免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプタータンパク及び／又は免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプター様タンパク産生抑制剤及びその使用
【課題】免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプタータンパク及び／又は免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプター様タンパク産生抑制剤を提供する。
【解決手段】搾乳動物の乳由来の免疫グロブリン及び／又はそのＦｃフラグメントを有効成分として含有せしめて免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプタータンパク及び／又は免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプター様タンパク産生抑制剤とし、これを経口的に摂取する。この免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプタータンパク及び／又は免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプター様タンパク産生抑制剤は、アレルギー症又は関節リウマチ症を予防し、その症状を改善するために好ましく用いられる。
【解決手段】搾乳動物の乳由来の免疫グロブリン及び／又はそのＦｃフラグメントを有効成分として含有せしめて免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプタータンパク及び／又は免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプター様タンパク産生抑制剤とし、これを経口的に摂取する。この免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプタータンパク及び／又は免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプター様タンパク産生抑制剤は、アレルギー症又は関節リウマチ症を予防し、その症状を改善するために好ましく用いられる。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプタータンパク及び／又は免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプター様タンパク産生抑制剤及びその使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
免疫グロブリンはＩｇＧ，ＩｇＭ，ＩｇＡ，ＩｇＤ及びＩｇEに分類され、それぞれに対応する基本分子構造としてγ，μ，α，δ，ε鎖と呼ばれるＨ鎖を有することが知られている。免疫グロブリンのパパイン消化物であるＨ鎖のＣ末端側の部分は、Ｆｃフラグメントと呼ばれ、このＦｃフラグメントが結合する細胞表面上の受容体はＦｃレセプターと呼ばれている。免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプターは免疫担当細胞に発現して、免疫担当細胞の機能を発揮させるために重要な役割を果たすことが知られている。
【０００３】
また、免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプターに構造上の相同性を有する免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプター様タンパクも、免疫担当細胞の機能と重要な関係があると考えられている。
【０００４】
従来、例えば下記特許文献１には、Ｆｃレセプター産生促進剤の発明が開示されている。下記特許文献２には、Ｆｃレセプターに対するモノクローナル抗体の発明が開示されている。
【特許文献１】特開平６−３４０５８６号公報
【特許文献２】特開平９−３１６１００号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
しかしながら、従来、免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプタータンパク及び／又は免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプター様タンパクの産生を抑制することができる技術は少なかった。
【０００６】
したがって、本発明の目的は、免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプタータンパク及び／又は免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプター様タンパクの産生を抑制することができる技術を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは、上記目的を達成するために鋭意研究した結果、搾乳動物の乳由来の免疫グロブリン及び／又はそのＦｃフラグメントの経口的摂取により、免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプタータンパク及び／又は免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプター様タンパクの産生を抑制することができることを見出し、本発明を完成するに至った。
【０００８】
すなわち本発明は以下の通りである。
（１） 搾乳動物の乳由来の免疫グロブリン及び／又はそのＦｃフラグメントを有効成分として含有することを特徴とする免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプタータンパク及び／又は免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプター様タンパク産生抑制剤。
（２） 前記搾乳動物は、ウシ、ヤギ、ヒツジ、及びウマから選ばれた１種である前記（１）に記載の免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプタータンパク及び／又は免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプター様タンパク産生抑制剤。
（３） 前記免疫グロブリンは、ＩｇＧである前記（１）又は（２）に記載の免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプタータンパク及び／又は免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプター様タンパク産生抑制剤。
（４） 搾乳動物の乳から調製された脱脂乳、脱脂粉乳、乳清、乳清たんぱく質濃縮物、及び乳たんぱく質濃縮物から選ばれた少なくとも一種に含有する免疫グロブリン及び／又はそのＦｃフラグメントを有効成分として含有する前記（１）〜（３）のいずれか一つに記載の免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプタータンパク及び／又は免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプター様タンパク産生抑制剤。
（５） 前記有効成分として前記免疫グロブリンを含有し、更に該免疫グロブリンに特異的に認識される抗体標的物質を含有する前記（１）〜（４）のいずれか一つに記載の免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプタータンパク及び／又は免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプター様タンパク産生抑制剤。
（６） 前記搾乳動物の乳は、搾乳動物を免疫原性物質で過免疫した後、搾乳して得た乳であり、かつ、前記免疫原性物質を特異的に認識する免疫グロブリンを含有する前記（５）に記載の免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプタータンパク及び／又は免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプター様タンパク産生抑制剤。
（７） 前記抗体標的物質が、前記過免疫するために用いた免疫原性物質と同一物質である前記（６）に記載の免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプタータンパク及び／又は免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプター様タンパク産生抑制剤。
（８） 前記抗体標的物質が、大腸菌、酵母、乳酸菌、納豆菌、及び花粉から選ばれた１種である前記（５）〜（７）のいずれか一つに記載の免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプタータンパク及び／又は免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプター様タンパク産生抑制剤。
