レクチンに対する高親和性核酸リガンド
【課題】レクチンに対する核酸リガンドの同定方法および製造方法、並びにこうして同定および製造された核酸リガンドを提供する。
【解決手段】レクチンについて高親和性オリゴヌクレオチドリガンド、特に、レクチン、コムギ胚芽アグルチニン、Ｌ−セレクチン、Ｅ−セレクチンおよびＰ−セレクチンに結合する能力を有する核酸リガンド。また、このようなリガンドを得るための方法。
【解決手段】レクチンについて高親和性オリゴヌクレオチドリガンド、特に、レクチン、コムギ胚芽アグルチニン、Ｌ−セレクチン、Ｅ−セレクチンおよびＰ−セレクチンに結合する能力を有する核酸リガンド。また、このようなリガンドを得るための方法。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号２２３で示されるヌクレオチド配列であるか、又は配列番号２２３に示される配列と７０％を超える一次配列相同性を有するヌクレオチド配列を含み、Ｐ−セレクチンに特異的に結合し、かつＰ−セレクチンの高親和性アンタゴニストである核酸リガンドであって、前記リガンドの一次配列がＣＵＣＡＡＣＧＡＧＣＣＡＧＧＡＡＣＡＵＣＧＡＣＧＵＣＡＧＣＡＡＡＣＧＣＧＡＧを含む核酸リガンド。
【請求項２】
前記核酸リガンドがリボ核酸であって、ピリミジンが２’−フルオロ(２’−Ｆ)である請求項１に記載の核酸リガンド。
【請求項３】
前記核酸リガンドがリボ核酸であって、ピリミジンが２’−アミノ(２’−ＮＨ２)である請求項１に記載の核酸リガンド。
【請求項４】
１５位までのプリンが２’−Ｏ−メチルである配列番号２２３の一次ヌクレオチド配列を含むリガンドである、請求項１−３のいずれか一項に記載の核酸リガンド。
【請求項５】
配列番号２２３の一次ヌクレオチド配列の７−９位、１５位、２７位、２８位、および３１位のプリンが２’−Ｏ−メチルである、請求項４に記載の核酸リガンド。
【請求項６】
配列番号２２３の一次ヌクレオチド配列の１３位、１４位、１８位、２１位、２２位および２４位のプリンが２’−Ｏ−メチルである、請求項４または５に記載の核酸リガンド。
【請求項７】
配列番号２２３の一次ヌクレオチド配列の７−９位、１３−１５位、１８位、２１位、２２位、２４位、２７位、２８位、および３１位のプリンが２’−Ｏ−メチルである配列番号２２３の一次ヌクレオチド配列を含むリガンドである、請求項１に記載の核酸リガンド。
【請求項８】
Ｐ−セレクチンに結合するアプタマーであって、前記アプタマーは配列番号２２３を含む。
【請求項９】
前記アプタマーがポリエチレングリコール部分にコンジュゲートされた、請求項８のアプタマー。
【請求項１０】
前記ポリエチレングリコール部分が前記アプタマーの５’末端にコンジュゲートされた、請求項９のアプタマー。
【請求項１１】
前記アプタマーがその３’末端に逆転されたデオキシチミジンをさらに含む、請求項１０のアプタマー。
【請求項１２】
前記アプタマーの中の少なくとも１つのグアニンが２’−Ｏ−メチル（２’−ＯＭｅ）であり、前記アプタマーの中の少なくとも１つのアデニンが２’−Ｏ−メチル（２’−ＯＭｅ）である、請求項８のアプタマー。
【請求項１３】
前記アプタマーがポリエチレングリコール部分にコンジュゲートされている、請求項１２のアプタマー。
【請求項１４】
前記ポリエチレングリコール部分が前記アプタマーの５’末端にコンジュゲートされている、請求項１３のアプタマー。
【請求項１５】
前記アプタマーがその３’末端に逆転されたデオキシチミジンをさらに含む、請求項１４のアプタマー。
【請求項１６】
Ｐ−セレクチンに結合するアプタマーであって、前記アプタマーが配列番号２２３を含み、ここで配列番号２２３は７位、８位、９位、１３位、１４位、１５位、１８位、２１位、２２位、２４位、２７位、２８位、および３１位に２’−Ｏ−メチルプリンをさらに含むアプタマー。
【請求項１７】
前記アプタマーがポリエチレングリコール部分にコンジュゲートされた、請求項１６のアプタマー。
【請求項１８】
前記ポリエチレングリコール部分が前記アプタマーの５’末端にコンジュゲートされている、請求項１７のアプタマー。
【請求項１９】
前記アプタマーがその３’末端に逆転されたデオキシチミジンをさらに含む、請求項１８のアプタマー。
【請求項２０】
