免疫測定におけるＢ／Ｆ分離装置および方法
【課題】小型軽量で高勾配磁場が得られる磁石を用いた免疫測定におけるＢ／Ｆ分離装置および方法を提供する。
【解決手段】磁性体を固相に用い、固相抗体（または固相抗原）と目的の抗原（または抗体）の間、及び目的の抗原（または抗体）と標識抗体（または標識抗原）の間で抗原抗体反応させた後、固相抗体（または固相抗原）を磁石装置を用いてＢ／Ｆ分離する際に、反発し合う同極同士を対向配置させた磁石対を用い、その磁極間の空隙に近接させて分離容器を配置することにより、固相抗体（または固相抗原）をＢ／Ｆ分離する。
【解決手段】磁性体を固相に用い、固相抗体（または固相抗原）と目的の抗原（または抗体）の間、及び目的の抗原（または抗体）と標識抗体（または標識抗原）の間で抗原抗体反応させた後、固相抗体（または固相抗原）を磁石装置を用いてＢ／Ｆ分離する際に、反発し合う同極同士を対向配置させた磁石対を用い、その磁極間の空隙に近接させて分離容器を配置することにより、固相抗体（または固相抗原）をＢ／Ｆ分離する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、免疫測定法において、固相抗体（または固相抗原）に結合しなかった目的の抗原（または抗体）、及び目的の抗原（または抗体）に結合しなかった標識抗体（または標識抗原）を反応容器から分離除去するＢ／Ｆ分離技術に関する。
【背景技術】
【０００２】
酵素免疫測定法（Enzyme immunoassay法、ＥＩＡ法）は、「鍵と鍵穴」に例えられる特異的な抗原抗体反応を利用して、生体内の特定の抗原または抗体を定量する免疫測定法の一つである。検出感度が極めて高いので、癌マーカー、各種感染症の抗原、ホルモン等、生体内に微量に存在する物質の定量に幅広く利用されている。測定対象となる試料は、血液（特に血清）、尿、唾液、髄液などの体液である。
【０００３】
図１は、ＥＩＡ法の原理の一例を示したものである。図１（ａ）は、ＥＩＡ法の最初の状態を示している。図中１は磁性粒子固相である。例えば、強磁性体などで作られた磁性粒子が用いられる。磁性粒子固相１の表面には、抗体（たんぱく質の一種）が吸着されていて、固相抗体２を形成している。そこに、測定したい抗原３を含んだ試料を添加して、磁性粒子固相１と一定時間反応させると、抗原３は固相抗体２と抗原抗体反応を起こして、磁性粒子固相１の表面に結合し、図１（ｂ）のように、抗原-抗体複合物４を形成する。この状態の抗原を、結合型抗原５（Bound form、Ｂと略す）と呼び、磁性粒子固相１の洗浄によっても結合が切られることはない。一方、固相抗体２に対して未結合の抗原３は遊離型抗原（Free form、Ｆと略す）と呼ばれ、磁性粒子固相１を洗浄することによって容易に反応容器の中から取り除くことができる。この結合型抗原５と遊離型抗原３を洗浄によって分ける操作をＢ／Ｆ分離と呼ぶ。Ｂ／Ｆ分離後は、図１（ｃ）に示すように、結合型抗原５のみが反応容器中に残ることになる。
【０００４】
次に、ＥＩＡ法では、抗原-抗体複合物４を形成している結合型抗原５に対して、適当な酵素（例えば、ＨＲＰ、即ち、西洋ワサビペルオキシダーゼ）によって標識された抗体（酵素標識抗体）６を抗原抗体反応で結合させ、結合型抗原５を酵素で標識する操作を行なう。図１（ｄ）は、その様子を示したものである。標識酵素７で標識された酵素標識抗体６を反応容器に添加し、磁性粒子固相１と一定時間反応させると、酵素標識抗体６は、結合型抗原５を固相抗体２との間でサンドイッチ状に挟んで、酵素標識抗体-抗原-抗体複合物８を形成する。このとき、ＥＩＡ法では、固相抗体２に結合した結合型抗原５を十分に標識化するために、過剰量の酵素標識抗体６を添加するのを通例としている。従って、結合型抗原５と酵素標識抗体６の抗原抗体反応によって結合型抗原５の標識化を行なった後には、抗原に結合した酵素標識抗体９と抗原に結合しなかった余分の遊離型酵素標識抗体６とを分ける操作、即ちＢ／Ｆ分離を再び行なう必要がある。このＢ／Ｆ分離後は、図１（ｅ）に示すように、酵素によって標識化された酵素標識抗体-抗原-抗体複合物８のみが磁性粒子固相１の表面に残ることになる。これは、磁性粒子固相１の表面に残った結合型抗原５の数だけ標識酵素７が残っていることを意味する。
【０００５】
磁性粒子固相１の表面に結合された標識酵素７の量は、図１（ｆ）に示すように、該酵素の基質となり得る発色試薬（例えば、ＯＰＤＡ、即ち、オルトフェニレンジアミン）１０を加えて標識酵素７と反応させ、生成する発色後の発色試薬１１の量を測定することにより、定量することができる。
【０００６】
尚、上記の例では、固相抗体と酵素標識抗体を用いて抗原を定量する方法について説明したが、固相抗体と酵素標識抗体の代わりに固相抗原と酵素標識抗原を用いて同様の操作を行なえば、試料中の抗体を定量することもできる。
【０００７】
以上に説明したように、ＥＩＡ法においては、抗原抗体反応によって磁性粒子固相に結合した抗原（または抗体）と未結合の遊離した抗原（または抗体）を分離するＢ／Ｆ分離、及び、抗原抗体複合物に結合した標識抗体（または標識抗原）と未結合の遊離した標識抗体（または標識抗原）を分離するＢ／Ｆ分離が測定の精度を決める重要な鍵となっている。
【０００８】
磁気分離固相法のＢ／Ｆ分離装置の構成を図２に示す。図中１２は、磁性粒子固相である。通常、磁気分離固相法では、分離容器１３の側壁外側のＡ位置に磁石１４を配置し、磁性粒子固相１２に磁界を与えて磁化し、磁性粒子固相１２を磁気的に吸引して、分離容器１３の内壁側面に集合保持させる。そこへ給排水ノズル１５を分離容器１３内に挿入して、遊離した抗原（または抗体）を含んだ溶液を吸引除去する。次に、磁石１４をＢ位置に遠ざけ、新たな洗浄液を注入して、磁性粒子固相１２を再懸濁して洗浄する。その後、再び、磁石１４をＡ位置に戻して磁性粒子固相１２を分離容器１３の内壁側面に集合保持させ、洗浄液を吸引除去する。これを複数回繰り返し、Ｂ／Ｆ分離を行なう。
【０００９】
【特許文献１】特開平７−１８１１８８号公報
【特許文献２】特開平８−６２２２４号公報
【特許文献３】特開平８−１７８９３１号公報