（９） 前記免疫原性物質が、大腸菌、酵母、乳酸菌、納豆菌、及び花粉から選ばれた１種である前記（８）に記載の免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプタータンパク及び／又は免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプター様タンパク産生抑制剤。
（１０） 前記（１）〜（９）のいずれか一つに記載の免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプタータンパク及び／又は免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプター様タンパク産生抑制剤を配合してなる飲食品。
（１１） 練乳、アイスクリーム、ヨーグルト、酸乳等の乳製品から選ばれた１種である前記（１０）に記載の飲食品。
（１２） 前記（１）〜（９）のいずれか一つに記載の免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプタータンパク及び／又は免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプター様タンパク産生抑制剤を経口摂取することを特徴とする免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプタータンパク及び／又は免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプター様タンパク産生抑制方法。
【０００９】
本発明においては、前記免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプタータンパク及び／又は免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプター様タンパク産生抑制剤を経口摂取することで、免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプタータンパク及び／又は免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプター様タンパクの産生を抑制することができる。
【発明の効果】
【００１０】
本発明により、免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプタータンパク及び／又は免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプター様タンパクの産生を抑制することができる技術が提供される。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１１】
本発明の免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプタータンパク及び／又は免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプター様タンパク産生抑制剤は、搾乳動物の乳由来の免疫グロブリン及び／又はそのＦｃフラグメントを有効成分として含有することを特徴とする。
【００１２】
本発明において、「搾乳動物の乳」とは、搾乳のために飼育できる動物から得られる乳でありウシ、ヤギ、ヒツジ、ウマ等の乳を好ましく例示できる。
【００１３】
本発明において、「免疫グロブリン」とは、ＩｇＧ，ＩｇＭ，ＩｇＡ，ＩｇＤ及びＩｇEである。
【００１４】
本発明において、「免疫グロブリンのＦｃフラグメント」とは、ＩｇＧ，ＩｇＭ，ＩｇＡ，ＩｇＤ、又はＩｇEのパパイン消化物である免疫グロブリンＨ鎖のＣ末端側の部分に相当するＦｃフラグメント領域部分のタンパク断片であり、構造上それと同等の性質を有するものを含む。
【００１５】
本発明においては、免疫グロブリンとしてＩｇＧを用いることが好ましい。
【００１６】
本発明においては、搾乳動物の乳から調製された脱脂乳、脱脂粉乳、乳清、乳清たんぱく質濃縮物、及び乳たんぱく質濃縮物から選ばれた少なくとも一種に含有する免疫グロブリン及び／又はそのＦｃフラグメントを、上記の有効成分とすることが好ましい。
【００１７】
本発明の一つの態様においては、有効成分として前記免疫グロブリンを含有し、更に該免疫グロブリンに特異的に認識される抗体標的物質を含有する。
【００１８】
本発明の上記一態様において、「免疫グロブリンに特異的に認識される抗体標的物質」とは、その構造に起因して免疫グロブリンに対して免疫学的に有意な選択的結合能を有する物質を意味する。
【００１９】
本発明において、「免疫グロブリンに特異的に認識される」とは、免疫学分野において用いられる用語の意味における抗原―抗体複合体を形成できる程度に選択性及び親和性を有することを意味する。そして、本発明において、「免疫グロブリンに特異的に認識される抗体標的物質」とは、その構造に起因して免疫グロブリンに対して免疫学的に有意な抗原―抗体複合体を形成できる物質を意味する。
【００２０】
本発明において用いられる抗体標的物質は、ヒトに継続的に経口摂取しても有害とならない物質であれば特に制限されることはなく、後述する過免疫をするために用いられる免疫原性物質と同一物質であってもよい。また、該免疫原性物質と物質として同一ではないが、共通の認識部位を有することにより、当該免疫グロブリンに特異的に認識される物質であってもよい。
【００２１】
具体的には、例えば、大腸菌、酵母、乳酸菌、納豆菌、花粉等を用いることができる。なお、ヒトに継続的に経口摂取しても有害とならないように、抗体標的物質が細菌や微生物である場合には、加熱、加圧処理等することで殺菌してその死菌体を用いることが好ましい。また、酵母、乳酸菌、納豆菌等は、従来から食品や健康食品として経口的に摂取されていたものであるので、本発明に好ましく用いることができる。更にまた、後述する過免疫をするために用いられる免疫原性物質を認識する抗原―抗体認識部分を同定して、上記の抗体標的物質のかわりにその認識部分のみを抗体標的物質として用いることもできる。
【００２２】
本発明の他の態様においては、前記搾乳動物の乳は、搾乳動物を免疫原性物質で過免疫した後、搾乳して得た乳であり、かつ、前記免疫原性物質を特異的に認識する免疫グロブリンを含有する。
【００２３】
本発明の上記一態様において、「過免疫」とは、当該分野において用いられる用語の意味において、通常よりも自然に又は人工的に免疫反応が進んだ状態を意味する。動物に筋肉注射、皮下注射、静脈注射、腹腔注射、経口摂取等の方法により任意の物質を投与し、その物質に対する免疫反応状態を誘導して、その動物を過免疫の状態とすることができる。
【００２４】
本発明の上記一態様において、「免疫原性物質」とは、動物に筋肉注射、皮下注射、静脈注射、腹腔注射、経口摂取等の方法により投与すると、その物質に対する免疫反応状態を誘導して、その動物を過免疫の状態とすることができる物質を意味する。そのような作用を有するものであれば特に制限されないが、本発明においては、免疫原性物質として、例えば、大腸菌、酵母、乳酸菌、納豆菌、花粉等を用いることができる。なお、免疫原性物質が細菌や微生物である場合には、加熱、加圧処理等することで殺菌してその死菌体を用いることが好ましい。
【００２５】
本発明の上記一態様において、「搾乳動物を免疫原性物質で過免疫した後、搾乳して得た乳」とは、ウシ、ヤギ、ヒツジ、ウマ等の搾乳動物を、任意の免疫原性物質で過免疫した後、搾乳により採取される乳を意味する。乳が、ウシ、ヤギ、ヒツジ等の反芻動物から搾乳により採取される乳であることが好ましく、より好ましくは乳牛の乳である。
【００２６】
これらの搾乳動物を免疫原性物質で過免疫すると、その免疫原性物質を特異的に認識する免疫グロブリンであるＩｇＧが乳に移行し蓄積する。なお、牛乳中のＩｇＧはＩｇＧ1が殆どである。
【００２７】
免疫原性物質による搾乳動物の過免疫は、特開昭５２−１０１４号公報、特開昭５４−１１３４２５号公報、特開昭５７−１８８５２３号公報等に記載されている公知の方法に準じて行うことができる。
【００２８】
すなわち、例えば、下記表１に示す２６種類の細菌をそれぞれ常法にしたがって培養し、加熱殺菌した後、各菌体を回収して凍結乾燥する。各凍結乾燥菌体を等量ずつ採取して混合し、滅菌した生理的食塩水に懸濁し、４×１０８細胞／ｍｌとなるように希釈して死菌体ワクチンを調製して免疫原性物質として用いる。そして、雌乳牛に前記の死菌体ワクチン５ｍｌ（２０×１０８細胞）を１週間に１回、連続８週間以上筋肉注射し、乳中に十分な量のＩｇＧが含まれているのを確認してから、乳を採取する。なお、免疫反応状態を誘導した後は、２週間毎に同一量の上記ワクチンをブースター注射すれば、死菌体ワクチンに対する抗体産生を維持できる。
【００２９】
【表１】
【００３０】
