レセプターアイソフォームおよびリガンドアイソフォームの産生のための方法
細胞表面レセプター（ＣＳＲ）およびリガンドアイソフォームを産生するための方法が提供される。具体的には、分泌、プロセシング、および細胞内追跡のための前駆体配列であるアイソフォーム融合体が提供される。この融合体をコードする核酸分子が宿主細胞において発現され、コードされ、かつ部分的または完全にプロセシングされたコードされたＣＳＲまたはリガンドアイソフォームが、細胞培地中に産生される。得られたポリペプチドは、必要に応じて、その検出および／または精製のためのエピトープタグを含む。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
異種前駆体配列またはその十分な部分に、直接的かまたはポリペプチドリンカーを介して間接的に作動可能に連結されたレセプターチロシンキナーゼ（ＲＴＫ）アイソフォームを含むポリペプチドであって、該部分は、該連結されたＲＴＫイントロン融合タンパク質の分泌、プロセシングおよび／または輸送を達成するのに十分である、ポリペプチド。
【請求項２】
前記ＲＴＫアイソフォームは、内因性シグナル配列を含む、請求項１に記載のポリペプチド。
【請求項３】
前記ＲＴＫアイソフォームは、内因性シグナル配列を含まない、請求項１に記載のポリペプチド。
【請求項４】
前記前駆体配列は、組織プラスミノーゲンアクチベータ（ｔＰＡ）プレ／プロ配列または分泌を達成するために十分なその部分、ならびにその対立遺伝子改変体および種改変体から選択される、請求項１〜３のいずれかに記載のポリペプチド。
【請求項５】
前記ｔＰＡプレ／プロ配列は、哺乳動物ｔＰＡプレ／プロ配列である、請求項４に記載のポリペプチド。
【請求項６】
前記ｔＰＡプレ／プロ配列は、配列番号２に示されるアミノ酸の配列あるいはその対立遺伝子改変体あるいは少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれ以上の配列同一性を有する改変体を含み、そして該ｔＰＡ部分は、前記連結されたＲＴＫアイソフォームの分泌、プロセシングおよび／または輸送を達成する、請求項４または５のいずれかに記載のポリペプチド。
【請求項７】
前記ＲＴＫアイソフォームは、ＶＥＧＦＲ融合タンパク質、ＦＧＦＲ融合タンパク質、ＰＤＧＦＲ融合タンパク質、ＭＥＴ融合タンパク質、ＥＰＨ融合タンパク質、ＴＩＥ融合タンパク質、ＤＤＲ融合タンパク質およびＨＥＲ融合タンパク質から選択される、請求項１〜６のいずれかに記載のポリペプチド。
【請求項８】
前記ＲＴＫアイソフォームは、ＤＤＲ１、ＥｐｈＡ１、ＥｐｈＡ２、ＥｐｈＡ８、ＥｐｈＢ１、ＥｐｈＢ４、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ−２（ＥｒｂＢ２）、ＥｒｂＢ３、ＦＧＦＲ−１、ＦＧＦＲ−２、ＦＧＦＲ−４、ＭＥＴ、ＲＯＮ、ＣＳＦ１Ｒ、ＫＩＴ、ＰＤＧＦＲ−Ａ、ＰＤＧＦＲ−Ｂ、ＴＥＫ、Ｔｉｅ−１、ＶＥＧＦＲ−１、ＶＥＧＦＲ−２、ＶＥＧＦＲ−３、およびそれらの対立遺伝子改変体または任意のこれらのＲＴＫアイソフォームと少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくはそれ以上の配列同一性を有するそれらの改変体から選択され、該改変体は、対応するＲＴＫアイソフォームの少なくとも１つの活性を有する、請求項７に記載のポリペプチド。
【請求項９】
前記ＲＴＫアイソフォームは、配列番号１４０、配列番号１４２、配列番号１４３、配列番号１４５、配列番号１４７、配列番号１４９、配列番号１５０、配列番号１５２、配列番号１５３、配列番号１５５、配列番号１５７、配列番号１５９、配列番号１６１〜１６８、配列番号１７０、配列番号１７２、配列番号１７４、配列番号１７６、配列番号１７８、配列番号１８０、配列番号１８１、配列番号１８３、配列番号１８５、配列番号１８６、配列番号１８８、配列番号１９０、配列番号１９２、配列番号１９４、配列番号１９６、配列番号１９８、配列番号２００、配列番号２０２、配列番号２０４、配列番号２０６、配列番号２０８、配列番号２１０、配列番号２１２、配列番号２１４、配列番号２１６、配列番号２１７、配列番号２１９、配列番号２２１、配列番号２２３、配列番号２２５、配列番号２２７、配列番号２２９〜２３１、配列番号２３３、配列番号２４５、配列番号２４７〜２５１、配列番号２５３、配列番号２５５、配列番号２５７、配列番号２５９、配列番号２６１、配列番号２６３〜２７０、配列番号２７４〜２８０、配列番号２８２、配列番号２８４、配列番号２８６、配列番号２８８、配列番号２８９〜３０３のいずれか１つに示されるアミノ酸の配列またはその活性な部分を含む、請求項８のポリペプチド。
【請求項１０】
前記ＲＴＫアイソフォームは、ｔＰＡ前駆体配列または分泌を達成するために十分なその部分にリンカーを介して作動可能に連結されている、請求項１〜９のいずれかに記載のポリペプチド。
【請求項１１】
前記リンカーは、１種以上の制限酵素によって認識されるヌクレオチドの配列によってコードされる制限酵素リンカーである、請求項１０に記載のポリペプチド。
【請求項１２】
前記制限酵素リンカーは、アイソフォームと、ｔＰＡプレ／プロ配列または分泌を達成するために十分なその部分との間に連結されている、請求項１１に記載のポリペプチド。
【請求項１３】
ポリペプチドの精製および／または検出を容易にするタグを必要に応じて含む、請求項１〜１２のいずれかに記載のポリペプチド。
【請求項１４】
前記タグは、前記制限酵素リンカーと、ｔＰＡ前駆体配列または分泌を達成するために十分なその部分との間に連結されている、請求項１３に記載のポリペプチド。
【請求項１５】
前記タグは、ｍｙｃタグである、請求項１４に記載のポリペプチド。
【請求項１６】
前記ＲＴＫアイソフォームは、ＶＥＧＦＲ−１、ＦＧＦＲ−２、ＦＧＦＲ−４、ＴＥＫ、ＲＯＮ、ＭＥＴおよびそれらの対立遺伝子改変体または任意のこれらのＲＴＫアイソフォームと少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくはそれ以上の配列同一性を有するそれらの改変体から選択され、該改変体は、対応するＲＴＫアイソフォームの少なくとも１つの活性を有する、請求項１５に記載のポリペプチド。
【請求項１７】
配列番号３２、配列番号３４、配列番号３６、配列番号４０、配列番号４２、配列番号４６および配列番号４８のいずれか１つに示されるアミノ酸の配列を含む、請求項１〜１６のいずれかに記載のポリペプチド。
【請求項１８】
構築物が、制限酵素リンカーを含み、そして前記タグが、該制限酵素リンカーと前記アイソフォームとの間に位置する、請求項１３に記載のポリペプチド。
【請求項１９】
前記タグは、ポリＨｉｓタグである、請求項１３または１８に記載のポリペプチド。
【請求項２０】
前記ＲＴＫアイソフォームは、ＨＥＲ−２またはその対立遺伝子改変体である、請求項１〜１９のいずれかに記載のポリペプチド。
【請求項２１】
配列番号３８に示されるアミノ酸の配列を含む、請求項１に記載のポリペプチド。
【請求項２２】
異種前駆体配列またはその十分な部分に直接的かまたはポリペプチドリンカーを介して間接的に作動可能に連結された終末糖化産物レセプター（ＲＡＧＥ）アイソフォームを含むポリペプチドであって、該部分は、該ＲＡＧＥアイソフォームの分泌および／または輸送を達成するのに十分である、ポリペプチド。
【請求項２３】
前記ＲＡＧＥアイソフォームは、内因性シグナル配列を含む、請求項２２に記載のポリペプチド。
【請求項２４】
前記ＲＡＧＥアイソフォームタンパク質は、内因性シグナル配列を含まない、請求項２３に記載のポリペプチド。
【請求項２５】
前記前駆体配列は、組織プラスミノーゲンアクチベータ（ｔＰＡ）プレ／プロ配列、または分泌を達成するために十分なその部分、あるいはその対立遺伝子改変体、あるいは前記ＲＡＧＥアイソフォームの分泌および／またはプロセシングまたは輸送を達成するために該前駆体配列と少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくはそれ以上の配列同一性を有するその改変体である、請求項２２〜２４のいずれかに記載のポリペプチド。