【特許文献４】特開平９−２１８２０１号公報
【特許文献５】特開平９−３２５１４８号公報
【特許文献６】特開平１０−９６７３２号公報
【特許文献７】特開平１０−１２３１３６号公報
【特許文献８】特開平１１−２６２６７８号公報
【特許文献９】特開平１１−３２６３３８号公報
【特許文献１０】特開２００１−９１５２１号公報
【特許文献１１】特表平１１−５０２６２５号公報
【特許文献１２】特表２００１−５１０８９３号公報
【特許文献１３】特表２００２−５２８７０５号公報
【特許文献１４】特表２００２−５３１８１１号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
ところで、磁性分別の効率（磁力Ｆ）は、式（１）で示されるように、第１項の粒子質量［ｍ］×加速度と、第２項の粒子断面積［Ｓ］×速度×粘性係数［σ］の和として与えられる。
【００１１】
【数１】
【００１２】
式（１）の磁気モーメント［Ｍ］は、真空の透磁率［μ0］と磁化率［Ｘm］と磁界［Ｈ］の積として、式（２）で与えられる。ここで、真空の透磁率［μ0］と磁化率［Ｘm］は、定数である。
【００１３】
【数２】
【００１４】
磁性ビーズ径がサブミクロンから数ミクロンのものを高速で磁性分別するためには、式（１）の第３項、磁界グラディエント［ｄＨ／ｄＸ］が大きい磁気回路を設計すれば良いことになる。ハイスループットのＢ／Ｆ分離装置を提供するためには、磁性粒子を短時間で集合させる必要がある。そのためには、磁性分別の原理で示されるように、磁界グラディエント［ｄＨ／ｄＸ］の大きい、高い磁場勾配の磁石が必要である。それは、分離容器と磁束方向を図３に示すように、磁石（●）よりＺ方向の高勾配磁場が必要ということである。
【００１５】
一例として、ネオジム磁石の重ね枚数と磁石表面の磁場強度との関係を図４に示す。図から明らかなように、ネオジム磁石を１枚から１０枚と重ねても、表面磁場の増加率は、ネオジム磁石の枚数を増やすにつれて低下し、効率の良い磁場強度の増加が得られない。したがって、高勾配磁場の磁石を構成するためには、大型の磁石が必要となる。
【００１６】
実験では、入手可能な最も高い磁場強度を持つネオジム磁石を１０枚用いても、液層５ｍｍφの分離容器中の磁性粒子を５秒以内に集合させ得る強度の高勾配磁場は得られなかった。
【００１７】
この問題の解決のためには、より大型の重い磁石が必要となり、スペースファクターが劣るという新たな問題が発生する。また、大型の重い磁石は、高速駆動がむつかしく、トラブル発生を誘発する恐れが大きい。
【００１８】
本発明の目的は、上述した点に鑑み、磁性粒子を５秒以内に集合させ、ハイスループットを可能とする、小型軽量で高勾配磁場が得られる磁石を用いた免疫測定におけるＢ／Ｆ分離装置および方法を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１９】
この目的を達成するため、
本発明にかかる免疫測定におけるＢ／Ｆ分離装置および方法は、
磁性体を固相に用い、固相抗体（または固相抗原）と目的の抗原（または抗体）を抗原抗体反応させた後、標識物質によって標識された過剰量の標識抗体（または標識抗原）を添加して抗原（または抗体）の標識化を行なう免疫測定法において、
固相抗体（または固相抗原）と目的の抗原（または抗体）の間、及び目的の抗原（または抗体）と標識抗体（または標識抗原）の間で抗原抗体反応させた後、固相抗体（または固相抗原）を磁石装置を用いてＢ／Ｆ分離する際に、
反発し合う同極同士を対向配置させた磁石対を用い、その磁極間の空隙に近接させて分離容器を配置することにより、固相抗体（または固相抗原）をＢ／Ｆ分離することを特徴としている。
【００２０】
また、前記対向配置させた磁極間の距離（空隙距離）と、該対向軸方向の磁石の長さとの比は、０．００１〜０．５であることを特徴としている。
【００２１】
また、反発し合う同極同士を対向配置させた磁石を分離容器の移動方向に合わせて複数個連続配置させ、複数の分離容器でＢ／Ｆ分離を一度に行なうことを特徴としている。
【００２２】
また、磁性体を固相に用い、固相抗体（または固相抗原）と目的の抗原（または抗体）を抗原抗体反応させた後、標識物質によって標識された過剰量の標識抗体（または標識抗原）を添加して抗原（または抗体）の標識化を行なう免疫測定法において、
固相抗体（または固相抗原）と目的の抗原（または抗体）の間、及び目的の抗原（または抗体）と標識抗体（または標識抗原）の間で抗原抗体反応させた後、固相抗体（または固相抗原）を磁石装置を用いてＢ／Ｆ分離する際に、
磁石の周りを分離容器の反対側端面から分離容器の対向面側に向けてヨークで取り囲んで漏洩磁場を抑えるとともに、磁石の分離容器側端面の周囲をヨークの先端で囲んで磁束を集中させた磁石装置を用いて固相抗体（または固相抗原）をＢ／Ｆ分離することを特徴としている。
【００２３】
また、前記磁石装置において、磁石の分離容器とは反対側の端面と、磁石の分離容器側端面の周囲を囲むヨ−クの先端とは同極性、また、磁石の分離容器側端面と、磁石の分離容器側端面の周囲を囲むヨ−クの先端とは逆極性であることを特徴としている。
【発明の効果】
【００２４】
本発明の免疫測定におけるＢ／Ｆ分離装置および方法によれば、
磁性体を固相に用い、固相抗体（または固相抗原）と目的の抗原（または抗体）を抗原抗体反応させた後、標識物質によって標識された過剰量の標識抗体（または標識抗原）を添加して抗原（または抗体）の標識化を行なう免疫測定法において、
固相抗体（または固相抗原）と目的の抗原（または抗体）の間、及び目的の抗原（または抗体）と標識抗体（または標識抗原）の間で抗原抗体反応させた後、固相抗体（または固相抗原）を磁石装置を用いてＢ／Ｆ分離する際に、
反発し合う同極同士を対向配置させた磁石対を用い、その磁極間の空隙に近接させて分離容器を配置することにより、固相抗体（または固相抗原）をＢ／Ｆ分離することを特徴とするので、
磁性粒子を５秒以内に集合させ、ハイスループットを可能とする、小型軽量で高勾配磁場が得られる磁石を用いたＢ／Ｆ分離装置および方法を提供することができる。