上記の表１右欄には、このように得られた乳中の総ＩｇＧ量に含まれる各種細菌に対する特異的抗体の含有量について、各種細菌をコーティングしたマイクロプレートを用いたＥＬＩＳＡ法により定量した結果の一例を示す。これによれば、例えば、エシィリキア コリ（Ｅｓｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ；ＡＴＣＣ Ｎｏ．２６）を特異的に認識するＩｇＧは１，６８３μｇ／ｇ（総ＩｇＧ）の含有量であり、ストレプトコッカス ビオゲネス タイプＡ１４型（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ Ａｔｙｐｅ１４；ＡＴＣＣ Ｎｏ．１２９７２）を特異的に認識するＩｇＧは４８，３６８μｇ／ｇ（総ＩｇＧ）の含有量であり、それぞれの細菌を特異的に認識するＩｇＧが乳中に移行・蓄積していることがわかる。
【００３１】
なお、上記表１に示す２６種類の細菌で過免疫した乳牛から採取した乳から調製した脱脂粉乳、あるいは乳清たんぱく質濃縮物は、例えば、脱脂粉乳として商品名「スターリミルク」、乳清たんぱく質濃縮物として商品名「スターリ乳清」、あるいは脱脂粉乳／乳清たんぱく質濃縮物混合物として商品名「スターリミルクゴールド」（いずれも兼松ウェルネス株式会社から販売）等が市販されており、本発明に好ましく用いることができる。
【００３２】
なお、これらの脱脂粉乳や乳清たんぱく質濃縮物は、水に戻して飲用する際の飲用１回分である２０〜４０ｇ当たりに総ＩｇＧ換算で９６〜１９２ｍｇのＩｇＧを含有する組成物である。
【００３３】
本発明において用いられる免疫グロブリンのＦｃフラグメントは、上記の初乳、免疫ミルクから調製された免疫グロブリンを、パパイン、ペプシン、トリプシン、及びパンクレアチン等のプロテアーゼで処理することにより得ることができる。上記の脱脂乳、脱脂粉乳、乳清、乳清たんぱく質濃縮物、及び乳たんぱく質濃縮物をそのままプロテアーゼ処理してもよい。
【００３４】
具体的には、例えば、精製した免疫グロブリンを、システイン、ＥＤＴＡ及び塩化ナトリウムを含むリン酸緩衝液（ｐＨ７．３）に溶解し、適量のパパインを添加して４０〜５５℃で６０〜１２０分間反応させた後、酵素を失活させることにより調製することができる。本発明においては、上記パパイン消化物をゲル濾過クロマトグラフィー及びアフィニティクロマトグラフィーに供して、Ｆｃフラグメントを分離して用いることができる。
【００３５】
本発明においては、上記の乳や乳加工組成物から、分離膜やカラムクロマトグラフィー等を用いて免疫グロブリン及び／又はそのＦｃフラグメントを濃縮・精製して本発明の有効成分として用いることができる。また、上記の脱脂乳、脱脂粉乳、乳清、乳清たんぱく質濃縮物、及び乳たんぱく質濃縮物をそのまま本発明の有効成分として用いることもできる。本発明の有効成分は、牛乳の成分からなるものであるので、安全性に優れ、継続的に長期間に摂取するのに適している。
【００３６】
本発明の免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプタータンパク及び／又は免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプター様タンパク産生抑制剤は、これを経口的に摂取することで、腸管の免疫担当細胞であるパイエル板細胞に主に影響を与えて、免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプタータンパク及び／又は免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプター様タンパクの産生を抑制することができる。
【００３７】
本発明の免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプタータンパク及び／又は免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプター様タンパク産生抑制剤によれば、後述する実施例で示すように、例えば高親和性ＩｇＥ受容体であるＦｃεＲ１の産生を抑制して、花粉症、ダニアレルギー、食物アレルギー等のアレルギー症の改善及び／又はその予防をすることができる。また、例えば、免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプター様タンパクであるＦｃレセプター様３（ＦＣＲＬ３）タンパクの産生を抑制して、関節リウマチの改善及び／又はその予防をすることができる。
【００３８】
本発明の免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプタータンパク及び／又は免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプター様タンパク産生抑制剤の成人１日当りの有効摂取量は、摂取者の健康状態、症状、体重、性別、年齢等によって適宜選択すればよいが、通常、免疫グロブリン及び／又はそのＦｃフラグメントの質量換算で０．１ｍｇ〜１０ｍｇである。
【００３９】
また、その有効摂取量において、抗体標的物質の有効摂取量は、その抗原―抗体複合体の特性に応じて有効な抗原―抗体複合体が形成されるように適宜選択すればよいが、通常、成人１日当り０．１μｇ〜１０ｇとすることが好ましい。
【００４０】
本発明の免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプタータンパク及び／又は免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプター様タンパク産生抑制剤は、他の成分として、例えば、免疫調節作用を有することが知られている、ラクトフェリン、カゼイン、ラクトアルブミン等、又はそれらに由来するカゼインホスホペプチド、グリコマクロペプチド、パラ−κ−カゼイン等の生物活性ペプチド又はその誘導体等を含むことができ、これらの成分による相乗効果を期待することができる。
【００４１】
本発明の免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプタータンパク及び／又は免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプター様タンパク産生抑制剤の製剤形態は、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、細粒剤、散剤、丸剤、液剤、ゼリー、チュアブル、ペースト等が挙げられ、有効性を損わない範囲で、食品、及び医薬的に許容される担体、賦形剤、糖類、甘味料、香料、酸味料、着色料、その他補助的添加剤を配合することができる。
【００４２】
一方、本発明の飲食品は、上記の免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプタータンパク及び／又は免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプター様タンパク産生抑制剤を配合してなるものであるが、そのような飲食品として、練乳、アイスクリーム、ヨーグルト、酸乳等の乳製品が挙げられる。
【００４３】
上記の飲食品への免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプタータンパク及び／又は免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプター様タンパク産生抑制剤の配合量は、飲食品の種類及び上述した有効摂取量に基いて適宜設定すればよく、また、食品衛生上許容される賦形剤、安定剤、防腐剤、保存剤、光沢剤、増粘剤、着色剤、ミネラル類、ビタミン類、糖類、香料、油脂、アミノ酸等の添加剤を適宜配合することができる。
【実施例】
【００４４】
以下実施例を挙げて本発明を具体的に説明するが、これらの実施例は本発明の範囲を限定するものではない。
【００４５】
以下の試験例に用いるためにＩｇＧ含有組成物を調製した。すなわち、ホルスタイン種乳牛の初乳に硫酸アンモニウムを３３質量％飽和濃度になるように加え、得られた沈殿を蒸留水に対して一晩透析して乳たんぱく質濃縮物を調製した。この乳たんぱく質濃縮物を、常法にしたがってイオン交換カラムクロマトグラフィー（商品名「ＤＥＡＥ Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ａ−５０」、Ｐｈａｒｍａｃｉａ社製）、プロテインＧカラムクロマトグラフィー（商品名「ＵｌｔｒａＬｉｎｋ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｇ ｐｌｕｓ」、Ｐｉｅｒｃｅ社製）、プロテインＡカラムクロマトグラフィー（商品名「Ｓｈｏｄｅｘ Ａｆｐａｋ ＡＰＡ−８９４」、昭和電工株式会社製）に供し、ＩｇＧを分離して、総ＩｇＧ濃度３．０ｍｇ／ｍｌ（ＩｇＧ１：ＩｇＧ２＝９６：４）のＩｇＧ含有組成物を調製した。
【００４６】