【請求項２６】
前記ｔＰＡプレ／プロ配列は、哺乳動物ｔＰＡプレ／プロ配列である、請求項２５に記載のポリペプチド。
【請求項２７】
前記ｔＰＡプレ／プロ配列は、配列番号２に示されるアミノ酸の配列、またはその対立遺伝子改変体を含む、請求項２５および２６のいずれかに記載のポリペプチド。
【請求項２８】
前記ＲＡＧＥアイソフォームは、配列番号２３５、配列番号２３７、配列番号２３９、配列番号２４１、配列番号２４３のいずれかに示されるアミノ酸の配列、またはその活性部分あるいはそれらと少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれ以上の配列同一性を有するそれらの改変体を含む、請求項２２〜２７のいずれかに記載のポリペプチド。
【請求項２９】
前記ＲＡＧＥアイソフォームは、ｔＰＡプレ／プロ配列または分泌を達成するために十分なその部分にリンカーによって作動可能に連結されている、請求項２２〜２８のいずれかに記載のポリペプチド。
【請求項３０】
前記リンカーは、１種以上の制限酵素によって認識されるヌクレオチドの配列によってコードされる制限酵素リンカーである、請求項２９に記載のポリペプチド。
【請求項３１】
前記制限酵素リンカーは、前記ＲＡＧＥアイソフォームまたはその活性部分と、ｔＰＡプレ／プロ配列または分泌を達成するために十分なその部分との間に連結される、請求項３０に記載のポリペプチド。
【請求項３２】
ポリペプチドの精製および／または検出を容易にするタグを必要に応じて含む、請求項２２〜３１のいずれかに記載のポリペプチド。
【請求項３３】
前記ポリペプチドは、制限酵素リンカーを含み、そして前記タグは、該制限酵素リンカーと、ｔＰＡプレ／プロ配列または分泌を達成するために十分なその部分との間に連結される、請求項３２に記載のポリペプチド。
【請求項３４】
前記タグは、ｍｙｃタグである、請求項３３に記載のポリペプチド。
【請求項３５】
配列番号４４に示されるアミノ酸の配列を含む、請求項２２に記載のポリペプチド。
【請求項３６】
異種前駆体配列またはその十分な部分に直接的かまたはリンカーを介して間接的に作動可能に連結された腫瘍壊死因子レセプター（ＴＮＦＲ）アイソフォームを含むポリペプチドであって、該部分は、該ＴＮＦＲアイソフォームの分泌、プロセシングおよび／または輸送を達成するのに十分である、ポリペプチド。
【請求項３７】
前記ＴＮＦＲアイソフォームは、内因性シグナル配列を含む、請求項３６に記載のポリペプチド。
【請求項３８】
前記ＴＮＦＲアイソフォームは、内因性シグナル配列を含まない、請求項３６に記載のポリペプチド。
【請求項３９】
前記前駆体配列は、組織プラスミノーゲンアクチベータ（ｔＰＡ）プレ／プロ配列または分泌を達成するために十分なその部分、あるいはそれらの対立遺伝子改変体あるいはそれらと少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれ以上の配列同一性を有するそれらの改変体である、請求項３６〜３８のいずれかに記載のポリペプチド。
【請求項４０】
前記ｔＰＡプレ／プロ配列は、哺乳動物ｔＰＡプレ／プロ配列である、請求項３９に記載のポリペプチド。
【請求項４１】
前記ｔＰＡプレ／プロ配列は、配列番号２に示されるアミノ酸の配列を含む、請求項３９および４０のいずれかに記載のポリペプチド。
【請求項４２】
前記ＴＮＦＲアイソフォームは、ＴＮＦＲ１またはＴＮＦＲ２である、請求項３６〜４１のいずれかに記載のポリペプチド。
【請求項４３】
前記ＴＮＦＲアイソフォームは、ＴＮＦＲ２アイソフォームである、請求項４２に記載のポリペプチド。
【請求項４４】
前記ＴＮＦＲアイソフォームは、配列番号２７２に示されるアミノ酸の配列またはその活性部分、あるいはそれらと少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれ以上の配列同一性を有するそれらの改変体を含む、請求項４３に記載のポリペプチド。
【請求項４５】
前記ＴＮＦＲアイソフォームは、ｔＰＡプレ／プロ配列または分泌、プロセシングもしくは輸送を達成するために十分なその部分にリンカーによって作動可能に連結される、請求項３６〜４４のいずれかに記載のポリペプチド。
【請求項４６】
前記リンカーは、１種以上の制限酵素によって認識されるヌクレオチドの配列によってコードされる制限酵素リンカーである、請求項４５に記載のポリペプチド。
【請求項４７】
前記制限酵素リンカーは、アイソフォームまたはその活性部分と、ｔＰＡプレ／プロ配列または分泌を達成するために十分なその部分との間に連結される、請求項４６に記載のポリペプチド。
【請求項４８】
ポリペプチドの精製および／または検出を容易にするタグを必要に応じて含む、請求項３６〜４７のいずれかに記載のポリペプチド。
【請求項４９】
前記ポリペプチドは、制限酵素リンカーを含み、そして前記タグは、該制限酵素リンカーと、ｔＰＡ前駆体配列または分泌を達成するために十分なその部分との間に連結される、請求項４８に記載のポリペプチド。
【請求項５０】
前記タグは、ｍｙｃタグである、請求項３６〜４９のいずれかに記載のポリペプチド。
【請求項５１】
請求項１〜５０または請求項９２〜１０４のいずれか１項に記載のポリペプチドをコードするヌクレオチドの配列を含む、核酸分子。
【請求項５２】
配列番号３１、配列番号３３、配列番号３５、配列番号３７、配列番号３９、配列番号４１、配列番号４３、配列番号４５および配列番号４７のいずれか１項に示されるヌクレオチドの配列を含む、核酸分子。
【請求項５３】
請求項５１または請求項５２の分子を含む、ベクター。
【請求項５４】
哺乳動物発現ベクターである、請求項５３に記載のベクター。
【請求項５５】
ｐＣＩベクターおよびｐｃＤＮＡ３．１ベクターから選択される、請求項５４に記載のベクター。
【請求項５６】
アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、ＥＢＶ、ＳＶ４０、サイトメガロウイルスベクター、ワクシニアウイルスベクター、ヘルペスウイルスベクター、レトロウイルスベクター、レンチウイルスベクター、または人工染色体から選択される、請求項５３に記載のベクター。
【請求項５７】
請求項５３〜５６のいずれかに記載のベクターであって、該ベクターは、エピソームであるか、または該ベクターが導入される細胞の染色体中に組み込む、ベクター。
【請求項５８】
請求項５３〜５７のいずれかに記載のベクターを含む、細胞。
【請求項５９】
哺乳動物細胞である、請求項５８に記載の細胞。
【請求項６０】
前記哺乳動物細胞は、マウス細胞、ラット細胞、ヒト細胞、サル細胞、ニワトリ細胞、およびハムスター細胞から選択される、請求項５９に記載の細胞。
【請求項６１】
前記細胞は、ＣＨＯ細胞株、Ｂａｌｂ／３Ｔ３細胞株、ＨｅＬａ細胞株、ＭＴ２細胞株、マウスＮＳ０細胞株および他の骨髄腫細胞株、ハイブリドーマ細胞株およびヘテロハイブリドーマ細胞株、リンパ球、線維芽細胞、Ｓｐ２／０細胞、ＣＯＳ細胞、ＮＩＨ３Ｔ３細胞、ＨＥＫ２９３細胞、２９３Ｔ細胞、２９３Ｓ細胞、２Ｂ８細胞、およびＨＫＢ細胞、およびＥＢＮＡ−１細胞から選択される、請求項５９または６０のいずれかに記載の細胞。
【請求項６２】
請求項５８〜６１のいずれかに記載の細胞を培養する工程を包含する、ＣＳＲアイソフォームまたはリガンドアイソフォームを産生する方法であって、該工程によって、該アイソフォームが、分泌される、方法。
【請求項６３】
前記分泌されたアイソフォームを細胞培養物から精製する工程をさらに包含する、請求項６２に記載の方法。
【請求項６４】
前記アイソフォームは、精製を容易にするためにエピトープタグを含み；そして
該エピトープタグは、該タンパク質上に発現される；
請求項６３に記載の方法。
【請求項６５】