【００２５】
また、磁性体を固相に用い、固相抗体（または固相抗原）と目的の抗原（または抗体）を抗原抗体反応させた後、標識物質によって標識された過剰量の標識抗体（または標識抗原）を添加して抗原（または抗体）の標識化を行なう免疫測定法において、
固相抗体（または固相抗原）と目的の抗原（または抗体）の間、及び目的の抗原（または抗体）と標識抗体（または標識抗原）の間で抗原抗体反応させた後、固相抗体（または固相抗原）を磁石装置を用いてＢ／Ｆ分離する際に、
磁石の周りをヨークで取り囲んで漏洩磁場を抑えるとともに、磁石の端面の周囲をヨークで取り囲ませて磁束を集中させた磁石装置を用いて固相抗体（または固相抗原）をＢ／Ｆ分離することを特徴とするので、
磁性粒子を５秒以内に集合させ、ハイスループットを可能とする、小型軽量で高勾配磁場が得られる磁石を用いたＢ／Ｆ分離装置および方法を提供することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２６】
以下、図面を参照して、本発明の実施の形態を説明する。図５は、本発明にかかる免疫測定におけるＢ／Ｆ分離装置および方法の一実施例である。本実施例では、磁石のＮ極とＮ極、またはＳ極とＳ極を対向させてＢ／Ｆ分離用磁石を構成する。磁束方向は、磁石の対向軸に直交し、対向した磁石の空隙面に沿った矢印方向となる。磁石の対向面で挟まれた空隙の中心点の磁界強度は、理論的には２倍となる。また、磁石を対向させて配置し、裏面同士をヨークでつないだ場合も、中心点の磁界強度は、理論的に２倍になる。対向配置させた磁石間の距離（空隙距離）と、該対向軸方向の磁石の長さとの比は、０．００１〜０．５、より好ましくは、０．０１〜０．０５に保つ。
【００２７】
対向磁石と分離容器の構成例を図６に示す。Ａはネオジム磁石、Ｂは磁石ホルダ、Ｃは分離容器、Ｄは磁性粒子である。分離容器Ｃは、２つのネオジム磁石Ａの対向軸と平行に、空隙に近接して配置される。分離容器Ｃの内径は５ｍｍ、磁石Ａの長さは１０ｍｍ、空隙距離は０．５ｍｍである。０．５ｍｍの空隙をＢ／Ｆ分離用磁場発生源として用いた場合、得られた磁場勾配（液層５ｍｍφ）の実測値は、単独磁石を使用した場合の１．５倍、磁性粒子の集合時間は３秒だった。
【００２８】
同じ分離容器Ｃを用いて磁性粒子Ｄを集合させる実験では、ネオジム磁石５枚を単独に配置した場合で６秒、電磁石を用いて１６００アンペア・ターンの電流を流した場合で５秒、電磁石を用いて２０００アンペア・ターンの電流を流した場合でも３．５秒の集合時間を要するので、本実施例の効果は大きい。
【００２９】
図７は、本発明にかかる免疫測定におけるＢ／Ｆ分離装置および方法の別の実施例である。本実施例では、直方体のネオジム磁石Ａ−１の上に、角錐体の先端を平らに削平した台形状のネオジム磁石Ａ−２を載せ、磁石の周りを分離容器の反対側端面から分離容器の対向面側に向けてヨークＥで取り囲むことにより、漏洩磁場を抑えるとともに、ネオジム磁石Ａ−２の先端面とヨークＥの先端面を一致させながら、ネオジム磁石Ａ−２の分離容器側端面の周囲をヨークＥの先端で囲んで、ヨークＥで磁束を集中させる。
【００３０】
このときの磁極の極性は、磁石の分離容器とは反対側の端面と、磁石の分離容器側端面の周囲を囲むヨ−クの先端とは同極性、また、磁石の分離容器側端面と、磁石の分離容器側端面の周囲を囲むヨ−クの先端とは逆極性になるように配置される。すなわち、図７に基づいて説明すれば、ネオジム磁石Ａ−１のヨークＥ側がＮ極、ネオジム磁石Ａ−１の反対側、すなわちネオジム磁石Ａ−２側がＳ極、ネオジム磁石Ａ−２のネオジム磁石Ａ−１側がＮ極、ネオジム磁石Ａ−２の分離容器Ｃ側がＳ極、ネオジム磁石Ａ−２の分離容器Ｃ側周囲を囲むヨークＥの先端がＮ極である。尚、これらの磁極は、Ｎ極とＳ極が逆であっても良い。
【００３１】
このような磁気回路を構成することにより、ネオジム磁石Ａ−１、Ａ−２からの漏洩磁場を抑えるとともに、ヨークＥの先端でネオジム磁石Ａ−２の分離容器Ｃ側に磁束を集中させるようにした。この方法により、得られた磁場勾配（液相５ｍｍ）の実測値は、単独磁石を使用した場合の１．２〜１．３倍となった。
【００３２】
分離容器Ｃは、ヨークＥの先端で磁束を集中させたネオジム磁石Ａ−２の先端に対向させて、ネオジム磁石Ａ−２の先端に近接する位置に配置させる。このとき、ネオジム磁石Ａ−２の先端面とヨークＥの先端面を予め一致させてあるので、ネオジム磁石Ａ−２と分離容器Ｃとの距離を最小にすることができる。これにより、磁性粒子Ｄは、分離容器Ｃの内側壁面に容易に集合させることができる。
【００３３】
尚、ネオジム磁石Ａ−１は、直方体ではなく、円柱状であっても良い。また、ネオジム磁石Ａ−２は、角錐体の先端を平らに削平した台形状ではなく、円錐体の先端を平らに削平したポールピース状であっても良い。
【００３４】
図８は、本発明にかかる免疫測定におけるＢ／Ｆ分離装置および方法の別の実施例である。本実施例では、反発し合う同極同士を磁石の両端部で対向配置させた磁石を分離容器Ｃの移動方向に合わせて複数個連続配置させ、それを１つの磁石ホルダＢ―２で固定した構成となっている。Ｂ／Ｆ分離は、通常、複数回繰り返して行なわれる。そこで、分離容器Ｃが位置ａ→位置ｂ→位置ｃ→位置ｄに逐次進むごとにＢ／Ｆ分離が行なわれる構成とした。このような構成とすることで、複数本の分離容器Ｃを一度にＢ／Ｆ分離させることができ、スペースファクタの高いＢ／Ｆ分離装置を提供することができる。
【００３５】
対向磁石と分離容器Ｃの移動方法は、等間隔で並んだ対向磁石を固定している磁石ホルダＢ−２側を動かすようにしても良いが、逆に、等間隔で並んだ分離容器Ｃ側を動かすようにしても良い。
【００３６】
尚、図８の例では、対向磁石と分離容器Ｃは平面状に並んでいるが、これは、数十本ないし数百本の分離容器が円周方向に並んで載った反応回転テーブル、あるいは、数本の分離容器が載った円盤状のＢ／Ｆ分離ユニットの外周または内周に沿って、分離容器と同心円状に対向磁石ホルダを配置させるようにしても良い。分離容器群と対向磁石群とが相互に回転できる構成にすることで、効果的なＢ／Ｆ分離機構を備えた自動免疫分析装置を提供することができる。