また、ＩｇＧのＦｃフラグメントを調製するために、上記のようにして得られたＩｇＧのパパイン消化を行った。パパイン消化は、システイン、ＥＤＴＡ及び塩化ナトリウムを含むリン酸緩衝液（ｐＨ７．３）中で、基質：酵素＝５０：１にして、５５℃で２時間反応を行った。各パパイン消化物をプロテインＧカラムクロマトグラフィー（商品名「UltraLink Protein G plus」、Pierce社製）に供し、Ｆｃフラグメントを分離精製した。
【００４７】
一方、抗体標的物質として大腸菌の死菌体を調製した。すなわち、大腸菌を、菌体成分が遊離しない低温度保持殺菌処理（７５℃で１５分）し、ＰＢＳ緩衝液で洗浄した後、ＰＢＳ緩衝液に１×１０１１個／ｍｌの細胞濃度で懸濁し、これを大腸菌含有組成物とした。
【００４８】
得られたＩｇＧ、Ｆｃフラグメント及び大腸菌含有組成物を用いて以下の試験を行った。
【００４９】
<試験例１> （ＤＮＡマイクロアレイによる免疫関連遺伝子の解析）
マウス用無蛋白飼料（Purina Mills社製、商品名「Purified Diet」）にオボアルブミンを添加したものをベースにして下記表２に示す試験飼料を調製し、４週齢のＣ３Ｈ／ＨｅＮ系雄マウスに自由摂取させた。なお、下記表２中の試験飼料１に配合されたＩｇＧ及び大腸菌は、上記のＩｇＧ含有組成物（ＩｇＧ濃度３．０ｍｇ／ｍｌ）、上記の大腸菌含有組成物（１×１０１１個／ｍｌ）を、混和して、遠心操作により大腸菌を回収したもの（大腸菌を認識するＩｇＧを含む）であり、大腸菌と大腸菌を認識するＩｇＧとの複合体（ＩｇＧ−大腸菌複合体）である。
【００５０】
そして、その摂取開始から５週目にマウスを麻酔下に解剖し、小腸からパイエル板を切り分け、０．１ｍＭのＥＤＴＡを含む３７℃のＨａｎｋｓ’Ｂａｌａｎｃｅｄ Ｓａｌｔ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ（ＨＢＳＳ）中で攪拌することで、パイエル板上皮細胞を上澄みに遊離させ、遠心操作によりパイエル板細胞を沈殿として回収した。
【００５１】
【表２】
【００５２】
採取したパイエル板細胞から常法に従いｍＲＮＡを抽出し、ＤＮＡマイクロアレイ法によってそれぞれの試験群又は対照群のパイエル板細胞における遺伝子発現量の相対値を測定した。なお、測定では誤差を最小化するため、各試験群及び対照群につき４匹のマウスを用いてその遺伝子発現量の相対値を測定し、それらの平均を求めた。図１は、全３３６９６遺伝子について、試験飼料１を摂取させた試験群と対照群との比較における発現量の相関を示すグラフである。また、図２は、全３３６９６遺伝子について、試験飼料２を摂取させた試験群と対照群との比較における発現量の相関を示すグラフである。
【００５３】
【表３】
【００５４】
その結果、マウスに牛乳ＩｇＧ−大腸菌複合体を含有する試験飼料１、又は牛乳ＩｇＧのＦｃフラグメントを含有する試験飼料２を経口的に摂取させることにより、高親和性ＩｇＥ受容体であるＦｃεＲ１（α、β、及びγサブユニットからなる）の遺伝子発現を減少させることができることが明らかとなった。また、マウスに牛乳ＩｇＧ−大腸菌複合体を含有する試験飼料１、又は牛乳ＩｇＧのＦｃフラグメントを含有する試験飼料２を経口的に摂取させることにより、免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプター様タンパクであるＦｃレセプター様３（ＦＣＲＬ３）の遺伝子発現を減少させることができることが明らかとなった。
【００５５】
高親和性ＩｇＥ受容体であるＦｃεＲ１は、花粉症、ダニアレルギー、食物アレルギー等のアレルギー症に関与することが知られていることから、上記の作用効果によれば、花粉症、ダニアレルギー、食物アレルギー等のアレルギー症の症状の改善及び／又はその予防をすることが期待できる。また、免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプター様タンパクであるＦｃレセプター様３（ＦＣＲＬ３）は、関節リウマチ症に関与することが知られていることから、上記の作用効果によれば、関節リウマチ症の症状の改善及び／又はその予防をすることが期待できる。
【図面の簡単な説明】
【００５６】
【図１】マウスに牛乳ＩｇＧ−大腸菌複合体を摂取させた試験群と対照群との比較における全３３６９６遺伝子の発現量の相関を示すグラフである。
【図２】マウスに牛乳ＩｇＧＦｃフラグメントを摂取させた試験群と対照群との比較における全３３６９６遺伝子の発現量の相関を示すグラフである。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプタータンパク及び／又は免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプター様タンパク産生抑制剤及びその使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
免疫グロブリンはＩｇＧ，ＩｇＭ，ＩｇＡ，ＩｇＤ及びＩｇEに分類され、それぞれに対応する基本分子構造としてγ，μ，α，δ，ε鎖と呼ばれるＨ鎖を有することが知られている。免疫グロブリンのパパイン消化物であるＨ鎖のＣ末端側の部分は、Ｆｃフラグメントと呼ばれ、このＦｃフラグメントが結合する細胞表面上の受容体はＦｃレセプターと呼ばれている。免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプターは免疫担当細胞に発現して、免疫担当細胞の機能を発揮させるために重要な役割を果たすことが知られている。
【０００３】
また、免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプターに構造上の相同性を有する免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプター様タンパクも、免疫担当細胞の機能と重要な関係があると考えられている。
【０００４】
従来、例えば下記特許文献１には、Ｆｃレセプター産生促進剤の発明が開示されている。下記特許文献２には、Ｆｃレセプターに対するモノクローナル抗体の発明が開示されている。
【特許文献１】特開平６−３４０５８６号公報
【特許文献２】特開平９−３１６１００号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
しかしながら、従来、免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプタータンパク及び／又は免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプター様タンパクの産生を抑制することができる技術は少なかった。
【０００６】
したがって、本発明の目的は、免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプタータンパク及び／又は免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプター様タンパクの産生を抑制することができる技術を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは、上記目的を達成するために鋭意研究した結果、搾乳動物の乳由来の免疫グロブリン及び／又はそのＦｃフラグメントの経口的摂取により、免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプタータンパク及び／又は免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプター様タンパクの産生を抑制することができることを見出し、本発明を完成するに至った。
【０００８】
すなわち本発明は以下の通りである。
（１） 搾乳動物の乳由来の免疫グロブリン及び／又はそのＦｃフラグメントを有効成分として含有することを特徴とする免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプタータンパク及び／又は免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプター様タンパク産生抑制剤。
（２） 前記搾乳動物は、ウシ、ヤギ、ヒツジ、及びウマから選ばれた１種である前記（１）に記載の免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプタータンパク及び／又は免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプター様タンパク産生抑制剤。
（３） 前記免疫グロブリンは、ＩｇＧである前記（１）又は（２）に記載の免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプタータンパク及び／又は免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプター様タンパク産生抑制剤。