前記精製されたタンパク質は、エキソプロテアーゼによって処理される、請求項６３および６４のいずれかに記載の方法。
【請求項６６】
前記エキソプロテアーゼは、プラスミン様プロテアーゼである、請求項６５に記載の方法。
【請求項６７】
ＣＳＲアイソフォームまたはリガンドアイソフォームを産生する方法であって、該方法は、該アイソフォームとシグナル配列とをコードするＤＮＡ構築物を導入する工程を包含し、該工程によって、該アイソフォームが、細胞から分泌される、方法。
【請求項６８】
前記細胞は、哺乳動物細胞である、請求項６７に記載の方法。
【請求項６９】
前記哺乳動物細胞は、マウス細胞、ラット細胞、ヒト細胞、サル細胞、ニワトリ細胞、およびハムスター細胞から選択される、請求項６８に記載の方法。
【請求項７０】
前記細胞は、ＣＨＯ細胞株、Ｂａｌｂ／３Ｔ３細胞株、ＨｅＬａ細胞株、ＭＴ２細胞株、マウスＮＳ０細胞株および他の骨髄腫細胞株、ハイブリドーマ細胞株およびヘテロハイブリドーマ細胞株、リンパ球、線維芽細胞、Ｓｐ２／０細胞、ＣＯＳ細胞、ＮＩＨ３Ｔ３細胞、ＨＥＫ２９３細胞、２９３Ｔ細胞、２９３Ｓ細胞、２Ｂ８細胞、およびＨＫＢ細胞およびＥＢＮＡ−１細胞から選択される、請求項６８および６９のいずれかに記載の方法。
【請求項７１】
前記核酸分子は、請求項５１または５２に記載のＤＮＡ構築物である、請求項６７〜７０のいずれかに記載の方法。
【請求項７２】
前記核酸分子は、トランスフェクション、エレクトロポレーション、および核マイクロインジェクションから選択される方法によって細胞に導入される、請求項６７〜７１のいずれかに記載の方法。
【請求項７３】
前記核酸分子は、リン酸カルシウム、カチオン性脂質試薬、またはポリカチオンを使用することによって細胞に導入される、請求項６７〜７２のいずれかに記載の方法。
【請求項７４】
前記カチオン性脂質試薬は、カチオン性脂質Ｎ−［１−（２，３−ジオレイルオキシ）プロピル］−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウムクロリド（ＤＯＴＭＡ）とジオレオイル−ホスファチジル−エタノールアミン（ＤＯＰＥ）との１：１（ｗ／ｗ）処方物；ポリカチオン性脂質２，３−ジオレイルオキシ−Ｎ−［２（スペルミン−カルボキサミド）エチル］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−１−プロパンアミニウムトリフルオロアセテート（ＤＯＳＰＡ）とジオレオイルホスファチジル−エタノールアミン（ＤＯＰＥ）との３：１（ｗ／ｗ）処方物、ならびにＤＯＴＭＡ、ＤＯＳＰＡおよびＤＯＰＥのうちの１つ以上を含む他の組成物から選択される、請求項７３に記載の方法。
【請求項７５】
前記分泌されたアイソフォームを前記細胞培養物から精製する工程をさらに包含する、請求項６７〜７４のいずれかに記載の方法。
【請求項７６】
前記アイソフォームを精製する工程は、前記タンパク質によって発現されたエピトープタグによって容易にされる、請求項７５に記載の方法。
【請求項７７】
前記精製されたタンパク質は、エキソプロテアーゼによって処理される、請求項７５および７６のいずれかに記載の方法。
【請求項７８】
前記エキソプロテアーゼは、プラスミン様プロテアーゼである、請求項７７に記載の方法。
【請求項７９】
細胞表面レセプター（ＣＳＲ）アイソフォームまたはリガンドアイソフォームを含むポリペプチドであって、
該ポリペプチドが、内因性前駆体配列を欠き；そして
該ポリペプチドが、そのＮ末端に１つ以上のさらなるアミノ酸を含む；
ポリペプチド。
【請求項８０】
前記内因性前駆体配列は、シグナル配列を含む、請求項７９に記載のポリペプチド。
【請求項８１】
前記内因性前駆体配列は、シグナル配列および１つのさらなるアミノ酸を含む、請求項７９に記載のポリペプチド。
【請求項８２】
前記ＣＳＲアイソフォームは、ＲＴＫアイソフォーム、ＴＮＦＲアイソフォーム、およびＲＡＧＥアイソフォームから選択されるアイソフォームである、請求項７９〜８１のいずれかに記載のポリペプチド。
【請求項８３】
前記リガンドアイソフォームは、ＨＧＦのアイソフォームである、請求項７９〜８１のいずれかに記載のポリペプチド。
【請求項８４】
配列番号１４０、配列番号１４２、配列番号１４３、配列番号１４５、配列番号１４７、配列番号１４９、配列番号１５０、配列番号１５２、配列番号１５３、配列番号１５５、配列番号１５７、配列番号１５９、配列番号１６１〜１６８、配列番号１７０、配列番号１７２、配列番号１７４、配列番号１７６、配列番号１７８、配列番号１８０、配列番号１８１、配列番号１８３、配列番号１８５、配列番号１８６、配列番号１８８、配列番号１９０、配列番号１９２、配列番号１９４、配列番号１９６、配列番号１９８、配列番号２００、配列番号２０２、配列番号２０４、配列番号２０６、配列番号２０８、配列番号２１０、配列番号２１２、配列番号２１４、配列番号２１６、配列番号２１７、配列番号２１９、配列番号２２１、配列番号２２３、配列番号２２５、配列番号２２７、配列番号２２９〜２３１、配列番号２３３、配列番号２３５、配列番号２３７、配列番号２３９、配列番号２４１、配列番号２４３、配列番号２４５、配列番号２４７〜２５１、配列番号２５３、配列番号２５５、配列番号２５７、配列番号２５９、配列番号２６１、配列番号２６３〜２７０、配列番号２７２、配列番号２７４〜２８０、配列番号２８２、配列番号２８４、配列番号２８６、配列番号２８８、配列番号２８９〜３０３、配列番号３５０、配列番号３５２および配列番号３５４のいずれか１つに示されるアミノ酸の配列の全てまたは部分、その対立遺伝子改変体または種改変体ならびにそれらと少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれ以上の配列同一性を有し、かつ配列番号１４０、配列番号１４２、配列番号１４３、配列番号１４５、配列番号１４７、配列番号１４９、配列番号１５０、配列番号１５２、配列番号１５３、配列番号１５５、配列番号１５７、配列番号１５９、配列番号１６１〜１６８、配列番号１７０、配列番号１７２、配列番号１７４、配列番号１７６、配列番号１７８、配列番号１８０、配列番号１８１、配列番号１８３、配列番号１８５、配列番号１８６、配列番号１８８、配列番号１９０、配列番号１９２、配列番号１９４、配列番号１９６、配列番号１９８、配列番号２００、配列番号２０２、配列番号２０４、配列番号２０６、配列番号２０８、配列番号２１０、配列番号２１２、配列番号２１４、配列番号２１６、配列番号２１７、配列番号２１９、配列番号２２１、配列番号２２３、配列番号２２５、配列番号２２７、配列番号２２９〜２３１、配列番号２３３、配列番号２３５、配列番号２３７、配列番号２３９、配列番号２４１、配列番号２４３、配列番号２４５、配列番号２４７〜２５１、配列番号２５３、配列番号２５５、配列番号２５７、配列番号２５９、配列番号２６１、配列番号２６３〜２７０、配列番号２７２、配列番号２７４〜２８０、配列番号２８２、配列番号２８４、配列番号２８６、配列番号２８８、配列番号２８９〜３０３、配列番号３５０、配列番号３５２および配列番号３５４のいずれかに示される対応するポリペプチドの少なくとも１つの活性を有するその改変体を含む、請求項７９〜８３のいずれか１項に記載のポリペプチド。
【請求項８５】
前記Ｎ末端における１つ以上のさらなるアミノ酸は、制限酵素リンカー配列またはｔＰＡのプロ配列の部分またはエピトープタグのうちの１つ以上であり、制限酵素リンカーは、１種以上の制限酵素によって認識されるヌクレオチドの配列によってコードされる、請求項７９〜８４のいずれかに記載のポリペプチド。
【請求項８６】
前記Ｎ末端における１つ以上のさらなるアミノ酸は、ＧＡＲ、ＳＲ、またはＬＥである、請求項７９〜８５のいずれかに記載のポリペプチド。
【請求項８７】
前記Ｎ末端における１つ以上のさらなるアミノ酸は、ＧＡＲＳＲまたはＧＡＲＬＥである、請求項７９〜８６のいずれか１項に記載のポリペプチド。
【請求項８８】
