乳児仙痛を低減するための選択された乳酸菌の使用
【課題】本発明は、本明細書において、乳児仙痛の予防及び／又は治療のために、ＩＬ−ＩＯの産生を促進する能力、その結果としてのＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＴＲ細胞の増殖に関して選択された乳酸菌の特定の菌株、このような菌株を選択する方法、及びこのような菌株を含む製品を提供する。
【解決手段】適切な宿主細胞でのＩＬ−１０の発現を促進する乳酸菌菌株の能力を試験すること、該宿主細胞によるＩＬ−１０産生の増加を引き起こす乳酸菌菌株を選択すること、及び該選択された菌株の細胞を含む製品を製造することを含む、乳児仙痛を低減するための製品を製造する方法。
【解決手段】適切な宿主細胞でのＩＬ−１０の発現を促進する乳酸菌菌株の能力を試験すること、該宿主細胞によるＩＬ−１０産生の増加を引き起こす乳酸菌菌株を選択すること、及び該選択された菌株の細胞を含む製品を製造することを含む、乳児仙痛を低減するための製品を製造する方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、本明細書において、仙痛の予防及び／又は治療のために、サイトカインＩＬ−１０のレベルを増加させる乳酸菌の能力に関して選択された乳酸菌の特定の菌株、このような菌株を選択する方法、及びこのような菌株を含む製品を提供する。
【背景技術】
【０００２】
罹患率及び苦痛の両方に関して顕著であるにもかかわらず、乳児仙痛の性質及び原因はまだよく分かっていない。この病態の母親の説明では、乳児は昼間は機嫌がよいが、不機嫌な顔をし始め、顔が赤くなり、足を突っ張り、泣き叫び、約２〜２０分間泣き続け、その後この発作が急に終わるというものである。病態を記載するために用いられた用語にさえ論争が生じている。これらの用語には、「乳児仙痛」、痛みが主として夕方に限られるので「夕方仙痛」、及び痛みは出生から約３ヵ月後に消失するという名目で「３ヵ月仙痛」が含まれる。（Ｉｌｌｉｎｇｗｏｒｔｈ ＲＳ．母乳哺育での問題点（Ｄｉｆｆｉｃｕｌｔｉｅｓ ｉｎ ｂｒｅａｓｔｆｅｅｄｉｎｇ）。Ｒｏｎａｌｄ Ｓ．Ｉｌｌｉｎｇｗｏｒｔｈ編、Ｔｈｅ Ｎｏｒｍａｌ Ｃｈｉｌｄ。第１０版。Ｈａｒｃｏｕｒｔ（Ｉｎｄｉａ）Ｐｖｔ Ｌｔｄ．１９９７；３９〜４４）。別の著者は、別の定義を用いていた。仙痛は、少なくとも３週間の期間で、１週間当たり３日かそれ以上の間の、１日当たり３時間かそれ以上の間の号泣の発作であるというＷｅｓｓｅｌｓの定義が、文献では主に受け入れられている（Ｓｏｎｄｅｒｇａａｒｄ Ｃ，Ｓｋａｊａａ Ｅ，Ｈｅｎｒｉｋｓｅｎ ＴＢ．胎児成長及び乳児仙痛（Ｆｅｔａｌ ｇｒｏｗｔｈ ａｎｄ ｉｎｆａｎｔｉｌｅ ｃｏｌｉｃ）。Ａｒｃｈ Ｄｉｓ Ｃｈｉｌｄ Ｆｅｔａｌ−Ｎｅｏｎａｔａｌ Ｅｄ ２０００；８３（１）：Ｆ４４〜４７）。これまでのところ、考えられる主要な原因因子が３つのグループに分けられている。すなわち心理社会的障害、消化管障害及び神経発生的障害である。
【０００３】
心理社会的因子には、正常号泣の変形、変則的育児の行動的影響及び親と乳児との相互関係における問題の発現が含まれる。
【０００４】
ひとしきり泣く間の乳児の肢位及びしかめ面のため、消化管障害は仙痛と関係している。消化管因子を以下に簡潔に概説する。
【０００５】
哺乳瓶授乳で育てる様な不適当な授乳技術、水平位置での授乳及び授乳後のげっぷの欠如が原因因子として考えられている。最初の６ヵ月間の母乳哺育が、唯一の保護因子であることが見いだされた。乳児仙痛の危険は、母乳哺育でない乳児の間で１．８６倍高い（Ｓａａｖｅｄｒａ ＭＡ，Ｄａｃｏｓｔａ ＪＳ，Ｇａｒｃｉａｓ Ｇ，Ｈｏｒｔａ ＢＬ，Ｔｏｍａｓｉ Ｅ，Ｍｅｎｄｏｃａ Ｒ．乳児仙痛発症率及び関連する危険因子：コホート研究（Ｉｎｆａｎｔｉｌｅ ｃｏｌｉｃ ｉｎｃｉｄｅｎｃｅ ａｎｄ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｒｉｓｋ ｆａｃｔｏｒｓ：ａ ｃｏｈｏｒｔ ｓｔｕｄｙ）。Ｐｅｄｉａｔｒ（Ｒｉｏ Ｊ）２００３；７９（２）：１１５〜１２２）。Ｌｏｔｈｅらは、仙痛は牛乳ホエータンパク質に対する感受性に由来することを示した（Ｌｏｔｈｅ Ｌ，Ｌｉｎｄｂｅｒｇ Ｔ．仙痛調合乳で哺育された乳児において、牛乳ホエータンパク質は乳児仙痛の症状を誘発する：二重盲検交叉研究（Ｃｏｗ’ｓ ｍｉｌｋ ｗｈｅｙ ｐｒｏｔｅｉｎ ｅｌｉｃｉｔｓ ｓｙｍｐｔｏｍｓ ｏｆ ｉｎｆａｎｔｉｌｅ ｃｏｌｉｃ ｉｎ ｃｏｌｉｃｋｙ ｆｏｒｍｕｌａ−ｆｅｄ ｉｎｆａｎｔｓ：Ａ ｄｏｕｂｌｅ−ｂｌｉｎｄ ｃｒｏｓｓ ｏｖｅｒ ｓｔｕｄｙ）Ｐｅｄｉａｔｒｉｃｓ １９８９；８３：２６２）。
【０００６】
最近の研究で、乳児仙痛の少数の症例でのみ、食品に対する過敏性が原因であると定義され得ることが結論づけられた（Ｈｉｌｌ ＤＪ，Ｈｏｓｋｉｎｇ ＣＳ．乳児仙痛及び食品過敏性（Ｉｎｆａｎｔｉｌｅ ｃｏｌｉｃ ａｎｄ ｆｏｏｄ ｈｙｐｅｒｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ）。Ｊ Ｐｅｄｉａｔｒ Ｇａｓｔｒｅｎｔｅｒｏｌ Ｎｕｔｒ ２０００；３０（Ｓｕｐｐｌ）：Ｓ６７〜７６）。最近Ｂｕｃｈａｎａｎは、乳児仙痛における低アレルギー性ミルクの治験は、十分に強固な証拠で裏づけられていないことを示した（Ｂｕｃｈａｎａｎ Ｐ．乳児仙痛に対する治療効果。低アレルギー性ミルクの治験は、強い十分な証拠によって裏づけられていない（Ｅｆｆｅｃｔｉｖｅｎｅｓｓ ｏｆ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｆｏｒ ｉｎｆａｎｔｉｌｅ ｃｏｌｉｃ．Ｔｒｉａｌ ｏｆ ｈｙｐｏａｌｌｅｒｇｅｎｉｃ ｍｉｌｋ ｉｓ ｎｏｔ ｓｕｐｐｏｒｔｅｄ ｂｙ ｓｔｒｏｎｇ ｅｎｏｕｇｈ ｅｖｉｄｅｎｃｅ）。ＢＭＪ １９９８；３１７（７１７０）：１４５１〜１４５２）。乳児仙痛を有する乳児は、アレルギー性疾患を来たす可能性が高いと考えられている。しかし最近の研究では、アトピーのマーカー、アレルギー性鼻炎、喘息、喘鳴及び最大流速変動性は、乳児仙痛を有するか又は有していない乳児で同程度であることが示されている（Ｃａｓｔｒｏ− Ｒｏｄｒｉｇｕｅｚ ＪＡ，Ｓｔｅｒｎ ＤＡ，Ｈａｌｏｎｅｎ Ｍ，Ｗｒｉｇｈｔ ＡＬ，Ｈｏｌｂｅｒｇ ＣＪら、乳児仙痛と喘息／アトピーの間の関係：任意抽出集団のプロスペクティブ試験（Ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ ｂｅｔｗｅｅｎ ｉｎｆａｎｔｉｌｅ ｃｏｌｉｃ ａｎｄ Ａｓｔｈｍａ／ａｔｏｐｙ：Ａ ｐｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅ ｓｔｕｄｙ ｉｎ ａｎ ｕｎｓｅｌｅｃｔｅｄ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ）。Ｐｅｄｉａｔｒｉｃｓ ２００１；１０８（４）：８７８〜８８２）。
【０００７】
水素呼気テストに基づくラクトース吸収不全が、著者らによって報告された（Ｈｙａｍｓ Ｊ，Ｇｅｅｒｓｔａｍａ Ｍ，Ｅｔｉｅｎｎｅ Ｎ，Ｔｒｅｅｍ Ｗ．仙痛を有する乳児における結腸水素産生（Ｃｏｌｏｎｉｃ ｈｙｄｒｏｇｅｎ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｉｎ ｉｎｆａｎｔｓ ｗｉｔｈ ｃｏｌｉｃ）。Ｊ Ｐｅｄｉａｔｒ １９８９；１１５：５９２）。乳児仙痛を有するか又は有していない乳児間で、糞便水素濃度に差は見いだされなかった。しかしより高いメタンレベルを産生している乳児は、仙痛の減少を呈することが見いだされ、仙痛の緩和におけるメタン産生の役割を示唆していた（Ｂｅｌｓｏｎ Ａ，Ｓｈｅｔｔｙ ＡＫ，Ｙｏｒｇｉｎ ＰＤ，Ｂｕｊａｎｏｖｅｒ Ｙ，Ｐｅｌｅｄ Ｙ，Ｄａｒ ＭＨ，Ｒｉａｆ Ｓ．乳児仙痛症候群を伴う場合と伴わない場合の、乳児における結腸の水素除去及びメタン産生（Ｃｏｌｏｎｉｃ ｈｙｄｒｏｇｅｎ ｅｌｉｍｉｎａｔｉｏｎ ａｎｄ ｍｅｔｈａｎｅ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｉｎ ｉｎｆａｎｔｓ ｗｉｔｈ ａｎｄ ｗｉｔｈｏｕｔ ｉｎｆａｎｔｉｌｅ ｃｏｌｉｃ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）。Ｄｉｇ Ｄｉｓ Ｓｃｉ ２００３；４８（９）：１７６２〜１７６６）。
【０００８】
モチリンなどの消化管（ＧＩＴ）ホルモンである血管作動性腸管ペプチドが、仙痛を有する乳児で異常に高いことが示された。Ｌｏｔｈｅらは、乳児仙痛における異常なＧＩＴ生理を示唆する、その後に仙痛を発症した乳児において出生当日からの高いレベルを示した。（Ｌｏｔｈｅ Ｌ，Ｉｖａｓｓｓｏｎ ＳＡ，Ｅｋｍａｎ Ｒ，Ｌｉｎｄｂｅｒｇ Ｔ．モチリンと乳児仙痛：プロスペクティブ研究（Ｍｏｔｉｌｉｎ ａｎｄ ｉｎｆａｎｔｉｌｅ ｃｏｌｉｃ：Ａ ｐｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅ ｓｔｕｄｙ）。Ａｃｔａ Ｐｅｄｉａｔｒ Ｓｃａｎｄ １９９０；７９（４）：４１０〜４１６）。
【０００９】
提案された神経発生的障害は、腹部痙攣及び仙痛がぜん動亢進の結果であり得ることを示唆している。この理論は、抗コリン作用薬の使用が仙痛症状を低下させるという証拠により裏づけられている（Ｇｕｐｔａ ＳＫ．仙痛は、消化管障害であるか？（Ｉｓ ｃｏｌｉｃ ａ ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｄｉｓｏｒｄｅｒ？）Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｐｅｄｉａｔｒ ２００２；１４：５８８〜９２）。
【００１０】
大部分の乳児は、生後４ヵ月の年齢までに仙痛から抜け出すという事実は、仙痛の神経発生的原因に支持を与えるものである（Ｂａｒｒ ＲＧ．乳児における仙痛及び号泣症候群（Ｃｏｌｉｃ ａｎｄ ｃｒｙｉｎｇ ｓｙｎｄｒｏｍｅｓ ｉｎ ｉｎｆａｎｔｓ）。Ｐｅｄｉａｔｒｉｃｓ １９９８；１０２（５ ｓｕｐｐｌ Ｅ）：１２８２〜６）。
【００１１】
一般に容認された定義によるプロバイオティクスは、宿主動物の腸内菌叢のバランスを改善することによって、宿主動物に有益に作用する生菌栄養補給補助食品である。本来は家畜用の動物飼料の補充を意味するにもかかわらず、この定義はヒトに容易に適用可能である。ヒトによるプロバイオティクスの主な消費は、ラクトバチルス（ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｉ）及びビフィドバクテリア（ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉａ）の腸内種属を含む酪農に基づく食品の形態である。プロバイオティクスの消費は、腸内ミクロフローラの構成に影響を及ぼすことがこの定義に内在する。
【００１２】
腸内生態系に及ぼすプロバイオティクスのこの効果は、使用者に何らかの有利な形で影響を与えることが提案されている。以下を含むプロバイオティクスの作用を介して腸内環境に対する変化から生じる多くの潜在的利点が実証されている。すなわち、特に腸の感染症に対する抵抗性の増加、下痢期間の減少、血圧の低下、血清コレステロール濃度の低下、アレルギーの減衰、末梢血白血球によるファゴサイトーシスの刺激、サイトカイン遺伝子発現の調節、アジュバント効果、腫瘍の退縮、及び発癌物質又は発癌補助物質産生の減少である。
【００１３】
Ｃｈｒｉｓｔｅｎｓｅｎらは、プロバイオティクス・ラクトバチルスは、樹状細胞（ＤＣ）のＴｈ１／Ｔｈ２／Ｔｈ３／Ｔｒ１／Ｔｒｅｇ促進能力を調節することにより、その免疫調節性効果を及ぼしたことを報告した最初の一グループであった。彼らはマウスのＤＣをラクトバチルス・ロイテリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｅｕｔｅｒｉ）を含む異なるラクトバチルス属種の共培養にさらした場合、これらはサイトカインＩｌ−６、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２及びＴＮＦ−αの産生、並びにＭＨＣクラスＩＩ及びＣＤ８６表面マーカーの上方制御について濃度依存的に特異的に調節されることを示した。全てのラクトバチルスは、ＤＣの成熟を示す表面ＭＨＣクラスＩＩ及びＣＤ８６マーカーを上方制御した。特にこれらの研究で顕著なのは、Ｌ．ロイテリ（Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉ）（１２２４６株）は、弱いＩＬ−１２インデューサーであったが、Ｌ．ジョンソニイ（Ｌ．ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）又はＬ．カゼイ（Ｌ．ｃａｓｅｉ）と共培養した場合、Ｌ．ロイテリは炎症誘発性サイトカインシグナルＩＬ−１２、ＩＬ−６及びＴＮＦ−ａの産生を特異的に阻害し、これらの生産は後者の２つの種によって促進されたことであった。ＩＬ−１０産生は、これらの条件下では変わらなかった。
【００１４】
これらの結果は、「Ｌ．ロイテリは、「危険信号（ｄａｎｇｅｒ ｓｉｇｎａｌ）」を有していない抗原に対する寛容性を促進する腸内樹状細胞産生の環境調節に関与する可能性があるが、同時にＬＰＳ様の危険信号を介して認識される病原体に対して応答する能力を完全に保っている」、「Ｌ．ロイテリ は、ＩＬ−１２及びＴＮＦ−α（及びＩＬ−６）の産生の下方制御に有効な有望で見事に標的化された治療である可能性があるが、抗炎症性ＩＬ−１０を誘導し、したがって炎症誘発性腸内サイトカイン環境とバランスをとる代替の治療的方法を示す」、したがって「摂取したプロバイオティクスを含む消化管のミクロフローラの消費に従って消化管のＴｈ１／Ｔｈ２／Ｔｈ３を駆動する能力が調節される可能性が存在する。」という彼らの結論をもたらした。（Ｃｈｒｉｓｔｅｎｓｅｎ ＨＲ，Ｆｒｏｋｉａｅｒ Ｈ，Ｐｅｓｔｋａ ＪＪ（２００２）マウスの樹状細胞において、ラクトバチルスは特異的にサイトカイン及び成熟表面マーカーの発現を調節する（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｉ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙ ｍｏｄｕｌａｔｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ ａｎｄ ｍａｔｕｒａｔｉｏｎ ｓｕｒｆａｃｅ ｍａｒｋｅｒｓ ｉｎ ｍｕｒｉｎｅ ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌｓ）。Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １６８ １７１〜１７８）。
【００１５】
Ｓｍｉｔｓらはこれらの観察結果を拡張し、Ｌ．ロイテリがＤＣをプライミングしてＴ調節（ＴＲ）細胞産生を刺激する能力を有することを示した。彼らは、ｉｎ ｖｉｔｒｏでヒト単球由来ＤＣと共培養した３つの異なるラクトバチルス属種を用いた。Ｌ．プランタルム（Ｌ．ｐｌａｎｔａｒｕｍ）株でなく、ヒトＬ．ロイテリ株（ＡＴＣＣ ５３６０９）及びＬ．カゼイの２つのラクトバチルスは、これらのＤＣをプライミングしてＴＲ細胞の発生を刺激する。これらのＴＲ細胞は、ＩＬ−１０のレベルの増加を生じることが示され、ＩＬ−１０依存様式でバイスタンダーＴ細胞（ｂｙｓｔａｎｄｅｒ Ｔ ｃｅｌｌ）の増殖を阻害することができた（Ｓｍｉｔｓ ＨＨ，Ｅｎｇｅｒｉｎｇ Ａ，ｖａｎ ｄｅｒ Ｋｌｅｉｊ Ｄ，ｄｅ Ｊｏｎｇ ＥＣ，Ｓｃｈｉｐｐｅｒ Ｋ，ｖａｎ Ｃａｐｅｌ ＴＭＭ，Ｚａａｔ ＢＡＪ．Ｙａｚｄａｎｂａｋｈｓｈ Ｍ，Ｗｉｅｒｅｎｇａ ＥＡ，ｖａｎ Ｋｏｏｙｋ Ｙ，Ｋａｐｓｅｎｂｅｒｇ Ｌ（２００５）選択的プロバイオティクス細菌は、樹状細胞特異的細胞間接着分子３−グラビングノンインテグリンを介して樹状細胞機能を調節することにより、ｉｎ ｖｉｔｒｏでＩＬ−１０産生調節Ｔ細胞を誘導する（Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ｐｒｏｂｉｏｔｉｃ ｂａｃｔｅｒｉａ ｉｎｄｕｃｅ ＩＬ−１０−ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ Ｔ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｂｙ ｍｏｄｕｌａｔｉｎｇ ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｔｈｒｏｕｇｈ ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｉｎｔｅｒｃｅｌｌｕｌａｒ ａｄｈｅｓｉｏｎ ｍｏｌｅｃｕｌｅ ３−ｇｒａｂｂｉｎｇ ｎｏｎｉｎｔｅｇｒｉｎ）。Ｊ Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ １１５１ １２６０〜１２６７）。
【００１６】
