥ１およびＥ２の考察のためにはＨｏｕｇｈｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ（１９９１）１４：３８１−３８８を参照できる）。これらの蛋白の各々、並びにその抗原フラグメントは本発明の組成物および方法において使用できる。
【００９４】
同様に、ＨＤＶ由来のδ−抗原に対する配列も知られており（例えば米国特許５，３７８，８１４参照）、そして、この抗原もまた本発明の組成物および方法において好都合に用いることができる。さらにまた、ＨＢＶから誘導された抗原、例えばコア抗原、表面抗原、ｓＡｇ並びにｐｒｅ−表面配列、ｐｒｅ−Ｓ１およびｐｒｅ−Ｓ２（以前はｐｒｅ−Ｓと称されている）並びにこれらの組み合わせ、例えばｓＡｇ／ｐｒｅ−Ｓ１、ｓＡｇ／ｐｒｅ−Ｓ２、ｓＡｇ／ｐｒｅ−Ｓ１／ｐｒｅ−Ｓ２およびｐｒｅ−Ｓ１／ｐｒｅ−Ｓ２も使用される。例えばＨＶＢこうぞの考察のためには”ＨＢＶ Ｖａｃｃｉｎｅｓ−ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｔｏ ｌｉｃｅｎｓｅ： ａ ｃａｓｅ ｓｔｕｄｙ”， Ｍａｃｋｅｔｔ， Ｍ． ａｎｄ Ｗｉｌｌｉａｍｓｏｎ，Ｊ，Ｄ．，Ｈｕｍａｎ Ｖａｃｃｉｎｅｓ ａｎｄ Ｖａｃｃｉｎａｔｉｏｎ，ｐｐ．１５９−１７６；参照によりその全体が本明細書に組み込まれる米国特許４，７２２，８４０、５，０９８，７０４、５，３２４，５１３；Ｂｅａｍｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．（１９９５）６９：６８３３−６８３８，Ｂｉｒｎｂａｕｍ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．（１９９０）６４：３３１９−３３３０；およびＺｈｏｕ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．（１９９１）６５：５４５７−５４６４を参照できる。
【００９５】
他のウィルスから誘導された抗原は本発明の組成物および方法において使用され、例えばピコナウィルス科（例えばポリオウィルス等）；カルシウイルス科；トガウィルス科（例えば風疹ウィルス、デングウイルス等）；フラビウィルス科；コロナウィルス科；レオウィルス科；ビルナウィルス科；ラボドウィルス科（例えば狂犬病ウィルス等）；フィロウィルス科；パラミクソウィルス科（例えばおたふくかぜウィルス、はしかウィルス、呼吸器シンシチウムウィルス等）；オルトミクソウィルス科（例えばＡ、ＢおよびＣ型インフルエンザウィルス等）；ブンヤウィルス科；アレナウィルス科；レトロウィルス科（例えばＨＴＬＶ−Ｉ；ＨＴＬＶ−ＩＩ；ＨＩＶ−１（ＨＴＬＶ−ＩＩＩ、ＬＡＶ、ＡＲＶ、ｈＴＬＲ等としても知られている））、例えば単離株ＨＩＶＩＩＩｂ、ＨＩＶＳＦ２、ＨＩＶＬＡＶ、ＨＩＶＬＡＩ、ＨＩＶＭＮ）；ＨＩＶ−１ＣＭ２３５、ＨＩＶ−１ＵＳ４；ＨＩＶ−２由来の抗原；サル免疫不全ウィルス（ＳＩＶ）等が挙げられる。さらにまた、抗原はヒト乳頭腫ウィルス（ＨＰＶ）およびダニ媒介脳炎ウィルスから誘導してもよい。例えばこれらおよび他のウィルスの説明についてはＶｉｒｏｌｏｇｙ，３ｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｗ．Ｋ．Ｊｏｋｌｉｋ ｅｄ．１９８８）；Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，２ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｂ．Ｎ．Ｆｉｅｌｄｓ ａｎｄ Ｄ．Ｍ．Ｋｎｉｐｅ，ｅｄｓ．１９９１）を参照できる。
【００９６】
より詳しくは、上記ＨＩＶ単離株、例えばＨＩＶの種々の遺伝子サブタイプのメンバーの何れかに由来するｇｐ１２０またはｇｐ１４０エンベロープ蛋白が知られており、報告されており（例えばＨＩＶ単離株の種々のエンベロープ配列の比較についてはＭｙｅｒｓ ｅｔ ａｌ．，Ｌｏｓ Ａｌａｍｏｓ Ｄａｔａｂａｓｅ，Ｌｏｓ Ａｌａｍｏｓ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｌｏｓ Ａｌａｍｏｓ，Ｎｅｗ Ｍｅｘｉｃｏ（１９９２）；Ｍｙｅｒｓ ｅｔ ａｌ．，Ｈｕｍａｎ Ｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓｅｓ ａｎｄ Ａｉｄｓ，１９９０，Ｌｏｓ Ａｌａｍｏｓ，Ｎｅｗ Ｍｅｘｉｃｏ：Ｌｏｓ Ａｌａｍｏｓ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ；Ｍｏｄｒｏｗ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．（１９８７）６１：５７０−５７８を参照できる）、そしてこれらの単離株の何れかから誘導した抗原を本発明の方法において使用する。さらにまた、本発明は種々のＨＩＶ単離株から誘導した他の免疫原性蛋白、例えば種々のエンベロープ蛋白の何れか、例えばｇｐ１６０およびｇｐ４１、ｇａｇ抗原、例えばｐ２４ｇａｇおよびｐ５５ｇａｇ並びにｐｏｌおよびｔａｔ領域から誘導した蛋白にも等しく適用される。
【００９７】
インフルエンザウィルスは本発明が特に有用となるウィルスの別の例である。特にＡ型インフルエンザのエンベロープ糖蛋白ＨＡおよびＮＡが免疫応答を発生させる場合に特に有利である。Ａ型インフルエンザの多くのＨＡサブタイプが発見されている（Ｋａｗａｏｋａ ｅｔ ａｌ．，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ（１９９０）１７９：７５９−７６７；Ｗｅｂｓｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，”Ａｎｔｉｇｅｎｉｃ ｖａｒｉａｔｉｏｎ ａｍｏｎｇ ｔｙｐｅ Ａ ｉｎｆｌｕｅｎｚａ ｖｉｒｕｓｅｓ”，ｐ．１２７−１６８． Ｐ．Ｐａｌｅｓｅ ａｄｎ Ｄ．Ｗ．Ｋｉｎｇｓｂｕｒｙ（ｅｄ），Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ｏｆ ｉｎｆｌｕｅｎｚａ ｖｉｒｕｓｅｓ． Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）。即ち、上記単離株の何れかから誘導した蛋白もまた本明細書に記載した組成物および方法において使用できる。
【００９８】
本明細書に記載した組成物および方法は多くの細菌性抗原、例えばジフテリア、コレラ、結核、破傷風、百日咳、髄膜炎および他の病理学的状態を誘発する生物、例えばパラ百日咳菌、髄膜炎菌（Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｙ）、淋菌、ヘリコバクター・ピロリおよびインフルエンザ菌、ヘモフィルスインフルエンザタイプＢ菌（ＨＩＢ）、ヘリコバクター・ピロリおよびこれらの組み合わせから誘導されたものに対して使用される。Ｂ型髄膜炎菌由来の抗原の例は、出願人等の以下の特許出願、即ちＰＣＴ／ＵＳ９９／０９３４６；ＰＣＴＩＢ９８／０１６６５；およびＰＣＴＩＢ９９／００１０３に開示されている。寄生生物抗原の例は、マラリヤおよびライム病を誘発する生物から誘導されたものを包含する。
【００９９】
本発明と共に使用する別の抗原は本明細書に記載したものが全てではなく、例えば（ａ）髄膜炎菌の血清群Ｂに由来する蛋白抗原、例えば後に記載する参考文献１〜７に記載されているもの；（ｂ）髄膜炎菌の血清群Ｂに由来する外膜小疱（ＯＭＶ）調製物、例えば記載する参考文献８、９、１０、１１等に記載されているもの；（ｃ）髄膜炎菌の血清群Ａ、Ｃ、Ｗ１３５および／またはＹに由来する糖抗原、例えば血清群Ｃに由来する後記参考文献１２に開示されているオリゴ糖（参考文献１３も参照）；（ｄ）ストレプトコッカス・ニューモニア由来の糖抗原（例えば参考文献１４、１５、１６）；（ｅ）淋菌由来の抗原（例えば参考文献１、２、３）；（ｅ）クラミジア・ニューモニア由来の抗原（例えば参考文献１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３）；（ｆ）クラミジア・トラコーマチス由来の抗原（例えば参考文献２４）；（ｇ）Ａ型肝炎ウィルス由来の抗原、例えば不活性化ウィルス（例えば参考文献２５、２６）；（ｈ）Ｂ型肝炎ウィルス由来の抗原、例えば表面および／またはコア抗原（例えば参考文献２６、２７）；（ｉ）Ｃ型肝炎ウィルス由来の抗原（例えば参考文献２８）；（ｊ）百日咳菌由来の抗原、例えば百日咳菌由来の百日咳ホロトキシン（ＰＴ）およびフィラメント様ヘマグルチニン（ＦＨＡ）を、必要に応じてペルタクチンおよび／またはアグルチノゲン２および３と組み合わせたもの（例えば参考文献２９および３０）；（ｋ）ジフテリア抗原、例えばジフテリアトキソイド（例えば参考文献３１の第３章）、例えばＣＲＭ１９７突然変異体（例えば参考文献３２）；（ｌ）破傷風抗原、例えば破傷風トキソイド（例えば参考文献３１の第４章）；（ｍ）ヘリコバクター・ピロリ由来の蛋白抗原、例えばＣａｇＡ（例えば参考文献３３）、ＶａｃＡ（例えば参考文献３３）、ＮＡＰ（例えば参考文献３４）、ＨｏｐＸ（例えば参考文献３５）、ＨｏｐＹ（例えば参考文献３５）および／またはウレアーゼ；（ｎ）ヘモフィルスインフルエンザタイプＢ菌由来の糖抗原（例えば参考文献１３）；（ｏ）ポルフィラモナス・ギンギバリス由来の抗原（例えば参考文献３６）；（ｐ）ポリオ抗原（例えば参考文献３７、３８）、例えばＩＰＶまたはＯＰＶ；（ｑ）狂犬病抗原（例えば参考文献３９）、例えば凍結乾燥不活性化ウィルス（例えば参考文献４０、ＲａｂａｖｅｒｔＴＭ）；（ｒ）はしか、おたふくかぜおよび／または風疹の抗原（例えば参考文献３１の第９、１０および１１章）；（ｓ）インフルエンザ抗原（例えば参考文献３１の第１９章）、例えばヘマグルチニンおよび／またはノイラミニダーゼ表面蛋白；（ｔ）モラキセラ・カタラリス由来のアンフェ（例えば参考文献４１参照）；（ｕ）ストレプトコッカス・アガラクチア（Ｂ群ストレプトコッカス）由来の抗原（例えば参考文献４２、４３）；（ｖ）ストレプトコッカス・パイオゲン（Ａ群ストレプトコッカス）由来の抗原（例えば参考文献４３、４４、４５）；（ｗ）スタフィロコッカス・アウレウス由来の抗原（例えば参考文献４６）；および（ｘ）これらの抗原の１つ以上を含む複合物を包含する。糖類または炭水化物の抗原を使用する場合は、それは好ましくは免疫原性を増強するために担体蛋白にコンジュゲートする（例えば参考文献４７〜５６）。好ましい担体蛋白は細菌毒素またはトキソイド、例えばジフテリアまたは破傷風のトキソイドである。ＣＲＭ１９７ジフテリアトキソイドが特に好ましい。他の適当な担体蛋白は脳髄膜炎外膜蛋白（例えば参考文献５７）、合成ペプチド（例えば参考文献５８、５９）、熱ショック蛋白（例えば参考文献６０）、百日咳蛋白（例えば参考文献６１、６２）、インフルエンザ菌由来蛋白Ｄ（例えば参考文献６３）、Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ由来の毒素ＡまたはＢ（例えば参考文献６４）等を包含する。混合物が血清群ＡおよびＣの両方に由来する被膜糖を含む場合は、ＭｅｎＡ糖：ＭｅｎＣ糖の比（ｗ／ｗ）は１より大きい（例えば２：１、３：１、４：１、５：１、１０：１以上）であることが好ましい。髄膜炎菌の異なる血清群に由来する糖を同じかまたは異なる担体蛋白にコンジュゲートしてよい。必要に応じて何れかの適当なリンカーを使用しながら、何れかの適当なコンジュゲートゲート形成反応を用いる。毒性蛋白抗原は必要に応じて無毒化してよい（例えば化学的手段による百日咳毒素の無毒化（参考文献３０））。参考となるものは、国際特許出願９９／２４５７８（参考文献１）；国際特許出願ＷＯ９９／３６５４４（参考文献２）；国際特許出願ＷＯ９９／５７２８０（参考文献３）；国際特許出願ＷＯ００／２２４３０（参考文献４）；Ｔｅｔｔｅｌｉｎ ｅｔ ａｌ．，（２０００）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２８７：１８０９−１８１５（参考文献５）；国際特許出願ＷＯ９６／２９４１２（参考文献６）；Ｐｉｚｚａ ｅｔ ａｌ．，（２０００）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２８７：１８１６−１８２０（参考文献７）；国際特許出願ＰＣＴ・ＩＢ０１／００１６６（参考文献８）；Ｂｊｕｎｅ ｅｔ ａｌ（１９９１）Ｌａｎｃｅｔ ３３８（８７７５）：１０９３−１０９６（参考文献９）；Ｆｕｋａｓａｗａ ｅｔ ａｌ．，（１９９０）Ｖａｃｃｉｎｅ １７：２９５１−２９５８（参考文献１０）；Ｒｏｓｅｎｑｖｉｓｔ ｅｔ ａｌ．，（１９９８）Ｄｅｖ．Ｂｉｏｌ．Ｓｔａｎｄ．９２：３２３−３３３（参考文献１１）；Ｃｏｎｓｔａｎｔｉｎｏ ｅｔ ａｌ．，（１９９２）Ｖａｃｃｉｎｅ １０：６９１−６９８（参考文献１２）；Ｃｏｓｔａｎｔｉｎｏ ｅｔ ａｌ．，（１９９９）Ｖａｃｃｉｎｅ １７：１２５１−１２６３（参考文献１３）；Ｗａｔｓｏｎ（２０００）Ｐａｄｉａｔｒ Ｉｎｆｅｃｔ Ｄｉｓ Ｊ１９：３３１−３３２（参考文献１４）；Ｒｕｂｉｎ（２０００）Ｐｅｄｉａｔｒ Ｃｌｉｎ Ｎｏｒｔｈ Ａｍ ４７：２６９−２８５，ｖ（参考文献１５）；Ｊｅｄｒｚｅｊａｓ（２００１）Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ Ｒｅｖ６５：１８７−２０７（参考文献１６）；ＧＢ−００１６３６３．４の優先権を主張する２００１年７月３日出願の国際特許出願（参考文献１７）；Ｋａｌｍａｎ ｅｔ ａｌ．（１９９９）Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ２１：３８５−３８９（参考文献１８）；Ｒｅａｄ ｅｔ ａｌ（２０００）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ ２８：１３９７−４０６（参考文献１９）；Ｓｈｉｒａｉ ｅｔ ａｌ．（２０００），Ｊ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．１８１（Ｓｕｐｐｌ３）：Ｓ５２４−Ｓ５２７（参考文献２０）；国際特許出願ＷＯ９９／２７１０５（参考文献２１）；国際特許出願ＷＯ００／２７９９４（参考文献２２）；国際特許出願ＷＯ００／３７４９４（参考文献２３）；国際特許出願ＷＯ９９／２８４７５（参考文献２４）；Ｂｅｌｌ（２０００）Ｐｅｄｉａｔｒ Ｉｎｆｅｃｔ Ｄｉｓ Ｊ１９：１１８７−１１８８（参考文献２５）；Ｉｗａｒｓｏｎ（１９９５）ＡＰＭＩＳ１０３：３２１−３２６（参考文献２６）；Ｇｅｒｌｉｃｈ ｅｔ ａｌ．（１９９０）Ｖａｃｃｉｎｅ ８ Ｓｕｐｐｌｅ：Ｓ６３−６８＆７９−８０（参考文献２７）；Ｈｓｕ ｅｔ ａｌ．（１９９９）Ｃｌｉｎ Ｌｉｖｅｒ Ｄｉｓ ３：９０１−９１５（参考文献２８）；Ｇｕｓｔａｆｓｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，（１９９６）Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３３４：３４９−３５５（参考文献２９）；Ｒａｐｐｕｏｌｉ ｅｔ ａｌ．（１９９１）ＴＩＢＴＥＣＨ ９：２３２−２３８（参考文献３０）；Ｖａｃｃｉｎｅｓ（１９８８）ｅｄｓ．