【００３７】
尚、図８の対向磁石のＮ極とＳ極の並びは、同じ極を対向させてあれば、どちらの極が先頭であっても良い。
【産業上の利用可能性】
【００３８】
自動免疫分析装置および方法に、広く利用できる。
【図面の簡単な説明】
【００３９】
【図１】ＥＩＡ法の測定原理を示す図である。
【図２】従来のＢ／Ｆ分離装置の一例を示す図である。
【図３】分離容器と磁場方向の関係を示す図である。
【図４】ネオジム磁石の重ね枚数と磁石表面の磁場強度との関係を示す図である。
【図５】本発明にかかるＢ／Ｆ分離装置の一実施例を示す図である。
【図６】本発明にかかるＢ／Ｆ分離装置の対向磁石と分離容器の構成例である。
【図７】本発明にかかるＢ／Ｆ分離装置の別の実施例を示す図である。
【図８】本発明にかかるＢ／Ｆ分離装置の別の実施例を示す図である。
【符号の説明】
【００４０】
１：固相（磁性ビーズ固相）、２：固相抗体、３：固相抗体に未結合の抗原、４：抗原-抗体複合物、５：固相抗体に結合した抗原、６：抗原-抗体複合物に未結合の酵素標識抗体、７：標識酵素、８：酵素標識抗体-抗原-抗体複合物、９：抗原-抗体複合物に結合した酵素標識抗体、１０：発色試薬（発色前）、１１：発色試薬（発色後）、１２：磁性粒子固相、１３：分離容器、１４：磁石、１５：給排水ノズル、Ａ：磁石、Ｂ：磁石ホルダ、Ｃ：分離容器、Ｄ：磁性粒子、Ｅ：ヨーク
【技術分野】
【０００１】
本発明は、免疫測定法において、固相抗体（または固相抗原）に結合しなかった目的の抗原（または抗体）、及び目的の抗原（または抗体）に結合しなかった標識抗体（または標識抗原）を反応容器から分離除去するＢ／Ｆ分離技術に関する。
【背景技術】
【０００２】
酵素免疫測定法（Enzyme immunoassay法、ＥＩＡ法）は、「鍵と鍵穴」に例えられる特異的な抗原抗体反応を利用して、生体内の特定の抗原または抗体を定量する免疫測定法の一つである。検出感度が極めて高いので、癌マーカー、各種感染症の抗原、ホルモン等、生体内に微量に存在する物質の定量に幅広く利用されている。測定対象となる試料は、血液（特に血清）、尿、唾液、髄液などの体液である。
【０００３】
図１は、ＥＩＡ法の原理の一例を示したものである。図１（ａ）は、ＥＩＡ法の最初の状態を示している。図中１は磁性粒子固相である。例えば、強磁性体などで作られた磁性粒子が用いられる。磁性粒子固相１の表面には、抗体（たんぱく質の一種）が吸着されていて、固相抗体２を形成している。そこに、測定したい抗原３を含んだ試料を添加して、磁性粒子固相１と一定時間反応させると、抗原３は固相抗体２と抗原抗体反応を起こして、磁性粒子固相１の表面に結合し、図１（ｂ）のように、抗原-抗体複合物４を形成する。この状態の抗原を、結合型抗原５（Bound form、Ｂと略す）と呼び、磁性粒子固相１の洗浄によっても結合が切られることはない。一方、固相抗体２に対して未結合の抗原３は遊離型抗原（Free form、Ｆと略す）と呼ばれ、磁性粒子固相１を洗浄することによって容易に反応容器の中から取り除くことができる。この結合型抗原５と遊離型抗原３を洗浄によって分ける操作をＢ／Ｆ分離と呼ぶ。Ｂ／Ｆ分離後は、図１（ｃ）に示すように、結合型抗原５のみが反応容器中に残ることになる。
【０００４】
次に、ＥＩＡ法では、抗原-抗体複合物４を形成している結合型抗原５に対して、適当な酵素（例えば、ＨＲＰ、即ち、西洋ワサビペルオキシダーゼ）によって標識された抗体（酵素標識抗体）６を抗原抗体反応で結合させ、結合型抗原５を酵素で標識する操作を行なう。図１（ｄ）は、その様子を示したものである。標識酵素７で標識された酵素標識抗体６を反応容器に添加し、磁性粒子固相１と一定時間反応させると、酵素標識抗体６は、結合型抗原５を固相抗体２との間でサンドイッチ状に挟んで、酵素標識抗体-抗原-抗体複合物８を形成する。このとき、ＥＩＡ法では、固相抗体２に結合した結合型抗原５を十分に標識化するために、過剰量の酵素標識抗体６を添加するのを通例としている。従って、結合型抗原５と酵素標識抗体６の抗原抗体反応によって結合型抗原５の標識化を行なった後には、抗原に結合した酵素標識抗体９と抗原に結合しなかった余分の遊離型酵素標識抗体６とを分ける操作、即ちＢ／Ｆ分離を再び行なう必要がある。このＢ／Ｆ分離後は、図１（ｅ）に示すように、酵素によって標識化された酵素標識抗体-抗原-抗体複合物８のみが磁性粒子固相１の表面に残ることになる。これは、磁性粒子固相１の表面に残った結合型抗原５の数だけ標識酵素７が残っていることを意味する。
【０００５】
磁性粒子固相１の表面に結合された標識酵素７の量は、図１（ｆ）に示すように、該酵素の基質となり得る発色試薬（例えば、ＯＰＤＡ、即ち、オルトフェニレンジアミン）１０を加えて標識酵素７と反応させ、生成する発色後の発色試薬１１の量を測定することにより、定量することができる。
【０００６】
尚、上記の例では、固相抗体と酵素標識抗体を用いて抗原を定量する方法について説明したが、固相抗体と酵素標識抗体の代わりに固相抗原と酵素標識抗原を用いて同様の操作を行なえば、試料中の抗体を定量することもできる。
【０００７】
以上に説明したように、ＥＩＡ法においては、抗原抗体反応によって磁性粒子固相に結合した抗原（または抗体）と未結合の遊離した抗原（または抗体）を分離するＢ／Ｆ分離、及び、抗原抗体複合物に結合した標識抗体（または標識抗原）と未結合の遊離した標識抗体（または標識抗原）を分離するＢ／Ｆ分離が測定の精度を決める重要な鍵となっている。
【０００８】
磁気分離固相法のＢ／Ｆ分離装置の構成を図２に示す。図中１２は、磁性粒子固相である。通常、磁気分離固相法では、分離容器１３の側壁外側のＡ位置に磁石１４を配置し、磁性粒子固相１２に磁界を与えて磁化し、磁性粒子固相１２を磁気的に吸引して、分離容器１３の内壁側面に集合保持させる。そこへ給排水ノズル１５を分離容器１３内に挿入して、遊離した抗原（または抗体）を含んだ溶液を吸引除去する。次に、磁石１４をＢ位置に遠ざけ、新たな洗浄液を注入して、磁性粒子固相１２を再懸濁して洗浄する。その後、再び、磁石１４をＡ位置に戻して磁性粒子固相１２を分離容器１３の内壁側面に集合保持させ、洗浄液を吸引除去する。これを複数回繰り返し、Ｂ／Ｆ分離を行なう。