経口投与したＬ．ロイテリの宿主に及ぼす効果に関する最初の１つの証拠それ自体は、ニワトリ回腸で観察された増加したＣＤ４＋／ＣＤ８＋Ｔ細胞比率であった（Ｗａｌｔｅｒ Ｊ．Ｄｏｂｒｏｇｏｓｚ，ＮＵＴＲＡｆｏｏｄｓ ２００５ ４（２／３）１５〜２８）。Ｖａｌｅｕｒらは、最近この観察結果を拡張してヒト回腸を含めた。彼らは、（ａ）ヒト消化管全体にわたる個々のヒト特異的Ｌ．ロイテリＡＴＣＣ ５５７３０細胞の分布及び（ｂ）特に腸の回腸部位でのＣＤ４＋Ｔ細胞の動員及び／又は増殖におけるＬ．ロイテリＡＴＣＣ５５７３０の明白な関与を示す、ヒト対象における直接的なｉｎ ｓｉｔｕでの証拠を得た。彼らは、「Ｌ．ロイテリの投与は、ヒト上皮へのＣＤ４＋Ｔヘルパー細胞の動員を誘発した。この動員は、ヒトでこのＬ．ロイテリ株のプロバイオティクス効果を説明する１つの要素であるかもしれない」と結論づけた（Ｖａｌｅｕｒ Ｎ，Ｅｎｇｅｌ Ｐ，Ｃａｒｂａｊａｌ Ｎ，Ｃｏｎｎｏｌｌｙ Ｅ，Ｌａｄｅｆｏｇｅｄ Ｋ（２００４）ヒト消化管におけるラクトバチルス・ロイテリＡＴＣＣ ５５７３０によるコロニー形成及び免疫調節（Ｃｏｌｏｎｉｚａｔｉｏｎ ａｎｄ ｉｍｍｕｎｏｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ ｂｙ Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｅｕｔｅｒｉ ＡＴＣＣ ５５７３０ ｉｎ ｔｈｅ ｈｕｍａｎ ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｔｒａｃｔ）、Ａｐｐｌ Ｅｎｖｉｒｏｎ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ ７０ １１７６〜１１８１）。
【００１７】
Ｔｏｌｌ様リセプター（ＴＬＲ）は、微生物モティーフを認識してサイトカイン産生に導く一連の遺伝子を活性化する。従来はＴＬＲは微生物感染のセンサーと考えられていて、その役割は炎症反応を誘導することである。しかしＴＬＲによって認識されるモティーフは病原体に特有ではなく微生物の全部のクラスによって共有される一般的なモティーフであるが、どのようにして免疫系がＴＬＲを介して片利共生細菌と病原性細菌とを区別するかについてはまだ充分には分かっていない。最近ではデータは、炎症反応の誘導におけるＴＬＲの役割にもかかわらず、片利共生ミクロフローラを認識することにより、ＴＬＲは腸内ホメオスタシスを維持することにおいても役割を果たすことを示した（Ｒａｋｏｆｆ−Ｎａｈｏｕｍ Ｓ，Ｐａｇｌｉｎｏ Ｊ，Ｅｓｌａｍｉ−Ｖａｒｚａｎｅｈ Ｆ，Ｅｄｂｅｒｇ Ｓ，Ｍｅｄｚｈｉｔｏｖ Ｒ．ｔｏｌｌ様リセプターによる片利共生ミクロフローラの認識には、腸内ホメオスタシスが必要である（Ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ ｏｆ ｃｏｍｍｅｎｓａｌ ｍｉｃｒｏｆｌｏｒａ ｂｙ ｔｏｌｌ−ｌｉｋｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ ｉｓ ｒｅｑｕｉｒｅｄ ｆｏｒ ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｈｏｍｅｏｓｔａｓｉｓ）。Ｃｅｌｌ．２００４ Ｊｕｌ ２３；１１８（２）：２２９〜４１）。
【００１８】
Ｌ．ロイテリを含む様々なラクトバチルス属種の菌株が、プロバイオティクス処方において用いられている。Ｌ．ロイテリは、動物消化管に天然に存在する生物の１つであり、通常ヒトを含む健常動物の腸に認められる。これは抗菌活性を有することが知られている。例えば、米国特許第５，４３９，６７８号、同第５，４５８，８７５号、同第５，５３４，２５３号、同第５，８３７，２３８号、及び同第５，８４９，２８９号を参照のこと。Ｌ．ロイテリ細胞がグリセロール存在下の嫌気的条件下で増殖するとき、これらはβ−ヒドロキシ−プロピオンアルデヒド（３−ＨＰＡ）として知られている抗菌物質を産生する。
【００１９】
腸内免疫系と片利共生フローラ間に明白で複雑な関係が存在する。最近、管腔内在性フローラは、腸内上皮細胞上に位置するｔｏｌｌ様リセプター（ＴＬＲｓ）及びＮＯＤリセプターの活性化を介する細菌誘発性の生得的及び適応宿主応答の重要な過程を開始することができることが示された（Ｈａｌｌｅｒ Ｄ，Ｊｏｂｉｎ Ｃ．常在性第一胃細菌と宿主間の相互作用：健全な関係がまずくなるか？（Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ ｂｅｔｗｅｅｎ ｒｅｓｉｄｅｎｔ ｒｕｍｉｎａｌ ｂａｃｔｅｒｉａ ａｎｄ ｔｈｅ ｈｏｓｔ：ｃａｎ ａ ｈｅａｌｔｈｙ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ ｔｕｒｎ ｓｏｕｒ？）Ｊ Ｐｅｄｉａｔｒ Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ Ｎｕｔｒ ２００４；３８：１２３〜３６．Ｒａｋｏｆｆ−Ｎａｈｏｌｍ Ｓ，Ｐａｇｌｉｎｏ Ｊ，Ｅｓｌａｍｉ−Ｖａｒｚａｎｅｈ Ｆ，Ｅｄｂｅｒｇ Ｓ，Ｍｅｄｚｈｉｔｏｖ Ｒ．Ｔｏｌｌ様リセプターによる片利共生ミクロフローラの認識には、腸内ホメオスタシスが必要である（Ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ ｏｆ ｃｏｍｍｅｎｓａｌ ｍｉｃｒｏｆｌｏｒａ ｂｙ Ｔｏｌｌ−ｌｉｋｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ ｉｓ ｒｅｑｕｉｒｅｄ ｆｏｒ ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｈｏｍｅｏｓｔａｓｉｓ）。Ｃｅｌｌ ２００４；１１８：２２９〜２４１）。動物モデルにおいて、サイトカインは神経及び筋免疫相互作用（ｎｅｕｒｏ− ａｎｄ ｍｙｏ−ｉｍｍｕｎｅ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ）を介して腸神経筋肉組織の反射亢進を開始することができる（Ｍｉｌｌａ ＰＪ．炎症細胞及び腸運動性の制御（Ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｃｅｌｌｓ ａｎｄ ｔｈｅ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｇｕｔ ｍｏｔｉｌｉｔｙ）。Ｊ Ｐｅｄｉａｔｒ Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ Ｎｕｔｒ ２００４；３９：Ｓ７５０）。
【００２０】
実験的研究及び臨床的研究において、特異的なプロバイオティクス菌株はＴ細胞の増殖を阻害し、Ｔｈ１及びＴｈ２サイトカイン両方の分泌を低減するが、ＩＬ−１０及びＴＧＦ−βなどの抑圧性サイトカインを選択的に産生することが示された（Ｒａｕｔａｖａ Ｓ，Ｋａｌｌｉｏｍａｋｉ Ｍ，Ｉｓｏｌａｕｒｉ Ｅ．妊娠及び母乳哺育中のプロバイオティクスが、乳児におけるアトピー性疾患に対して免疫調節性保護を与える可能性がある（Ｐｒｏｂｉｏｔｉｃｓ ｄｕｒｉｎｇ ｐｒｅｇｎａｎｃｙ ａｎｄ ｂｒｅａｓｔ−ｆｅｅｄｉｎｇ ｍｉｇｈｔ ｃｏｎｆｅｒ ｉｍｍｕｎｏｍｏｄｕｌａｔｏｒｙ ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ ａｇａｉｎｓｔ ａｔｏｐｉｃ ｄｉｓｅａｓｅ ｉｎ ｔｈｅ ｉｎｆａｎｔｓ）。 Ｊ Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２００２；１０９：１１９〜１２１）。さらにヒトボランティアにおいて、Ｌ．ロイテリはヒト消化管でコロニーを形成し、ヒト回腸上皮におけるＣＤ４＋Ｔヘルパー細胞の摂取を含む免疫調節性活性を発揮することができる（Ｖａｌｅｕｒ Ｎ，Ｅｎｇｅｌ Ｐ，Ｃａｒｂａｊａｌ Ｎ，Ｃｏｎｎｏｌｌｙ Ｅ，Ｌａｄｅｆｏｇｅｄ Ｋ．ヒト消化管のラクトバチルス・ロイテリＡＴＣＣ ５５７３０によるコロニー形成及び免疫調節（Ｃｏｌｏｎｉｚａｔｉｏｎ ａｎｄ ｉｍｍｕｎｏｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ ｂｙ Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｅｕｔｅｒｉ ＡＴＣＣ ５５７３０ ｉｎ ｔｈｅ ｈｕｍａｎ ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｔｒａｃｔ）。Ａｐｐｌ Ｅｎｖｉｒｏｎ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ ２００４；７０：１１７６〜８１）。ＤＣの成熟は、未成熟ＤＣをリンパ節に遊走する熟成抗原提示細胞に変換する過程である。この過程は、未成熟のＤＣを特徴づける強力な抗原取り込み能力の喪失並びに同時刺激性分子及び種々のサイトカインの上方制御を生じる（Ｍｅｌｌｍａｎ Ｉ，Ｓｔｅｉｎｍａｎ ＲＭ：樹状細胞：特殊化及び調節された抗原プロセシング装置（Ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌｓ：ｓｐｅｃｉａｌｉｚｅｄ ａｎｄ ｒｅｇｕｌａｔｅｄ ａｎｔｉｇｅｎ ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ ｍａｃｈｉｎｅｓ）。Ｃｅｌｌ ２００１，１０６：２５５〜８．Ｂａｎｃｈｅｒｅａｕ Ｊ，Ｂｒｉｅｒｅ Ｆ，Ｃａｕｘ Ｃ，Ｄａｖｏｕｓｔ Ｊ，Ｌｅｂｅｃｑｕｅ Ｓ，Ｌｉｕ ＹＪ，Ｐｕｌｅｎｄｒａｎ Ｂ，Ｐａｌｕｃｋａ Ｋ：樹状細胞の免疫生物学（Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌｓ）。Ａｎｎｕ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２０００，１８：７６７〜８１１）。
【００２１】
既知の成熟化プロトコルは、ＤＣが抗原に曝露後又は曝露中に遭遇すると考えられている環境に基づいている。この方法の最適例は、単球馴化培地（ＭＣＭ）の使用である。ＭＣＭは、単球を培養後、成熟因子の供給源として培養上清液を用いることによりｉｎ ｖｉｔｒｏで作製する。成熟に関与するＭＣＭの主要成分は、炎症誘発性サイトカインであるインターロイキン−１ベータ（ＩＬ−１β）、ＩＬ−６及びＴＮＦ−αである（Ｒｅｄｄｙ Ａ，Ｓａｐｐ Ｍ，Ｆｅｌｄｍａｎ Ｍ，Ｓｕｂｋｌｅｗｅ Ｍ，Ｂｈａｒｄｗａｊ Ｎ：単球馴化培地は、ヒト樹状細胞の末期成熟の媒介において定義されたサイトカインより効果的である（Ａ ｍｏｎｏｃｙｔｅ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｅｄ ｍｅｄｉｕｍ ｉｓ ｍｏｒｅ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ｔｈａｎ ｄｅｆｉｎｅｄ ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ ｉｎ ｍｅｄｉａｔｉｎｇ ｔｈｅ ｔｅｒｍｉｎａｌ ｍａｔｕｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌｓ）。Ｂｌｏｏｄ １９９７，９０：３６４０〜６）。熟成したＤＣは、Ｔ細胞応答を促進し指令する種々のサイトカインを産生する。これらのサイトカインの２つは、ＩＬ−１０及びＩＬ−１２である。これらのサイトカインは、誘導されたＴ細胞応答の方向に対して反対の作用を有する。すなわちＩＬ−１２はＴｈ１タイプ応答を誘導するが、一方ＩＬ−１０はそのような応答を阻害する。
【００２２】
したがって、ＤＣを含むＡＰＣの活性化状態（抗原提示細胞）が、ＣＤ４＋Ｔ細胞応答のタイプと強度を決定する。休止ＡＰＣ（胸腺の上皮細胞を含む）は、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＴＲ細胞の発生を促進することができる。病原体による感染の間に、ＴＬＲによる微生物分子の認識はＡＰＣの活性化を生じる。次いでＡＰＣは、全体としてＴＲ細胞の抑制効果よりも優位になるＩＬ−６及び別の可溶性因子を産生して、病原体に対するＴＥ（エフェクターＴ細胞）細胞の効率的な産生を可能にする。休止及び活性化ＡＰＣ間の動的平衡は、ＴＲ及びＴＥ細胞の両方の作用によっても影響を受けるであろう（図１）。
【００２３】
Ｐｅｓｓｉら（２０００）は、経口でのラクトバチルス・ラムノサスＧＧ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ ＧＧ）に続くアトピーの子供におけるＩＬ−１０産生を記載している。しかし本明細書におけるこの発明と異なり、この研究は、運動障害及び仙痛に対する菌株の効率に関して選択された、大量のＩＬ−１０を産生する能力を有する菌株を具体的には記載していない（Ｐｅｓｓｉ Ｔ，Ｓｕｔａｓ Ｙ，Ｈｕｒｍｅ Ｍ．Ｉｓｏｌａｕｒｉ Ｅ．経口でのラクトバチルス・ラムノサスＧＧに続く、アトピーの子供におけるインターロイキン−１０の産生（Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−１０ ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｉｎ ａｔｏｐｉｃ ｃｈｉｌｄｒｅｎ ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ ｏｒａｌ Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ．ＧＧ．）Ｃｌｉｎ Ｅｘｐ Ａｌｌｅｒｇｙ．２０００ Ｄｅｃ；３０（１２）：１８０４〜８）。
【００２４】
Ｈｅｒｍｅｌｉｊｎらによる研究（２００５）は、ラクトバチルス・プランタルム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ）ではなく、Ｌ．ロイテリ及びラクトバチルス・カゼイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃａｓｅｉ）は、単球由来ＤＣをプライミングしてＴＲ細胞の発生を促進することを示している。これらのＴＲ細胞は、ＩＬ−１０のレベルの増加を生じた。本明細書におけるこの発明と異なり、この著者らは腸運動性又は仙痛とＩＬ−１０の上昇を結び付けていない。菌株に関してさえも、この著者らはＩＬ−１０レベルを増加させるのに効率が良い２つの異なる細菌種を述べている。これは、仙痛を低減するのに最も有効なプロバイオティクスを決定し、ＩＬ−１０レベルを増加させるのに有効である異なる能力を有する同じ種の異なる菌株として菌株レベルで選択されなければならないことを示した本明細書におけるこの発明とは対照的である。
【００２５】
現在、仙痛の治療薬は存在しない。仙痛のための現在の治療パラダイムは、薬理学的及び／又は非薬理学的方法から成り、症状のせいぜいわずかな緩和を与える。親に提供される仙痛の典型的な治療的介入は、食餌的、物理的、行動的及び薬理学的介入を含む４つのカテゴリーの中に含まれる。食事療法には、種々の授乳技術についての専門家の助言又は低アレルギー性ミルクの使用、大豆若しくはラクトースを含まない調合乳、及び早い段階での固形食の採用が含まれる（Ｌｏｔｈｅ，Ｌ．ら、乳児仙痛の原因としての牛乳からの調合乳：二重盲検試験（ｃｏｗ’ｓ ｍｉｌｋ ｆｏｒｍｕｌａ ａｓ ａ ｃａｕｓｅ ｏｆ ｉｎｆａｎｔｉｌｅ ｃｏｌｉｃ：ａ ｄｏｕｂｌｅ−ｂｌｉｎｄ ｓｔｕｄｙ）。Ｐｅｄｉａｔｒｉｃｓ １９８２；７０：７〜１０；Ｆｏｒｓｙｔｈ Ｂ Ｗ Ｃ．仙痛と調合乳を変える効果：二重盲検多段交叉研究（Ｃｏｌｉｃ ａｎｄ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｃｈａｎｇｉｎｇ ｆｏｒｍｕｌａｓ：ａ ｄｏｕｂｌｅ−ｂｌｉｎｄ ｍｕｌｔｉｐｌｅ−ｃｒｏｓｓｏｖｅｒ ｓｔｕｄｙ）。Ｊ Ｐｅｄｉａｔｒ １９８９；１１５，５２１〜６；Ｔｒｅｅｍ，Ｗ Ｒら、乳児仙痛に及ぼす繊維強化調合乳の効果の評価（Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ａ ｆｉｂｅｒ−ｅｎｒｉｃｈｅｄ ｆｏｒｍｕｌａ ｏｎ ｉｎｆａｎｔ ｃｏｌｉｃ）。Ｊ Ｐｅｄｉａｔｒ １９９１；１１９６９５〜７０１）。しかし大豆調合乳の使用、又は授乳技術の変更のどちらも、仙痛のすべての症例に効果的に作用する訳ではない。これらの推奨を研究するデータの再検討では、低アレルギー性調合乳、例えば部分的に加水分解した又はアミノ酸に基づく調合乳の使用は、約２５％の乳児にしか恩恵をもたらし得ないことを示した（Ｌｕｃａｓｓｅｎ，Ｐ Ｌ Ｂ Ｊら、乳児仙痛：ホエー水解物を用いる号泣時間の減少：二重盲検、無作為プラセボ対照試験（Ｉｎｆａｎｔｉｌｅ ｃｏｌｉｃ：ｃｒｙｉｎｇ ｔｉｍｅ ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ａ ｗｈｅｙ ｈｙｄｒｏｌｙｓａｔｅ：ａ ｄｏｕｂｌｅ−ｂｌｉｎｄ，ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ ｐｌａｃｅｂｏ−ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ ｔｒｉａｌ）。Ｐｅｄｉａｔｒｉｃｓ ２０００；１０６：１３４９〜５４；Ｅｓｔｅｐ，Ｄ Ｃら、アミノ酸に基づく特殊調合乳を用いる小児仙痛の治療：予備的研究（Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｉｎｆａｎｔ ｃｏｌｉｃ ｗｉｔｈ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄ−ｂａｓｅｄ ｉｎｆａｎｔ ｆｏｒｍｕｌａ：ａ ｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｙ ｓｔｕｄｙ）。Ａｃｔａ Ｐａｅｄｉａｔｒ ２０００；８９：２２〜７）。