Ｐｌｏｔｋｉｎ＆Ｍｏｒｔｉｍｅｒ．ＩＳＢＮ ０−７２１６−１９４６−０（参考文献３１）；Ｄｅｌ Ｇｕｉｄｉｃｅ ｅｔ ａｌ．（１９９８）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ａｓｐｅｃｔｓ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ １９：１−７０（参考文献３２）；国際特許出願ＷＯ９３／１８１５０（参考文献３３）；国際特許出願ＷＯ９９／５３３１０（参考文献３４）；国際特許出願ＷＯ９８／０４７０２（参考文献３５）；Ｒｏｓｓ ｅｔ ａｌ．（２００１）Ｖａｃｃｉｎｅ １９：４１３５−４１４２（参考文献３６）；Ｓｕｔｔｅｒ ｅｔ ａｌ．（２０００）Ｐｅｄｉａｔｒ Ｃｌｉｎ Ｎｏｒｔｈ Ａｍ．４７：２８７−３０８（参考文献３７）；Ｚｉｍｍｅｒｍａｎ＆Ｓｐａｎｎ（１９９９）Ａｍ Ｆａｍ Ｐｈｙｓｉｃｉａｎ ５９：１１３−１１８，１２５−１２６（参考文献３８）；Ｄｒｅｅｓｅｎ（１９９７）Ｖａｃｃｉｎｅ １５ Ｓｕｐｐｌ：Ｓ２−６（参考文献３９）；ＭＭＷＲ Ｍｏｒｂ Ｍｏｒｔａｌ Ｗｋｌｙ Ｒｅｐ １９９８ Ｊａｎ １６；４７（１）：１２．１９（参考文献４０）；ＭｃＭｉｃｈａｅｌ（２０００）Ｖａｃｃｉｎｅ １９ Ｓｕｐｐｌ１：Ｓ１０１−１０７（参考文献４１）；Ｓｃｈｕｃｈａｔ（１９９９）Ｌａｎｃｅｔ ３５３（９１４６）：５１−６（参考文献４２）；英国特許出願００２６３３３．５、００２７￥８７２７．６＆０１０５６４０．７（参考文献４３）；Ｄａｌｅ（１９９９）Ｉｎｆｅｃｔ Ｄｉｓ Ｃｌｉｎ Ｎｏｒｔｈ Ａｍ １３：２２７−４３，ｖｉｉｉ（参考文献４４）；Ｆｅｒｒｅｔｔｉ ｅｔ ａｌ．（２００１）ＰＮＡＳ ＵＳＡ ９８：４６５８−４６６３（参考文献４５）；Ｋｕｒｏｄａ ｅｔ ａｌ．（２００１）Ｌａｎｃｅｔ ３５７（９２６４）：１２２５−１２４０；ｐ．１２１８−１２１９（参考文献４６）；Ｒａｍｓａｙ ｅｔ ａｌ．（２００１）Ｌａｎｃｅｔ ３５７（９２５１）：１９５−１９６（参考文献４７）；Ｌｉｎｄｂｅｒｇ（１９９９）Ｖａｃｃｉｎｅ １７ Ｓｕｐｐｌ ２：Ｓ２８−３６（参考文献４８）；Ｂｕｔｔｅｒｙ＆Ｍｏｘｏｎ（２０００）Ｊ Ｒ Ｃｏｌｌ Ｐｈｙｓｉｃｉａｎｓ Ｌｏｎｄｏｎ ３４：１６３−１６８（参考文献４９）；Ａｈｍａｄ＆Ｃｈａｐｎｉｃｋ（１９９９）Ｉｎｆｅｃｔ Ｄｉｓ Ｃｌｉｎ Ｎｏｒｔｈ Ａｍ １３：１１３−１３３，ｖｉｉ（参考文献５０）；Ｇｏｌｄｂｌａｔｔ（１９９８）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．４７：５６３−５６７（参考文献５１）；欧州特許０４７７５０８（参考文献５２）；米国特許５，３０６，４９２（参考文献５３）；国際特許出願ＷＯ９８／４２７２１（参考文献５４）；Ｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｖａｃｃｉｎｅｓ （ｅｄｓ．Ｃｒｕｓｅ ｅｔ ａｌ．）ＩＳＢＮ ３８０５５４９３２６，ｖｏｌ．１０：４８−１１４（参考文献５５）；Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ（１９９６）Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ＩＳＢＮ：０１２３４２３３６８＆０１２３４２３３５Ｘ（参考文献５６）；欧州特許出願０３７２５０１（参考文献５７）；欧州特許出願０３７８８８１８（参考文献５８）；欧州特許出願０４２７３４７（参考文献５９）；国際特許出願ＷＯ９３／１７７１２（参考文献６０）；国際特許出願ＷＯ９８／５８６６８（参考文献６１）；欧州特許出願０４７１１７７（参考文献６２）；国際特許出願ＷＯ００／５６３６０（参考文献６３）；国際特許出願ＷＯ００／６１７６１（参考文献６４）である。
【０１００】
ジフテリア抗原を組成物に含有させる場合は、破傷風抗原および百日咳抗原も含有させることが好ましい。同様に、破傷風抗原を含有させる場合は、ジフテリアおよび百日咳抗原を含有させることが好ましい。同様に百日咳抗原を含有させる場合は、ジフテリアおよび破傷風抗原を含有させることが好ましい。
【０１０１】
別の抗原にはペスト、ロッキー山紅斑熱、痘瘡、チフス様、チフス、ネコ白血病ウィルスおよび黄熱病を指向した抗原も包含される。
【０１０２】
（３．免疫原性エマルジョン組成物）
本発明の種々の実施形態は免疫原性エマルジョン組成物に関する。リン脂質および抗原物質種（上記）、並びに、任意の補充的成分（上記）に加えて、本発明の免疫原性エマルジョン組成物は（ａ）水、（ｂ）代謝可能な油、および（ｃ）乳化剤を好都合に含んでいる。典型的には、免疫学的エマルジョンは油滴の実質的に全てが直径１ミクロン未満、典型的には２５０ｎｍ未満である水中油エマルジョンである。特定の実施形態においては、組成物は何れかのポリオキシプロピレン−ポリオキシエチレンブロック共重合体の非存在下に存在する。
【０１０３】
これらの免疫原性エマルジョン組成物は典型的には油０．５〜２０容量％、より典型的には油１〜１０容量％、そしてさらに典型的には油２〜６容量％；および水８０〜９９．５容量％、より典型低には９０〜９９容量％を含む。組成物はやはり典型的には、乳化剤約０．００１〜約５重量％、より典型的には乳化剤０．００１〜１重量％、さらに典型的には乳化剤０．０１〜０．１重量％；リン脂質約０．１〜５重量％、より典型的にはリン脂質０．５〜１重量％；ポリペプチド含有抗原を使用する場合は、ポリペプチド含有抗原約０．１〜５重量％、より典型的にはポリペプチド含有抗原０．５〜１重量％；そしてポリヌクレオチド含有抗原を使用する場合は、ポリヌクレオチド含有抗原約０．１〜２０重量％、より典型的にはポリヌクレオチド含有抗原約１〜１０重量％を含む。
【０１０４】
代謝可能な油は通常は炭素原子約６〜約３０個を有するもの、例えばアルカン、アルケン、アルキンおよびこれらの相当する酸およびアルコール、そのエーテルおよびエステルおよびそれらの混合物である。油は本質的には何れかの植物性の油、魚油、動物性油または合成により製造された油であって、免疫原性エマルジョン組成物の投与対象である宿主動物の身体で代謝されることができ、そして、対象に対して実質的に毒性ではないものである。鉱物油および同様の毒性石油蒸留油は本発明から除外される。
【０１０５】
例えば本発明の油成分は何れかの長鎖アルカン、アルケンまたはアルキン、またはその酸またはアルコール誘導体、例えば遊離酸、その塩またはエステル、例えばモノ、またはジまたはトリエステル、例えばトリグリセリド、１，２−プロパンジオールのエステル、または同様の多価アルコールであることができる。アルコールは網のまたは多官能性の酸、例えば酢酸、プロパン酸、クエン酸等を用いてアシル化できる。油であり上記した基準に合致する長鎖アルコールから誘導されたエーテルも使用できる。
【０１０６】
個々のアルカン、アルケンまたはアルキン部分およびその酸またはアルコール誘導体は一般的に炭素原子約６〜約３０個を有する。この部分は直鎖または分枝鎖の構造であることができる。完全飽和または１つ以上の二重または三重結合を有することができる。モノまたはポリエステルまたはエーテル系の油を使用する場合は、全炭素数ではなく個々の脂肪酸または脂肪アルコール部分について約６〜約３０炭素原子の制限が適用される。
【０１０７】
特定の例として、多くの魚類は容易に回収できる代謝可能な油を含有している。例えばタラ肝油、サメ肝油および鯨油、例えば鯨蝋が魚油の数例として挙げることができ、これらを本発明において使用してよい。多くの分枝鎖の油は５炭素イソプレン単位において生化学的に合成でき、そして一般的にはテルペノイドと称される。サメ肝油はスクワレン、即ち２，６，１０，１５，１９，２３−ヘキサメチル−１，６，１０，１４，１８，２２−テトラコサヘキサアエンとして知られている分枝鎖不飽和テルペノイドを含有する。魚油、例えばスクワレンおよびスクワラン、スクワレンの飽和類縁体は市販品を容易に入手でき、あるいは、当該分野で知られた方法により得てよい。
【０１０８】
多数の安定な乳化剤（本明細書においては界面活性剤、洗剤等とも称する）が医薬品科学において使用され、その多くが、十分非毒性であるかぎり、本発明の免疫原性エマルジョン組成物において有用である。これらには天然から誘導された物質、例えば樹木から誘導したが無類、植物性蛋白、糖系の重合体、例えばアルギネートおよびセルロース等が包含される。炭素骨格上にヒドロキシドまたは他の親水性置換基を有する特定のオキシ重合体または重合体は界面活性を有し、例えばポビドン、ポリビニルアルコールおよびグリコールエーテル系の１官能性または多官能性の化合物が挙げられる。長鎖脂肪酸誘導化合物が本発明において使用できる乳化剤の別の多く名グループを形成する。
【０１０９】
本発明において使用できる適当な乳化剤の特定の例は以下に示す通りである。（１）水溶性石鹸、例えば高級脂肪酸（Ｃ１０−Ｃ２２）のナトリウム、カリウム、アンモニウムおよびアルカノールアンモニウム塩、および特にナトリウムおよびカリウムタローおよびココナツ石鹸。（２）アニオン系合成非石鹸洗剤であって、炭素原子約８〜２２個およびスルホン酸および硫酸エステル基よりなる群から選択される基を含むアルキル基をその分子構造に有する有機の硫酸反応性生物の水溶性の塩として代表されるもの。
【０１１０】
（３）有機疎水性化合物とのアルキレンオキシド基の縮合により生成されるノニオン系合成洗剤。典型的な疎水性基はプロピレンオキシドのプロピレングリコールとの縮合生成物、アルキルフェノール、プロピレンオキシドとエチレンジアミンの縮合生成物、炭素原子８〜２２個を有する脂肪族アルコール、および脂肪酸のアミドを包含する。
【０１１１】
（４）ノニオン系洗剤、例えばアミンオキシド、ホスフィンオキシドおよびスルホキシドであって半極性の特性を有するもの。（５）長鎖スルホキシド、例えば式Ｒ１ＳＯＲ２に相当するもの、ただしここでＲ１およびＲ２は置換または未置換のアルキル基であり、前者は炭素原子約１０〜約２８個を含み、Ｒ２は炭素原子１〜３個を含む。（６）両性合成洗剤、例えば３−ドデシルアミノプロピオン酸ナトリウムおよび３−ドデシルアミノプロパンスルホン酸ナトリウム。（７）両性イオン合成洗剤、例えば３−（Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−ヘキサデシルアンモニオ）プロパン−１−スルホネートおよび３−（Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−ヘキサデシルアンモニオ）−２−ヒドロキシプロパン−１−スルホネート。
【０１１２】
上記段落に記載したものを除外する必然性は無いが、以下の型の乳化剤、即ち（ａ）脂肪酸、ロジン酸およびトール油の石鹸（即ちアルカリ塩）；（ｂ）アルキルアレンスルホネート；（ｃ）アルキルスルフェート、例えば分枝鎖および直鎖の両方の疎水性の基、並びに、第１および第２スルフェート基を有する界面活性剤；（ｄ）疎水性および親水性の基の間に中間的結合を含むスルフェートおよびスルホネート、例えば脂肪アシル化メチルタウリドおよび硫酸化脂肪モノグリセリド；（ｅ）ポリエチレングリコールの長鎖酸エステル、特にトール油エステル；（ｆ）アルキルフェノールのポリエチレングリコールエーテル；（ｇ）長鎖アルコールおよびメルカプタンのポリエチレングリコールエーテル；および（ｈ）脂肪アシルジエタノールアミドもまた本発明の免疫原性エマルジョン組成物中に使用できる。
【０１１３】
生物学的状況に対して特に設計され、そして一般的に使用されている多くの乳化剤がある。例えば、多くの生物学的洗剤（界面活性剤）が例えばＳｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐａｎｙ の１９８７ Ｃａｔａｌｏｇ ｏｆ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ ａｎｄ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓの３１０〜３１６ページに列挙されている。このような界面活性剤は４種の基本的な型、即ち、アニオン系、カチオン系、両性イオン系およびノニオン系に分類される。アニオン系洗剤の例はアルギン酸、カプリル酸、コール酸、１−デカンスルホン酸、デオキシコール酸、１−ドデカンスルホン酸、Ｎ−ラウロイルサルコシンおよびタウロコール酸を包含する。カチオン系洗剤は臭化ドデシルトリメチルアンモニウム、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンジルジメチルヘキサデシルアンモニウム、塩化セチルピリジニウム、塩化メチルベンゼトニウムおよび４−ピコリンドデシルスルフェートを包含する。両性イオン洗剤の例は３−［（３−クロロアミドプロピル）−ジメチルアンモニオ］−１−プロパンスルホネート（一般的にはＣＨＡＰＳと略記）、３−［（クロラミドプロピル）ジメチルアンモニオ］−２−ヒドロキシ−１−プロパンスルホネート（一般的にはＣＨＡＰＳＯと略記）、Ｎ−ドデシル−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−アンモニオ−１−プロパンスルホネートおよびリソ−アルファ−ホスファチジルコリンを包含する。ノニオン系洗剤の例はデカノイル−Ｎ−メチルグルカミド、ジエチレングリコールモノペンチルエーテル、ｎ−ドデシルベータ−Ｄ−グルコピラノシド、脂肪アルコールのエチレンオキシド縮合物（例えばＬｕｂｒｏｌの商品名で販売されているもの）、脂肪酸のポリオキシエチレンエーテル（特にＣ１２−Ｃ２０脂肪酸）、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル（例えばＴｗｅｅｎ（登録商標）の商品名で販売）およびソルビオタン脂肪酸エステル（例えばＳｐａｎ（登録商標）の商品名で販売）を包含する。
【０１１４】
界面活性剤の特に有用なグループはソルビタン系のノニオン系界面活性剤である。これらの界面活性剤は典型的にはソルビトールを脱水して１，４−ソルビタンとし、これを次に１等量以上の脂肪酸と反応させることにより製造する。脂肪酸置換部分はさらにエチレンオキシドと反応させて界面活性剤の第２のグループとしてよい。
【０１１５】
脂肪酸置換ソルビタン界面活性剤は典型的には１，４−ソルビタンを脂肪酸、例えばラウリル酸、パルミチン酸、ステアリン酸、オレイン酸または同様の調査脂肪酸と反応させて１，４−ソルビタンモノエステル、１，４−ソルビタンセスキエステルまたは１，４−ソルビタントリエステルとすることにより製造する。これらの界面活性剤の一部に対する共通の名称は、例えば、ソルビタンモノラウレート、ソルビタンモノパルミテート、ソルビタンモノステアレート、ソルビタンモノオレエート、ソルビタンセスキオレエートおよびソルビタントリオレエートを包含する。これらの界面活性剤はＳＰＡＮ（登録商標）またはＡＲＬＡＣＥＬ（登録商標）の商品名で市販されている。
【０１１６】