Ｐ−セレクチンに結合するアプタマーであって、前記アプタマーがＰＥＧ４０Ｋ−ｎｈ−ｆＣ−ｆＵ−ｆＣ−ｒＡ−ｒＡ−ｆＣ−ｍＧ−ｍＡ−ｍＧ−ｆＣ−ｆＣ−ｒＡ−ｍＧ−ｍＧ−ｍＡ−ｒＡ−ｆＣ−ｍＡ−ｆＵ−ｆＣ−ｍＧ−ｍＡ−ｆＣ−ｍＧ−ｆＵ−ｆＣ−ｍＡ−ｍＧ−ｆＣ−ｒＡ−ｍＡ−ｒＡ−ｆＣ−ｒＧ−ｆＣ−ｒＧ−ｒＡ−ｒＧ−ｉｄＴ（配列番号３９２）を含み、ここで“ＰＥＧ４０Ｋ”は４０ｋＤａのポリエチレングリコール部分であり、“ｎｈ“はアミンリンカーであり、“ｉｄＴ”は逆転されたデオキシチミジンであり、“ｆ”はフルオロであり、“ｍ”はメトキシであり、そして“ｒ”はリボであるアプタマー。
【請求項２１】
前記アミンリンカーがヘキシルアミンリンカーである、請求項２０のアプタマー。
【請求項２２】
Ｐ−セレクチンに特異的に結合する精製および単離された非天然存在の核酸リガンドであって、前記核酸リガンドが配列番号１９９−２４７および２５１−２９０に示されたいずれか１つの配列を有する核酸リガンド。
【請求項２３】
Ｐ−セレクチンに特異的に結合する精製および単離された非天然存在の核酸リガンドであって、前記核酸リガンドが配列番号１９９−２４７および２５１−２９０に示されたいずれか１つの配列を有する核酸リガンドと実質的に同一の配列であって、かつ実質的に同じＰ−セレクチンとの結合能力を有する核酸リガンド。
【請求項２４】
Ｐ−セレクチンに特異的に結合し、Ｐ−セレクチンの高親和性アンタゴニストである核酸リガンドであって、前記核酸リガンドが配列番号２０６で示される配列を有する核酸リガンド。
【請求項２５】
レクチン媒介性の血小板異常を治療するための医薬組成物であって、医薬的有効量のＰ−セレクチンに対する核酸リガンドを含む医薬組成物。
【請求項２６】
ａ） 核酸の候補混合物をレクチンと接触させ、ここで候補混合物よりレクチンへの親和性が上昇している核酸は、残りの候補混合物から分離される工程；
ｂ） 残りの候補混合物から親和性が上昇した核酸を分離する工程；
ｃ） 親和性が上昇した核酸を増幅して、レクチンへの結合について比較的高い親和性と特異性を有する核酸配列が濃縮された核酸の混合物を得て、それによってレクチンの核酸リガンドを同定する工程、
を含む方法によって、Ｐ−セレクチンに対する前記核酸リガンドが同定される、請求項２５の医薬組成物。
【請求項２７】
Ｐ−セレクチンに対する核酸リガンドが、配列番号１９９−２４７、および２５１−２９０からなる群より選択される、請求項２５の医薬組成物。
【請求項２８】
Ｐ−セレクチンに対する前記核酸リガンドが、配列番号２０６である、請求項２７の医薬組成物。
【請求項２９】
Ｐ−セレクチンに対する前記核酸リガンドが、１９位を５’末端とし、５６位を３’末端とする３８塩基を含む配列番号２０６の断片である、請求項２８の医薬組成物。
【請求項３０】
前記３８塩基の中の少なくとも１つのグアニンが２’−Ｏ−メチルであり、前記３８塩基の中の少なくとも１つのアデニンが２’−Ｏ−メチルであるように、前記３８塩基がさらに修飾された、請求項２９の医薬組成物。
【請求項３１】
前記３８塩基が２’−Ｏ−メチルプリン置換によってさらに修飾された請求項２９の医薬組成物であって、前記３８塩基が５’−ＣＵＣＡＡＣＧＡＧＣＣＡＧＧＡＡＣＡＵＣＧＡＣＧＵＣＡＧＣＡＡＡＣＧＣＧＡＧ−３’（配列番号３９１）を含み、ここで少なくとも下線を引いた塩基が２’−Ｏ−メチルである医薬組成物。
【請求項３２】
哺乳類におけるレクチン媒介性の血小板異常を治療するための医薬組成物であって、Ｐ−セレクチンに対する核酸リガンドを含む医薬的有効量の剤形を含み、ここで前記リガンドはＰＳ−Ｒｇの機能的アンタゴニストである医薬組成物。
【請求項３３】
ａ） 核酸の候補混合物をレクチンと接触させ、ここで候補混合物よりレクチンへの親和性が上昇している核酸は、残りの候補混合物から分離される工程；
ｂ） 残りの候補混合物から親和性が上昇した核酸を分離する工程；および
ｃ） 親和性が上昇した核酸を増幅して、レクチンへの結合について比較的高い親和性と特異性を有する核酸配列が濃縮された核酸の混合物を得て、それによってＰ−セレクチンの核酸リガンドを同定する工程、
を含む方法によって、Ｐ−セレクチンに対する前記核酸リガンドが同定される、請求項３２の医薬組成物。
【請求項３４】