（４） 搾乳動物の乳から調製された脱脂乳、脱脂粉乳、乳清、乳清たんぱく質濃縮物、及び乳たんぱく質濃縮物から選ばれた少なくとも一種に含有する免疫グロブリン及び／又はそのＦｃフラグメントを有効成分として含有する前記（１）〜（３）のいずれか一つに記載の免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプタータンパク及び／又は免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプター様タンパク産生抑制剤。
（５） 前記有効成分として前記免疫グロブリンを含有し、更に該免疫グロブリンに特異的に認識される抗体標的物質を含有する前記（１）〜（４）のいずれか一つに記載の免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプタータンパク及び／又は免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプター様タンパク産生抑制剤。
（６） 前記搾乳動物の乳は、搾乳動物を免疫原性物質で過免疫した後、搾乳して得た乳であり、かつ、前記免疫原性物質を特異的に認識する免疫グロブリンを含有する前記（５）に記載の免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプタータンパク及び／又は免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプター様タンパク産生抑制剤。
（７） 前記抗体標的物質が、前記過免疫するために用いた免疫原性物質と同一物質である前記（６）に記載の免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプタータンパク及び／又は免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプター様タンパク産生抑制剤。
（８） 前記抗体標的物質が、大腸菌、酵母、乳酸菌、納豆菌、及び花粉から選ばれた１種である前記（５）〜（７）のいずれか一つに記載の免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプタータンパク及び／又は免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプター様タンパク産生抑制剤。
（９） 前記免疫原性物質が、大腸菌、酵母、乳酸菌、納豆菌、及び花粉から選ばれた１種である前記（８）に記載の免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプタータンパク及び／又は免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプター様タンパク産生抑制剤。
（１０） 前記（１）〜（９）のいずれか一つに記載の免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプタータンパク及び／又は免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプター様タンパク産生抑制剤を配合してなる飲食品。
（１１） 練乳、アイスクリーム、ヨーグルト、酸乳等の乳製品から選ばれた１種である前記（１０）に記載の飲食品。
（１２） 前記（１）〜（９）のいずれか一つに記載の免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプタータンパク及び／又は免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプター様タンパク産生抑制剤を経口摂取することを特徴とする免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプタータンパク及び／又は免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプター様タンパク産生抑制方法。
【０００９】
本発明においては、前記免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプタータンパク及び／又は免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプター様タンパク産生抑制剤を経口摂取することで、免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプタータンパク及び／又は免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプター様タンパクの産生を抑制することができる。
【発明の効果】
【００１０】
本発明により、免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプタータンパク及び／又は免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプター様タンパクの産生を抑制することができる技術が提供される。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１１】
本発明の免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプタータンパク及び／又は免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプター様タンパク産生抑制剤は、搾乳動物の乳由来の免疫グロブリン及び／又はそのＦｃフラグメントを有効成分として含有することを特徴とする。
【００１２】
本発明において、「搾乳動物の乳」とは、搾乳のために飼育できる動物から得られる乳でありウシ、ヤギ、ヒツジ、ウマ等の乳を好ましく例示できる。
【００１３】
本発明において、「免疫グロブリン」とは、ＩｇＧ，ＩｇＭ，ＩｇＡ，ＩｇＤ及びＩｇEである。
【００１４】
本発明において、「免疫グロブリンのＦｃフラグメント」とは、ＩｇＧ，ＩｇＭ，ＩｇＡ，ＩｇＤ、又はＩｇEのパパイン消化物である免疫グロブリンＨ鎖のＣ末端側の部分に相当するＦｃフラグメント領域部分のタンパク断片であり、構造上それと同等の性質を有するものを含む。
【００１５】
本発明においては、免疫グロブリンとしてＩｇＧを用いることが好ましい。
【００１６】
本発明においては、搾乳動物の乳から調製された脱脂乳、脱脂粉乳、乳清、乳清たんぱく質濃縮物、及び乳たんぱく質濃縮物から選ばれた少なくとも一種に含有する免疫グロブリン及び／又はそのＦｃフラグメントを、上記の有効成分とすることが好ましい。
【００１７】
本発明の一つの態様においては、有効成分として前記免疫グロブリンを含有し、更に該免疫グロブリンに特異的に認識される抗体標的物質を含有する。
【００１８】
本発明の上記一態様において、「免疫グロブリンに特異的に認識される抗体標的物質」とは、その構造に起因して免疫グロブリンに対して免疫学的に有意な選択的結合能を有する物質を意味する。
【００１９】
本発明において、「免疫グロブリンに特異的に認識される」とは、免疫学分野において用いられる用語の意味における抗原―抗体複合体を形成できる程度に選択性及び親和性を有することを意味する。そして、本発明において、「免疫グロブリンに特異的に認識される抗体標的物質」とは、その構造に起因して免疫グロブリンに対して免疫学的に有意な抗原―抗体複合体を形成できる物質を意味する。
【００２０】
本発明において用いられる抗体標的物質は、ヒトに継続的に経口摂取しても有害とならない物質であれば特に制限されることはなく、後述する過免疫をするために用いられる免疫原性物質と同一物質であってもよい。また、該免疫原性物質と物質として同一ではないが、共通の認識部位を有することにより、当該免疫グロブリンに特異的に認識される物質であってもよい。
【００２１】
具体的には、例えば、大腸菌、酵母、乳酸菌、納豆菌、花粉等を用いることができる。なお、ヒトに継続的に経口摂取しても有害とならないように、抗体標的物質が細菌や微生物である場合には、加熱、加圧処理等することで殺菌してその死菌体を用いることが好ましい。また、酵母、乳酸菌、納豆菌等は、従来から食品や健康食品として経口的に摂取されていたものであるので、本発明に好ましく用いることができる。更にまた、後述する過免疫をするために用いられる免疫原性物質を認識する抗原―抗体認識部分を同定して、上記の抗体標的物質のかわりにその認識部分のみを抗体標的物質として用いることもできる。
【００２２】
本発明の他の態様においては、前記搾乳動物の乳は、搾乳動物を免疫原性物質で過免疫した後、搾乳して得た乳であり、かつ、前記免疫原性物質を特異的に認識する免疫グロブリンを含有する。
【００２３】
本発明の上記一態様において、「過免疫」とは、当該分野において用いられる用語の意味において、通常よりも自然に又は人工的に免疫反応が進んだ状態を意味する。動物に筋肉注射、皮下注射、静脈注射、腹腔注射、経口摂取等の方法により任意の物質を投与し、その物質に対する免疫反応状態を誘導して、その動物を過免疫の状態とすることができる。
【００２４】