ＳＰＡＮ（登録商標）およびＡＲＬＡＣＥＬ（登録商標）界面活性剤は親油性であり、一般的には油中に可溶または分散性である。それらはまた大部分の有機溶媒に可溶である。水中ではこれらは一般的には不溶であるが分散可能である。一般的にこれらの界面活性剤は１．８および８．６の間の親水性−親油性バランス（ＨＬＢ）を有する。このような界面活性剤は当該分野で知られた手段により容易に製造できるか、または例えばＩＣＩ Ａｍｅｒｉｃａ’ｓ Ｉｎｃ．，Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＤＥから登録商標ＡＴＬＡＳ（登録商標）の下に販売されている。
【０１１７】
界面活性剤の関連するグループはポリオキシエチレンソルビタンモノエステルおよびポリオキシエチレンソルビタントリエステルを含む。これらの物質は典型的にはエチレンオキシドを１，４−ソルビタンモノエステルまたはトリエステルに添加することにより製造する。ポリオキシエチレンの添加は親油性のソルビタンモノまたはトリエステル界面活性剤を一般的には水中に可溶または分散可能であり、そして様々な程度で有機性液体に可溶である親水性の界面活性剤に変換する。ＴＷＥＥＮ（登録商標）界面活性剤は例えば関連するソルビタンモノエステルまたはトリエステル界面活性剤と組み合わせることによりエマルジョンの安定性を向上させる。ＴＷＥＥＮ（登録商標）界面活性剤は一般的に９．６および１６．７の間のＨＬＢ値を有する。ＴＷＥＥＮ（登録商標）界面活性剤は多くの製造元、例えばＩＣＩ Ａｍｅｒｉｃａ’ｓ Ｉｎｃ．，Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，Ｄｅｌ．より、登録商標ＡＴＬＡＳ（登録商標）界面活性剤の下で販売されている。
【０１１８】
単独またはＳＰＡＮ（登録商標）、ＡＲＬＡＣＥＬ（登録商標）および／またはＴＷＥＥＮ（登録商標）界面活性剤と組み合わせて使用されるノニオン界面活性剤の別の群はエチレンオキシドと長鎖脂肪酸との反応により製造されるポリオキシエチレン脂肪酸である。この型の最も一般的な市販の界面活性剤はＮＹＲＪ（登録商標）の名称で販売されている固体であり、そしてステアリン酸のポリオキシエチレン誘導体である。ＭＹＲＪ（登録商標）界面活性剤はＴＷＥＥＮ（登録商標）と同様、親水性であり、そして水中に可溶または分散可能である。ＭＹＲＪ（登録商標）界面活性剤は、エマルジョンの形成において使用するためには、例えばＴＷＥＥＮ（登録商標）界面活性剤と、またはＴＷＥＥＮ（登録商標）／ＳＰＡＮ（登録商標）と、またはＡＲＬＡＣＥＬ（登録商標）界面活性剤混合物とブレンドしてよい。ＭＹＲＪ（登録商標）界面活性剤は当該分野で知られた方法により製造するか、またはＩＣＩ Ａｍｅｒｉｃａ’ｓ Ｉｎｃ．から購入してよい。
【０１１９】
ポリオキシエチレン系のノニオン系界面活性剤の別のグループはラウリル、アセチル、ステアリルおよびオレイルアルコールから誘導したポリオキシエチレン脂肪酸エーテルである。これらの物質は典型的にはエチレンオキシドを脂肪アルコールに添加することにより上記したとおり製造する。これらの界面活性剤の市販品の名称はＢＲＩＪ（登録商標）である。ＢＲＩＪ（登録商標）界面活性剤は界面活性剤中のポリオキシエチレン部分のサイズにより親水性または親油性となる。これらの化合物の製造は当該分野において可能であるが、ＩＣＩ Ａｍｅｒｉｃａ’ｓ Ｉｎｃのような販売元から容易に入手することもできる。
【０１２０】
本発明の実施において使用してよい他のノニオン系界面活性剤は、例えば、ポリオキシエチレン、ポリオール脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンエーテル、ポリオキシプロピレン脂肪エーテル、ポリオキシエチレン含有蜜蝋誘導体、ポリオキシエチレンラノリン誘導体、ポリオキシエチレン脂肪グリセリド、グリセロール脂肪酸エステルまたは他のポリオキシエチレン酸アルコールまたは炭素原子１２〜２２個の長鎖脂肪酸のエーテル誘導体である。
【０１２１】
上記したとおり、特定の実施形態においては、２種以上の界面活性剤を本発明の免疫原性エマルジョン組成物中で組み合わせる。例えば、免疫原性エマルジョン組成物は１〜９のＨＬＢ価を有する親水性乳化剤および１０〜１８のＨＬＢ価を有する親油性乳化剤を含むことができる。特定の例として、ソルビタン脂肪酸エステルはポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステルと組み合わせることができる（これらの乳化剤の一部とそのＨＬＢ価を示した下記の表１参照）。
【０１２２】
【表１】
本発明の免疫原性エマルジョン組成物は一般的に非経腸投与を意図しているため、免疫原性組成物の張力、即ち浸透圧は、典型的には、例えば組成物と通常の生理学的液体との間の溶質の濃度の相違による組成物の投与後の膨潤または急速な吸収を防止するためには、生理学的液体と適合性を有するものである。本質的に何れかの生理学的に許容される溶質、例えば塩化ナトリウムを、浸透圧の調節のために使用することができる。
【０１２３】
エマルジョン組成物はまた典型的には正常な生理学的条件に適合するｐＨを維持するために緩衝性を付与される。さらにまた、特定の実施形態においては、グリコペプチドのような特定の組成物成分の安定性を確保するため特定の水準に維持することが必要である。何れかの生理学的に許容される緩衝物質、例えばリン酸塩緩衝物質を本明細書において使用できる。他の許容される緩衝物質、例えば酢酸塩、トリス、重炭酸塩、炭酸塩等もまた同様に使用できる。水性成分のｐＨは典型的には約６．０〜８．０である。
【０１２４】
サブミクロンのエマルジョンをまず調製する場合は、エマルジョンの水性成分としては典型的には純粋な水を使用するが、その理由は、例えば、漸増塩濃度は所望の小さい液滴サイズを達成することをより困難にするためである。
【０１２５】
しかしながらエマルジョンを形成した後には、張力およびｐＨを例えば溶質および／または適切な緩衝物質の添加により適宜調節できる。一部の実施形態においては、抗原は最終免疫原性組成物に所望の浸透圧とｐＨを付与するために適切な浸透圧およびｐＨを有する緩衝溶液中に添加することができる。同様に、一部の実施形態においては、リン脂質を適切な浸透圧およびｐＨを有する緩衝溶液中に溶解または分散してエマルジョンに添加することができる。
【０１２６】
本発明の免疫原性エマルジョン組成物は当該分野でよく知られた数種の方法の何れかを用いて調製する。好ましくは、本発明のエマルジョン組成物はサブミクロンの油滴の水注油エマルジョン、即ち、直径約１ミクロン未満でありナノメートルの粒径範囲である分散（油）層液滴を有するエマルジョンの形態である。例えば高圧下に小型の穿孔に液体を強制的に通過させることにより生じさせた高剪断力の原理により作動する市販の乳化装置を用いることができる。市販の乳化装置の例は、Ｍｏｄｅｌ １１０Ｙマイクロ流動化装置（Ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｃｓ， Ｎｅｗｔｏｎ， Ｍａｓｓ．）、Ｇａｕｌｉｎ Ｍｏｄｅｌ３０ＣＤ（Ｇａｕｌｉｎ，Ｉｎｃ．，Ｅｖｅｒｅｔｔ，Ｍａｓｓ．）およびＲａｉｎｎｉｅ Ｍｉｎｉｌａｂ Ｔｙｐｅ８．３０Ｈ（Ｍｉｒｏ Ａｔｏｍｉｚｅｒ Ｆｏｏｄ ａｎｄ Ｄａｉｒｙ，Ｉｎｃ．，Ｈｕｄｓｏｎ，Ｗｉｓ．）である。個々のエマルジョンと共に使用する適切な圧力は当業者が容易に決定できる。代謝可能な油エマルジョンに関するその他の情報は例えば共通保有している国際特許出願ＷＯ００／５０００６記載および米国特許６，２９９，８８４号に記載されている。
【０１２７】
油滴の粒径は例えば乳化剤の油に対する比（比が増大すると液滴粒径は典型的には減少する）、操作圧力（作動圧力が増大すると液滴粒径は典型的には減少する）および操作温度（温度が上昇すると液滴粒径は典型的には減少する）を変化させることにより変動させることができる。液滴粒径はまた、使用する特定の乳化剤および油、並びに、乳化の際に存在する他の成分（例えばリン脂質、抗原および以下に記載する任意の補充的化合物）に応じて変化する。
【０１２８】
液滴の粒径はサイジング機器、例えば市販のＣｏｕｌｔｅｒ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ製のＳｕｂ−Ｍｉｃｒｏｎ Ｐａｒｔｉｃｌｅ Ａｎａｌｙｚｅｒ（Ｍｏｄｅｌ Ｎ４ＭＤ）およびを用いて評価でき、そして方法のパラメーターは例えば実質的に全ての液滴が直径１ミクロン未満、典型的には直径０．８ミクロン未満、より典型的には直径０．５ミクロン未満となるまで上記した指針を用いて変化させることができる。「実質的に全て」とは少なくとも約８０％（数に基づく）、典型的には少なくとも約９０％、より典型的には約９５％またはさらには少なくとも９８％を意味する。粒径分布は、平均直径が記載した限度より小さくなるためには、典型的にはガウス分布である。
【０１２９】
１つの特徴的な例によれば、リン脂質、代謝可能な油、１〜９のＨＬＢ値を有する乳化剤、そして必要に応じて有機溶媒を合わせることにより油相とする。同時に、１０〜１８の範囲のＨＬＢ値を有する乳化剤を水または別の水溶液と合わせることにより水相とする。油相および水相を合わせ、高剪断の装置に付し、所望の粒径を有する分散（油相）粒子を含有するエマルジョンを形成する。方法は好ましくは何れの残留有機溶媒も除去することにより完了する。
【０１３０】
目的の抗原は多くの手法により本発明の免疫原性エマルジョン組成物内に存在させることができる。典型的には、エマルジョンは水、代謝可能な油、乳化剤、および必要に応じてリン脂質から、上記したとおり調製し、その後、ワクチンにおいて用いられる抗原を添加する。記載した通り、エマルジョンはまず、純粋な水（例えば脱イオン水）を用いて調製し、次に適切な緩衝液中の抗原を添加することにより所望の浸透圧およびｐＨを有する最終組成物を形成する。エマルジョン組成物は典型的には安定であるため、抗原およびエマルジョンは単純な振とうにより混合できる。他の手法、例えば抗原およびエマルジョンを急速に小型開口部（例えば注射針）を通過させること等によっても、有用なワクチン組成物を容易に得ることができる。しかしながら、目的の抗原をエマルジョン組成物の形成後に添加することは必須ではない。むしろ、抗原は上記した通り乳化よりも前に添加できる。
【０１３１】
種々の成分、例えばリン脂質および／または以下に記載する任意の補充的成分は、例えば乳化の前後において、（ａ）油溶性または油分散性形態においては油相に付加的成分を添加することにより、または（ｂ）水溶性または水分散性形態においては水相に付加的成分を添加することにより、本発明のエマルジョン組成物に導入できる。
【０１３２】
（４．免疫原性微粒子組成物）
本明細書に記載した免疫原性微粒子組成物を形成するための有用な生体分解性の重合体はポリヒドロキシ酪酸（ポリヒドロキシブチレートとも称する）；ポリヒドロキシ吉草酸（ポリヒドロキシバレレートとも称する）；ポリグリコール酸（ＰＧＡ）（ポリグリコリドとも称する）；ポリ乳酸（ＰＬＡ）（ポリラクチドとも称する）；ポリジオキサノン；ポリカプロラクトン；ポリオルトエステルおよびポリ無水物から誘導される単独重合体、共重合体およびポリマーブレンドである。より典型的なものは、ポリ（α−ヒドロキシ酸）例えばポリ（Ｌ−ラクチド）、ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド）（共に本明細書においては「ＰＬＡ」と称する）、ポリ（ヒドロキシブチレート）、ラクチドとグリコリドの共重合体、例えばポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド−ｃｏ−グリコリド）（本明細書においては「ＰＬＧ」と記載する）またはＤ，Ｌ−ラクチドおよびカプロラクトンの共重合体である。
【０１３３】
上記重合体は種々の分子量のものが入手可能であり、そして、所定の用途のための適切な分子量は当業者が容易に決定できる。即ち、例えば、ＰＬＡの適当な分子量は約２０００〜５０００のオーダーであってよい。ＰＬＧの適当な分子量は約１０，０００〜約２００，０００、典型的には約１５，０００〜約１５０，０００の範囲である。
【０１３４】
共重合体を使用する場合は、種々のモノマー比率を有する共重合体を使用してよい。例えばＰＬＧを使用して微粒子を形成する場合は、種々のラクチド：グリコリドモル比が使用でき、そして、比は、部分的には併用吸着および／または捕獲物質種および所望の分解速度に応じて、広範な範囲で選択できる。例えば５０％Ｄ，Ｌ−ラクチドおよび５０％グリコリドを含有する５０：５０ＰＬＧ重合体は急速再吸収重合体を形成するが、ラクチド成分の増大により、７５：２５ＰＬＧはより緩徐に、そして８５：１５および９０：１０のものはさらに緩徐に分解する。種々のラクチド：グリコリド比の微粒子の混合物を本発明において使用することにより所望の放出動態を達成してよい。本発明の微粒子の分解速度はまた重合体の分子量および重合体の結晶性のような要因により制御できる。
【０１３５】
種々のラクチド：グリコリド比および分子量を有するＰＬＧ共重合体は多くの製造元、例えばＢｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ，ＧｅｒｍａｎｙおよびＢｉｒｍｉｎｇｈａｍ Ｐｏｌｙｍｅｒｓ，Ｉｎｃ．，Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ，ＡＬより容易に購入できる。例示される一部のＰＬＧ共重合体は（ａ）ＲＧ５０２、即ち５０：５０のラクチド／グリコリドモル比および分子量１２，０００Ｄａを有するＰＬＧ；（ｂ）ＲＧ５０３、即ち５０：５０のラクチド／グリコリドモル比および分子量３４，０００Ｄａを有するＰＬＧ；（ｃ）ＲＧ５０４、即ち５０：５０のラクチド／グリコリドモル比および分子量４８，０００Ｄａを有するＰＬＧ；（ｄ）ＲＧ７５２、即ち７５：２５のラクチド／グリコリドモル比および分子量２２，０００Ｄａを有するＰＬＧ；および（ｅ）ＲＧ５０５、即ち７５：２５のラクチド／グリコリドモル比および分子量６８，０００Ｄａを有するＰＬＧを包含する。ＰＬＧ重合体はまた当該分野でよく知られた手法、例えばＴａｂａｔａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｍａｔｅｒ．Ｒｅｓ．（１９８８）２２：８３７−８５８に記載のものを用いて乳酸成分の単純な縮重合によっても合成できる。
【０１３６】
ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド−ｃｏ−グリコリド）重合体を使用する場合は、典型的にはラクチド／グリコリドのモル比２０：８０〜８０：２０、より典型的には４０：６０〜６０：４０を有志、そして、分子量１０，０００〜１００，０００ダルトン、より典型的には２０，０００〜７０，０００ダルトンを有するものとする。
【０１３７】
微粒子は当該分野でよく知られた数種の方法の何れかを用いて調製する。例えば、一部の実施形態においては二重エマルジョン／溶媒蒸発法、例えば米国特許３，５２３，９０７号およびＯｇａｗａ ｅｔ ａｌ．，Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．（１９８８）３６：１０９５−１１０３に記載のものを本発明において使用することにより微粒子を形成する。これらの手法では、重合体溶液の液滴よりなる一次エマルジョンを形成し、これをその後、粒子安定化剤／界面活性剤を含有する連続水相と混合する。
【０１３８】