Ｐ−セレクチンに対する前記核酸リガンドが、配列番号１９９−２４７、および２５１−２９０からなる群より選択される、請求項３２の医薬組成物。
【請求項３５】
Ｐ−セレクチンに対する前記核酸リガンドが、配列番号２０６である、請求項３４の医薬組成物。
【請求項３６】
Ｐ−セレクチンに対する前記核酸リガンドが、１９位を５’末端とし、５６位を３’末端とする３８塩基を含む配列番号２０６の断片である、請求項３５の医薬組成物。
【請求項３７】
前記３８塩基の中の少なくとも１つのグアニンが２’−Ｏ−メチルであり、前記３８塩基の中の少なくとも１つのアデニンが２’−Ｏ−メチルであるように、前記３８塩基がさらに修飾された、請求項３６の医薬組成物。
【請求項３８】
前記３８塩基が２’−Ｏ−メチルプリン置換によってさらに修飾された請求項３６の医薬組成物であって、前記３８塩基が５’−ＣＵＣＡＡＣＧＡＧＣＣＡＧＧＡＡＣＡＵＣＧＡＣＧＵＣＡＧＣＡＡＡＣＧＣＧＡＧ−３’（配列番号３９１）を含み、ここで少なくとも下線を引いた塩基が２’−Ｏ−メチルである医薬組成物。
【請求項３９】
哺乳類の血液中の好中球に対する血小板の接着を阻害するための医薬組成物であって、Ｐ−セレクチンに対する核酸リガンドを含み、ここで前記リガンドはＰＳ−Ｒｇの機能的アンタゴニストである医薬組成物。
【請求項４０】
ａ） 核酸の候補混合物をレクチンと接触させ、ここで候補混合物よりレクチンへの親和性が上昇している核酸は、残りの候補混合物から分離される工程；
ｂ） 残りの候補混合物から親和性が上昇した核酸を分離する工程；および
ｃ） 親和性が上昇した核酸を増幅して、レクチンへの結合について比較的高い親和性と特異性を有する核酸配列が濃縮された核酸の混合物を得て、それによってＰ−セレクチンの核酸リガンドを同定する工程、
を含む方法によって、Ｐ−セレクチンに対する前記核酸リガンドが同定される、請求項３９の医薬組成物。
【請求項４１】
Ｐ−セレクチンに対する前記核酸リガンドが、配列番号１９９−２４７、および２５１−２９０からなる群より選択される、請求項３９の医薬組成物。
【請求項４２】
Ｐ−セレクチンに対する前記核酸リガンドが、配列番号２０６である、請求項４１の医薬組成物。
【請求項４３】
Ｐ−セレクチンに対する前記核酸リガンドが、１９位を５’末端とし、５６位を３’末端とする３８塩基を含む配列番号２０６の断片である、請求項４２の医薬組成物。
【請求項４４】
前記３８塩基の中の少なくとも１つのグアニンが２’−Ｏ−メチルであり、前記３８塩基の中の少なくとも１つのアデニンが２’−Ｏ−メチルであるように、前記３８塩基がさらに修飾された、請求項４３の医薬組成物。
【請求項４５】
前記３８塩基が２’−Ｏ−メチルプリン置換によってさらに修飾された請求項４３の医薬組成物であって、前記３８塩基が５’−ＣＵＣＡＡＣＧＡＧＣＣＡＧＧＡＡＣＡＵＣＧＡＣＧＵＣＡＧＣＡＡＡＣＧＣＧＡＧ−３’（配列番号３９１）を含み、ここで少なくとも下線を引いた塩基が２’−Ｏ−メチルである医薬組成物。
【請求項４６】
哺乳類の血液中の白血球に対する血小板の接着を阻害するための医薬組成物であって、Ｐ−セレクチンに対する核酸リガンドを含む医薬組成物。
【請求項４７】
哺乳類の血液中の炭水化物に対するＰ−セレクチンの結合を阻害するための医薬組成物であって、Ｐ−セレクチンに対する核酸リガンドを含む医薬組成物。
【請求項４８】
Ｐ−セレクチンおよび前記Ｐ−セレクチンの炭水化物リガンドの間の結合を阻害する方法であって、前記Ｐ−セレクチンに対する核酸リガンドを前記Ｐ−セレクチンに接触させる工程を含み、ここでＰ−セレクチンに対する前記核酸リガンドが、配列番号１９９−２４７および２５１−２９０からなる群より選択される方法。
【請求項４９】
白血球の接着または移動を調節する方法であって、第一の細胞上にあるＰ−セレクチンおよび第二の細胞上にある前記Ｐ−セレクチンに対するリガンドの間の結合を阻害する工程を含み、前記阻害する工程は前記セレクチンに対する核酸リガンドが前記第一の細胞と相互作用することを可能にする工程を含み、ここで前記第一の細胞は好中球および単球からなる群より選択される白血球であり、前記第二の細胞は血管内皮細胞であり、そして前記核酸リガンドは配列番号１９９−２４７、２５１−２９０からなる群より選択される方法。