【００２６】
仙痛管理に対する物理的な方法には、ガスの産生／還流を緩和する体位の物理的な動き、乳児を抱きかかえること、スワドリング、腹圧をかけること、又はマッサージをすることが含まれる。他の方法には、仙痛に幼児が気づくのを最小限にするように気をそらすこと、例えば乳児を車に乗せること、乗車シミュレータの使用、ベビーベッド振動器、又は幼児用ブランコが含まれる（Ｌｉｐｔｏｎ Ｅ Ｌ．スワドリングと小児ケアの実施：歴史的、文化的及び経験的観察（Ｓｗａｄｄｌｉｎｇ ａｎｄ ｃｈｉｌｄ ｃａｒｅ ｐｒａｃｔｉｃｅ：ｈｉｓｔｏｒｉｃａｌ，ｃｕｌｔｕｒａｌ ａｎｄ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎｓ）。Ｐｅｄｉａｔｒｉｃｓ １９６５；３５：５２１〜６７；Ｂｙｒｎｅ Ｊ Ｍ，Ｈｏｒｏｗｉｔｚ Ｆ Ｄ．鎮痛介入としてのロッキング：身動きの方向とタイプの影響（Ｒｏｃｋｉｎｇ ａｓ ａ ｓｏｏｔｈｉｎｇ ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎ：ｔｈｅ ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ ｏｆ ｄｉｒｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｔｙｐｅ ｏｆ ｍｏｖｅｍｅｎｔ）。Ｉｎｆａｎｔ Ｂｅｈａｖ Ｄｅｖ １９８１；４：２０７〜１８）。
【００２７】
別の方法は、乳児をなだめるといわれている音の録音を再生することである。しかし医学文献に、これらの方法は効果が無いという証拠が存在する（Ｐａｒｋｉｎ Ｐ Ｃ，Ｓｃｈｗａｒｔｚ Ｃ Ｊ，Ｍａｎｕｅｌ Ｂ Ａ．乳児期の持続的号泣管理における３つの介入の無作為対照臨床試験（Ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ ｔｒｉａｌ ｏｆ ｔｈｒｅｅ ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎｓ ｉｎ ｔｈｅ ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ ｏｆ ｐｅｒｓｉｓｔｅｎｔ ｃｒｙｉｎｇ ｏｆ ｉｎｆａｎｃｙ）Ｐｅｄｉａｔｒｉｃｓ １９９３；９２（２）：１９７〜２０１）。これらの方法は、仙痛症状の緩和にせいぜいわずかに効果があるのみである。
【００２８】
仙痛治療のための行動に関する介入の推奨は、利用できる最も一貫しない治療法である。一部の著者は感覚刺激を増大させることを勧めるが、他の著者はそのような刺激を低下させることを勧めている（Ｂａｌｏｎ Ａ Ｊ．乳児仙痛の管理（Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ ｏｆ ｉｎｆａｎｔｉｌｅ ｃｏｌｉｃ）。Ａｍｅｒ Ｐｈａｍ Ｐｈｙｓｉｃｉａｎ １９９７；５５：２３５〜２４２；Ｌｕｃａｓｓｅｎ Ｐ Ｌ Ｂ Ｊ，Ａｓｓｅｎｄｅｌｆｔ Ｗ Ｊ Ｊ，Ｇｕｂｂｅｌｓ Ｊ Ｗ，ｖａｎ Ｅｉｊｋ Ｔ Ｍ，ｖａｎ Ｇｅｌｄｒｏｐ Ｗ Ｊ．乳児仙痛に対する治療の効果：系統的再検討（Ｅｆｆｅｃｔｉｖｅｎｅｓｓ ｏｆ ｔｒｅａｔｍｅｎｔｓ ｆｏｒ ｉｎｆａｎｔｉｌｅ ｃｏｌｉｃ：ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ ｒｅｖｉｅｗ）。ＢＭＪ １９９８；３１６（５）：１５６３〜９；及びＣａｒｅｙ Ｗ Ｂ．「仙痛」−乳児−環境相互作用としての主要な過剰号泣（“Ｃｏｌｉｃ”−ｐｒｉｍａｒｙ ｅｘｃｅｓｓｉｖｅ ｃｒｙｉｎｇ ａｓ ａｎ ｉｎｆａｎｔ−ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ）。Ｐｅｄｉａｔｒ Ｃｌｉｎ Ｎｏｒｔｈ Ａｍ １９８４；３１：９９３〜１００５）。その他の推奨には、号泣に対する早い段階での対応又は乳児を泣かせること、おしゃぶりを与えること、通常の授乳スケジュールの実施、視線を交わすこと及び対話型の遊びを用いることが含まれる。
【００２９】
仙痛の治療の薬理学的介入により、処方薬及び非処方薬を使用するようになった。現在使用されている処方薬には、緩和を与え得るが錐体外路系症状、呼吸抑制、及び便秘を含む危険を伴うベラドンナアルカロイド及びオピエイト（鎮痛剤）が含まれる。例えばアトロピンとその効果が類似した抗コリン剤、例えばヒヨスチアミン（ＬＥＶＩＳＩＮＥ（登録商標）、又はＧＡＳＴＲＯＳＥＤ（登録商標））及びジサイクロミンは、瞳孔を拡大し、心拍数を増加し、唾液産生を減少させ、消化管及び尿路並びに気管支の痙攣を緩和する。抗コリン剤が、乳児仙痛を常に効果的に治療することが示された米国市場での唯一の処方薬であるにもかかわらず、残念なことに治療を受けた乳児の５％までもが呼吸困難、無呼吸、発作、失神、窒息、昏睡及び筋緊張低下を含む副作用を生じることがある（Ｗｉｌｌｉａｍｓ Ｊ，Ｗａｔｋｉｎ−Ｊｏｎｅｓ Ｒ．ジサイクロミン：一部の小さい乳児におけるこの使用に伴う憂慮すべき症状（Ｄｉｃｙｃｌｏｍｉｎｅ：ｗｏｒｒｙｉｎｇ ｓｙｍｐｔｏｍｓ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｉｔｓ ｕｓｅ ｉｎ ｓｏｍｅ ｓｍａｌｌ ｂａｂｉｅｓ）（ＢＭＪ １９８４；２８８：９０１；Ｍｙｅｒｓ Ｊ Ｈ，Ｍｏｒｏ−Ｓｕｔｈｅｒｌａｎｄ Ｄ，Ｓｈｏｏｋ Ｊ Ｅ．硫酸ヒオスシアミンを用いて治療した仙痛の乳児における抗コリン作用性中毒（Ａｎｔｉｃｈｏｌｉｎｅｒｇｉｃ ｐｏｉｓｏｎｉｎｇ ｉｎ ｃｏｌｉｃｋｙ ｉｎｆａｎｔｓ ｔｒｅａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｈｙｏｓｃｙａｍｉｎｅ ｓｕｌｆａｔｅ）。Ａｍ Ｊ Ｅｍｅｒｇ Ｍｅｄ １９９７；１５：５３２〜５）。さらに数例の死亡が、ジサイクロミンを服用している乳児で報告された（Ｇａｒｒｉｏｔｔ Ｊ Ｃ，Ｒｏｄｒｉｇｕｅｚ Ｒ，Ｎｏｒｔｏｎ Ｌ Ｅ．乳児におけるジサイクロミンが関与する２例の死亡（Ｔｗｏ ｃａｓｅｓ ｏｆ ｄｅａｔｈ ｉｎｖｏｌｖｉｎｇ ｄｉｃｙｃｌｏｍｉｎｅ ｉｎ ｉｎｆａｎｔｓ）。Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｔｏｘｉｃｏｌ １９８４；２２（５）：４５５〜４６２）。
【００３０】
乳児仙痛に有効な治療として報告された非処方薬には、超生理学的（高用量）ジフェンヒドラミン（ＢＥＮＡＤＲＹＬ（登録商標））、フェノバルビタール、抱水クロラール、及びアルコールさえも含むいくつかの鎮静剤又は睡眠導入剤が含まれる。しかし呼吸器疾患を伴う子供においていくつかのこれらの薬剤に関連した重篤な副作用の可能性があり、したがって、仙痛治療におけるこれらの広範な使用を制限している（Ｂａｌｏｎ Ａ Ｊ．乳児仙痛の管理（Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ ｏｆ ｉｎｆａｎｔｉｌｅ ｃｏｌｉｃ）。Ａｍｅｒ Ｐｈａｍ Ｐｈｙｓｉｃｉａｎ １９９７；５５：２３５〜２４２；Ｇｕｒｒｙ Ｄ．Ｉｎｆａｎｔｉｌｅ ｃｏｌｉｃ．Ａｕｓｔｒａｌｉａｎ Ｐｈａｍ Ｐｈｙｓ １９９４；２３（３）：３３７〜３４６３２）。
【００３１】
仙痛治療のより安全な非処方薬は、腸内ガス泡の量を低減する非吸収性の市販薬であるシメチコン又はジメチルポリシロキサンの投与を概して含んでいた。シメチコンは、非常に安全なプロフィールを有し、乳児仙痛に対するシメチコンの効果はプラセボと同じであることを示すいくつかの研究にもかかわらず多くの場合推奨されている（Ｍｅｔｃａｌｆ，Ｔ Ｊら、Ｐｅｄｉａｔｒｉｃｓ １９９４ Ｊｕｌｙ；９４（１）：２９〜３４．Ｓｆｅｒｒａ，Ｔ Ｊら、Ｐｅｄｉａｔｒ Ｃｌｉｎ Ｎｏｒｔｈ Ａｍ １９９６ Ａｐｒｉｌ；４３（２）：４８９〜５１０．Ｄａｎｉｅｌｓｏｎ，Ｂ．ら、Ａｃｔａ Ｐａｅｄｉａｔｒ Ｓｃａｎｄ １９８５ Ｍａｙ；７４（３）：４４６〜５０．Ｃｏｌｏｎ，Ａ Ｒら、Ａｍ Ｆａｍ Ｐｈｙｓｉｃｉａｎ １９８９ Ｄｅｃｅｍｂｅｒ；４０（６）：１２２〜４）。その結果、今日の仙痛の最も一般的な治療は、乳児が成長して病態から脱するのを待つことだけである。
【００３２】
したがって現在、乳児及び幼児における仙痛治療に役立つ安全で有効な化合物及び組成物並びに技術に対する要望がある。本発明の組成物及び方法は、この必要に応えて乳児における仙痛に伴う症状を安全且つ効果的に治療することができる製品を提供する。特許出願ＥＰ１３６４４８３Ａ１０には、乳児における仙痛などの消化管−神経筋異常の治療用プロバイオティクスが記載されている。プロバイオティクスとして、この出願人はいくつかの異なる細菌種について言及している。これは、仙痛を最も効果的に低減するプロバイオティクスはＩＬ−１０レベルの増加に有効であるように選択された特定の乳酸菌株であり、本発明の発明者がまた同種の菌株間でもＩＬ−１０産生の刺激にかなりの差異があることを示したように全ての細菌種ではないという本明細書における本発明と対照的である。
【００３３】
２００５年に、Ｓａｖｉｎｏは治療の７日以内にシメチコンを用いる標準的治療法と比べて、Ｌ．ロイテリＡＴＣＣ５５７３０の補充は、母乳哺育児における仙痛症状を有意に改善したことを示した。Ｌ．ロイテリを用いる治療に対する反応率は９５％であったが、一方シメチコンに反応したのは乳児の７％のみであった。彼は、２００５年８月３１日〜２００５年９月３日、イタリア国シエナでの欧州小児研究会議（Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｆｏｒ Ｐｅｄｉａｔｒｉｃ Ｒｅｓｅａｒｃｈ（ＥＳＰＲ），Ｍｅｅｔｉｎｇ）で結果を発表した（Ｐｅｄｉａｔｒ Ｒｅｓ．２００５；５８（２）：４１１）。Ｓａｖｉｎｏの結果が有益な効果を示したにもかかわらず、彼はＩＬ−１０産生を促進する特定の菌株と腸運動性の減少、その結果としての仙痛の減少との間の関連に気づいていなかった。本発明は、本明細書においてそのような最良の菌株を選択する方法を提供する。
【００３４】
Ｃｏｌｌｉｎｓは運動機能の障害は、様々な消化管部位で炎症又は免疫の活性化に関連して生じる場合がある種々の症状を生じ、食道炎、胃炎、及び突発性炎症性腸疾患（ＩＢＤ）などの一般的な疾患を含むことを記載した。これらの観察は、消化管の運動性は免疫系の影響も受けやすいことを示唆している。このような関係において、運動系は内腔に存在する侵害刺激から消化管を防御する重要な役割を果たす可能性がある（Ｃｏｌｌｉｎｓ Ｓ．，腸神経筋機能の免疫調節：運動性及び炎症性障害に対する影響（Ｔｈｅ Ｉｍｍｕｎｏｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ Ｅｎｔｅｒｉｃ Ｎｅｕｒｏｍｕｓｃｕｌａｒ Ｆｕｎｃｔｉｏｎ：Ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｆｏｒ Ｍｏｔｉｌｉｔｙ ａｎｄ Ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ）。Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｒｏｌｏｇｙ １９９６；１１１：１６８３〜１６９９）。例えばこの概念はＶａｎｔｒａｐｐｅｎらの観察を反映しており、彼は小腸での細菌の異常増殖が、小腸における空腹時の運動性の正常な周期性パターンの破壊を伴うことを示した（Ｖａｎｔｒａｐｐｅｎ Ｇ，Ｊａｎｎｓｓｅｎｓ Ｊ，Ｈｅｌｌｅｍａｎｓ Ｊ，Ｇｈｏｏｓ Ｙ．正常対象及び小腸で細菌の異常増殖を有する患者の空腹時運動複合体（Ｔｈｅ ｉｎｔｅｒｄｉｇｅｓｔｉｖｅ ｍｏｔｏｒ ｃｏｍｐｌｅｘ ｏｆ ｎｏｒｍａｌ ｓｕｂｊｅｃｔｓ ａｎｄ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｏｖｅｒｇｒｏｗｔｈ ｏｆ ｔｈｅ ｓｍａｌｌ ｉｎｔｅｓｔｉｎｅ）。Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ １９７７；９：１１５８〜１１６８）。
【００３５】
高いＩＬ−１０のレベルが、過度に活性化された免疫系を抑制することは長年よく知られていた。腸運動性は腸内免疫系に接続されている神経学的シグナルにより調節されること、及び仙痛は腸運動性が、例えば細菌異常増殖により増加した結果であることもまた既に示されていた。
【００３６】
先進工業国では、母親の消化管ミクロフローラを取り込む新生児能力を阻害する衛生処置が早くも分娩過程で始まっている。その結果、異なるミクロフローラが乳児で確立される。例えば大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）及びラクトバチルスを保菌する代わりに、新生児には黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）及び他の皮膚細菌が定着していることの方が多い。
【００３７】
本発明の発明者らは、皮膚細菌の異常増殖は乳児の免疫系を過剰に活性化して、過剰に活性化された腸運動性及びその結果として仙痛を引き起こすが、ＩＬ−１０産生を促進する能力を有するＬ．ロイテリＤＳＭ １７９３８などのさらに多数の特定の消化管細菌は、ＴＲ系の成熟、すなわちＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＴＲ細胞の増殖をもたらすという予想外の発見をした。ＣＤ４＋ＣＤ２５＋細胞の上方制御は穏やかな腸運動性をもたらし、その結果として仙痛を有する乳児に有益な効果をもたらす。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００３８】
これらの所見のために、非病原性細菌菌株をＩＬ−１０増加特性に関して選択した。そして意外にもこの菌株のこの特性が、乳児仙痛の減少と相関することを見いだした。したがって本発明は、仙痛の予防及び／又は治療用の医薬品の製造のためのＬ．ロイテリＤＳＭ １７９３８の使用並びに同じようにして選択された他の菌株の使用に関する。
【００３９】
本発明のさらなる目的は、ヒトを含む動物へ投与するための、前記菌株を含む製品を提供することである。他の目的及び効果は、下記の開示及び添付の特許請求の範囲からより明らかとなるであろう。
【課題を解決するための手段】
【００４０】
本発明は、本明細書において、仙痛の予防及び／又は治療のために、ＩＬ−１０の産生を促進する能力、その結果としてのＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＴＲ細胞の増殖に関して選択された乳酸菌の特定の菌株、このような菌株を選択する方法、及びこのような菌株を含む製品を提供する。
【００４１】
本発明のその他の目的と特徴は、下記の開示及び添付の特許請求の範囲からより明らかとなるであろう。
【図面の簡単な説明】
【００４２】
【図１】ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＴＲ細胞の発生促進における、特定の選択された乳酸菌菌株に対する提案された役割を示す図である。
【図２ａ】棒グラフ形式でのＤＣ細胞によるＩＬ１０産生を示す図である。
【図２ｂ】表形式でのＤＣ細胞によるＩＬ１０産生を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００４３】
消化管での皮膚細菌のコロニー形成及びＴＲ−細胞の欠乏は、新生乳児の免疫系を過剰に活性化して、過剰に活性化された腸運動性及びその結果として仙痛を引き起こす。ＩＬ−１０の産生を促進する能力を有するＬ．ロイテリＤＳＭ １７９３８などの多数の特定の消化管細菌細胞は、ＴＲ系の成熟、すなわちＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＴＲ細胞の増殖をもたらす。その他のラクトバチルス菌株がＩＬ−１０の産生を誘導することが、多くの研究者、例えばＲａｕｔａｖａら（上記）により既に報告された。ＣＤ４＋ＣＤ２５＋細胞の上方制御は穏やかな腸運動性をもたらし、その結果として仙痛に有益な効果をもたらす。意外にも、サイトカインＩＬ−１０のレベルの増加をもたらす菌株は、平均的号泣時間を低下させることができる同じ菌株であることが見いだされた（実施例２）。