別の実施形態においては、微粒子はまた、例えばＴｈｏｍａｓｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ （１９９６）４１：１３１；米国特許２，８００，４５７；Ｍａｓｔｅｒｓ，Ｋ．（１９７６）Ｓｐｒａｙ Ｄｒｙｉｎｇ ２ｎｄ Ｅｄ． Ｗｉｌｅｙ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋに記載の噴霧乾燥およびコアセルベーション、Ｈａｌｌ ｅｔ ａｌ．，（１９８０） Ｔｈｅ ”Ｗｕｓｔｅｒ Ｐｒｏｃｅｓｓ” ｉｎ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ：Ｍｅｔｈｏｄｓ， Ｔｈｅｏｒｙ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ （Ａ．Ｆ．Ｋｙｄｏｎｉｅｕｓ，ｅｄ．），Ｖｏｌ．２，ｐｐ．１３３−１５４ ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ， Ｆｌｏｒｉｄａ ａｎｄ Ｄｅａｓｙ， Ｐ．Ｂ．，Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｔｈｅｒ．Ｄｒｕｇ Ｃａｒｒｉｅｒ Ｓｙｓｔ．（１９８８）Ｓ（２）：９９−１３９に記載のエアサスペンションコーティング法；および例えばＬｉｍ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ（１９８０）２１０：９０８−９１０に記載のイオンゲル化を用いて形成することができる。
【０１３９】
好ましい実施形態においては、水中油中水（ｗ／ｏ／ｗ）溶媒蒸発系を用いながら、Ｏ’Ｈａｇａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｖａｃｃｉｎｅ（１９９３）１１：９６５−９６９， Ｏ’Ｈａｇｅｎ ｅｔ ａｌへのＰＣＴ／ＵＳ９９／１７３０８（ＷＯ００／０６１２３）およびＪｅｆｆｅｒｙ ｅｔ ａｌ．，Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．（１９９３）１０：３６２に記載の通り微粒子を形成することができる。
【０１４０】
一般的に、ＰＬＧのような目的の重合体を有機溶媒、例えば酢酸エチル、ジメチルクロリド（塩化メチレンおよびジクロロメタンとも称する）、アセトニトリル、アセトン、クロロホルム等に溶解する。重合体は典型的には有機溶媒中約１〜３０％、より典型的には約２〜１５％、さらに典型的には約３〜１０％、そして最も典型的には約４〜８％の溶液とする。次に重合体溶液を水溶液の第１の容量と合わせ、乳化してｏ／ｗエマルジョンを形成する。水溶液は例えば脱イオン水、生理食塩水、緩衝溶液、例えばリン酸塩緩衝食塩水（ＰＢＳ）またはクエン酸ナトリウム／エチレンジアミン４酢酸（クエン酸ナトリウム／ＥＴＤＡ）緩衝液であることができる。後者の溶液は（ａ）正常な生理学的液体と本質的に同じ張力、即ち浸透圧を提供し、そして（ｂ）正常な生理学的状態に適合するｐＨを維持することができる。或は、本発明の組成物の張力および／またはｐＨ特性は、微粒子形成の後、投与前に調節できる。好ましくは重合体溶液の水溶液に対する容量比は、約５：１〜約２０：１の範囲、より好ましくは約１０：１である。乳化はこの作業のために適切な何れかの装置を用いて実施し、そして典型的には例えばホモゲナイザーのような高剪断装置である。
【０１４１】
一部の実施形態においては、１つ以上の付加的な成分を微粒子内に捕獲する。例えば、抗原、リン脂質および／または以下に記載するような任意の補充的成分は、これを（ａ）油溶性または油分散性形態である場合は重合体溶液に、または（ｂ）水溶性または水分散性形態である場合は水溶液に添加することにより導入できる。
【０１４２】
次にｏ／ｗエマルジョンの容量を、典型的には界面活性剤を含有する水溶液のより多量の第２の容量に合わせる。水溶液のｏ／ｗエマルジョンに対する容量比は、典型的には約２：１〜１０：１、より典型的には約４：１の範囲である。本発明の実施のために適切な界面活性剤の例は、上記に列挙した通りである。吸着すべき物質種の型に対して適切な界面活性剤の選択は当業者が容易に行える。例えば、荷電した界面活性剤、例えばアニオン系またはカチオン系の界面活性剤の存在下に製造された微粒子は広範な種類の分子を吸着できる実効負電荷または実効正電荷を有する表面を持った微粒子をもたらす。例えばアニオン系界面活性剤、例えばドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）を用いて製造した微粒子、例えばＳＤＳ−ＰＬＧ微粒子は正荷電した物質種、例えばポリペプチド含有物質種、例えば蛋白を吸着する。同様に、カチオン系界面活性剤、例えばＣＴＡＢを用いて製造した微粒子、例えばＰＬＧ／ＣＴＡＢ微粒子は負荷電の物質種、例えばポリヌクレオチド含有物質種、例えばＤＮＡを吸着する。吸着すべき物質種が正および負の電荷の領域を有する場合は、カチオンまたはアニオンまたはノニオン系の界面活性剤のいずれかが適している。特定の物質種は界面活性剤の組み合わせを有する微粒子にさらに容易に吸着する。さらにまた、一部の例においては、上記有機溶液に界面活性剤を添加することが望ましい。
【０１４３】
ＣＴＡＢのようなカチオン系界面活性剤を使用する場合は、典型的には約０．０００２５〜１％溶液、より典型的には約０．００２５〜０．１％溶液として提供される。ＤＳＳのようなアニオン系界面活性剤を使用する場合は、典型的には約０．００００１〜０．２５％溶液、より典型的には約０．０００１〜０．００２５％溶液として提供される。ＰＶＡのようなノニオン系界面活性剤を使用する場合は、典型的には約２〜１５％溶液、より典型的には約４〜１０％溶液として提供される。カチオン系界面活性剤の場合、界面活性剤の重合体に対する重量比は典型的には約０．００００１：１〜約０．５：１；より典型的には約０．００１：１〜約０．１：１、そしてさらに典型的には約０．００２５：１〜約０．０５：１であり；ＤＳＳのようなアニオン系界面活性剤の場合は、界面活性剤の重合体に対する重量比は典型的には約０．００００１：１〜約０．０２５：１；より典型的には約０．０００１：１〜約０．００２５：１であり；ＰＶＡのようなノニオン系界面活性剤の場合は、界面活性剤の重合体に対する重量比は典型的には約０．００１：１〜約０．１：１；より典型的には約０．００２５：１〜約０．０５：１である。
【０１４４】
次にこの混合物をホモゲナイズして安定なｗ／ｏ／ｗ二重エマルジョンを製造する。上記したホモゲナイズ工程の各々は典型的には室温（即ち２５℃）以下、より典型的には、例えばアイスバス中で冷却しながら実施する。
【０１４５】
次に有機溶媒を蒸発させる。調製の後、微粒子はそのまま使用するか、後の使用のために凍結乾燥できる。
【０１４６】
処方パラメーターを操作することにより０．０５μｍ（５０ｎｍ）のオーダーの小型の微粒子からより大きい微粒子、５０μｍ以上のものを製造できる。例えばＪｅｆｆｅｒｙ ｅｔ ａｌ．，Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．（１９９３）１０：３６２−３６８；ＭｃＧｅｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｉｃｒｏｅｎｃａｐ．（１９９６）を参照できる。例えば、低減した攪拌混合では典型的にはより大きい微粒子となり、内相の容量の増大および重合体濃度の上昇でも同様である。小型粒子は典型的には増強された攪拌混合並びに小さい水相容量、高濃度のエマルジョン安定化剤および重合体濃度の低下により生じる。
【０１４７】
粒径は例えばレーザ光散乱により、例えばヘリウムネオンレーザー搭載の分光光度計を用いて測定できる。一般的に、粒径は室温で測定し、対象となる試料の複数の分析を行い（例えば５〜１０回）、粒径の平均値を求める。粒径はまた走査電子顕微鏡（ＳＥＭ）を用いて容易に測定される。
【０１４８】
調製の際には、種々の成分、例えば抗原、リン脂質および任意の補充的成分、例えば後に記載するものを微粒子と混合し、得られた処方を所望により使用時まで凍結乾燥する。典型的には、これらの成分は水溶液または分散液として微粒子に添加する。一部の例においては、これらの物質種は微粒子の表面に吸着される（例えばポリペプチド抗原が微粒子表面に吸着される後述の実施例を参照）。吸着された物質種の含量は標準的手法を用いて測定できる。
【０１４９】
即ち、本発明の重合体粒子はその内部に捕獲またはカプセル化された種々の成分を有してよく、それと同時にその上に吸着された種々の成分を有する。例えば当業者は本発明に従って、吸着された抗原のほかに、吸着された微粒子を有する微粒子を製造してよい。当業者はまた、抗原、リン脂質および／または後に記載する補充的成分の何れかのようなカプセル化された成分を有する微粒子を製造してよい。
【０１５０】
（５．補充的成分）
本発明の免疫原性組成物は広範な種類の任意の補充的成分を包含できる。このような補充的成分には（ａ）医薬品、例えば抗体および抗ウィルス剤、非ステロイド抗炎症剤、鎮痛剤、血管拡張剤、心臓血管剤、向精神薬、神経弛緩剤、抗欝剤、抗パーキンソン剤、ベータブロッカー、カルシウムチャンネルブロッカー、ブラジキニン阻害剤、ＡＣＥ阻害剤、血管拡張剤、プロラクチン阻害剤、ステロイド、ホルモン拮抗剤、抗ヒスタミン剤、セロトニン拮抗剤、ヘパリン、化学療法剤、抗新生物剤および成長因子、例えばＰＤＧＦ、ＥＧＦ、ＫＧＦ、ＩＧＦ−１およびＩＧＦ−２、ＦＧＦ、（ｂ）ホルモン類、例えばペプチドホルモン、例えばインスリン、プロインスリン、成長因子、ＧＨＲＨ、ＬＨＲＨ、ＥＧＦ、ソマトスタチン、ＳＮＸ−１１１、ＢＮＰ、インスリノトロピン、ＡＮＰ、ＦＳＨ、ＬＨ、ＰＳＨおよびｈＣＨ、ゴナダルステロイドホルモン（アンドロゲン、エストロゲンおよびプロゲステロン）、甲状腺刺激ホルモン、インヒビン、コレシストキニン、ＡＣＴＨ、ＣＲＦ、ヂノルフィン、エンドルフィン、エンドセリン、フィブロネクチンフラグメント、ガラニン、ガストリン、インスリノトロピン、グルカゴン、ＧＴＰ結合蛋白フラグメント、グアニリン、ロイコキニン、マガイニン、マストパラン、デルマセプチン、システミン、ニューロメジン、ニューロテンシン、パンクレスタチン、パンクレアチンポリペプチド、物質Ｐ、セクレチン、チモシン等、（ｃ）酵素、（ｄ）転写または翻訳メディエーター、（ｅ）代謝経路の中間体、（ｆ）免疫モジュレーター、例えば種々のサイトカイン、例えばインターロイキン−１、インターロイキン−２、インターロイキン−３、インターロイキン−４およびガンマ−インターフェロン、および（ｇ）補充的な免疫学的アジュバント、例えば後に記載するものが包含される。
【０１５１】
免疫原性の微粒子組成物の場合は、このような補充的成分は例えば微粒子の表面に吸着、微粒子内部に捕獲、微粒子に未結合のまま溶液中に溶解または分散、微粒子の別のグループに吸着または捕獲させるなどすることができる。
【０１５２】
免疫原性エマルジョン組成物の場合、このような補充的成分は、例えば、エマルジョンの油相内に溶解または分散、エマルジョンの水相内に溶解または分散、エマルジョンの水相と油相の界面に配置するなどが可能である。
【０１５３】
補充的免疫学的アジュバントを用いることにより免疫原性組成物の有効性を増強してよい。例えば、このような免疫学的アジュバントは本発明の免疫原性組成物と同時に、例えば同じ組成物中で、または個別の組成物中で投与してよい。或はこのようなアジュバントは本発明の免疫原性組成物よりも前または後に投与してよい。
【０１５４】
補充的免疫学的アジュバントは例えば（１）アルミニウム塩（アルム）、例えば水酸化アルミニウム、リン酸アルミニウム、硫酸アルミニウム等；（２）サポニンアジュバント、例えばＱｕｉｌＡまたはＱＳ２１（例えばＳｔｉｍｕｌｏｎＴＭ（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ，Ｗｏｒｃｅｓｔｅｒ，ＭＡ））を使用するか、それから生成した粒子、例えばＩＳＣＯＭ（免疫刺激複合体）、このＩＣＯＭＳは例えばＷＯ００／０７６２１に記載の通りさらに洗剤を含有しなくて良い；（３）完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ）および不完全フロイントアジュバント（ＩＦＡ）；（４）サイトカイン、例えばインターロイキン類（例えばＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−１２（ＷＯ９９／４４６３６）等）、インターフェロン類（例えばガンマインターフェロン）、マクロファージコロニー刺激因子（Ｍ−ＣＳＦ）、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）等、（５）ＣｐＧモチーフを含むオリゴヌクレオチド（Ｒｏｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．，１９９７，３．８４９−８５４；Ｗｅｉｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ ＵＳＡ，１９９７，９４，１０８３３−１０８３７；Ｄａｖｉｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９８８，１６０，８７０−８７６；Ｃｈｕ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，１９９７，１８６，１６２３−１６３１；Ｌｉｐｆｏｒｄ ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９７，２７，２３４０−２３４４；Ｍｏｌｄｏｖｅａｎｕ ｅｔ ａｌ．， Ｖａｃｃｉｎｅ，１９８８，１６，１２１６−１２２４，Ｋｒｉｅｇ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，１９９５，３７４，５４６−５４９；Ｋｌｉｎｍａｎ ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ ＵＳＡ，１９９６，９３，２８７９−２８８３：Ｂａｌｌａｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｌ．，１９９６，１５７，１８４９０１８４５；Ｃｏｗｄｅｒｙ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１９９６，１５６，４５７０−４５７５；Ｈａｌｐｅｒｎ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１９９６，１６７，７２−７８；Ｙａｍａｍｏｔｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊｐｎ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，１９８８，７９，８６６−８７３；Ｓｔａｃｅｙ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９６，１５７，２１１６−２１２２；Ｍｅｓｓｉｎａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１９９１，１４７，１７５９−１７６４；Ｙｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１９９６，１５７，４９１８−４９２５；Ｙｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１９９６，１５７，５３９４−５４０２；Ｙｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１９９８，１６０，４７５５−４７６１；およびＹｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１９９８，１６０，５８９８−５９０６；国際特許出願ＷＯ９６／０２５５５、ＷＯ９８／１６２４７、ＷＯ９８／１８８１０、ＷＯ９８／４０１００、ＷＯ９８／５５４９５、ＷＯ９８／３７９１９およびＷＯ９８／５２５８１）、即ち、少なくとも１つのＣＧジヌクレオチド（シトシンヌクレオチドとその後のグアニンヌクレオチド）を含むオリゴヌクレオチドであり、必要に応じてシトシンの代わりに５メチルシトシンを用いたもの；（６）ポリオキシエチレンエーテルまたはポリオキシエチレンエステル、例えばＷＯ９９／５２５４９；（７）ポリオキシエチレンソルビタンエステル界面活性剤をオクトキシノールと組み合わせたもの（ＷＯ０１／２１２０７）またはポリオキシエチレンアルキルエーテルまたはエステル界面活性剤を少なくとも１つの別のノニオン系界面活性剤、例えばオクトキシノールと組み合わせたもの（ＷＯ０１／２１１５２）；（８）サポニンおよび免疫刺激オリゴヌクレオチド（例えばＣｐＧオリゴヌクレオチド）（ＷＯ００／６２８００）；（９）免疫刺激剤および金属塩粒子、例えばＷＯ００／２３１０５；（１０）サポニンおよび水中油エマルジョン、例えばＷＯ９９／１１２４１；（１１）サポニン（例えばＱＳ２１）＋３ｄＭＰＬ＋ＩＬ−１２（必要に応じて＋ステロール）例えばＷＯ９８／５７６５９；（１２）細菌性ＡＤＰリボシル化毒素の無毒化突然変異体、例えばコレラ毒素（ＣＴ）、百日咳毒素（ＰＴ）またはＥ．ｃｏｌｉ熱不安定性毒素（ＬＴ）、特にＬＴ−Ｋ６３（野生型アミノ酸ではリジンが６３位で置換）、ＬＴ−Ｒ７２（野生型アミノ酸ではアルギニンが７２位で置換）、ＣＴ−Ｓ１０９（野生型アミノ酸ではセリンが１０９位で置換え）およびＰＴ−Ｋ９／Ｇ１２９（野生型アミノ酸ではリジンが９位で置換、グリシンが１２９位で置換）（例えば国際特許出願ＷＯ９３／１３２０２およびＷＯ９２／１９２６５参照）；（１３）天然または合成の２本鎖ＲＮＡ（「ｄｓＲＮＡ」）を含むアジュバント、これは一般的には間歇的なリボグアニル酸−リボシチジル酸（［ｒＧ−ｒＣ］）およびリボアデニル酸−ポリリボウリジル酸（［ｒＡ−ｒＵ］）塩基対；詳細は共通保有しているＰＣＴ／ＵＳ０２／３０４２３参照；および（１４）免疫刺激剤として作用して組成物の有効性を増強する他の物質である。
【０１５５】
ムラミルペプチドは、例えばＮ−アセチル−ムラミル−Ｌ−スレオニル−Ｄ−イソグルタミン（ｔｈｒ−ＭＤＰ）、Ｎ−アセチル−ノルムラニル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタム（ｎｏｒ−ＭＤＰ）、Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタミニル−Ｌ−アラニン−２−（１’−２’−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ヒドロキシホスホリルオキシ）−エチルアミン（ＭＴＰ−ＰＥ）等を包含する。
【０１５６】
アジュバントの別の例は、Ｖａｃｃｉｎｅ Ｄｅｓｉｇｎ，Ｔｈｅ Ｓｕｂｕｎｉｔ ａｎｄ ｔｈｅ Ａｄｊｕｖａｎｔ Ａｐｐｒｏａｃｈ，Ｐｏｗｅｌｌ，Ｍ．Ｆ． ａｎｄ Ｎｅｗｍａｎ，Ｍ．Ｊ．ｅｄｓ．，Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ，１９９５を参照できる。
【０１５７】
（６．投与）
処方された後には、本発明の組成物は非経腸、例えば注射（針不使用であってもよい）により投与できる。組成物は例えば皮下、腹腔内、静脈内、動脈内、皮内または筋肉内に注射できる。投与の他の方法は鼻、粘膜、眼内、直腸、膣、口腔および肺への投与、坐剤および経皮または皮内の適用を包含する。
【０１５８】
一部の実施形態において、本発明の組成物は部位特異的ターゲティング送達のために使用できる。例えば、組成物の静脈内投与は肺、肝、脾臓、血液循環系または骨髄をターゲティングするために使用できる。
【０１５９】
上記より明らかな通り、本発明の組成物は一般的に薬学的に受容可能な賦形剤１種以上を含有する。例えば水、食塩水、グリセロール、ポリエチレングリコール、ヒアルロン酸、エタノール等のようなベヒクルを使用してよい。他の賦形剤、例えば水和剤または乳化剤、生物学的緩衝物質等を存在させてよい。生物学的鑑賞物質は、薬学的に許容でき、そして所望のｐＨ、即ち生理学的範囲のｐＨの処方を与えるような実質的には何れの溶液であることもできる。その例としては、食塩水、リン酸塩緩衝食塩水、トリス緩衝食塩水、Ｈａｎｋ緩衝食塩水等が包含される。最終剤型に応じて、当該分野で知られた他の賦形剤、例えばバインダー、錠剤崩壊剤、充填剤（希釈剤）、潤滑剤、滑剤（流動性増強剤）、圧縮補助剤、着色料、甘味料、保存料、懸濁／分散剤、膜形成剤／コーティング、フレーバーおよび印刷インキも導入することができる。
【０１６０】
治療は単一用量日程または多用量日程に従って行ってよい。多用量日程は投与の初期過程を例えば１〜１０個別用量で行い、その後、治療応答の維持および／または強化のために選択された他の用量を、例えば第２用量では１〜４ヶ月、そして必要に応じて数ヵ月後にその後の用量を与える。用量用法は少なくとも部分的には対象の必要性により決定され、そして医師の判断により異なる。
【０１６１】
さらにまた、疾患の予防が望まれる場合は、組成物は一般的には感染症または目的の障害の原発時よりも前に投与する。治療の別の形態、例えば症状または再発の低減または除去が望まれる場合は、組成物は一般的には感染症または目的の障害の原発時の後に投与する。
【０１６２】
（Ｃ．実験）
以下に示すものは、本発明の方法の実施に関する特定の実施形態の例である。実施例は説明を目的とするのみであり、如何なる点においても本発明の範囲を制限する意図はない。
【０１６３】
使用した数値（例えば量、温度等）は正確であるよう努めたが、一部の実験誤差および偏りは当然ながら妥協せざるを得ない。
【実施例】
【０１６４】
（実施例１）
（ブランクＰＬＧ微粒子の製造および特性化）
微粒子は塩化メチレン中ＲＧ５０４重合体（５０：５０のラクチド／グリコリドモル比および分子量４２〜４５ｋＤａを有するＰＬＧ、Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍより入手可能）の６％ｗ／ｖ溶液を用いて製造した。この溶液１０ｍｌを１５０００ｒｐｍで３分間、ホモゲナイザー（Ｕｌｔｒａ−ＴｕｒｒａｘＴ２５ＩＫＡ−Ｌａｂｏｒｔｅｃｈｎｉｋ，Ｇｅｒｍａｎｙ）の１０ｍｍプローブを用いて２．５ｍｌＰＢＳとともにホモゲナイズすることにより、油中水エマルジョンを形成した。このエマルジョンを次に６μｇ／ｍｌジオクチルナトリウムスルホスクシネート（ＤＳＳ）（Ｓｉｇｍａ，ＵＳＡより入手可能）を含有する蒸留水５０ｍｌに添加し、アイスバス中２５分間２０ｍｍプローブ（ＥＳ−１５ Ｏｍｎｉ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，ＧＡ，ＵＳＡ）を装着したホモゲナイザーを用いて極めて高速度でホモゲナイズした。これにより水注油中水エマルジョンが得られ、これを室温で１２時間１０００ｒｐｍで攪拌することにより、塩化メチレンを蒸発させた。得られた微粒子を凍結乾燥した。得られた微粒子は０．０５％ＤＳＳｗｔ／ｗｔを含有していた。得られた微粒子の粒径分布は粒径分布分析器（Ｍａｓｔｅｒ Ｓｉｚｅｒ，Ｍａｌｖｅｒｎ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，ＵＫ）を用いて測定し、０．８〜１．２μｍであることがわかった。
【０１６５】
（実施例２）
（捕獲されたＥｉｓａｉ５７またはＥｉｓａｉ５３を有するＰＬＧ微粒子の製造および特性化）
微粒子は（ａ）クロロホルム懸濁液中のＥｉｓａｉ５７（ＥＲ−８０４０５７，Ｅｉｓａｉ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．，Ｔｏｋｙｏ，ＪＰ）リン脂質３ｍｇ、または（ｂ）エタノール懸濁液中のＥｉｓａｉ５３（ＥＲ−８０４０５３，Ｅｉｓａｉ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．，Ｔｏｋｙｏ，ＪＰ）リン脂質３ｍｇを予め添加した塩化メチレン中ＲＧ５０４ＰＬＧ重合体の６％ｗ／ｖ溶液１０ｍｌを、２．５ｍｌＰＢＳと共に、１０ｍｍプローブ（Ｕｌｔｒａ−Ｔｕｒｒａｘ Ｔ２５ ＩＫＡ−Ｌａｂｏｒｔｅｃｈｎｉｋ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を用いて、３分間、１５０００ｒｐｍでホモゲナイズして油中水エマルジョンを形成することにより製造した。エマルジョン３つの各々を、次に、６μｇ／ｍｌＤＳＳを含有する蒸留水５０ｍｌに添加し、アイスバス中２５分間２０ｍｍプローブ（ＥＳ−１５ Ｏｍｎｉ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，ＧＡ，ＵＳＡ）を装着したホモゲナイザーを用いて極めて高速度でホモゲナイズした。これにより水注油中水エマルジョンが得られ、これを室温で１２時間１０００ｒｐｍで攪拌することにより、塩化メチレンを蒸発させた。得られた微粒子を凍結乾燥した。得られた微粒子は０．０５％ＤＳＳｗｔ／ｗｔを含有していた。得られた微粒子の粒径分布は粒径分布分析器（Ｍａｓｔｅｒ Ｓｉｚｅｒ，Ｍａｌｖｅｒｎ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，ＵＫ）を用いて測定し、０．８〜１．２μｍであることがわかった。
【０１６６】
（実施例３）
（注射可能組成物の製造）
実施例１のＤＳＳ粒子１０ｍｇ（即ち１０ｍｇ／ｍｌ懸濁液１０ｍｌ）をヒスチジン緩衝液（１０ミリモル、ｐＨ５．０）１ｍｌ中のＢ型髄膜炎抗原（「ＭｅｎＢ」）（例えばＰＣＴ／ＩＢ０２／０３９０４；ＷＯ０１／５２８８５；Ｖｏｌ／２８７ Ｓｃｉｅｎｃｅ，１８１６（２０００）参照）１ｍｇと共に室温で一夜インキュベートした。懸濁液に賦形剤（マンニトール：スクロース、４５：１５ｍｇ／ｍｌ）を添加した後に凍結乾燥した。
【０１６７】
これらの組成物は（ａ）注射用水で希釈再調製した後にマウスに筋肉内注射（「ＰＬＧ／ＭｅｎＢ」）、（ｂ）ＴＥ緩衝液中１．０ｍｇ／ｍｌＣｐＧオリゴヌクレオチド（Ｏｌｉｇｏｓ Ｉｎｃ．，ＵＳＡより入手可能）を含有する溶液０．１ｍｌと合わせ（「ＰＬＧ／ＭｅｎＢ＋ｓｏｌＣＰＧ」）てから注射、（ｃ）エタノール中１．０ｍｇ／ｍｌＥＲ−８０４０５３を含有する溶液０．１ｍｌと合わせ（「ＰＬＧ／ＭｅｎＢ＋ｓｏｌＥｉｓａｉ５３」）てから注射、（ｄ）エタノール中１．０ｍｇ／ｍｌＥＲ−８０４０５７を含有する溶液０．１ｍｌと合わせ（「ＰＬＧ／ＭｅｎＢ＋ｓｏｌＥｉｓａｉ５７」）てから注射、（ｅ）実施例２の捕獲ＥＲ−８０４０５３を有する凍結乾燥ＤＳＳ粒子１０ｍｇと合わせ（「ＰＬＧ／ＭｅｎＢ＋ＰＬＧ／Ｅｉｓａｉ５３」）てから注射、または（ｆ）実施例２の捕獲ＥＲ−８０４０５７を有する凍結乾燥ＤＳＳ粒子１０ｍｇと合わせ（「ＰＬＧ／ＭｅｎＢ＋ＰＬＧ／Ｅｉｓａｉ５７」）てから注射した。
【０１６８】
さらにまた、実施例２の捕獲リン脂質を有する凍結乾燥ＤＳＳ粒子１００ｍｇをヒスチジン緩衝液（ｐＨ５．０）１ｍｌ中Ｂ型髄膜炎抗原１．０ｍｇと共に室温で一夜インキュベートした。これらの組成物の各々（本明細書においては「ＰＬＧ／Ｅｉｓａｉ５３／ＭｅｎＢ」または「ＰＬＧ／Ｅｉｓａｉ５７／ＭｅｎＢ」と称する）を直接マウスに筋肉内注射した。
【０１６９】
上記した場合の各々において、マウスは２１日および３５日においてブースター投与した。
【０１７０】
（実施例４）
（ＭＦ５９エマルジョンの製造および特性化）
クロロホルム５００μｌを５０ｍｌ容ビーカーにいれ、１００μｌのＳｐａｎ（登録商標）８５（Ｓｉｇｍａ，ＵＳＡより入手）およびスクワラン１ｍｌ（Ｓｉｇｍａ，ＵＳＡより入手）を添加し、混合した。１００μｌのＴｗｅｅｎ（登録商標）８０（Ｓｉｇｍａ，ＵＳＡより入手）を１８．８ｍｌのＤＩ水に添加し、１５分間攪拌することにより混合した。Ｔｗｅｅｎ（登録商標）溶液を油性混合物に添加し、１分間１０ｍｍプローブ（Ｕｌｔｒａ−Ｔｕｒｎａｘ Ｔ２５ ＩＫＡ−Ｌａｂｏｒｔｅｃｈｎｉｋ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を用いてホモゲナイズした。乳化した混合物をマイクロ流動化装置（Ｍ１１０５型、Ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｃｓ）に９０ｐｓｉで５回通した。残留クロロホルムを３０分間蒸発させた。エマルジョンの粒径は動的光散乱により分析し、粒径分布は＜２００ｎｍであった。
【０１７１】
（実施例５）
（Ｅｉｓａｉ５７およびＥｉｓａｉ５３ＭＦ５９エマルジョンの製造および特性化）
油相に取り込まれたＥｉｓａｉ５７およびＥｉｓａｉ５３を用いて水中油エマルジョンを製造した。慨すれば、８００μｌのクロロホルム中５ｍｇ／ｍｌのＥｉｓａｉ５７および８００μｌのクロロホルム中５ｍｇ／ｍｌのＥｉｓａｉ５３を個別の５０ｍｌ容ビーカーに入れた。クロロホルムは各々約５００μｌの容量となるまで蒸発させた。１００μｌのＳｐａｎ（登録商標）８５およびスクワレン１ｍｌを各々に添加し、混合した。１００μｌのＴｗｅｅｎ（登録商標）を１８．８ｍｌのＤＩ水に添加し、１５分間攪拌することにより混合した。Ｔｗｅｅｎ（登録商標）溶液を各油性混合物に添加し、１分間１０ｍｍプローブ（Ｕｌｔｒａ−Ｔｕｒｎａｘ Ｔ２５ ＩＫＡ−Ｌａｂｏｒｔｅｃｈｎｉｋ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を用いてホモゲナイズした。各々の乳化した混合物をマイクロ流動化装置に９０ｐｓｉで５回通した。エマルジョンの粒径は動的光散乱により分析し、粒径分布は＜２００ｎｍであった。
【０１７２】
（実施例６）
（注射可能組成物の製造）
実施例４および５において形成したエマルジョンの各々０．５ｍｌにＰＢＳ中抗原０．２ｍｇ／ｍｌを含有する溶液０．５ｍｌを添加し、得られた組成物を５分間混合した。使用した抗原は、（ａ）Ｂ型髄膜炎抗原、得られる注射可能組成物は本明細書においては、「ＭＦ５９＋ｓｏｌＭｅｎＢ」、「ＭＦ５９／Ｅｉｓａｉ５３＋ｓｏｌＭｅｎＢ」および「ＭＦ５９／Ｅｉｓａｉ５７＋ｓｏｌＭｅｎＢ」；（ｂ）ＨＩＶｇｐ１２０エンベロープ蛋白（例えばＷＯ００／０６１２３；ＷＯ０２／２６２０９）、得られる注射可能組成物は本明細書においては、「ＭＦ５９＋ｓｏｌｇｐ１２０」、「ＭＦ５９／Ｅｉｓａｉ５３＋ｓｏｌｇｐ１２０」および「ＭＦ５９／Ｅｉｓａｉ５７＋ｓｏｌｇｐ１２０」；（ｃ）ＨＣＶ Ｅ１Ｅ２ポリペプチド（例えばＰＣＴ／ＵＳ０２／２０６７６参照）、得られる注射可能組成物は本明細書においては、「ＭＦ５９＋ｓｏｌＥ１Ｅ２」、「ＭＦ５９／Ｅｉｓａｉ５３＋ｓｏｌＥ１Ｅ２」および「ＭＦ５９／Ｅｉｓａｉ５７＋ｓｏｌＥ１Ｅ２」とした。
【０１７３】