マルチマー化ドメインを含む、請求項１〜５０および請求項７９〜８７のいずれかに記載のポリペプチド。
【請求項８９】
請求項１〜５０および請求項７９〜８８のいずれか１項に記載のポリペプチドを含む、薬学的組成物。
【請求項９０】
被験体に請求項８９に記載の薬学的組成物を投与する工程を包含する、疾患または状態を処置する方法であって、該疾患または状態は、同族ＣＳＲまたは同族リガンドによって媒介される、方法。
【請求項９１】
前記疾患または状態は、炎症性疾患、癌、新脈管形成媒介性疾患、または過剰増殖性疾患である、請求項９０に記載の方法。
【請求項９２】
前記疾患または状態は、眼疾患、アテローム硬化症、糖尿病、関節リウマチ、血管腫、創傷治癒、アルツハイマー病、クロイツフェルト−ヤーコプ病、ハンティングトン病、平滑筋増殖に関連する疾患、多発性硬化症、心臓血管疾患、および腎疾患から選択される、請求項９１に記載の方法。
【請求項９３】
前記癌は、癌腫、リンパ腫、芽細胞腫、肉腫、白血病、リンパ性悪性疾患、扁平上皮癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺の腺癌および肺の扁平上皮癌を含む肺癌、腹膜の癌、肝細胞癌、胃癌または消化管癌を含む胃癌、膵臓癌、グリア芽細胞腫、子宮頚癌、卵巣癌、肝臓癌、膀胱癌、ヘパトーマ、乳癌、結腸癌、直腸癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌または子宮癌、唾液腺癌、腎臓癌または腎細胞癌、前立腺癌、外陰癌、甲状腺癌、肝癌、肛門癌、陰茎癌、および頭頸部癌から選択される、請求項９１に記載の方法。
【請求項９４】
異種前駆体配列またはその十分な部分に直接的かまたは間接的に作動可能に連結された肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）アイソフォームを含むポリペプチドであって、該部分は、該ＨＧＦアイソフォームの分泌および／または輸送を達成するのに十分である、ポリペプチド。
【請求項９５】
前記ＨＧＦアイソフォームは、内因性シグナル配列を含む、請求項９４に記載のポリペプチド。
【請求項９６】
前記ＨＧＦアイソフォームは、内因性シグナル配列を含まない、請求項９５に記載のポリペプチド。
【請求項９７】
前記前駆体配列は、組織プラスミノーゲンアクチベータ（ｔＰＡ）プレ／プロ配列または分泌を達成するために十分なその部分、あるいはその対立遺伝子改変体、あるいは少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれ以上の配列同一性を有する改変体であり、該改変体は、前記連結されたアイソフォームの分泌、プロセシングおよび／または輸送を達成する、請求項９４〜９５のいずれかに記載のポリペプチド。
【請求項９８】
前記ｔＰＡプレ／プロ配列は、哺乳動物ｔＰＡプレ／プロ配列である、請求項９７に記載のポリペプチド。
【請求項９９】
前記ｔＰＡプレ／プロ配列は、配列番号２に示されるアミノ酸の配列、またはその対立遺伝子改変体を含む、請求項９７および９８のいずれかに記載のポリペプチド。
【請求項１００】
前記ＨＧＦアイソフォームは、配列番号３５０、配列番号３５２、および配列番号３５４のいずれか１つに示されるアミノ酸の配列、またはその活性部分を含む、請求項９４〜９９のうちのいずれかの請求項に記載のポリペプチド。
【請求項１０１】
前記ＨＧＦアイソフォームは、ｔＰＡプレ／プロ配列または前記連結されたアイソフォームの分泌、プロセシングおよび／または輸送を達成するために十分なその部分に、リンカーによって作動可能に連結されている、請求項９５〜１００のいずれかに記載のポリペプチド。
【請求項１０２】
前記リンカーは、１種以上の制限酵素によって認識されるヌクレオチドの配列によってコードされる制限酵素リンカーである、請求項１０１に記載のポリペプチド。
【請求項１０３】
前記制限酵素リンカーは、アイソフォームまたはその活性部分と、ｔＰＡプレ／プロ配列または分泌を達成するために十分なその部分との間に連結されている、請求項１０２に記載のポリペプチド。
【請求項１０４】
ポリペプチドの精製および／または検出を容易にするタグを必要に応じて含む、請求項９５〜１０３のいずれかに記載のポリペプチド。
【請求項１０５】
請求項１０４に記載のポリペプチドであって、
該ポリペプチドが、制限酵素リンカーを含み、該リンカーが、１種以上の制限酵素によって認識されるヌクレオチドの配列によってコードされる制限酵素リンカーであり；そして
前記タグが、該制限酵素リンカーと、ｔＰＡ前駆体配列または分泌を達成するために十分なその部分との間に連結されている；
ポリペプチド。
【請求項１０６】
前記タグは、ｍｙｃタグである、請求項９４〜１０４のいずれかに記載のポリペプチド。
【請求項１０７】
前記アイソフォームは、イントロン融合タンパク質である、請求項１〜５０、請求項７８〜８７および請求項９４〜１０６のいずれかに記載のポリペプチド。
【請求項１０８】
前記アイソフォームは、イントロン融合タンパク質である、請求項６２〜７８のいずれかに記載の方法。
【請求項１０９】
請求項５１または５２に記載の核酸分子、あるいは請求項５３〜５７のいずれかに記載のベクター、あるいは請求項５８〜６１のいずれかに記載の細胞を含む、薬学的組成物であって、前記疾患または状態が、ＣＳＲまたはそれらに対するリガンドによって媒介される、薬学的組成物。
【請求項１１０】
被験体に請求項１０９に記載の薬学的組成物を投与する工程を包含する、疾患または状態を処置する方法であって、該疾患または状態は、同族ＣＳＲまたは同族リガンドによって媒介される、方法。
【請求項１１１】
前記疾患または状態は、炎症性疾患、癌、新脈管形成媒介性疾患、または過剰増殖性疾患である、請求項１１０に記載の方法。
【請求項１１２】
前記疾患または状態は、眼疾患、アテローム硬化症、糖尿病、関節リウマチ、血管腫、創傷治癒、アルツハイマー病、クロイツフェルト−ヤーコプ病、ハンティングトン病、平滑筋増殖に関連する疾患、多発性硬化症、心臓血管疾患、および腎疾患から選択される、請求項１１０に記載の方法。
【請求項１１３】
前記癌は、癌腫、リンパ腫、芽細胞腫、肉腫、白血病、リンパ性悪性疾患、扁平上皮癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺の腺癌および肺の扁平上皮癌を含む肺癌、腹膜の癌、肝細胞癌、胃癌または消化管癌を含む胃癌、膵臓癌、グリア芽細胞腫、子宮頚癌、卵巣癌、肝臓癌、膀胱癌、ヘパトーマ、乳癌、結腸癌、直腸癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌または子宮癌、唾液腺癌、腎臓癌または腎細胞癌、前立腺癌、外陰癌、甲状腺癌、肝癌、肛門癌、陰茎癌、および頭頸部癌から選択される、請求項１１２に記載の方法。
【請求項１１４】
ＣＳＲまたはそれに対するリガンドによって媒介される疾患または状態を処置するための、請求項５１もしくは５２に記載のＤＮＡ構築物、または請求項５３〜５７のいずれかに記載のベクター、または請求項５８〜６１のいずれかに記載の細胞の、使用。
【請求項１１５】
ＣＳＲまたはそれに対するリガンドによって媒介される疾患または状態を処置するための医薬の処方のための、請求項５１もしくは５２に記載のＤＮＡ構築物、または請求項５３〜５７のいずれかに記載のベクター、または請求項５８〜６１のいずれかに記載の細胞の、使用。
【請求項１１６】
前記疾患または状態は、炎症性疾患、癌、新脈管形成媒介性疾患または過剰増殖性疾患である、請求項１１４または請求項１１５に記載の使用。
【請求項１】
異種前駆体配列またはその十分な部分に、直接的かまたはポリペプチドリンカーを介して間接的に作動可能に連結されたレセプターチロシンキナーゼ（ＲＴＫ）アイソフォームを含むポリペプチドであって、該部分は、該連結されたＲＴＫイントロン融合タンパク質の分泌、プロセシングおよび／または輸送を達成するのに十分である、ポリペプチド。
【請求項２】