【００４４】
本明細書において、本発明は、Ｌ．ロイテリＤＳＭ １７９３８を含む仙痛を低減する能力に関して選択した乳酸菌の菌株を含む。食品などの製品、栄養的添加物及び処方、完全な細胞若しくはこれらの菌株に由来する成分を含む薬剤又は医療用具は、当技術分野で知られるように製剤化することができ、知られているように摂取可能な支持体に加えてラクトバチルス菌株、又はこの菌株に由来する成分を一般に含んでいる。
【００４５】
ｉｎ ｖｉｔｒｏでの研究を、単球由来のＤＣでのＩＬ−１０の産生を促進し、それによりＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＴＲ細胞の発生を誘導する能力に関してラクトバチルスの菌株を選択する方法として使用することができる（実施例１）。
【００４６】
データは、特定の菌株Ｌ．ロイテリＡＴＣＣ ５５７３０及びＬ．ロイテリＤＳＭ １７９３８によるＩＬ−１０の効果的な刺激の指標を開示し、この調節は後期対数増殖期／定常増殖期の間にこれらの２つの特定の菌株によって増殖培地に放出される物質により媒介される。これに反してＬ．ロイテリの他の２つの菌株は、関連するＩＬ−１０産生を促進することができなかった。
【００４７】
仙痛の予防又は治療のために選択された菌株の臨床的な適切さを確かめるために、乳児仙痛の診断を受けた母乳哺育児においてさらに研究を実施する。
【００４８】
本発明の特徴は、以下の実施例を参照することによりさらに明確に理解されるが、本発明を限定するものとこれらを解釈すべきではない。
【実施例】
【００４９】
（実施例１）
単球由来のＤＣによりＩＬ−１０の発現を促進するプロバイオティクス菌株の能力の研究：
未成熟ＤＣは、１０％ ＦＣＳ ＨｙＣｌｏｎｅ、Ｌｏｇａｎ、ＵＴ）、組み換え型のヒト（ｒｈ）ＧＭ−ＣＳＦ（５００ Ｕ／ｍｌ；Ｓｃｈｅｒｉｎｇ−Ｐｌｏｕｇｈ、Ｕｄｅｎ、Ｔｈｅ Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）、及びｒｈＩＬ−４（２５０ Ｕ／ｍｌ；Ｐｈａｒｍａ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅ Ｈａｎｎｏｖｅｒ、Ｈａｎｎｏｖｅｒ、Ｇｅｒｍａｎｙ）を含むＩＭＤＭ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｐａｉｓｌｅｙ、Ｕ．Ｋ．）で培養された末梢血単球から生成される（Ｈｉｌｋｅｎｓ，Ｃ．Ｍ．Ｕ．，Ｐ．Ｋａｌｉｎｓｋｉ，Ｍ．ｄｅ Ｂｏｅｒ，ａｎｄ Ｋａｐｓｅｎｂｅｒｇ．１９９７．ヒト樹状細胞は、ナイーヴなＴヘルパー細胞のＴｈ１表現型への発生を指令するために外来性のインターロイキン−１２誘導性因子を必要とする（Ｈｕｍａｎ ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌｓ ｒｅｑｕｉｒｅ ｅｘｏｇｅｎｏｕｓ ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−１２−ｉｎｄｕｃｉｎｇ ｆａｃｔｏｒｓ ｔｏ ｄｉｒｅｃｔ ｔｈｅ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ｎａｉｖｅ Ｔ−ｈｅｌｐｅｒ ｃｅｌｌｓ ｔｏｗａｒｄ ｔｈｅ Ｔｈ１ ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ）。Ｂｌｏｏｄ ９０：１９２０）（Ｋａｌｉｎｓｋｉ，Ｐ．，Ｊ．Ｈ．Ｎ．Ｓｃｈｕｉｔｅｍａｋｅｒ，Ｃ．Ｍ．Ｕ．Ｈｉｌｋｅｎｓ，Ｅ．Ａ．Ｗｉｅｒｅｎｇａ，ａｎｄ Ｍ．Ｌ．Ｋａｐｓｅｎｂｅｒｇ．１９９９。樹状細胞の最終的な成熟は、ＩＦＮ−γ及び細菌のＩＬ−１２インデューサーに対する反応性の減少を伴い、Ｔｈ細胞との相互作用の間にＩＬ−１２を産生する熟成した樹状細胞の能力の減少を伴う（Ｆｉｎａｌ ｍａｔｕｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌｓ ｉｓ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｉｍｐａｉｒｅｄ ｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅｎｅｓｓ ｔｏ ＩＦＮ−γ ａｎｄ ｔｏ ｂａｃｔｅｒｉａｌ ＩＬ−１２ ｉｎｄｕｃｅｒｓ：ｄｅｃｒｅａｓｅｄ ａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ｍａｔｕｒｅ ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌｓ ｔｏ ｐｒｏｄｕｃｅ ＩＬ−１２ ｄｕｒｉｎｇ ｔｈｅ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ ｗｉｔｈ Ｔｈ ｃｅｌｌｓ）。Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６２：３２３１）。
【００５０】
この実施例で試験される菌株は、ＡＴＣＣ（Ｍａｎａｓｓａｓ、ＶＡ、ＵＳＡ及びＤＳＭＺ、Ｂｒａｕｎｓｃｈｗｅｉｇ、Ｇｅｒｍａｎｙ）から入手可能なラクトバチルス・ロイテリＡＴＣＣ ５５７３０，ラクトバチルス・ロイテリＤＳＭ １７９３８，ラクトバチルス・ロイテリＡＴＣＣ ＰＴＡ ４６６０及びラクトバチルス・ロイテリＡＴＣＣ ＰＴＡ ４９６４である。菌株は、６．２５％ヒツジ血液を含むコロンビア寒天培地（Ｏｘｏｉｄ、Ｂａｓｉｎｇｓｔｏｋｅ、Ｕｎｉｔｅｄ Ｋｉｎｇｄｏｍ）で培養される。ラクトバチルスは５％ＣＯ２雰囲気中で３７℃で培養する。３日後に、細菌数を６２０ｎｍでの吸光度（ＯＤ６２０）を測定することにより決定する。通常は、ＯＤ６２０の０．３５が全ての試験菌株について１×１０８コロニー形成ユニット（ｃｆｕ）に対応した。
【００５１】
６日目に、成熟因子（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ、Ｒｏｃｋｙ Ｈｉｌｌ、ＮＪ．から購入したサイトカイン）として全てを一緒に使用したサイトカインＩＬ−１β（２５ｎｇ／ｍＬ）及びＴＮＦ−α（５０ｎｇ／ｍＬ）の組合せの存在下で、ＬＰＳ（大腸菌；Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｓｔ Ｌｏｕｉｓ、Ｍｏ）並びに試験ラクトバチルスによって未成熟ＤＣの成熟を誘導する。
【００５２】
熟成したＤＣによるＩＬ−１２、ＩＬ−１０及びＩＬ−６サイトカイン産生を、Ｖｉｅｉｒａ ＰＬらによる記載のようにＣＤ４０リガンド発現マウスプラズマ細胞腫細胞（Ｊ５５８）を用いる２４時間の刺激によって測定する（Ｖｉｅｉｒａ ＰＬ，ｄｅ Ｊｏｎｇ ＥＣ，Ｗｉｅｒｅｎｇａ ＥＡ，Ｋａｐｓｅｎｂｅｒｇ ＭＬ，Ｋａｌｉｎｓｋｉ Ｐ．骨髄系樹状細胞におけるＴｈ１誘導能力の発生には、環境的指示を必要とする（Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ Ｔｈ１ −ｉｎｄｕｃｉｎｇ ｃａｐａｃｉｔｙ ｉｎ ｍｙｅｌｏｉｄ ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌｓ ｒｅｑｕｉｒｅｓ ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ ｉｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ）。Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２０００；１６４：４５０７〜１２）。上清を２４時間後に採取して、ＩＬ−１０の濃度をＥＬＩＳＡにより測定する。結果は図２を参照のこと。結果から分かるように、ＤＣによるＩＬ−１０産生を促進する菌株の能力に関して異なるラクトバチルス菌株による影響にかなりの差が存在する。
【００５３】
（実施例２）
乳児仙痛の治療において、選択されたプロバイオティクス菌株対シメチコン
乳児仙痛の診断を受けた母乳哺育児が、小児及び青年期科学科（Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｐｅｄｉａｔｒｉｃ ａｎｄ Ａｄｏｌｅｓｃｅｎｃｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ）（Ｄｒｏｔｔｎｉｎｇ Ｓｉｌｖｉａｓ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｈｏｓｐｉｔａｌ、Ｇｏｔｅｂｏｒｇ）で募集された。２５００と４０００ｇの間の出生時体重を有する適切な在胎月齢で、Ｗｅｓｓｅｌのクライテリアに当てはまり且つ登録前６±１日に生じた仙痛症状を有し、生後２１〜９０日の患者が、この研究への参加に考慮される（Ｗｅｓｓｅｌ ＭＡ，Ｃｏｂｂ ＪＣ，Ｊａｃｋｓｏｎ ＥＢ，Ｈａｒｒｉｓ ＧＳ，Ｄｅｔｗｉｌｅｒ ＡＣ．時には、「仙痛」と呼ばれている乳児期におけるパロキシスマルファッシング（Ｐａｒｏｘｉｓｍａｌ ｆｕｓｓｉｎｇ）（Ｐａｒｏｘｉｓｍａｌ ｆｕｓｓｉｎｇ ｉｎ ｉｎｆａｎｃｙ，ｓｏｍｅｔｉｍｅｓ ｃａｌｌｅｄ “ｃｏｌｉｃ”）。Ｐｅｄｉａｔｒｉｃｓ １９５４；１４：４２１〜３５）。参加した全ての乳児には、やはりプロバイオティクスに対する反応に影響を与え得る食事の変動による腸内ミクロフローラの変動を減らすために、全て母乳だけを与える。乳児が慢性疾患若しくは消化器障害の臨床所見を有する場合、又は募集に先立つ１週間に乳児に抗生物質若しくはプロバイオティクスのいずれかを投与された場合には、乳児は除外される。
【００５４】
この研究において、仙痛の乳児は以下の治療におけるプロバイオティクス又はシメチコンを投与されるためにランダム化される。すなわち、
（Ｐ１）ラクトバチルス・ロイテリ株ＡＴＣＣ ５５７３０（ＳＤ２１１２とも呼ばれる）、
（Ｐ２）ラクトバチルス・ロイテリ株ＤＳＭ １７９３８（２００６年２月６日にブダペスト条約に基づいてＤＳＭＺ−Ｄｅｕｔｓｃｈｅ Ｓａｍｍｌｕｎｇ ｖｏｎ Ｍｉｋｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｎ ｕｎｄ Ｚｅｌｌｋｕｌｔｕｒｅｎ ＧｍｂＨ（Ｍａｓｃｈｅｒｏｄｅｒ Ｗｅｇ ｌ ｂ、Ｄ−３８１２４ Ｂｒａｕｎｓｃｈｗｅｉｇ）に寄託された）
（Ｐ３）ラクトバチルス・ロイテリ株ＡＴＣＣ ＰＴＡ ４６６０ 及び
（Ｓ）シメチコンである。
【００５５】
Ｌ．ロイテリは、２８日間、１日につき１回、授乳後３０分に、市販のＭＣＴ油（中鎖脂肪酸トリグリセリド油）懸濁液５滴中の１０８コロニー形成単位（ＣＦＵ）の用量で投与される。ＭＣＴ油は天然に存在しており、最も豊富な供給源はヤシ油である。ほとんどのＭＣＴ油は、ヤシ油から精製される。ＭＣＴ油は、無味で低粘性の透明な薄い色の液体である。この油懸濁液は、２〜８℃で２１ヵ月間安定である（製造業者（ＢｉｏＧａｉａ ＡＢ、Ｓｔｏｃｋｈｏｌｍ、Ｓｗｅｄｅｎ）によって実証されたように）、（ＭＣＴ油の他の製造業者は、Ａｋｏｍｅｄ Ｒ、ｂｙ Ｋａｒｌｓｈａｍｎｓ ＡＢ、Ｋａｒｌｓｈａｍｎ、Ｓｗｅｄｅｎである）。研究の間、親は使用しないときは冷蔵庫で製品を保管するように指示されている。シメチコン（Ｓ）は、１日に２回、２８日間、授乳後に市販溶液（Ｍｙｌｉｃｏｎ Ｉｎｆａｎｔｓ Ｇａｓ Ｒｅｌｉｅｆ Ｄｒｏｐｓ、Ｊ＆Ｊ、７０５０ Ｃａｍｐ Ｈｉｌｌ Ｒｄ．、Ｆｏｒｔ Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ、Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ、１９０３４−２２１０、ＵＳＡ）の３ｍＬ中６０ｍｇ／日の用量で投与された。登録時に全ての母親は報告されるような牛乳が含まれていない食べ物に従うよう要請された。すなわち、ミルク、ヨーグルト、新鮮な臭いの強いチーズ、クリーム、バター、ビスケットを避けること。食事の順守は、全治療期間続けた食事日記で監視される。７日、１４日、２１日及び２８日目に、１つの研究でこの食事のコンプライアンスを調べた。
【００５６】
実施施設の倫理委員会は、研究プロトコルを承認し、乳児は文書によるインフォームドコンセントが親から得られた後に初めてこの研究に登録される。
【００５７】
追跡訪問
小児科医が初めて乳児を診察した日を、１日目として定義する。この時にそれぞれの乳児は診察を受け、分娩のタイプ、出生時体重並びに在胎月齢、消化器疾患及びアトピーの家族歴に関する背景データを得るために親は面接を受けた。特に、乳児がアトピー性湿疹、アレルギー性鼻炎若しくは喘息を有する１人又は複数の家族（母親、父親及び／又は年長の兄弟姉妹）を有する場合、最後の１つはポジティブとみなされる。さらに研究期間でのアトピー性疾患のあらゆる徴候及び症状が記録された。また親も、募集（０日目）以後の毎日の平均号泣時間及び仙痛症状の回数についてデータを記録するように要請された。医師は研究群のいずれかに子供を無作為割付けした。研究製品の投与を１日目に始めた。
【００５８】
親には研究に関する文書による情報が与えられ、体系化した日記を使用して０日目から開始して２８日目まで、慰めることができない号泣症状の毎日の回数及びその持続時間、便の硬さ及び回数並びに何らかの観察された副作用（便秘、嘔吐、皮膚反応など）を記録するように求められる。全ての親が、同一のやり方で号泣時間を記載したこと及び乳児が薬物を適切に与えられたことを確認するために、親を助けるために研究者の１人が何時も電話で対応できる。
【００５９】
それぞれの患者は、１日、７日、１４日、２１日及び２８日目に同じ小児科医によって再検査される。
【００６０】
結果
登録された母乳栄養仙痛乳児１２０人のうち、３０人をＬ．ロイテリＡＴＣＣ ５５７３０を用いる治療に無作為割付けし（Ｐ１）、３０人をＬ．ロイテリＤＳＭ １７９３８用いる治療に無作為割付けし（Ｐ２）、３０人をＬ．ロイテリＡＴＣＣ ＰＴＡ ４６６０を用いる治療に無作為割付けし（Ｐ３）、３０人をシメチコンを用いる治療に無作為割付けする（Ｓ）。本治験に関連する何らかの副作用のために治験から脱落した乳児はいない。いずれの群も、年齢、出生時体重、性別、分娩のタイプ、アトピー又は消化器疾患の家族歴及び喫煙に対する曝露に関して類似している。
【００６１】
１日当たりの平均号泣時間は、０日及び１日目においては投与群間で類似している。Ｌ．ロイテリＡＴＣＣ ５５７３０（Ｐ１）及びＤＳＭ １７９３８（Ｐ２）を投与されている乳児は、ＡＴＣＣ ＰＴＡ ４６６０及びシメチコン（Ｓ）で治療された乳児に比べて、７日目までに毎日の号泣時間の有意な減少を示した。１４日、２１日及び２８日目で、号泣時間は４つの投与群間で有意に異なる。２８日目でこの研究の開始からの終わりまでの１日当たりの平均号泣時間における（Ｐ１）と（Ｓ）との間の差は８２分であり、この研究の開始からの終わりまでの１日当たりの平均号泣時間における（Ｐ２）と（Ｓ）との間の差は８３分である（表１）。この結果から分かるように、試験製品の投与前、この４つの投与群はかなり同等である。既に７日後に、２つのその他の代替物に対してＬ．ロイテリ株ＡＴＣＣ ５５７３０ 及びＤＳＭ １７９３８を優勢にする明らかな差が存在する。２８日後にこの差はさらに大きくなった。
表１．Ｌ．ロイテリ及びとシメチコン群における号泣時間（１日当たりの平均分）
【表１】
【００６２】
本発明について特定の実施例に関して説明してきたが、多くの変形、修正、及び実施形態が可能であり、したがって全てのそのような多くの変形、修正及び実施形態は本発明の趣旨及び範囲内にあるとみなされるべきであることが理解されよう。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、本明細書において、仙痛の予防及び／又は治療のために、サイトカインＩＬ−１０のレベルを増加させる乳酸菌の能力に関して選択された乳酸菌の特定の菌株、このような菌株を選択する方法、及びこのような菌株を含む製品を提供する。
【背景技術】
【０００２】
罹患率及び苦痛の両方に関して顕著であるにもかかわらず、乳児仙痛の性質及び原因はまだよく分かっていない。この病態の母親の説明では、乳児は昼間は機嫌がよいが、不機嫌な顔をし始め、顔が赤くなり、足を突っ張り、泣き叫び、約２〜２０分間泣き続け、その後この発作が急に終わるというものである。病態を記載するために用いられた用語にさえ論争が生じている。これらの用語には、「乳児仙痛」、痛みが主として夕方に限られるので「夕方仙痛」、及び痛みは出生から約３ヵ月後に消失するという名目で「３ヵ月仙痛」が含まれる。（Ｉｌｌｉｎｇｗｏｒｔｈ ＲＳ．母乳哺育での問題点（Ｄｉｆｆｉｃｕｌｔｉｅｓ ｉｎ ｂｒｅａｓｔｆｅｅｄｉｎｇ）。Ｒｏｎａｌｄ Ｓ．Ｉｌｌｉｎｇｗｏｒｔｈ編、Ｔｈｅ Ｎｏｒｍａｌ Ｃｈｉｌｄ。第１０版。Ｈａｒｃｏｕｒｔ（Ｉｎｄｉａ）Ｐｖｔ Ｌｔｄ．１９９７；３９〜４４）。別の著者は、別の定義を用いていた。仙痛は、少なくとも３週間の期間で、１週間当たり３日かそれ以上の間の、１日当たり３時間かそれ以上の間の号泣の発作であるというＷｅｓｓｅｌｓの定義が、文献では主に受け入れられている（Ｓｏｎｄｅｒｇａａｒｄ Ｃ，Ｓｋａｊａａ Ｅ，Ｈｅｎｒｉｋｓｅｎ ＴＢ．胎児成長及び乳児仙痛（Ｆｅｔａｌ ｇｒｏｗｔｈ ａｎｄ ｉｎｆａｎｔｉｌｅ ｃｏｌｉｃ）。Ａｒｃｈ Ｄｉｓ Ｃｈｉｌｄ Ｆｅｔａｌ−Ｎｅｏｎａｔａｌ Ｅｄ ２０００；８３（１）：Ｆ４４〜４７）。これまでのところ、考えられる主要な原因因子が３つのグループに分けられている。すなわち心理社会的障害、消化管障害及び神経発生的障害である。