【請求項５０】
血小板の接着を調節する方法であって、第一の細胞上にあるＰ−セレクチンおよび第二の細胞上にある前記Ｐ−セレクチンに対するリガンドの間の結合を阻害する工程を含み、前記阻害する工程は前記Ｐ−セレクチンに対する核酸リガンドが前記第一の細胞と相互作用することを可能にする工程を含み、ここで前記第一の細胞は血小板であり、前記レクチンはＰ−セレクチンであり、そして前記Ｐ−セレクチンに対する核酸リガンドは配列番号１９９−２４７、および２５１−２９０からなる群より選択される方法。
【請求項５１】
Ｐ−セレクチンおよび前記Ｐ−セレクチンに対する炭水化物リガンドの間の結合を阻害する方法であって、前記Ｐ−セレクチンに対する核酸リガンドを前記Ｐ−セレクチンに接触させる工程を含み、ここでＰ−セレクチンに対する前記核酸リガンドは配列番号２２３を含む方法。
【請求項５２】
配列番号２２３が少なくとも１つの２’−Ｏ−メチルプリンをさらに含む、請求項５１の方法。
【請求項５３】
配列番号２２３が７位、８位、９位、１５位、２７位、２８位および３１位に２’−Ｏ−メチルプリンをさらに含む、請求項５１の方法。
【請求項５４】
配列番号２２３が、以下の１３位、１４位、１６位、１８位、２１位、２２位、２４位および３０位のうち１以上に２’−Ｏ−メチルプリンをさらに含む、請求項５３の方法。
【請求項５５】
配列番号２２３が、１３位、１４位、１８位、２１位、２２位、および２４位に２’−Ｏ−メチルプリンをさらに含む、請求項５３の方法。
【請求項５６】
白血球の接着または移動を調節する方法であって、第一の細胞上にあるＰ−セレクチンおよび第二の細胞上にある前記Ｐ−セレクチンに対するリガンドの間の結合を阻害する工程を含み、前記阻害する工程は前記セレクチンに対する核酸リガンドが前記第一の細胞と相互作用することを可能にする工程を含み、ここで前記第一の細胞は好中球および単球からなる群より選択される白血球であり、前記第二の細胞は血管内皮細胞であり、そして前記核酸リガンドは配列番号２２３である方法。
【請求項５７】
配列番号２２３が少なくとも１つの２’−Ｏ−メチルプリンをさらに含む、請求項５６の方法。
【請求項５８】
配列番号２２３が、７位、８位、９位、１５位、２７位、２８位、および３１位に２’−Ｏ−メチルプリンをさらに含む、請求項５６の方法。
【請求項５９】
配列番号２２３が、以下の１３位、１４位、１６位、１８位、２１位、２２位、２４位および３０位のうち１以上に２’−Ｏ−メチルプリンをさらに含む、請求項５８の方法。
【請求項６０】
配列番号２２３が、１３位、１４位、１８位、２１位、２２位、および２４位に２’−Ｏ−メチルプリンをさらに含む、請求項５８の方法。
【請求項６１】
血小板の接着を調節する方法であって、Ｐ−セレクチンを有する第一の細胞上のレクチンおよび前記Ｐ−セレクチンに対するリガンドを有する第二の細胞上の前記Ｐ−セレクチンに対するリガンドの間の結合を阻害する工程を含み、前記Ｐ−セレクチンに対する核酸リガンドが第一の細胞と相互作用することを可能にする工程を含み、ここで前記第一の細胞は血小板であり、前記レクチンはＰ−セレクチンであり、そして前記Ｐ−セレクチンに対する前記核酸リガンドは配列番号２２３を含む方法。
【請求項６２】
配列番号２２３が少なくとも１つの２’−Ｏ−メチルプリンをさらに含む、請求項６１の方法。
【請求項６３】
配列番号２２３が７位、８位、９位、１５位、２７位、２８位および３１位に２’−Ｏ−メチルプリンをさらに含む、請求項６１の方法。
【請求項６４】
配列番号２２３が以下の１３位、１４位、１６位、１８位、２１位、２２位、２４位および３０位のうち１以上に２’−Ｏ−メチルプリンをさらに含む、請求項６３の方法。
【請求項６５】
配列番号２２３が、１３位、１４位、１８位、２１位、２２位、および２４位に２’−Ｏ−メチルプリンをさらに含む、請求項６３の方法。
【請求項１】
配列番号２２３で示されるヌクレオチド配列であるか、又は配列番号２２３に示される配列と７０％を超える一次配列相同性を有するヌクレオチド配列を含み、Ｐ−セレクチンに特異的に結合し、かつＰ−セレクチンの高親和性アンタゴニストである核酸リガンドであって、前記リガンドの一次配列がＣＵＣＡＡＣＧＡＧＣＣＡＧＧＡＡＣＡＵＣＧＡＣＧＵＣＡＧＣＡＡＡＣＧＣＧＡＧを含む核酸リガンド。