実施例４で形成したエマルジョン０．５ｍｌに（ａ）ＰＢＳ中ＣｐＧオリゴヌクレオチド０．１ｍｇ／ｍｌを含有する溶液０．５ｍｌ、および（ｂ）ＰＢＳ中抗原０．２ｍｇ／ｍｌを含有する溶液０．５ｍｌを添加した。得られた組成物を５分間混合した。使用した抗原は（ａ）Ｂ型髄膜炎蛋白（「ＭＦ５９＋ｓｏｌＭｅｎＢ＋ｓｏｌＣｐＧ」）；（ｂ）ＨＩＶｇｐ１２０エンベロープ蛋白（ＭＦ５９＋ｓｏｌｇｐ１２０＋ｓｏｌＣｐＧ）；（ｃ）ＨＣＶ Ｅ１Ｅ２ポリペプチド（「ＭＦ５９＋ｓｏｌＥ１Ｅ２＋ｓｏｌＣｐＧ」）とした。
【０１７４】
これらの組成物の各々を直接マウスに筋肉内注射した。各々の場合において、マウスには２１日および３５日においてブースター投与した。
【０１７５】
（実施例７）
（インビボ評価）
（抗体試験）
抗原特異的抗体ＩｇＧおよびＩｇＧ異性体タイプ（ＩｇＧ１およびＩｇＧ２ａ）は３，３，５，５’−テトラメチルベンジジン系比色検出を用いてＥＬＩＳＡにより測定した。ＥＬＩＳＡプレート（Ｎｕｃｎ Ｍａｘｉｓｏｒｂ Ｕ９６）を４℃で一夜５μｇ／ｍｌの精製抗原５０μｌでコーティングした。コーティングされたウェルをリン酸塩緩衝食塩水（ＰＢＳ）中５％ヤギ血清（Ｇｉｂｃｏ ＢＲＬ，Ｇｒａｎｄ Ｉｓｌａｎｄ，ＮＹ）１５０μｌで３７℃で１時間ブロッキングした。プレートを洗浄緩衝液（ＰＢＳ、０．３％Ｔｗｅｅｎ−２０）で３回洗浄し、タッピングし、乾燥した。血清試料および血清標準物質は、まずブロッキング緩衝液中に稀釈し、次にコーティングされブロッキングされたプレートに移し、そこで同じ緩衝液を用いて試料を連続３倍希釈した。３７℃１時間インキュベートした後にプレートを洗浄した。セイヨウワサビペルオキシダーゼコンジュゲートヤギ抗マウスＩｇＧガンマ鎖特異的（Ｇａｌｔａｇ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．）を用いて全ＩｇＧを測定し、そして抗マウスＩｇＧ１およびＩｇＧ２を用いてアイソタイプを測定した。３７℃１時間インキュベートした後、プレートを洗浄して未結合の抗体を除去し、ＴＭＢ基質を用いてプレートを展開し、そして呈色反応は１５分後に２ＮのＨＣを添加することによりブロックした。抗体の力価は試料希釈度の逆数として表示し、その場合、希釈試料の光学密度は４５０ｎｍで０．５とした。結果は表２および３Ａ〜３Ｃに示す。
【０１７６】
【表２】
【０１７７】
【表３Ａ】
【０１７８】
【表３Ｂ】
【０１７９】
【表３Ｃ】
要件となる発明の好ましい実施形態を幾分詳細に説明したが、本発明の精神および範囲を外れることなく顕著な変更が可能であると理解される。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の成分、即ち：（ａ）水；（ｂ）ポリ（α−ヒドロキシ酸）、ポリヒドロキシ酪酸、ポリカプロラクトン、ポリオルトエステル、ポリ無水物およびポリシアノアクリレートから選択される重合体を含む重合体微粒子；（ｃ）該微粒子に吸着させた抗原；ならびに（ｄ）以下の成分、即ち：（ｉ）独立して下記基：
【化１】
および下記基：
【化２】
から選択されるホスホリル基１つ以上；（ｉｉ）直鎖アルカン基：
【化３】
［式中ｎは独立して６〜２０の整数である］複数、を含む合成リン脂質化合物、を含む免疫原性組成物。
【請求項２】
前記リン脂質化合物が下記基：
【化４】
１つ以上を含み下記基：
【化５】
を全く含まない請求項１記載の免疫原性組成物。
【請求項３】
前記リン脂質化合物が下記基：
【化６】
１つ以上を含み下記基：
【化７】
を全く含まない請求項１記載の免疫原性組成物。
【請求項４】
前記リン脂質化合物が前記基：
【化８】
４〜８つを含む請求項１記載の免疫原性組成物。
【請求項５】
前記リン脂質化合物が前記基：
【化９】
６つを含む請求項１記載の免疫原性組成物。
【請求項６】
前記リン脂質化合物が糖基を含まない請求項１記載の免疫原性組成物。
【請求項７】
前記リン脂質化合物が下記式：
【化１０】
［式中、
Ｒ１は下記：
（ａ）Ｃ（Ｏ）；
（ｂ）Ｃ（Ｏ）Ｃ１−１４アルキル−Ｃ（Ｏ）であって、ここで該Ｃ１−１４アルキルは、必要に応じてヒドロキシ、Ｃ１−５アルコキシ、Ｃ１−５アルキレンジオキシ、Ｃ１−５アルキルアミノまたはＣ１−５アルキル−アリールで置換されており、ここで該Ｃ１−５アルキル−アリールのアリール部分は、必要に応じてＣ１−５アルコキシ、Ｃ１−５アルキルアミノ、Ｃ１−５アルコキシ−アミノ、Ｃ１−５アルキルアミノ−Ｃ１−５アルコキシ、ＯＣ１−５アルキルアミノ−Ｃ１−５アルコキシ、ＯＣ１−５アルキルアミノ−Ｃ（Ｏ）Ｃ１−５アルキルＣ（Ｏ）ＯＨ、ＯＣ１−５アルキルアミノ−Ｃ（Ｏ）Ｃ１−５アルキル−Ｃ（Ｏ）Ｃ１−５アルキルで置換されている、Ｃ（Ｏ）Ｃ１−１４アルキル−Ｃ（Ｏ）；
（ｃ）必要に応じてヒドロキシまたはアルコキシで置換されているＣ２〜Ｃ１５の直鎖または分枝鎖のアルキル；および
（ｄ）Ｃ（Ｏ）Ｃ６−１２アリーレン−Ｃ（Ｏ）であって、ここで、該アリーレンは、必要に応じてヒドロキシ、ハロゲン、ニトロまたはアミノにより置換されている、Ｃ（Ｏ）Ｃ６−１２アリーレン−Ｃ（Ｏ）；
よりなる群から選択され；
ａおよびｂは独立して０、１、２、３または４であり；
ｄ、ｄ’、ｄ’’、ｅ、ｅ’、ｅ’’は独立して１〜４の整数であり；
Ｘ１、Ｘ２、Ｙ１およびＹ２は独立して非存在、酸素、ＮＨおよびＮ（Ｃ（Ｏ）Ｃ１−４アルキル）およびＮ（Ｃ１−４アルキル）２よりなる群から選択され；
Ｗ１およびＷ２は独立してカルボニル、メチレン、スルホンおよびスルホキシドよりなる群から選択され；
Ｒ２およびＲ５は独立して下記：
（ａ）必要に応じてオキソ、ヒドロキシまたはアルコキシで置換されたＣ２〜Ｃ２０の直鎖または分枝鎖のアルキル；
（ｂ）必要に応じてオキソ、ヒドロキシまたはアルコキシで置換されたＣ２〜Ｃ２０の直鎖または分枝鎖のアルケニルまたはジアルケニル；
（ｃ）必要に応じてオキソ、ヒドロキシまたはアルコキシで置換されたＣ２〜Ｃ２０の直鎖または分枝鎖のアルコキシ；
（ｄ）アルキル基が必要に応じてオキソ、ヒドロキシまたはアルコキシで置換されたＮＨＣ２〜Ｃ２０の直鎖または分枝鎖のアルキル；および
（ｅ）下記基：
【化１１】
｛式中、ＺはＯおよびＮＨよりなる群から選択され、そしてＭおよびＮは独立してＣ２〜Ｃ２０の直鎖または分枝鎖のアルキル、アルケニル、アルコキシ、アシルオキシ、アルキルアミノおよびアシルアミノよりなる群から選択される｝；
よりなる群から選択され；
Ｒ３およびＲ６は独立して、必要に応じてフルオロまたはオキソで置換されたＣ２〜Ｃ２０の直鎖または分枝鎖のアルキルまたはアルケニルよりなる群から選択され；
Ｒ４およびＲ７は独立してＣ（Ｏ）Ｃ２〜Ｃ２０の直鎖または分枝鎖のアルキルまたはアルケニル；Ｃ２〜Ｃ２０の直鎖または分枝鎖のアルキル；Ｃ２〜Ｃ２０の直鎖または分枝鎖のアルコキシ；Ｃ２〜Ｃ２０の直鎖または分枝鎖のアルケニルよりなる群から選択され、ここで該アルキル基、アルケニル基またはアルコキシ基は独立して、そして必要に応じて、ヒドロキシ、フルオロまたはＣ１〜Ｃ５アルコキシで置換されており；
Ｇ１、Ｇ２、Ｇ３およびＧ４は独立して酸素、メチレン、アミノ、チオール、ＮＨＣ（Ｏ）およびＮ（Ｃ（Ｏ）Ｃ１−４アルキル）よりなる群から選択されるか；またはＧ２Ｒ４またはＧ４Ｒ７は一緒になって水素原子またはヒドロキシルであり得る］を有する化合物あるいは薬学的に受容可能なその塩である請求項１記載の免疫原性組成物。
【請求項８】
Ｒ１がＣ（Ｏ）であり；ａ、ｂ、ｄ、ｄ’、ｄ’’、ｅ、ｅ’およびｅ’’は独立して１または２であり；Ｘ１、Ｘ２、Ｙ１およびＹ２はＮＨであり；Ｗ１およびＷ２はカルボニルであり；Ｒ２およびＲ５はオキソで置換されたＣ１０〜Ｃ２０の直鎖のアルキルであり；Ｒ３およびＲ６はＣ５〜Ｃ１０の直鎖のアルキルであり；Ｒ４およびＲ７はＣ（Ｏ）Ｃ８−Ｃ１４の直鎖のアルキルまたはアルケニルであり；そしてＧ１、Ｇ２、Ｇ３およびＧ４は酸素である請求項７記載の免疫原性組成物。
【請求項９】
Ｒ１がＣ（Ｏ）であり；ａおよびｂが２であり；ｄ、ｄ’、ｅおよびｅ’が１であり；ｄ’’およびｅ’’は２であり；Ｘ１、Ｘ２、Ｙ１およびＹ２はＮＨであり；Ｗ１およびＷ２はカルボニルであり；Ｒ２およびＲ５は２位においてオキソで置換されたＣ１３の直鎖のアルキルであり；Ｒ３およびＲ６はＣ７の直鎖のアルキルであり；Ｒ４およびＲ７はＣ（Ｏ）Ｃ１１の直鎖のアルキルであり；そしてＧ１、Ｇ２、Ｇ３およびＧ４は酸素である請求項７記載の免疫原性組成物。
【請求項１０】
前記リン脂質が前記微粒子内に捕獲されている請求項１〜９のいずれかに記載の免疫原性組成物。
【請求項１１】
前記リン脂質が前記微粒子に吸着されている請求項１〜９のいずれかに記載の免疫原性組成物。
【請求項１２】
前記リン脂質が水溶液中に分散されている請求項１〜９のいずれかに記載の免疫原性組成物。
【請求項１３】
抗原２つ以上が前記微粒子に吸着されている請求項１〜１２のいずれかに記載の免疫原性組成物。
【請求項１４】
別の抗原が前記微粒子内に捕獲されている請求項１〜１２のいずれかに記載の免疫原性組成物。
【請求項１５】
前記抗原がポリペプチド含有抗原である請求項１〜１４のいずれかに記載の免疫原性組成物。
【請求項１６】
前記抗原がポリヌクレオチド含有抗原である請求項１〜１４のいずれかに記載の免疫原性組成物。
【請求項１７】
前記抗原が腫瘍細胞由来である請求項１〜１６のいずれかに記載の免疫原性組成物。
【請求項１８】
前記抗原が病原性生物由来である請求項１〜１６のいずれかに記載の免疫原性組成物。
【請求項１９】
前記病原性生物がウィルス、細菌、真菌および寄生生物から選択される請求項１８記載の免疫原性組成物。
【請求項２０】
前記病原性生物がＨＩＶ、Ｂ型肝炎ウィルス、Ｃ型肝炎ウィルス、Ｂ型髄膜炎、ヘモフィルスインフルエンザタイプＢ、百日咳、ジフテリア、破傷風およびＡ型インフルエンザのウィルスから選択される請求項１８記載の免疫原性組成物。
【請求項２１】
前記病原性生物がヒト免疫不全ウィルス、髄膜炎菌およびヘルペスウィルスから選択される請求項１８記載の免疫原性組成物。
【請求項２２】
前記免疫原性組成物がさらに界面活性剤を含む請求項１〜２１のいずれかに記載の免疫原性組成物。
【請求項２３】
前記微粒子が５００ナノメートルと２０ミクロンとの間の直径を有する請求項１〜２２のいずれかに記載の免疫原性組成物。
【請求項２４】
前記ポリ（α−ヒドロキシ酸）がポリ（Ｌ−ラクチド）、ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド）およびポリ（ラクチド−ｃｏ−グリコリド）から選択される請求項１〜２３のいずれかに記載の免疫原性組成物。
【請求項２５】
前記ポリ（α−ヒドロキシ酸）がポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド−ｃｏ−グリコリド）である請求項１〜２３のいずれかに記載の免疫原性組成物。
【請求項２６】
前記ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド−ｃｏ−グリコリド）が４０：６０〜６０：４０の範囲のラクチド：グリコリドモル比を有する請求項２５記載の免疫原性組成物。
【請求項２７】
補充的免疫学的アジュバントをさらに含む請求項１〜２６のいずれかに記載の免疫原性組成物。
【請求項２８】
前記免疫原性組成物が注射可能組成物である請求項１〜２７のいずれかに記載の免疫原性組成物。
【請求項２９】
脊椎動物の宿主動物に抗原の治療量を送達する方法であって、請求項１〜２８のいずれかに記載の免疫原性組成物を該宿主動物に投与することを含む、方法。
【請求項３０】
病原性生物感染または腫瘍を有する宿主動物の治療方法であって、請求項１〜２８のいずれかに記載の免疫原性組成物を該動物に投与することを含む、方法。
【請求項３１】
腫瘍または病原性生物感染による感染に対して宿主動物を免疫化する方法であって、請求項１〜２８のいずれかに記載の免疫原性組成物を該動物に投与することを含む、方法。
【請求項３２】
宿主動物における免疫応答を刺激する方法であって、請求項１〜２８のいずれかに記載の免疫原性組成物を宿主動物に投与することを含む、方法。
【請求項３３】
前記免疫応答が体液性免疫応答を含む請求項３２記載の方法。
【請求項３４】
前記免疫応答が細胞性免疫応答を含む請求項３２記載の方法。
【請求項３５】
前記免疫応答がウィルス、細菌または寄生生物の感染に対して誘起される請求項３２記載の方法。
【請求項３６】
前記免疫応答が腫瘍に対して誘起される請求項３２記載の方法。
【請求項３７】
前記宿主動物が脊椎動物である請求項３２記載の方法。
【請求項３８】
前記宿主動物が哺乳動物である請求項３２記載の方法。
【請求項３９】
前記宿主動物がヒトである請求項３２記載の方法。
【請求項４０】
以下の成分、即ち：（ａ）水；（ｂ）代謝可能な油；（ｃ）乳化剤；（ｄ）抗原；および（ｅ）（ｉ）独立して下記基：
【化１２】
および下記基：
【化１３】
から選択されるホスホリル基１つ以上；（ｉｉ）直鎖アルカン基：
【化１４】
［式中ｎは独立して６〜２０の整数である］複数、を含むリン脂質化合物、
を含み、
ここで該組成物は油相および水相を有する水中油のエマルジョンであり、そして、
ここで油相は実質的に全てが直径１ミクロン未満である油滴の形態である免疫原性組成物。
【請求項４１】
前記リン脂質化合物が下記基：
【化１５】
１つ以上を含み下記基：
【化１６】
を全く含まない請求項４０記載の免疫原性組成物。
【請求項４２】
前記リン脂質化合物が下記基：
【化１７】
１つ以上を含み下記基：
【化１８】
を全く含まない請求項４０記載の免疫原性組成物。
【請求項４３】
前記リン脂質化合物が前記基：
【化１９】
４〜８つを含む請求項４０記載の免疫原性組成物。
【請求項４４】
前記リン脂質化合物が前記基：
【化２０】
６つを含む請求項４０記載の免疫原性組成物。
【請求項４５】
前記リン脂質化合物が糖基を含まない請求項４０記載の免疫原性組成物。
【請求項４６】
前記リン脂質化合物が下記式：
【化２１】
［式中、
Ｒ１は下記：
（ａ）Ｃ（Ｏ）；
（ｂ）Ｃ（Ｏ）Ｃ１−１４アルキル−Ｃ（Ｏ）であって、ここで該Ｃ１−１４アルキルは、必要に応じてヒドロキシ、Ｃ１−５アルコキシ、Ｃ１−５アルキレンジオキシ、Ｃ１−５アルキルアミノまたはＣ１−５アルキル−アリールで置換されており、ここで該Ｃ１−５アルキル−アリールのアリール部分は、必要に応じてＣ１−５アルコキシ、Ｃ１−５アルキルアミノ、Ｃ１−５アルコキシ−アミノ、Ｃ１−５アルキルアミノ−Ｃ１−５アルコキシ、ＯＣ１−５アルキルアミノ−Ｃ１−５アルコキシ、ＯＣ１−５アルキルアミノ−Ｃ（Ｏ）Ｃ１−５アルキルＣ（Ｏ）ＯＨ、ＯＣ１−５アルキルアミノ−Ｃ（Ｏ）Ｃ１−５アルキル−Ｃ（Ｏ）Ｃ１−５アルキルで置換されている、Ｃ（Ｏ）Ｃ１−１４アルキル−Ｃ（Ｏ）；
（ｃ）必要に応じてヒドロキシまたはアルコキシで置換されているＣ２〜Ｃ１５の直鎖または分枝鎖のアルキル；および
（ｄ）Ｃ（Ｏ）Ｃ６−１２アリーレン−Ｃ（Ｏ）であって、ここで、該アリーレンは、必要に応じてヒドロキシ、ハロゲン、ニトロまたはアミノにより置換されている、Ｃ（Ｏ）Ｃ６−１２アリーレン−Ｃ（Ｏ）；
よりなる群から選択され；
ａおよびｂは独立して０、１、２、３または４であり；
ｄ、ｄ’、ｄ’’、ｅ、ｅ’およびｅ’’は独立して１〜４の整数であり；
Ｘ１、Ｘ２、Ｙ１およびＹ２は独立して非存在、酸素、ＮＨおよびＮ（Ｃ（Ｏ）Ｃ１−４アルキル）およびＮ（Ｃ１−４アルキル）２よりなる群から選択され；