【０００３】
心理社会的因子には、正常号泣の変形、変則的育児の行動的影響及び親と乳児との相互関係における問題の発現が含まれる。
【０００４】
ひとしきり泣く間の乳児の肢位及びしかめ面のため、消化管障害は仙痛と関係している。消化管因子を以下に簡潔に概説する。
【０００５】
哺乳瓶授乳で育てる様な不適当な授乳技術、水平位置での授乳及び授乳後のげっぷの欠如が原因因子として考えられている。最初の６ヵ月間の母乳哺育が、唯一の保護因子であることが見いだされた。乳児仙痛の危険は、母乳哺育でない乳児の間で１．８６倍高い（Ｓａａｖｅｄｒａ ＭＡ，Ｄａｃｏｓｔａ ＪＳ，Ｇａｒｃｉａｓ Ｇ，Ｈｏｒｔａ ＢＬ，Ｔｏｍａｓｉ Ｅ，Ｍｅｎｄｏｃａ Ｒ．乳児仙痛発症率及び関連する危険因子：コホート研究（Ｉｎｆａｎｔｉｌｅ ｃｏｌｉｃ ｉｎｃｉｄｅｎｃｅ ａｎｄ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｒｉｓｋ ｆａｃｔｏｒｓ：ａ ｃｏｈｏｒｔ ｓｔｕｄｙ）。Ｐｅｄｉａｔｒ（Ｒｉｏ Ｊ）２００３；７９（２）：１１５〜１２２）。Ｌｏｔｈｅらは、仙痛は牛乳ホエータンパク質に対する感受性に由来することを示した（Ｌｏｔｈｅ Ｌ，Ｌｉｎｄｂｅｒｇ Ｔ．仙痛調合乳で哺育された乳児において、牛乳ホエータンパク質は乳児仙痛の症状を誘発する：二重盲検交叉研究（Ｃｏｗ’ｓ ｍｉｌｋ ｗｈｅｙ ｐｒｏｔｅｉｎ ｅｌｉｃｉｔｓ ｓｙｍｐｔｏｍｓ ｏｆ ｉｎｆａｎｔｉｌｅ ｃｏｌｉｃ ｉｎ ｃｏｌｉｃｋｙ ｆｏｒｍｕｌａ−ｆｅｄ ｉｎｆａｎｔｓ：Ａ ｄｏｕｂｌｅ−ｂｌｉｎｄ ｃｒｏｓｓ ｏｖｅｒ ｓｔｕｄｙ）Ｐｅｄｉａｔｒｉｃｓ １９８９；８３：２６２）。
【０００６】
最近の研究で、乳児仙痛の少数の症例でのみ、食品に対する過敏性が原因であると定義され得ることが結論づけられた（Ｈｉｌｌ ＤＪ，Ｈｏｓｋｉｎｇ ＣＳ．乳児仙痛及び食品過敏性（Ｉｎｆａｎｔｉｌｅ ｃｏｌｉｃ ａｎｄ ｆｏｏｄ ｈｙｐｅｒｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ）。Ｊ Ｐｅｄｉａｔｒ Ｇａｓｔｒｅｎｔｅｒｏｌ Ｎｕｔｒ ２０００；３０（Ｓｕｐｐｌ）：Ｓ６７〜７６）。最近Ｂｕｃｈａｎａｎは、乳児仙痛における低アレルギー性ミルクの治験は、十分に強固な証拠で裏づけられていないことを示した（Ｂｕｃｈａｎａｎ Ｐ．乳児仙痛に対する治療効果。低アレルギー性ミルクの治験は、強い十分な証拠によって裏づけられていない（Ｅｆｆｅｃｔｉｖｅｎｅｓｓ ｏｆ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｆｏｒ ｉｎｆａｎｔｉｌｅ ｃｏｌｉｃ．Ｔｒｉａｌ ｏｆ ｈｙｐｏａｌｌｅｒｇｅｎｉｃ ｍｉｌｋ ｉｓ ｎｏｔ ｓｕｐｐｏｒｔｅｄ ｂｙ ｓｔｒｏｎｇ ｅｎｏｕｇｈ ｅｖｉｄｅｎｃｅ）。ＢＭＪ １９９８；３１７（７１７０）：１４５１〜１４５２）。乳児仙痛を有する乳児は、アレルギー性疾患を来たす可能性が高いと考えられている。しかし最近の研究では、アトピーのマーカー、アレルギー性鼻炎、喘息、喘鳴及び最大流速変動性は、乳児仙痛を有するか又は有していない乳児で同程度であることが示されている（Ｃａｓｔｒｏ− Ｒｏｄｒｉｇｕｅｚ ＪＡ，Ｓｔｅｒｎ ＤＡ，Ｈａｌｏｎｅｎ Ｍ，Ｗｒｉｇｈｔ ＡＬ，Ｈｏｌｂｅｒｇ ＣＪら、乳児仙痛と喘息／アトピーの間の関係：任意抽出集団のプロスペクティブ試験（Ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ ｂｅｔｗｅｅｎ ｉｎｆａｎｔｉｌｅ ｃｏｌｉｃ ａｎｄ Ａｓｔｈｍａ／ａｔｏｐｙ：Ａ ｐｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅ ｓｔｕｄｙ ｉｎ ａｎ ｕｎｓｅｌｅｃｔｅｄ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ）。Ｐｅｄｉａｔｒｉｃｓ ２００１；１０８（４）：８７８〜８８２）。
【０００７】
水素呼気テストに基づくラクトース吸収不全が、著者らによって報告された（Ｈｙａｍｓ Ｊ，Ｇｅｅｒｓｔａｍａ Ｍ，Ｅｔｉｅｎｎｅ Ｎ，Ｔｒｅｅｍ Ｗ．仙痛を有する乳児における結腸水素産生（Ｃｏｌｏｎｉｃ ｈｙｄｒｏｇｅｎ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｉｎ ｉｎｆａｎｔｓ ｗｉｔｈ ｃｏｌｉｃ）。Ｊ Ｐｅｄｉａｔｒ １９８９；１１５：５９２）。乳児仙痛を有するか又は有していない乳児間で、糞便水素濃度に差は見いだされなかった。しかしより高いメタンレベルを産生している乳児は、仙痛の減少を呈することが見いだされ、仙痛の緩和におけるメタン産生の役割を示唆していた（Ｂｅｌｓｏｎ Ａ，Ｓｈｅｔｔｙ ＡＫ，Ｙｏｒｇｉｎ ＰＤ，Ｂｕｊａｎｏｖｅｒ Ｙ，Ｐｅｌｅｄ Ｙ，Ｄａｒ ＭＨ，Ｒｉａｆ Ｓ．乳児仙痛症候群を伴う場合と伴わない場合の、乳児における結腸の水素除去及びメタン産生（Ｃｏｌｏｎｉｃ ｈｙｄｒｏｇｅｎ ｅｌｉｍｉｎａｔｉｏｎ ａｎｄ ｍｅｔｈａｎｅ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｉｎ ｉｎｆａｎｔｓ ｗｉｔｈ ａｎｄ ｗｉｔｈｏｕｔ ｉｎｆａｎｔｉｌｅ ｃｏｌｉｃ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）。Ｄｉｇ Ｄｉｓ Ｓｃｉ ２００３；４８（９）：１７６２〜１７６６）。
【０００８】
モチリンなどの消化管（ＧＩＴ）ホルモンである血管作動性腸管ペプチドが、仙痛を有する乳児で異常に高いことが示された。Ｌｏｔｈｅらは、乳児仙痛における異常なＧＩＴ生理を示唆する、その後に仙痛を発症した乳児において出生当日からの高いレベルを示した。（Ｌｏｔｈｅ Ｌ，Ｉｖａｓｓｓｏｎ ＳＡ，Ｅｋｍａｎ Ｒ，Ｌｉｎｄｂｅｒｇ Ｔ．モチリンと乳児仙痛：プロスペクティブ研究（Ｍｏｔｉｌｉｎ ａｎｄ ｉｎｆａｎｔｉｌｅ ｃｏｌｉｃ：Ａ ｐｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅ ｓｔｕｄｙ）。Ａｃｔａ Ｐｅｄｉａｔｒ Ｓｃａｎｄ １９９０；７９（４）：４１０〜４１６）。
【０００９】
提案された神経発生的障害は、腹部痙攣及び仙痛がぜん動亢進の結果であり得ることを示唆している。この理論は、抗コリン作用薬の使用が仙痛症状を低下させるという証拠により裏づけられている（Ｇｕｐｔａ ＳＫ．仙痛は、消化管障害であるか？（Ｉｓ ｃｏｌｉｃ ａ ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｄｉｓｏｒｄｅｒ？）Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｐｅｄｉａｔｒ ２００２；１４：５８８〜９２）。
【００１０】
大部分の乳児は、生後４ヵ月の年齢までに仙痛から抜け出すという事実は、仙痛の神経発生的原因に支持を与えるものである（Ｂａｒｒ ＲＧ．乳児における仙痛及び号泣症候群（Ｃｏｌｉｃ ａｎｄ ｃｒｙｉｎｇ ｓｙｎｄｒｏｍｅｓ ｉｎ ｉｎｆａｎｔｓ）。Ｐｅｄｉａｔｒｉｃｓ １９９８；１０２（５ ｓｕｐｐｌ Ｅ）：１２８２〜６）。
【００１１】
一般に容認された定義によるプロバイオティクスは、宿主動物の腸内菌叢のバランスを改善することによって、宿主動物に有益に作用する生菌栄養補給補助食品である。本来は家畜用の動物飼料の補充を意味するにもかかわらず、この定義はヒトに容易に適用可能である。ヒトによるプロバイオティクスの主な消費は、ラクトバチルス（ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｉ）及びビフィドバクテリア（ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉａ）の腸内種属を含む酪農に基づく食品の形態である。プロバイオティクスの消費は、腸内ミクロフローラの構成に影響を及ぼすことがこの定義に内在する。
【００１２】
腸内生態系に及ぼすプロバイオティクスのこの効果は、使用者に何らかの有利な形で影響を与えることが提案されている。以下を含むプロバイオティクスの作用を介して腸内環境に対する変化から生じる多くの潜在的利点が実証されている。すなわち、特に腸の感染症に対する抵抗性の増加、下痢期間の減少、血圧の低下、血清コレステロール濃度の低下、アレルギーの減衰、末梢血白血球によるファゴサイトーシスの刺激、サイトカイン遺伝子発現の調節、アジュバント効果、腫瘍の退縮、及び発癌物質又は発癌補助物質産生の減少である。
【００１３】
Ｃｈｒｉｓｔｅｎｓｅｎらは、プロバイオティクス・ラクトバチルスは、樹状細胞（ＤＣ）のＴｈ１／Ｔｈ２／Ｔｈ３／Ｔｒ１／Ｔｒｅｇ促進能力を調節することにより、その免疫調節性効果を及ぼしたことを報告した最初の一グループであった。彼らはマウスのＤＣをラクトバチルス・ロイテリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｅｕｔｅｒｉ）を含む異なるラクトバチルス属種の共培養にさらした場合、これらはサイトカインＩｌ−６、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２及びＴＮＦ−αの産生、並びにＭＨＣクラスＩＩ及びＣＤ８６表面マーカーの上方制御について濃度依存的に特異的に調節されることを示した。全てのラクトバチルスは、ＤＣの成熟を示す表面ＭＨＣクラスＩＩ及びＣＤ８６マーカーを上方制御した。特にこれらの研究で顕著なのは、Ｌ．ロイテリ（Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉ）（１２２４６株）は、弱いＩＬ−１２インデューサーであったが、Ｌ．ジョンソニイ（Ｌ．ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）又はＬ．カゼイ（Ｌ．ｃａｓｅｉ）と共培養した場合、Ｌ．ロイテリは炎症誘発性サイトカインシグナルＩＬ−１２、ＩＬ−６及びＴＮＦ−ａの産生を特異的に阻害し、これらの生産は後者の２つの種によって促進されたことであった。ＩＬ−１０産生は、これらの条件下では変わらなかった。
【００１４】
これらの結果は、「Ｌ．ロイテリは、「危険信号（ｄａｎｇｅｒ ｓｉｇｎａｌ）」を有していない抗原に対する寛容性を促進する腸内樹状細胞産生の環境調節に関与する可能性があるが、同時にＬＰＳ様の危険信号を介して認識される病原体に対して応答する能力を完全に保っている」、「Ｌ．ロイテリ は、ＩＬ−１２及びＴＮＦ−α（及びＩＬ−６）の産生の下方制御に有効な有望で見事に標的化された治療である可能性があるが、抗炎症性ＩＬ−１０を誘導し、したがって炎症誘発性腸内サイトカイン環境とバランスをとる代替の治療的方法を示す」、したがって「摂取したプロバイオティクスを含む消化管のミクロフローラの消費に従って消化管のＴｈ１／Ｔｈ２／Ｔｈ３を駆動する能力が調節される可能性が存在する。」という彼らの結論をもたらした。（Ｃｈｒｉｓｔｅｎｓｅｎ ＨＲ，Ｆｒｏｋｉａｅｒ Ｈ，Ｐｅｓｔｋａ ＪＪ（２００２）マウスの樹状細胞において、ラクトバチルスは特異的にサイトカイン及び成熟表面マーカーの発現を調節する（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｉ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙ ｍｏｄｕｌａｔｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ ａｎｄ ｍａｔｕｒａｔｉｏｎ ｓｕｒｆａｃｅ ｍａｒｋｅｒｓ ｉｎ ｍｕｒｉｎｅ ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌｓ）。Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １６８ １７１〜１７８）。
【００１５】
Ｓｍｉｔｓらはこれらの観察結果を拡張し、Ｌ．ロイテリがＤＣをプライミングしてＴ調節（ＴＲ）細胞産生を刺激する能力を有することを示した。彼らは、ｉｎ ｖｉｔｒｏでヒト単球由来ＤＣと共培養した３つの異なるラクトバチルス属種を用いた。Ｌ．プランタルム（Ｌ．ｐｌａｎｔａｒｕｍ）株でなく、ヒトＬ．ロイテリ株（ＡＴＣＣ ５３６０９）及びＬ．カゼイの２つのラクトバチルスは、これらのＤＣをプライミングしてＴＲ細胞の発生を刺激する。これらのＴＲ細胞は、ＩＬ−１０のレベルの増加を生じることが示され、ＩＬ−１０依存様式でバイスタンダーＴ細胞（ｂｙｓｔａｎｄｅｒ Ｔ ｃｅｌｌ）の増殖を阻害することができた（Ｓｍｉｔｓ ＨＨ，Ｅｎｇｅｒｉｎｇ Ａ，ｖａｎ ｄｅｒ Ｋｌｅｉｊ Ｄ，ｄｅ Ｊｏｎｇ ＥＣ，Ｓｃｈｉｐｐｅｒ Ｋ，ｖａｎ Ｃａｐｅｌ ＴＭＭ，Ｚａａｔ ＢＡＪ．Ｙａｚｄａｎｂａｋｈｓｈ Ｍ，Ｗｉｅｒｅｎｇａ ＥＡ，ｖａｎ Ｋｏｏｙｋ Ｙ，Ｋａｐｓｅｎｂｅｒｇ Ｌ（２００５）選択的プロバイオティクス細菌は、樹状細胞特異的細胞間接着分子３−グラビングノンインテグリンを介して樹状細胞機能を調節することにより、ｉｎ ｖｉｔｒｏでＩＬ−１０産生調節Ｔ細胞を誘導する（Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ｐｒｏｂｉｏｔｉｃ ｂａｃｔｅｒｉａ ｉｎｄｕｃｅ ＩＬ−１０−ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ Ｔ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｂｙ ｍｏｄｕｌａｔｉｎｇ ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｔｈｒｏｕｇｈ ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｉｎｔｅｒｃｅｌｌｕｌａｒ ａｄｈｅｓｉｏｎ ｍｏｌｅｃｕｌｅ ３−ｇｒａｂｂｉｎｇ ｎｏｎｉｎｔｅｇｒｉｎ）。Ｊ Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ １１５１ １２６０〜１２６７）。
【００１６】
経口投与したＬ．ロイテリの宿主に及ぼす効果に関する最初の１つの証拠それ自体は、ニワトリ回腸で観察された増加したＣＤ４＋／ＣＤ８＋Ｔ細胞比率であった（Ｗａｌｔｅｒ Ｊ．Ｄｏｂｒｏｇｏｓｚ，ＮＵＴＲＡｆｏｏｄｓ ２００５ ４（２／３）１５〜２８）。Ｖａｌｅｕｒらは、最近この観察結果を拡張してヒト回腸を含めた。彼らは、（ａ）ヒト消化管全体にわたる個々のヒト特異的Ｌ．ロイテリＡＴＣＣ ５５７３０細胞の分布及び（ｂ）特に腸の回腸部位でのＣＤ４＋Ｔ細胞の動員及び／又は増殖におけるＬ．ロイテリＡＴＣＣ５５７３０の明白な関与を示す、ヒト対象における直接的なｉｎ ｓｉｔｕでの証拠を得た。彼らは、「Ｌ．ロイテリの投与は、ヒト上皮へのＣＤ４＋Ｔヘルパー細胞の動員を誘発した。この動員は、ヒトでこのＬ．ロイテリ株のプロバイオティクス効果を説明する１つの要素であるかもしれない」と結論づけた（Ｖａｌｅｕｒ Ｎ，Ｅｎｇｅｌ Ｐ，Ｃａｒｂａｊａｌ Ｎ，Ｃｏｎｎｏｌｌｙ Ｅ，Ｌａｄｅｆｏｇｅｄ Ｋ（２００４）ヒト消化管におけるラクトバチルス・ロイテリＡＴＣＣ ５５７３０によるコロニー形成及び免疫調節（Ｃｏｌｏｎｉｚａｔｉｏｎ ａｎｄ ｉｍｍｕｎｏｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ ｂｙ Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｅｕｔｅｒｉ ＡＴＣＣ ５５７３０ ｉｎ ｔｈｅ ｈｕｍａｎ ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｔｒａｃｔ）、Ａｐｐｌ Ｅｎｖｉｒｏｎ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ ７０ １１７６〜１１８１）。
【００１７】
Ｔｏｌｌ様リセプター（ＴＬＲ）は、微生物モティーフを認識してサイトカイン産生に導く一連の遺伝子を活性化する。従来はＴＬＲは微生物感染のセンサーと考えられていて、その役割は炎症反応を誘導することである。しかしＴＬＲによって認識されるモティーフは病原体に特有ではなく微生物の全部のクラスによって共有される一般的なモティーフであるが、どのようにして免疫系がＴＬＲを介して片利共生細菌と病原性細菌とを区別するかについてはまだ充分には分かっていない。最近ではデータは、炎症反応の誘導におけるＴＬＲの役割にもかかわらず、片利共生ミクロフローラを認識することにより、ＴＬＲは腸内ホメオスタシスを維持することにおいても役割を果たすことを示した（Ｒａｋｏｆｆ−Ｎａｈｏｕｍ Ｓ，Ｐａｇｌｉｎｏ Ｊ，Ｅｓｌａｍｉ−Ｖａｒｚａｎｅｈ Ｆ，Ｅｄｂｅｒｇ Ｓ，Ｍｅｄｚｈｉｔｏｖ Ｒ．ｔｏｌｌ様リセプターによる片利共生ミクロフローラの認識には、腸内ホメオスタシスが必要である（Ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ ｏｆ ｃｏｍｍｅｎｓａｌ ｍｉｃｒｏｆｌｏｒａ ｂｙ ｔｏｌｌ−ｌｉｋｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ ｉｓ ｒｅｑｕｉｒｅｄ ｆｏｒ ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｈｏｍｅｏｓｔａｓｉｓ）。Ｃｅｌｌ．２００４ Ｊｕｌ ２３；１１８（２）：２２９〜４１）。