【請求項２】
前記核酸リガンドがリボ核酸であって、ピリミジンが２’−フルオロ(２’−Ｆ)である請求項１に記載の核酸リガンド。
【請求項３】
前記核酸リガンドがリボ核酸であって、ピリミジンが２’−アミノ(２’−ＮＨ２)である請求項１に記載の核酸リガンド。
【請求項４】
１５位までのプリンが２’−Ｏ−メチルである配列番号２２３の一次ヌクレオチド配列を含むリガンドである、請求項１−３のいずれか一項に記載の核酸リガンド。
【請求項５】
配列番号２２３の一次ヌクレオチド配列の７−９位、１５位、２７位、２８位、および３１位のプリンが２’−Ｏ−メチルである、請求項４に記載の核酸リガンド。
【請求項６】
配列番号２２３の一次ヌクレオチド配列の１３位、１４位、１８位、２１位、２２位および２４位のプリンが２’−Ｏ−メチルである、請求項４または５に記載の核酸リガンド。
【請求項７】
配列番号２２３の一次ヌクレオチド配列の７−９位、１３−１５位、１８位、２１位、２２位、２４位、２７位、２８位、および３１位のプリンが２’−Ｏ−メチルである配列番号２２３の一次ヌクレオチド配列を含むリガンドである、請求項１に記載の核酸リガンド。
【請求項８】
Ｐ−セレクチンに結合するアプタマーであって、前記アプタマーは配列番号２２３を含む。
【請求項９】
前記アプタマーがポリエチレングリコール部分にコンジュゲートされた、請求項８のアプタマー。
【請求項１０】
前記ポリエチレングリコール部分が前記アプタマーの５’末端にコンジュゲートされた、請求項９のアプタマー。
【請求項１１】
前記アプタマーがその３’末端に逆転されたデオキシチミジンをさらに含む、請求項１０のアプタマー。
【請求項１２】
前記アプタマーの中の少なくとも１つのグアニンが２’−Ｏ−メチル（２’−ＯＭｅ）であり、前記アプタマーの中の少なくとも１つのアデニンが２’−Ｏ−メチル（２’−ＯＭｅ）である、請求項８のアプタマー。
【請求項１３】
前記アプタマーがポリエチレングリコール部分にコンジュゲートされている、請求項１２のアプタマー。
【請求項１４】
前記ポリエチレングリコール部分が前記アプタマーの５’末端にコンジュゲートされている、請求項１３のアプタマー。
【請求項１５】
前記アプタマーがその３’末端に逆転されたデオキシチミジンをさらに含む、請求項１４のアプタマー。
【請求項１６】
Ｐ−セレクチンに結合するアプタマーであって、前記アプタマーが配列番号２２３を含み、ここで配列番号２２３は７位、８位、９位、１３位、１４位、１５位、１８位、２１位、２２位、２４位、２７位、２８位、および３１位に２’−Ｏ−メチルプリンをさらに含むアプタマー。
【請求項１７】
前記アプタマーがポリエチレングリコール部分にコンジュゲートされた、請求項１６のアプタマー。
【請求項１８】
前記ポリエチレングリコール部分が前記アプタマーの５’末端にコンジュゲートされている、請求項１７のアプタマー。
【請求項１９】
前記アプタマーがその３’末端に逆転されたデオキシチミジンをさらに含む、請求項１８のアプタマー。
【請求項２０】
Ｐ−セレクチンに結合するアプタマーであって、前記アプタマーがＰＥＧ４０Ｋ−ｎｈ−ｆＣ−ｆＵ−ｆＣ−ｒＡ−ｒＡ−ｆＣ−ｍＧ−ｍＡ−ｍＧ−ｆＣ−ｆＣ−ｒＡ−ｍＧ−ｍＧ−ｍＡ−ｒＡ−ｆＣ−ｍＡ−ｆＵ−ｆＣ−ｍＧ−ｍＡ−ｆＣ−ｍＧ−ｆＵ−ｆＣ−ｍＡ−ｍＧ−ｆＣ−ｒＡ−ｍＡ−ｒＡ−ｆＣ−ｒＧ−ｆＣ−ｒＧ−ｒＡ−ｒＧ−ｉｄＴ（配列番号３９２）を含み、ここで“ＰＥＧ４０Ｋ”は４０ｋＤａのポリエチレングリコール部分であり、“ｎｈ“はアミンリンカーであり、“ｉｄＴ”は逆転されたデオキシチミジンであり、“ｆ”はフルオロであり、“ｍ”はメトキシであり、そして“ｒ”はリボであるアプタマー。
【請求項２１】
前記アミンリンカーがヘキシルアミンリンカーである、請求項２０のアプタマー。
【請求項２２】
Ｐ−セレクチンに特異的に結合する精製および単離された非天然存在の核酸リガンドであって、前記核酸リガンドが配列番号１９９−２４７および２５１−２９０に示されたいずれか１つの配列を有する核酸リガンド。
【請求項２３】
Ｐ−セレクチンに特異的に結合する精製および単離された非天然存在の核酸リガンドであって、前記核酸リガンドが配列番号１９９−２４７および２５１−２９０に示されたいずれか１つの配列を有する核酸リガンドと実質的に同一の配列であって、かつ実質的に同じＰ−セレクチンとの結合能力を有する核酸リガンド。
