【課題】抗原接種に対し応答した結果、大幅に向上した特異的体液性免疫反応レベルを示すトランスジェニック動物を提供する。
【解決手段】本発明は、同一種の非トランスジェニック対照動物に比べて、抗原に対して向上した体液性免疫応答を発現することができるトランスジェニック（Ｔｇ）非ヒト動物の作製方法であって、向上したＭＨＣクラスＩ関連新生児型Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）活性を提供する遺伝子構築物を前記非ヒト動物に導入することを含む作製方法である。本発明はまた、向上したＦｃＲｎ活性を提供する遺伝子構築物を含むＴｇ非ヒト動物及びこれら動物の非治療的方法における使用である。本発明はまた、治療用遺伝子構築物及び治療方法である。更に本発明は免疫グロブリンの製造方法である。

【特許請求の範囲】
【請求項１】
同一種の非トランスジェニック対照動物に比べて、抗原に対して向上した体液性免疫応答を発現することができるトランスジェニック（Ｔｇ）非ヒト動物の作製方法であって、向上したＭＨＣクラスＩ関連新生児型Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）活性を提供する遺伝子構築物を前記非ヒト動物に導入することを含むことを特徴とする方法。
【請求項２】
向上したＦｃＲｎ活性を提供する遺伝子構築物を含むことを特徴とするＴｇ非ヒト動物であって、
前記動物がＦＶＢ／Ｎマウスである場合には、前記遺伝子構築物はバクテリア人工染色体（ＢＡＣ）クローン＃１２８Ｅ０４のウシのインサートの全部は含まず、
前記ＦｃＲｎがヒトＦｃＲｎ（ｈＦｃＲｎ）である場合には、前記遺伝子構築物は１０ｋｂの５’フランキング配列と１０ｋｂの３’フランキング配列とを有する完全ｈＦｃＲｎ遺伝子を含む３３ｋｂのヒトコスミドクローンと；サイトメガロウィルス（ＣＭＶ）エンハンサーとトリβ−アクチンプロモーターとを有し、且つクローン化されたｈＦｃＲｎα鎖を有するベクターＥと；ヒト由来ＢＡＣライブラリーから取得した完全ｈＦｃＲｎ遺伝子を含む３４ｋｂＸｈｏＩ断片のいずれでもなく、
前記ＦｃＲｎがウシＦｃＲｎ（ｂＦｃＲｎ）である場合には、前記遺伝子構築物はｂＦｃＲｎのα鎖をコードする配列を含む、ｐＢＣ１−ｂＦｃＲｎのＮｏｔＩ−ＳａｌＩ断片と；ｂＦｃＲｎの軽鎖をコードする、ｐＢＣ１−ｂｂ２ｍのＮｏｔＩ−ＳａｌＩ断片のいずれでもなく、
前記ＦｃＲｎがネズミ科のＦｃＲｎ（ｍＦｃＲｎ）である場合には、前記遺伝子構築物はＩＦＡＢＰ−ｍＦｃＲｎとＩＦＡＢＰ−ｍｂ２ｍのいずれでもない、Ｔｇ非ヒト動物。
【請求項３】
向上したＦｃＲｎ活性を提供する遺伝子構築物を含むＴｇ非ヒト動物の非治療的方法における使用であって、目的の抗原に対する向上した体液性免疫応答を前記動物に発現させるステップを含むことを特徴とする使用。
【請求項４】
免疫グロブリンの製造を可能とする確立された任意のプロトコールに従って、向上したＦｃＲｎ活性を提供する遺伝子構築物を含むＴｇ動物を使用するステップを含むことを特徴とする免疫グロブリンを製造する方法。
【請求項５】
体液性免疫応答の向上が、抗原による免疫感作時の免疫グロブリン産生レベルを向上させることを含み、前記免疫グロブリンに特異的な親和性を有するＦｃＲｎが前記免疫感作時に前記動物によって産生される、請求項１から４のいずれか１項に記載の方法、使用又は動物。
【請求項６】
体液性免疫応答の向上が抗原特異的なＢ細胞のクローンの増殖の向上を含む、請求項１から４のいずれか１項に記載の方法、使用又は動物。
【請求項７】
体液性免疫応答の向上が好中球の二次リンパ器官への流入を刺激することを含む、請求項６に記載の方法、使用又は動物。
【請求項８】
体液性免疫応答の向上が、樹状細胞及びマクロファージの少なくともいずれかの二次リンパ器官への流入を刺激することを含む、請求項６に記載の方法、使用又は動物。
【請求項９】
二次リンパ器官が脾臓を含む、請求項７から８のいずれかに記載の方法、使用又は動物。
【請求項１０】