Ｗ１およびＷ２は独立してカルボニル、メチレン、スルホンおよびスルホキシドよりなる群から選択され；
Ｒ２およびＲ５は独立して下記：
（ａ）必要に応じてオキソ、ヒドロキシまたはアルコキシで置換されたＣ２〜Ｃ２０の直鎖または分枝鎖のアルキル；
（ｂ）必要に応じてオキソ、ヒドロキシまたはアルコキシで置換されたＣ２〜Ｃ２０の直鎖または分枝鎖のアルケニルまたはジアルケニル；
（ｃ）必要に応じてオキソ、ヒドロキシまたはアルコキシで置換されたＣ２〜Ｃ２０の直鎖または分枝鎖のアルコキシ；
（ｄ）アルキル基が、必要に応じてオキソ、ヒドロキシまたはアルコキシで置換されたＮＨＣ２〜Ｃ２０の直鎖または分枝鎖のアルキル；および
（ｅ）下記基：
【化２２】
｛式中、ＺはＯおよびＮＨよりなる群から選択され、そしてＭおよびＮは独立してＣ２〜Ｃ２０の直鎖または分枝鎖のアルキル、アルケニル、アルコキシ、アシルオキシ、アルキルアミノおよびアシルアミノよりなる群から選択される｝；
よりなる群から選択され；
Ｒ３およびＲ６は独立して、必要に応じてフルオロまたはオキソで置換されたＣ２〜Ｃ２０の直鎖または分枝鎖のアルキルまたはアルケニルよりなる群から選択され；
Ｒ４およびＲ７は独立してＣ（Ｏ）Ｃ２〜Ｃ２０の直鎖または分枝鎖のアルキルまたはアルケニル；Ｃ２〜Ｃ２０の直鎖または分枝鎖のアルキル；Ｃ２〜Ｃ２０の直鎖または分枝鎖のアルコキシ；Ｃ２〜Ｃ２０の直鎖または分枝鎖のアルケニルよりなる群から選択され、ここでアルキル、アルケニルまたはアルコキシ基は独立して、そして必要に応じて、ヒドロキシ、フルオロまたはＣ１〜Ｃ５アルコキシで置換されており；
Ｇ１、Ｇ２、Ｇ３およびＧ４は独立して酸素、メチレン、アミノ、チオール、ＮＨＣ（Ｏ）およびＮ（Ｃ（Ｏ）Ｃ１−４アルキル）よりなる群から選択されるか；あるいはＧ２Ｒ４またはＧ４Ｒ７は一緒になって水素原子またはヒドロキシルであり得る］を有する化合物または薬学的に受容可能なその塩である請求項４０記載の免疫原性組成物。
【請求項４７】
Ｒ１がＣ（Ｏ）であり；ａ、ｂ、ｄ、ｄ’、ｄ’’、ｅ、ｅ’およびｅ’’は独立して１または２であり；Ｘ１、Ｘ２、Ｙ１およびＹ２はＮＨであり；Ｗ１およびＷ２はカルボニルであり；Ｒ２およびＲ５はオキソで置換されたＣ１０〜Ｃ２０の直鎖のアルキルであり；Ｒ３およびＲ６はＣ５〜Ｃ１０の直鎖のアルキルであり；Ｒ４およびＲ７はＣ（Ｏ）Ｃ８−Ｃ１４直鎖のアルキルまたはアルケニルであり；そしてＧ１、Ｇ２、Ｇ３およびＧ４は酸素である請求項４６記載の免疫原性組成物。
【請求項４８】
Ｒ１がＣ（Ｏ）であり；ａおよびｂが２であり；ｄ、ｄ’、ｅおよびｅ’が１であり；ｄ’’およびｅ’’は２であり；Ｘ１、Ｘ２、Ｙ１およびＹ２はＮＨであり；Ｗ１およびＷ２はカルボニルであり；Ｒ２およびＲ５は２位においてオキソで置換されたＣ１３の直鎖のアルキルであり；Ｒ３およびＲ６はＣ７の直鎖のアルキルであり；Ｒ４およびＲ７はＣ（Ｏ）Ｃ１１の直鎖のアルキルであり；そしてＧ１、Ｇ２、Ｇ３およびＧ４は酸素である請求項４６記載の免疫原性組成物。
【請求項４９】
前記油滴の実質的に全てが直径５００ｎｍ未満である請求項４０〜４８のいずれかに記載の免疫原性組成物。
【請求項５０】
前記油滴の実質的に全てが直径２５０ｎｍ未満である請求項４０〜４８のいずれかに記載の免疫原性組成物。
【請求項５１】
前記代謝可能な油が動物性油および植物性油から選択される請求項４０〜５０のいずれかに記載の免疫原性組成物。
【請求項５２】
前記代謝可能な油が魚油である請求項４０〜５０のいずれかに記載の免疫原性組成物。
【請求項５３】
前記代謝可能な油が炭素原子２０〜４０個を有する分枝鎖多不飽和炭化水素である請求項４０〜５０のいずれかに記載の免疫原性組成物。
【請求項５４】
前記代謝可能な油がテルペノイドである請求項４０〜５０のいずれかに記載の免疫原性組成物。
【請求項５５】
前記代謝可能な油がスクワレンである請求項４０〜５０のいずれかに記載の免疫原性組成物。
【請求項５６】
前記乳化剤がソルビタン誘導体を含む請求項４０〜５５のいずれかに記載の免疫原性組成物。
【請求項５７】
前記ソルビタン誘導体がソルビタン脂肪酸モノエステル、ソルビタン脂肪酸セスキエステル、ソルビタン脂肪酸トリエステル、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸モノエステルおよびポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸トリエステルから選択される請求項５６記載の免疫原性組成物。
【請求項５８】
前記組成物が乳化剤複数を含む請求項４０〜５５のいずれかに記載の免疫原性組成物。
【請求項５９】
前記組成物がソルビタンエステルおよびポリオキシエチレンソルビタンエステルを含む請求項５８記載の免疫原性組成物。
【請求項６０】
前記組成物がポリオキシエチレンソルビタンモノオレエートおよびソルビタントリオレエートを含む請求項５９記載の免疫原性組成物。
【請求項６１】
前記組成物が１〜９の範囲のＨＬＢ価を有する第１の乳化剤および１０〜２０の範囲のＨＬＢ価を有する第２の乳化剤を含む請求項５８記載の免疫原性組成物。
【請求項６２】
前記組成物が１〜４の範囲のＨＬＢ価を有する第１の乳化剤および１２〜１７の範囲のＨＬＢ価を有する第２の乳化剤を含む請求項５８記載の免疫原性組成物。
【請求項６３】
前記リン脂質が前記油相に溶解または分散されている請求項４０〜６２のいずれかに記載の免疫原性組成物。
【請求項６４】
前記リン脂質が前記水相に分散されている請求項４０〜６２のいずれかに記載の免疫原性組成物。
【請求項６５】
前記抗原が水相に溶解または分散されている請求項４０〜６４のいずれかに記載の免疫原性組成物。
【請求項６６】
前記抗原がポリペプチド含有抗原である請求項４０〜６５のいずれかに記載の免疫原性組成物。
【請求項６７】
前記抗原がポリヌクレオチド含有抗原である請求項４０〜６５のいずれかに記載の免疫原性組成物。
【請求項６８】
前記抗原が腫瘍細胞由来である請求項４０〜６７のいずれかに記載の免疫原性組成物。
【請求項６９】
前記抗原が病原性生物由来である請求項４０〜６７のいずれかに記載の免疫原性組成物。
【請求項７０】
前記病原性生物がウィルス、細菌、真菌および寄生生物から選択される請求項６９記載の免疫原性組成物。
【請求項７１】
前記病原性生物がＨＩＶ、Ｂ型肝炎ウィルス、Ｃ型肝炎ウィルス、Ｂ型髄膜炎、ヘモフィルスインフルエンザタイプＢ、百日咳、ジフテリア、破傷風およびＡ型インフルエンザのウィルスから選択される請求項６９記載の免疫原性組成物。
【請求項７２】
前記病原性生物がヒト免疫不全ウィルス、髄膜炎菌およびヘルペスウィルスから選択される請求項６９記載の免疫原性組成物。
【請求項７３】
補充的免疫学的アジュバントをさらに含む請求項４０〜７２のいずれかに記載の免疫原性組成物。
【請求項７４】
前記免疫原性組成物が注射可能組成物である請求項４０〜７３のいずれかに記載の免疫原性組成物。
【請求項７５】
脊椎動物の宿主動物に抗原の治療量を送達する方法であって、請求項４０〜７４のいずれかに記載の免疫原性組成物を該宿主動物に投与することを含む、方法。
【請求項７６】
病原性生物感染または腫瘍を有する宿主動物の治療方法であって、請求項４０〜７４のいずれかに記載の免疫原性組成物を該動物に投与することを含む、方法。
【請求項７７】
腫瘍または病原性生物感染による感染に対して宿主動物を免疫化する方法であって、請求項４０〜７４のいずれかに記載の免疫原性組成物を該動物に投与することを含む、方法。
【請求項７８】
宿主動物における免疫応答を刺激する方法であって、請求項４０〜７４のいずれかに記載の免疫原性組成物を宿主動物に投与することを含む、方法。
【請求項７９】
前記免疫応答が体液性免疫応答を含む請求項７８記載の方法。
【請求項８０】
前記免疫応答が細胞性免疫応答を含む請求項７８記載の方法。
【請求項８１】
前記免疫応答がウィルス、細菌または寄生生物の感染に対して誘起される請求項７８記載の方法。
【請求項８２】
前記免疫応答が腫瘍に対して誘起される請求項７８記載の方法。
【請求項８３】
前記宿主動物が脊椎動物である請求項７８記載の方法。
【請求項８４】
前記宿主動物が哺乳動物である請求項７８記載の方法。
【請求項８５】
前記宿主動物がヒトである請求項７８記載の方法。
【請求項１】
以下の成分、即ち：（ａ）水；（ｂ）ポリ（α−ヒドロキシ酸）、ポリヒドロキシ酪酸、ポリカプロラクトン、ポリオルトエステル、ポリ無水物およびポリシアノアクリレートから選択される重合体を含む重合体微粒子；（ｃ）該微粒子に吸着させた抗原；ならびに（ｄ）以下の成分、即ち：（ｉ）独立して下記基：
【化１】
および下記基：
【化２】
から選択されるホスホリル基１つ以上；（ｉｉ）直鎖アルカン基：
【化３】
［式中ｎは独立して６〜２０の整数である］複数、を含む合成リン脂質化合物、を含む免疫原性組成物。
【請求項２】
前記リン脂質化合物が下記基：
【化４】
１つ以上を含み下記基：
【化５】
を全く含まない請求項１記載の免疫原性組成物。
【請求項３】
前記リン脂質化合物が下記基：
【化６】
１つ以上を含み下記基：
【化７】
を全く含まない請求項１記載の免疫原性組成物。
【請求項４】
前記リン脂質化合物が前記基：
【化８】
４〜８つを含む請求項１記載の免疫原性組成物。
【請求項５】
前記リン脂質化合物が前記基：
【化９】
６つを含む請求項１記載の免疫原性組成物。
【請求項６】
前記リン脂質化合物が糖基を含まない請求項１記載の免疫原性組成物。
【請求項７】
前記リン脂質化合物が下記式：
【化１０】
［式中、
Ｒ１は下記：
（ａ）Ｃ（Ｏ）；
（ｂ）Ｃ（Ｏ）Ｃ１−１４アルキル−Ｃ（Ｏ）であって、ここで該Ｃ１−１４アルキルは、必要に応じてヒドロキシ、Ｃ１−５アルコキシ、Ｃ１−５アルキレンジオキシ、Ｃ１−５アルキルアミノまたはＣ１−５アルキル−アリールで置換されており、ここで該Ｃ１−５アルキル−アリールのアリール部分は、必要に応じてＣ１−５アルコキシ、Ｃ１−５アルキルアミノ、Ｃ１−５アルコキシ−アミノ、Ｃ１−５アルキルアミノ−Ｃ１−５アルコキシ、ＯＣ１−５アルキルアミノ−Ｃ１−５アルコキシ、ＯＣ１−５アルキルアミノ−Ｃ（Ｏ）Ｃ１−５アルキルＣ（Ｏ）ＯＨ、ＯＣ１−５アルキルアミノ−Ｃ（Ｏ）Ｃ１−５アルキル−Ｃ（Ｏ）Ｃ１−５アルキルで置換されている、Ｃ（Ｏ）Ｃ１−１４アルキル−Ｃ（Ｏ）；
（ｃ）必要に応じてヒドロキシまたはアルコキシで置換されているＣ２〜Ｃ１５の直鎖または分枝鎖のアルキル；および
（ｄ）Ｃ（Ｏ）Ｃ６−１２アリーレン−Ｃ（Ｏ）であって、ここで、該アリーレンは、必要に応じてヒドロキシ、ハロゲン、ニトロまたはアミノにより置換されている、Ｃ（Ｏ）Ｃ６−１２アリーレン−Ｃ（Ｏ）；
よりなる群から選択され；
ａおよびｂは独立して０、１、２、３または４であり；
ｄ、ｄ’、ｄ’’、ｅ、ｅ’、ｅ’’は独立して１〜４の整数であり；
Ｘ１、Ｘ２、Ｙ１およびＹ２は独立して非存在、酸素、ＮＨおよびＮ（Ｃ（Ｏ）Ｃ１−４アルキル）およびＮ（Ｃ１−４アルキル）２よりなる群から選択され；
Ｗ１およびＷ２は独立してカルボニル、メチレン、スルホンおよびスルホキシドよりなる群から選択され；
Ｒ２およびＲ５は独立して下記：
（ａ）必要に応じてオキソ、ヒドロキシまたはアルコキシで置換されたＣ２〜Ｃ２０の直鎖または分枝鎖のアルキル；
（ｂ）必要に応じてオキソ、ヒドロキシまたはアルコキシで置換されたＣ２〜Ｃ２０の直鎖または分枝鎖のアルケニルまたはジアルケニル；
（ｃ）必要に応じてオキソ、ヒドロキシまたはアルコキシで置換されたＣ２〜Ｃ２０の直鎖または分枝鎖のアルコキシ；
（ｄ）アルキル基が必要に応じてオキソ、ヒドロキシまたはアルコキシで置換されたＮＨＣ２〜Ｃ２０の直鎖または分枝鎖のアルキル；および
（ｅ）下記基：
【化１１】
｛式中、ＺはＯおよびＮＨよりなる群から選択され、そしてＭおよびＮは独立してＣ２〜Ｃ２０の直鎖または分枝鎖のアルキル、アルケニル、アルコキシ、アシルオキシ、アルキルアミノおよびアシルアミノよりなる群から選択される｝；
よりなる群から選択され；
Ｒ３およびＲ６は独立して、必要に応じてフルオロまたはオキソで置換されたＣ２〜Ｃ２０の直鎖または分枝鎖のアルキルまたはアルケニルよりなる群から選択され；
Ｒ４およびＲ７は独立してＣ（Ｏ）Ｃ２〜Ｃ２０の直鎖または分枝鎖のアルキルまたはアルケニル；Ｃ２〜Ｃ２０の直鎖または分枝鎖のアルキル；Ｃ２〜Ｃ２０の直鎖または分枝鎖のアルコキシ；Ｃ２〜Ｃ２０の直鎖または分枝鎖のアルケニルよりなる群から選択され、ここで該アルキル基、アルケニル基またはアルコキシ基は独立して、そして必要に応じて、ヒドロキシ、フルオロまたはＣ１〜Ｃ５アルコキシで置換されており；
Ｇ１、Ｇ２、Ｇ３およびＧ４は独立して酸素、メチレン、アミノ、チオール、ＮＨＣ（Ｏ）およびＮ（Ｃ（Ｏ）Ｃ１−４アルキル）よりなる群から選択されるか；またはＧ２Ｒ４またはＧ４Ｒ７は一緒になって水素原子またはヒドロキシルであり得る］を有する化合物あるいは薬学的に受容可能なその塩である請求項１記載の免疫原性組成物。
【請求項８】
Ｒ１がＣ（Ｏ）であり；ａ、ｂ、ｄ、ｄ’、ｄ’’、ｅ、ｅ’およびｅ’’は独立して１または２であり；Ｘ１、Ｘ２、Ｙ１およびＹ２はＮＨであり；Ｗ１およびＷ２はカルボニルであり；Ｒ２およびＲ５はオキソで置換されたＣ１０〜Ｃ２０の直鎖のアルキルであり；Ｒ３およびＲ６はＣ５〜Ｃ１０の直鎖のアルキルであり；Ｒ４およびＲ７はＣ（Ｏ）Ｃ８−Ｃ１４の直鎖のアルキルまたはアルケニルであり；そしてＧ１、Ｇ２、Ｇ３およびＧ４は酸素である請求項７記載の免疫原性組成物。
【請求項９】
Ｒ１がＣ（Ｏ）であり；ａおよびｂが２であり；ｄ、ｄ’、ｅおよびｅ’が１であり；ｄ’’およびｅ’’は２であり；Ｘ１、Ｘ２、Ｙ１およびＹ２はＮＨであり；Ｗ１およびＷ２はカルボニルであり；Ｒ２およびＲ５は２位においてオキソで置換されたＣ１３の直鎖のアルキルであり；Ｒ３およびＲ６はＣ７の直鎖のアルキルであり；Ｒ４およびＲ７はＣ（Ｏ）Ｃ１１の直鎖のアルキルであり；そしてＧ１、Ｇ２、Ｇ３およびＧ４は酸素である請求項７記載の免疫原性組成物。
【請求項１０】
前記リン脂質が前記微粒子内に捕獲されている請求項１〜９のいずれかに記載の免疫原性組成物。
【請求項１１】
前記リン脂質が前記微粒子に吸着されている請求項１〜９のいずれかに記載の免疫原性組成物。
【請求項１２】
前記リン脂質が水溶液中に分散されている請求項１〜９のいずれかに記載の免疫原性組成物。
【請求項１３】
抗原２つ以上が前記微粒子に吸着されている請求項１〜１２のいずれかに記載の免疫原性組成物。
【請求項１４】
別の抗原が前記微粒子内に捕獲されている請求項１〜１２のいずれかに記載の免疫原性組成物。
【請求項１５】
前記抗原がポリペプチド含有抗原である請求項１〜１４のいずれかに記載の免疫原性組成物。
【請求項１６】
前記抗原がポリヌクレオチド含有抗原である請求項１〜１４のいずれかに記載の免疫原性組成物。
【請求項１７】
前記抗原が腫瘍細胞由来である請求項１〜１６のいずれかに記載の免疫原性組成物。
【請求項１８】
前記抗原が病原性生物由来である請求項１〜１６のいずれかに記載の免疫原性組成物。
【請求項１９】
前記病原性生物がウィルス、細菌、真菌および寄生生物から選択される請求項１８記載の免疫原性組成物。
【請求項２０】
前記病原性生物がＨＩＶ、Ｂ型肝炎ウィルス、Ｃ型肝炎ウィルス、Ｂ型髄膜炎、ヘモフィルスインフルエンザタイプＢ、百日咳、ジフテリア、破傷風およびＡ型インフルエンザのウィルスから選択される請求項１８記載の免疫原性組成物。