【０００９】
【特許文献１】特開平７−１８１１８８号公報
【特許文献２】特開平８−６２２２４号公報
【特許文献３】特開平８−１７８９３１号公報
【特許文献４】特開平９−２１８２０１号公報
【特許文献５】特開平９−３２５１４８号公報
【特許文献６】特開平１０−９６７３２号公報
【特許文献７】特開平１０−１２３１３６号公報
【特許文献８】特開平１１−２６２６７８号公報
【特許文献９】特開平１１−３２６３３８号公報
【特許文献１０】特開２００１−９１５２１号公報
【特許文献１１】特表平１１−５０２６２５号公報
【特許文献１２】特表２００１−５１０８９３号公報
【特許文献１３】特表２００２−５２８７０５号公報
【特許文献１４】特表２００２−５３１８１１号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
ところで、磁性分別の効率（磁力Ｆ）は、式（１）で示されるように、第１項の粒子質量［ｍ］×加速度と、第２項の粒子断面積［Ｓ］×速度×粘性係数［σ］の和として与えられる。
【００１１】
【数１】
【００１２】
式（１）の磁気モーメント［Ｍ］は、真空の透磁率［μ0］と磁化率［Ｘm］と磁界［Ｈ］の積として、式（２）で与えられる。ここで、真空の透磁率［μ0］と磁化率［Ｘm］は、定数である。
【００１３】
【数２】
【００１４】
磁性ビーズ径がサブミクロンから数ミクロンのものを高速で磁性分別するためには、式（１）の第３項、磁界グラディエント［ｄＨ／ｄＸ］が大きい磁気回路を設計すれば良いことになる。ハイスループットのＢ／Ｆ分離装置を提供するためには、磁性粒子を短時間で集合させる必要がある。そのためには、磁性分別の原理で示されるように、磁界グラディエント［ｄＨ／ｄＸ］の大きい、高い磁場勾配の磁石が必要である。それは、分離容器と磁束方向を図３に示すように、磁石（●）よりＺ方向の高勾配磁場が必要ということである。
【００１５】
一例として、ネオジム磁石の重ね枚数と磁石表面の磁場強度との関係を図４に示す。図から明らかなように、ネオジム磁石を１枚から１０枚と重ねても、表面磁場の増加率は、ネオジム磁石の枚数を増やすにつれて低下し、効率の良い磁場強度の増加が得られない。したがって、高勾配磁場の磁石を構成するためには、大型の磁石が必要となる。
【００１６】
実験では、入手可能な最も高い磁場強度を持つネオジム磁石を１０枚用いても、液層５ｍｍφの分離容器中の磁性粒子を５秒以内に集合させ得る強度の高勾配磁場は得られなかった。
【００１７】
この問題の解決のためには、より大型の重い磁石が必要となり、スペースファクターが劣るという新たな問題が発生する。また、大型の重い磁石は、高速駆動がむつかしく、トラブル発生を誘発する恐れが大きい。
【００１８】
本発明の目的は、上述した点に鑑み、磁性粒子を５秒以内に集合させ、ハイスループットを可能とする、小型軽量で高勾配磁場が得られる磁石を用いた免疫測定におけるＢ／Ｆ分離装置および方法を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１９】
この目的を達成するため、
本発明にかかる免疫測定におけるＢ／Ｆ分離装置および方法は、
磁性体を固相に用い、固相抗体（または固相抗原）と目的の抗原（または抗体）を抗原抗体反応させた後、標識物質によって標識された過剰量の標識抗体（または標識抗原）を添加して抗原（または抗体）の標識化を行なう免疫測定法において、
固相抗体（または固相抗原）と目的の抗原（または抗体）の間、及び目的の抗原（または抗体）と標識抗体（または標識抗原）の間で抗原抗体反応させた後、固相抗体（または固相抗原）を磁石装置を用いてＢ／Ｆ分離する際に、
反発し合う同極同士を対向配置させた磁石対を用い、その磁極間の空隙に近接させて分離容器を配置することにより、固相抗体（または固相抗原）をＢ／Ｆ分離することを特徴としている。
【００２０】
また、前記対向配置させた磁極間の距離（空隙距離）と、該対向軸方向の磁石の長さとの比は、０．００１〜０．５であることを特徴としている。
【００２１】
また、反発し合う同極同士を対向配置させた磁石を分離容器の移動方向に合わせて複数個連続配置させ、複数の分離容器でＢ／Ｆ分離を一度に行なうことを特徴としている。
【００２２】
また、磁性体を固相に用い、固相抗体（または固相抗原）と目的の抗原（または抗体）を抗原抗体反応させた後、標識物質によって標識された過剰量の標識抗体（または標識抗原）を添加して抗原（または抗体）の標識化を行なう免疫測定法において、
固相抗体（または固相抗原）と目的の抗原（または抗体）の間、及び目的の抗原（または抗体）と標識抗体（または標識抗原）の間で抗原抗体反応させた後、固相抗体（または固相抗原）を磁石装置を用いてＢ／Ｆ分離する際に、
磁石の周りを分離容器の反対側端面から分離容器の対向面側に向けてヨークで取り囲んで漏洩磁場を抑えるとともに、磁石の分離容器側端面の周囲をヨークの先端で囲んで磁束を集中させた磁石装置を用いて固相抗体（または固相抗原）をＢ／Ｆ分離することを特徴としている。
【００２３】
また、前記磁石装置において、磁石の分離容器とは反対側の端面と、磁石の分離容器側端面の周囲を囲むヨ−クの先端とは同極性、また、磁石の分離容器側端面と、磁石の分離容器側端面の周囲を囲むヨ−クの先端とは逆極性であることを特徴としている。
【発明の効果】
【００２４】
本発明の免疫測定におけるＢ／Ｆ分離装置および方法によれば、
磁性体を固相に用い、固相抗体（または固相抗原）と目的の抗原（または抗体）を抗原抗体反応させた後、標識物質によって標識された過剰量の標識抗体（または標識抗原）を添加して抗原（または抗体）の標識化を行なう免疫測定法において、
固相抗体（または固相抗原）と目的の抗原（または抗体）の間、及び目的の抗原（または抗体）と標識抗体（または標識抗原）の間で抗原抗体反応させた後、固相抗体（または固相抗原）を磁石装置を用いてＢ／Ｆ分離する際に、