【請求項２４】
Ｐ−セレクチンに特異的に結合し、Ｐ−セレクチンの高親和性アンタゴニストである核酸リガンドであって、前記核酸リガンドが配列番号２０６で示される配列を有する核酸リガンド。
【請求項２５】
レクチン媒介性の血小板異常を治療するための医薬組成物であって、医薬的有効量のＰ−セレクチンに対する核酸リガンドを含む医薬組成物。
【請求項２６】
ａ） 核酸の候補混合物をレクチンと接触させ、ここで候補混合物よりレクチンへの親和性が上昇している核酸は、残りの候補混合物から分離される工程；
ｂ） 残りの候補混合物から親和性が上昇した核酸を分離する工程；
ｃ） 親和性が上昇した核酸を増幅して、レクチンへの結合について比較的高い親和性と特異性を有する核酸配列が濃縮された核酸の混合物を得て、それによってレクチンの核酸リガンドを同定する工程、
を含む方法によって、Ｐ−セレクチンに対する前記核酸リガンドが同定される、請求項２５の医薬組成物。
【請求項２７】
Ｐ−セレクチンに対する核酸リガンドが、配列番号１９９−２４７、および２５１−２９０からなる群より選択される、請求項２５の医薬組成物。
【請求項２８】
Ｐ−セレクチンに対する前記核酸リガンドが、配列番号２０６である、請求項２７の医薬組成物。
【請求項２９】
Ｐ−セレクチンに対する前記核酸リガンドが、１９位を５’末端とし、５６位を３’末端とする３８塩基を含む配列番号２０６の断片である、請求項２８の医薬組成物。
【請求項３０】
前記３８塩基の中の少なくとも１つのグアニンが２’−Ｏ−メチルであり、前記３８塩基の中の少なくとも１つのアデニンが２’−Ｏ−メチルであるように、前記３８塩基がさらに修飾された、請求項２９の医薬組成物。
【請求項３１】
前記３８塩基が２’−Ｏ−メチルプリン置換によってさらに修飾された請求項２９の医薬組成物であって、前記３８塩基が５’−ＣＵＣＡＡＣＧＡＧＣＣＡＧＧＡＡＣＡＵＣＧＡＣＧＵＣＡＧＣＡＡＡＣＧＣＧＡＧ−３’（配列番号３９１）を含み、ここで少なくとも下線を引いた塩基が２’−Ｏ−メチルである医薬組成物。
【請求項３２】
哺乳類におけるレクチン媒介性の血小板異常を治療するための医薬組成物であって、Ｐ−セレクチンに対する核酸リガンドを含む医薬的有効量の剤形を含み、ここで前記リガンドはＰＳ−Ｒｇの機能的アンタゴニストである医薬組成物。
【請求項３３】
ａ） 核酸の候補混合物をレクチンと接触させ、ここで候補混合物よりレクチンへの親和性が上昇している核酸は、残りの候補混合物から分離される工程；
ｂ） 残りの候補混合物から親和性が上昇した核酸を分離する工程；および
ｃ） 親和性が上昇した核酸を増幅して、レクチンへの結合について比較的高い親和性と特異性を有する核酸配列が濃縮された核酸の混合物を得て、それによってＰ−セレクチンの核酸リガンドを同定する工程、
を含む方法によって、Ｐ−セレクチンに対する前記核酸リガンドが同定される、請求項３２の医薬組成物。
【請求項３４】
Ｐ−セレクチンに対する前記核酸リガンドが、配列番号１９９−２４７、および２５１−２９０からなる群より選択される、請求項３２の医薬組成物。
【請求項３５】
Ｐ−セレクチンに対する前記核酸リガンドが、配列番号２０６である、請求項３４の医薬組成物。
【請求項３６】
Ｐ−セレクチンに対する前記核酸リガンドが、１９位を５’末端とし、５６位を３’末端とする３８塩基を含む配列番号２０６の断片である、請求項３５の医薬組成物。
【請求項３７】
前記３８塩基の中の少なくとも１つのグアニンが２’−Ｏ−メチルであり、前記３８塩基の中の少なくとも１つのアデニンが２’−Ｏ−メチルであるように、前記３８塩基がさらに修飾された、請求項３６の医薬組成物。
【請求項３８】
前記３８塩基が２’−Ｏ−メチルプリン置換によってさらに修飾された請求項３６の医薬組成物であって、前記３８塩基が５’−ＣＵＣＡＡＣＧＡＧＣＣＡＧＧＡＡＣＡＵＣＧＡＣＧＵＣＡＧＣＡＡＡＣＧＣＧＡＧ−３’（配列番号３９１）を含み、ここで少なくとも下線を引いた塩基が２’−Ｏ−メチルである医薬組成物。
【請求項３９】
哺乳類の血液中の好中球に対する血小板の接着を阻害するための医薬組成物であって、Ｐ−セレクチンに対する核酸リガンドを含み、ここで前記リガンドはＰＳ−Ｒｇの機能的アンタゴニストである医薬組成物。