本発明の上記一態様において、「免疫原性物質」とは、動物に筋肉注射、皮下注射、静脈注射、腹腔注射、経口摂取等の方法により投与すると、その物質に対する免疫反応状態を誘導して、その動物を過免疫の状態とすることができる物質を意味する。そのような作用を有するものであれば特に制限されないが、本発明においては、免疫原性物質として、例えば、大腸菌、酵母、乳酸菌、納豆菌、花粉等を用いることができる。なお、免疫原性物質が細菌や微生物である場合には、加熱、加圧処理等することで殺菌してその死菌体を用いることが好ましい。
【００２５】
本発明の上記一態様において、「搾乳動物を免疫原性物質で過免疫した後、搾乳して得た乳」とは、ウシ、ヤギ、ヒツジ、ウマ等の搾乳動物を、任意の免疫原性物質で過免疫した後、搾乳により採取される乳を意味する。乳が、ウシ、ヤギ、ヒツジ等の反芻動物から搾乳により採取される乳であることが好ましく、より好ましくは乳牛の乳である。
【００２６】
これらの搾乳動物を免疫原性物質で過免疫すると、その免疫原性物質を特異的に認識する免疫グロブリンであるＩｇＧが乳に移行し蓄積する。なお、牛乳中のＩｇＧはＩｇＧ1が殆どである。
【００２７】
免疫原性物質による搾乳動物の過免疫は、特開昭５２−１０１４号公報、特開昭５４−１１３４２５号公報、特開昭５７−１８８５２３号公報等に記載されている公知の方法に準じて行うことができる。
【００２８】
すなわち、例えば、下記表１に示す２６種類の細菌をそれぞれ常法にしたがって培養し、加熱殺菌した後、各菌体を回収して凍結乾燥する。各凍結乾燥菌体を等量ずつ採取して混合し、滅菌した生理的食塩水に懸濁し、４×１０８細胞／ｍｌとなるように希釈して死菌体ワクチンを調製して免疫原性物質として用いる。そして、雌乳牛に前記の死菌体ワクチン５ｍｌ（２０×１０８細胞）を１週間に１回、連続８週間以上筋肉注射し、乳中に十分な量のＩｇＧが含まれているのを確認してから、乳を採取する。なお、免疫反応状態を誘導した後は、２週間毎に同一量の上記ワクチンをブースター注射すれば、死菌体ワクチンに対する抗体産生を維持できる。
【００２９】
【表１】
【００３０】
上記の表１右欄には、このように得られた乳中の総ＩｇＧ量に含まれる各種細菌に対する特異的抗体の含有量について、各種細菌をコーティングしたマイクロプレートを用いたＥＬＩＳＡ法により定量した結果の一例を示す。これによれば、例えば、エシィリキア コリ（Ｅｓｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ；ＡＴＣＣ Ｎｏ．２６）を特異的に認識するＩｇＧは１，６８３μｇ／ｇ（総ＩｇＧ）の含有量であり、ストレプトコッカス ビオゲネス タイプＡ１４型（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ Ａｔｙｐｅ１４；ＡＴＣＣ Ｎｏ．１２９７２）を特異的に認識するＩｇＧは４８，３６８μｇ／ｇ（総ＩｇＧ）の含有量であり、それぞれの細菌を特異的に認識するＩｇＧが乳中に移行・蓄積していることがわかる。
【００３１】
なお、上記表１に示す２６種類の細菌で過免疫した乳牛から採取した乳から調製した脱脂粉乳、あるいは乳清たんぱく質濃縮物は、例えば、脱脂粉乳として商品名「スターリミルク」、乳清たんぱく質濃縮物として商品名「スターリ乳清」、あるいは脱脂粉乳／乳清たんぱく質濃縮物混合物として商品名「スターリミルクゴールド」（いずれも兼松ウェルネス株式会社から販売）等が市販されており、本発明に好ましく用いることができる。
【００３２】
なお、これらの脱脂粉乳や乳清たんぱく質濃縮物は、水に戻して飲用する際の飲用１回分である２０〜４０ｇ当たりに総ＩｇＧ換算で９６〜１９２ｍｇのＩｇＧを含有する組成物である。
【００３３】
本発明において用いられる免疫グロブリンのＦｃフラグメントは、上記の初乳、免疫ミルクから調製された免疫グロブリンを、パパイン、ペプシン、トリプシン、及びパンクレアチン等のプロテアーゼで処理することにより得ることができる。上記の脱脂乳、脱脂粉乳、乳清、乳清たんぱく質濃縮物、及び乳たんぱく質濃縮物をそのままプロテアーゼ処理してもよい。
【００３４】
具体的には、例えば、精製した免疫グロブリンを、システイン、ＥＤＴＡ及び塩化ナトリウムを含むリン酸緩衝液（ｐＨ７．３）に溶解し、適量のパパインを添加して４０〜５５℃で６０〜１２０分間反応させた後、酵素を失活させることにより調製することができる。本発明においては、上記パパイン消化物をゲル濾過クロマトグラフィー及びアフィニティクロマトグラフィーに供して、Ｆｃフラグメントを分離して用いることができる。
【００３５】
本発明においては、上記の乳や乳加工組成物から、分離膜やカラムクロマトグラフィー等を用いて免疫グロブリン及び／又はそのＦｃフラグメントを濃縮・精製して本発明の有効成分として用いることができる。また、上記の脱脂乳、脱脂粉乳、乳清、乳清たんぱく質濃縮物、及び乳たんぱく質濃縮物をそのまま本発明の有効成分として用いることもできる。本発明の有効成分は、牛乳の成分からなるものであるので、安全性に優れ、継続的に長期間に摂取するのに適している。
【００３６】
本発明の免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプタータンパク及び／又は免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプター様タンパク産生抑制剤は、これを経口的に摂取することで、腸管の免疫担当細胞であるパイエル板細胞に主に影響を与えて、免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプタータンパク及び／又は免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプター様タンパクの産生を抑制することができる。
【００３７】
本発明の免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプタータンパク及び／又は免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプター様タンパク産生抑制剤によれば、後述する実施例で示すように、例えば高親和性ＩｇＥ受容体であるＦｃεＲ１の産生を抑制して、花粉症、ダニアレルギー、食物アレルギー等のアレルギー症の改善及び／又はその予防をすることができる。また、例えば、免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプター様タンパクであるＦｃレセプター様３（ＦＣＲＬ３）タンパクの産生を抑制して、関節リウマチの改善及び／又はその予防をすることができる。
【００３８】
本発明の免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプタータンパク及び／又は免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプター様タンパク産生抑制剤の成人１日当りの有効摂取量は、摂取者の健康状態、症状、体重、性別、年齢等によって適宜選択すればよいが、通常、免疫グロブリン及び／又はそのＦｃフラグメントの質量換算で０．１ｍｇ〜１０ｍｇである。
【００３９】
また、その有効摂取量において、抗体標的物質の有効摂取量は、その抗原―抗体複合体の特性に応じて有効な抗原―抗体複合体が形成されるように適宜選択すればよいが、通常、成人１日当り０．１μｇ〜１０ｇとすることが好ましい。
【００４０】
本発明の免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプタータンパク及び／又は免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプター様タンパク産生抑制剤は、他の成分として、例えば、免疫調節作用を有することが知られている、ラクトフェリン、カゼイン、ラクトアルブミン等、又はそれらに由来するカゼインホスホペプチド、グリコマクロペプチド、パラ−κ−カゼイン等の生物活性ペプチド又はその誘導体等を含むことができ、これらの成分による相乗効果を期待することができる。
【００４１】
本発明の免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプタータンパク及び／又は免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプター様タンパク産生抑制剤の製剤形態は、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、細粒剤、散剤、丸剤、液剤、ゼリー、チュアブル、ペースト等が挙げられ、有効性を損わない範囲で、食品、及び医薬的に許容される担体、賦形剤、糖類、甘味料、香料、酸味料、着色料、その他補助的添加剤を配合することができる。
【００４２】
一方、本発明の飲食品は、上記の免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプタータンパク及び／又は免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプター様タンパク産生抑制剤を配合してなるものであるが、そのような飲食品として、練乳、アイスクリーム、ヨーグルト、酸乳等の乳製品が挙げられる。