前記ＲＴＫアイソフォームは、内因性シグナル配列を含む、請求項１に記載のポリペプチド。
【請求項３】
前記ＲＴＫアイソフォームは、内因性シグナル配列を含まない、請求項１に記載のポリペプチド。
【請求項４】
前記前駆体配列は、組織プラスミノーゲンアクチベータ（ｔＰＡ）プレ／プロ配列または分泌を達成するために十分なその部分、ならびにその対立遺伝子改変体および種改変体から選択される、請求項１〜３のいずれかに記載のポリペプチド。
【請求項５】
前記ｔＰＡプレ／プロ配列は、哺乳動物ｔＰＡプレ／プロ配列である、請求項４に記載のポリペプチド。
【請求項６】
前記ｔＰＡプレ／プロ配列は、配列番号２に示されるアミノ酸の配列あるいはその対立遺伝子改変体あるいは少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれ以上の配列同一性を有する改変体を含み、そして該ｔＰＡ部分は、前記連結されたＲＴＫアイソフォームの分泌、プロセシングおよび／または輸送を達成する、請求項４または５のいずれかに記載のポリペプチド。
【請求項７】
前記ＲＴＫアイソフォームは、ＶＥＧＦＲ融合タンパク質、ＦＧＦＲ融合タンパク質、ＰＤＧＦＲ融合タンパク質、ＭＥＴ融合タンパク質、ＥＰＨ融合タンパク質、ＴＩＥ融合タンパク質、ＤＤＲ融合タンパク質およびＨＥＲ融合タンパク質から選択される、請求項１〜６のいずれかに記載のポリペプチド。
【請求項８】
前記ＲＴＫアイソフォームは、ＤＤＲ１、ＥｐｈＡ１、ＥｐｈＡ２、ＥｐｈＡ８、ＥｐｈＢ１、ＥｐｈＢ４、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ−２（ＥｒｂＢ２）、ＥｒｂＢ３、ＦＧＦＲ−１、ＦＧＦＲ−２、ＦＧＦＲ−４、ＭＥＴ、ＲＯＮ、ＣＳＦ１Ｒ、ＫＩＴ、ＰＤＧＦＲ−Ａ、ＰＤＧＦＲ−Ｂ、ＴＥＫ、Ｔｉｅ−１、ＶＥＧＦＲ−１、ＶＥＧＦＲ−２、ＶＥＧＦＲ−３、およびそれらの対立遺伝子改変体または任意のこれらのＲＴＫアイソフォームと少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくはそれ以上の配列同一性を有するそれらの改変体から選択され、該改変体は、対応するＲＴＫアイソフォームの少なくとも１つの活性を有する、請求項７に記載のポリペプチド。
【請求項９】
前記ＲＴＫアイソフォームは、配列番号１４０、配列番号１４２、配列番号１４３、配列番号１４５、配列番号１４７、配列番号１４９、配列番号１５０、配列番号１５２、配列番号１５３、配列番号１５５、配列番号１５７、配列番号１５９、配列番号１６１〜１６８、配列番号１７０、配列番号１７２、配列番号１７４、配列番号１７６、配列番号１７８、配列番号１８０、配列番号１８１、配列番号１８３、配列番号１８５、配列番号１８６、配列番号１８８、配列番号１９０、配列番号１９２、配列番号１９４、配列番号１９６、配列番号１９８、配列番号２００、配列番号２０２、配列番号２０４、配列番号２０６、配列番号２０８、配列番号２１０、配列番号２１２、配列番号２１４、配列番号２１６、配列番号２１７、配列番号２１９、配列番号２２１、配列番号２２３、配列番号２２５、配列番号２２７、配列番号２２９〜２３１、配列番号２３３、配列番号２４５、配列番号２４７〜２５１、配列番号２５３、配列番号２５５、配列番号２５７、配列番号２５９、配列番号２６１、配列番号２６３〜２７０、配列番号２７４〜２８０、配列番号２８２、配列番号２８４、配列番号２８６、配列番号２８８、配列番号２８９〜３０３のいずれか１つに示されるアミノ酸の配列またはその活性な部分を含む、請求項８のポリペプチド。
【請求項１０】
前記ＲＴＫアイソフォームは、ｔＰＡ前駆体配列または分泌を達成するために十分なその部分にリンカーを介して作動可能に連結されている、請求項１〜９のいずれかに記載のポリペプチド。
【請求項１１】
前記リンカーは、１種以上の制限酵素によって認識されるヌクレオチドの配列によってコードされる制限酵素リンカーである、請求項１０に記載のポリペプチド。
【請求項１２】
前記制限酵素リンカーは、アイソフォームと、ｔＰＡプレ／プロ配列または分泌を達成するために十分なその部分との間に連結されている、請求項１１に記載のポリペプチド。
【請求項１３】
ポリペプチドの精製および／または検出を容易にするタグを必要に応じて含む、請求項１〜１２のいずれかに記載のポリペプチド。
【請求項１４】
前記タグは、前記制限酵素リンカーと、ｔＰＡ前駆体配列または分泌を達成するために十分なその部分との間に連結されている、請求項１３に記載のポリペプチド。
【請求項１５】
前記タグは、ｍｙｃタグである、請求項１４に記載のポリペプチド。
【請求項１６】
前記ＲＴＫアイソフォームは、ＶＥＧＦＲ−１、ＦＧＦＲ−２、ＦＧＦＲ−４、ＴＥＫ、ＲＯＮ、ＭＥＴおよびそれらの対立遺伝子改変体または任意のこれらのＲＴＫアイソフォームと少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくはそれ以上の配列同一性を有するそれらの改変体から選択され、該改変体は、対応するＲＴＫアイソフォームの少なくとも１つの活性を有する、請求項１５に記載のポリペプチド。
【請求項１７】
配列番号３２、配列番号３４、配列番号３６、配列番号４０、配列番号４２、配列番号４６および配列番号４８のいずれか１つに示されるアミノ酸の配列を含む、請求項１〜１６のいずれかに記載のポリペプチド。
【請求項１８】
構築物が、制限酵素リンカーを含み、そして前記タグが、該制限酵素リンカーと前記アイソフォームとの間に位置する、請求項１３に記載のポリペプチド。
【請求項１９】
前記タグは、ポリＨｉｓタグである、請求項１３または１８に記載のポリペプチド。
【請求項２０】
前記ＲＴＫアイソフォームは、ＨＥＲ−２またはその対立遺伝子改変体である、請求項１〜１９のいずれかに記載のポリペプチド。
【請求項２１】
配列番号３８に示されるアミノ酸の配列を含む、請求項１に記載のポリペプチド。
【請求項２２】
異種前駆体配列またはその十分な部分に直接的かまたはポリペプチドリンカーを介して間接的に作動可能に連結された終末糖化産物レセプター（ＲＡＧＥ）アイソフォームを含むポリペプチドであって、該部分は、該ＲＡＧＥアイソフォームの分泌および／または輸送を達成するのに十分である、ポリペプチド。
【請求項２３】
前記ＲＡＧＥアイソフォームは、内因性シグナル配列を含む、請求項２２に記載のポリペプチド。
【請求項２４】
前記ＲＡＧＥアイソフォームタンパク質は、内因性シグナル配列を含まない、請求項２３に記載のポリペプチド。
【請求項２５】
前記前駆体配列は、組織プラスミノーゲンアクチベータ（ｔＰＡ）プレ／プロ配列、または分泌を達成するために十分なその部分、あるいはその対立遺伝子改変体、あるいは前記ＲＡＧＥアイソフォームの分泌および／またはプロセシングまたは輸送を達成するために該前駆体配列と少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくはそれ以上の配列同一性を有するその改変体である、請求項２２〜２４のいずれかに記載のポリペプチド。
【請求項２６】
前記ｔＰＡプレ／プロ配列は、哺乳動物ｔＰＡプレ／プロ配列である、請求項２５に記載のポリペプチド。
【請求項２７】
前記ｔＰＡプレ／プロ配列は、配列番号２に示されるアミノ酸の配列、またはその対立遺伝子改変体を含む、請求項２５および２６のいずれかに記載のポリペプチド。
【請求項２８】
前記ＲＡＧＥアイソフォームは、配列番号２３５、配列番号２３７、配列番号２３９、配列番号２４１、配列番号２４３のいずれかに示されるアミノ酸の配列、またはその活性部分あるいはそれらと少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれ以上の配列同一性を有するそれらの改変体を含む、請求項２２〜２７のいずれかに記載のポリペプチド。
【請求項２９】
前記ＲＡＧＥアイソフォームは、ｔＰＡプレ／プロ配列または分泌を達成するために十分なその部分にリンカーによって作動可能に連結されている、請求項２２〜２８のいずれかに記載のポリペプチド。