【請求項４０】
ａ） 核酸の候補混合物をレクチンと接触させ、ここで候補混合物よりレクチンへの親和性が上昇している核酸は、残りの候補混合物から分離される工程；
ｂ） 残りの候補混合物から親和性が上昇した核酸を分離する工程；および
ｃ） 親和性が上昇した核酸を増幅して、レクチンへの結合について比較的高い親和性と特異性を有する核酸配列が濃縮された核酸の混合物を得て、それによってＰ−セレクチンの核酸リガンドを同定する工程、
を含む方法によって、Ｐ−セレクチンに対する前記核酸リガンドが同定される、請求項３９の医薬組成物。
【請求項４１】
Ｐ−セレクチンに対する前記核酸リガンドが、配列番号１９９−２４７、および２５１−２９０からなる群より選択される、請求項３９の医薬組成物。
【請求項４２】
Ｐ−セレクチンに対する前記核酸リガンドが、配列番号２０６である、請求項４１の医薬組成物。
【請求項４３】
Ｐ−セレクチンに対する前記核酸リガンドが、１９位を５’末端とし、５６位を３’末端とする３８塩基を含む配列番号２０６の断片である、請求項４２の医薬組成物。
【請求項４４】
前記３８塩基の中の少なくとも１つのグアニンが２’−Ｏ−メチルであり、前記３８塩基の中の少なくとも１つのアデニンが２’−Ｏ−メチルであるように、前記３８塩基がさらに修飾された、請求項４３の医薬組成物。
【請求項４５】
前記３８塩基が２’−Ｏ−メチルプリン置換によってさらに修飾された請求項４３の医薬組成物であって、前記３８塩基が５’−ＣＵＣＡＡＣＧＡＧＣＣＡＧＧＡＡＣＡＵＣＧＡＣＧＵＣＡＧＣＡＡＡＣＧＣＧＡＧ−３’（配列番号３９１）を含み、ここで少なくとも下線を引いた塩基が２’−Ｏ−メチルである医薬組成物。
【請求項４６】
哺乳類の血液中の白血球に対する血小板の接着を阻害するための医薬組成物であって、Ｐ−セレクチンに対する核酸リガンドを含む医薬組成物。
【請求項４７】
哺乳類の血液中の炭水化物に対するＰ−セレクチンの結合を阻害するための医薬組成物であって、Ｐ−セレクチンに対する核酸リガンドを含む医薬組成物。
【請求項４８】
Ｐ−セレクチンおよび前記Ｐ−セレクチンの炭水化物リガンドの間の結合を阻害する方法であって、前記Ｐ−セレクチンに対する核酸リガンドを前記Ｐ−セレクチンに接触させる工程を含み、ここでＰ−セレクチンに対する前記核酸リガンドが、配列番号１９９−２４７および２５１−２９０からなる群より選択される方法。
【請求項４９】
白血球の接着または移動を調節する方法であって、第一の細胞上にあるＰ−セレクチンおよび第二の細胞上にある前記Ｐ−セレクチンに対するリガンドの間の結合を阻害する工程を含み、前記阻害する工程は前記セレクチンに対する核酸リガンドが前記第一の細胞と相互作用することを可能にする工程を含み、ここで前記第一の細胞は好中球および単球からなる群より選択される白血球であり、前記第二の細胞は血管内皮細胞であり、そして前記核酸リガンドは配列番号１９９−２４７、２５１−２９０からなる群より選択される方法。
【請求項５０】
血小板の接着を調節する方法であって、第一の細胞上にあるＰ−セレクチンおよび第二の細胞上にある前記Ｐ−セレクチンに対するリガンドの間の結合を阻害する工程を含み、前記阻害する工程は前記Ｐ−セレクチンに対する核酸リガンドが前記第一の細胞と相互作用することを可能にする工程を含み、ここで前記第一の細胞は血小板であり、前記レクチンはＰ−セレクチンであり、そして前記Ｐ−セレクチンに対する核酸リガンドは配列番号１９９−２４７、および２５１−２９０からなる群より選択される方法。
【請求項５１】
Ｐ−セレクチンおよび前記Ｐ−セレクチンに対する炭水化物リガンドの間の結合を阻害する方法であって、前記Ｐ−セレクチンに対する核酸リガンドを前記Ｐ−セレクチンに接触させる工程を含み、ここでＰ−セレクチンに対する前記核酸リガンドは配列番号２２３を含む方法。
【請求項５２】
配列番号２２３が少なくとも１つの２’−Ｏ−メチルプリンをさらに含む、請求項５１の方法。
【請求項５３】
配列番号２２３が７位、８位、９位、１５位、２７位、２８位および３１位に２’−Ｏ−メチルプリンをさらに含む、請求項５１の方法。
【請求項５４】