反発し合う同極同士を対向配置させた磁石対を用い、その磁極間の空隙に近接させて分離容器を配置することにより、固相抗体（または固相抗原）をＢ／Ｆ分離することを特徴とするので、
磁性粒子を５秒以内に集合させ、ハイスループットを可能とする、小型軽量で高勾配磁場が得られる磁石を用いたＢ／Ｆ分離装置および方法を提供することができる。
【００２５】
また、磁性体を固相に用い、固相抗体（または固相抗原）と目的の抗原（または抗体）を抗原抗体反応させた後、標識物質によって標識された過剰量の標識抗体（または標識抗原）を添加して抗原（または抗体）の標識化を行なう免疫測定法において、
固相抗体（または固相抗原）と目的の抗原（または抗体）の間、及び目的の抗原（または抗体）と標識抗体（または標識抗原）の間で抗原抗体反応させた後、固相抗体（または固相抗原）を磁石装置を用いてＢ／Ｆ分離する際に、
磁石の周りをヨークで取り囲んで漏洩磁場を抑えるとともに、磁石の端面の周囲をヨークで取り囲ませて磁束を集中させた磁石装置を用いて固相抗体（または固相抗原）をＢ／Ｆ分離することを特徴とするので、
磁性粒子を５秒以内に集合させ、ハイスループットを可能とする、小型軽量で高勾配磁場が得られる磁石を用いたＢ／Ｆ分離装置および方法を提供することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２６】
以下、図面を参照して、本発明の実施の形態を説明する。図５は、本発明にかかる免疫測定におけるＢ／Ｆ分離装置および方法の一実施例である。本実施例では、磁石のＮ極とＮ極、またはＳ極とＳ極を対向させてＢ／Ｆ分離用磁石を構成する。磁束方向は、磁石の対向軸に直交し、対向した磁石の空隙面に沿った矢印方向となる。磁石の対向面で挟まれた空隙の中心点の磁界強度は、理論的には２倍となる。また、磁石を対向させて配置し、裏面同士をヨークでつないだ場合も、中心点の磁界強度は、理論的に２倍になる。対向配置させた磁石間の距離（空隙距離）と、該対向軸方向の磁石の長さとの比は、０．００１〜０．５、より好ましくは、０．０１〜０．０５に保つ。
【００２７】
対向磁石と分離容器の構成例を図６に示す。Ａはネオジム磁石、Ｂは磁石ホルダ、Ｃは分離容器、Ｄは磁性粒子である。分離容器Ｃは、２つのネオジム磁石Ａの対向軸と平行に、空隙に近接して配置される。分離容器Ｃの内径は５ｍｍ、磁石Ａの長さは１０ｍｍ、空隙距離は０．５ｍｍである。０．５ｍｍの空隙をＢ／Ｆ分離用磁場発生源として用いた場合、得られた磁場勾配（液層５ｍｍφ）の実測値は、単独磁石を使用した場合の１．５倍、磁性粒子の集合時間は３秒だった。
【００２８】
同じ分離容器Ｃを用いて磁性粒子Ｄを集合させる実験では、ネオジム磁石５枚を単独に配置した場合で６秒、電磁石を用いて１６００アンペア・ターンの電流を流した場合で５秒、電磁石を用いて２０００アンペア・ターンの電流を流した場合でも３．５秒の集合時間を要するので、本実施例の効果は大きい。
【００２９】
図７は、本発明にかかる免疫測定におけるＢ／Ｆ分離装置および方法の別の実施例である。本実施例では、直方体のネオジム磁石Ａ−１の上に、角錐体の先端を平らに削平した台形状のネオジム磁石Ａ−２を載せ、磁石の周りを分離容器の反対側端面から分離容器の対向面側に向けてヨークＥで取り囲むことにより、漏洩磁場を抑えるとともに、ネオジム磁石Ａ−２の先端面とヨークＥの先端面を一致させながら、ネオジム磁石Ａ−２の分離容器側端面の周囲をヨークＥの先端で囲んで、ヨークＥで磁束を集中させる。
【００３０】
このときの磁極の極性は、磁石の分離容器とは反対側の端面と、磁石の分離容器側端面の周囲を囲むヨ−クの先端とは同極性、また、磁石の分離容器側端面と、磁石の分離容器側端面の周囲を囲むヨ−クの先端とは逆極性になるように配置される。すなわち、図７に基づいて説明すれば、ネオジム磁石Ａ−１のヨークＥ側がＮ極、ネオジム磁石Ａ−１の反対側、すなわちネオジム磁石Ａ−２側がＳ極、ネオジム磁石Ａ−２のネオジム磁石Ａ−１側がＮ極、ネオジム磁石Ａ−２の分離容器Ｃ側がＳ極、ネオジム磁石Ａ−２の分離容器Ｃ側周囲を囲むヨークＥの先端がＮ極である。尚、これらの磁極は、Ｎ極とＳ極が逆であっても良い。
【００３１】
このような磁気回路を構成することにより、ネオジム磁石Ａ−１、Ａ−２からの漏洩磁場を抑えるとともに、ヨークＥの先端でネオジム磁石Ａ−２の分離容器Ｃ側に磁束を集中させるようにした。この方法により、得られた磁場勾配（液相５ｍｍ）の実測値は、単独磁石を使用した場合の１．２〜１．３倍となった。
【００３２】
分離容器Ｃは、ヨークＥの先端で磁束を集中させたネオジム磁石Ａ−２の先端に対向させて、ネオジム磁石Ａ−２の先端に近接する位置に配置させる。このとき、ネオジム磁石Ａ−２の先端面とヨークＥの先端面を予め一致させてあるので、ネオジム磁石Ａ−２と分離容器Ｃとの距離を最小にすることができる。これにより、磁性粒子Ｄは、分離容器Ｃの内側壁面に容易に集合させることができる。
【００３３】
尚、ネオジム磁石Ａ−１は、直方体ではなく、円柱状であっても良い。また、ネオジム磁石Ａ−２は、角錐体の先端を平らに削平した台形状ではなく、円錐体の先端を平らに削平したポールピース状であっても良い。
【００３４】
図８は、本発明にかかる免疫測定におけるＢ／Ｆ分離装置および方法の別の実施例である。本実施例では、反発し合う同極同士を磁石の両端部で対向配置させた磁石を分離容器Ｃの移動方向に合わせて複数個連続配置させ、それを１つの磁石ホルダＢ―２で固定した構成となっている。Ｂ／Ｆ分離は、通常、複数回繰り返して行なわれる。そこで、分離容器Ｃが位置ａ→位置ｂ→位置ｃ→位置ｄに逐次進むごとにＢ／Ｆ分離が行なわれる構成とした。このような構成とすることで、複数本の分離容器Ｃを一度にＢ／Ｆ分離させることができ、スペースファクタの高いＢ／Ｆ分離装置を提供することができる。
【００３５】
対向磁石と分離容器Ｃの移動方法は、等間隔で並んだ対向磁石を固定している磁石ホルダＢ−２側を動かすようにしても良いが、逆に、等間隔で並んだ分離容器Ｃ側を動かすようにしても良い。
【００３６】