【００４３】
上記の飲食品への免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプタータンパク及び／又は免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプター様タンパク産生抑制剤の配合量は、飲食品の種類及び上述した有効摂取量に基いて適宜設定すればよく、また、食品衛生上許容される賦形剤、安定剤、防腐剤、保存剤、光沢剤、増粘剤、着色剤、ミネラル類、ビタミン類、糖類、香料、油脂、アミノ酸等の添加剤を適宜配合することができる。
【実施例】
【００４４】
以下実施例を挙げて本発明を具体的に説明するが、これらの実施例は本発明の範囲を限定するものではない。
【００４５】
以下の試験例に用いるためにＩｇＧ含有組成物を調製した。すなわち、ホルスタイン種乳牛の初乳に硫酸アンモニウムを３３質量％飽和濃度になるように加え、得られた沈殿を蒸留水に対して一晩透析して乳たんぱく質濃縮物を調製した。この乳たんぱく質濃縮物を、常法にしたがってイオン交換カラムクロマトグラフィー（商品名「ＤＥＡＥ Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ａ−５０」、Ｐｈａｒｍａｃｉａ社製）、プロテインＧカラムクロマトグラフィー（商品名「ＵｌｔｒａＬｉｎｋ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｇ ｐｌｕｓ」、Ｐｉｅｒｃｅ社製）、プロテインＡカラムクロマトグラフィー（商品名「Ｓｈｏｄｅｘ Ａｆｐａｋ ＡＰＡ−８９４」、昭和電工株式会社製）に供し、ＩｇＧを分離して、総ＩｇＧ濃度３．０ｍｇ／ｍｌ（ＩｇＧ１：ＩｇＧ２＝９６：４）のＩｇＧ含有組成物を調製した。
【００４６】
また、ＩｇＧのＦｃフラグメントを調製するために、上記のようにして得られたＩｇＧのパパイン消化を行った。パパイン消化は、システイン、ＥＤＴＡ及び塩化ナトリウムを含むリン酸緩衝液（ｐＨ７．３）中で、基質：酵素＝５０：１にして、５５℃で２時間反応を行った。各パパイン消化物をプロテインＧカラムクロマトグラフィー（商品名「UltraLink Protein G plus」、Pierce社製）に供し、Ｆｃフラグメントを分離精製した。
【００４７】
一方、抗体標的物質として大腸菌の死菌体を調製した。すなわち、大腸菌を、菌体成分が遊離しない低温度保持殺菌処理（７５℃で１５分）し、ＰＢＳ緩衝液で洗浄した後、ＰＢＳ緩衝液に１×１０１１個／ｍｌの細胞濃度で懸濁し、これを大腸菌含有組成物とした。
【００４８】
得られたＩｇＧ、Ｆｃフラグメント及び大腸菌含有組成物を用いて以下の試験を行った。
【００４９】
<試験例１> （ＤＮＡマイクロアレイによる免疫関連遺伝子の解析）
マウス用無蛋白飼料（Purina Mills社製、商品名「Purified Diet」）にオボアルブミンを添加したものをベースにして下記表２に示す試験飼料を調製し、４週齢のＣ３Ｈ／ＨｅＮ系雄マウスに自由摂取させた。なお、下記表２中の試験飼料１に配合されたＩｇＧ及び大腸菌は、上記のＩｇＧ含有組成物（ＩｇＧ濃度３．０ｍｇ／ｍｌ）、上記の大腸菌含有組成物（１×１０１１個／ｍｌ）を、混和して、遠心操作により大腸菌を回収したもの（大腸菌を認識するＩｇＧを含む）であり、大腸菌と大腸菌を認識するＩｇＧとの複合体（ＩｇＧ−大腸菌複合体）である。
【００５０】
そして、その摂取開始から５週目にマウスを麻酔下に解剖し、小腸からパイエル板を切り分け、０．１ｍＭのＥＤＴＡを含む３７℃のＨａｎｋｓ’Ｂａｌａｎｃｅｄ Ｓａｌｔ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ（ＨＢＳＳ）中で攪拌することで、パイエル板上皮細胞を上澄みに遊離させ、遠心操作によりパイエル板細胞を沈殿として回収した。
【００５１】
【表２】
【００５２】
採取したパイエル板細胞から常法に従いｍＲＮＡを抽出し、ＤＮＡマイクロアレイ法によってそれぞれの試験群又は対照群のパイエル板細胞における遺伝子発現量の相対値を測定した。なお、測定では誤差を最小化するため、各試験群及び対照群につき４匹のマウスを用いてその遺伝子発現量の相対値を測定し、それらの平均を求めた。図１は、全３３６９６遺伝子について、試験飼料１を摂取させた試験群と対照群との比較における発現量の相関を示すグラフである。また、図２は、全３３６９６遺伝子について、試験飼料２を摂取させた試験群と対照群との比較における発現量の相関を示すグラフである。
【００５３】
【表３】
【００５４】
その結果、マウスに牛乳ＩｇＧ−大腸菌複合体を含有する試験飼料１、又は牛乳ＩｇＧのＦｃフラグメントを含有する試験飼料２を経口的に摂取させることにより、高親和性ＩｇＥ受容体であるＦｃεＲ１（α、β、及びγサブユニットからなる）の遺伝子発現を減少させることができることが明らかとなった。また、マウスに牛乳ＩｇＧ−大腸菌複合体を含有する試験飼料１、又は牛乳ＩｇＧのＦｃフラグメントを含有する試験飼料２を経口的に摂取させることにより、免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプター様タンパクであるＦｃレセプター様３（ＦＣＲＬ３）の遺伝子発現を減少させることができることが明らかとなった。
【００５５】
高親和性ＩｇＥ受容体であるＦｃεＲ１は、花粉症、ダニアレルギー、食物アレルギー等のアレルギー症に関与することが知られていることから、上記の作用効果によれば、花粉症、ダニアレルギー、食物アレルギー等のアレルギー症の症状の改善及び／又はその予防をすることが期待できる。また、免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプター様タンパクであるＦｃレセプター様３（ＦＣＲＬ３）は、関節リウマチ症に関与することが知られていることから、上記の作用効果によれば、関節リウマチ症の症状の改善及び／又はその予防をすることが期待できる。
【図面の簡単な説明】
【００５６】
【図１】マウスに牛乳ＩｇＧ−大腸菌複合体を摂取させた試験群と対照群との比較における全３３６９６遺伝子の発現量の相関を示すグラフである。
【図２】マウスに牛乳ＩｇＧＦｃフラグメントを摂取させた試験群と対照群との比較における全３３６９６遺伝子の発現量の相関を示すグラフである。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
搾乳動物の乳由来の免疫グロブリン及び／又はそのＦｃフラグメントを有効成分として含有することを特徴とする免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプタータンパク及び／又は免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプター様タンパク産生抑制剤。
【請求項２】
前記搾乳動物は、ウシ、ヤギ、ヒツジ、及びウマから選ばれた１種である請求項１に記載の免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプタータンパク及び／又は免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプター様タンパク産生抑制剤。
【請求項３】
前記免疫グロブリンは、ＩｇＧである請求項１又は２に記載の免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプタータンパク及び／又は免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプター様タンパク産生抑制剤。
【請求項４】
搾乳動物の乳から調製された脱脂乳、脱脂粉乳、乳清、乳清たんぱく質濃縮物、及び乳たんぱく質濃縮物から選ばれた少なくとも一種に含有する免疫グロブリン及び／又はそのＦｃフラグメントを有効成分として含有する請求項１〜３のいずれか一つに記載の免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプタータンパク及び／又は免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプター様タンパク産生抑制剤。
【請求項５】
前記有効成分として前記免疫グロブリンを含有し、更に該免疫グロブリンに特異的に認識される抗体標的物質を含有する請求項１〜４のいずれか一つに記載の免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプタータンパク及び／又は免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプター様タンパク産生抑制剤。
【請求項６】
前記搾乳動物の乳は、搾乳動物を免疫原性物質で過免疫した後、搾乳して得た乳であり、かつ、前記免疫原性物質を特異的に認識する免疫グロブリンを含有する請求項５に記載の免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプタータンパク及び／又は免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプター様タンパク産生抑制剤。