配列番号２２３が、以下の１３位、１４位、１６位、１８位、２１位、２２位、２４位および３０位のうち１以上に２’−Ｏ−メチルプリンをさらに含む、請求項５３の方法。
【請求項５５】
配列番号２２３が、１３位、１４位、１８位、２１位、２２位、および２４位に２’−Ｏ−メチルプリンをさらに含む、請求項５３の方法。
【請求項５６】
白血球の接着または移動を調節する方法であって、第一の細胞上にあるＰ−セレクチンおよび第二の細胞上にある前記Ｐ−セレクチンに対するリガンドの間の結合を阻害する工程を含み、前記阻害する工程は前記セレクチンに対する核酸リガンドが前記第一の細胞と相互作用することを可能にする工程を含み、ここで前記第一の細胞は好中球および単球からなる群より選択される白血球であり、前記第二の細胞は血管内皮細胞であり、そして前記核酸リガンドは配列番号２２３である方法。
【請求項５７】
配列番号２２３が少なくとも１つの２’−Ｏ−メチルプリンをさらに含む、請求項５６の方法。
【請求項５８】
配列番号２２３が、７位、８位、９位、１５位、２７位、２８位、および３１位に２’−Ｏ−メチルプリンをさらに含む、請求項５６の方法。
【請求項５９】
配列番号２２３が、以下の１３位、１４位、１６位、１８位、２１位、２２位、２４位および３０位のうち１以上に２’−Ｏ−メチルプリンをさらに含む、請求項５８の方法。
【請求項６０】
配列番号２２３が、１３位、１４位、１８位、２１位、２２位、および２４位に２’−Ｏ−メチルプリンをさらに含む、請求項５８の方法。
【請求項６１】
血小板の接着を調節する方法であって、Ｐ−セレクチンを有する第一の細胞上のレクチンおよび前記Ｐ−セレクチンに対するリガンドを有する第二の細胞上の前記Ｐ−セレクチンに対するリガンドの間の結合を阻害する工程を含み、前記Ｐ−セレクチンに対する核酸リガンドが第一の細胞と相互作用することを可能にする工程を含み、ここで前記第一の細胞は血小板であり、前記レクチンはＰ−セレクチンであり、そして前記Ｐ−セレクチンに対する前記核酸リガンドは配列番号２２３を含む方法。
【請求項６２】
配列番号２２３が少なくとも１つの２’−Ｏ−メチルプリンをさらに含む、請求項６１の方法。
【請求項６３】
配列番号２２３が７位、８位、９位、１５位、２７位、２８位および３１位に２’−Ｏ−メチルプリンをさらに含む、請求項６１の方法。
【請求項６４】
配列番号２２３が以下の１３位、１４位、１６位、１８位、２１位、２２位、２４位および３０位のうち１以上に２’−Ｏ−メチルプリンをさらに含む、請求項６３の方法。
【請求項６５】
配列番号２２３が、１３位、１４位、１８位、２１位、２２位、および２４位に２’−Ｏ−メチルプリンをさらに含む、請求項６３の方法。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８Ａ】
【図８Ｂ】
【図８Ｃ】
【図８Ｄ】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８Ａ】
【図８Ｂ】
【図８Ｃ】
【図８Ｄ】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【公開番号】特開２００９−３９１２６（Ｐ２００９−３９１２６Ａ）
【公開日】平成２１年２月２６日（２００９．２．２６）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００８−２２７４００（Ｐ２００８−２２７４００）
【出願日】平成２０年９月４日（２００８．９．４）
【分割の表示】特願平９−５０１７７０の分割
【原出願日】平成８年６月５日（１９９６．６．５）
【出願人】（５０１３４５３９０）ギリード・サイエンシズ・インコーポレーテッド (17)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２１年２月２６日（２００９．２．２６）
【国際特許分類】
【出願日】平成２０年９月４日（２００８．９．４）
【分割の表示】特願平９−５０１７７０の分割
【原出願日】平成８年６月５日（１９９６．６．５）
【出願人】（５０１３４５３９０）ギリード・サイエンシズ・インコーポレーテッド (17)
【Ｆターム（参考）】
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