【請求項３０】
前記リンカーは、１種以上の制限酵素によって認識されるヌクレオチドの配列によってコードされる制限酵素リンカーである、請求項２９に記載のポリペプチド。
【請求項３１】
前記制限酵素リンカーは、前記ＲＡＧＥアイソフォームまたはその活性部分と、ｔＰＡプレ／プロ配列または分泌を達成するために十分なその部分との間に連結される、請求項３０に記載のポリペプチド。
【請求項３２】
ポリペプチドの精製および／または検出を容易にするタグを必要に応じて含む、請求項２２〜３１のいずれかに記載のポリペプチド。
【請求項３３】
前記ポリペプチドは、制限酵素リンカーを含み、そして前記タグは、該制限酵素リンカーと、ｔＰＡプレ／プロ配列または分泌を達成するために十分なその部分との間に連結される、請求項３２に記載のポリペプチド。
【請求項３４】
前記タグは、ｍｙｃタグである、請求項３３に記載のポリペプチド。
【請求項３５】
配列番号４４に示されるアミノ酸の配列を含む、請求項２２に記載のポリペプチド。
【請求項３６】
異種前駆体配列またはその十分な部分に直接的かまたはリンカーを介して間接的に作動可能に連結された腫瘍壊死因子レセプター（ＴＮＦＲ）アイソフォームを含むポリペプチドであって、該部分は、該ＴＮＦＲアイソフォームの分泌、プロセシングおよび／または輸送を達成するのに十分である、ポリペプチド。
【請求項３７】
前記ＴＮＦＲアイソフォームは、内因性シグナル配列を含む、請求項３６に記載のポリペプチド。
【請求項３８】
前記ＴＮＦＲアイソフォームは、内因性シグナル配列を含まない、請求項３６に記載のポリペプチド。
【請求項３９】
前記前駆体配列は、組織プラスミノーゲンアクチベータ（ｔＰＡ）プレ／プロ配列または分泌を達成するために十分なその部分、あるいはそれらの対立遺伝子改変体あるいはそれらと少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれ以上の配列同一性を有するそれらの改変体である、請求項３６〜３８のいずれかに記載のポリペプチド。
【請求項４０】
前記ｔＰＡプレ／プロ配列は、哺乳動物ｔＰＡプレ／プロ配列である、請求項３９に記載のポリペプチド。
【請求項４１】
前記ｔＰＡプレ／プロ配列は、配列番号２に示されるアミノ酸の配列を含む、請求項３９および４０のいずれかに記載のポリペプチド。
【請求項４２】
前記ＴＮＦＲアイソフォームは、ＴＮＦＲ１またはＴＮＦＲ２である、請求項３６〜４１のいずれかに記載のポリペプチド。
【請求項４３】
前記ＴＮＦＲアイソフォームは、ＴＮＦＲ２アイソフォームである、請求項４２に記載のポリペプチド。
【請求項４４】
前記ＴＮＦＲアイソフォームは、配列番号２７２に示されるアミノ酸の配列またはその活性部分、あるいはそれらと少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれ以上の配列同一性を有するそれらの改変体を含む、請求項４３に記載のポリペプチド。
【請求項４５】
前記ＴＮＦＲアイソフォームは、ｔＰＡプレ／プロ配列または分泌、プロセシングもしくは輸送を達成するために十分なその部分にリンカーによって作動可能に連結される、請求項３６〜４４のいずれかに記載のポリペプチド。
【請求項４６】
前記リンカーは、１種以上の制限酵素によって認識されるヌクレオチドの配列によってコードされる制限酵素リンカーである、請求項４５に記載のポリペプチド。
【請求項４７】
前記制限酵素リンカーは、アイソフォームまたはその活性部分と、ｔＰＡプレ／プロ配列または分泌を達成するために十分なその部分との間に連結される、請求項４６に記載のポリペプチド。
【請求項４８】
ポリペプチドの精製および／または検出を容易にするタグを必要に応じて含む、請求項３６〜４７のいずれかに記載のポリペプチド。
【請求項４９】
前記ポリペプチドは、制限酵素リンカーを含み、そして前記タグは、該制限酵素リンカーと、ｔＰＡ前駆体配列または分泌を達成するために十分なその部分との間に連結される、請求項４８に記載のポリペプチド。
【請求項５０】
前記タグは、ｍｙｃタグである、請求項３６〜４９のいずれかに記載のポリペプチド。
【請求項５１】
請求項１〜５０または請求項９２〜１０４のいずれか１項に記載のポリペプチドをコードするヌクレオチドの配列を含む、核酸分子。
【請求項５２】
配列番号３１、配列番号３３、配列番号３５、配列番号３７、配列番号３９、配列番号４１、配列番号４３、配列番号４５および配列番号４７のいずれか１項に示されるヌクレオチドの配列を含む、核酸分子。
【請求項５３】
請求項５１または請求項５２の分子を含む、ベクター。
【請求項５４】
哺乳動物発現ベクターである、請求項５３に記載のベクター。
【請求項５５】
ｐＣＩベクターおよびｐｃＤＮＡ３．１ベクターから選択される、請求項５４に記載のベクター。
【請求項５６】
アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、ＥＢＶ、ＳＶ４０、サイトメガロウイルスベクター、ワクシニアウイルスベクター、ヘルペスウイルスベクター、レトロウイルスベクター、レンチウイルスベクター、または人工染色体から選択される、請求項５３に記載のベクター。
【請求項５７】
請求項５３〜５６のいずれかに記載のベクターであって、該ベクターは、エピソームであるか、または該ベクターが導入される細胞の染色体中に組み込む、ベクター。
【請求項５８】
請求項５３〜５７のいずれかに記載のベクターを含む、細胞。
【請求項５９】
哺乳動物細胞である、請求項５８に記載の細胞。
【請求項６０】
前記哺乳動物細胞は、マウス細胞、ラット細胞、ヒト細胞、サル細胞、ニワトリ細胞、およびハムスター細胞から選択される、請求項５９に記載の細胞。
【請求項６１】
前記細胞は、ＣＨＯ細胞株、Ｂａｌｂ／３Ｔ３細胞株、ＨｅＬａ細胞株、ＭＴ２細胞株、マウスＮＳ０細胞株および他の骨髄腫細胞株、ハイブリドーマ細胞株およびヘテロハイブリドーマ細胞株、リンパ球、線維芽細胞、Ｓｐ２／０細胞、ＣＯＳ細胞、ＮＩＨ３Ｔ３細胞、ＨＥＫ２９３細胞、２９３Ｔ細胞、２９３Ｓ細胞、２Ｂ８細胞、およびＨＫＢ細胞、およびＥＢＮＡ−１細胞から選択される、請求項５９または６０のいずれかに記載の細胞。
【請求項６２】
請求項５８〜６１のいずれかに記載の細胞を培養する工程を包含する、ＣＳＲアイソフォームまたはリガンドアイソフォームを産生する方法であって、該工程によって、該アイソフォームが、分泌される、方法。
【請求項６３】
前記分泌されたアイソフォームを細胞培養物から精製する工程をさらに包含する、請求項６２に記載の方法。
【請求項６４】
前記アイソフォームは、精製を容易にするためにエピトープタグを含み；そして
該エピトープタグは、該タンパク質上に発現される；
請求項６３に記載の方法。
【請求項６５】
前記精製されたタンパク質は、エキソプロテアーゼによって処理される、請求項６３および６４のいずれかに記載の方法。
【請求項６６】
前記エキソプロテアーゼは、プラスミン様プロテアーゼである、請求項６５に記載の方法。
【請求項６７】
ＣＳＲアイソフォームまたはリガンドアイソフォームを産生する方法であって、該方法は、該アイソフォームとシグナル配列とをコードするＤＮＡ構築物を導入する工程を包含し、該工程によって、該アイソフォームが、細胞から分泌される、方法。
【請求項６８】
前記細胞は、哺乳動物細胞である、請求項６７に記載の方法。
【請求項６９】
前記哺乳動物細胞は、マウス細胞、ラット細胞、ヒト細胞、サル細胞、ニワトリ細胞、およびハムスター細胞から選択される、請求項６８に記載の方法。
【請求項７０】
前記細胞は、ＣＨＯ細胞株、Ｂａｌｂ／３Ｔ３細胞株、ＨｅＬａ細胞株、ＭＴ２細胞株、マウスＮＳ０細胞株および他の骨髄腫細胞株、ハイブリドーマ細胞株およびヘテロハイブリドーマ細胞株、リンパ球、線維芽細胞、Ｓｐ２／０細胞、ＣＯＳ細胞、ＮＩＨ３Ｔ３細胞、ＨＥＫ２９３細胞、２９３Ｔ細胞、２９３Ｓ細胞、２Ｂ８細胞、およびＨＫＢ細胞およびＥＢＮＡ−１細胞から選択される、請求項６８および６９のいずれかに記載の方法。