【００１８】
Ｌ．ロイテリを含む様々なラクトバチルス属種の菌株が、プロバイオティクス処方において用いられている。Ｌ．ロイテリは、動物消化管に天然に存在する生物の１つであり、通常ヒトを含む健常動物の腸に認められる。これは抗菌活性を有することが知られている。例えば、米国特許第５，４３９，６７８号、同第５，４５８，８７５号、同第５，５３４，２５３号、同第５，８３７，２３８号、及び同第５，８４９，２８９号を参照のこと。Ｌ．ロイテリ細胞がグリセロール存在下の嫌気的条件下で増殖するとき、これらはβ−ヒドロキシ−プロピオンアルデヒド（３−ＨＰＡ）として知られている抗菌物質を産生する。
【００１９】
腸内免疫系と片利共生フローラ間に明白で複雑な関係が存在する。最近、管腔内在性フローラは、腸内上皮細胞上に位置するｔｏｌｌ様リセプター（ＴＬＲｓ）及びＮＯＤリセプターの活性化を介する細菌誘発性の生得的及び適応宿主応答の重要な過程を開始することができることが示された（Ｈａｌｌｅｒ Ｄ，Ｊｏｂｉｎ Ｃ．常在性第一胃細菌と宿主間の相互作用：健全な関係がまずくなるか？（Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ ｂｅｔｗｅｅｎ ｒｅｓｉｄｅｎｔ ｒｕｍｉｎａｌ ｂａｃｔｅｒｉａ ａｎｄ ｔｈｅ ｈｏｓｔ：ｃａｎ ａ ｈｅａｌｔｈｙ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ ｔｕｒｎ ｓｏｕｒ？）Ｊ Ｐｅｄｉａｔｒ Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ Ｎｕｔｒ ２００４；３８：１２３〜３６．Ｒａｋｏｆｆ−Ｎａｈｏｌｍ Ｓ，Ｐａｇｌｉｎｏ Ｊ，Ｅｓｌａｍｉ−Ｖａｒｚａｎｅｈ Ｆ，Ｅｄｂｅｒｇ Ｓ，Ｍｅｄｚｈｉｔｏｖ Ｒ．Ｔｏｌｌ様リセプターによる片利共生ミクロフローラの認識には、腸内ホメオスタシスが必要である（Ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ ｏｆ ｃｏｍｍｅｎｓａｌ ｍｉｃｒｏｆｌｏｒａ ｂｙ Ｔｏｌｌ−ｌｉｋｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ ｉｓ ｒｅｑｕｉｒｅｄ ｆｏｒ ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｈｏｍｅｏｓｔａｓｉｓ）。Ｃｅｌｌ ２００４；１１８：２２９〜２４１）。動物モデルにおいて、サイトカインは神経及び筋免疫相互作用（ｎｅｕｒｏ− ａｎｄ ｍｙｏ−ｉｍｍｕｎｅ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ）を介して腸神経筋肉組織の反射亢進を開始することができる（Ｍｉｌｌａ ＰＪ．炎症細胞及び腸運動性の制御（Ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｃｅｌｌｓ ａｎｄ ｔｈｅ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｇｕｔ ｍｏｔｉｌｉｔｙ）。Ｊ Ｐｅｄｉａｔｒ Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ Ｎｕｔｒ ２００４；３９：Ｓ７５０）。
【００２０】
実験的研究及び臨床的研究において、特異的なプロバイオティクス菌株はＴ細胞の増殖を阻害し、Ｔｈ１及びＴｈ２サイトカイン両方の分泌を低減するが、ＩＬ−１０及びＴＧＦ−βなどの抑圧性サイトカインを選択的に産生することが示された（Ｒａｕｔａｖａ Ｓ，Ｋａｌｌｉｏｍａｋｉ Ｍ，Ｉｓｏｌａｕｒｉ Ｅ．妊娠及び母乳哺育中のプロバイオティクスが、乳児におけるアトピー性疾患に対して免疫調節性保護を与える可能性がある（Ｐｒｏｂｉｏｔｉｃｓ ｄｕｒｉｎｇ ｐｒｅｇｎａｎｃｙ ａｎｄ ｂｒｅａｓｔ−ｆｅｅｄｉｎｇ ｍｉｇｈｔ ｃｏｎｆｅｒ ｉｍｍｕｎｏｍｏｄｕｌａｔｏｒｙ ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ ａｇａｉｎｓｔ ａｔｏｐｉｃ ｄｉｓｅａｓｅ ｉｎ ｔｈｅ ｉｎｆａｎｔｓ）。 Ｊ Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２００２；１０９：１１９〜１２１）。さらにヒトボランティアにおいて、Ｌ．ロイテリはヒト消化管でコロニーを形成し、ヒト回腸上皮におけるＣＤ４＋Ｔヘルパー細胞の摂取を含む免疫調節性活性を発揮することができる（Ｖａｌｅｕｒ Ｎ，Ｅｎｇｅｌ Ｐ，Ｃａｒｂａｊａｌ Ｎ，Ｃｏｎｎｏｌｌｙ Ｅ，Ｌａｄｅｆｏｇｅｄ Ｋ．ヒト消化管のラクトバチルス・ロイテリＡＴＣＣ ５５７３０によるコロニー形成及び免疫調節（Ｃｏｌｏｎｉｚａｔｉｏｎ ａｎｄ ｉｍｍｕｎｏｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ ｂｙ Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｅｕｔｅｒｉ ＡＴＣＣ ５５７３０ ｉｎ ｔｈｅ ｈｕｍａｎ ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｔｒａｃｔ）。Ａｐｐｌ Ｅｎｖｉｒｏｎ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ ２００４；７０：１１７６〜８１）。ＤＣの成熟は、未成熟ＤＣをリンパ節に遊走する熟成抗原提示細胞に変換する過程である。この過程は、未成熟のＤＣを特徴づける強力な抗原取り込み能力の喪失並びに同時刺激性分子及び種々のサイトカインの上方制御を生じる（Ｍｅｌｌｍａｎ Ｉ，Ｓｔｅｉｎｍａｎ ＲＭ：樹状細胞：特殊化及び調節された抗原プロセシング装置（Ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌｓ：ｓｐｅｃｉａｌｉｚｅｄ ａｎｄ ｒｅｇｕｌａｔｅｄ ａｎｔｉｇｅｎ ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ ｍａｃｈｉｎｅｓ）。Ｃｅｌｌ ２００１，１０６：２５５〜８．Ｂａｎｃｈｅｒｅａｕ Ｊ，Ｂｒｉｅｒｅ Ｆ，Ｃａｕｘ Ｃ，Ｄａｖｏｕｓｔ Ｊ，Ｌｅｂｅｃｑｕｅ Ｓ，Ｌｉｕ ＹＪ，Ｐｕｌｅｎｄｒａｎ Ｂ，Ｐａｌｕｃｋａ Ｋ：樹状細胞の免疫生物学（Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌｓ）。Ａｎｎｕ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２０００，１８：７６７〜８１１）。
【００２１】
既知の成熟化プロトコルは、ＤＣが抗原に曝露後又は曝露中に遭遇すると考えられている環境に基づいている。この方法の最適例は、単球馴化培地（ＭＣＭ）の使用である。ＭＣＭは、単球を培養後、成熟因子の供給源として培養上清液を用いることによりｉｎ ｖｉｔｒｏで作製する。成熟に関与するＭＣＭの主要成分は、炎症誘発性サイトカインであるインターロイキン−１ベータ（ＩＬ−１β）、ＩＬ−６及びＴＮＦ−αである（Ｒｅｄｄｙ Ａ，Ｓａｐｐ Ｍ，Ｆｅｌｄｍａｎ Ｍ，Ｓｕｂｋｌｅｗｅ Ｍ，Ｂｈａｒｄｗａｊ Ｎ：単球馴化培地は、ヒト樹状細胞の末期成熟の媒介において定義されたサイトカインより効果的である（Ａ ｍｏｎｏｃｙｔｅ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｅｄ ｍｅｄｉｕｍ ｉｓ ｍｏｒｅ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ｔｈａｎ ｄｅｆｉｎｅｄ ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ ｉｎ ｍｅｄｉａｔｉｎｇ ｔｈｅ ｔｅｒｍｉｎａｌ ｍａｔｕｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌｓ）。Ｂｌｏｏｄ １９９７，９０：３６４０〜６）。熟成したＤＣは、Ｔ細胞応答を促進し指令する種々のサイトカインを産生する。これらのサイトカインの２つは、ＩＬ−１０及びＩＬ−１２である。これらのサイトカインは、誘導されたＴ細胞応答の方向に対して反対の作用を有する。すなわちＩＬ−１２はＴｈ１タイプ応答を誘導するが、一方ＩＬ−１０はそのような応答を阻害する。
【００２２】
したがって、ＤＣを含むＡＰＣの活性化状態（抗原提示細胞）が、ＣＤ４＋Ｔ細胞応答のタイプと強度を決定する。休止ＡＰＣ（胸腺の上皮細胞を含む）は、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＴＲ細胞の発生を促進することができる。病原体による感染の間に、ＴＬＲによる微生物分子の認識はＡＰＣの活性化を生じる。次いでＡＰＣは、全体としてＴＲ細胞の抑制効果よりも優位になるＩＬ−６及び別の可溶性因子を産生して、病原体に対するＴＥ（エフェクターＴ細胞）細胞の効率的な産生を可能にする。休止及び活性化ＡＰＣ間の動的平衡は、ＴＲ及びＴＥ細胞の両方の作用によっても影響を受けるであろう（図１）。
【００２３】
Ｐｅｓｓｉら（２０００）は、経口でのラクトバチルス・ラムノサスＧＧ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ ＧＧ）に続くアトピーの子供におけるＩＬ−１０産生を記載している。しかし本明細書におけるこの発明と異なり、この研究は、運動障害及び仙痛に対する菌株の効率に関して選択された、大量のＩＬ−１０を産生する能力を有する菌株を具体的には記載していない（Ｐｅｓｓｉ Ｔ，Ｓｕｔａｓ Ｙ，Ｈｕｒｍｅ Ｍ．Ｉｓｏｌａｕｒｉ Ｅ．経口でのラクトバチルス・ラムノサスＧＧに続く、アトピーの子供におけるインターロイキン−１０の産生（Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−１０ ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｉｎ ａｔｏｐｉｃ ｃｈｉｌｄｒｅｎ ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ ｏｒａｌ Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ．ＧＧ．）Ｃｌｉｎ Ｅｘｐ Ａｌｌｅｒｇｙ．２０００ Ｄｅｃ；３０（１２）：１８０４〜８）。
【００２４】
Ｈｅｒｍｅｌｉｊｎらによる研究（２００５）は、ラクトバチルス・プランタルム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ）ではなく、Ｌ．ロイテリ及びラクトバチルス・カゼイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃａｓｅｉ）は、単球由来ＤＣをプライミングしてＴＲ細胞の発生を促進することを示している。これらのＴＲ細胞は、ＩＬ−１０のレベルの増加を生じた。本明細書におけるこの発明と異なり、この著者らは腸運動性又は仙痛とＩＬ−１０の上昇を結び付けていない。菌株に関してさえも、この著者らはＩＬ−１０レベルを増加させるのに効率が良い２つの異なる細菌種を述べている。これは、仙痛を低減するのに最も有効なプロバイオティクスを決定し、ＩＬ−１０レベルを増加させるのに有効である異なる能力を有する同じ種の異なる菌株として菌株レベルで選択されなければならないことを示した本明細書におけるこの発明とは対照的である。
【００２５】
現在、仙痛の治療薬は存在しない。仙痛のための現在の治療パラダイムは、薬理学的及び／又は非薬理学的方法から成り、症状のせいぜいわずかな緩和を与える。親に提供される仙痛の典型的な治療的介入は、食餌的、物理的、行動的及び薬理学的介入を含む４つのカテゴリーの中に含まれる。食事療法には、種々の授乳技術についての専門家の助言又は低アレルギー性ミルクの使用、大豆若しくはラクトースを含まない調合乳、及び早い段階での固形食の採用が含まれる（Ｌｏｔｈｅ，Ｌ．ら、乳児仙痛の原因としての牛乳からの調合乳：二重盲検試験（ｃｏｗ’ｓ ｍｉｌｋ ｆｏｒｍｕｌａ ａｓ ａ ｃａｕｓｅ ｏｆ ｉｎｆａｎｔｉｌｅ ｃｏｌｉｃ：ａ ｄｏｕｂｌｅ−ｂｌｉｎｄ ｓｔｕｄｙ）。Ｐｅｄｉａｔｒｉｃｓ １９８２；７０：７〜１０；Ｆｏｒｓｙｔｈ Ｂ Ｗ Ｃ．仙痛と調合乳を変える効果：二重盲検多段交叉研究（Ｃｏｌｉｃ ａｎｄ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｃｈａｎｇｉｎｇ ｆｏｒｍｕｌａｓ：ａ ｄｏｕｂｌｅ−ｂｌｉｎｄ ｍｕｌｔｉｐｌｅ−ｃｒｏｓｓｏｖｅｒ ｓｔｕｄｙ）。Ｊ Ｐｅｄｉａｔｒ １９８９；１１５，５２１〜６；Ｔｒｅｅｍ，Ｗ Ｒら、乳児仙痛に及ぼす繊維強化調合乳の効果の評価（Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ａ ｆｉｂｅｒ−ｅｎｒｉｃｈｅｄ ｆｏｒｍｕｌａ ｏｎ ｉｎｆａｎｔ ｃｏｌｉｃ）。Ｊ Ｐｅｄｉａｔｒ １９９１；１１９６９５〜７０１）。しかし大豆調合乳の使用、又は授乳技術の変更のどちらも、仙痛のすべての症例に効果的に作用する訳ではない。これらの推奨を研究するデータの再検討では、低アレルギー性調合乳、例えば部分的に加水分解した又はアミノ酸に基づく調合乳の使用は、約２５％の乳児にしか恩恵をもたらし得ないことを示した（Ｌｕｃａｓｓｅｎ，Ｐ Ｌ Ｂ Ｊら、乳児仙痛：ホエー水解物を用いる号泣時間の減少：二重盲検、無作為プラセボ対照試験（Ｉｎｆａｎｔｉｌｅ ｃｏｌｉｃ：ｃｒｙｉｎｇ ｔｉｍｅ ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ａ ｗｈｅｙ ｈｙｄｒｏｌｙｓａｔｅ：ａ ｄｏｕｂｌｅ−ｂｌｉｎｄ，ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ ｐｌａｃｅｂｏ−ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ ｔｒｉａｌ）。Ｐｅｄｉａｔｒｉｃｓ ２０００；１０６：１３４９〜５４；Ｅｓｔｅｐ，Ｄ Ｃら、アミノ酸に基づく特殊調合乳を用いる小児仙痛の治療：予備的研究（Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｉｎｆａｎｔ ｃｏｌｉｃ ｗｉｔｈ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄ−ｂａｓｅｄ ｉｎｆａｎｔ ｆｏｒｍｕｌａ：ａ ｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｙ ｓｔｕｄｙ）。Ａｃｔａ Ｐａｅｄｉａｔｒ ２０００；８９：２２〜７）。
【００２６】
仙痛管理に対する物理的な方法には、ガスの産生／還流を緩和する体位の物理的な動き、乳児を抱きかかえること、スワドリング、腹圧をかけること、又はマッサージをすることが含まれる。他の方法には、仙痛に幼児が気づくのを最小限にするように気をそらすこと、例えば乳児を車に乗せること、乗車シミュレータの使用、ベビーベッド振動器、又は幼児用ブランコが含まれる（Ｌｉｐｔｏｎ Ｅ Ｌ．スワドリングと小児ケアの実施：歴史的、文化的及び経験的観察（Ｓｗａｄｄｌｉｎｇ ａｎｄ ｃｈｉｌｄ ｃａｒｅ ｐｒａｃｔｉｃｅ：ｈｉｓｔｏｒｉｃａｌ，ｃｕｌｔｕｒａｌ ａｎｄ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎｓ）。Ｐｅｄｉａｔｒｉｃｓ １９６５；３５：５２１〜６７；Ｂｙｒｎｅ Ｊ Ｍ，Ｈｏｒｏｗｉｔｚ Ｆ Ｄ．鎮痛介入としてのロッキング：身動きの方向とタイプの影響（Ｒｏｃｋｉｎｇ ａｓ ａ ｓｏｏｔｈｉｎｇ ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎ：ｔｈｅ ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ ｏｆ ｄｉｒｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｔｙｐｅ ｏｆ ｍｏｖｅｍｅｎｔ）。Ｉｎｆａｎｔ Ｂｅｈａｖ Ｄｅｖ １９８１；４：２０７〜１８）。
【００２７】