尚、図８の例では、対向磁石と分離容器Ｃは平面状に並んでいるが、これは、数十本ないし数百本の分離容器が円周方向に並んで載った反応回転テーブル、あるいは、数本の分離容器が載った円盤状のＢ／Ｆ分離ユニットの外周または内周に沿って、分離容器と同心円状に対向磁石ホルダを配置させるようにしても良い。分離容器群と対向磁石群とが相互に回転できる構成にすることで、効果的なＢ／Ｆ分離機構を備えた自動免疫分析装置を提供することができる。
【００３７】
尚、図８の対向磁石のＮ極とＳ極の並びは、同じ極を対向させてあれば、どちらの極が先頭であっても良い。
【産業上の利用可能性】
【００３８】
自動免疫分析装置および方法に、広く利用できる。
【図面の簡単な説明】
【００３９】
【図１】ＥＩＡ法の測定原理を示す図である。
【図２】従来のＢ／Ｆ分離装置の一例を示す図である。
【図３】分離容器と磁場方向の関係を示す図である。
【図４】ネオジム磁石の重ね枚数と磁石表面の磁場強度との関係を示す図である。
【図５】本発明にかかるＢ／Ｆ分離装置の一実施例を示す図である。
【図６】本発明にかかるＢ／Ｆ分離装置の対向磁石と分離容器の構成例である。
【図７】本発明にかかるＢ／Ｆ分離装置の別の実施例を示す図である。
【図８】本発明にかかるＢ／Ｆ分離装置の別の実施例を示す図である。
【符号の説明】
【００４０】
１：固相（磁性ビーズ固相）、２：固相抗体、３：固相抗体に未結合の抗原、４：抗原-抗体複合物、５：固相抗体に結合した抗原、６：抗原-抗体複合物に未結合の酵素標識抗体、７：標識酵素、８：酵素標識抗体-抗原-抗体複合物、９：抗原-抗体複合物に結合した酵素標識抗体、１０：発色試薬（発色前）、１１：発色試薬（発色後）、１２：磁性粒子固相、１３：分離容器、１４：磁石、１５：給排水ノズル、Ａ：磁石、Ｂ：磁石ホルダ、Ｃ：分離容器、Ｄ：磁性粒子、Ｅ：ヨーク
【特許請求の範囲】
【請求項１】
磁性体を固相に用い、固相抗体（または固相抗原）と目的の抗原（または抗体）を抗原抗体反応させた後、標識物質によって標識された過剰量の標識抗体（または標識抗原）を添加して抗原（または抗体）の標識化を行なう免疫測定法において、
固相抗体（または固相抗原）と目的の抗原（または抗体）の間、及び目的の抗原（または抗体）と標識抗体（または標識抗原）の間で抗原抗体反応させた後、固相抗体（または固相抗原）を磁石装置を用いてＢ／Ｆ分離する際に、
反発し合う同極同士を対向配置させた磁石対を用い、その磁極間の空隙に近接させて分離容器を配置することにより、固相抗体（または固相抗原）をＢ／Ｆ分離することを特徴とする免疫測定におけるＢ／Ｆ分離装置。
【請求項２】
前記対向配置させた磁極間の距離（空隙距離）と、該対向軸方向の磁石の長さとの比は、０．００１〜０．５であることを特徴とする請求項１記載の免疫測定におけるＢ／Ｆ分離装置。
【請求項３】
反発し合う同極同士を対向配置させた磁石を分離容器の移動方向に合わせて複数個連続配置させ、複数の分離容器でＢ／Ｆ分離を一度に行なうことを特徴とする請求項１または２記載の免疫測定におけるＢ／Ｆ分離装置。
【請求項４】
磁性体を固相に用い、固相抗体（または固相抗原）と目的の抗原（または抗体）を抗原抗体反応させた後、標識物質によって標識された過剰量の標識抗体（または標識抗原）を添加して抗原（または抗体）の標識化を行なう免疫測定法において、
固相抗体（または固相抗原）と目的の抗原（または抗体）の間、及び目的の抗原（または抗体）と標識抗体（または標識抗原）の間で抗原抗体反応させた後、固相抗体（または固相抗原）を磁石装置を用いてＢ／Ｆ分離する際に、
磁石の周りを分離容器の反対側端面から分離容器の対向面側に向けてヨークで取り囲んで漏洩磁場を抑えるとともに、磁石の分離容器側端面の周囲をヨークの先端で囲んで磁束を集中させた磁石装置を用いて固相抗体（または固相抗原）をＢ／Ｆ分離することを特徴とする免疫測定におけるＢ／Ｆ分離装置。
【請求項５】
前記磁石装置において、磁石の分離容器とは反対側の端面と、磁石の分離容器側端面の周囲を囲むヨ−クの先端とは同極性、また、磁石の分離容器側端面と、磁石の分離容器側端面の周囲を囲むヨ−クの先端とは逆極性であることを特徴とする請求項４記載の免疫測定におけるＢ／Ｆ分離装置。
【請求項６】
磁性体を固相に用い、固相抗体（または固相抗原）と目的の抗原（または抗体）を抗原抗体反応させた後、標識物質によって標識された過剰量の標識抗体（または標識抗原）を添加して抗原（または抗体）の標識化を行なう免疫測定法において、
固相抗体（または固相抗原）と目的の抗原（または抗体）の間、及び目的の抗原（または抗体）と標識抗体（または標識抗原）の間で抗原抗体反応させた後、固相抗体（または固相抗原）を磁石装置を用いてＢ／Ｆ分離する際に、
反発し合う同極同士を対向配置させた磁石対を用い、その磁極間の空隙に近接させて分離容器を配置することにより、固相抗体（または固相抗原）をＢ／Ｆ分離することを特徴とする免疫測定におけるＢ／Ｆ分離方法。
【請求項７】
前記対向配置させた磁極間の距離（空隙距離）と、該対向軸方向の磁石の長さとの比は、０．００１〜０．５であることを特徴とする請求項６記載の免疫測定におけるＢ／Ｆ分離方法。
【請求項８】
反発し合う同極同士を対向配置させた磁石を分離容器の移動方向に合わせて複数個連続配置させ、複数の分離容器でＢ／Ｆ分離を一度に行なうことを特徴とする請求項６または７記載の免疫測定におけるＢ／Ｆ分離方法。
【請求項９】
磁性体を固相に用い、固相抗体（または固相抗原）と目的の抗原（または抗体）を抗原抗体反応させた後、標識物質によって標識された過剰量の標識抗体（または標識抗原）を添加して抗原（または抗体）の標識化を行なう免疫測定法において、
固相抗体（または固相抗原）と目的の抗原（または抗体）の間、及び目的の抗原（または抗体）と標識抗体（または標識抗原）の間で抗原抗体反応させた後、固相抗体（または固相抗原）を磁石装置を用いてＢ／Ｆ分離する際に、
磁石の周りを分離容器の反対側端面から分離容器の対向面側に向けてヨークで取り囲んで漏洩磁場を抑えるとともに、磁石の分離容器側端面の周囲をヨークの先端で囲んで磁束を集中させた磁石装置を用いて固相抗体（または固相抗原）をＢ／Ｆ分離することを特徴とする免疫測定におけるＢ／Ｆ分離方法。