【請求項７１】
前記核酸分子は、請求項５１または５２に記載のＤＮＡ構築物である、請求項６７〜７０のいずれかに記載の方法。
【請求項７２】
前記核酸分子は、トランスフェクション、エレクトロポレーション、および核マイクロインジェクションから選択される方法によって細胞に導入される、請求項６７〜７１のいずれかに記載の方法。
【請求項７３】
前記核酸分子は、リン酸カルシウム、カチオン性脂質試薬、またはポリカチオンを使用することによって細胞に導入される、請求項６７〜７２のいずれかに記載の方法。
【請求項７４】
前記カチオン性脂質試薬は、カチオン性脂質Ｎ−［１−（２，３−ジオレイルオキシ）プロピル］−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウムクロリド（ＤＯＴＭＡ）とジオレオイル−ホスファチジル−エタノールアミン（ＤＯＰＥ）との１：１（ｗ／ｗ）処方物；ポリカチオン性脂質２，３−ジオレイルオキシ−Ｎ−［２（スペルミン−カルボキサミド）エチル］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−１−プロパンアミニウムトリフルオロアセテート（ＤＯＳＰＡ）とジオレオイルホスファチジル−エタノールアミン（ＤＯＰＥ）との３：１（ｗ／ｗ）処方物、ならびにＤＯＴＭＡ、ＤＯＳＰＡおよびＤＯＰＥのうちの１つ以上を含む他の組成物から選択される、請求項７３に記載の方法。
【請求項７５】
前記分泌されたアイソフォームを前記細胞培養物から精製する工程をさらに包含する、請求項６７〜７４のいずれかに記載の方法。
【請求項７６】
前記アイソフォームを精製する工程は、前記タンパク質によって発現されたエピトープタグによって容易にされる、請求項７５に記載の方法。
【請求項７７】
前記精製されたタンパク質は、エキソプロテアーゼによって処理される、請求項７５および７６のいずれかに記載の方法。
【請求項７８】
前記エキソプロテアーゼは、プラスミン様プロテアーゼである、請求項７７に記載の方法。
【請求項７９】
細胞表面レセプター（ＣＳＲ）アイソフォームまたはリガンドアイソフォームを含むポリペプチドであって、
該ポリペプチドが、内因性前駆体配列を欠き；そして
該ポリペプチドが、そのＮ末端に１つ以上のさらなるアミノ酸を含む；
ポリペプチド。
【請求項８０】
前記内因性前駆体配列は、シグナル配列を含む、請求項７９に記載のポリペプチド。
【請求項８１】
前記内因性前駆体配列は、シグナル配列および１つのさらなるアミノ酸を含む、請求項７９に記載のポリペプチド。
【請求項８２】
前記ＣＳＲアイソフォームは、ＲＴＫアイソフォーム、ＴＮＦＲアイソフォーム、およびＲＡＧＥアイソフォームから選択されるアイソフォームである、請求項７９〜８１のいずれかに記載のポリペプチド。
【請求項８３】
前記リガンドアイソフォームは、ＨＧＦのアイソフォームである、請求項７９〜８１のいずれかに記載のポリペプチド。
【請求項８４】
配列番号１４０、配列番号１４２、配列番号１４３、配列番号１４５、配列番号１４７、配列番号１４９、配列番号１５０、配列番号１５２、配列番号１５３、配列番号１５５、配列番号１５７、配列番号１５９、配列番号１６１〜１６８、配列番号１７０、配列番号１７２、配列番号１７４、配列番号１７６、配列番号１７８、配列番号１８０、配列番号１８１、配列番号１８３、配列番号１８５、配列番号１８６、配列番号１８８、配列番号１９０、配列番号１９２、配列番号１９４、配列番号１９６、配列番号１９８、配列番号２００、配列番号２０２、配列番号２０４、配列番号２０６、配列番号２０８、配列番号２１０、配列番号２１２、配列番号２１４、配列番号２１６、配列番号２１７、配列番号２１９、配列番号２２１、配列番号２２３、配列番号２２５、配列番号２２７、配列番号２２９〜２３１、配列番号２３３、配列番号２３５、配列番号２３７、配列番号２３９、配列番号２４１、配列番号２４３、配列番号２４５、配列番号２４７〜２５１、配列番号２５３、配列番号２５５、配列番号２５７、配列番号２５９、配列番号２６１、配列番号２６３〜２７０、配列番号２７２、配列番号２７４〜２８０、配列番号２８２、配列番号２８４、配列番号２８６、配列番号２８８、配列番号２８９〜３０３、配列番号３５０、配列番号３５２および配列番号３５４のいずれか１つに示されるアミノ酸の配列の全てまたは部分、その対立遺伝子改変体または種改変体ならびにそれらと少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれ以上の配列同一性を有し、かつ配列番号１４０、配列番号１４２、配列番号１４３、配列番号１４５、配列番号１４７、配列番号１４９、配列番号１５０、配列番号１５２、配列番号１５３、配列番号１５５、配列番号１５７、配列番号１５９、配列番号１６１〜１６８、配列番号１７０、配列番号１７２、配列番号１７４、配列番号１７６、配列番号１７８、配列番号１８０、配列番号１８１、配列番号１８３、配列番号１８５、配列番号１８６、配列番号１８８、配列番号１９０、配列番号１９２、配列番号１９４、配列番号１９６、配列番号１９８、配列番号２００、配列番号２０２、配列番号２０４、配列番号２０６、配列番号２０８、配列番号２１０、配列番号２１２、配列番号２１４、配列番号２１６、配列番号２１７、配列番号２１９、配列番号２２１、配列番号２２３、配列番号２２５、配列番号２２７、配列番号２２９〜２３１、配列番号２３３、配列番号２３５、配列番号２３７、配列番号２３９、配列番号２４１、配列番号２４３、配列番号２４５、配列番号２４７〜２５１、配列番号２５３、配列番号２５５、配列番号２５７、配列番号２５９、配列番号２６１、配列番号２６３〜２７０、配列番号２７２、配列番号２７４〜２８０、配列番号２８２、配列番号２８４、配列番号２８６、配列番号２８８、配列番号２８９〜３０３、配列番号３５０、配列番号３５２および配列番号３５４のいずれかに示される対応するポリペプチドの少なくとも１つの活性を有するその改変体を含む、請求項７９〜８３のいずれか１項に記載のポリペプチド。
【請求項８５】
前記Ｎ末端における１つ以上のさらなるアミノ酸は、制限酵素リンカー配列またはｔＰＡのプロ配列の部分またはエピトープタグのうちの１つ以上であり、制限酵素リンカーは、１種以上の制限酵素によって認識されるヌクレオチドの配列によってコードされる、請求項７９〜８４のいずれかに記載のポリペプチド。
【請求項８６】
前記Ｎ末端における１つ以上のさらなるアミノ酸は、ＧＡＲ、ＳＲ、またはＬＥである、請求項７９〜８５のいずれかに記載のポリペプチド。
【請求項８７】
前記Ｎ末端における１つ以上のさらなるアミノ酸は、ＧＡＲＳＲまたはＧＡＲＬＥである、請求項７９〜８６のいずれか１項に記載のポリペプチド。
【請求項８８】
マルチマー化ドメインを含む、請求項１〜５０および請求項７９〜８７のいずれかに記載のポリペプチド。
【請求項８９】
請求項１〜５０および請求項７９〜８８のいずれか１項に記載のポリペプチドを含む、薬学的組成物。
【請求項９０】
被験体に請求項８９に記載の薬学的組成物を投与する工程を包含する、疾患または状態を処置する方法であって、該疾患または状態は、同族ＣＳＲまたは同族リガンドによって媒介される、方法。
【請求項９１】
前記疾患または状態は、炎症性疾患、癌、新脈管形成媒介性疾患、または過剰増殖性疾患である、請求項９０に記載の方法。
【請求項９２】
前記疾患または状態は、眼疾患、アテローム硬化症、糖尿病、関節リウマチ、血管腫、創傷治癒、アルツハイマー病、クロイツフェルト−ヤーコプ病、ハンティングトン病、平滑筋増殖に関連する疾患、多発性硬化症、心臓血管疾患、および腎疾患から選択される、請求項９１に記載の方法。
【請求項９３】