抗原が弱免疫原である、請求項１から９のいずれか１項に記載の方法、使用又は動物。
【請求項１１】
向上したＦｃＲｎ活性を提供する遺伝子構築物を含むＴｇ動物を使用することを含む免疫グロブリン製造方法であって、前記Ｔｇ動物が、同一種の非トランスジェニック対照動物に比べてより少ない抗原接種回数でこれと同一レベルの体液性免疫応答を発現するように、適用されるプロトコールを調整する少なくとも一のステップを含むことを特徴とする方法。
【請求項１２】
向上したＦｃＲｎ活性を提供する遺伝子構築物を含むＴｇ動物を使用することを含む免疫グロブリン製造方法であって、前記Ｔｇ動物が、同一種の非トランスジェニック対照動物に比べてより早くこれと同一レベルの体液性免疫応答を発現するように、適用されるプロトコールを調整する少なくとも一のステップを含むことを特徴とする方法。
【請求項１３】
動物が哺乳動物である、請求項１から１２のいずれか１項に記載の方法、使用又は動物。
【請求項１４】
動物がげっ歯類である、請求項１３に記載の方法、使用又は動物。
【請求項１５】
げっ歯類がマウスである、請求項１４に記載の方法、使用又は動物。
【請求項１６】
哺乳動物がウサギである、請求項１３に記載の方法、使用又は動物。
【請求項１７】
哺乳動物がウシ、ブタ、ラクダ、ヤギ、ヒツジ、イヌ、ロバ及びウマからなる群から選択される、請求項１３に記載の方法、使用又は動物。
【請求項１８】
トランスジェニック哺乳動物が、モノクローナル抗体産生に有用な系統及びモノクローナル抗体産生により適するように遺伝子的に改変された系統のいずれかから得られる、請求項１３から１６のいずれか１項に記載の方法、使用又は動物。
【請求項１９】
請求項１８に記載の動物から得られる細胞から作製されるか、又は請求項１８に記載の方法若しくは使用に従って作製される若しくは使用される動物から得られる細胞から作製されることを特徴とするハイブリドーマ細胞株。
【請求項２０】
請求項１８に記載の方法、使用又は動物により産生されることを特徴とするモノクローナル抗体。
【請求項２１】
トランスジェニック動物が、ポリクローナル抗体産生に有用な系統又はポリクローナル抗体産生により適するように遺伝子的に改変された系統から得られる、請求項１３から１７のいずれか１項に記載の方法、使用又は動物。
【請求項２２】
請求項２１に記載の方法、使用又は動物により産生されることを特徴とするポリクローナル抗体。
【請求項２３】
免疫グロブリンがＩｇＧである、請求項１から２２のいずれか１項に記載の方法、使用又は動物。
【請求項２４】
免疫グロブリンがＩｇＭである、請求項１から２２のいずれか１項に記載の方法、使用又は動物。
【請求項２５】
動物がヒト又はヒト化免疫グロブリンの産生のために形質転換されている、請求項１から２４のいずれか１項に記載の方法、使用又は動物。
【請求項２６】
遺伝子構築物がＦｃＲｎタンパク質のα鎖をコードする核酸配列の発現を提供する、請求項１から２５のいずれか１項に記載の方法、使用又は動物。
【請求項２７】
ＦｃＲｎタンパク質のα鎖をコードする核酸配列が突然変異している、請求項２６に記載の方法、使用又は動物。
【請求項２８】
突然変異によりＦｃＲｎタンパク質のアルブミン結合部位の機能が失われる、請求項２７に記載の方法、使用又は動物。
【請求項２９】
核酸配列がキメラＦｃＲｎタンパク質をコードする、請求項２７に記載の方法、使用又は動物。
【請求項３０】
請求項２に記載のＴｇ動物又は請求項１に記載の方法によって得られるＴｇ動物から得られる動物繁殖材料であって、向上したＦｃＲｎ活性を提供する遺伝子構築物を含むことを特徴とする動物繁殖材料。
【請求項３１】
精子、精原細胞、卵子、卵巣組織、胚及び体細胞クローニング用組織サンプルから成る群から選択される、請求項３０に記載の動物繁殖材料。
【請求項３２】
向上したＦｃＲｎ活性が、ＦｃＲｎをコードする核酸配列の一個より大の機能的コピーを動物のゲノムに組み込むことにより提供される、請求項１から３１のいずれか１項に記載の方法、使用又は動物。
【請求項３３】