別の方法は、乳児をなだめるといわれている音の録音を再生することである。しかし医学文献に、これらの方法は効果が無いという証拠が存在する（Ｐａｒｋｉｎ Ｐ Ｃ，Ｓｃｈｗａｒｔｚ Ｃ Ｊ，Ｍａｎｕｅｌ Ｂ Ａ．乳児期の持続的号泣管理における３つの介入の無作為対照臨床試験（Ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ ｔｒｉａｌ ｏｆ ｔｈｒｅｅ ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎｓ ｉｎ ｔｈｅ ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ ｏｆ ｐｅｒｓｉｓｔｅｎｔ ｃｒｙｉｎｇ ｏｆ ｉｎｆａｎｃｙ）Ｐｅｄｉａｔｒｉｃｓ １９９３；９２（２）：１９７〜２０１）。これらの方法は、仙痛症状の緩和にせいぜいわずかに効果があるのみである。
【００２８】
仙痛治療のための行動に関する介入の推奨は、利用できる最も一貫しない治療法である。一部の著者は感覚刺激を増大させることを勧めるが、他の著者はそのような刺激を低下させることを勧めている（Ｂａｌｏｎ Ａ Ｊ．乳児仙痛の管理（Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ ｏｆ ｉｎｆａｎｔｉｌｅ ｃｏｌｉｃ）。Ａｍｅｒ Ｐｈａｍ Ｐｈｙｓｉｃｉａｎ １９９７；５５：２３５〜２４２；Ｌｕｃａｓｓｅｎ Ｐ Ｌ Ｂ Ｊ，Ａｓｓｅｎｄｅｌｆｔ Ｗ Ｊ Ｊ，Ｇｕｂｂｅｌｓ Ｊ Ｗ，ｖａｎ Ｅｉｊｋ Ｔ Ｍ，ｖａｎ Ｇｅｌｄｒｏｐ Ｗ Ｊ．乳児仙痛に対する治療の効果：系統的再検討（Ｅｆｆｅｃｔｉｖｅｎｅｓｓ ｏｆ ｔｒｅａｔｍｅｎｔｓ ｆｏｒ ｉｎｆａｎｔｉｌｅ ｃｏｌｉｃ：ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ ｒｅｖｉｅｗ）。ＢＭＪ １９９８；３１６（５）：１５６３〜９；及びＣａｒｅｙ Ｗ Ｂ．「仙痛」−乳児−環境相互作用としての主要な過剰号泣（“Ｃｏｌｉｃ”−ｐｒｉｍａｒｙ ｅｘｃｅｓｓｉｖｅ ｃｒｙｉｎｇ ａｓ ａｎ ｉｎｆａｎｔ−ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ）。Ｐｅｄｉａｔｒ Ｃｌｉｎ Ｎｏｒｔｈ Ａｍ １９８４；３１：９９３〜１００５）。その他の推奨には、号泣に対する早い段階での対応又は乳児を泣かせること、おしゃぶりを与えること、通常の授乳スケジュールの実施、視線を交わすこと及び対話型の遊びを用いることが含まれる。
【００２９】
仙痛の治療の薬理学的介入により、処方薬及び非処方薬を使用するようになった。現在使用されている処方薬には、緩和を与え得るが錐体外路系症状、呼吸抑制、及び便秘を含む危険を伴うベラドンナアルカロイド及びオピエイト（鎮痛剤）が含まれる。例えばアトロピンとその効果が類似した抗コリン剤、例えばヒヨスチアミン（ＬＥＶＩＳＩＮＥ（登録商標）、又はＧＡＳＴＲＯＳＥＤ（登録商標））及びジサイクロミンは、瞳孔を拡大し、心拍数を増加し、唾液産生を減少させ、消化管及び尿路並びに気管支の痙攣を緩和する。抗コリン剤が、乳児仙痛を常に効果的に治療することが示された米国市場での唯一の処方薬であるにもかかわらず、残念なことに治療を受けた乳児の５％までもが呼吸困難、無呼吸、発作、失神、窒息、昏睡及び筋緊張低下を含む副作用を生じることがある（Ｗｉｌｌｉａｍｓ Ｊ，Ｗａｔｋｉｎ−Ｊｏｎｅｓ Ｒ．ジサイクロミン：一部の小さい乳児におけるこの使用に伴う憂慮すべき症状（Ｄｉｃｙｃｌｏｍｉｎｅ：ｗｏｒｒｙｉｎｇ ｓｙｍｐｔｏｍｓ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｉｔｓ ｕｓｅ ｉｎ ｓｏｍｅ ｓｍａｌｌ ｂａｂｉｅｓ）（ＢＭＪ １９８４；２８８：９０１；Ｍｙｅｒｓ Ｊ Ｈ，Ｍｏｒｏ−Ｓｕｔｈｅｒｌａｎｄ Ｄ，Ｓｈｏｏｋ Ｊ Ｅ．硫酸ヒオスシアミンを用いて治療した仙痛の乳児における抗コリン作用性中毒（Ａｎｔｉｃｈｏｌｉｎｅｒｇｉｃ ｐｏｉｓｏｎｉｎｇ ｉｎ ｃｏｌｉｃｋｙ ｉｎｆａｎｔｓ ｔｒｅａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｈｙｏｓｃｙａｍｉｎｅ ｓｕｌｆａｔｅ）。Ａｍ Ｊ Ｅｍｅｒｇ Ｍｅｄ １９９７；１５：５３２〜５）。さらに数例の死亡が、ジサイクロミンを服用している乳児で報告された（Ｇａｒｒｉｏｔｔ Ｊ Ｃ，Ｒｏｄｒｉｇｕｅｚ Ｒ，Ｎｏｒｔｏｎ Ｌ Ｅ．乳児におけるジサイクロミンが関与する２例の死亡（Ｔｗｏ ｃａｓｅｓ ｏｆ ｄｅａｔｈ ｉｎｖｏｌｖｉｎｇ ｄｉｃｙｃｌｏｍｉｎｅ ｉｎ ｉｎｆａｎｔｓ）。Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｔｏｘｉｃｏｌ １９８４；２２（５）：４５５〜４６２）。
【００３０】
乳児仙痛に有効な治療として報告された非処方薬には、超生理学的（高用量）ジフェンヒドラミン（ＢＥＮＡＤＲＹＬ（登録商標））、フェノバルビタール、抱水クロラール、及びアルコールさえも含むいくつかの鎮静剤又は睡眠導入剤が含まれる。しかし呼吸器疾患を伴う子供においていくつかのこれらの薬剤に関連した重篤な副作用の可能性があり、したがって、仙痛治療におけるこれらの広範な使用を制限している（Ｂａｌｏｎ Ａ Ｊ．乳児仙痛の管理（Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ ｏｆ ｉｎｆａｎｔｉｌｅ ｃｏｌｉｃ）。Ａｍｅｒ Ｐｈａｍ Ｐｈｙｓｉｃｉａｎ １９９７；５５：２３５〜２４２；Ｇｕｒｒｙ Ｄ．Ｉｎｆａｎｔｉｌｅ ｃｏｌｉｃ．Ａｕｓｔｒａｌｉａｎ Ｐｈａｍ Ｐｈｙｓ １９９４；２３（３）：３３７〜３４６３２）。
【００３１】
仙痛治療のより安全な非処方薬は、腸内ガス泡の量を低減する非吸収性の市販薬であるシメチコン又はジメチルポリシロキサンの投与を概して含んでいた。シメチコンは、非常に安全なプロフィールを有し、乳児仙痛に対するシメチコンの効果はプラセボと同じであることを示すいくつかの研究にもかかわらず多くの場合推奨されている（Ｍｅｔｃａｌｆ，Ｔ Ｊら、Ｐｅｄｉａｔｒｉｃｓ １９９４ Ｊｕｌｙ；９４（１）：２９〜３４．Ｓｆｅｒｒａ，Ｔ Ｊら、Ｐｅｄｉａｔｒ Ｃｌｉｎ Ｎｏｒｔｈ Ａｍ １９９６ Ａｐｒｉｌ；４３（２）：４８９〜５１０．Ｄａｎｉｅｌｓｏｎ，Ｂ．ら、Ａｃｔａ Ｐａｅｄｉａｔｒ Ｓｃａｎｄ １９８５ Ｍａｙ；７４（３）：４４６〜５０．Ｃｏｌｏｎ，Ａ Ｒら、Ａｍ Ｆａｍ Ｐｈｙｓｉｃｉａｎ １９８９ Ｄｅｃｅｍｂｅｒ；４０（６）：１２２〜４）。その結果、今日の仙痛の最も一般的な治療は、乳児が成長して病態から脱するのを待つことだけである。
【００３２】
したがって現在、乳児及び幼児における仙痛治療に役立つ安全で有効な化合物及び組成物並びに技術に対する要望がある。本発明の組成物及び方法は、この必要に応えて乳児における仙痛に伴う症状を安全且つ効果的に治療することができる製品を提供する。特許出願ＥＰ１３６４４８３Ａ１０には、乳児における仙痛などの消化管−神経筋異常の治療用プロバイオティクスが記載されている。プロバイオティクスとして、この出願人はいくつかの異なる細菌種について言及している。これは、仙痛を最も効果的に低減するプロバイオティクスはＩＬ−１０レベルの増加に有効であるように選択された特定の乳酸菌株であり、本発明の発明者がまた同種の菌株間でもＩＬ−１０産生の刺激にかなりの差異があることを示したように全ての細菌種ではないという本明細書における本発明と対照的である。
【００３３】
２００５年に、Ｓａｖｉｎｏは治療の７日以内にシメチコンを用いる標準的治療法と比べて、Ｌ．ロイテリＡＴＣＣ５５７３０の補充は、母乳哺育児における仙痛症状を有意に改善したことを示した。Ｌ．ロイテリを用いる治療に対する反応率は９５％であったが、一方シメチコンに反応したのは乳児の７％のみであった。彼は、２００５年８月３１日〜２００５年９月３日、イタリア国シエナでの欧州小児研究会議（Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｆｏｒ Ｐｅｄｉａｔｒｉｃ Ｒｅｓｅａｒｃｈ（ＥＳＰＲ），Ｍｅｅｔｉｎｇ）で結果を発表した（Ｐｅｄｉａｔｒ Ｒｅｓ．２００５；５８（２）：４１１）。Ｓａｖｉｎｏの結果が有益な効果を示したにもかかわらず、彼はＩＬ−１０産生を促進する特定の菌株と腸運動性の減少、その結果としての仙痛の減少との間の関連に気づいていなかった。本発明は、本明細書においてそのような最良の菌株を選択する方法を提供する。
【００３４】
Ｃｏｌｌｉｎｓは運動機能の障害は、様々な消化管部位で炎症又は免疫の活性化に関連して生じる場合がある種々の症状を生じ、食道炎、胃炎、及び突発性炎症性腸疾患（ＩＢＤ）などの一般的な疾患を含むことを記載した。これらの観察は、消化管の運動性は免疫系の影響も受けやすいことを示唆している。このような関係において、運動系は内腔に存在する侵害刺激から消化管を防御する重要な役割を果たす可能性がある（Ｃｏｌｌｉｎｓ Ｓ．，腸神経筋機能の免疫調節：運動性及び炎症性障害に対する影響（Ｔｈｅ Ｉｍｍｕｎｏｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ Ｅｎｔｅｒｉｃ Ｎｅｕｒｏｍｕｓｃｕｌａｒ Ｆｕｎｃｔｉｏｎ：Ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｆｏｒ Ｍｏｔｉｌｉｔｙ ａｎｄ Ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ）。Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｒｏｌｏｇｙ １９９６；１１１：１６８３〜１６９９）。例えばこの概念はＶａｎｔｒａｐｐｅｎらの観察を反映しており、彼は小腸での細菌の異常増殖が、小腸における空腹時の運動性の正常な周期性パターンの破壊を伴うことを示した（Ｖａｎｔｒａｐｐｅｎ Ｇ，Ｊａｎｎｓｓｅｎｓ Ｊ，Ｈｅｌｌｅｍａｎｓ Ｊ，Ｇｈｏｏｓ Ｙ．正常対象及び小腸で細菌の異常増殖を有する患者の空腹時運動複合体（Ｔｈｅ ｉｎｔｅｒｄｉｇｅｓｔｉｖｅ ｍｏｔｏｒ ｃｏｍｐｌｅｘ ｏｆ ｎｏｒｍａｌ ｓｕｂｊｅｃｔｓ ａｎｄ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｏｖｅｒｇｒｏｗｔｈ ｏｆ ｔｈｅ ｓｍａｌｌ ｉｎｔｅｓｔｉｎｅ）。Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ １９７７；９：１１５８〜１１６８）。
【００３５】
高いＩＬ−１０のレベルが、過度に活性化された免疫系を抑制することは長年よく知られていた。腸運動性は腸内免疫系に接続されている神経学的シグナルにより調節されること、及び仙痛は腸運動性が、例えば細菌異常増殖により増加した結果であることもまた既に示されていた。
【００３６】
先進工業国では、母親の消化管ミクロフローラを取り込む新生児能力を阻害する衛生処置が早くも分娩過程で始まっている。その結果、異なるミクロフローラが乳児で確立される。例えば大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）及びラクトバチルスを保菌する代わりに、新生児には黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）及び他の皮膚細菌が定着していることの方が多い。
【００３７】
本発明の発明者らは、皮膚細菌の異常増殖は乳児の免疫系を過剰に活性化して、過剰に活性化された腸運動性及びその結果として仙痛を引き起こすが、ＩＬ−１０産生を促進する能力を有するＬ．ロイテリＤＳＭ １７９３８などのさらに多数の特定の消化管細菌は、ＴＲ系の成熟、すなわちＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＴＲ細胞の増殖をもたらすという予想外の発見をした。ＣＤ４＋ＣＤ２５＋細胞の上方制御は穏やかな腸運動性をもたらし、その結果として仙痛を有する乳児に有益な効果をもたらす。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００３８】
これらの所見のために、非病原性細菌菌株をＩＬ−１０増加特性に関して選択した。そして意外にもこの菌株のこの特性が、乳児仙痛の減少と相関することを見いだした。したがって本発明は、仙痛の予防及び／又は治療用の医薬品の製造のためのＬ．ロイテリＤＳＭ １７９３８の使用並びに同じようにして選択された他の菌株の使用に関する。
【００３９】
本発明のさらなる目的は、ヒトを含む動物へ投与するための、前記菌株を含む製品を提供することである。他の目的及び効果は、下記の開示及び添付の特許請求の範囲からより明らかとなるであろう。
【課題を解決するための手段】
【００４０】
本発明は、本明細書において、仙痛の予防及び／又は治療のために、ＩＬ−１０の産生を促進する能力、その結果としてのＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＴＲ細胞の増殖に関して選択された乳酸菌の特定の菌株、このような菌株を選択する方法、及びこのような菌株を含む製品を提供する。
【００４１】
本発明のその他の目的と特徴は、下記の開示及び添付の特許請求の範囲からより明らかとなるであろう。
【図面の簡単な説明】
【００４２】
【図１】ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＴＲ細胞の発生促進における、特定の選択された乳酸菌菌株に対する提案された役割を示す図である。
【図２ａ】棒グラフ形式でのＤＣ細胞によるＩＬ１０産生を示す図である。
【図２ｂ】表形式でのＤＣ細胞によるＩＬ１０産生を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００４３】
消化管での皮膚細菌のコロニー形成及びＴＲ−細胞の欠乏は、新生乳児の免疫系を過剰に活性化して、過剰に活性化された腸運動性及びその結果として仙痛を引き起こす。ＩＬ−１０の産生を促進する能力を有するＬ．ロイテリＤＳＭ １７９３８などの多数の特定の消化管細菌細胞は、ＴＲ系の成熟、すなわちＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＴＲ細胞の増殖をもたらす。その他のラクトバチルス菌株がＩＬ−１０の産生を誘導することが、多くの研究者、例えばＲａｕｔａｖａら（上記）により既に報告された。ＣＤ４＋ＣＤ２５＋細胞の上方制御は穏やかな腸運動性をもたらし、その結果として仙痛に有益な効果をもたらす。意外にも、サイトカインＩＬ−１０のレベルの増加をもたらす菌株は、平均的号泣時間を低下させることができる同じ菌株であることが見いだされた（実施例２）。
【００４４】
本明細書において、本発明は、Ｌ．ロイテリＤＳＭ １７９３８を含む仙痛を低減する能力に関して選択した乳酸菌の菌株を含む。食品などの製品、栄養的添加物及び処方、完全な細胞若しくはこれらの菌株に由来する成分を含む薬剤又は医療用具は、当技術分野で知られるように製剤化することができ、知られているように摂取可能な支持体に加えてラクトバチルス菌株、又はこの菌株に由来する成分を一般に含んでいる。
【００４５】
ｉｎ ｖｉｔｒｏでの研究を、単球由来のＤＣでのＩＬ−１０の産生を促進し、それによりＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＴＲ細胞の発生を誘導する能力に関してラクトバチルスの菌株を選択する方法として使用することができる（実施例１）。
【００４６】
データは、特定の菌株Ｌ．ロイテリＡＴＣＣ ５５７３０及びＬ．ロイテリＤＳＭ １７９３８によるＩＬ−１０の効果的な刺激の指標を開示し、この調節は後期対数増殖期／定常増殖期の間にこれらの２つの特定の菌株によって増殖培地に放出される物質により媒介される。これに反してＬ．ロイテリの他の２つの菌株は、関連するＩＬ−１０産生を促進することができなかった。
【００４７】
仙痛の予防又は治療のために選択された菌株の臨床的な適切さを確かめるために、乳児仙痛の診断を受けた母乳哺育児においてさらに研究を実施する。
【００４８】
本発明の特徴は、以下の実施例を参照することによりさらに明確に理解されるが、本発明を限定するものとこれらを解釈すべきではない。
【実施例】
【００４９】
（実施例１）
単球由来のＤＣによりＩＬ−１０の発現を促進するプロバイオティクス菌株の能力の研究：