前記癌は、癌腫、リンパ腫、芽細胞腫、肉腫、白血病、リンパ性悪性疾患、扁平上皮癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺の腺癌および肺の扁平上皮癌を含む肺癌、腹膜の癌、肝細胞癌、胃癌または消化管癌を含む胃癌、膵臓癌、グリア芽細胞腫、子宮頚癌、卵巣癌、肝臓癌、膀胱癌、ヘパトーマ、乳癌、結腸癌、直腸癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌または子宮癌、唾液腺癌、腎臓癌または腎細胞癌、前立腺癌、外陰癌、甲状腺癌、肝癌、肛門癌、陰茎癌、および頭頸部癌から選択される、請求項９１に記載の方法。
【請求項９４】
異種前駆体配列またはその十分な部分に直接的かまたは間接的に作動可能に連結された肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）アイソフォームを含むポリペプチドであって、該部分は、該ＨＧＦアイソフォームの分泌および／または輸送を達成するのに十分である、ポリペプチド。
【請求項９５】
前記ＨＧＦアイソフォームは、内因性シグナル配列を含む、請求項９４に記載のポリペプチド。
【請求項９６】
前記ＨＧＦアイソフォームは、内因性シグナル配列を含まない、請求項９５に記載のポリペプチド。
【請求項９７】
前記前駆体配列は、組織プラスミノーゲンアクチベータ（ｔＰＡ）プレ／プロ配列または分泌を達成するために十分なその部分、あるいはその対立遺伝子改変体、あるいは少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれ以上の配列同一性を有する改変体であり、該改変体は、前記連結されたアイソフォームの分泌、プロセシングおよび／または輸送を達成する、請求項９４〜９５のいずれかに記載のポリペプチド。
【請求項９８】
前記ｔＰＡプレ／プロ配列は、哺乳動物ｔＰＡプレ／プロ配列である、請求項９７に記載のポリペプチド。
【請求項９９】
前記ｔＰＡプレ／プロ配列は、配列番号２に示されるアミノ酸の配列、またはその対立遺伝子改変体を含む、請求項９７および９８のいずれかに記載のポリペプチド。
【請求項１００】
前記ＨＧＦアイソフォームは、配列番号３５０、配列番号３５２、および配列番号３５４のいずれか１つに示されるアミノ酸の配列、またはその活性部分を含む、請求項９４〜９９のうちのいずれかの請求項に記載のポリペプチド。
【請求項１０１】
前記ＨＧＦアイソフォームは、ｔＰＡプレ／プロ配列または前記連結されたアイソフォームの分泌、プロセシングおよび／または輸送を達成するために十分なその部分に、リンカーによって作動可能に連結されている、請求項９５〜１００のいずれかに記載のポリペプチド。
【請求項１０２】
前記リンカーは、１種以上の制限酵素によって認識されるヌクレオチドの配列によってコードされる制限酵素リンカーである、請求項１０１に記載のポリペプチド。
【請求項１０３】
前記制限酵素リンカーは、アイソフォームまたはその活性部分と、ｔＰＡプレ／プロ配列または分泌を達成するために十分なその部分との間に連結されている、請求項１０２に記載のポリペプチド。
【請求項１０４】
ポリペプチドの精製および／または検出を容易にするタグを必要に応じて含む、請求項９５〜１０３のいずれかに記載のポリペプチド。
【請求項１０５】
請求項１０４に記載のポリペプチドであって、
該ポリペプチドが、制限酵素リンカーを含み、該リンカーが、１種以上の制限酵素によって認識されるヌクレオチドの配列によってコードされる制限酵素リンカーであり；そして
前記タグが、該制限酵素リンカーと、ｔＰＡ前駆体配列または分泌を達成するために十分なその部分との間に連結されている；
ポリペプチド。
【請求項１０６】
前記タグは、ｍｙｃタグである、請求項９４〜１０４のいずれかに記載のポリペプチド。
【請求項１０７】
前記アイソフォームは、イントロン融合タンパク質である、請求項１〜５０、請求項７８〜８７および請求項９４〜１０６のいずれかに記載のポリペプチド。
【請求項１０８】
前記アイソフォームは、イントロン融合タンパク質である、請求項６２〜７８のいずれかに記載の方法。
【請求項１０９】
請求項５１または５２に記載の核酸分子、あるいは請求項５３〜５７のいずれかに記載のベクター、あるいは請求項５８〜６１のいずれかに記載の細胞を含む、薬学的組成物であって、前記疾患または状態が、ＣＳＲまたはそれらに対するリガンドによって媒介される、薬学的組成物。
【請求項１１０】
被験体に請求項１０９に記載の薬学的組成物を投与する工程を包含する、疾患または状態を処置する方法であって、該疾患または状態は、同族ＣＳＲまたは同族リガンドによって媒介される、方法。
【請求項１１１】
前記疾患または状態は、炎症性疾患、癌、新脈管形成媒介性疾患、または過剰増殖性疾患である、請求項１１０に記載の方法。
【請求項１１２】
前記疾患または状態は、眼疾患、アテローム硬化症、糖尿病、関節リウマチ、血管腫、創傷治癒、アルツハイマー病、クロイツフェルト−ヤーコプ病、ハンティングトン病、平滑筋増殖に関連する疾患、多発性硬化症、心臓血管疾患、および腎疾患から選択される、請求項１１０に記載の方法。
【請求項１１３】
前記癌は、癌腫、リンパ腫、芽細胞腫、肉腫、白血病、リンパ性悪性疾患、扁平上皮癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺の腺癌および肺の扁平上皮癌を含む肺癌、腹膜の癌、肝細胞癌、胃癌または消化管癌を含む胃癌、膵臓癌、グリア芽細胞腫、子宮頚癌、卵巣癌、肝臓癌、膀胱癌、ヘパトーマ、乳癌、結腸癌、直腸癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌または子宮癌、唾液腺癌、腎臓癌または腎細胞癌、前立腺癌、外陰癌、甲状腺癌、肝癌、肛門癌、陰茎癌、および頭頸部癌から選択される、請求項１１２に記載の方法。
【請求項１１４】
ＣＳＲまたはそれに対するリガンドによって媒介される疾患または状態を処置するための、請求項５１もしくは５２に記載のＤＮＡ構築物、または請求項５３〜５７のいずれかに記載のベクター、または請求項５８〜６１のいずれかに記載の細胞の、使用。
【請求項１１５】
ＣＳＲまたはそれに対するリガンドによって媒介される疾患または状態を処置するための医薬の処方のための、請求項５１もしくは５２に記載のＤＮＡ構築物、または請求項５３〜５７のいずれかに記載のベクター、または請求項５８〜６１のいずれかに記載の細胞の、使用。
【請求項１１６】
前記疾患または状態は、炎症性疾患、癌、新脈管形成媒介性疾患または過剰増殖性疾患である、請求項１１４または請求項１１５に記載の使用。
【公表番号】特表２００９−５１５５２１（Ｐ２００９−５１５５２１Ａ）
【公表日】平成２１年４月１６日（２００９．４．１６）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００８−５４００６３（Ｐ２００８−５４００６３）
【出願日】平成１８年１０月３１日（２００６．１０．３１）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００６／０４２６８０
【国際公開番号】ＷＯ２００７／０６４４３７
【国際公開日】平成１９年６月７日（２００７．６．７）
【出願人】（５０８１３９５９４）レセプター バイオロジックス， インコーポレイテッド (3)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２１年４月１６日（２００９．４．１６）
【国際特許分類】
【出願日】平成１８年１０月３１日（２００６．１０．３１）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００６／０４２６８０
【国際公開番号】ＷＯ２００７／０６４４３７
【国際公開日】平成１９年６月７日（２００７．６．７）
【出願人】（５０８１３９５９４）レセプター バイオロジックス， インコーポレイテッド (3)
【Ｆターム（参考）】
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