【請求項２１】
前記病原性生物がヒト免疫不全ウィルス、髄膜炎菌およびヘルペスウィルスから選択される請求項１８記載の免疫原性組成物。
【請求項２２】
前記免疫原性組成物がさらに界面活性剤を含む請求項１〜２１のいずれかに記載の免疫原性組成物。
【請求項２３】
前記微粒子が５００ナノメートルと２０ミクロンとの間の直径を有する請求項１〜２２のいずれかに記載の免疫原性組成物。
【請求項２４】
前記ポリ（α−ヒドロキシ酸）がポリ（Ｌ−ラクチド）、ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド）およびポリ（ラクチド−ｃｏ−グリコリド）から選択される請求項１〜２３のいずれかに記載の免疫原性組成物。
【請求項２５】
前記ポリ（α−ヒドロキシ酸）がポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド−ｃｏ−グリコリド）である請求項１〜２３のいずれかに記載の免疫原性組成物。
【請求項２６】
前記ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド−ｃｏ−グリコリド）が４０：６０〜６０：４０の範囲のラクチド：グリコリドモル比を有する請求項２５記載の免疫原性組成物。
【請求項２７】
補充的免疫学的アジュバントをさらに含む請求項１〜２６のいずれかに記載の免疫原性組成物。
【請求項２８】
前記免疫原性組成物が注射可能組成物である請求項１〜２７のいずれかに記載の免疫原性組成物。
【請求項２９】
脊椎動物の宿主動物に抗原の治療量を送達する方法であって、請求項１〜２８のいずれかに記載の免疫原性組成物を該宿主動物に投与することを含む、方法。
【請求項３０】
病原性生物感染または腫瘍を有する宿主動物の治療方法であって、請求項１〜２８のいずれかに記載の免疫原性組成物を該動物に投与することを含む、方法。
【請求項３１】
腫瘍または病原性生物感染による感染に対して宿主動物を免疫化する方法であって、請求項１〜２８のいずれかに記載の免疫原性組成物を該動物に投与することを含む、方法。
【請求項３２】
宿主動物における免疫応答を刺激する方法であって、請求項１〜２８のいずれかに記載の免疫原性組成物を宿主動物に投与することを含む、方法。
【請求項３３】
前記免疫応答が体液性免疫応答を含む請求項３２記載の方法。
【請求項３４】
前記免疫応答が細胞性免疫応答を含む請求項３２記載の方法。
【請求項３５】
前記免疫応答がウィルス、細菌または寄生生物の感染に対して誘起される請求項３２記載の方法。
【請求項３６】
前記免疫応答が腫瘍に対して誘起される請求項３２記載の方法。
【請求項３７】
前記宿主動物が脊椎動物である請求項３２記載の方法。
【請求項３８】
前記宿主動物が哺乳動物である請求項３２記載の方法。
【請求項３９】
前記宿主動物がヒトである請求項３２記載の方法。
【請求項４０】
以下の成分、即ち：（ａ）水；（ｂ）代謝可能な油；（ｃ）乳化剤；（ｄ）抗原；および（ｅ）（ｉ）独立して下記基：
【化１２】
および下記基：
【化１３】
から選択されるホスホリル基１つ以上；（ｉｉ）直鎖アルカン基：
【化１４】
［式中ｎは独立して６〜２０の整数である］複数、を含むリン脂質化合物、
を含み、
ここで該組成物は油相および水相を有する水中油のエマルジョンであり、そして、
ここで油相は実質的に全てが直径１ミクロン未満である油滴の形態である免疫原性組成物。
【請求項４１】
前記リン脂質化合物が下記基：
【化１５】
１つ以上を含み下記基：
【化１６】
を全く含まない請求項４０記載の免疫原性組成物。
【請求項４２】
前記リン脂質化合物が下記基：
【化１７】
１つ以上を含み下記基：
【化１８】
を全く含まない請求項４０記載の免疫原性組成物。
【請求項４３】
前記リン脂質化合物が前記基：
【化１９】
４〜８つを含む請求項４０記載の免疫原性組成物。
【請求項４４】
前記リン脂質化合物が前記基：
【化２０】
６つを含む請求項４０記載の免疫原性組成物。
【請求項４５】
前記リン脂質化合物が糖基を含まない請求項４０記載の免疫原性組成物。
【請求項４６】
前記リン脂質化合物が下記式：
【化２１】
［式中、
Ｒ１は下記：
（ａ）Ｃ（Ｏ）；
（ｂ）Ｃ（Ｏ）Ｃ１−１４アルキル−Ｃ（Ｏ）であって、ここで該Ｃ１−１４アルキルは、必要に応じてヒドロキシ、Ｃ１−５アルコキシ、Ｃ１−５アルキレンジオキシ、Ｃ１−５アルキルアミノまたはＣ１−５アルキル−アリールで置換されており、ここで該Ｃ１−５アルキル−アリールのアリール部分は、必要に応じてＣ１−５アルコキシ、Ｃ１−５アルキルアミノ、Ｃ１−５アルコキシ−アミノ、Ｃ１−５アルキルアミノ−Ｃ１−５アルコキシ、ＯＣ１−５アルキルアミノ−Ｃ１−５アルコキシ、ＯＣ１−５アルキルアミノ−Ｃ（Ｏ）Ｃ１−５アルキルＣ（Ｏ）ＯＨ、ＯＣ１−５アルキルアミノ−Ｃ（Ｏ）Ｃ１−５アルキル−Ｃ（Ｏ）Ｃ１−５アルキルで置換されている、Ｃ（Ｏ）Ｃ１−１４アルキル−Ｃ（Ｏ）；
（ｃ）必要に応じてヒドロキシまたはアルコキシで置換されているＣ２〜Ｃ１５の直鎖または分枝鎖のアルキル；および
（ｄ）Ｃ（Ｏ）Ｃ６−１２アリーレン−Ｃ（Ｏ）であって、ここで、該アリーレンは、必要に応じてヒドロキシ、ハロゲン、ニトロまたはアミノにより置換されている、Ｃ（Ｏ）Ｃ６−１２アリーレン−Ｃ（Ｏ）；
よりなる群から選択され；
ａおよびｂは独立して０、１、２、３または４であり；
ｄ、ｄ’、ｄ’’、ｅ、ｅ’およびｅ’’は独立して１〜４の整数であり；
Ｘ１、Ｘ２、Ｙ１およびＹ２は独立して非存在、酸素、ＮＨおよびＮ（Ｃ（Ｏ）Ｃ１−４アルキル）およびＮ（Ｃ１−４アルキル）２よりなる群から選択され；
Ｗ１およびＷ２は独立してカルボニル、メチレン、スルホンおよびスルホキシドよりなる群から選択され；
Ｒ２およびＲ５は独立して下記：
（ａ）必要に応じてオキソ、ヒドロキシまたはアルコキシで置換されたＣ２〜Ｃ２０の直鎖または分枝鎖のアルキル；
（ｂ）必要に応じてオキソ、ヒドロキシまたはアルコキシで置換されたＣ２〜Ｃ２０の直鎖または分枝鎖のアルケニルまたはジアルケニル；
（ｃ）必要に応じてオキソ、ヒドロキシまたはアルコキシで置換されたＣ２〜Ｃ２０の直鎖または分枝鎖のアルコキシ；
（ｄ）アルキル基が、必要に応じてオキソ、ヒドロキシまたはアルコキシで置換されたＮＨＣ２〜Ｃ２０の直鎖または分枝鎖のアルキル；および
（ｅ）下記基：
【化２２】
｛式中、ＺはＯおよびＮＨよりなる群から選択され、そしてＭおよびＮは独立してＣ２〜Ｃ２０の直鎖または分枝鎖のアルキル、アルケニル、アルコキシ、アシルオキシ、アルキルアミノおよびアシルアミノよりなる群から選択される｝；
よりなる群から選択され；
Ｒ３およびＲ６は独立して、必要に応じてフルオロまたはオキソで置換されたＣ２〜Ｃ２０の直鎖または分枝鎖のアルキルまたはアルケニルよりなる群から選択され；
Ｒ４およびＲ７は独立してＣ（Ｏ）Ｃ２〜Ｃ２０の直鎖または分枝鎖のアルキルまたはアルケニル；Ｃ２〜Ｃ２０の直鎖または分枝鎖のアルキル；Ｃ２〜Ｃ２０の直鎖または分枝鎖のアルコキシ；Ｃ２〜Ｃ２０の直鎖または分枝鎖のアルケニルよりなる群から選択され、ここでアルキル、アルケニルまたはアルコキシ基は独立して、そして必要に応じて、ヒドロキシ、フルオロまたはＣ１〜Ｃ５アルコキシで置換されており；
Ｇ１、Ｇ２、Ｇ３およびＧ４は独立して酸素、メチレン、アミノ、チオール、ＮＨＣ（Ｏ）およびＮ（Ｃ（Ｏ）Ｃ１−４アルキル）よりなる群から選択されるか；あるいはＧ２Ｒ４またはＧ４Ｒ７は一緒になって水素原子またはヒドロキシルであり得る］を有する化合物または薬学的に受容可能なその塩である請求項４０記載の免疫原性組成物。
【請求項４７】
Ｒ１がＣ（Ｏ）であり；ａ、ｂ、ｄ、ｄ’、ｄ’’、ｅ、ｅ’およびｅ’’は独立して１または２であり；Ｘ１、Ｘ２、Ｙ１およびＹ２はＮＨであり；Ｗ１およびＷ２はカルボニルであり；Ｒ２およびＲ５はオキソで置換されたＣ１０〜Ｃ２０の直鎖のアルキルであり；Ｒ３およびＲ６はＣ５〜Ｃ１０の直鎖のアルキルであり；Ｒ４およびＲ７はＣ（Ｏ）Ｃ８−Ｃ１４直鎖のアルキルまたはアルケニルであり；そしてＧ１、Ｇ２、Ｇ３およびＧ４は酸素である請求項４６記載の免疫原性組成物。
【請求項４８】
Ｒ１がＣ（Ｏ）であり；ａおよびｂが２であり；ｄ、ｄ’、ｅおよびｅ’が１であり；ｄ’’およびｅ’’は２であり；Ｘ１、Ｘ２、Ｙ１およびＹ２はＮＨであり；Ｗ１およびＷ２はカルボニルであり；Ｒ２およびＲ５は２位においてオキソで置換されたＣ１３の直鎖のアルキルであり；Ｒ３およびＲ６はＣ７の直鎖のアルキルであり；Ｒ４およびＲ７はＣ（Ｏ）Ｃ１１の直鎖のアルキルであり；そしてＧ１、Ｇ２、Ｇ３およびＧ４は酸素である請求項４６記載の免疫原性組成物。
【請求項４９】
前記油滴の実質的に全てが直径５００ｎｍ未満である請求項４０〜４８のいずれかに記載の免疫原性組成物。
【請求項５０】
前記油滴の実質的に全てが直径２５０ｎｍ未満である請求項４０〜４８のいずれかに記載の免疫原性組成物。
【請求項５１】
前記代謝可能な油が動物性油および植物性油から選択される請求項４０〜５０のいずれかに記載の免疫原性組成物。
【請求項５２】
前記代謝可能な油が魚油である請求項４０〜５０のいずれかに記載の免疫原性組成物。
【請求項５３】
前記代謝可能な油が炭素原子２０〜４０個を有する分枝鎖多不飽和炭化水素である請求項４０〜５０のいずれかに記載の免疫原性組成物。
【請求項５４】
前記代謝可能な油がテルペノイドである請求項４０〜５０のいずれかに記載の免疫原性組成物。
【請求項５５】
前記代謝可能な油がスクワレンである請求項４０〜５０のいずれかに記載の免疫原性組成物。
【請求項５６】
前記乳化剤がソルビタン誘導体を含む請求項４０〜５５のいずれかに記載の免疫原性組成物。
【請求項５７】
前記ソルビタン誘導体がソルビタン脂肪酸モノエステル、ソルビタン脂肪酸セスキエステル、ソルビタン脂肪酸トリエステル、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸モノエステルおよびポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸トリエステルから選択される請求項５６記載の免疫原性組成物。
【請求項５８】
前記組成物が乳化剤複数を含む請求項４０〜５５のいずれかに記載の免疫原性組成物。
【請求項５９】
前記組成物がソルビタンエステルおよびポリオキシエチレンソルビタンエステルを含む請求項５８記載の免疫原性組成物。
【請求項６０】
前記組成物がポリオキシエチレンソルビタンモノオレエートおよびソルビタントリオレエートを含む請求項５９記載の免疫原性組成物。
【請求項６１】
前記組成物が１〜９の範囲のＨＬＢ価を有する第１の乳化剤および１０〜２０の範囲のＨＬＢ価を有する第２の乳化剤を含む請求項５８記載の免疫原性組成物。
【請求項６２】
前記組成物が１〜４の範囲のＨＬＢ価を有する第１の乳化剤および１２〜１７の範囲のＨＬＢ価を有する第２の乳化剤を含む請求項５８記載の免疫原性組成物。
【請求項６３】
前記リン脂質が前記油相に溶解または分散されている請求項４０〜６２のいずれかに記載の免疫原性組成物。
【請求項６４】
前記リン脂質が前記水相に分散されている請求項４０〜６２のいずれかに記載の免疫原性組成物。
【請求項６５】
前記抗原が水相に溶解または分散されている請求項４０〜６４のいずれかに記載の免疫原性組成物。
【請求項６６】
前記抗原がポリペプチド含有抗原である請求項４０〜６５のいずれかに記載の免疫原性組成物。
【請求項６７】
前記抗原がポリヌクレオチド含有抗原である請求項４０〜６５のいずれかに記載の免疫原性組成物。
【請求項６８】
前記抗原が腫瘍細胞由来である請求項４０〜６７のいずれかに記載の免疫原性組成物。
【請求項６９】
前記抗原が病原性生物由来である請求項４０〜６７のいずれかに記載の免疫原性組成物。
【請求項７０】
前記病原性生物がウィルス、細菌、真菌および寄生生物から選択される請求項６９記載の免疫原性組成物。
【請求項７１】
前記病原性生物がＨＩＶ、Ｂ型肝炎ウィルス、Ｃ型肝炎ウィルス、Ｂ型髄膜炎、ヘモフィルスインフルエンザタイプＢ、百日咳、ジフテリア、破傷風およびＡ型インフルエンザのウィルスから選択される請求項６９記載の免疫原性組成物。
【請求項７２】
前記病原性生物がヒト免疫不全ウィルス、髄膜炎菌およびヘルペスウィルスから選択される請求項６９記載の免疫原性組成物。
【請求項７３】
補充的免疫学的アジュバントをさらに含む請求項４０〜７２のいずれかに記載の免疫原性組成物。
【請求項７４】
前記免疫原性組成物が注射可能組成物である請求項４０〜７３のいずれかに記載の免疫原性組成物。
【請求項７５】
脊椎動物の宿主動物に抗原の治療量を送達する方法であって、請求項４０〜７４のいずれかに記載の免疫原性組成物を該宿主動物に投与することを含む、方法。
【請求項７６】
病原性生物感染または腫瘍を有する宿主動物の治療方法であって、請求項４０〜７４のいずれかに記載の免疫原性組成物を該動物に投与することを含む、方法。
【請求項７７】
腫瘍または病原性生物感染による感染に対して宿主動物を免疫化する方法であって、請求項４０〜７４のいずれかに記載の免疫原性組成物を該動物に投与することを含む、方法。
【請求項７８】
宿主動物における免疫応答を刺激する方法であって、請求項４０〜７４のいずれかに記載の免疫原性組成物を宿主動物に投与することを含む、方法。
【請求項７９】
前記免疫応答が体液性免疫応答を含む請求項７８記載の方法。
【請求項８０】
前記免疫応答が細胞性免疫応答を含む請求項７８記載の方法。
【請求項８１】
前記免疫応答がウィルス、細菌または寄生生物の感染に対して誘起される請求項７８記載の方法。
【請求項８２】
前記免疫応答が腫瘍に対して誘起される請求項７８記載の方法。
【請求項８３】
前記宿主動物が脊椎動物である請求項７８記載の方法。
【請求項８４】
前記宿主動物が哺乳動物である請求項７８記載の方法。
【請求項８５】
前記宿主動物がヒトである請求項７８記載の方法。
【公表番号】特表２００６−５２０７４６（Ｐ２００６−５２０７４６Ａ）
【公表日】平成１８年９月１４日（２００６．９．１４）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００４−５６５７５６（Ｐ２００４−５６５７５６）
【出願日】平成１５年１２月２９日（２００３．１２．２９）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００３／０４１４１２
【国際公開番号】ＷＯ２００４／０６０３９６
【国際公開日】平成１６年７月２２日（２００４．７．２２）
【出願人】（５９１０７６８１１）カイロン コーポレイション (265)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成１８年９月１４日（２００６．９．１４）
【国際特許分類】
【出願日】平成１５年１２月２９日（２００３．１２．２９）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００３／０４１４１２
【国際公開番号】ＷＯ２００４／０６０３９６
【国際公開日】平成１６年７月２２日（２００４．７．２２）
【出願人】（５９１０７６８１１）カイロン コーポレイション (265)
【Ｆターム（参考）】
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