【請求項１０】
前記磁石装置において、磁石の分離容器とは反対側の端面と、磁石の分離容器側端面の周囲を囲むヨ−クの先端とは同極性、また、磁石の分離容器側端面と、磁石の分離容器側端面の周囲を囲むヨ−クの先端とは逆極性であることを特徴とする請求項９記載の免疫測定におけるＢ／Ｆ分離方法。
【請求項１】
磁性体を固相に用い、固相抗体（または固相抗原）と目的の抗原（または抗体）を抗原抗体反応させた後、標識物質によって標識された過剰量の標識抗体（または標識抗原）を添加して抗原（または抗体）の標識化を行なう免疫測定法において、
固相抗体（または固相抗原）と目的の抗原（または抗体）の間、及び目的の抗原（または抗体）と標識抗体（または標識抗原）の間で抗原抗体反応させた後、固相抗体（または固相抗原）を磁石装置を用いてＢ／Ｆ分離する際に、
反発し合う同極同士を対向配置させた磁石対を用い、その磁極間の空隙に近接させて分離容器を配置することにより、固相抗体（または固相抗原）をＢ／Ｆ分離することを特徴とする免疫測定におけるＢ／Ｆ分離装置。
【請求項２】
前記対向配置させた磁極間の距離（空隙距離）と、該対向軸方向の磁石の長さとの比は、０．００１〜０．５であることを特徴とする請求項１記載の免疫測定におけるＢ／Ｆ分離装置。
【請求項３】
反発し合う同極同士を対向配置させた磁石を分離容器の移動方向に合わせて複数個連続配置させ、複数の分離容器でＢ／Ｆ分離を一度に行なうことを特徴とする請求項１または２記載の免疫測定におけるＢ／Ｆ分離装置。
【請求項４】
磁性体を固相に用い、固相抗体（または固相抗原）と目的の抗原（または抗体）を抗原抗体反応させた後、標識物質によって標識された過剰量の標識抗体（または標識抗原）を添加して抗原（または抗体）の標識化を行なう免疫測定法において、
固相抗体（または固相抗原）と目的の抗原（または抗体）の間、及び目的の抗原（または抗体）と標識抗体（または標識抗原）の間で抗原抗体反応させた後、固相抗体（または固相抗原）を磁石装置を用いてＢ／Ｆ分離する際に、
磁石の周りを分離容器の反対側端面から分離容器の対向面側に向けてヨークで取り囲んで漏洩磁場を抑えるとともに、磁石の分離容器側端面の周囲をヨークの先端で囲んで磁束を集中させた磁石装置を用いて固相抗体（または固相抗原）をＢ／Ｆ分離することを特徴とする免疫測定におけるＢ／Ｆ分離装置。
【請求項５】
前記磁石装置において、磁石の分離容器とは反対側の端面と、磁石の分離容器側端面の周囲を囲むヨ−クの先端とは同極性、また、磁石の分離容器側端面と、磁石の分離容器側端面の周囲を囲むヨ−クの先端とは逆極性であることを特徴とする請求項４記載の免疫測定におけるＢ／Ｆ分離装置。
【請求項６】
磁性体を固相に用い、固相抗体（または固相抗原）と目的の抗原（または抗体）を抗原抗体反応させた後、標識物質によって標識された過剰量の標識抗体（または標識抗原）を添加して抗原（または抗体）の標識化を行なう免疫測定法において、
固相抗体（または固相抗原）と目的の抗原（または抗体）の間、及び目的の抗原（または抗体）と標識抗体（または標識抗原）の間で抗原抗体反応させた後、固相抗体（または固相抗原）を磁石装置を用いてＢ／Ｆ分離する際に、
反発し合う同極同士を対向配置させた磁石対を用い、その磁極間の空隙に近接させて分離容器を配置することにより、固相抗体（または固相抗原）をＢ／Ｆ分離することを特徴とする免疫測定におけるＢ／Ｆ分離方法。
【請求項７】
前記対向配置させた磁極間の距離（空隙距離）と、該対向軸方向の磁石の長さとの比は、０．００１〜０．５であることを特徴とする請求項６記載の免疫測定におけるＢ／Ｆ分離方法。
【請求項８】
反発し合う同極同士を対向配置させた磁石を分離容器の移動方向に合わせて複数個連続配置させ、複数の分離容器でＢ／Ｆ分離を一度に行なうことを特徴とする請求項６または７記載の免疫測定におけるＢ／Ｆ分離方法。
【請求項９】
磁性体を固相に用い、固相抗体（または固相抗原）と目的の抗原（または抗体）を抗原抗体反応させた後、標識物質によって標識された過剰量の標識抗体（または標識抗原）を添加して抗原（または抗体）の標識化を行なう免疫測定法において、
固相抗体（または固相抗原）と目的の抗原（または抗体）の間、及び目的の抗原（または抗体）と標識抗体（または標識抗原）の間で抗原抗体反応させた後、固相抗体（または固相抗原）を磁石装置を用いてＢ／Ｆ分離する際に、
磁石の周りを分離容器の反対側端面から分離容器の対向面側に向けてヨークで取り囲んで漏洩磁場を抑えるとともに、磁石の分離容器側端面の周囲をヨークの先端で囲んで磁束を集中させた磁石装置を用いて固相抗体（または固相抗原）をＢ／Ｆ分離することを特徴とする免疫測定におけるＢ／Ｆ分離方法。
【請求項１０】
前記磁石装置において、磁石の分離容器とは反対側の端面と、磁石の分離容器側端面の周囲を囲むヨ−クの先端とは同極性、また、磁石の分離容器側端面と、磁石の分離容器側端面の周囲を囲むヨ−クの先端とは逆極性であることを特徴とする請求項９記載の免疫測定におけるＢ／Ｆ分離方法。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【公開番号】特開２００６−２１８４４２（Ｐ２００６−２１８４４２Ａ）
【公開日】平成１８年８月２４日（２００６．８．２４）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００５−３５８７７（Ｐ２００５−３５８７７）
【出願日】平成１７年２月１４日（２００５．２．１４）
【出願人】（０００００４２７１）日本電子株式会社 (811)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成１８年８月２４日（２００６．８．２４）
【国際特許分類】
【出願日】平成１７年２月１４日（２００５．２．１４）
【出願人】（０００００４２７１）日本電子株式会社 (811)
【Ｆターム（参考）】
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