【請求項７】
前記抗体標的物質が、前記過免疫するために用いた免疫原性物質と同一物質である請求項６に記載の免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプタータンパク及び／又は免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプター様タンパク産生抑制剤。
【請求項８】
前記抗体標的物質が、大腸菌、酵母、乳酸菌、納豆菌、及び花粉から選ばれた１種である請求項５〜７のいずれか１つに記載の免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプタータンパク及び／又は免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプター様タンパク産生抑制剤。
【請求項９】
前記免疫原性物質が、大腸菌、酵母、乳酸菌、納豆菌、及び花粉から選ばれた１種である請求項８に記載の免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプタータンパク及び／又は免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプター様タンパク産生抑制剤。
【請求項１０】
前記請求項１〜９のいずれか１つに記載の免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプタータンパク及び／又は免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプター様タンパク産生抑制剤を配合してなる飲食品。
【請求項１１】
練乳、アイスクリーム、ヨーグルト、酸乳等の乳製品から選ばれた１種である請求項１０に記載の飲食品。
【請求項１２】
前記請求項１〜９のいずれか１つに記載の免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプタータンパク及び／又は免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプター様タンパク産生抑制剤を経口摂取することを特徴とする免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプタータンパク及び／又は免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプター様タンパク産生抑制方法。
【請求項１】
搾乳動物の乳由来の免疫グロブリン及び／又はそのＦｃフラグメントを有効成分として含有することを特徴とする免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプタータンパク及び／又は免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプター様タンパク産生抑制剤。
【請求項２】
前記搾乳動物は、ウシ、ヤギ、ヒツジ、及びウマから選ばれた１種である請求項１に記載の免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプタータンパク及び／又は免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプター様タンパク産生抑制剤。
【請求項３】
前記免疫グロブリンは、ＩｇＧである請求項１又は２に記載の免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプタータンパク及び／又は免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプター様タンパク産生抑制剤。
【請求項４】
搾乳動物の乳から調製された脱脂乳、脱脂粉乳、乳清、乳清たんぱく質濃縮物、及び乳たんぱく質濃縮物から選ばれた少なくとも一種に含有する免疫グロブリン及び／又はそのＦｃフラグメントを有効成分として含有する請求項１〜３のいずれか一つに記載の免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプタータンパク及び／又は免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプター様タンパク産生抑制剤。
【請求項５】
前記有効成分として前記免疫グロブリンを含有し、更に該免疫グロブリンに特異的に認識される抗体標的物質を含有する請求項１〜４のいずれか一つに記載の免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプタータンパク及び／又は免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプター様タンパク産生抑制剤。
【請求項６】
前記搾乳動物の乳は、搾乳動物を免疫原性物質で過免疫した後、搾乳して得た乳であり、かつ、前記免疫原性物質を特異的に認識する免疫グロブリンを含有する請求項５に記載の免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプタータンパク及び／又は免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプター様タンパク産生抑制剤。
【請求項７】
前記抗体標的物質が、前記過免疫するために用いた免疫原性物質と同一物質である請求項６に記載の免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプタータンパク及び／又は免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプター様タンパク産生抑制剤。
【請求項８】
前記抗体標的物質が、大腸菌、酵母、乳酸菌、納豆菌、及び花粉から選ばれた１種である請求項５〜７のいずれか１つに記載の免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプタータンパク及び／又は免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプター様タンパク産生抑制剤。
【請求項９】
前記免疫原性物質が、大腸菌、酵母、乳酸菌、納豆菌、及び花粉から選ばれた１種である請求項８に記載の免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプタータンパク及び／又は免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプター様タンパク産生抑制剤。
【請求項１０】
前記請求項１〜９のいずれか１つに記載の免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプタータンパク及び／又は免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプター様タンパク産生抑制剤を配合してなる飲食品。
【請求項１１】
練乳、アイスクリーム、ヨーグルト、酸乳等の乳製品から選ばれた１種である請求項１０に記載の飲食品。
【請求項１２】
前記請求項１〜９のいずれか１つに記載の免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプタータンパク及び／又は免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプター様タンパク産生抑制剤を経口摂取することを特徴とする免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプタータンパク及び／又は免疫グロブリンＦｃフラグメントレセプター様タンパク産生抑制方法。
【図１】
【図２】
【図２】
【公開番号】特開２００８−１７９５７２（Ｐ２００８−１７９５７２Ａ）
【公開日】平成２０年８月７日（２００８．８．７）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００７−１４９５３（Ｐ２００７−１４９５３）
【出願日】平成１９年１月２５日（２００７．１．２５）
【出願人】（５０４１８０２３９）国立大学法人信州大学 (759)
【出願人】（３９９０７２２５５）兼松ウェルネス株式会社 (3)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２０年８月７日（２００８．８．７）
【国際特許分類】
【出願日】平成１９年１月２５日（２００７．１．２５）
【出願人】（５０４１８０２３９）国立大学法人信州大学 (759)
【出願人】（３９９０７２２５５）兼松ウェルネス株式会社 (3)
【Ｆターム（参考）】
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