遺伝子構築物がＢＡＣクローン＃１２８Ｅ０４のウシのインサート及びＢＡＣクローン＃２６２Ｅ０２のウサギのインサートのいずれかを含む、請求項１から３２のいずれか１項に記載の方法、使用又は動物。
【請求項３４】
アルブミンの製造を可能とする確立された任意のプロトコールに従って、向上したＦｃＲｎ活性を提供する遺伝子構築物を含むＴｇ動物を使用するステップを含むことを特徴とするアルブミンの製造方法。
【請求項３５】
遺伝子構築物がＦｃＲｎタンパク質のα鎖をコードする核酸配列の発現を提供し、前記ＦｃＲｎタンパク質の免疫グロブリン結合活性が除かれている、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
体液性免疫応答を向上させる必要のある患者の遺伝子治療に使用する遺伝子構築物であって、向上したＦｃＲｎ活性を提供することを特徴とする遺伝子構築物。
【請求項３７】
体液性免疫応答を向上させる必要のある患者を治療する方法であって、向上したＦｃＲｎ活性を提供する遺伝子構築物を前記患者に導入することを含むことを特徴とする方法。
【請求項３８】
天然の免疫グロブリン産生により内因的にもたらされるか又は治療手段により外因的にもたらされる血清免疫グロブリンレベルを上昇させる必要のある患者の遺伝子治療に使用する遺伝子構築物であって、前記遺伝子構築物は向上したＦｃＲｎ活性を提供し、前記ＦｃＲｎは、前記患者によって産生されるか又は前記患者に投与される免疫グロブリンに特異的な親和性を有することを特徴とする遺伝子構築物。
【請求項３９】
血清免疫グロブリンレベルを上昇させる必要のある患者を治療する方法であって、向上したＦｃＲｎ活性を提供する遺伝子構築物を前記患者に導入することを含み、前記ＦｃＲｎは、患者により産生されるか又は患者に投与される免疫グロブリンに特異的な親和性を有することを特徴とする方法。
【請求項４０】
患者がヒトである、請求項３６から３９のいずれか１項に記載の遺伝子構築物又は方法。
【請求項４１】
遺伝子構築物がＦｃＲｎタンパク質のα鎖をコードする核酸配列の発現を提供する、請求項３６から４０のいずれかに記載の遺伝子構築物又は方法。
【請求項４２】
向上したＦｃＲｎ活性が、ＦｃＲｎをコードする核酸配列の一個より大の機能的コピーを患者のゲノムに組み込むことにより提供される、請求項３６から４１のいずれかに記載の遺伝子構築物又は方法。
【請求項４３】
ＦｃＲｎタンパク質のα鎖をコードする核酸配列が突然変異している、請求項３６から４２のいずれかに記載の遺伝子構築物又は方法。
【請求項４４】
突然変異により前記ＦｃＲｎタンパク質のアルブミン結合部位の機能が失われる、請求項４３に記載の遺伝子構築物又は方法。
【請求項４５】
免疫応答の変化に関する条件について試験するのに有用なモデル動物の体液性免疫応答を向上させる方法であって、向上したＦｃＲｎ活性を提供する遺伝子構築物を前記動物に導入するステップを含むことを特徴とする方法。

【図１】

【図２】

【図３】

【図４】

【図５】

【図６】

【図７】

【図８】

【図９】

【図１０】

【図１２】

【図１３】

【図１４】

【図１５】

【図１６】

【図１７】

【図１８】

【図１１】

【公表番号】特表２０１０−５１０７７３（Ｐ２０１０−５１０７７３Ａ）
【公表日】平成２２年４月８日（２０１０．４．８）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００９−５３７７４８（Ｐ２００９−５３７７４８）
【出願日】平成１９年１１月２３日（２００７．１１．２３）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＩＢ２００７／０５４７７０
【国際公開番号】ＷＯ２００８／０６２３８３
【国際公開日】平成２０年５月２９日（２００８．５．２９）
【出願人】（５０９１４４２２５）アグリカルチュラル　バイオテクノロジー　センター (1)
【出願人】（５０９１４４２３６）エトヴェシュ　ロラーンド　ユニバーシティ (1)
【Ｆターム（参考）】