未成熟ＤＣは、１０％ ＦＣＳ ＨｙＣｌｏｎｅ、Ｌｏｇａｎ、ＵＴ）、組み換え型のヒト（ｒｈ）ＧＭ−ＣＳＦ（５００ Ｕ／ｍｌ；Ｓｃｈｅｒｉｎｇ−Ｐｌｏｕｇｈ、Ｕｄｅｎ、Ｔｈｅ Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）、及びｒｈＩＬ−４（２５０ Ｕ／ｍｌ；Ｐｈａｒｍａ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅ Ｈａｎｎｏｖｅｒ、Ｈａｎｎｏｖｅｒ、Ｇｅｒｍａｎｙ）を含むＩＭＤＭ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｐａｉｓｌｅｙ、Ｕ．Ｋ．）で培養された末梢血単球から生成される（Ｈｉｌｋｅｎｓ，Ｃ．Ｍ．Ｕ．，Ｐ．Ｋａｌｉｎｓｋｉ，Ｍ．ｄｅ Ｂｏｅｒ，ａｎｄ Ｋａｐｓｅｎｂｅｒｇ．１９９７．ヒト樹状細胞は、ナイーヴなＴヘルパー細胞のＴｈ１表現型への発生を指令するために外来性のインターロイキン−１２誘導性因子を必要とする（Ｈｕｍａｎ ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌｓ ｒｅｑｕｉｒｅ ｅｘｏｇｅｎｏｕｓ ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−１２−ｉｎｄｕｃｉｎｇ ｆａｃｔｏｒｓ ｔｏ ｄｉｒｅｃｔ ｔｈｅ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ｎａｉｖｅ Ｔ−ｈｅｌｐｅｒ ｃｅｌｌｓ ｔｏｗａｒｄ ｔｈｅ Ｔｈ１ ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ）。Ｂｌｏｏｄ ９０：１９２０）（Ｋａｌｉｎｓｋｉ，Ｐ．，Ｊ．Ｈ．Ｎ．Ｓｃｈｕｉｔｅｍａｋｅｒ，Ｃ．Ｍ．Ｕ．Ｈｉｌｋｅｎｓ，Ｅ．Ａ．Ｗｉｅｒｅｎｇａ，ａｎｄ Ｍ．Ｌ．Ｋａｐｓｅｎｂｅｒｇ．１９９９。樹状細胞の最終的な成熟は、ＩＦＮ−γ及び細菌のＩＬ−１２インデューサーに対する反応性の減少を伴い、Ｔｈ細胞との相互作用の間にＩＬ−１２を産生する熟成した樹状細胞の能力の減少を伴う（Ｆｉｎａｌ ｍａｔｕｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌｓ ｉｓ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｉｍｐａｉｒｅｄ ｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅｎｅｓｓ ｔｏ ＩＦＮ−γ ａｎｄ ｔｏ ｂａｃｔｅｒｉａｌ ＩＬ−１２ ｉｎｄｕｃｅｒｓ：ｄｅｃｒｅａｓｅｄ ａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ｍａｔｕｒｅ ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌｓ ｔｏ ｐｒｏｄｕｃｅ ＩＬ−１２ ｄｕｒｉｎｇ ｔｈｅ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ ｗｉｔｈ Ｔｈ ｃｅｌｌｓ）。Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６２：３２３１）。
【００５０】
この実施例で試験される菌株は、ＡＴＣＣ（Ｍａｎａｓｓａｓ、ＶＡ、ＵＳＡ及びＤＳＭＺ、Ｂｒａｕｎｓｃｈｗｅｉｇ、Ｇｅｒｍａｎｙ）から入手可能なラクトバチルス・ロイテリＡＴＣＣ ５５７３０，ラクトバチルス・ロイテリＤＳＭ １７９３８，ラクトバチルス・ロイテリＡＴＣＣ ＰＴＡ ４６６０及びラクトバチルス・ロイテリＡＴＣＣ ＰＴＡ ４９６４である。菌株は、６．２５％ヒツジ血液を含むコロンビア寒天培地（Ｏｘｏｉｄ、Ｂａｓｉｎｇｓｔｏｋｅ、Ｕｎｉｔｅｄ Ｋｉｎｇｄｏｍ）で培養される。ラクトバチルスは５％ＣＯ２雰囲気中で３７℃で培養する。３日後に、細菌数を６２０ｎｍでの吸光度（ＯＤ６２０）を測定することにより決定する。通常は、ＯＤ６２０の０．３５が全ての試験菌株について１×１０８コロニー形成ユニット（ｃｆｕ）に対応した。
【００５１】
６日目に、成熟因子（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ、Ｒｏｃｋｙ Ｈｉｌｌ、ＮＪ．から購入したサイトカイン）として全てを一緒に使用したサイトカインＩＬ−１β（２５ｎｇ／ｍＬ）及びＴＮＦ−α（５０ｎｇ／ｍＬ）の組合せの存在下で、ＬＰＳ（大腸菌；Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｓｔ Ｌｏｕｉｓ、Ｍｏ）並びに試験ラクトバチルスによって未成熟ＤＣの成熟を誘導する。
【００５２】
熟成したＤＣによるＩＬ−１２、ＩＬ−１０及びＩＬ−６サイトカイン産生を、Ｖｉｅｉｒａ ＰＬらによる記載のようにＣＤ４０リガンド発現マウスプラズマ細胞腫細胞（Ｊ５５８）を用いる２４時間の刺激によって測定する（Ｖｉｅｉｒａ ＰＬ，ｄｅ Ｊｏｎｇ ＥＣ，Ｗｉｅｒｅｎｇａ ＥＡ，Ｋａｐｓｅｎｂｅｒｇ ＭＬ，Ｋａｌｉｎｓｋｉ Ｐ．骨髄系樹状細胞におけるＴｈ１誘導能力の発生には、環境的指示を必要とする（Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ Ｔｈ１ −ｉｎｄｕｃｉｎｇ ｃａｐａｃｉｔｙ ｉｎ ｍｙｅｌｏｉｄ ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌｓ ｒｅｑｕｉｒｅｓ ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ ｉｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ）。Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２０００；１６４：４５０７〜１２）。上清を２４時間後に採取して、ＩＬ−１０の濃度をＥＬＩＳＡにより測定する。結果は図２を参照のこと。結果から分かるように、ＤＣによるＩＬ−１０産生を促進する菌株の能力に関して異なるラクトバチルス菌株による影響にかなりの差が存在する。
【００５３】
（実施例２）
乳児仙痛の治療において、選択されたプロバイオティクス菌株対シメチコン
乳児仙痛の診断を受けた母乳哺育児が、小児及び青年期科学科（Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｐｅｄｉａｔｒｉｃ ａｎｄ Ａｄｏｌｅｓｃｅｎｃｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ）（Ｄｒｏｔｔｎｉｎｇ Ｓｉｌｖｉａｓ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｈｏｓｐｉｔａｌ、Ｇｏｔｅｂｏｒｇ）で募集された。２５００と４０００ｇの間の出生時体重を有する適切な在胎月齢で、Ｗｅｓｓｅｌのクライテリアに当てはまり且つ登録前６±１日に生じた仙痛症状を有し、生後２１〜９０日の患者が、この研究への参加に考慮される（Ｗｅｓｓｅｌ ＭＡ，Ｃｏｂｂ ＪＣ，Ｊａｃｋｓｏｎ ＥＢ，Ｈａｒｒｉｓ ＧＳ，Ｄｅｔｗｉｌｅｒ ＡＣ．時には、「仙痛」と呼ばれている乳児期におけるパロキシスマルファッシング（Ｐａｒｏｘｉｓｍａｌ ｆｕｓｓｉｎｇ）（Ｐａｒｏｘｉｓｍａｌ ｆｕｓｓｉｎｇ ｉｎ ｉｎｆａｎｃｙ，ｓｏｍｅｔｉｍｅｓ ｃａｌｌｅｄ “ｃｏｌｉｃ”）。Ｐｅｄｉａｔｒｉｃｓ １９５４；１４：４２１〜３５）。参加した全ての乳児には、やはりプロバイオティクスに対する反応に影響を与え得る食事の変動による腸内ミクロフローラの変動を減らすために、全て母乳だけを与える。乳児が慢性疾患若しくは消化器障害の臨床所見を有する場合、又は募集に先立つ１週間に乳児に抗生物質若しくはプロバイオティクスのいずれかを投与された場合には、乳児は除外される。
【００５４】
この研究において、仙痛の乳児は以下の治療におけるプロバイオティクス又はシメチコンを投与されるためにランダム化される。すなわち、
（Ｐ１）ラクトバチルス・ロイテリ株ＡＴＣＣ ５５７３０（ＳＤ２１１２とも呼ばれる）、
（Ｐ２）ラクトバチルス・ロイテリ株ＤＳＭ １７９３８（２００６年２月６日にブダペスト条約に基づいてＤＳＭＺ−Ｄｅｕｔｓｃｈｅ Ｓａｍｍｌｕｎｇ ｖｏｎ Ｍｉｋｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｎ ｕｎｄ Ｚｅｌｌｋｕｌｔｕｒｅｎ ＧｍｂＨ（Ｍａｓｃｈｅｒｏｄｅｒ Ｗｅｇ ｌ ｂ、Ｄ−３８１２４ Ｂｒａｕｎｓｃｈｗｅｉｇ）に寄託された）
（Ｐ３）ラクトバチルス・ロイテリ株ＡＴＣＣ ＰＴＡ ４６６０ 及び
（Ｓ）シメチコンである。
【００５５】
Ｌ．ロイテリは、２８日間、１日につき１回、授乳後３０分に、市販のＭＣＴ油（中鎖脂肪酸トリグリセリド油）懸濁液５滴中の１０８コロニー形成単位（ＣＦＵ）の用量で投与される。ＭＣＴ油は天然に存在しており、最も豊富な供給源はヤシ油である。ほとんどのＭＣＴ油は、ヤシ油から精製される。ＭＣＴ油は、無味で低粘性の透明な薄い色の液体である。この油懸濁液は、２〜８℃で２１ヵ月間安定である（製造業者（ＢｉｏＧａｉａ ＡＢ、Ｓｔｏｃｋｈｏｌｍ、Ｓｗｅｄｅｎ）によって実証されたように）、（ＭＣＴ油の他の製造業者は、Ａｋｏｍｅｄ Ｒ、ｂｙ Ｋａｒｌｓｈａｍｎｓ ＡＢ、Ｋａｒｌｓｈａｍｎ、Ｓｗｅｄｅｎである）。研究の間、親は使用しないときは冷蔵庫で製品を保管するように指示されている。シメチコン（Ｓ）は、１日に２回、２８日間、授乳後に市販溶液（Ｍｙｌｉｃｏｎ Ｉｎｆａｎｔｓ Ｇａｓ Ｒｅｌｉｅｆ Ｄｒｏｐｓ、Ｊ＆Ｊ、７０５０ Ｃａｍｐ Ｈｉｌｌ Ｒｄ．、Ｆｏｒｔ Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ、Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ、１９０３４−２２１０、ＵＳＡ）の３ｍＬ中６０ｍｇ／日の用量で投与された。登録時に全ての母親は報告されるような牛乳が含まれていない食べ物に従うよう要請された。すなわち、ミルク、ヨーグルト、新鮮な臭いの強いチーズ、クリーム、バター、ビスケットを避けること。食事の順守は、全治療期間続けた食事日記で監視される。７日、１４日、２１日及び２８日目に、１つの研究でこの食事のコンプライアンスを調べた。
【００５６】
実施施設の倫理委員会は、研究プロトコルを承認し、乳児は文書によるインフォームドコンセントが親から得られた後に初めてこの研究に登録される。
【００５７】
追跡訪問
小児科医が初めて乳児を診察した日を、１日目として定義する。この時にそれぞれの乳児は診察を受け、分娩のタイプ、出生時体重並びに在胎月齢、消化器疾患及びアトピーの家族歴に関する背景データを得るために親は面接を受けた。特に、乳児がアトピー性湿疹、アレルギー性鼻炎若しくは喘息を有する１人又は複数の家族（母親、父親及び／又は年長の兄弟姉妹）を有する場合、最後の１つはポジティブとみなされる。さらに研究期間でのアトピー性疾患のあらゆる徴候及び症状が記録された。また親も、募集（０日目）以後の毎日の平均号泣時間及び仙痛症状の回数についてデータを記録するように要請された。医師は研究群のいずれかに子供を無作為割付けした。研究製品の投与を１日目に始めた。
【００５８】
親には研究に関する文書による情報が与えられ、体系化した日記を使用して０日目から開始して２８日目まで、慰めることができない号泣症状の毎日の回数及びその持続時間、便の硬さ及び回数並びに何らかの観察された副作用（便秘、嘔吐、皮膚反応など）を記録するように求められる。全ての親が、同一のやり方で号泣時間を記載したこと及び乳児が薬物を適切に与えられたことを確認するために、親を助けるために研究者の１人が何時も電話で対応できる。
【００５９】
それぞれの患者は、１日、７日、１４日、２１日及び２８日目に同じ小児科医によって再検査される。
【００６０】
結果
登録された母乳栄養仙痛乳児１２０人のうち、３０人をＬ．ロイテリＡＴＣＣ ５５７３０を用いる治療に無作為割付けし（Ｐ１）、３０人をＬ．ロイテリＤＳＭ １７９３８用いる治療に無作為割付けし（Ｐ２）、３０人をＬ．ロイテリＡＴＣＣ ＰＴＡ ４６６０を用いる治療に無作為割付けし（Ｐ３）、３０人をシメチコンを用いる治療に無作為割付けする（Ｓ）。本治験に関連する何らかの副作用のために治験から脱落した乳児はいない。いずれの群も、年齢、出生時体重、性別、分娩のタイプ、アトピー又は消化器疾患の家族歴及び喫煙に対する曝露に関して類似している。
【００６１】
１日当たりの平均号泣時間は、０日及び１日目においては投与群間で類似している。Ｌ．ロイテリＡＴＣＣ ５５７３０（Ｐ１）及びＤＳＭ １７９３８（Ｐ２）を投与されている乳児は、ＡＴＣＣ ＰＴＡ ４６６０及びシメチコン（Ｓ）で治療された乳児に比べて、７日目までに毎日の号泣時間の有意な減少を示した。１４日、２１日及び２８日目で、号泣時間は４つの投与群間で有意に異なる。２８日目でこの研究の開始からの終わりまでの１日当たりの平均号泣時間における（Ｐ１）と（Ｓ）との間の差は８２分であり、この研究の開始からの終わりまでの１日当たりの平均号泣時間における（Ｐ２）と（Ｓ）との間の差は８３分である（表１）。この結果から分かるように、試験製品の投与前、この４つの投与群はかなり同等である。既に７日後に、２つのその他の代替物に対してＬ．ロイテリ株ＡＴＣＣ ５５７３０ 及びＤＳＭ １７９３８を優勢にする明らかな差が存在する。２８日後にこの差はさらに大きくなった。
表１．Ｌ．ロイテリ及びとシメチコン群における号泣時間（１日当たりの平均分）
【表１】
【００６２】
本発明について特定の実施例に関して説明してきたが、多くの変形、修正、及び実施形態が可能であり、したがって全てのそのような多くの変形、修正及び実施形態は本発明の趣旨及び範囲内にあるとみなされるべきであることが理解されよう。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
適切な宿主細胞でのＩＬ−１０の発現を促進する乳酸菌菌株の能力を試験すること、該宿主細胞によるＩＬ−１０産生の増加を引き起こす乳酸菌菌株を選択すること、及び該選択された菌株の細胞を含む製品を製造することを含む、乳児仙痛を低減するための製品を製造する方法。
【請求項２】
前記乳酸菌菌株が、ラクトバチルス・ロイテリの菌株である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記乳酸菌菌株が、ラクトバチルス・ロイテリ菌株ＤＳＭ １７９３８である、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
請求項１に記載の前記選択された乳酸菌菌株の生物学的純粋培養物を本質的に含む乳児仙痛を低減するための細菌製品であって、該菌株がＩＬ−１０産生を増加させる能力に関して選択されたたものである、上記細菌製品。
【請求項５】
前記乳酸菌菌株が、ラクトバチルス・ロイテリの菌株である、請求項４に記載の製品。
【請求項６】
前記乳酸菌菌株が、ラクトバチルス・ロイテリ菌株ＤＳＭ １７９３８である、請求項５に記載の製品。
【請求項７】
中鎖脂肪酸トリグリセリド油をさらに含む、請求項４〜６のいずれか一項に記載の製品。
【請求項８】
乳児仙痛と診断された乳児に投与するための、請求項１に記載の方法によって製造された製品。
【請求項１】
適切な宿主細胞でのＩＬ−１０の発現を促進する乳酸菌菌株の能力を試験すること、該宿主細胞によるＩＬ−１０産生の増加を引き起こす乳酸菌菌株を選択すること、及び該選択された菌株の細胞を含む製品を製造することを含む、乳児仙痛を低減するための製品を製造する方法。
【請求項２】
前記乳酸菌菌株が、ラクトバチルス・ロイテリの菌株である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記乳酸菌菌株が、ラクトバチルス・ロイテリ菌株ＤＳＭ １７９３８である、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
請求項１に記載の前記選択された乳酸菌菌株の生物学的純粋培養物を本質的に含む乳児仙痛を低減するための細菌製品であって、該菌株がＩＬ−１０産生を増加させる能力に関して選択されたたものである、上記細菌製品。
【請求項５】
前記乳酸菌菌株が、ラクトバチルス・ロイテリの菌株である、請求項４に記載の製品。
【請求項６】
前記乳酸菌菌株が、ラクトバチルス・ロイテリ菌株ＤＳＭ １７９３８である、請求項５に記載の製品。
【請求項７】
中鎖脂肪酸トリグリセリド油をさらに含む、請求項４〜６のいずれか一項に記載の製品。
【請求項８】
乳児仙痛と診断された乳児に投与するための、請求項１に記載の方法によって製造された製品。
【図１】
【図２ａ】
【図２ｂ】
【図２ａ】
【図２ｂ】
【公開番号】特開２０１０−２０２６５４（Ｐ２０１０−２０２６５４Ａ）
【公開日】平成２２年９月１６日（２０１０．９．１６）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１０−９２７２８（Ｐ２０１０−９２７２８）
【出願日】平成２２年４月１４日（２０１０．４．１４）
【分割の表示】特願２００９−５１４２３９（Ｐ２００９−５１４２３９）の分割
【原出願日】平成１９年５月３０日（２００７．５．３０）
【出願人】（５００１５５５７８）バイオガイア・エイビー (13)
【氏名又は名称原語表記】Ｂｉｏｇａｉａ ＡＢ
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２２年９月１６日（２０１０．９．１６）
【国際特許分類】
【出願日】平成２２年４月１４日（２０１０．４．１４）
【分割の表示】特願２００９−５１４２３９（Ｐ２００９−５１４２３９）の分割
【原出願日】平成１９年５月３０日（２００７．５．３０）
【出願人】（５００１５５５７８）バイオガイア・エイビー (13)
【氏名又は名称原語表記】Ｂｉｏｇａｉａ ＡＢ
【Ｆターム（参考）】
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